KR101326102B1

KR101326102B1 - 홍국 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물

Info

Publication number: KR101326102B1
Application number: KR1020130031013A
Authority: KR
Inventors: 박근동; 이대우; 하정욱
Original assignee: 주식회사 더마랩
Priority date: 2013-03-22
Filing date: 2013-03-22
Publication date: 2013-11-06

Abstract

본 발명은 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균을 접종하여 발효시킴으로써 수득된 발효 추출물을 포함하는 항노화 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.
본 발명에 따른 발효 추출물은 천연 아르간씨, 유채씨 또는 망고씨의 유용 성분을 다량 함유하며, 항산화, 콜라겐 분해 억제 및 합성 촉진 효과 등을 가짐으로써, 항노화, 미백 등을 위한 화장료로 우수한 성능을 보인다.

Description

홍국 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물{Cosmetic composition comprising an Monascus-fermented extract}

본 발명은 홍국균에 의한 발효 과정을 거쳐 제조되는 천연 발효 추출물을 함유하는 항노화 및 미백용 화장료 조성물 및 이의 제조방법에 관한 것이다.

최근 고령화 사회의 도래로 웰빙 트랜드가 사회 전반에 뿌리내리고 있으며, 이는 식품, 화장품, 주거 환경 등의 모든 분야에서 천연 식물성 소재 및 전통적인 민간 요법으로 전래되는 한약재에 대한 관심을 증폭시켰다. 상대적으로 천연 식물소재의 제품화가 용이한 화장품 산업 분야에서 오래 전부터 이를 원료로 사용한 시도들이 있어 왔으며, 기능식품 및 예방의학, 치료의학의 분야에서도 동양의 식물성 약재 (Herbal medicine)가 미국 및 유럽에서까지 허가 및 제품화되기 시작하면서, 천연 식물소재 및 한약재의 인체 유용성에 대한 관심이 증가하였다. 천연 식물소재는 다양한 생리활성 물질과 항산화 물질을 함유하고 있어 항노화, 항암, 항염, 면역기능 개선 등 다양한 효과를 보이지만, 추출된 이후에는 불안정하고 때론 자극적이어서, 인체에 독성을 띄는 경우도 종종 있다. 따라서, 최근에는 천연 추출물을 안정화시키거나, 독성을 줄이거나, 안정한 유도체로 전환시켜 효과를 높이려는 시도가 많이 진행되고 있으며, 그 일환으로 미생물이나 효소를 이용한 생물학적 전환(Biological transformation) 방법이 개발되고 있으며, 대표적 방법으로 발효를 예로 들 수 있다. 발효는 미생물이 가지고 있는 효소를 이용하여 유기물을 분해시킴으로써 인간 생활에 유용하게 사용되는 물질을 제조하는 과정이다. 인체에 유용한 물질을 만들어내는 대표적인 발효 미생물로는 홍국균, 효모 등이 있고, 다양한 식품들의 발효 과정에 사용된다. 또한, 발효는 유용 물질을 만들어 내는 것 이외에도 장 내에서 면역 및 독소 제거 (Detoxification)의 역할을 담당하기도 한다. 더 나아가, 장내 미생물에 의한 발효를 통해 섭취된 성분은 분해되어 인체 세포에 흡수가 용이한 저분자 물질로 전환되거나, 불안정하거나 불활성인 형태에서 활성 형태로 전환되어 흡수되기도 하며, 이러한 결과는 장내 미생물에 의한 생물전환의 중요성을 단적으로 보여주는 것이라 볼 수 있다. 따라서, 홍국균 및 효모 등의 미생물 발효에 의해서 천연 식물소재 및 한약재의 효능을 극대화시키거나, 안전성 문제를 해결하기 위한 시도는 다양한 식품, 화장품, 약품 등의 개발에 있어서 중요한 의미를 갖는다고 할 수 있다. 특히, 우수한 항암 효과, 항 염증 효과, 항 노화 효과, 면역력 증강 효과 등을 갖는 것으로 보고되는 김치나 된장 등의 한국전통식품에서 번식하는 미생물들은 생물학적 활성이 뛰어난 것으로 보고되고 있어, 전통 발효 식품에서 분리한 미생물들을 이용하려는 많은 연구가 진행되고 있다.

사람의 피부는 나이가 듦에 따라 다양한 변화가 일어난다. 이러한 것을 노화라고 하는데 사람의 피부에는 이러한 노화 현상들이 다양하게 나타난다. 노화의 원인으로는 자외선, 정신적 스트레스, 질병상태, 상처 및 외부 환경 등 다양하게 들 수 있는데 이때, 가장 중요한 역할을 하는 것이 활성 산소종이며 활성 산소종은 세포 및 조직을 손상시켜 성인병 및 노화를 촉진하게 된다.

구체적으로, 피부의 주요 구성물질인 지질, 단백질, 다당류 및 핵산 등이 산화되어 피부세포 및 조직이 파괴되고, 결국 피부노화 현상이 생겨나는 것이다. 특히 단백질의 산화는 피부의 결합조직인 콜라겐(collagen), 히아루론산(hyaluronic acid), 엘라스틴(elastin), 프로테오글리칸(proteoglycan), 피브로넥틴(fibronectin) 등이 절단되어 심한 과다 염증반응과 피부의 탄력에 지장을 주고 이것이 더 심해질 경우 DNA의 변이에 의해 돌연변이, 암의 유발, 면역기능 저하의 사태에 이르게 된다.

활성 산소종 이외에도 다양한 원인으로 피부 노화가 일어난다. 따라서 피부노화를 효과적으로 예방 하기 위해서는 자외선 등의 외부 자극을 효과적으로 제거하고 피부 내에서 발생하는 활성산소 등의 피부 유해 인자들을 제거해주는 것이 매우 중요하다. 최근에 개발되는 대부분의 화장품들은 외부 자극을 막아주고 내부에서의 피부 유해 인자를 제거하는 방향으로 연구가 되고 있다. 특히, 이러한 효과를 나타내기 위해 여러 화학물질 등에 의한 피부 자극을 줄이기 위해 천연물을 사용한 화장품들이 많이 개발되고 있다. 천연 재료는 피부에 부작용이 적을 뿐만 아니라, 최근 천연재료를 이용한 화장품에 대한 소비자들의 호응이 높아짐에 따라 화장품의 원료로서 개발가치가 한층 늘어나고 있다.

한국출원특허: KR 10-2010-0056648, 출원일: 2010. 06. 15, 공개일: 2011.12.21 한국출원특허: KR 10-2006-0067815, 출원일: 2006. 07. 20, 공개일: 2008.01.24

본 발명은 홍국균에 의한 발효 과정을 거친 아르간씨, 유채씨, 망고 씨 또는 이들의 혼합 추출물을 함유하는 항노화 및 미백 효과가 있는 화장료 조성물 및 이의 제조방법을 제공하고자 한다.

본 발명자들은 주름 개선 및 탄력 증진 등의 항노화 활성 및 미백 효과를 갖는 화장료 조성물을 개발하고자 예의 연구한 결과, 홍국균에 의해 발효 과정을 거친 아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 추출물이 항산화, 콜라겐 생성 촉진 등에 우수한 활성을 나타냄을 확인하여 본 발명을 완성하였다.

상기 목적을 달성하기 위하여, 본 발명은 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균을 접종하여 발효시킴으로써 수득된 발효추출물을 제공한다.

본 발명은 또한 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물을 포함하는 홍국균 발효 추출물의 제조 방법으로써,

(a) 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균을 접종한 후 고체 발효하는 단계;

(b) 상기 (a) 단계의 발효 추출물을 수득하는 단계; 및

(c) 상기 (b) 단계의 추출물을 여과하는 단계를 포함하는 홍국균 발효 추출물의 제조 방법을 제공한다.

본 발명은 또한 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균을 접종하여 발효시킴으로써 수득된 발효 추출물을 포함하는 항노화 및 미백용 화장료 조성물을 제공한다.

본 발명의 홍국균 발효 추출물은 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합 추출물 중 선택되는 어느 하나로써, 항산화, 콜라겐 분해 억제 및 합성 촉진 등의 효과가 우수하고 피부 자극에 대한 부작용이 없는 천연의 안전 제제에 해당한다. 본 발명에서, 홍국균 발효 추출물은 농축된 액상일 수도 있고, 건조된 분말형태일 수도 있다.

아르간 (Argania Spinosa)은 모로코의 일부 지역에서만 자라면서 150-200년 동안 사는 아르간 나무(Arganiaspinosa)의 열매에서 옛날부터 전해 내려온 전통적 방식으로 추출되고 있다. 아르간 오일은 두바이(Dubai), 프랑스, 영국에서 많이 알려져 있으며, 식용 외에도 두발제품, 스파, 마사지, 비누 등 바디케어(body care)에 이용되고 있다. 특히 미용에 사용되는 아르간 오일은 피부를 부드럽고 탄력 있게 만들면서 건조함을 방지함과 동시에 피부트러블을 막아주고 피부에 노화를 방지하는 효과가 있다. 아르간 나무는 8-10m까지 자라며 뿌리조직이 매우 깊게 뻗어나가 토양 침식을 방지하여 사하라 사막 확대를 막는 역할을 하기도 한다. 5-6월에 녹색을 띤 노란색의 꽃을 피우는데 이는 암수가 한 몸인 자웅동체 꽃이다. 아르간씨는 국내외 시장 및 인터넷 마켓 등에서 구매할 수 있다.

유채(Brassicanapus)는 유럽의 서북부 바닷가 기슭과 지중해 연안의 넓은 지역에 분포하고 있으며, 우리나라에서는 기원전 4000년 전부터 재배되었다. 지금도 제주도를 비롯하여 중부이남의 각 지역에서 관상용으로 재배하며 제주도가 가장 많이 심는다. 십자화과의 두해살이 기름 원료 작물이며 식물체 높이 100cm 안팎이다. 줄기는 곧게 자라며 밑부분에서 많은 가지를 벋는다. 식물체에 털이 없으며 납질의 흰가루로 덮여있다, 뿌리잎(근생엽)과 줄기잎(경생엽)은 비슷하며 잎자루가 있다. 잎몸(옆신)은 매우크고 밑부분은 좁으며 가장자리는 밋밋하거나 결각 모양이다. 줄기 윗부분의 잎은 줄기를 감싼다. 3~5월에 꽃이 줄기끝에 송이꽃차례(총상화서)를 이루고 선명한 황색으로 피며 두성꽃(양성화)이다. 꽃받침잎은 버들잎 모양이고 황록색이다. 꽃잎은 달걀 모양이고 밑부분에 짧은 꽃뿌리가 있다. 열매는 긴뿔열매(장각과)이고 가늘고 길며, 씨는 공 모양이다. 5~6월에 열매가 익는다. 식용으로 먹으며 관상용으로 심는다. 유채의 씨에는 기름이 35~48%함유되어 있다. 기름의 색깔은 흑갈색, 황갈색이다. 유채기름에는 에르카산 50%, 올레인산 32%, 리놀렌산 16%, 아라키돈산 2.9%, 기타 미리스틴산, 팔미틴산, 등이 함유되어 있다. 기름의 비중은 0917, 굴절률 1.4651, 비누화 174, 요오드 105이다. 기름을 짜낸 찌꺼기에는 단백질 32~34%, 기름이 5%가 들어있다. 유채 기름은 식용뿐만 아니라 인쇄잉크, 비누, 그림물감 등의 원료로 쓰이며 기계기름으로도 쓸 수 있다. 유채는 봄과 가을에 심는 2품종이 있다. 봄 유채는 배추형 도는 무형이고 가을유채는 가두배추형 이다. 봄 유채는 보통 90~110일, 가을유채는 270~280일 자란다. 유채는 추위에 강하며 낮이 긴 조건에서 잘 자란다. 유채씨는 국내외 시장 및 인터넷 마켓 등에서 구매할 수 있다.

망고는(Mangiferaindica) 높이가 약 10∼30m이다. 잎은 어긋나고 두꺼우며 바소꼴로 가장자리가 밋밋하고 털이 없으며 길이 10∼15cm이다. 꽃은 말레이시아와 타이완에서는 1∼4월에 피고 암수딴그루이며 가지 끝 원추꽃차례에 달리고 붉은빛을 띤 흰색이다. 꽃받침과 꽃잎은 각각 5개이다. 수술은 5개 이상이며 수술과 씨방 사이에는 육질의 화반이 있다. 씨방은 상위이고 배젖이 있다. 열매는 핵과(核果)로서 5∼10월에 익으며 넓은 달걀 모양이고 길이 3∼25cm, 나비 1.5∼10cm인데, 품종마다 차이가 크다. 익으면 노란빛을 띤 녹색이거나 노란색 또는 붉은빛을 띠며 과육(果肉)은 노란빛이고 즙이 많다. 종자는 1개 들어 있는데, 원기둥 꼴의 양끝이 뾰족한 모양이며 약으로 쓰거나 갈아서 식용한다. 세계에서 가장 많이 재배되고 있는 열대 과수로 말레이반도, 미얀마, 인도 북부 원산이다. 생산량이 세계 5위이며 종류도 상당히 많다. 비타민 A가 많으며 카로틴은 푸른 잎 야채와 거의 같은 양이 들어 있다. 날로 먹기도 하고 디저트와 과자 재료로 쓰며 과육을 갈아 샐러드의 드레싱이나 소스, 수프 등에 사용한다. 산지에서는 덜 익은 것을 야채와 같이 볶거나 절여서 먹는다. 관상용으로도 심으며 수액은 아라비아고무 대용으로 쓴다. 아프리카, 브라질, 멕시코, 플로리다, 캘리포니아, 하와이 등의 열대와 아열대지방에 분포한다. 망고씨는 국내외 시장 및 인터넷 마켓 등에서 구매할 수 있다.

홍국균, 즉 모나스쿠스(Monascus)는 분류학적으로 Kingdom: Fungi, Phylum: Ascomycota, Class: Plectomyetes, Order: Ascosphaerales 및 Family: Monascaeae로 분류되며, 유성생식(formation of cleistohecia with ascospores) 및 무성생식(formation of conidia)을 통해 증식하는 것으로 알려져 있고, 현재까지 약 20여가지의 균주가 분리되어 동정되었다. 이러한 모나스쿠스 균은 색소생산성, 항균활성, 콜레스테롤합성 저해능, 항당뇨 활성 및 혈압강하 활성 등이 있어, 각종 기능성 소재로 활용 가능하다.

(a) 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균 홍국균 을 접종한 후 고체 발효하는 단계;

(b) 상기 (a) 단계의 발효 추출물을 수득하는 단계; 및

본 발명의 홍국균 발효 추출물 제조 방법 중, (a) 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물에 홍국균 홍국균 을 접종한 후 고체 발효하는 단계에서는, 아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 각각을 홍국균으로 고체 발효 시킬 수 있으며, 또한, 이들 씨를 혼합한 후 홍국균으로 고체 발효 시킬 수 있다.

홍국균은 홍국균속(Monascussp.)에 속하는 것이라면 어떠한 것이라도 사용할 수 있으며, 대표적으로 모나스쿠스 루버(Monascus ruber), 모나스쿠스 퍼퍼레우스 웬트(Monascus purpureus Went), 모나스쿠스 루버반 틱헴(Monascus rubervan Tieghem), 모나스쿠스 풀리기노서스 사토(Monascus fuliginosus Sato), 모나스쿠스 필로수스(Monascus pilosus), 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens), 모나스쿠스 필로수스 사토(Monascus pilosus Sato), 모나스쿠스 안카(Monascus anka), 모나스쿠스 바리케리(Monascus barykery), 또는 모나스쿠스 알비두스 사토(Monascus albidus Sato) 등이 가능하다. 바람직하게는 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens) 또는 모나스쿠스 필로수스(Monascus pilosus)가 사용될 수 있으며, 더욱 바람직하게는 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens) KCTC6120BP 균주 또는 모나스쿠스 필로수스(Monascus pilosus) KCTC26768BP 균주가 사용될 수 있다.

본 발명에서 사용 가능한 홍국균의 접종량은 접종 초기 균수가 10⁵내지 10⁸cfu/g 또는 10⁵내지 10⁸cfu/㎖인 것이 바람직하다. 상기 초기 접종 균수가 10⁵cfu/g 또는 10⁵cfu/㎖ 미만인 경우에는 발효시간이 길어지는 문제점이 있고, 10⁸cfu/g 또는 10⁸cfu/㎖를 초과하는 때에는 효과의 증가가 크지 않음에도 접종량이 과도한 문제가 있다.

상기 홍국균들은 배양을 통한 발효 단계는, 최적의 홍국균 발효 조건을 고려할 때에, 통기가 용이하여야 하며 25℃ 내지 30℃에서 15일 내지 30일 동안 수행될 수 있다.

고체발효란 고체 기질에 일정량의 수분을 함유하게 한 후, 무수 상태에서 미생물을 키워서 발효시키는 방법이다. 고체발효는 액체발효와 비교하여 원료의 값이 싸고 정제가 용이하며 적은 에너지를 소모한다.

본 발명의 홍국균 발효 추출물 제조 방법 중, (b) 상기 (a) 단계의 발효 추출물을 추출하는 단계에서는, (a) 단계의 발효 물질을 압착하거나 유기 용매를 이용하여 수득할 수 있다.

본 발명의 압착에 의한 수득 방법은, 홍국균 고체 발효 추출물을 압착기에 올려놓은 후, 300kg/cm² 내지 900kg/cm²의 힘으로 1분 내지 10분간 압착한 후, 흘러나오는 액체를 회수함으로써. 수득할 수 있다.

본 발명의 유기 용매에 의한 수득 방법은 핵산 등의 유기용매를 이용하여 당업계에 공지된 방법에 의한다.

본 발명의 홍국균 발효 추출물 제조 방법 중, (c) 상기 (b) 단계의 추출물을 여과하는 단계에서는, 추출된 물질을 감압농축기 등으로 농축 및 여과 할 수 있다. 2um ~ 0.2um의 필터로 여과하고 감압농축기 등으로 농축하여 분말 또는 액상의 발효 추출물을 수득할 수 있다. 바람직하게는 진공상태에서 cheese cloth를 필터로 하여 여과한다.

본 발명의 화장료 조성물에서 홍국균 발효 추출물은 화장료 조성물의 총 중량에 대하여 0.001~10.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있고, 바람직하게는 0.01∼5.0중량%의 양으로 화장료에 첨가될 수 있다.

본 발명의 화장료 조성물에 포함되는 성분은 유효 성분으로서의 홍국균 발효 추출물 이외에 화장료 조성물에 통상적으로 이용되는 성분들을 포함하며, 예컨대 항산화제, 안정화제, 용해화제, 비타민, 안료, 색소 및 향료와 같은 통상적인 보조제, 그리고 담체를 포함한다.

본 발명의 화장료 조성물은 당 업계에서 통상적으로 제조되는 어떠한 제형으로도 제조될 수 있으며, 예를 들어, 용액, 현탁액, 유탁액, 페이스트, 겔, 크림, 로션, 파우더, 비누, 계면활성제-함유 클린싱, 오일, 분말 파운데이션, 유탁액 파운데이션, 왁스 파운데이션 및 스프레이 등으로 제형화될 수 있으나, 이에 한정되는 것은 아니다. 보다 상세하게는, 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더의 제형으로 제조될 수 있다.

본 발명의 제형이 페이스트, 크림 또는 겔인 경우에는 담체 성분으로서 동물성유, 식물성유, 왁스, 파라핀, 전분, 트라칸트, 셀룰로오스 유도체, 폴리에틸렌글리콜, 실리콘, 벤토나이트, 실리카, 탈크 또는 산화아연 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 파우더 또는 스프레이인 경우에는 담체 성분으로서 락토스, 탈크, 실리카, 알루미늄 히드록시드, 칼슘 실리케이트 또는 폴리아미드 파우더가 이용될 수 있고, 특히 스프레이인 경우에는 추가적으로 클로로플루오로히드로카본, 프로판/부탄 또는 디메틸 에테르와 같은 추진체를 포함할 수 있다.

본 발명의 제형이 용액 또는 유탁액인 경우에는 담체 성분으로서 용매, 용해화제 또는 유탁화제가 이용되고, 예컨대 물, 에탄올, 이소프로판올, 에틸 카보네이트, 에틸 아세테이트, 벤질 알코올, 벤질 벤조에이트, 프로필렌글리콜, 부틸렌글리콜, 1,3-부틸글리콜 오일, 폴리옥시에칠렌 경화피마자유, 글리세롤, 글리세린, 지방족 에스테르, 페녹시에탄올, 트리에탄올아민, 폴리에틸렌 글리콜, 농글리세린, 밀납, 폴리솔베이트 60, 솔비탄세스퀴오레이드, 파라핀, 소르비탄 스테아레이트, 친유형 모노스테아린산 글리세린, 스테아린산, 글리세릴스테아레이트/피이지-400 스테아레이트, 카르복시폴리머, 시토스테롤, 폴리글리세릴 2-올레이트, 세라마이드, 콜레스테롤, 스테아레스-4, 디세틸포스페이트, 마카다미아 오일, 카르복시비닐폴리머, 소이빈포스포리피드, 하이드록시에틸셀룰로오즈, 소디움히아루로네이트, 산탄검, 잔탄검 또는 소르비탄의 지방산 에스테르 등이 있다.

본 발명의 제형이 현탁액인 경우에는 담체 성분으로서 물, 에탄올, 글리세린, 부틸렌글리콜 또는 프로필렌 글리콜과 같은 액상의 희석제, 에톡실화 이소스테아릴 알코올, 폴리옥시에틸렌 소르비톨 에스테르 및 폴리옥시에틸렌 소르비탄 에스테르와 같은 현탁제, 미소결정성 셀룰로오스, 하이드록시에틸셀룰로오즈, 소디움히아루로네이트, 페녹시에탄올, 알루미늄 메타히드록시드, 벤토나이트, 스테아린산, 세틸알코올, 글리세릴모노스테아레이트, 폴리옥시에틸렌소르비탄모노스테아레이트, 솔비탄세스퀴올레이트, 글리세릴모노스테아레이트 /글리세릴스테아레이트 /폴리옥시에틸렌스테아레이트, 왁스, 파리핀, 스쿠알란, 카프릴릭/카프릭트리글리세라이드, 카르복시비닐폴리머, 트리에탄올아민, 아가 또는 트라칸트 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 제형이 계면-활성제 함유 클린징인 경우에는 담체 성분으로서 지방족 알코올 설페이트, 지방족 알코올 에테르 설페이트, 설포숙신산 모노에스테르, 이세티오네이트, 이미다졸리늄 유도체, 메틸타우레이트, 사르코시네이트, 지방산 아미드 에테르 설페이트, 알킬아미도베타인, 지방족 알코올, 지방산 글리세리드, 지방산 디에탄올아미드, 식물성 유, 라놀린 유도체 또는 에톡실화 글리세롤 지방산 에스테르 등이 이용될 수 있다.

본 발명의 홍국균에 의해 발효된 아르간씨, 유채씨, 망고씨 또는 이들의 혼합물을 유효성분으로 함유하는 화장료 조성물은, 이들 씨앗의 유용 성분을 다량 함유하며, 항산화, 콜라겐 분해 억제 및 합성 촉진 효과 등을 가짐으로써, 항노화, 미백 등을 위한 화장료로 우수한 효과를 보인다.

발명의 이점 및 특징, 그리고 그것들을 달성하는 방법은 상세하게 후술되어있는 실시예들을 참조하면 명확해질 것이다. 그러나 본 발명은 이하에서 개시되는 실시예들에 한정되는 것이 아니라 서로 다른 다양한 형태로 구현될 것이며, 단지 본 실시예들은 본 발명의 개시가 완전하도록 하고, 본 발명이 속하는 기술 분야에서 통상의 지식을 가진 자에게 발명의 범주를 완전하게 알려주기 위해 제공되는 것이며, 본 발명은 청구항의 범주에 의해 정의될 뿐이다.

< 실시예 1> 홍국균 발효 아르간씨 추출물 제조

모로코에서 구매한, 아르간 Seed Cake을 정제수로 세척하고 건조시켰다. 건조된 아르간 Seed Cake 100g을 멸균기 121℃ 1.5기압에서 15분간 멸균하였다. 또한, 한국생명공학연구원 생명자원센터(KCTC)에서 분양 받은 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens) KCTC6120BP 균주를 PDB (potato dextrose Broth medium (PDB))배지에서 25℃에서 18시간 배양하였다. 배양된 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens) KCTC6120BP 균주를 균수가 10⁷cfu/g이 되도록 아르간 Seed Cake에 접종하고 25℃에서 720시간 동안 통기가 용이한 곳에서 고체 발효하였다. 고체 발효 후, 아르간씨 100g을 멸균기 121℃ 1.5기압에서 15분간 멸균 및 건조하고 압착기(Dongkwang Oil Co., Seoul, Korea)에 올려놓은 후, 600kg/cm²의 힘으로 2분간 압착하였다. 압착에 의해 흘러나오는 홍국균 발효 아르간씨 추출물을 회수하고, 추출된 홍국 발효 아르간씨 추출물로부터 찌꺼기를 제거하기 위해, 진공상태에서 cheese cloth(Norpro 367 Natural Cheese Cloth)로 필터링 하였다. 그 결과, 9g의 홍국균 발효 아르간씨 추출물을 얻었다.

< 실시예 2 > 홍국균 발효 유채씨 추출물 제조

인터넷에서 구매한 유채씨(원산지: 제주)를 이용하여, 실시예 1과 동일한 방법으로 홍국균 발효 유채씨 추출물을 제조하였다. 그 결과, 19g의 홍국균 발효 유채씨 추출물을 얻었다.

< 실시예 3 > 홍국균 발효 망고씨 추출물 제조

인터넷에서 구매한 망고씨(원산지: 수단) 를 이용하여, 실시예 1과 동일한 방법으로 홍국균 발효 망고씨 추출물을 제조하였다. 그 결과, 20g의 홍국균 발효 망고씨 추출물을 얻었다.

< 비교예 1> 아르간씨 추출물 제조

모로코에서 구매한 아르간 Seed Cake을 정제수로 세척하고 건조시켰다. 건조된 아르간 Seed Cake 100g을 멸균기 121℃ 1.5기압에서 15분간 멸균하였다. 건조된 아르간 Seed Cake 을 압착기(Dongkwang Oil Co., Seoul, Korea)에 올려놓은 후, 600kg/cm² 의 힘으로 2분간 압착한 후, 흘러나오는 아르간씨 추출물을 회수하였다. 아르간씨 추출물로부터 찌꺼기를 제거하기 위해, 진공상태에서 cheese cloth로 필터링하였다. 그 결과, 11g의 아르간 추출물을 얻었다.

< 비교예 2> 유채씨 추출물 제조

인터넷에서 구매한 유채씨(원산지: 제주)를 이용하여, 비교예 1과 동일한 방법으로 유채씨 추출물을 제조하였다. 그 결과, 20g의 유채씨 추출물을 얻었다.

< 비교예 3> 망고씨 추출물 제조

인터넷에서 구매한 망고씨(원산지: 수단)를 이용하여, 비교예 1과 동일한 방법으로 망고씨 추출물을 제조하였다. 그 결과, 19g의 망고씨 추출물을 얻었다.

< 실험예 1> 항산화 효과 확인

항산화활성은 DPPH(1, 1-diphenyl-2-picrylhydrazyl) 라디칼을 이용한 전자공여능법을 사용하여 확인하였다. 시료 56uL을 이소옥탄(isooctane)에 녹이고 25㎖ 시험관에 200uL를 첨가하였다. 250uM DPPH 이소옥탄(isooctane) 용액 3㎖를 넣고 30분간 실온에 방치하여 517㎚에서 흡광도를 측정하였다. 시료를 첨가하지 않은 대조군의 흡광도를 함꼐 측정하여 황산화 활성을 하기 식 1과 같이 계산하였으며, 그 결과를 표 1에 나타내었다.

[식 1]

R%=(A-B/A)×100

A:대조군, B: 시료군

[표 1] 홍국균 발효 추출물의 항산화 효과 확인

[표 1]에서 나타낸 바와 같이, 홍국균 발효처리를 하지 않은 실험군에서 항산화 효과가 10~20% 내외인 반면, 발효처리를 한 실험군에서는 40~60%의 항산화 효과가 보임을 확인할 수 있었다. 즉, 홍국균 발효 처리된 모든 실험 군에서 발효되지 않은 추출물보다 전자공여능(항산화활성)이 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예 2> 세포 무독성 및 세포 증식 효과 확인

상기 실시예에서 제조된 홍국균 발효 추출물이 세포 증식에 미치는 영향 및 독성 여부를 확인하였다.

홍국균 발효 추출물에 의한 세포 독성 및 증식을 다음과 같은 방법으로 확인하였다. 배양하고 있는 3T3 세포(fibroblast)(한국세포주은행 KCLB)를 96 웰 마이크로플레이트에 5,000세포/웰로 분주하여 30분간 항온조에서 37℃ 조건으로 DMEM 배지에 배양하고, 시료를 농도 별 각각 0.1, 0.5, 1.0, 2.0, 5.0(%W/V))로 투여하여 72시간 동안 배양하였다. 그리고 티아졸린 블루(Thiazoline blue) 1mL를 투여하고 4시간 동안 추가 배양을 하였다. 배양액을 모두 버리고 마이크로플레이트의 각 웰에 반응 정지액(acidic isopropanol)을 가하고 5분간 교반한 후, 570㎚에서 흡광도를 측정하였다. 대조군은 시료 주입량만큼 10 % 우태아혈청(Fetal Bovine Serum, FBS) 배지를 투여하여 37℃ 조건으로 동시배양을 하였으며, 대조군의 세포증식을 100%로 하고 시료 투입 실험군의 세포 증식률을 계산하였다.

세포증식률은 하기 [식 1]에 의해 산출되었고, 그 결과는 하기 [표 2]에 나타내었다.

[식 2]

[표 2] 세포 증식률의 확인

[표 2]에서 나타낸 바와 같이, 세포 성장 최적 조건에서의 세포 증식을 100%로 하였을 때, 측정 오차범위를 고려하면 홍국균 발효 추출물은 모두 세포 무독성이며, 세포 증식 효과가 있음을 확인할 수 있었다.

< 실험예3 > MMP -1 생성 억제를 통한 주름 개선 효과 확인

실시예 1-3에서 수득한 홍국균 발효 추출물의 주름개선 효과를 확인하기 위해 하기와 같이 실험을 진행하였다.

인체 정상 섬유 아세포를 48-웰 마이크로 플레이트(Nunc, 덴마크)의 각 웰에 1×10⁶세포가 되도록 접종하고, 37℃ 조건으로 DMEM 배지(Sigma, 미국)에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 0.01%의 홍국균 발효 추출물(실시예 1-3) 또는 0.01%의 비교예 1 내지 3 추출물을 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체하고, 4시간 동안 추가로 배양하였다. 음성 대조군은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 것을 사용하였다. 배양 후, 각 실험군의 상층액을 모아 MMP-1 분석 키트(Amersham, USA)를 이용하여 새로 합성된 MMP-1의 양을 측정한 뒤, MMP-1의 양은 ng/㎖ 환산하였다. 양성 대조군으로 TGF-β(10ng/ml, Roche, USA)을 사용하였으며 MMP-1 생성 억제율을 계산하였다.

MMP-1 억제 효과는 [식 3]에 의하여 산출하였으며, 결과는 [표 3]과 같다.

[식 3]

MMP-1 생성억제율(%) =[1-(실험군의 MMP-1 양/대조군의 MMP-1양)]×100

[표 3] MMP-1 생성 억제를 통한 주름 개선 효과 확인

[표 3]에서 나타낸 바와 같이, 홍국균 발효 추출물이 비교예와 대비하여 약 20%이상 MMP-1 생성이 억제된 것을 확인할 수 있었다. 즉, 홍국균 발효 처리된 모든 실험 군에서 발효되지 않은 추출물보다 주름 개선 효과가 우수한 것을 확인할 수 있었다.

< 실험예4 > 콜라겐 합성 증진 효과

실시예에서 수득한 홍국균 발효 추출물의 주름개선 효과를 확인하기 위해 하기와 같은 실험을 진행하였다. 인체 정상 섬유아세포를 48-웰 마이크로 플레이트의 각 웰에 1 x 10⁶세포가 되도록 접종하고, 37℃ DMEM 배지에서 24시간 동안 배양하였다. 이어서, 1%의 홍국균 발효 추출물(실시예 1-3) 또는 1%의 비교예 1 내지 3 추출물을 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체하고, 24시간 동안 추가로 배양하였다. 음성 대조군은 혈청이 없는 DMEM 배지로 교체한 것을 사용하였다. 배양 후, 각 웰의 상층액을 모아서, 프로콜라겐 (procllagen) 타입 I C-펩타이드 (PICP) 양을 키트 (Takara, 일본)를 이용하여 측정하였다. PICP 양은 ng/㎖ 환산하였으며, 양성대조군으로 역시 TGF-β를 사용하였다. 콜라겐 생합성 증가율을 [식 4]를 이용하여 계산하였으며, 그 결과를 [표 4]에 나타내었다.

[식 3]

콜라겐 생성 증가율(%) =[(시험군 콜라겐 양/대조군 콜라겐 양) -1]×100

[표 4] 콜라겐 합성 증진 효과 확인

[표 4]에서 나타낸 바와 같이, 홍국균 발효 추출물(실시예 1-3)의 콜라겐 합성 효과가 비교예 1 내지 비교예 3과 대비하여 10 내지 20% 우수한 것을 확인할 수 있었다. 즉, 홍국균 발효에 의하여 우수한 콜라겐 합성 효과를 나타냄을 확인할 수 있었다.

< 제형예 1> 홍국균 발효 추출물을 이용한 화장수 제조

아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 홍국균 발효 추출물을 함유한 화장수(스킨로션)를 하기 [표 5]의 함량으로 1kg씩 각각 제조하였다.

[표 5] 홍국균 발효 추출물을 함유한 화장수의 구성

상기 화장수를 제조하기 위하여, [표 5]에 기재된 일정량의 11번 물질에 2, 3, 4 및 8번 물질을 순서대로 반응 용기에 투입하고 교반하여 용해시킨 후, 5번 물질을 60℃ 정도로 가열하여 용해시켰다. 다음으로, 10번 물질을 반응용기에 투입하여 용해한 후 잔량의 11번 물질을 투입하였다. 마지막으로 1, 6, 7 및 9번 물질을 투입하여 충분히 교반시키고 25℃에서 3일간 숙성시켜 화장수를 제조하였다.

< 제형예 2> 홍국균 발효 추출물을 이용한 영양 로션 제조

아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 홍국균 발효 추출물을 함유한 영양로션을 하기 [표 6]의 함량으로 1kg씩 각각 제조하였다.

[표 6] 홍국균 발효 추출물을 함유한 영양 세럼의 구성

상기 영양 로션을 제조하기 위하여, [표 6]에 기재된 10, 11, 13 및 16번 물질을 혼합 교반 하면서 80 ~ 85℃로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 및 12번 물질을 80 ~ 85℃로 가열 용해한 후 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반 하면서 50℃까지 냉각한 뒤 15번 물질을 투입하고 45℃까지 냉각한 뒤 14번 물질을 투입하고 35℃에서 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 영양로션을 제조하였다.

< 제형예 3> 홍국균 발효 추출물을 이용한 영양 세럼 제조

아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 홍국균 발효 추출물을 함유한 영양세럼을 하기 [표 7]의 함량으로 1kg씩 각각 제조하였다.

[표 7] 홍국균 발효 추출물을 함유한 영양 세럼의 구성

상기 영양 세럼을 제조하기 위하여, [표 7]에 기재된 2, 3 및 5번 물질을 혼합 교반 하면서 40 ~ 45℃로 가열하여 제조부에 투입한 후 유화기를 작용시키고 4, 6 및 7번 물질을 제조부에 투입하고 유화시켰다. 유화가 끝나면 교반기를 이용하여 교반하면서 35℃까지 냉각하고 1번 물질을 투입하여 25℃까지 냉각한 뒤 25℃에서 3일간 숙성시켜 영양 세럼을 제조하였다.

< 제형예 4> 홍국균 발효 추출물을 이용한 에센스 제조

아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 홍국균 발효 추출물을 함유한 에센스를 하기 [표 8]의 함량으로 1kg씩 각각 제조하였다.

[표 8] 홍국균 발효 추출물을 함유한 에센스의 구성

상기 에센스를 제조하기 위하여, [표 8]에 기재된 2, 3, 4, 5 및 6번 물질을 일정한 온도에서 균질화하여 비이온계 양친매성 지질을 제조하였다. 이 비이온계 양친매성 지질과 1, 7, 8 및 14번 물질을 혼합하고 일정한 온도에서 균질화하여 마이크로플루이다이져를 통과시키고 이어 9번 물질을 50 ~ 60℃로 가온하여 서서히 첨가하여 균질화한 후 다시 마이크로플루이다이져에 재차 통과시켰다. 그 후, 10, 11, 12 및 13번 물질을 투입하여 분산시켜 안정화하고 25℃에서 3일간 숙성시켜 에센스를 제조하였다.

< 실험예 5> 제형 안정도 확인

아르간씨, 유채씨 또는 망고씨 홍국균 발효 추출물을 포함하는 제형예 1 내지 4에서 제조한 제형 각각에 대하여 4℃, 실온(25℃) 및 45℃로 일정하게 유지되는 냉장고, 실내 및 항온수조에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관 후 육안으로 변색, 및 분리를 관찰하고, 후각으로 변취를 확인하여 이들 제형의 안정성을 확인하였다. 그 결과는 [표 9]와 같다.

[표 9] 제형의 안정성 확인

[표 9] 에 나타낸 바와 같이, 제형예 1 내지 4의 제형 모두 아르간씨, 유채씨 또는 망고씨의 종류에 상관없이 4℃, 실온 및 45℃ 온도 조건하에서 변색, 변취 및 분리 현상이 나타나지 않고 안정하였다. 즉, 홍국균 발효 추출물을 포함하는 화장료 조성물의 안정성이 뛰어남을 확인할 수 있었다.

Claims

아르간씨에 홍국균을 접종하여 발효시킴으로써 수득된 발효추출물을 포함하는 항노화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 홍국균은 모나스쿠스 퍼퓨렌스(Monascus purpurens) KCTC6120BP 균주 또는 모나스쿠스 필로수스(Monascus pilosus) KCTC26768BP 균주인 항노화용 화장료 조성물.
제1항에 있어서, 상기 발효는 고체 발효에 의한 것인 항노화용 화장료 조성물.
제3항에 있어서, 상기 고체 발효는 25℃ 내지 30℃에서 15일 내지 30일 동안 진행된 것인 항노화용 화장료 조성물.
제4항에 있어서, 상기 고체 발효의 초기 접종 균수는 10⁵내지 10⁸cfu/g인 것인 항노화용 화장료 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 발효 추출물이 화장료 조성물 총 중량에 대하여 0.001 ~ 10중량%의 양으로 포함되는 것인 항노화용 화장료 조성물.
제1항 내지 제5항 중 어느 한 항에 있어서, 상기 화장료는 유연 화장수, 영양 화장수, 영양 크림, 맛사지 크림, 에센스, 팩, 아이 크림, 클렌징 크림, 클렌징 포옴, 클렌징 워터, 팩, 스프레이 또는 파우더 중 선택된 어느 하나의 제형을 가지는 항노화용 화장료 조성물.
아르간씨를 포함하는 홍국균 발효 추출물의 제조 방법으로써,
(a) 아르간씨에 홍국균을 접종한 후 고체 발효하는 단계;
(b) 상기 (a) 단계의 발효 추출물을 수득하는 단계; 및
(c) 상기 (b) 단계의 추출물을 여과하는 단계를 포함하는 홍국균 발효 추출물의 제조 방법.
제8항에 있어서, 상기 (a) 단계의 고체 발효는 10⁵내지 10⁸cfu/g의 농도로 접종하고 25℃ 내지 30℃에서 15일 내지 30일 동안 발효되는 것인 홍국균 발효 추출물의 제조 방법.
제8항에 있어서, 상기 (b) 단계의 추출을 압착 추출에 의한 것인 홍국균 발효 추출물의 제조 방법.
제8항 내지 제10항의 제조 방법 중 선택된 어느 하나의 제조방법으로 제조된, 아르간씨를 포함하는 홍국균 발효 추출물.