CN102068391A - 人干细胞生长因子在化妆品中的应用 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了人干细胞生长因子在化妆品中的应用，应用方法为通过均质工艺将人细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的人干细胞生长因子含量为0.1～20.0ng，纯度为85～99％。更具体的应用方法包括如下步骤：将化妆品的原料中需要加热的成分分为油性组分和水性组分，分别加热后混合，接着均质乳化，再冷却至37～50℃，加入含有人干细胞生长因子的溶液以及不需加热的组分，搅拌均匀，真空脱气即可。本发明首次将人干细胞生长因子应用于化妆品中，在化妆品基质材料中人干细胞生长因子仍可以保持良好的活性，得到的含有人干细胞生长因子的化妆品抗皱性能储存一个月后仍然保持良好。
Description
技术领域
本发明特别涉及一种人干细胞生长因子在化妆品中的应用，属于日化产品领域。
背景技术
皮肤被细分为表浅较薄的表皮、含更多纤维的真皮及皮下组织。表皮由覆盖于胚胎表面的外胚层分化而来，由多层鳞状上皮构成，从厚厚的头皮到全身最薄的眼睑皮肤(0.04mm)，其厚度各有所不同。表皮又可以细分为角朊细胞、树枝状细胞和麦克尔细胞；真皮主要由中胚层发育而来，位于表皮之下，与表皮之间靠一层基底膜带分开。真皮主要由结缔组织构成，也包括了血管、神经、肌肉、淋巴、汗腺和皮脂腺，浅在较薄的被称为乳头层，而深层较厚的则被称为网状层。真皮的主要成分是胶原，胶原纤维在乳头层含量很少且排列不规则，但在网络层则呈束状平行于表面排列；皮下组织或称脂膜，是体表的浅筋膜，由疏松结缔组织和脂肪组织构成。真皮向皮下组织内伸出许多大小不等的胶原纤维束，使皮肤与皮下组织牢固连接，两者之间无明显界限(Wayne F.Larrabee，Jr.Kathleen H.Makielski，Jenifer L.Henderson，主译王原路、张金明、何祯平，第二版，面部外科解剖图解[M].广东：广东科技出版社，2006，45-46；王德昌，傅洪滨，王一兵 主编.人体皮肤组织学彩色图谱[M].山东：山东科学技术出版社，1999，4-8)。
细胞老化就是人体衰老的根本原因。25岁以后，人自身的生理功能自行性减退，衰老的细胞大于新生细胞。加上外界影响(自然环境、生活压力、特别是女性生育哺乳后自然环境的伤害、辐射、接触性伤害等)和机体自身的原因(免疫力低下、内分泌失调、脏器功能减弱、病毒侵害、自由基侵入等)以致人会整体开始衰老。人体的衰老外部最明显的表现是皮肤，开始出现皱纹，皮肤老化，失去光泽等。美国科学家LEVI博士发现GF细胞因子，这些除皱肽是由多种生长因子组成的多肽生物制品，主要有SCGF(干细胞生长肽)、AFGF(酸性成纤维细胞生长肽)、CCTF(细胞智能调控肽)和EGF(表皮细胞生长肽)组成。SCGF作用于真皮层的成纤维干细胞，使处于休眠、损伤的成纤维干细胞被激活和修复并成熟分化大量的成纤维细胞。
人干细胞生长因子(human stem cell growth factor，hSCGF，又名LSLCL)是一种在骨髓造血微环境中起作用的早期造血刺激因子，具有多种生物活性。其基因定位于人染色体19q13.3，由4个外显子和3个内含子组成。
已知人干细胞生长因子具有两种形式，全长分子hSCGF-α(成熟mRNA完全开放读码框972bp，编码323个氨基酸)和在C端保守的Ca2+依赖糖识别结构域(calcium dependent carbohydrate recognition domain，CRD)内缺失78氨基酸(erythropoietin，Epo)协同作用对红细胞系有红细胞样爆发促进活性的截短型分子hSCGF-β(成熟mRNA长738bp，编码245个氨基酸)，因此属于C型凝集素(C-type lectin)超家族成员。
SCGF作为一种生物活性蛋白，应用于化妆品中的关键问题是在制备化妆品过程中必须要保持SCGF的活性。目前还未有关于SCGF应用于化妆品中的报道。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供人干细胞生长因子在化妆品中的应用。
本发明的目的通过下述技术方案实现：人干细胞生长因子在化妆品中的应用，是通过均质工艺将人细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的人干细胞生长因子含量为0.1～20.0ng，纯度为85～99％；
所述的均质工艺具体包括以下步骤：将化妆品的原料中需要加热的成分分为油性组分和水性组分，分别加热后混合，接着均质乳化，再冷却至37～50℃，加入含有人干细胞生长因子的溶液以及不需加热的组分，搅拌均匀，真空脱气；
所述的人干细胞生长因子可以是用基因工程方法制备的重组人干细胞生长因子，也可以是应用细胞培养液天然分离的人源人干细胞生长因子，人干细胞生长因子包括hSCGF-α和hSCGF-β两个亚型；
所述的化妆品包括护肤类及抗皱产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化妆品；
所述的护肤类及抗皱产品包括润肤霜、冷霜、雪花膏、乳液、眼霜、护手霜、日霜、晚霜、防裂膏、花露水、收缩水和化妆水；
所述的清洁类化妆品包括清洁霜、洗面乳、沐浴液和剃须用品；
所述的功能性化妆品包括美白护肤品、抗皱护肤品、保湿护肤品、祛痘护肤品和抗汗护肤品；
所述的美容化妆品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。
一种抗皱的化妆品，含有相当于化妆品质量0.1～20.0ppm的人干细胞生长因子；
一种含有人干细胞生长因子的护手霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
鲸蜡醇 4.0-9.0％
精制蜂蜡 5.0-8.0％
葵花籽油 30-45％
貂油 4.0-9.0％
尼泊金甲酯 0.01-0.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％；
一种含有人干细胞生长因子的眼霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
PEA(乳化剂) 1.0-3..5％
IPP(棕榈酸异丙酯) 3.5-5.5％
合成角鲨烷 0.5-3.5％
C16-18OH(16-18醇) 0.3-2.0％；
AVC(丙烯酸聚合物) 0.5-2.5％；
Polylift(紧肤剂) 2.0-3.5％
Fermiskin(去皱剂) 0.5-2.3％
极美 0.5-2.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％；
一种含有人干细胞生长因子的润肤霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
ZY-92(乳化剂) 1.5-3.5％
ZY-921(乳化剂) 2.0-4.5％
C16-18OH(16-18醇) 2.0-4.5％
白油 5.0-17.0％
DC-200(乳化剂) 0.1-1.0％
硬脂酸 1.0-3.0％
BTH(抗氧化剂) 0.1-0.35％
甘油 1.5-4.5％
汉生胶 0.01-0.15％
EDTA-2Na(乙二胺四乙酸二钠) 0.01-0.15％
三乙醇胺 0.1-0.35％
极美 0.1-1.0％；
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％；
一种含有人干细胞生长因子的洗手液，主要含有如下按质量百分比计的成分：
AC-208(乳化剂) 20.0-45.0％
6501(椰油酰胺丙基甜菜碱) 2.0-10.0％
AES-70(脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠) 3.0-7.0％
氧化胺 5.0-10.0％
PX(氯二甲苯酚) 0.1-1.0％
IG-300(三氯生) 0.1-1.0％；
柠檬酸 0.1-1.0％；
DMDMH(防腐剂) 0.1-0.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％。
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
(1)本发明首次将人干细胞生长因子应用于化妆品中，含有人干细胞生长因子的化妆品中于4℃环境中保存，一个月内仍可检测到人干细胞生长因子的活性。
(2)将人干细胞生长因子按0.1～20.0ng/g化妆品的量添加于化妆品中，得到的含有人干细胞生长因子的化妆品于4℃环境中保存一个月后，其抗皱性能仍然保持良好。
附图说明
图1是hSCGF作用人真皮成纤维细胞HDF的效果图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1
人干细胞生长因子的获取
从人脐带间充质干细胞中抽提总RNA，逆转录为cDNA。根据人SCGF全长基因序列(GenBank Accession No.NM_002975)，设计PCR引物。SCGF1上游引物序列：5′-CAAGAGTCCAGCTTAATGCAGGCAG-3′，SCGF1下游引物序列：5′-GCTAGAAGGGGAACTCGCAGACGTA-3′。以上所获CDNA为模板，通过PCR获取SCGF1基因。SCGF成熟肽编码序列(SCGF2)PCR引物(GenBank：AB009244.1)设计：SCGF2上游：5′-ATTTAAAACATATGGGTGCTCGGGGAGCAGAGAG-3′，SCGF2下游：5′-ATTGGATCCCTAGAAGGGGAACTCGCAG-3′。以SCGF1为模板，PCR反应获得SCGF2。用Nde I、BamH I双酶切SCGF2和pET-28a(+)质粒，T4 DNA连接酶连接，连接物转化感受态大肠杆菌DH5α，重组质粒pET-28a-SCGF构建成功后，转化入大肠杆菌BL21(DE3)表达。表达的重组人干细胞生长因子通过Ni2+-NTA柱纯化，获得目标重组蛋白。
实施例2
将护手霜成分进行分组，如表1所示，制备得到3种配方的含有人干细胞生长因子的护手霜：
制备过程：将A组分于70～80℃溶解，加入B组分均质(负压，均质1-2次，每次15-30分钟)乳化，降温至37～50℃，加入C、D组分，搅拌均匀，真空脱气，得到三种含有人干细胞生长因子的护手霜。
实施例3
干细胞生长因子眼霜
将眼霜成分进行分组，如表2所示，制备得到3种配方的含有人干细胞生长因子的眼霜：
工艺：将B组分用部分去离水加热溶解、搅拌均匀，A组分于70-80℃溶解，A组分倒入B组分中，搅拌均匀，降温至37-50℃，加入C、D组分，搅拌均匀即可。
实施例4：
干细胞生长因子润肤霜：
将润肤霜成分进行分组，如表2所示，制备得到3种配方的含有人干细胞生长因子的润肤霜：
工艺：将A组分于70-80℃水浴溶解，B组分用甘油将汉生胶和乙二胺四乙酸二钠分散均匀后水浴溶解，将A倒入B中，均质(负压，均质1-2次，每次15-30分钟)乳化，降温到37-50℃后加入C、D组分，均质均匀。
实施例5：
干细胞生长因子洗手液：
将洗手液成分进行分组，如表1所示，制备得到3种配方的含有人干细胞生长因子的洗手液：
工艺：将C、B组分于70-80℃水浴溶解，均质(负压，均质1-2次，每次15-30分钟)乳化，降温至37-50℃，加入A、D组分，搅拌均匀即可。
效果的检测：
HDF(Human dermal fibroblast，人真皮成纤维细胞，由16周岁人包皮细胞分离而来)达到80-90％融合，消化，以5×104/ml的细胞密度铺96孔板，每孔100μl，12h后加细胞因子，实验分为加SCGF组(浓度分别为0.000001％、0.00001％、0.00002％)和不加SCGF组，每组设4复孔。37℃，5％CO2，饱和湿度培养箱孵育48h加MTT，继续孵育4h后加DMSO，570nm波长下测吸光度值，实验重复三次。
结果显示，含有细胞因子组与不含因子的对照组相比，吸光度值明显增加，有显著性差异，如图1。图1的结果表明，在一定浓度范围内，人干细胞生长因子对人真皮成纤维细胞有促增殖能力，效果显著。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (10)
1.人干细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：通过均质工艺将人细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的人干细胞生长因子含量为0.1～20.0ng，纯度为85～99％。
2.根据权利要求1所述人干细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述的均质工艺具体包括以下步骤：将化妆品的原料中需要加热的成分分为油性组分和水性组分，分别加热后混合，接着均质乳化，再冷却至37～50℃，加入含有人干细胞生长因子的溶液以及不需加热的组分，搅拌均匀，真空脱气。
3.根据权利要求1所述人干细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述的人干细胞生长因子为是用基因工程方法制备的重组人干细胞生长因子或是应用细胞培养液天然分离的人源人干细胞生长因子。
4.根据权利要求1所述人干细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述的化妆品包括护肤类及抗皱产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化妆品。
5.根据权利要求4所述人干细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述的护肤类及抗皱产品包括润肤霜、冷霜、雪花膏、乳液、眼霜、护手霜、日霜、晚霜、防裂膏、花露水、收缩水和化妆水；
所述的清洁类化妆品包括清洁霜、洗面乳、沐浴液和剃须用品；
所述的功能性化妆品包括美白护肤品、抗皱护肤品、保湿护肤品、祛痘护肤品和抗汗护肤品；
所述的美容化妆品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。
6.一种抗皱的化妆品，其特征在于含有相当于化妆品质量0.1～20.0ppm的人干细胞生长因子。
7.一种含有人干细胞生长因子的护手霜，其特征是通过权利要求1所述的应用得到，主要含有如下按质量百分比计的成分：
鲸蜡醇 4.0-9.0％
精制蜂蜡 5.0-8.0％
葵花籽油 30-45％
貂油 4.0-9.0％
尼泊金甲酯 0.01-0.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％。
8.一种含有人干细胞生长因子的眼霜，一其特征是通过权利要求1所述的应用得到，主要含有如下按质量百分比计的成分：
乳化剂PEA 1.0-3..5％
棕榈酸异丙酯IPP 3.5-5.5％
合成角鲨烷 0.5-3.5％
C16-18醇 0.3-2.0％
丙烯酸聚合物AVC 0.5-2.5％
紧肤剂Polylift 2.0-3.5％
去皱剂Fermiskin 0.5-2.3％
极美 0.5-2.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％。
9.一种含有人干细胞生长因子的润肤霜，其特征是通过权利要求1所述的应用得到，主要含有如下按质量百分比计的成分：
乳化剂ZY-92 1.5-3.5％
乳化剂ZY-921 2.0-4.5％
C16-18醇 2.0-4.5％
白油 5.0-17.0％
乳化剂DC-200 0.1-1.0％
硬脂酸 1.0-3.0％
抗氧化剂BTH 0.1-0.35％
甘油 1.5-4.5％
汉生胶 0.01-0.15％
乙二胺四乙酸二钠 0.01-0.15％
三乙醇胺 0.1-0.35％
极美 0.1-1.0％；
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％。
10.一种含有人干细胞生长因子的洗手液，其特征是通过权利要求1所述的应用得到，主要含有如下按质量百分比计的成分：
乳化剂AC-208 20.0-45.0％
椰油酰胺丙基甜菜碱6501 2.0-10.0％
脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠AES-70 3.0-7.0％
氧化胺 5.0-10.0％
氯二甲苯酚PX 0.1-1.0％
三氯生IG-300 0.1-1.0％；
柠檬酸 0.1-1.0％；
防腐剂DMDMH 0.1-0.5％
人干细胞生长因子 0.000001～0.0002％。
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