CN103083202A - 细胞生长因子在化妆品制备中的应用方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了人细胞生长因子在化妆品中的应用，应用方法为通过均质工艺将人细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的人细胞生长因子含量为0.1-20ng，纯度为85-99％。更具体的应用方法包括如下步骤：油、水两相必须在80℃保持15分钟，进均质锅前须经过200目过滤网。均质锅搅拌均匀6分钟，冷却至37℃加入细胞因子；密封放置于4℃保存。本发明首次将人细胞生长因子用于多种化妆品中，在化妆品基质材料中人细胞生长因子仍然可以保持良好的活性，所制备的化妆品在一个月后仍能保持良好的美容功效。
Description
技术领域
本发明特别设计一种人细胞生长因子在化妆品中的应用，属于日化产品领域。
背景技术
皮肤被细分为表浅较薄的表皮，含更多纤维的真皮及皮下组织。表皮由覆盖于胚胎表面的外胚层分化而来，由多层鳞状上皮构成，从厚厚的头皮到全身最薄的眼睑皮肤，其厚度各有所不同。表皮又可以细分为角朊细胞、树枝状细胞和迈克尔细胞；真皮主要由中胚层发育而来，位于表皮之下，与表皮质仅靠一层基底膜分开。真皮主要由结缔组织构成，也包括了血管、神经、肌肉、淋巴、汗腺和皮脂腺，表浅较薄的被称为乳头层，而深层较厚的则被称为网状层。真皮的主要成分是胶原，胶原纤维在乳头层含量很少而且排列不规则，但在网络层则呈束状平行于表面排列；皮下组织或称脂膜，是体表的浅筋膜，由疏松结缔组织和脂肪组织构成。真皮向皮下组织内伸出许多大小不等的胶原纤维束，使皮肤与皮下组织牢固连接，两者之间无明显界限。
皮肤老化是由自然因素或非自然因素造成的皮肤衰老现象。人出生后皮肤组织日益发达，功能逐渐活跃，当到达某种年龄就会开始退化，这种退化往往在人们不知不觉中慢慢进行。皮肤组织的成长期一般结束于25岁左右，有人称此期为“皮肤的弯角”，自此后生长与老化同时进行，皮肤弹力纤维渐渐变粗，40-50岁进入初老期，皮肤的老化慢慢明显，但老化程度因人而异。
皮肤老化现象主要表现在两个方面：
1.皮肤组织衰退。皮肤的厚度随着年龄的增加而有明显改变。人的表皮20岁时最厚，以后逐渐变薄，到老年期颗粒层可萎缩至消失，棘细胞生存期缩短。表皮细胞核分裂增加，故黑色素亦增多，以致老年人的肤色多为棕黑色。由于老化细胞附着于表皮角质层，使皮肤表面变硬，失去光泽。真皮在30岁时最厚，以后渐变薄并伴有萎缩。皮下脂肪减少，并由于弹力纤维与胶原纤维发生变化而渐失皮肤弹性和张力，更进一步导致皮肤松弛与皱纹产生。
2.生理功能低下。皮脂腺、汗腺功能衰退，汗液与皮脂排除减少，皮肤逐渐失去昔日光泽而变得干燥。血液循环功能减退以补充皮肤必要的营养，因此老年人皮肤伤口难愈合。
细胞生长因子是一类能在骨髓造血微环境中起作用的早期造血刺激因子，具有多种生物活性。包括
表皮生长因子：含有3个二硫键的小分子丝裂原。参与正常细胞的生长、肿瘤形成、创伤愈合等过程。其序列和功能与TGF-α同源。能刺激表皮和上皮组织增生的多肽类促分裂素，亦可抑制胃酸分泌。表皮生长因子由53个氨基酸残基组成，其前体分子质量超过100kDa。
成纤维细胞生长因子：由垂体和下丘脑分泌的多肽。有酸性(pI 5.6)和碱性(pI9.6)两种。能促进成纤维细胞有丝分裂、中胚层细胞的生长，还可刺激血管形成，在创伤愈合及肢体再生中发挥作用。
转化生长因子-α：表皮生长因子家族成员，与表皮生长因子受体结合，可引起受体的酪氨酸磷酸化及受体结合后的信号传导变化。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的缺点与不足，提供人细胞生长因子在化妆品中的应用。
本发明的目的通过下述方案实现：人细胞生长因子在化妆品中的应用，是通过均质工艺将细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的细胞生长因子含量为0.1-20ng，纯度为85-99％；
所述的均质工艺具体包括以下步骤：将化妆品的原料中需要加热的成分分为油性组分和水性组分，分别加热后混合，接着均质乳化，再冷却至37-50℃，加入含有生长因子的溶液以及不需加热的组分，搅拌均匀，真空脱气；
所述的人细胞生长因子使用基因工程方法制备的重组人细胞生长因子，也可以是应用细胞培养液天然分离的人源细胞生长因子，包括表皮生长因子、成纤维细胞生长因子、转化生长因子-α。
所述的化妆品包括护肤类及抗皱产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化妆品；
所述的护肤类和抗皱类产品包括清洁霜、洗面乳、沐浴乳和剃须用品；
一种含有人细胞生长因子的护手霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
一种含有人细胞生长因子的眼霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
一种含有人细胞生长因子的洗手液，主要含有如下按质量百分比计的成分
本发明相对于现有技术具有如下的优点及效果：
本发明首次将人细胞生长因子应用于化妆品中，含有人细胞生长因子的化妆品于4℃ PEA(乳化剂)中保存，一个月内仍可检测到生长因子的活性。
将细胞生长因子按照0.1-20ng/g化妆品的量添加于化妆品中，得到的含有人细胞生长因子的化妆品于4℃保存一个月后，其抗皱性仍然保持良好。
附图说明
图1是表皮生长因子作用人真皮成纤维细胞的效果图。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明做进一步的阐述，但本发明的实施方式不限于此。
实施例1人表皮生长因子的获取
从人脐带间充质干细胞中抽提总RNA，逆转录为cDNA。根据人EGF全长基因序列，设计PCR引物。EGF上游引物序列：5’-CAAGAGTCCAGCTTAATGCAGGCAG-3’，下游引物序列：5’-GCTAGAAGGGGAACTCGCAGACGTA-3’.以上所获cDNA为模板，通过PCR获取EGF基因。用Nde，BamH1双酶切EGF和pET-28a质粒，T4DNA连接酶连接；连接物转化感受态大肠杆菌DH5α。重组质粒pET-28a构建成功后，转化入大肠杆菌BL21表达。表达的重组人细胞生长因子通过镍柱纯化，获得目标重组蛋白。
实施例2
将日霜成分进行分组，按表1所示，制备得到3种配方的含有人细胞生长因子的日霜：
表1
制备过程：将A组分于70-80℃溶解，加入B组分均质乳化，降温至37℃，加入C、D组分，搅拌均匀，真空脱气，得到三种含有人细胞生长因子的护手霜。
人真皮成纤维细胞，由16周岁人包皮细胞分离而来，达到80-90％融合，消化，以5×104/ml的细胞密度铺96孔板，每孔100ul，12小时候加细胞因子，实验分为加EGF组和不加EGF组。每组设4复孔。37℃，5％CO2，饱和湿度培养箱孵育48小时，加MTT，继续孵育4小时候加DMSO，570nm波长下测吸收光度值，实验重复三次。
结果显示，含有细胞因子组与不含细胞因子对照组相比，吸光度值明显增加，有显著性差异，如图1所示。图1的结果表明，在一定浓度范围内，人细胞生长因子对人真皮成纤维细胞(HDF)有促增值能力，效果显著。
上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。
Claims (9)
1.人细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：通过均质工艺将人细胞生长因子添加在化妆品中，其中，每克化妆品的人细胞生长因子含量为0.1-20ng/g，纯度为85-99％。
2.根据权利要求1所述人细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述的均质工艺包括以下步骤：将化妆品的原料中需要加热的成分分为油性组分和水性组分，分别加热混合后，接着均质乳化，再冷却至37摄氏度，加入含有人细胞生长因子的溶液以及不需要加热的组分，搅拌均匀，真空脱气。
3.根据权利要求1所述的人细胞生长因子在化妆品中的应用，其特征是：所述化妆品包括护肤类及抗皱产品、清洁类化妆品、功能性化妆品和美容化妆品。
4.根据权利要求1所述人细胞生长因子是用基因工程方法制备的重组人细胞生长因子。
5.根据权利要求3所述人细胞生长因子，其特征是：所述的护肤类及抗皱产品包括润肤霜、冷霜、雪花膏、乳液、眼霜、护手霜、日霜、晚霜、防裂膏、花露水、收缩水和化妆水。所述的清洁类化妆品包括清洁霜、洗面乳、沐浴液和剃须用品；所述的美容化妆品包括粉底霜、香粉、面膜、唇膏和胭脂。
6.一种抗皱化妆品，其特征在于含有相当于化妆品质量0.1-20ppm的人细胞生长因子。
7.一种含有细胞生长因子的护手霜，其特征是通过权利要求1所述的应用得到，主要含有如下按质量百分比计的成分：
8.一种含有人细胞生长因子的眼霜，主要含有如下按质量百分比计的成分：
9.一种含有人细胞生长因子的洗手液，主要含有如下按质量百分比计的成分：
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