CN107652336A

CN107652336A - 一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法

Info

Publication number: CN107652336A
Application number: CN201711059668.3A
Authority: CN
Inventors: 钟玉林
Original assignee: ANHUI LONKING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Current assignee: ANHUI LONKING BIOTECHNOLOGY Co Ltd
Priority date: 2017-11-01
Filing date: 2017-11-01
Publication date: 2018-02-02

Abstract

本发明公开了一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，通过对现有橄榄苦苷的溶剂提取工艺进行优化，在保证橄榄苦苷的纯度达到85%以上的基础上，从橄榄叶中提取橄榄苦苷的提取率达到了8%以上，节约了宝贵的橄榄叶资源，较好地解决了现有溶剂提取法存在的收率低和/纯度低的技术问题。

Description

一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法

技术领域

本发明属于植物活性成分提取技术领域，具体涉及一种从橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法。

背景技术

橄榄苦苷苷是一种裂环烯醚萜苷类多酚化合物，广泛存在于各种木犀科的木犀榄属、丁香属、女贞属等植物中。其分子式为C₂₅H₃₂O₁₃，分子量为540.51。橄榄苦苷苷的主要物理特征如下：易吸潮，熔点87～89℃；易溶于乙醇、丙酮、冰醋酸、5％NaOH溶液等，也可溶于水、丁醇、乙酸乙酯、醋酸丁酯等，几乎不溶于乙醚、石油醚、氯仿、四氯化碳等。

现有许多研究已证实，橄榄苦苷具有多种保健作用和治疗作用的药理活性。橄榄苦苷在临床上作为药品，能抑制病毒、细菌、微生物及其引起的毒素，对低密度脂蛋白胆固醇具有抗氧化作用，能改善高血压、高血脂等心血管疾病，提高T淋巴细胞、NK细胞、吞噬细胞等的再生能力，加强细胞对病毒和感染的免疫能力。

由于橄榄叶中所含橄榄苦苷的含量明显高于果实和树皮，现有多种从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的工艺和方法。这些方法主要包括溶剂提取法、超临界CO₂萃取技术、微波或超声波辅助萃取、过热液体提取法、低温减压沸腾蒸馏提取法等等。上述提取方法中除溶剂提取法外，其它几种方法在提高产品收率和产品纯度以及活性方面均较常规的溶剂提取法有所改善，但这几种方法需要有专门的设备，操作也较为复杂，提取成本较高。

现有用于橄榄苦苷的溶剂提取法在产品纯度提高方面有较好地表现，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量(纯度)大约在80～90％之间，如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取分离高含量橄榄苦苷的方法》(公布号CN 102532217 A)中，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量为80％左右，又如在中国发明专利《一种从橄榄叶提取橄榄苦苷和穗花杉双黄酮的方法》(CN 102731592 A)中，釆用HPLC检测橄榄苦苷成品的含量达到97-98％。

但是，现有用于橄榄苦苷的溶剂提取法的产品收率均较低，如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法》(CN 103333213 A)中，橄榄苦苷的提取率仅为6％，又如在中国发明专利《从油橄榄叶中提取分离橄榄苦苷的方法》(CN 104311613 A)中，橄榄苦苷的提取工艺和成品处理过程较为繁杂，且其回收率仅为4.4％。

发明内容

本发明要解决的技术问题是提供一种从橄榄叶中提取橄榄苦苷的方法，该方法不仅工艺简单，而且在保证橄榄苦苷纯度的基础上，提高了橄榄苦苷成品的提取率。

为解决上述技术问题，本发明一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，包括如下步骤：

1)、粉碎：

将橄榄叶粉碎过10目筛，得到橄榄叶粗粉；

2)、提取、浓缩：

橄榄叶粗粉用20～95％乙醇回流提取三次，合并提取液，浓缩至比重1.1～1.3；

3)、吸附分离：

向浓缩液中加入3～5倍量的水，搅拌均匀，离心，取滤液上大孔吸附树脂，用50～80％乙醇解吸；

4)、脱色、浓缩结晶：

向解吸液中加入2～5％活性炭，回流搅拌脱色2～4小时，冷却过滤，滤液减压浓缩至比重为1.5～1.8，冷却结晶12～24小时；

5)、离心、重结晶：

将结晶粗品离心，沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3～5次；

6)、离心：

将重结晶好的物料倒入离心机离心，沉淀用乙酸乙酯淋洗，得橄榄苦苷精品湿品沉淀；

7)、干燥：

将橄榄苦苷精品湿品沉淀放入烘箱干燥，干燥温度为50～60℃；

8)、粉碎过筛：

将干燥的橄榄苦苷精品粉碎，过80目筛，得橄榄苦苷成品。

在上述技术方案的基础上，为了进一步提高橄榄苦苷成品的提取率，对提取工艺的节点步骤进行优化，其中，在上述步骤2)提取、浓缩中，提取时乙醇的体积比和用量分别优选为：第一次提取时乙醇的体积比为30％、乙醇的用量为1200mL；第二次提取时乙醇的体积比为80％、乙醇的用量为1000mL；第三次提取时乙醇的体积比为20％、乙醇的用量为800mL。

更进一步地，在上述步骤3)吸附分离中，水的使用量为浓缩液的4倍，解吸用的乙醇体积比为80％。

在上述步骤4)脱色、浓缩结晶中，活性炭的使用量优选为3％。

在上述步骤5)离心、重结晶中，乙酸乙酯重结晶的次数优选为3次。

在上述步骤5)和步骤6)离心中，离心机转速分别优选为2000r/min和1500r/min。

与现有技术相比，本发明具有以下优点：

本申请通过对现有橄榄苦苷的溶剂提取工艺进行优化，在保证橄榄苦苷的纯度达到85％以上的基础上，从橄榄叶中提取橄榄苦苷的提取率达到了8％以上，节约了宝贵的橄榄叶资源，较好地解决了现有溶剂提取法存在的收率低和/纯度低的技术问题。与微波或超声波辅助萃取或低温减压沸腾蒸馏提取法等相比较，本申请不仅提高了橄榄苦苷的提取率，也无需配备专门的提取设备，极大地降低了橄榄苦苷的提取成本。

附图说明

图1：橄榄苦苷的HPLC图。

其中，纵坐标表示峰面积，横坐标表示分离时间。

具体实施方式

以下具体实施例对本发明作进一步阐述。

各个实施例中用于橄榄苦苷含量检测的HPLC法的色谱条件如下：

色谱柱为ZORBAX Eclipse XDB-C₁₈、流动相为乙睛：水(25：75)、流速为1.0mL/min、检测波长为260nm、柱温为30℃、检测时间为25min、橄榄苦苷的保留时间约为11分钟。

对照品溶液的配制：精密称取橄榄苦苷对照品10mg，用80％的甲醇溶液定容至5mL，配成2.0mg/mL的溶液。

供试品溶液的配制：精密称取各实施例最终得到的橄榄苦苷粉末0.5g，置10mL棕色量瓶中，加入80％甲醇溶解，定容，摇匀，水浴超声60min后放至室温，摇匀过滤，弃去初滤液。精密量取续滤液20mL，置旋转蒸发器中，浓缩挥去甲醇，定量转移至2mL量瓶中，加甲醇定容，摇匀，滤膜过滤后的滤液作为供试品溶液。

线性关系考察：分别精密量取0.5、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0mL对照品溶液，置10mL量瓶中，加80％甲醇定容，配成0.1、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mg/mL的系列对照品溶液。精密吸取系列溶液各10mL，按上述色谱条件进样分析，以峰面积为纵坐标(Y)，进样量为横坐标(X)，得橄榄苦苷的线性回归方程为：Y＝2.365×10⁵X+103.6(r＝0.9991)。线性范围为1～10ug。

实施例1

将橄榄叶粉碎过10目筛，取橄榄叶粗粉100g分别以30％的乙醇1200mL、80％的乙醇1000mL、20％的乙醇800mL回流提取，回流提取时间分别为2小时、1.5小时、1小时，合并3次提取液，在-0.06MPa下浓缩，浓缩至比重为1.2，浓缩液中加入4.0倍量水，搅拌均匀离心，取滤液上大孔吸附树脂，用80％乙醇解吸。向解吸液中加入3％活性炭，回流搅拌脱色3.0小时，冷却过滤，滤液减压浓缩至比重为1.60，冷却结晶15小时。将结晶粗品离心(转速为2000r/min)，沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3次。将重结晶好的物料倒入离心机离心(转速为1500r/min)，沉淀用乙酸乙酯淋洗，得橄榄苦苷精品湿品沉淀。将橄榄苦苷精品湿品沉淀放入烘箱干燥，干燥温度为55℃，将干燥的橄榄苦苷精品粉碎，过80目筛，得橄榄苦苷成品9.1g(橄榄苦苷的收率为9.1/100＝9.1％)。

再将最终得到的橄榄苦苷成品按上述HPLC方法连续进样5次进行检测，得到橄榄苦苷的含量平均值为86.5％。

为了对本申请的提取节点步骤进行进行优化，以橄榄苦苷的收率和含量作为指标，实施例2到12的提取工艺参数和指标如下表：

从上表可知，橄榄苦苷的收率均在8％以上，橄榄苦苷的含量也均在85％以上。在影响橄榄苦苷提取收率方面，主要是对步骤2)、提取、浓缩过程以及步骤3)吸附分离过程中对乙醇浓度的选择，步骤2)三次提取中乙醇的浓度依次为低高低，这种浓度梯度更有利于橄榄叶中多酚化合物如橄榄苦苷的提取，同时又可使用较少的乙醇，节约了提取成本。

Claims

1.一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)、粉碎：

将橄榄叶粉碎过10目筛，得到橄榄叶粗粉；

2)、提取、浓缩：

3)、吸附分离：

4)、脱色、浓缩结晶：

5)、离心、重结晶：

将结晶粗品离心，沉淀粗品用乙酸乙酯重结晶3～5次；

6)、离心：

7)、干燥：

8)、粉碎过筛：

将干燥的橄榄苦苷精品粉碎，过80目筛，得橄榄苦苷成品。

2.如权利要求1所述的一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于，所述步骤2)提取、浓缩中，提取时乙醇的体积比和用量分别为：第一次提取时乙醇的体积比为30％、乙醇的用量为1200mL；第二次提取时乙醇的体积比为80％、乙醇的用量为1000mL；第三次提取时乙醇的体积比为20％、乙醇的用量为800mL。

3.如权利要求1所述的一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于，所述步骤3)吸附分离中，水的使用量为浓缩液的4倍，解吸用的乙醇体积比为80％。

4.如权利要求1所述的一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于：所述步骤4)脱色、浓缩结晶中，活性炭的使用量为3％。

5.如权利要求1所述的一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于：所述步骤5)离心、重结晶中，乙酸乙酯重结晶的次数为3次。

6.如权利要求1所述的一种高收率、高纯度橄榄苦苷的提取方法，其特征在于：所述步骤5)和步骤6)离心中，离心机转速分别为2000r/min和1500r/min。