CN109305954A - 一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法 - Google Patents

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Abstract

一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，属于有机化合物分离领域。从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法包括以下步骤：获取藤茶的水提液；使用大孔树脂对水提液进行吸附，随后依次使用水和质量百分比为30‑50％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，再用质量百分比为70‑90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；将洗脱液浓缩、结晶得到晶体，水洗后干燥。本发明提供的一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法能够得到纯度在98％以上的二氢杨梅素，且二氢杨梅素的收率可达60％以上。

Description

一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法
技术领域
本发明涉及有机化合物分离领域，具体而言，涉及一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法。
背景技术
藤茶为葡萄科蛇葡萄属一种藤本植物，其学名为显齿蛇葡萄[Ampelopsisgrossedentata(Hand-Mazz)W.T.Wang]主要分布于我国长江流域以南方地区，如福建、广东、广西、湖北、湖南及云南东南部等地，其嫩茎叶多作茶品使用。二氢杨梅素是藤茶中含量最高的黄酮类活性物质，具有抗氧化、清除自由基、抗血栓、消炎、抗肿瘤等多种功效，有明显的降血糖、降血脂、降血压、抗氧化、抗血栓、抑菌抗菌的作用，能预防和减轻酒精对肝的损伤，有较强的保肝护肝作用。
目前生产上从藤茶中大量提取制备二氢杨梅素主要采用热水提取降温析出的方法，利用二氢杨梅素在冷热水中溶解度差异较大的原理来进行纯化，相对于其他方法，该方法有提取充分、分离简单、无溶剂污染和成本低的特点与优势，但是二氢杨梅素单次提取降温析出的纯度不高，需要多次重结晶才能获得高纯度(大于98％)的产品，多次重结晶后二氢杨梅素的得率会大幅降低。
因此，对现有提取制备二氢杨梅素的方法进行改进，研究能高收率大量制备高纯度二氢杨梅素的生产性工艺方法具有重要的生产实际价值与意义。
发明内容
本发明的目的在于提供一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其能够提高二氢杨梅素的纯度和提取的收率。
本发明的实施例是这样实现的：
一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其包括以下步骤：
获取藤茶的水提液；
使用大孔树脂对水提液进行吸附，随后依次使用水和质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，再用质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；
将洗脱液浓缩、结晶得到晶体，水洗后干燥。
在本发明较佳的实施例中，上述获取藤茶的水提液的方法是，将藤茶的粉末与水按1：18-24的质量比混合，随后在70-90℃下搅拌提取1-2h，离心得水提液。
在本发明较佳的实施例中，上述使用大孔树脂对水提液进行吸附时，使用大孔树脂在40-50℃下吸附1-2h。
在本发明较佳的实施例中，上述使用水洗涤大孔树脂时，使用大孔树脂体积2-3倍的水洗涤1-2次。
在本发明较佳的实施例中，上述使用水洗涤大孔树脂后，用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤2-3次。
在本发明较佳的实施例中，上述使用水和乙醇溶液洗涤大孔树脂后，用大孔树脂体积3-5倍的质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗脱1-2次。
在本发明较佳的实施例中，上述将洗脱液在60-80℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比为0-20％，得到浓缩液，随后将浓缩液和水按1：1-3的体积比混合均匀后在5-20℃下静置过夜，最后离心分离得到晶体。
在本发明较佳的实施例中，上述水洗是将晶体用20-30℃的水洗涤2-3次后干燥。
在本发明较佳的实施例中，上述干燥是在60-90℃和真空减压条件下进行。
在本发明较佳的实施例中，上述藤茶的粉末是将藤茶粉碎过40-80目筛得到。
本发明实施例的有益效果是：本发明实施例提供的一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法包括以下步骤：获取藤茶的水提液；使用大孔树脂对水提液进行吸附，随后依次使用水和质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，再用质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂得到洗脱液；将洗脱液浓缩、结晶得到晶体，水洗后干燥。本发明提供的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法能够得到纯度在98％以上的二氢杨梅素，且二氢杨梅素的收率可达60％以上。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍，应当理解，以下附图仅示出了本发明的某些实施例，因此不应被看作是对范围的限定，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他相关的附图。
图1为本发明实施例1制备得到的水提液的图片；
图2为本发明实施例1制备得到的洗脱液的照片；
图3为本发明实施例1制备得到的浓缩液中二氢杨梅素结晶时的照片；
图4为本发明实施例1制备得到的二氢杨梅素的照片；
图5为本发明实施例1制备得到的二氢杨梅素的HPLC图谱；
图6为购买的二氢杨梅素对照品的HPLC图谱。
具体实施方式
为使本发明实施例的目的、技术方案和优点更加清楚，下面将对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市售购买获得的常规产品。
下面对本发明实施例提供的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法进行具体说明。
本发明实施例提供的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，首先将藤茶粉碎得到粉末，之后用热水(70-90℃)提取藤茶粉末中的二氢杨梅素得到水提液，接着使用大孔树脂对水提液进行吸附处理，使水提液中的二氢杨梅素吸附到大孔树脂上，并依次用水和低浓度的乙醇溶液(30-40％质量分数)洗涤大孔树脂去除杂质，最后用高浓度的乙醇溶液(70-90％质量分数)洗涤大孔树脂并收集高浓度乙醇溶液的洗涤溶液，得到二氢杨梅素的洗脱液，将洗脱液减压浓缩结晶，水洗干燥得到二氢杨梅素成品。
本发明实施例提供的二氢杨梅素的提取方法是采用大孔树脂吸附洗涤除杂纯化二氢杨梅素的方法，其较目前水溶液多次重结晶的方法可省去多次结晶的操作，且除杂后的提取液单次结晶可以获得高纯度的二氢杨梅素，极大的简化了工艺流程，还能获得很高的收率。同时该工艺不使用有毒的化学试剂和酸碱药剂，不破坏二氢杨梅素的分子结构，环境相容性相好，溶剂易回收，能耗少，生产成本低，工艺流程简单，适合连续化规模化生产的需要。
在本发明实施例一优选的方案中，获取藤茶的水提液的方法是，将藤茶的粉末与水按1：18-24的质量比混合，随后在70-90℃下搅拌提取1-2h，离心得水提液；在此条件下可充分将藤茶中的二氢杨梅素提取到水溶液中，并且可避免过高的温度长时间加热引起二氢杨梅素的氧化破坏。
其中，使用大孔树脂对水提液进行吸附时，优选使用大孔树脂在40-50℃下吸附1-2h，随后冷却至25-30℃，该方法可充分吸附水提液中的二氢杨梅素，而且使用大孔树脂吸附时采用较低的温度且无需剧烈的pH变化，操作条件温和，有利于保持二氢杨梅素天然的分子结构和生物活性，保证二氢杨梅素成品的质量。
此外洗涤大孔树脂时，先用大孔树脂体积2-3倍的水洗涤大孔树脂，再用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为30-50％的醇溶液洗涤2-3次，最后用大孔树脂体积3-5倍的质量百分比为70-90％的乙醇溶液将二氢杨梅素从大孔树脂上洗脱，可将二氢杨梅素与水提液中的其他不吸附或吸附能力的弱杂质有效分离，从而大幅提高二氢杨梅素的纯度。
在将洗脱液浓缩结晶时，先将洗脱液在50-70℃(优选为60-65℃)下减压浓缩至乙醇的质量百分比为2-20％(优选为减压浓缩至乙醇的质量百分比为5-10％)，随后将浓缩液和水按1：1-2的体积比混合均匀，在5-20℃(优选在10-15℃)静置结晶过夜，优选静置结晶时间在12h以上，最后离心分离晶体。
在本发明较佳的实施例中，将离心分离晶体用室温(20-25℃)水洗涤2-3次后在70-80℃和真空减压环境下进行干燥，该干燥方法有利于使晶体充分脱水，有利于保持二氢杨梅素的生物活性和成品的品质。
将藤茶粉碎至40-80目后进行水提，能够充分的破坏藤茶茎叶细胞的细胞结构，促进藤茶茎叶细胞中含有的二氢杨梅素在水提过程中溶出，能够在降低水提时间的同时有效的提高二氢杨梅素的收率。
本发明所述的藤茶的粉末，是指将藤茶的茎和/或叶粉碎后得到；大孔树脂采用的是现有常规的D-101、DA-201、AB-8等大孔树脂；醇溶液和乙醇溶液均指醇的水溶液和乙醇的水溶液；真空减压即真空负压。
以下结合具体实施例对本发明的特征和性能作进一步的详细描述。
实施例1
本实施例提供了一种二氢杨梅素，其是采用以下的藤茶提取二氢杨梅素的方法制备得到，其具体工艺如下：
S11、将藤茶粉碎后过40目筛，收集过筛的藤茶粉末。
S12、取上述藤茶粉末100g加入2000ml水混合均匀，随后在90℃下搅拌提取1h，离心得到水提液，如图1所示。
S13、将水提液使用D-101大孔树脂进行吸附，在45℃下保温吸附1.5h后冷却至25℃，随后用大孔树脂体积3倍的水洗涤大孔树脂2次，再用大孔树脂体积3倍的质量百分比为40％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，最后使用大孔树脂3倍的质量百分比为90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，收集90％的乙醇洗涤溶液得到洗脱液，如图2所示。
S14、将洗脱液在60℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为20％，向浓缩液中加入其体积3倍的水后冷却至5℃静置12h使二氢杨梅素结晶析出，如图3所示，随后离心收集晶体沉淀物。
S15、将晶体沉淀用适量水洗涤3次，滤纸过滤后在90℃减压真空干燥，得到18.3二氢杨梅素，其收率为61.0％；制备得到的二氢杨梅素成品，如图4所示。
对上述实施例1制备得到的二氢杨梅素，以二氢杨梅素标准品(标示纯度≥98％，HPLC法)为对照，采用HPLC进行检测，其纯度≥99％，HPLC图谱如图5和图6所示。
其中HPLC的测定色谱条件：LC-300分析型高效液相色谱仪(武汉赛尔夫科技有限公司)；色谱柱：Thermo C18(4.6×250mm，5μm)；柱温：25℃；流动相：甲醇-1％醋酸(25：75)；流速：1mL/min；检测波长：294nm；进样量：20μL。
实施例2
本实施例提供了一种二氢杨梅素，其是采用以下的藤茶提取二氢杨梅素的方法制备得到，其具体工艺如下：
S21、将藤茶粉碎后过50目筛，收集过筛的藤茶粉末。
S22、取100g藤茶粉末和2200ml水混合均匀，随后在85℃下搅拌冷提取1.5h，过滤得到水提液。
S23、使用大孔树脂对水提液进行吸附，在40℃下吸附2h后冷却至30℃，随后用大孔树脂体积2倍的水洗涤大孔树脂2次，再用大孔树脂体积2倍的质量百分比为40％的乙醇溶液洗涤大孔树脂2次，最后使用大孔树脂4倍的质量百分比为90％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，收集90％的乙醇洗涤溶液得到洗脱液。
S24、将洗脱液在60℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为18％，向浓缩液中加入其体积2.5倍的水后，冷却至10℃静置15h使二氢杨梅素结晶析出，随后离心收集晶体沉淀物。
S25、将晶体沉淀用适量水洗涤2次，滤纸过滤后在85℃减压真空干燥，得到19.8g二氢杨梅素，其收率为66.0％；
对上述实施例2制备得到的二氢杨梅素采用HPLC法进行检测，其纯度≥99％。
实施例3
本实施例提供了一种二氢杨梅素，其是采用以下的藤茶提取二氢杨梅素的方法制备得到，其具体工艺如下：
S31、将藤茶粉碎后过60目筛，收集过筛的藤茶粉末。
S32、取100g藤茶粉末和2400ml水混合均匀，随后在80℃下搅拌冷凝回流1h，过滤得到水提液。
S33、使用大孔树脂对水提液进行吸附，在50℃下吸附1h后冷却至28℃，随后用大孔树脂体积3倍的水洗涤大孔树脂1次，再用大孔树脂体积3倍的质量百分比为35％的乙醇溶液洗涤大孔树脂1次，最后使用大孔树脂5倍的质量百分比为80％的乙醇溶液洗涤大孔树脂，收集80％的乙醇洗涤溶液得到洗脱液。
S34、将洗脱液65℃减压浓缩至乙醇的质量百分比含量约为15％，向浓缩液中加入其体积2倍的水后冷却至15℃静置16h使二氢杨梅素结晶析出，随后离心收集晶体沉淀物。
S35、将晶体沉淀用适量水洗涤3次，滤纸过滤后在80℃减压真空干燥，得到21.6g二氢杨梅素，其收率为72.0％；
对上述实施例3制备得到的二氢杨梅素采用HPLC法进行检测，其纯度≥98％。
综上所述，本发明提供的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法采用大孔树脂吸附分离的方法来替代现有的重结晶方法去除水溶液中的杂质，不仅能够有效的去除杂质提高二氢杨梅素的纯度，使提取得到的二氢杨梅素的纯度达到98％以上，而且二氢杨梅素的收率能够达到60％以上。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (10)

1.一种从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，其包括以下步骤：
获取藤茶的水提液；
使用大孔树脂对所述水提液进行吸附，随后依次使用水和质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤所述大孔树脂，再用质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗涤所述大孔树脂得到洗脱液；
将所述洗脱液浓缩、结晶得到晶体，水洗后干燥。
2.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，获取藤茶的水提液的方法是，将藤茶的粉末与水按1：18-24的质量比混合，随后在70-90℃下搅拌提取1-2h，离心得水提液。
3.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，使用大孔树脂对所述水提液进行吸附时，使用大孔树脂在40-50℃下吸附1-2h。
4.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，使用水洗涤所述大孔树脂时，使用大孔树脂体积2-3倍的水洗涤1-2次。
5.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，使用水洗涤所述大孔树脂后，用大孔树脂体积2-3倍的质量百分比为30-50％的乙醇溶液洗涤2-3次。
6.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，使用水和乙醇溶液洗涤所述大孔树脂后，用大孔树脂体积3-5倍的质量百分比为70-90％的乙醇溶液洗脱1-2次。
7.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，将所述洗脱液在60-80℃下减压浓缩至乙醇的质量百分比为0-20％，得到浓缩液，随后将浓缩液和水按1：1-3的体积比混合均匀后在5-20℃下静置过夜，最后离心分离得到晶体。
8.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，所述水洗是将所述晶体用20-30℃的水洗涤2-3次后干燥。
9.根据权利要求1所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，所述干燥是在60-90℃和真空减压条件下进行。
10.根据权利要求2所述的从藤茶中分离纯化二氢杨梅素的方法，其特征在于，所述藤茶的粉末是将藤茶粉碎过40-80目筛得到。
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