CN107525788A - 一种分子印迹荧光微球阵列检测卡及其应用 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及了一种分子印迹荧光微球检测卡及其应用，将荧光分子印迹微球阵列粘下固定于硬质卡片中即得到分子印迹荧光微球阵列检测卡。本发明的分子印迹荧光微球检测卡识别能力强、吸附量大、吸附时间短、荧光强度高且稳定，克服了乙酰甲胺磷传统检测中前处理繁琐、灵敏性低的缺点；微球阵列的有序排布有利于印迹微球与目标物的充分接触，并且克服了微球在溶液中发生沉降并影响荧光强度的缺点为乙酰甲胺磷农药残留检测提供了一种准确、灵敏、快速的新方法，也为其他种类的残留农药检测技术的开发提供了一定的参考。

Description

一种分子印迹荧光微球阵列检测卡及其应用
技术领域
本发明属于材料科学与化学分析检测领域，具体来说是一种分子印迹荧光微球阵列检测卡及其应用。
背景技术
乙酰甲胺磷(Acephate)又名高灭磷，属于低毒杀虫剂，但由于使用量的逐年增加，乙酰甲胺磷的残留问题亦引起人们的重视。目前国内外对乙酰甲胺磷的检测局限于气相色谱，但是出现前处理繁琐、检测灵敏度低等缺点。
分子印迹技术是制备对于特定目标分子具有特异识别能力的材料的技术，在仿生传感器、人工酶催化剂、固相萃取、农药残留检测等诸多领域显示出广阔应用前景。其中，分子印迹技术用于农残检测已经越来越广泛，研究者已经以多种农药作为模板分子，制备了分子印迹聚合物，并用于实际环境样品的检测中。早期分子印迹聚合物多为采用本体聚合法制备的为块状聚合物，且后处理繁琐。相比之下球状聚合物吸附性能和选择性能更高，种球溶胀聚合制备的印迹微球粒径均一，性能良好。
量子点(Quantum Dot)是一种粒径为1～100nm的半导体纳米粒子,受激发后可产生荧光，具有稳定性强、相容性好和寿命长等诸多优点，是一种新型的性能优良的荧光染料，已作为探针广泛用于生物体和有机物的荧光标记中。目前，量子点与分子印迹技术结合进行农药残留分析处于探索阶段。
微球阵列是类似于“胶体阵列”的一种微球的有序排列。通过自组装沉降法将分子印迹荧光微球制备成紧密的单层排列的微球阵列，利用其高识别特性对目标物进行识别与富集，相比于粉末状态的QD-MIPs，将其制备成阵列，增大了QD-MIPs与目标物的接触面，缩短富集时间。另外，将微球阵列制备成速测卡片，有效的防止了由于微球沉降而引起的荧光不稳定的现象，将传统的液体样品改成固体样品，简化了检测步骤，也是对荧光检测形式的一种创新。
发明内容
本发明的目的在于提供一种分子印迹荧光微球阵列检测卡及其应用
为实现上述目的，本发明采用技术方案为：一种分子印迹荧光微球阵列检测卡，将荧光分子印迹微球阵列粘下固定于硬质卡片中即得到分子印迹荧光微球阵列检测卡。
采用水平沉积法、重力沉降法或垂直沉降法在经过亲水处理后的玻璃基底上组装一层荧光分子印迹微球阵列。
以低毒杀虫剂、硫代磷酸酯类有机磷农药为模板采用多步溶胀法制备分子印迹微球；再以量子点作为荧光标记物对分子印迹微球进行编码，即可得到荧光分子印迹微球，量子点的发射波长为500～600nm。
将十二烷基硫酸钠(SDS)，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、聚苯乙烯微球和H2O混合，室温搅拌溶胀，然后加入引发剂、甲苯、4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液和H2O，室温搅拌溶胀，再加入模板分子、功能单体、交联剂、4.8％PVA水溶液和H2O，室温搅拌溶胀，最后在N2保护下反应20-28h，得到的微球洗涤后经索氏提取除去模板分子；即得到分子印迹微球(MIPs)。
在容器中分别加入0.01-0.03g十二烷基硫酸钠(SDS)，0.20-0.30mL邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、0.497g·mL-1聚苯乙烯微球0.075-0.095mL和8-12mL H2O，室温下，110-140rpm搅拌溶胀12-18h，至油滴消失，向反应体系中加入0.1-0.2g偶氮二异丁腈(AIBN)、2-3mL甲苯、8-12mL 4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液和10-15mL H2O，室温110-140rpm搅拌溶胀1-3h，再加入0.1-0.2g乙酰甲胺磷(Acephate)、0.3-0.4g甲基丙烯酸(MAA)、2-3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、8-12mL 4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液、10-15mL H2O，室温搅拌溶胀1-3h，最后在40-60℃、通N2保护，160-200rpm搅拌反应20-28h，得到的微球用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤，洗涤后的微球以体积比7:1的甲醇/乙酸作为溶剂，90-110℃索氏提取10-16h，共提取3次，以除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥20-28h，得到白色粉末状MIPs。
将氯仿和异丙醇加入到分子印迹微球(MIPs)中，超声震荡，加入量子点溶液，再超声分散，室温真空干燥，然后用无水乙醇洗涤，室温真空干燥即得荧光分子印迹微球(QD-MIPs)。
将所得的乙酰甲胺磷MIPs称取40-60mg置于烧杯中，加入体积比为1:8的氯仿/丙醇，超声10-20min，加入300-500μL量子点溶液，再超声10-20min，于25-40℃恒温真空干燥，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤，25-40℃恒温真空干燥即得QD-MIPs。
将荧光分子印迹微球(QD-MIPs)配制成浓度0.03～0.07％w/v的水溶液，滴加到玻璃基底上，使其散布于整个表面，恒温条件下静置，使其自组装成分子印迹荧光微球阵列，然后将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
所述分子印迹荧光微球阵列检测卡用于定性检测乙酰甲胺磷。
将分子印迹荧光微球阵列检测卡剪裁成适宜光度计检测池的形状，插入与激发光呈45°角的位置，设置激发光360nm，发射光565nm，采用荧光分光光度计测定卡片的荧光强度。
本发明的优点：
1.本发明采用分子印迹为目标物的吸附材料，替代了原有的吸附材料如色谱填料，微球表面存在与乙酰甲胺磷结构相匹配的位点，增加了对目标物乙酰甲胺磷的特异性吸附，避免了结构类似物质的干扰。本发明改进了多步溶胀合成方法，通过高低搅拌速率相结合的模式，制备出粒径约10μm的高均匀度微球。该微球属于小粒径微球，既方便使用又具有较大的表面积，增加了对目标物的吸附能力，且能够在短时间内迅速达到吸附平衡，节省了前处理的时间，材料的优良性能是本发明能够达到快速、准确、高通量农残分析的基础。
2.本发明采用量子点作为荧光材料，与传统有机染料标记物相比，量子点具有荧光稳定性强、宽的激发光谱与窄的激发光谱、较大的斯托克斯位移、生物相容性好和荧光寿命长的众多优势，量子点的优良性能是本发明能够达到灵敏检测农残的基础。
3.本发明提供了一种微球阵列卡片的制备方法，该方法制备工艺简单易于操作，克服了微球在溶液中易沉降而导致荧光强度不稳定甚至消失的缺点，此外，将微球有序排列成单层阵列，也有利于吸附材料与目标物更充分接触，缩短吸附时间，以达到速测的目的。
本发明提供了一种分子印迹荧光微球阵列速测卡的制备方法，克服了传统色谱分析中前处理繁琐分析费时和液体环境中微球易沉降等缺点，为乙酰甲胺磷农药残留于的快速、灵敏、准确检测提供了可能，也为其他农残检测提供参考。
附图说明
图1为多步种球溶胀制备的乙酰甲胺磷分子印迹聚合物微球扫描电镜图。
图2为实施例1中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图3为实施例2中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图4为实施例3中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图5为实施例4中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图6为实施例5中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图7为实施例6中所制备的荧光分子印迹微球阵列扫描电镜图。
图8为量子点荧光吸收与发射光谱图。
图9为乙酰甲胺磷荧光分子印迹微球与不同浓度目标物的荧光猝灭关系图。
具体实施方式
实施例1(1)乙酰甲胺磷分子印迹微球(MIPs)的制备
称取0.02g十二烷基硫酸钠(SDS)，加入0.24mL邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、0.497g·mL-1聚苯乙烯微球(Ps)微球0.085mL、10mL H2O，室温25℃125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g偶氮二异丁腈(AIBN)、2.5mL甲苯、10mL4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g甲基丙烯酸(MAA)、2.5mL乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的乙酰甲胺磷分子印迹微球(MIPs)离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码分子印迹微球(QD-MIPs)的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min，加入400μL量子点溶液(油溶性CdSe/ZnS量子点，发射波长565nm，浓度3mg/mL)，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液(98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.01％的水溶液，将玻璃片置于水平实验台上，使用滴管将溶液滴加到玻片，使其散布于整个表面，然后放入温度为30℃的恒温干燥箱中，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图2所示,乙酰甲胺磷QD-MIPs虽呈现单层排列，但排列不够紧密，局部呈现条带状，推测QD-MIPs浓度偏小。
实施例2
(1)乙酰甲胺磷MIPs的制备
称取0.02g SDS，加入0.24mL DBP、0.497g·mL-1Ps微球0.085mL、10mL H2O，室温25℃125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g AIBN、2.5mL甲苯、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g MAA、2.5mL EDMA、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的MIPs离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码微球QD-MIPs的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min，加入400μL量子点溶液，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液(98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.05％的水溶液，将玻璃片置于水平实验台上，使用滴管将溶液滴加到玻片，使其散布于整个表面，然后放入温度为30℃的恒温干燥箱中，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图3所示，此时微球呈现单层排列，并且排列紧密有序。
实施例3
(1)乙酰甲胺磷MIPs的制备
称取0.02g SDS，加入0.24mL DBP、0.497g·mL-1Ps微球0.085mL、10mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g AIBN、2.5mL甲苯、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g MAA、2.5mL EDMA、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的MIPs离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码微球QD-MIPs的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min后加入400μL量子点溶液，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液(98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.1％的水溶液，将玻璃片置于水平实验台上，使用滴管将溶液滴加到玻片，使其散布于整个表面，然后放入温度为30℃的恒温干燥箱中，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图4所示，微球基本呈现单层排列，各别位置有重叠排列，推测由于QD-MIPs浓度过大导致。
实施例4
(1)乙酰甲胺磷MIPs的制备
称取0.02g SDS，加入0.24mL DBP、0.497g·mL-1Ps微球0.085mL、10mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g AIBN、2.5mL甲苯、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g MAA、2.5mL EDMA、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的MIPs离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码微球QD-MIPs的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min后加入400μL量子点溶液，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液
(98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.03％和0.07％的水溶液，将玻璃片置于水平实验台上，使用滴管将溶液滴加到玻片，使其散布于整个表面，然后放入温度为30℃的恒温干燥箱中，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图5所示，微球呈现单层排列，并且排列紧密有序，说明QD-MIPs最佳浓度范围为0.03％～0.07％。
实施例5
(1)乙酰甲胺磷MIPs的制备
称取0.02g SDS，加入0.24mL DBP、0.497g·mL-1Ps微球0.085mL、10mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g AIBN、2.5mL甲苯、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g MAA、2.5mL EDMA、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的MIPs离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码微球QD-MIPs的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min，加入400μL量子点溶液，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液(98％H2SO4:V30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.05％的水溶液，之后将玻璃基片垂直插入微球溶液，60℃恒温条件下静置，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图6所示,乙酰甲胺磷QD-MIPs虽呈现单层排列，但排列不够紧密，垂直沉降法优点是微球排列紧密有序，但是本研究所制得的分子印迹微球粒径约为10μm，粒径稍大，导致微球还未组装就产生下降现象，必须选取粘度较大的溶剂进行组装；
实施例6
(1)乙酰甲胺磷MIPs的制备
称取0.02g SDS，加入0.24mL DBP、0.497g·mL-1Ps微球0.085mL、10mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀15h，至油滴消失。向反应体系中加入0.1642g AIBN、2.5mL甲苯、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温125rpm搅拌溶胀2h。再向反应体系里加入0.1832g乙酰甲胺磷、0.344g MAA、2.5mL EDMA、10mL4.8％PVA水溶液、12.5mL H2O，室温搅拌溶胀2h。最后在50℃、通N2保护，180rpm搅拌反应24h，得到的颗粒用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤。反应完成后所得的MIPs离心除去上清液以后再以甲醇:乙酸＝9:1(v/v)作为溶剂，95℃索氏提取12h，共提取3次，除去模板分子。将聚合物置于真空干燥箱中干燥24h(60℃，0.08MPa)，得到白色粉末状MIPs。
(2)量子点编码微球QD-MIPs的制备
称取50mg乙酰甲胺磷MIPs置于烧杯中，加0.5mL氯仿、4mL异丙醇，超声15min，加入400μL量子点溶液，再超声10min，于30℃恒温真空干燥12h，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤3遍，30℃恒温真空干燥，即得。
(3)荧光分子印迹微球阵列速测卡的制备
取普通载玻片为基片，将洗净的玻片浸泡入Piranha溶液(98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v))处理2h，取出后洗净晾干。将步骤(1)、(2)所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.05％的水溶液，将玻璃基片放在烧杯底部，60℃恒温条件下静置，60℃恒温条件下静置，微球在重力作用下自然沉积，自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
采用扫描电子显微镜对本实施例制得的微球阵列检测卡进行观察，结果如图7所示,可以看出组装的微球阵列是单层排列，比较均匀。
实施例7
(1)量子点吸收光谱发射光谱测定
取量子点0.2mL((油溶性CdSe/ZnS量子点，发射波长565nm，浓度3mg/mL，)加入比色皿，再加入正己烷，固定激发波长为Ex 350nm，扫描发射波长,记录荧光强度，以荧光强度为纵坐标，发射波长为横坐标，绘制量子点的发射光谱。同时使用紫外分光光度计扫描300～760nm波长范围，并绘制量子点的吸收曲线。
(2)水平沉积法制备乙酰甲胺磷分子印迹荧光微球检测卡
取普通载玻片为基片，将洗净的玻璃基片浸泡入98％H2SO4:30％H2O2＝3:1(v/v)的Piranha溶液处理2h，取出后洗净晾干。实施例2所制备的QD-MIPs配制成质量浓度0.05％的水溶液，将玻璃片置于水平实验台上，使用滴管将溶液滴加到玻片，使其散布于整个表面，然后放入温度为30℃的恒温干燥箱中，使其自组装成单层分子印迹荧光微球阵列。最后用胶带将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
(3)线性范围的确定
配制一系列浓度为0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0μg·mL-1的乙酰甲胺磷水溶液，取10ml加入制备的乙酰甲胺磷QD-MIPs胶体阵列，60min后取出晾干，并且取吸附后的上清液1ml，气相色谱(GC)测定其浓度，并计算微球阵列吸附乙酰甲胺磷的量；
(4)荧光检测
将检测卡分别插入浓度分别为0.5，1.0，1.5，2.0，2.5，3.0，3.5，4.0，4.5，5.0μg·mL-1乙酰甲胺磷水溶液，静置吸附60min，取出晾干，以45°角插入荧光分光光度计样品池，设置激发光360nm，发射光565nm，采用荧光分光光度计测定卡片的荧光强度，并结合线性曲线中得到的结果，绘制荧光猝灭曲线。
所得结果如图8、9所示。量子点的紫外吸收比较弱，位于382nm；最大发射波长λmax位于570nm附近，稍有红移现象，整体发射谱带稍宽，可能与该量子点的放置时间、温度、光照等外界因素有关。乙酰甲胺磷浓度与检测卡荧光强度的线性关系不够强，呈负相关。按照GB2763-2012和GB/T 5009.103-2002及GB/T14553-2003的相关规定，乙酰甲胺磷限量以1mg/kg计算，25g果蔬样品最大农药含量为25μg，以MIPs检测卡前期研究结果的实际吸附率81.36％计算，实际可吸附量为20.34μg。按图中曲线计算，荧光强度约为50.26，即F大于50.26时，样品中乙酰甲胺磷农残未超标，低于50.26，则乙酰甲胺磷超标。

Claims (10)

1.一种分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：将荧光分子印迹微球阵列粘下固定于硬质卡片中即得到分子印迹荧光微球阵列检测卡。
2.根据权利要求1所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：采用水平沉积法、重力沉降法或垂直沉降法在经过亲水处理后的玻璃基底上组装一层荧光分子印迹微球阵列。
3.根据权利要求1所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：以于低毒杀虫剂、硫代磷酸酯类有机磷农药为模板采用多步溶胀法制备分子印迹微球；再以量子点作为荧光标记物对分子印迹微球进行编码，即可得到荧光分子印迹微球，量子点的发射波长为500～600nm。
4.根据权利要求3所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：
将十二烷基硫酸钠(SDS)，邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、聚苯乙烯微球和H2O混合，室温搅拌溶胀，然后加入引发剂、甲苯、4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液和H2O，室温搅拌溶胀，再加入模板分子、功能单体、交联剂、4.8％PVA水溶液和H2O，室温搅拌溶胀，最后在N2保护下反应20-28h，得到的微球洗涤后经索氏提取除去模板分子；即得到分子印迹微球(MIPs)。
5.根据权利要求4所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：
在容器中分别加入0.01-0.03g十二烷基硫酸钠(SDS)，0.20-0.30mL邻苯二甲酸二丁酯(DBP)、0.497g·mL-1聚苯乙烯微球0.075-0.095mL和8-12mL H2O，室温下，110-140rpm搅拌溶胀12-18h，至油滴消失，向反应体系中加入0.1-0.2g偶氮二异丁腈(AIBN)、2-3mL甲苯、8-12mL 4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液和10-15mL H2O，室温110-140rpm搅拌溶胀1-3h，再加入0.1-0.2g乙酰甲胺磷(Acephate)、0.3-0.4g甲基丙烯酸(MAA)、2-3mL乙二醇二甲基丙烯酸酯(EDMA)、8-12mL 4.8％聚乙烯醇(PVA)水溶液、10-15mL H2O，室温搅拌溶胀1-3h，最后在40-60℃、通N2保护，160-200rpm搅拌反应20-28h，得到的微球用甲醇、热水和四氢呋喃洗涤，洗涤后的微球以体积比7:1的甲醇/乙酸作为溶剂，90-110℃索氏提取10-16h，共提取3次，以除去模板分子，将聚合物置于真空干燥箱中干燥20-28h，得到白色粉末状MIPs。
6.根据权利要求4所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：
将氯仿和异丙醇加入到分子印迹微球(MIPs)中，超声震荡，加入量子点溶液，再超声分散，室温真空干燥，然后用无水乙醇洗涤，室温真空干燥即得荧光分子印迹微球(QD-MIPs)。
7.根据权利要求6所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：
称取40-60mg乙酰甲胺磷MIPs，加入体积比为1:8的氯仿/丙醇，超声10-20min，加入300-500μL量子点溶液，再超声10-20min，于25-40℃恒温真空干燥，使液体挥发，取出以无水乙醇洗涤，25-40℃恒温真空干燥即得QD-MIPs。
8.根据权利要求6所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡，其特征在于：
将荧光分子印迹微球(QD-MIPs)配制成浓度0.03～0.07％w/v的水溶液，滴加到玻璃基底上，使其散布于整个表面，恒温条件下静置，使其自组装成分子印迹荧光微球阵列，然后将微球阵列粘下固定于硬质卡片中。
9.一种权利要求1所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡的应用，其特征在于：所述分子印迹荧光微球阵列检测卡用于定性检测乙酰甲胺磷。
10.据权利要求8所述的分子印迹荧光微球阵列检测卡的应用，其特征在于：将分子印迹荧光微球阵列检测卡剪裁成适宜光度计检测池的形状，插入与激发光呈45°角的位置，设置激发光360nm，发射光565nm，采用荧光分光光度计测定卡片的荧光强度。
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