CN107522683A

CN107522683A - 一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法

Info

Publication number: CN107522683A
Application number: CN201710579731.XA
Authority: CN
Inventors: 姚蓉
Original assignee: Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd
Current assignee: Changsha Aiyang Medical Technology Co Ltd
Priority date: 2017-07-17
Filing date: 2017-07-17
Publication date: 2017-12-29

Abstract

本发明涉及了一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法，对莲房采用醇回流提取，过滤，浓缩，过滤，滤液萃取，萃取液浓缩得到原花青素。滤渣用95％乙醇溶解后过硅胶柱，醇洗脱液浓缩结晶得到金丝桃苷。该方法中所用的原料、设备和试剂均很常见，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，适用于工业化大生产；且充分利用莲房的有效成分，同时提取原花青素和金丝桃苷，降低了生产成本，产生较大的经济和社会效益。

Description

一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法

所属技术领域：

本发明属于天然产物加工领域，涉及了一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法。

背景技术

原花青素，是植物界中广泛存在的多酚类化合物，主要分布于葡萄、法国海岸松、单子山楂、花生、银杏、花旗松、白烨树、野生刺葵、番荔枝、野草萄、扁桃、高粱、耳叶番泻、两谷椰子、可可豆、贯叶金丝桃、头状胡枝子、粘胶乳香树、海岸松和大黄等植物中。原花青素是清除自由基很强的抗氧化剂，其抗氧化、清除自由基的能力是VE的50倍、VC的20倍，预防由于人体血液中低密度脂蛋白的氧化为主要原因而引起的动脉硬化。同时还有降压、保护心肌、抗辐射、抗微生物、促进细胞增殖活性、抗突变和抗癌等作用。目前，原花青素已广泛应用于食品、药品、化妆品等领域。全世界对原花青素的研究越来越深入，其中对原花青素提取方法的研究是一大重点。目前的提取方法包括有机溶剂提取、微波提取、超声波提取、超临界CO₂萃取以及酶法等。

金丝桃苷，又名槲皮素-3-O-β-D-吡喃半乳糖苷，属于黄酮醇苷类化合物。淡黄色针状结晶，熔点227～229℃，易溶于乙醇、甲醇、丙酮和吡啶。金丝桃苷广泛存在于各种植物体内，如金丝桃科、蔷薇科、桔梗科、唇形科、杜鹃花科、葵科、藤黄科、豆科以及卫矛科等的果实与全草中。金丝桃苷具有保肝、抗过敏、抗炎、解痉、降压、抗乙肝病毒和显著止咳等作用，特别是具有镇痛及对心脑血管的保护功能，它的镇痛作用强于阿司匹林，弱于吗啡，且没有依赖性，被称为“第三类镇痛药”，是一种新型镇痛药。近年来，随着威胁人类健康的两大杀手心血管和脑血管疾病的日益猖獗，人们对这两种疾病的重视程度日益增加，对治疗的药物也倍加关注。目前主要采用乙醇热回流提取、甲醇热回流提取、乙醇超声提取、甲醇超声提取等方法从生药粉末中对金丝桃苷进行粗提。

莲子和莲藕是人们喜爱的食品，人们从莲房中取出莲子后，莲房常常被大量丢弃，造成了植物资源的浪费，并污染环境。近年报道，莲房中主要含多酚类、黄酮类、生物碱等多种成分，其中原花青素、金丝桃苷和槲皮素是莲房的主要活性成分，莲房与葡萄籽类似含有丰富的原花青素成分，且含量远高于葡萄籽，具有广阔的市场前景。为此，以莲房为原料，提取原花青素和金丝桃苷，研制其保健品及药品将有着较大的经济和社会效益。

公开号为CN103497170A的中国专利介绍了一种全低温过程提取莲房中原花青素的方法，其特征在于：联合使用超声提取，低温负压冷水机组冷凝系统乙醇回收浓缩装置，低温负压带式干燥装置三项技术提取莲房中的原花青素的方法。将破碎后的莲房用食用乙醇做溶剂，采用超声法(46℃以下)提取，提取液采用低温(46℃以下)负压(-0.098mpa)冷水机组冷凝系统乙醇回收浓缩装置回收乙醇并浓缩得浸膏；采用低温(46℃以下)负压(-0.098mpa)带式干燥装置将浸膏干燥成莲房原花青素提取物产品。

公开号为CN104974124A的专利介绍了一种从兴安落叶松树皮中提取原花青素的方法，其特征在于：将兴安落叶松树皮阴干后粉碎，加入溴化1-烯丙基-3-甲基咪唑离子液体溶液，超声波辅助提取，得提取液，将提取液用大孔树脂吸附，乙醇溶液解析，解析液浓缩后干燥即得到产品。

公开号为CN1436777的专利介绍了一种分离提取松树皮低聚体原花青素的方法，生产工艺流程为：原药材→前处理→提取→回收溶媒、浓缩→固液分离→浓缩→高效逆流萃取→浓缩→干燥→灭菌、包装。

公开号为CN1431205的专利介绍了一种用于从植物中提取原花青素的萃取剂及提取方法，该法的萃取剂为偏磷酸或亚硫酸盐或两者共用，加水配制，控制pH，所述的工艺为水浸提法，提取工艺还包括在常压下，控制处理温度及处理时间，料液过滤后，精制纯化，溶剂洗脱，浓缩后干燥为成品，此方法采用无机盐为萃取剂，调节pH值，控制处理温度和时间，操作方法复杂，水提取存在消耗的时间长、提取率低等缺点。

公开号为CN1264729的专利介绍了一种超临界CO₂从黑加仑籽中提取黑加仑籽油和原花青素低聚物的方法，该法分两步进行：第一步，是利用超临界CO₂提取黑加仑籽油，控制萃取压力在25—29MPa，温度为60℃；第二步是超临界CO₂加入以丙酮：水为70∶30的改性剂CO₂与改性剂流量比为4∶1，压力为22—25MPa，温度为60℃，提取原花青素低聚物，该方法使用超临界提取技术，设备要求高，生产成本高，不适宜工业化生产。

公开号为CN103372059A的中国专利介绍了一种莲房多酚的提取工艺，称取2.0g脱脂莲房粉置于细口烧杯中，按料液比1∶10～1∶35加入一定量的70％丙酮，把细口烧杯置于水浴锅中(带有磁力搅拌)，然后把超声探头放入细口烧杯(于液面1cm以下)，进行超声辅助提取，提取温度为20～60℃，超声时间为10～35min，超声功率为600～1100W。

公开号为CN103304532A的中国专利介绍了一种从莲房中提取原花青素的方法，利用莲房中原花青素含量丰富的特点，经剪碎、回流(渗滤或煎煮)、滤过、上柱交换、洗脱、浓缩干燥而得原花青素提取物。

公开号为CN104860916A的中国专利介绍了一种从苹果皮中提取原花青素的方法，所述提取方法是以微波联合酶法来提取苹果皮中的原花青素，所述提取方法是将苹果皮在复合酶的酶解作用后，再以微波萃取的方式提取其中的原花青素，所述的酶是由纤维素酶、半纤维素酶以及果胶酶组成的复合酶。填补了目前从苹果皮中提取原花青素的技术空白，同时也为从果实皮中提取原花青素提供了重要的技术指引。

公开号为CN104672194A的中国专利介绍了一种从葡萄籽中提取纯化原花青素的方法，提出了一条较为简单、合理、低成本的工艺路线。该方法将葡萄籽粉末用50％乙醇∶4％柠檬酸＝3∶1-5∶1的溶剂以料液比1∶6-1∶9(m/v，质量体积比)水浴回流提取，冷却过滤后旋蒸,回收乙醇；用乙醇醇沉，醇沉液过滤后浓缩，回收乙醇，加馏水均匀混合；用正丁醇萃取，合并萃取液，将萃取液用饱和食盐水洗涤；将萃取液旋转浓缩干燥，回收正丁醇，得到紫色素粉末。

公开号为CN104803960A的中国专利介绍了一种低温双水相冷却提取分离山楂肉原花青素的方法，步骤如下：新鲜山渣经清洗后，每10克山渣，加入30-70mL柠檬酸溶液和30-70mL氯化钠溶液，以及30-70mL异丙醇，置于冷冻机中冷却至-18℃，取出，用匀浆机均质处理三次，每次1-3min，静置5-15min，待分相完全后，分去异丙醇上相，收集得到的异丙醇通过旋转蒸发器真空蒸馏蒸去异丙醇，加入1-4ml乙醇将固体物洗出，将所得到固体20-35℃真空干燥至干，即得山楂原花青素提取物。

公开号为CN1634325的中国专利介绍了一种从陇蜀杜鹃叶中提取分离金丝桃苷和棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷的方法，将陇蜀杜鹃叶粉碎后，先用石油醚进行热回流以除去色素及脂溶性杂质；再用乙醇溶液浸提，过滤，得粗提取物；粗提取物用水溶解后，经聚酰胺柱层析分离，乙醇溶液洗脱，并分别收集流出液，浓缩，无水乙醇结晶，95％乙醇重结晶，得到棉花皮素-3-O-β-D-半乳糖苷(收率为0.1％～0.3％)和金丝桃苷(收率为0.3％～0.6％)。

公开号为CN101386634的中国专利介绍了一种金丝桃苷的提取方法及其制剂和用途，是由黄蜀葵花乙醇提取液的浓缩液，用正丁醇或醋酸乙酯萃取，或通过HPD100或HPD600大孔吸附树脂柱层析而制得黄蜀葵花提取物粗品，再经溶剂纯化和复结晶，得金丝桃苷含量按重量百分比为90-98％。金丝桃苷制剂，是以金丝桃苷为活性成分和药用辅料加工制成的冻干粉针剂或水针剂或输液或滴丸或片剂或胶囊剂或软胶囊剂。

公开号为CN103224540A的中国专利介绍了一种金丝桃苷原料药的提取分离和静脉注射液的制备方法，将照山白叶子用乙醇加热回流提取，醇提液减压回收乙醇，浓缩成浸膏；将上述浸膏再以乙酸乙酯提取2-3次，每次用量为浸膏的8-12倍，每次提取时间为1-2小时，回收乙酸乙酯，得到乙酸乙酯浸膏；进行硅胶柱层析，进行重结晶，得金丝桃苷纯品，制成静脉注射液。

公开号为CN101260133的中国专利介绍了从棉花花瓣中制备金丝桃苷和异槲皮素的方法，是以棉花花瓣为原料，用有机溶剂提取，然后将提取液减压浓缩至浸膏，加入适量水溶液溶解，上大孔树脂为载体的柱层析，用水冲洗柱床至无色，然后用乙醇溶液洗脱柱床，收集洗脱液，浓缩，得到金丝桃苷与异槲皮素的粗品，再将粗品用硅胶或C18硅胶层析得到金丝桃苷和异槲皮素的纯品。

公开号为CN103030674A的中国专利介绍了一种鹿蹄草中提取金丝桃苷的生产方法，将原料经粗粉碎后从投料斗投入，提取罐组主机旋转，将物料从机组前端向后缓慢推进，同时提取溶剂从机组末端的进液管进入提取罐内，由罐后端穿过移动的物料向前端流动，固液两相物质在这种逆向运动中充分接触，从而将药材中有效成分提取出来。药渣经出料传送器强制推动至出渣口而排出，专门的挤汁机对药渣进行挤压，将药渣申残留药液挤出药材组织，减少药渣申残留药液含量。提取效率更高、提取更完全。

公开号为CN102234299A的中国专利介绍了一种分离金丝桃苷的方法，其特征是取山里红或山楂叶药材，粉碎成粗粉，用含水醇回流提取，提取液过滤，合并滤液，减压浓缩至无醇味，经AB-8或D101大孔吸附树脂除杂，以浓度为30-80％乙醇洗脱，减压浓缩至无醇味，干燥，所得干燥物经聚酰胺柱层析分离，用含水乙醇梯度洗脱，洗脱部分将其减压浓缩，经硅胶层柱层析，再以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水洗脱或乙酸乙酯-丙酮-甲酸-水洗脱，直接得金丝桃苷。

公开号为CN102924537A的中国专利介绍了一种从罗布麻叶中同时制备金丝桃苷和异槲皮苷的方法，以罗布麻叶为原料，经加热回流或超声提取，减压浓缩得浸膏；浸膏加水溶解，用石油醚除去色素及脂溶性杂质；水相稀释，通过至少三级串联的大孔吸附树脂柱，动态吸附至饱和后，流加洗杂液洗杂，再用洗脱液洗脱至无金丝桃苷和异槲皮苷流出，并收集流出液；流出液减压浓缩，在甲醇中重结晶，经装填有C₁₈反相硅胶的中压梯度洗脱系统同时得到纯度均达到90％-98％的金丝桃苷和异槲皮苷。

公开号为CN102600194A的中国专利介绍了一种金丝桃苷的提取方法及其制备药物的用途，取山香圆叶或贯叶金丝桃，加5～15倍量的30％～90％乙醇回流提取1～3次，每次回流提取1～3小时，滤过；合并滤液，回收乙醇，水溶液通过大孔吸附树脂柱洗脱，收集洗脱部分，减压浓缩，干燥，得金丝桃苷的混合总苷，经硅胶柱层析、Sephadex LH-20柱层析分离，合并金丝桃苷流份，结晶，得到金丝桃苷纯品，金丝桃苷可作神经氨酸酶抑制剂用在预防和治疗流感，制成药学上可以接受的剂型。

公开号为CN1634325的中国专利介绍了一种罗布麻提取物及其提取方法，将(1)以金丝桃苷作为代表成分对该提取物进行测定，提取物中总黄酮含量35％-90％；(2)完全水解该提取物后，槲皮素化合物的含量30％-80％；(3)提取物中，金丝桃苷化合物的含量15％-55％。提取方法与采用聚酰胺树脂分离柱，并用澄清剂对上柱液进行澄清、纯化，可明显延长分离柱的寿命。本发明所表征的罗布麻提取物是首次从罗布麻中提取出来的一种新物质，不仅精制程度高，而且保留了大部分罗布麻的药理活性，而且服用量远小于罗布麻粗体物，其药理、药性与罗布麻粗提物相比有显著区别。

公开号为CN1880328的中国专利介绍了贯叶连翘中金丝桃苷和金丝桃素的制备方法，涉及金丝桃苷和金丝桃素药用活性成分的制备方法本发明综合利用我国丰富的贯叶连翘果实，同时制备出总收得率和产品纯度均高的金丝桃苷和金丝桃素两种药用活性成分，生产成本低；在生产过程中，实现了多种溶剂如乙醇乙醚的回收和再次反复使用；实现了反胶束萃取剂及吸附树脂的再生和反复使用采用本发明方法制备出的植物生物活性物质，可广泛应用于清热解毒收敛止血利尿及抑郁治疗等药物中。

综上所述，目前研究主要是从莲房中提取单一成分，如提取原花青素、棕色素、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖醛酸苷等，莲房未得到综合开发利用。若从莲房中同时提取原花青素和金丝桃苷，既充分利用资源，又能降低提取纯化设备投资，降低生产成本，将产生较大的经济和社会效益。

发明内容

本发明的目的在于提供一种工艺合理、操作简单、工艺周期短、快速提取原花青素和金丝桃苷的生产工艺。

本发明采用的技术方案包括：对莲房采用醇回流提取，过滤，浓缩，过滤，滤液萃取，萃取液浓缩得到原花青素。滤渣用95％乙醇溶解后过硅胶柱，醇洗脱液浓缩结晶得到金丝桃苷。

因此，本发明提供一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法，其具体步骤如下：

(1)将莲房粉碎至60-120目，用40-60％乙醇溶液回流提取3h，陶瓷膜过滤一次，得滤液Ⅰ；

(2)将滤液Ⅰ70℃减压浓缩至一定体积，静置2h，陶瓷膜过滤一次，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅰ；

(3)将滤液Ⅱ用2倍体积的乙酸乙酯萃取三次，萃取时间为1h/次，合并萃取液；

(4)将萃取液在40℃减压回收溶剂至干，得粗提物；

(5)将粗提物加入其总重量30-40倍的乙酸乙酯，搅拌，滤除不溶物后，减压回收乙酸乙酯，得原花青素。

(6)将步骤(2)中的滤渣Ⅰ用95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液上硅胶柱(200目)，吸附30min，先用3-5BV柱体积的水进行洗柱，再用5-10BV柱体积的70-80％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；

(7)将洗脱液在60℃减压浓缩至原有体积的1/5-1/10，结晶，得金丝桃苷。

所述步骤(1)中所述加入40-60％乙醇溶液，按体积(L)/莲房重量(kg)比为5-10:1，60％乙醇溶液的配制为60mL乙醇加入40mL水进行混合即可。

所述步骤(2)中所述浓缩至一定体积为原体积的1/3～1/5。

所述步骤(6)中所述加入95％乙醇溶液的量，按体积(L)/滤渣重量(kg)比为2-5:1。

所述步骤中采用陶瓷膜过滤，膜孔孔径大小为0.22μm。

技术效果：

1、本发明方法中所用的原料、设备和试剂均很常见，避免了工业化生产过程中对于昂贵原材料、仪器的依赖，适用于工业化大生产。

2、充分利用莲房的有效成分，同时提取原花青素和金丝桃苷，降低了生产成本。

3、进一步发掘了莲房的医药用途，促进莲房药材的深加工，提高农产品的附加值，增加莲农的收入。

具体实施方式

下面结合具体实施例对本发明作进一步说明，以下实施例旨在说明本发明而不是对本发明的进一步限定。

实施例1

粉碎莲房，过60目筛，称取5kg，用30L的40％乙醇溶液回流提取3h，陶瓷膜过滤，滤液Ⅰ在70℃减压浓缩至6L，静置2h，陶瓷膜过滤，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅰ；滤液Ⅱ加12L的乙酸乙酯萃取三次，萃取时间为1h/次，合并萃取液；萃取液在40℃减压回收溶剂至干，得0.32kg的粗提物；将粗提物加入10L的乙酸乙酯，搅拌，滤除不溶物后，减压回收乙酸乙酯，得原花青素0.25kg。滤渣Ⅰ加0.5L的95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液上硅胶柱(200目)，吸附30min，先用1.5L的水进行洗柱，再用4L的80％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；洗脱液在60℃减压浓缩至0.4L，结晶，得金丝桃苷纯品4.96g。经检测，原花青素的纯度为92.47％，金丝桃苷的纯度为98.73％。

实施例2

粉碎莲房，过60目筛，称取10kg，用80L的60％乙醇溶液回流提取3h，陶瓷膜过滤，滤液Ⅰ在70℃减压浓缩至20L，静置2h，陶瓷膜过滤，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅰ；滤液Ⅱ加40L的乙酸乙酯萃取三次，萃取时间为1h/次，合并萃取液；萃取液在40℃减压回收溶剂至干，得0.72kg的粗提物；将粗提物加入22L的乙酸乙酯，搅拌，滤除不溶物后，减压回收乙酸乙酯，得原花青素0.48kg。滤渣Ⅰ加0.8L的95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液上硅胶柱(200目)，吸附30min，先用3L的水进行洗柱，再用6L的70％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；洗脱液在60℃减压浓缩至0.8L，结晶，得金丝桃苷纯品8.86g。经检测，原花青素的纯度为93.85％，金丝桃苷的纯度为98.36％。

实施例3

粉碎莲房，过60目筛，称取20kg，用200L的50％乙醇溶液回流提取3h，陶瓷膜过滤，滤液Ⅰ在70℃减压浓缩至40L，静置2h，陶瓷膜过滤，得滤液Ⅱ和滤渣Ⅰ；滤液Ⅱ加80L的乙酸乙酯萃取三次，萃取时间为1h/次，合并萃取液；萃取液在40℃减压回收溶剂至干，得1.46kg的粗提物；将粗提物加入50L的乙酸乙酯，搅拌，滤除不溶物后，减压回收乙酸乙酯，得原花青素1.01kg。滤渣Ⅰ加2L的95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液上硅胶柱(200目)，吸附30min，先用7L的水进行洗柱，再用15L的80％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；洗脱液在60℃减压浓缩至2L，结晶，得金丝桃苷纯品18.38g。经检测，原花青素的纯度为92.61％，金丝桃苷的纯度为97.96％。

Claims

1.一种从莲房中提取原花青素和金丝桃苷的方法，其具体步骤如下：

(4)将萃取液在40℃减压回收溶剂至干，得粗提物；

(6)将步骤(2)中的滤渣Ⅰ用95％乙醇溶液溶解，过滤，滤液上200目硅胶柱，吸附30min，先用3-5BV柱体积的水进行洗柱，再用5-10BV柱体积的70-80％乙醇溶液进行洗脱，得到洗脱液；

2.权利要求1方法，其中步骤(1)中所述加入40-60％乙醇溶液，按体积L/莲房重量kg比为5-10:1。

3.权利要求1方法，其中步骤(2)中所述浓缩至一定体积为原体积的1/3～1/5。

4.权利要求1方法，其中步骤(6)中所述加入95％乙醇溶液的量，按体积L/滤渣重量kg比为2-5:1。

5.权利要求1方法，其中步骤中采用陶瓷膜过滤，膜孔孔径大小为0.22μm。