CN107488747A - 荧光定量pcr用引物与探针组合及其反应体系 - Google Patents

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CN107488747A CN201710824947.8A CN201710824947A CN107488747A CN 107488747 A CN107488747 A CN 107488747A CN 201710824947 A CN201710824947 A CN 201710824947A CN 107488747 A CN107488747 A CN 107488747A
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张明洲
方结红
马骉
苏志春
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Wenzhou Meizhong medical laboratory Co., Ltd
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Wenzhou Beauty Medical Laboratory
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    • C12Q1/70—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving virus or bacteriophage
    • C12Q1/701—Specific hybridization probes
    • C12Q1/708—Specific hybridization probes for papilloma
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
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    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
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    • C12Q1/6851—Quantitative amplification

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Abstract

本发明公开了一种荧光定量PCR引物与探针组合及其反应体系。本发明具有以下优点和效果：作为分子诊断的金标准，荧光定量PCR方法的准确性和稳定性，是其一直作为其他分子生物学技术的参照依据。HPV病毒亚型众多，亚型间的同源相似性较高，区分不同亚型对于HPV的检测鉴定工作具有重大意义。本发明针对22个不同亚型的HPV病毒，分别设计并筛选出22组特异性引物和与之对应的FAM标记的Taqman探针。适用于生殖泌尿道、宫颈脱落细胞、组织及其他体液的22种亚型人乳头瘤病毒核酸检测。使用Bioline扩增体系，qPCR检测HPV病毒的灵敏度达到101copies/μL，特异性良好，且无假阳性和假阴性，结果可靠。

Description

荧光定量PCR用引物与探针组合及其反应体系
技术领域
本发明涉及生物检测技术领域，特别涉及一种荧光定量PCR用引物与探针组合及其反应体系。
背景技术
人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)属于乳多空病毒科的乳头瘤病毒属，是一种小分子的、无被膜包被的、环状双链DNA病毒，基因组长约8000碱基对(bp)，分为3个功能区。早期转录区(E区)主要控制病毒的复制和转化功能；晚期转录区(L区)编码病毒的衣壳蛋白；长控制区(LCR区)包含复制起始区和复制转录控制元件。20世纪80年代，德国病毒学家Harald zur Hausen教授首次提出HPV病毒与宫颈癌发病相关的假说之后，经过20多年的科学研究，国际癌症研究所在1995年正式确认，高危型HPV持续感染是宫颈癌的主要病因。依照WHO国际癌症研究机构(IARC)的研究成果，HPV16、18、31、33、35、39、45、51、52、56、58、59、66、68、73等15种基因型在2005年的专题讨论会议上被正式认定为高危型。因此，检测宫颈细胞样本中人乳头瘤状病毒(HPV)的存在与具体基因型，成为宫颈癌预防及治疗的一种普遍早期诊断方法。
目前临床上用于人乳头瘤状病毒(HPV)的提前诊断、治疗预后判断方法主要有细胞学、免疫组化与病理学检查等。细胞学检查包括传统巴氏涂片(CV)、液基薄层细胞学检查(TCT)与自动细胞学检测(LCT)等，其优点是操作简便、价格低廉、适宜初步筛查，但存在灵敏度低、特异性差、易受主观因素影响、假阴性率与假阳性率高等缺点，且不能进行HPV分型。免疫组化检查原理明确、操作也相对简便，但存在无免疫应答者或HPV潜伏感染者易漏检等缺点。组织学检查包括肉眼观察、阴道镜观察与病理组织检查等，其优点也是操作简便、价格低廉、适宜初步筛查，但存在准确率低、人员素质要求高、病人痛苦等缺点。
发明内容
本发明的目的是提供一种荧光定量PCR用引物与探针组合，具有检测22种人乳头瘤病毒亚型时灵敏度高、特异性良好、结果可靠的效果。
本发明的上述技术目的是通过以下技术方案得以实现的：一种荧光定量PCR用引物与探针组合，包括以下引物与探针组合中的一种或多种，(1)引物与探针组合1，包括SEQID NO1的引物F、SEQ ID NO2的引物R、SEQ ID NO3的探针probe；(2)引物与探针组合2，包括SEQ ID NO4的引物F、SEQ ID NO5的引物R、SEQ ID NO6的探针probe；(3)引物与探针组合3，包括SEQ ID NO7的引物F、SEQ ID NO8的引物R、SEQ ID NO9的探针probe；(4)引物与探针组合4，包括SEQ ID NO10的引物F、SEQ ID NO11的引物R、SEQ ID NO12的探针probe；(5)引物与探针组合5，包括SEQ ID NO13的引物F、SEQ ID NO14的引物R、SEQ ID NO15的探针probe；(6)引物与探针组合6，包括SEQ ID NO16的引物F、SEQ ID NO17的引物R、SEQ ID NO18的探针probe；(7)引物与探针组合7，包括SEQ ID NO19的引物F、SEQ ID NO20的引物R、SEQ IDNO21的探针probe；(8)引物与探针组合8，包括SEQ ID NO22的引物F、SEQ ID NO23的引物R、SEQ ID NO24的探针probe；(9)引物与探针组合9，包括SEQ ID NO25的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ ID NO27的探针probe；(10)引物与探针组合10，包括SEQ ID NO28的引物F、SEQ ID NO29的引物R、SEQ ID NO30的探针probe；(11)引物与探针组合11，包括SEQ IDNO31的引物F、SEQ ID NO32的引物R、SEQ ID NO33的探针probe；(12)引物与探针组合12，包括SEQ ID NO34的引物F、SEQ ID NO35的引物R、SEQ ID NO36的探针probe；(13)引物与探针组合13，包括SEQ ID NO37的引物F、SEQ ID NO38的引物R、SEQ ID NO39的探针probe；(14)引物与探针组合14，包括SEQ ID NO40的引物F、SEQ ID NO41的引物R、SEQ ID NO42的探针probe；(15)引物与探针组合15，包括SEQ ID NO43的引物F、SEQ ID NO44的引物R、SEQ IDNO45的探针probe；(16)引物与探针组合16，包括SEQ ID NO46的引物F、SEQ ID NO47的引物R、SEQ ID NO48的探针probe；(17)引物与探针组合17，包括SEQ ID NO49的引物F、SEQ IDNO50的引物R、SEQ ID NO51的探针probe；(18)引物与探针组合18，包括SEQ ID NO52的引物F、SEQ ID NO53的引物R、SEQ ID NO54的探针probe；(19)引物与探针组合19，包括SEQ IDNO55的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ ID NO57的探针probe；(20)引物与探针组合20，包括SEQ ID NO59的引物F、SEQ ID NO59的引物R、SEQ ID NO60的探针probe；(21)引物与探针组合21，包括SEQ ID NO61的引物F、SEQ ID NO62的引物R、SEQ ID NO63的探针probe；(22)引物与探针组合22，包括SEQ ID NO64的引物F、SEQ ID NO65的引物R、SEQ ID NO66的探针probe。
表1
本发明的另一个目的在于提供一种反应体系，每20μL的反应体系包含组分如下，2×SensiFAST Probe Lo-ROX 10μL，0.4μM引物F和R各1μL，0.1μM探针probe(FAM标记)1μL，2.5μL模板DNA，剩余体积由ddH2O补足。
通过采用上述技术方案，上述反应体系为TaqMan探针法qPCR反应体系，反应程序如下：95℃预变性2min，95℃变性10s，60℃退火延伸26s，40个循环。反应结果当Ct值<35时，判定为阳性。
综上所述，本发明具有以下有益效果：作为分子诊断的金标准，荧光定量PCR方法的准确性和稳定性，是其一直作为其他分子生物学技术的参照依据。HPV病毒亚型众多，亚型间的同源相似性较高，区分不同亚型对于HPV的检测鉴定工作具有重大意义。本发明针对22个不同亚型的HPV病毒，分别设计并筛选出22组特异性引物和与之对应的FAM标记的Taqman探针。适用于生殖泌尿道、宫颈脱落细胞、组织及其他体液的22种亚型人乳头瘤病毒核酸检测。使用Bioline扩增体系，qPCR检测HPV病毒的灵敏度达到101copies/μL，特异性良好，且无假阳性和假阴性，结果可靠。
附图说明
图1是本发明的HPV6、HPV11、HPV18、HPV26和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图2是本发明的HPV31、HPV33、HPV35、HPV39和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图3是本发明的HPV42、HPV43、HPV45、HPV51和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图4是本发明的HPV51和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图5是本发明的HPV56、HPV58、HPV59、HPV66和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图6是本发明的HPV68、HPV73、HPV81、HPV83和对应的探针与引物组合的特异性实验扩增曲线；
图7是HPV16的灵敏度试验的扩增曲线；
图8是HPV16的灵敏度试验的扩增标准曲线。
具体实施方式
荧光定量PCR用引物与探针组合的反应体系，包括荧光定量PCR用引物与探针组合，包括以下引物与探针组合中的一种或多种，(1)引物与探针组合1，包括SEQ ID NO1的引物F、SEQ ID NO2的引物R、SEQ ID NO3的探针probe；(2)引物与探针组合2，包括SEQ ID NO4的引物F、SEQ ID NO5的引物R、SEQ ID NO6的探针probe；(3)引物与探针组合3，包括SEQ IDNO7的引物F、SEQ ID NO8的引物R、SEQ ID NO9的探针probe；(4)引物与探针组合4，包括SEQID NO10的引物F、SEQ ID NO11的引物R、SEQ ID NO12的探针probe；(5)引物与探针组合5，包括SEQ ID NO13的引物F、SEQ ID NO14的引物R、SEQ ID NO15的探针probe；(6)引物与探针组合6，包括SEQ ID NO16的引物F、SEQ ID NO17的引物R、SEQ ID NO18的探针probe；(7)引物与探针组合7，包括SEQ ID NO19的引物F、SEQ ID NO20的引物R、SEQ ID NO21的探针probe；(8)引物与探针组合8，包括SEQ ID NO22的引物F、SEQ ID NO23的引物R、SEQ IDNO24的探针probe；(9)引物与探针组合9，包括SEQ ID NO25的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ ID NO27的探针probe；(10)引物与探针组合10，包括SEQ ID NO28的引物F、SEQ IDNO29的引物R、SEQ ID NO30的探针probe；(11)引物与探针组合11，包括SEQ ID NO31的引物F、SEQ ID NO32的引物R、SEQ ID NO33的探针probe；(12)引物与探针组合12，包括SEQ IDNO34的引物F、SEQ ID NO35的引物R、SEQ ID NO36的探针probe；(13)引物与探针组合13，包括SEQ ID NO37的引物F、SEQ ID NO38的引物R、SEQ ID NO39的探针probe；(14)引物与探针组合14，包括SEQ ID NO40的引物F、SEQ ID NO41的引物R、SEQ ID NO42的探针probe；(15)引物与探针组合15，包括SEQ ID NO43的引物F、SEQ ID NO44的引物R、SEQ ID NO45的探针probe；(16)引物与探针组合16，包括SEQ ID NO46的引物F、SEQ ID NO47的引物R、SEQ IDNO48的探针probe；(17)引物与探针组合17，包括SEQ ID NO49的引物F、SEQ ID NO50的引物R、SEQ ID NO51的探针probe；(18)引物与探针组合18，包括SEQ ID NO52的引物F、SEQ IDNO53的引物R、SEQ ID NO54的探针probe；(19)引物与探针组合19，包括SEQ ID NO55的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ ID NO57的探针probe；(20)引物与探针组合20，包括SEQ IDNO59的引物F、SEQ ID NO59的引物R、SEQ ID NO60的探针probe；(21)引物与探针组合21，包括SEQ ID NO61的引物F、SEQ ID NO62的引物R、SEQ ID NO63的探针probe；(22)引物与探针组合22，包括SEQ ID NO64的引物F、SEQ ID NO65的引物R、SEQ ID NO66的探针probe。上述各引物与探针组合的序列信息及对应的HPV亚型如表1所述。
荧光定量PCR用引物与探针组合的反应体系为TaqMan探针法qPCR反应体系，每20μL的反应体系所含组分如下：2×SensiFAST Probe Lo-ROX 10μL，0.4μM引物F和R各1μL，0.1μM探针probe(FAM标记)1μL，2.5μL模板DNA，剩余体积由ddH2O补足。每一种引物与探针组合的反应体系，用一个试剂管单独包装。反应程序如下：95℃预变性2min，95℃变性10s，60℃退火延伸26s，40个循环。反应结果当Ct值<35时，判定为阳性。上述反应由美国Bio-Rad公司的CFX96荧光定量PCR仪完成。
标准曲线的建立：使用灭菌水对22个亚型的HPV病毒重组标准质粒进行10倍梯度稀释，然后取2.5μL不同浓度梯度的质粒作为模板DNA加入到各反应管中，每个稀释浓度均进行3管重复。在最佳反应条件下进行qPCR反应，结束后以模板起始拷贝数的对数为x轴，Ct值为y轴，绘制标准曲线。
荧光定量PCR方法的特异性试验：通过同时检测22种HPV亚型的质粒标准品来评价荧光定量PCR检测用引物与探针的特异性。图1-图6显示，21种HPV病毒亚型荧光定量PCR检测用引物与探针特异性好。
荧光定量PCR方法的灵敏度试验：使用已经10倍梯度稀释好的22个HPV病毒亚型的质粒标准品进行灵敏度的实验研究。取2.5μL不同浓度梯度的质粒作为模板DNA加入到各反应管中，每个稀释浓度均进行3管重复，进行TaqMan探针法qPCR反应。HPV16亚型的qPCR扩增曲线见图7，反应结束后绘制标准曲线，见图8，曲线的x轴为模板起始拷贝数的对数值，y轴为qPCR反应的Ct值。结果显示，TaqMan探针法qPCR反应的灵敏度可达到101copies/μL。
具体实施例仅仅是对本发明的解释，其并不是对本发明的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本发明的权利要求范围内都受到专利法的保护。
表1
序列表
<110> 温州美众医学检验所
<120> 荧光定量pcr用引物与探针组合及其反应体系
<160> 66
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<400> 29
gcagatcata ttcttccac 19
<210> 30
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<400> 30
cgttatgtgc ctctactgac c 21
<210> 31
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 31
ccgcagtact aatttaaca 19
<210> 32
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 32
cctccacatg tctactata 19
<210> 33
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(25)
<400> 33
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<210> 34
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 34
acctgtgttg atactacc 18
<210> 35
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<212> DNA
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(23)
<400> 36
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
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<222> (1)..(18)
<400> 37
gtcacagttg tggatacc 18
<210> 38
<211> 18
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<212> DNA
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<222> (1)..(27)
<400> 39
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<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 40
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<211> 19
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<400> 41
cctctgcatg tctaacata 19
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<222> (1)..(24)
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ctttccgcaa ccacacagtc tatg 24
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<400> 44
ctccacatgt ctaaggta 18
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<400> 45
cgtgcatcat atttacttaa ctgttct 27
<210> 46
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 46
actcgtagca ctaatatga 19
<210> 47
<211> 24
<212> DNA
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<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(24)
<400> 47
cgtacatatt ccttaaaatt atca 24
<210> 48
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<400> 48
atgtaccttc cttatttact tcagtgc 27
<210> 49
<211> 22
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(22)
<400> 49
gcttctacta cttcttctat tc 22
<210> 50
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 50
actgcaaatc aaattcctc 19
<210> 51
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<400> 51
acacctacca gttttaaaga atatgcc 27
<210> 52
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 52
tgtggatact accagaag 18
<210> 53
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 53
cacgggcatc atatttag 18
<210> 54
<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(26)
<400> 54
accaacatga ctattaatgc agctaa 26
<210> 55
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 55
taccgttgtg gatacaac 18
<210> 56
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<400> 56
catgcctaac atattcctta a 21
<210> 57
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<400> 57
acattgtcca ctactacaga ctctact 27
<210> 58
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 58
gtaggtacac aggctagta 19
<210> 59
<211> 23
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(23)
<400> 59
ctgcatgtct taaatattcc tta 23
<210> 60
<211> 27
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(27)
<400> 60
ctctactaca acgtatgcca actctaa 27
<210> 61
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 61
ggtggatact accagaag 18
<210> 62
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<400> 62
gcagaaattc cttaaagtta g 21
<210> 63
<211> 21
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(21)
<400> 63
acagctacat ctgctgctgc a 21
<210> 64
<211> 18
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(18)
<400> 64
ccgcagtacc aatattac 18
<210> 65
<211> 19
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(19)
<400> 65
cctgtaagtc atattcctc 19
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<211> 26
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<220>
<221> misc_feature
<222> (1)..(26)
<400> 66
tgctacacag gctaatgaat acacag 26

Claims (2)

1.一种荧光定量PCR用引物与探针组合，其特征在于：包括以下引物与探针组合中的一种或多种，
(1)引物与探针组合1，包括SEQ ID NO1的引物F、SEQ ID NO2的引物R、SEQ ID NO3的探针probe，
(2)引物与探针组合2，包括SEQ ID NO4的引物F、SEQ ID NO5的引物R、SEQ ID NO6的探针probe，
(3)引物与探针组合3，包括SEQ ID NO7的引物F、SEQ ID NO8的引物R、SEQ ID NO9的探针probe，
(4)引物与探针组合4，包括SEQ ID NO10的引物F、SEQ ID NO11的引物R、SEQ ID NO12的探针probe，
(5)引物与探针组合5，包括SEQ ID NO13的引物F、SEQ ID NO14的引物R、SEQ ID NO15的探针probe，
(6)引物与探针组合6，包括SEQ ID NO16的引物F、SEQ ID NO17的引物R、SEQ ID NO18的探针probe，
(7)引物与探针组合7，包括SEQ ID NO19的引物F、SEQ ID NO20的引物R、SEQ ID NO21的探针probe，
(8)引物与探针组合8，包括SEQ ID NO22的引物F、SEQ ID NO23的引物R、SEQ ID NO24的探针probe，
(9)引物与探针组合9，包括SEQ ID NO25的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ ID NO27的探针probe，
(10)引物与探针组合10，包括SEQ ID NO28的引物F、SEQ ID NO29的引物R、SEQ IDNO30的探针probe，
(11)引物与探针组合11，包括SEQ ID NO31的引物F、SEQ ID NO32的引物R、SEQ IDNO33的探针probe，
(12)引物与探针组合12，包括SEQ ID NO34的引物F、SEQ ID NO35的引物R、SEQ IDNO36的探针probe，
(13)引物与探针组合13，包括SEQ ID NO37的引物F、SEQ ID NO38的引物R、SEQ IDNO39的探针probe，
(14)引物与探针组合14，包括SEQ ID NO40的引物F、SEQ ID NO41的引物R、SEQ IDNO42的探针probe，
(15)引物与探针组合15，包括SEQ ID NO43的引物F、SEQ ID NO44的引物R、SEQ IDNO45的探针probe，
(16)引物与探针组合16，包括SEQ ID NO46的引物F、SEQ ID NO47的引物R、SEQ IDNO48的探针probe，
(17)引物与探针组合17，包括SEQ ID NO49的引物F、SEQ ID NO50的引物R、SEQ IDNO51的探针probe，
(18)引物与探针组合18，包括SEQ ID NO52的引物F、SEQ ID NO53的引物R、SEQ IDNO54的探针probe，
(19)引物与探针组合19，包括SEQ ID NO55的引物F、SEQ ID NO26的引物R、SEQ IDNO57的探针probe，
(20)引物与探针组合20，包括SEQ ID NO59的引物F、SEQ ID NO59的引物R、SEQ IDNO60的探针probe，
(21)引物与探针组合21，包括SEQ ID NO61的引物F、SEQ ID NO62的引物R、SEQ IDNO63的探针probe，
(22)引物与探针组合22，包括SEQ ID NO64的引物F、SEQ ID NO65的引物R、SEQ IDNO66的探针probe。
2.一种包括权利要求1所述的荧光定量PCR用引物与探针组合的反应体系，其特征在于：每20μL的反应体系包含组分如下，2×SensiFAST Probe Lo-ROX 10μL，0.4μM引物F和R各1μL，0.1μM探针probe(FAM标记)1μL，2.5μL模板DNA，剩余体积由ddH2O补足。
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Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101851630A (zh) * 2009-03-30 2010-10-06 白向阳 人乳头瘤病毒dna片段、特异性引物及其应用
CN102367487A (zh) * 2011-09-09 2012-03-07 中国医学科学院病原生物学研究所 一种高精确度检测人类乳头状瘤病毒基因型的方法
CN105002190A (zh) * 2013-12-03 2015-10-28 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 11型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN101851630A (zh) * 2009-03-30 2010-10-06 白向阳 人乳头瘤病毒dna片段、特异性引物及其应用
CN102367487A (zh) * 2011-09-09 2012-03-07 中国医学科学院病原生物学研究所 一种高精确度检测人类乳头状瘤病毒基因型的方法
CN105002190A (zh) * 2013-12-03 2015-10-28 北京康乐卫士生物技术股份有限公司 11型重组人乳头瘤病毒病毒样颗粒及其制备方法

Non-Patent Citations (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
FRANCISCO ROMERO-PASTRANA: "Detection and Typing of Human Papilloma Virus by Multiplex PCR with Type-Specific Primers", 《ISRN MICROBIOLOGY》 *
HEYDARI N.等: "Human papillomavirus type 6 isolate CC28 L1 protein (L1) gene, partial cds，GenBank: MF066875.1，139bp DNA linear", 《NCBI GENBANK》 *

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