CN107389806A - 一种土壤中盐酸吗啉胍的测定方法 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种土壤中盐酸吗啉胍的测定方法，其改进点为在采用非极性柱对盐酸吗啉胍待测样进行高效液相色谱检测前，采用辛烷磺酸钠对待测样进行预处理，使所述待测样中的盐酸吗啉胍全部与辛烷磺酸钠结合。本发明所述的盐酸吗啉胍的测定方法，可有效延长盐酸吗啉胍的保留时间，提高检测结果的准确性，在上柱前让盐酸吗啉胍与离子对试剂充分反应，可减少离子对试剂对分析柱的污染，减缓柱效降低的速度。

Description

一种土壤中盐酸吗啉胍的测定方法

技术领域

本发明涉及土壤中残留农药的检测领域，具体涉及一种土壤中残留的盐酸吗啉胍的测定方法。

背景技术

盐酸吗啉胍(moroxydine hydrochloride)又名N-(2-胍基-乙亚氨基)-吗啉盐酸盐，抗病毒药物，该物质为白色结晶性粉末。熔点206-212℃(分解)。易溶于水，微溶于乙醇、乙醚，几乎不溶于氯仿。无臭，味微苦。分子式C₆H₁₃N₅O·HCl，分子量207.66，其化学结构结构式如下：

盐酸吗啉胍可以通过抑制病毒的DNA和RNA聚合酶，从而抑制病毒繁殖，用于流感病毒及疱疹病毒感染。人服用后易引起出汗、食欲不振及低血糖等不良反应。2005年我国农业部公告第560号规定禁止在动物养殖过程使用该药物。1991年20％盐酸吗啉胍·铜可湿性粉剂获农业部登记，用于防治烟草、蔬菜、茶叶、水稻等作物的花叶病、蕨叶病、条斑病、叶枯病等病毒病。植物生长过程中施用盐酸吗啉胍后，会有部分药物残留在土壤中，研究表明土壤中盐酸吗啉胍浓度为1.0mg/kg时，就会对土壤中的蔗糖酶、土壤脉酶以及过氧化氢酶产生抑制或激活作用，土壤中生物酶活性的改变将影响土壤养分释放，从而影响作物生长，土壤中的药物还会随灌溉水、地表水径流和雨水冲刷污染水体，造成水环境污染进而影响人体健康；土壤中残留的盐酸吗啉胍还会通过植物的再吸收作用进入人和动物食物链，危害人和动物身体。

盐酸吗啉胍含有氨基，属于有机碱，在分析植物和动物产品中残留时常用的提取溶剂如丙酮、三氯乙酸等就可以将其提取出来。但是在土壤中因其具有的阳离子性质与土壤结合紧密，常用的分析土壤中农药残留的方法难以将其从土壤中提取出来如二氯甲烷萃取盐酸吗啉胍时其提取率仅为20％～30％，三氯甲烷提取率为15％以下，其它有机试剂如乙酸乙酯、正己烷、乙腈、丙酮不能萃取水相中盐酸吗啉胍。目前现有的测定土壤中盐酸吗啉胍的方法较少，周验旭等人将25g土壤样品中添加70ml的丙酮-水-饱和氯化钠(60：5：5，体积比)提取液，35℃震荡提取1h，减压抽滤，旋转蒸发有机溶剂丙酮，蒸馏水定容至15ml，液相色谱分析。最低检出浓度为0.075mg/kg，0.1mg/kg浓度下添加回收，平均回收率为85.9％，平均标准偏差为4.5％。

周建等人将20g土壤样品中添加80ml的丙酮-水-饱和氯化钠(14：1：1，体积比)提取液，45℃震荡提取1h，减压抽滤，用30ml丙酮冲洗残渣和抽滤瓶，旋转蒸发有机溶剂丙酮，蒸馏水定容至15ml，液相色谱分析。最低检出浓度为0.032mg/kg，0.1mg/kg浓度下添加回收，平均回收率为89.6％，平均标准偏差为9.9％。

上述技术在测定土壤中盐酸吗啉胍残留时均使用大量有机溶剂丙酮，分析1份土壤样品需要消耗60ml～100ml丙酮溶剂，提取溶剂成本为3.1～5.2元，成本较高。丙酮是中等毒性化学物质，对人体和大气会造成一定程度的危害和污染。

盐酸吗啉胍属于极性化合物，在进行色谱分析时，根据相似相溶的原理，在Hilic色谱柱上具有较好的保留，可以将其与样品中的干扰物质完全分开，如李文斌、田亚平、祝伟等人分析动物产品中盐酸吗啉胍残留时均采用该方法。如果采用非极性C18色谱柱需要在流动相或提取液中添加离子对试剂，增加盐酸吗啉胍在色谱柱上的保留，避免出峰过早受溶剂干扰，提高与样品中杂质的分离度。

但是上述分析方法提取时间长，提取1份样品需要分析时间1.5小时左右，工作效率低。处理过程中未净化，样品杂质多，缩短色谱柱的使用寿命增加仪器损耗，分析过程中噪音高，影响最低检出浓度。而且在流动相中添加离子对试剂容易污染色谱柱、降低柱效。现有方法中邵辉等人采用在提取液中添加离子对试剂庚烷磺酸钠，仅微弱提高了盐酸吗啉胍在C18色谱柱上的保留，保留时间仅为0.49min，待测组分出峰较早，溶剂大，色谱峰拖尾明显，影响定量分析，检测效果不理想。

发明内容

本发明目的是提供一种土壤中残留的盐酸吗啉胍的检测方法，包括如下步骤：

1)将土壤样品溶于乙酸铵溶液，利用乙酸铵将所述土壤样品中残留的盐酸吗啉胍全部质换到溶液中，得盐酸吗啉胍提取液；

2)在所述盐酸吗啉胍提取液中添加辛烷磺酸钠，使提取液中盐酸吗啉胍全部与辛烷磺酸钠结合，得预处理的盐酸吗啉胍提取液；

3)利用HLB固相萃取柱对所述预处理的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化，干燥后得盐酸吗啉胍待测品；

4)将所述盐酸吗啉胍待测品通过非极性柱进行高效液相色谱分离，然后通过质谱进行分析测定。

盐酸吗啉胍(pKa＝13.6)的碱性与氢氧化钠相仿，在溶液中主要以阳离子形式存在，土壤胶体同盐酸吗啉胍形成比较稳定的结合，用乙酸铵溶液反复处理土壤与盐酸吗啉胍进行交换，可使土壤成为铵饱和的土，将土壤中盐酸吗啉胍完全提取出来，为准确地测定土壤中残留的盐酸吗啉胍奠定基础。在样品中添加辛烷磺酸钠，同现有技术中添加庚烷磺酸钠相比，能有效地延长盐酸吗啉胍的保留时间，而且本发明创造性地提出在对盐酸吗啉胍进行高效液相色谱检测前，在样品中添加离子对试剂辛烷磺酸钠与盐酸吗啉胍全部结合，同现有技术通常采用的在流动相中添加离子对试剂相比，既减少了离子对试剂的用量，还可减少离子对试剂对非极性色谱柱的污染，可延长色谱柱的使用寿命。最后通过HLB对样品进行前处理，可加强测定过程的准确性。

优选的，所述非极性柱为C18柱。更优选的，使用AcquityBEH C18柱。

优选的，所述高效液相色谱分离中采用乙腈和质量浓度0.1％的甲酸的混合液作为流动相进行梯度洗脱；申请人比较了甲醇体系和乙腈体系发现，乙腈体系下盐酸吗啉胍灵敏度约是甲醇体系的10倍，因此采用乙腈体系的检测灵敏度更高。

优选的，洗脱过程中，所述乙腈的体积分数随时间的变化为：

0～2.0min，所述乙腈的体积分数从10％升高到30％；

2～2.10min，所述乙腈的体积分数从30％下降到10％；

2.10～3.00min，维持乙腈的体积分数为10％。

在检测的过程中，保持柱温：35℃；流速：0.2mL·min-1。

采用上述的液相色谱条件，检测的的线性范围是，0.05mg/kg～3.0mg/kg。

优选的，所述乙酸铵溶液的浓度为4～6mol/L。采用上述浓度，大约4次提取后加标回收率即90％以上。工作效率高，可降低乙酸铵的使用量。

进一步的优选，所述乙酸铵溶液的浓度为5mol/L。

优选的，在实际操作中，对中性和酸性土壤进行处理时，选择pH为7.0～7.5的乙酸铵溶液，对碱性土壤进行处理时，选择pH为6.2～6.8的乙酸铵溶液。上述操作可保持土壤的pH值接近中性，保证后继用酸性铬蓝K-萘酚绿B指示剂对共进行检测时可准确显色。

优选的，所述盐酸吗啉胍全部质换到溶液中的判断标准为，将质换完成后的所述待测土壤样品再次溶于乙酸铵溶液后，滴加中酸性铬蓝K-萘酚绿B指示剂后显示蓝色。

优选的，在实际操作的过程中，每10g土壤样品中添加65～95ml乙酸铵提取液。根据土壤类型的不同使用的提取液的体积有变化，一般情况下，10g样品中添加90ml乙酸铵基本上就可以将待测的盐酸吗啉胍都提取出来，使用量主要取决于土壤样品中盐酸吗啉胍和土壤中阳离子的浓度。

优选的，所述辛烷磺酸钠溶液的浓度为0.4～0.6mol/L。

更优选的，所述辛烷磺酸钠溶液的浓度为0.5mol/L。

优选的，所述HLB固相萃取柱对所述预处理后的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化后，用甲醇对吸附处理后的盐酸吗啉胍提取液进行洗脱。

优选的，在实际使用中，HLB固相萃取柱在使用前需使用体积比为1:1的甲醇和水的混合液进行润湿活化，样品过萃取柱后，用甲醇/水(5/95，V/V)混合液对柱进行淋洗。

优选的，所述质谱分析的条件为：离子源：ESI(+)；毛细管电压：4.0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L·h-1；脱溶剂气流量：650L·h-1；检测方式：多反应监测扫描模式(MRM)。

在检测的过程中，以注射标准样品的方式在ESI正离子模式下进行母离子全扫描，确定盐酸吗啉胍的母离子为m/z 172，优化锥孔电压，30V下母离子响应最大。对母离子m/z172施加碰撞电压进行子离子扫描，发现m/z 113.1和m/z 60.1是响应较大且比较稳定的2个，将其确定为定性定量的子离子。对m/z 113.1和m/z 60.1两个子离子进行碰撞电压的优化，在20V的电压下，子离子m/z 113.1的丰度较其他电压下大；在25V的电压下，子离子m/z60.1的丰度较其他电压下大，因此将20V和25V分别作为2个通道的碰撞电压。通过比较，发现子离子m/z 113.1的灵敏度比m/z 60.1高，因此确定子离子m/z 113.1为定量子离子。

更优选的，本发明所述的方法包括如下步骤：

1)将土壤样品溶于浓度为4～6mol/L乙酸铵溶液，利用乙酸铵将所述土壤样品中残留的盐酸吗啉胍全部质换到溶液中，得盐酸吗啉胍提取液；

2)在所述盐酸吗啉胍提取液中添加浓度为0.4～0.6mol/L的辛烷磺酸钠溶液，使提取液中盐酸吗啉胍全部与辛烷磺酸钠结合，得预处理的盐酸吗啉胍提取液；

3)利用HLB固相萃取柱对所述预处理的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化，并利用甲醇对吸附净化后的溶液进行洗脱，干燥后得盐酸吗啉胍待测品；

4)将所述盐酸吗啉胍待测品通过C18柱进行高效液相色谱分离，

所述高效液相色谱分离中采用的流动相为乙腈和质量浓度0.1％的甲酸的混合液；

梯度洗脱的过程中，所述乙腈的体积分数随时间的变化为：

0～2.0min，所述乙腈的体积分数从10％升高到30％；

2～2.10min，所述乙腈的体积分数从30％下降到10％；

2.10～3.00min，维持乙腈的体积分数为10％；

5)通过质谱对盐酸吗啉胍进行分析测定，所述质谱分析的条件为:离子源：ESI(+)；毛细管电压：4.0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L·h-1；脱溶剂气流量：650L·h-1；检测方式：多反应监测扫描模式(MRM)。

上述方法中，最优选的，步骤1)中将土壤样品溶于浓度为5mol/L乙酸铵溶液；步骤2)中在所述盐酸吗啉胍提取液中添加浓度为0.5mol/L的辛烷磺酸钠溶液。

本发明所述的方法具有如下有益效果：

1)本发明所述的盐酸吗啉胍的测定方法，选择辛烷磺酸钠作为离子对试剂，可有效延长盐酸吗啉胍的保留时间。现有方法在提取液中添加离子对试剂多为庚烷磺酸钠，盐酸吗啉胍在C18的保留时间仅为0.49min，容易受溶剂峰干扰，峰形拖尾明显。本发明在提取液中添加辛烷磺酸钠溶液，碳链长度增加，在C18色谱柱上的保留时间增加到1.12min，干扰少，峰形对称。本发明的方法在上柱前让盐酸吗啉胍与离子对试剂充分反应，可减少离子对试剂对分析柱的污染，减慢柱效降低的速度。

2)本发明所述的提取土壤中残留的盐酸吗啉胍的方法，成本低、效率高、环保效果明显。

盐酸吗啉胍在土壤中残留分析方法在公开发表的相关研究报道中，提取过程均使用大量有机溶剂丙酮，该溶剂为中等毒性化学物质，长期暴露在丙酮环境中容易危害人体健康，同时使用过程中处理不当还会造成环境污染。本发明采用的提取剂乙酸铵属于低毒类药物，常用作分析试剂、肉类防腐剂，也用作制药，对人体健康和环境危害较小。

本发明的方法同采用丙酮进行提取相比，提取过程中采用的提取剂量少，提取剂自身的成本低，而且提取的时间短。取例来说，本发明的方法分析1份样品10g需要65～95ml提取液，提取试剂仅需0.5～0.74元，成本仅为现有方法的1/8。同现有技术相比，本发明分析时间短现，有文献方法提取时间为1.5h，使用本发明的方法，若反复提取样品3次18分钟，0.05mg/kg添加回收率能达到90％，提取5次30分钟，0.05mg/kg添加回收率能达到97％。

3)现有方法处理过程中未净化，土壤中存在的脂溶性有机质类杂质多，不仅缩短色谱柱的使用寿命增加仪器损耗，而且分析过程中噪音高，影响最低检出浓度。本发明的样品经过HLB固相萃取柱净化后能够除去土壤中的水溶性有机质、腐殖酸以及胡敏酸等干扰物质，降低仪器分析过程中的噪声提高灵敏度。

4)本方法较现有方法具有更低的最低检出浓度，在较低的添加回收浓度下，具有更好的回收率和重现性。现有方法的最低检出浓度为0.032～0.075mg/kg，0.1mg浓度下添加回收，平均回收率为85.9％～89.6％，平均标准偏差为4.5％～9.9％。本方法的最低检出浓度为0.005mg/kg，0.05mg浓度下添加回收，平均回收率为97.4％，平均标准偏差为2.21％。

采用该方法对2014～2015年布置在黑龙江哈尔滨市、河南省祝楼乡、江苏省句容市三地的盐酸吗啉胍农药残留试验稻田土壤样品进行监测，水稻土壤中盐酸吗啉胍的半衰期为9.2～12.9天，周验旭等人采用有机溶剂提取液相色谱测定的方法得出盐酸吗啉胍在水稻土壤中的半衰期为8.62～13.62天，周建等人采用有机溶剂提取液相色谱测定的方法得出盐酸吗啉胍在烟田土壤中的半衰期为13.41～16.23天，3种方法结果相类似。

附图说明

图1为本申请的标准曲线；

图2为盐酸吗啉胍标样色谱图(0.05mg/kg)；

图3为盐酸吗啉胍标样色谱图(0.1mg/kg)；

图4为盐酸吗啉胍标样色谱图(0.5mg/kg)；

图5为盐酸吗啉胍标样色谱图(1.0mg/kg)；

图6为盐酸吗啉胍标样色谱图(3.0mg/kg)；

图7为土壤空白色谱图；

图8为土壤添加回收色谱图(添加浓度0.05mg/kg)；

图9为土壤添加回收色谱图(添加浓度0.5mg/kg)；

图10为土壤添加回收色谱图(添加浓度3.0mg/kg)。

图2～10中横坐标为盐酸吗啉胍保留时间时间，纵坐标为信号强度。

具体实施方式

以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。

实施例1

本实施例涉及一种土壤中盐酸吗啉胍的检测方法，包括如下步骤：

1)将土壤样品在自然条件下风干，准确称取10.00克样品，于50ml离心管中，加20mL(中性和酸性土壤pH值＝7.0，碱性土壤pH值＝6.5，)5mol/l的乙酸铵溶液，室温振荡提取3min，1600g离心力的条件下离心3min，收集上清于100ml容量瓶中，如此用15ml 5mol/l的乙酸铵溶液反复提取土壤样品3～5次，直至土壤乙酸铵溶液中酸性铬蓝K-萘酚绿B指示剂显示蓝色，收集上清液，得盐酸吗啉胍提取液；

2)在上述提取液中加0.5moL·L-1辛烷磺酸钠溶液0.5mL，并用5mol/l乙酸铵溶液定容至100mL，得预处理的盐酸吗啉胍提取液。

3)用3mL甲醇和3mL水对Waters Oasis HLB固相萃取柱进行湿润处理，取10mL预处理的盐酸吗啉胍提取液过柱，待全部通过后，用3mL甲醇/水(5/95，V/V)淋洗柱，弃去，抽干柱，用6mL甲醇洗脱被测物，洗脱液于45℃水浴中氮吹浓缩至干，得盐酸吗啉胍待测品；

4)用2.0mL流动相起始浓度溶解残渣，过0.22μm滤膜待测。

选择液相色谱柱：AcquityBEH C18(100mm×2.1mm，

1.7um)；柱温：35℃；进样量：2.0μL；流速：0.2mL·min-1，运行时间：3min。梯度洗脱条件如表1：

表1梯度洗脱条件

质谱条件：离子源：ESI(+)；毛细管电压：4.0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L·h-1；脱溶剂气流量：650L·h-1；检测方式：多反应监测扫描模式(MRM)(见表2)。

以注射标准样品的方式在ESI正离子模式下进行母离子全扫描，确定盐酸吗啉胍的母离子为m/z 172，优化锥孔电压，30V下母离子响应最大。对母离子m/z 172施加碰撞电压进行子离子扫描，发现m/z 113.1和m/z 60.1是响应较大且比较稳定的2个，将其确定为定性定量的子离子。对m/z 113.1和m/z60.1两个子离子进行碰撞电压的优化，在20V的电压下，子离子m/z 113.1的丰度较其他电压下大；在25V的电压下，子离子m/z 60.1的丰度较其他电压下大，因此将20V和25V分别作为2个通道的碰撞电压。通过比较，发现子离子m/z113.1的灵敏度比m/z 60.1高，因此确定子离子m/z 113.1为定量子离子。

表2反应监测表

表3土壤样品中加标回收率(具体见图7～10)

标准曲线的绘制：将1.0g/L的盐酸吗啉胍标准溶液用甲醇稀释配得3.0、1.0、0.5、0.1、0.05mg/L系列标准溶液，在上述液相色谱/质谱条件下进行测定，以盐酸吗啉胍标准溶液浓度(x)与监测离子峰面积(y)作标准曲线。标样线性方程为y＝463.36x+92.865，相关系数为r＝0.9995。方法的检出限为0.005mg/kg。(标准曲线图见图1，各浓度的液相色谱图见图2～6)

根据标准曲线，计算待测土壤样品中残留的盐酸吗啉胍的浓度为0.532mg/kg。

实施例2

采用该方法对2014～2015年布置在黑龙江哈尔滨市、河南省祝楼乡、江苏省句容市三地的盐酸吗啉胍农药残留试验稻田土壤样品进行监测，水稻土壤中盐酸吗啉胍的半衰期为9.2～12.9天，周验旭等人采用有机溶剂提取液相色谱测定的方法得出盐酸吗啉胍在水稻土壤中的半衰期为8.62～13.62天，周建等人采用有机溶剂提取液相色谱测定的方法得出盐酸吗啉胍在烟田土壤中的半衰期为13.41～16.23天，3种方法结果相类似，证明本申请的方法在实际应用中的准确性也是可信的。

虽然，上文中已经用一般性说明、具体实施方式及试验，对本发明作了详尽的描述，但在本发明基础上，可以对之作一些修改或改进，这对本领域技术人员而言是显而易见的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的这些修改或改进，均属于本发明要求保护的范围。

Claims (10)

1.一种土壤中盐酸吗啉胍的测定方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将土壤样品溶于乙酸铵溶液，利用乙酸铵将所述土壤样品中残留的盐酸吗啉胍全部质换到溶液中，得盐酸吗啉胍提取液；

2)在所述盐酸吗啉胍提取液中添加辛烷磺酸钠溶液，使提取液中盐酸吗啉胍全部与辛烷磺酸钠结合，得预处理的盐酸吗啉胍提取液；

3)利用HLB固相萃取柱对所述预处理的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化，干燥后得盐酸吗啉胍待测品；

4)将所述盐酸吗啉胍待测品通过非极性柱进行高效液相色谱分离，然后通过质谱进行分析测定。

2.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述非极性柱为C18柱。

3.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，所述高效液相色谱分离中采用乙腈和质量浓度0.1％的甲酸的混合液作为流动相进行梯度洗脱；

优选的，梯度洗脱的过程中，所述乙腈的体积分数随时间的变化为：

0～2.0min，所述乙腈的体积分数从10％升高到30％；

2～2.10min，所述乙腈的体积分数从30％下降到10％；

2.10～3.00min，维持乙腈的体积分数为10％。

4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述乙酸铵溶液的浓度为4～6mol/L。

5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，对中性和酸性土壤进行处理时，选择pH为7.0～7.5的乙酸铵溶液，对碱性土壤进行处理时，选择pH为6.2～6.8的乙酸铵溶液。

6.根据权利要求1或5所述的方法，其特征在于，所述盐酸吗啉胍全部质换到溶液中的判断标准为，将质换完成后的所述土壤样品再次溶于乙酸铵溶液后，滴加中酸性铬蓝K-萘酚绿B指示剂后显示蓝色。

7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述辛烷磺酸钠溶液的浓度为0.4～0.6moL/L。

8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述HLB固相萃取柱对所述预处理后的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化后，用甲醇对吸附处理后的盐酸吗啉胍提取液进行洗脱。

9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述质谱分析的条件为：

离子源：ESI(+)；毛细管电压：4.0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L·h-1；脱溶剂气流量：650L·h-1；检测方式：多反应监测扫描模式(MRM)。

10.根据权利要求1～9任一项所述的方法，其特征在于，包括如下步骤：

1)将土壤样品溶于浓度为4～6mol/L乙酸铵溶液，利用乙酸铵将所述土壤样品中残留的盐酸吗啉胍全部质换到溶液中，得盐酸吗啉胍提取液；

2)在所述盐酸吗啉胍提取液中添加浓度为0.4～0.6mol/L的辛烷磺酸钠溶液，使提取液中盐酸吗啉胍全部与辛烷磺酸钠结合，得预处理的盐酸吗啉胍提取液；

3)利用HLB固相萃取柱对所述预处理的盐酸吗啉胍提取液进行吸附净化，并利用甲醇对吸附净化后的溶液进行洗脱，干燥后得盐酸吗啉胍待测品；

4)将所述盐酸吗啉胍待测品通过C18柱进行高效液相色谱分离，

所述高效液相色谱分离中采用的流动相为乙腈和质量浓度0.1％的甲酸的混合液；

梯度洗脱的过程中，所述乙腈的体积分数随时间的变化为：

0～2.0min，所述乙腈的体积分数从10％升高到30％；

2～2.10min，所述乙腈的体积分数从30％下降到10％；

2.10～3.00min，维持乙腈的体积分数为10％；

5)通过质谱对盐酸吗啉胍进行分析测定，所述质谱分析的条件为:离子源：ESI(+)；毛细管电压：4.0kV；离子源温度：120℃；脱溶剂气温度：350℃；锥孔反吹气流量：50L·h-1；脱溶剂气流量：650L·h-1；检测方式：多反应监测扫描模式(MRM)。