CN107764915B - 春雷霉素在柑橘中的检测方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供春雷霉素在柑橘中的检测方法，包括：柑橘分离、柑橘橘皮提取、柑橘橘皮净化、柑橘橘肉提取、柑橘橘肉净化，或者柑橘全果提取、柑橘全果净化；测定，添加回收率试验，测定最小检出量，确定最低检测浓度。本方法的前处理过程相对简单，回收率高，重复性好，净化分离效果好，而且最低检测浓度比较低，适合于春雷霉素在柑橘全果、橘肉、橘皮中的分析检测。

Description

春雷霉素在柑橘中的检测方法

技术领域

本发明涉及农药检测，尤其涉及春雷霉素在柑橘中的检测。

背景技术

春雷霉素(Kasugamycin)是一种由小金色放线菌产生的农用抗菌素类杀菌剂，属于微生物农药，是以生物体如细菌、真菌、病毒等微生物为原料而制成的，这类农药的特点是安全可靠，不污染环境，对人畜不产生公害，而且原料易获得，生产成本低，是当前农作物病虫害防治中具有广阔发展前景的一种农药。

春雷霉素化学名称为(5-氨基-2-甲基-6-(2，3，4，5，6-羟基环己基氧代)

四氢吡喃-3-基)氨基-α-亚氨醋酸；化学结构式为

化学分子式C₁₄H₂₅O₉N₃，分子量379.36。春雷霉素纯品为白色结晶，盐酸盐为白色针状或片状结晶，有甜味。纯品在有机溶剂中难溶，在25℃水中溶解12.5％(W/V)；盐酸盐易溶于水，不溶于甲醇、乙醇、丙酮、苯等有机溶剂。在酸性或中性介质中较稳定，遇碱易破坏失效。

春雷霉素是水溶性农药，难溶于有机溶剂。对春雷霉素的分析多采用HPLC、UPLC-MS/MS、生物测定法(抑菌圈法)等；研究报道有关于春雷霉素在水稻、黄瓜、土豆、番茄、辣椒、西葫芦、莴苣、苹果、甜瓜、西瓜、烟叶、土壤和水中的检测方法。但是关于春雷霉素在柑橘上的检测方法未见报道。

发明内容

本发明所要解决的技术问题是提供一种春雷霉素在柑橘中的检测方法，能够对柑橘中的春雷霉素残留进行检测，满足农药残留分析中对准确度、精密度和灵敏度的要求。

本发明解决上述技术问题所采用的技术方案是：春雷霉素在柑橘中的检测方法，包括以下步骤：

(1)柑橘分离：将柑橘全果分离为柑橘橘肉和柑橘橘皮；

(2)柑橘橘肉前处理：

(2.1)柑橘橘肉提取：称取5g柑橘橘肉样品，置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后在4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；

(2.2)柑橘橘肉净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液将洗脱液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；

(3)柑橘橘皮前处理：

(3.1)柑橘橘皮提取：称取5g柑橘橘皮样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；

(3.2)柑橘橘皮净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；

或者，以步骤(4)替代步骤(1)-(3)；

(4)柑橘全果前处理：

(4.1)柑橘全果提取：称取5g柑橘全果样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取液4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL上述相同的提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化；

(4.2)柑橘全果净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5％氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用2mL定容液溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器，待测定；

(5)测定：用配制0.005、0.010、0.020、0.051、0.10和0.20mg/L春雷霉素系列标准工作溶液，分别进样1μL，获得UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积/峰高绘制春雷霉素标准曲线；

(6)回收率试验：根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中分别设定0.05、0.1和1.0mg/kg三档添加浓度，每档浓度重复添加5次，进行添加回收率试验，得到柑橘全果、柑橘橘肉和橘皮样品中春雷霉素的添加回收率和相对标准偏差；

(7)采用超高效液相色谱串联质谱仪测定春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品的最小检出量；

(8)根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及按春雷霉素最低添加浓度0.05mg/kg的柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中的最低检测浓度。

本发明的有益效果是：本发明建立了柑橘全果、橘肉、橘皮中春雷霉素的分析检测方法；根据柑橘的特性，采用甲醇/水(7/3，v/v)超声提取，MCX小柱(3cc/60mg)净化，净化分离效果好，通过本发明的方法，春雷霉素在0.005～0.20mg/L浓度范围内呈良好的线性关系；春雷霉素在柑橘全果中平均回收率为76％～77％，相对标准偏差为2.4％～6.1％。春雷霉素在柑橘橘肉中平均回收率为76％～79％，相对标准偏差为2.7％～5.7％。春雷霉素在柑橘橘皮中平均回收率为73％～82％，相对标准偏差为4.8％～6.6％。本方法的前处理过程相对简单，回收率高，重复性好，净化分离效果好，而且最低检测浓度比较低，适合于春雷霉素在柑橘全果、橘肉、橘皮中的分析检测。本发明的检测方法操作简便，准确可靠、可满足农药残留分析的要求，并可用于大量样品的快速检测。

附图说明

图1是本发明的测定步骤中在不同浓度下UPLC-MS/MS的响应值的峰面积表。

图2是春雷霉素标准曲线图。

图3是春雷霉素在不同添加浓度下的添加回收率表。

图4是春雷霉素在0.1mg/L的标准溶液色谱图。

具体实施方式

本发明公开了一种春雷霉素在柑橘中的检测方法，该方法所采用的主要化学仪器有：

超高效液相色谱串联质谱仪(超高效液相色谱仪型号为Waters ACQUITY UPLC，质谱仪型号为Waters Xevo TQ MS，Waters公司)、

SPS 402F型电子天平：(梅特勒－托利多(常州)测量技术有限公司)、

SK1200H型超声清洗器(上海科导科学仪器有限公司)、

Sigma 3-18K型高速冷冻力离心机(德国SIGMA公司)、

R-201型旋转蒸发器(上海申胜生物技术有限公司)、

HH-4型恒温水浴锅(江苏金坛市江南仪器厂)、

SHZ-D(Ⅲ)型循环水式真空泵(巩义市予华仪器有限责任公司)、

PB-10型pH计(赛多利斯科学仪器(北京)股份公司)、

有机滤纸(0.45μm，上海新亚净化器件厂)、

12管固相萃取装置(美国SUPELCL公司)、

N-EVAPTM Ⅲ型氮吹仪(美国Organomation公司)、

TQP-61322型有机针式滤器(0.22μm，天源科技公司)

TYZD-ⅡA型振荡器(姜堰市天仪电子仪器有限公司)、

VTX-3000LS型涡旋振荡器(杭州飞域实验室设备公司)、

SK1200H型超声波清洗器(上海科导科学仪器有限公司)。

仪器的条件要求是：

超高效液相色谱条件：

色谱柱：ACQUITY UPLC Hilic(1.7μm，2.1×100mm)；

流动相：乙腈/0.1％甲酸水＝55/45；

流速：0.1mL/min；

进样量：1uL；

柱温：40℃。

质谱条件：

离子源：ESI⁺；

毛细管电压：3.0KV；

锥孔电压：15V；

离子源温度：150℃；

脱溶剂温度：400℃；

脱溶剂气流量：800L/h；

锥孔气流量：30L/h；

检测方式：多重反应监测(MRM)模式；母离子：380.33；锥孔电压15；定量离子：112.1，(碰撞能量：12eV)；定性离子：200.21(碰撞能量12eV)。

本发明的检测方法所用到的化学试剂包括：

乙腈(色谱纯Honeywell 4L，Burdick&Jackson公司)、

甲醇(色谱纯Honeywell 4L，Burdick&Jackson公司)、

甲醇(分析纯500mL，上海凌峰化学试剂有限公司)、

氨水(分析纯500mL，杭州高晶精细化工有限公司)、

甲酸(色谱纯Honeywell 4L，Burdick&Jackson公司)、

甲酸(分析纯500mL，上海凌峰化学试剂有限公司)、

MCX小柱(3cc/60mg,Waters公司)、

C₁₈小柱(500mg/6mL，天津博纳艾杰尔科技有限公司)、

HLB小柱(3cc/60mg,Waters公司)、

SCX(3cc/60mg,Waters公司)。

本发明的检测方法如下：

首先，进行样品的前处理，前处理可以分为两种，一种是直接处理柑橘全果，一种是将柑橘全果分离为橘皮和橘肉，分别进行前处理。

直接处理柑橘全果的前处理步骤如下：

S1.1，柑橘全果提取

准确称取5g(精确至0.01g)柑橘全果样品置于50mL离心管中，加入20mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)30分钟。提取液4000rpm离心(Sigma3-18K型高速冷冻力离心机)5min后，转移到旋转蒸发瓶中。样品中加入10mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)15分钟，重复提取2次。收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中。40℃条件下旋转蒸发(R-201型旋转蒸发器)掉甲醇。提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化。

S1.2，柑橘全果净化

净化(MCX小柱，3cc/60mg,Waters公司)：5mL甲醇和5mL水分别按照顺序添加进行活化MCX小柱；12mL提取液上样；5mL水和5mL甲醇分别按照顺序淋洗MCX小柱，用12管固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL甲醇(含5％氨水)洗脱MCX小柱。洗脱液在40℃条件下吹干(N-EVAPTMⅢ型氮吹仪)，用2mL甲醇：水(1:1，v/v)溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器(TQP-61322型)，待测定。

或者先将柑橘全果分离为柑橘橘肉和柑橘橘皮，然后分别进行前处理，具体步骤如下：

S2.1，柑橘橘肉提取

准确称取5g(精确至0.01g)柑橘橘肉样品置于50mL离心管中，加入20mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)30分钟。提取液4000rpm离心(Sigma3-18K型高速冷冻力离心机)5min后，转移到旋转蒸发瓶中。样品中加入10mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)15分钟，重复提取2次。收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中。40℃条件下旋转蒸发(R-201型旋转蒸发器)掉甲醇。提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化。

S2.2，柑橘橘肉净化

净化(MCX小柱，3cc/60mg,Waters公司)：5mL甲醇和5mL水分别按照顺序添加进行活化MCX小柱；12mL提取液上样；5mL水和5mL甲醇分别按照顺序淋洗MCX小柱，用12管固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL甲醇(含5％氨水)洗脱MCX小柱。洗脱液在40℃条件下吹干(N-EVAPTMⅢ型氮吹仪)，用2mL甲醇：水(1:1，v/v)溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器(TQP-61322型)，待测定。

S2.3，柑橘橘皮提取

准确称取5g(精确至0.01g)柑橘橘皮样品置于50mL离心管中，加入20mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)30分钟。提取液4000rpm离心(Sigma3-18K型高速冷冻力离心机)5min后，转移到旋转蒸发瓶中。样品中加入10mL甲醇/水(7/3，v/v)提取液，超声提取(SK1200H型超声清洗器)15分钟，重复提取2次。收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中。40℃条件下旋转蒸发(R-201型旋转蒸发器)掉甲醇。提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45μm有机滤纸后，待净化。

S2.4，柑橘橘皮净化

净化(MCX小柱，3cc/60mg,Waters公司)：5mL甲醇和5mL水分别按照顺序添加进行活化MCX小柱；12mL提取液上样；5mL水和5mL甲醇分别按照顺序淋洗MCX小柱，用12管固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL甲醇(含5％氨水)洗脱MCX小柱。洗脱液在40℃条件下吹干(N-EVAPTMⅢ型氮吹仪)，用2mL甲醇：水(1:1，v/v)溶解定容到2.0mL，过0.22μm有机针式滤器(TQP-61322型)，待测定。

春雷霉素是水溶性农药，难溶于有机溶剂。春雷霉素难溶于有机溶剂的性质导致其检测方法建立的难度较大，难点在于难于提取和净化。

本发明在提取过程中进行如下实验：

(1)提取液氨水/水/甲醇(1/6/14，v/v/v)振荡提取；

(2)提取液甲醇/水(9/1，v/v)振荡提取；

(3)提取液甲醇/水(7/3，v/v)匀浆提取；

(4)提取液甲醇超声提取；

(5)提取液甲醇/水(9/1，v/v)超声提取；

(6)提取液甲醇/水(7/3，v/v)超声提取；

选取上述6种提取条件，(1)、(2)、(3)、(4)、(5)提取条件，均不能把春雷霉素从柑橘样品中完全提取出来。只有(6)提取液甲醇/水(7/3，v/v)超声提取3次，才能把春雷霉素从柑橘全果样品中完全提取出来。最终选取“(6)提取液甲醇/水(7/3，v/v)超声提取3次”作为提取条件。

本发明在净化过程中进行如下实验：

选取C₁₈小柱、HLB小柱、SCX小柱和MCX小柱净化。

提取液经过C₁₈小柱后，春雷霉素在C₁₈小柱上没有被保留，直接随着液体留下来，液体颜色仍然较深，和净化前区别不大，大部分杂质没有被去除，达不到净化的目的。

提取液经过HLB小柱后，春雷霉素在HLB小柱上没有被保留，直接随着液体留下来，液体颜色仍然较深，和净化前区别不大，大部分杂质没有被去除，达不到净化的目的。

提取液经过SCX小柱后，春雷霉素在SCX小柱上被保留，选取的洗脱液均不能把春雷霉素洗脱下来，回收率达不到要求。

只有选取MCX小柱，既能够很好的去除杂质，又能够保证回收率能够达到要求。

柑橘提取液浓缩掉甲醇，只剩下水后，显酸性，用氨水调解pH值为5(4.5-5.5)。

如果氨水太多(pH值大于5.5)，春雷霉素不能被完全离子化，从而使春雷霉素不能完全保留到MCX小柱上。

如果氨水太少(pH值小于5)，春雷霉素保留在MCX小柱上后，洗脱液(5％氨水甲醇溶液)不能把春雷霉素完全洗脱下来。

在这个pH值(pH值5)条件下，样品过MCX小柱，能够保证既把样品保留在MCX小柱上，用洗脱液6mL甲醇(含5％氨水)又能够把春雷霉素完全洗脱下来。

在前处理步骤进行完毕后，进行分析方法线性关系的测定。

S3，用甲醇和水按照1:1的体积比分别配制0.005、0.010、0.020、0.051、0.10和0.20mg/L春雷霉素系列标准工作溶液，分别进样1μL，获得如图1所示的UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积/峰高绘制春雷霉素标准曲线，如图2所示，其回归方程为Y＝14554.9717X－24.2032(r＝0.9997)。

S4，进行添加回收率试验。

根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)上的响应情况，春雷霉素在柑橘全果样品中设定了3档添加浓度(0.05、0.1和1.0mg/kg)，春雷霉素在柑橘橘肉样品中设定了3档添加浓度(0.05、0.1和1.0mg/kg)，雷霉素在柑橘橘皮样品中设定了3档添加浓度(0.05、0.1和1.0mg/kg)每档添加浓度设5个重复。

按上述提取、净化及测定步骤，进行添加回收率试验。得到柑橘全果、橘肉、橘皮样品中春雷霉素的添加回收率和相对标准偏差(RSDs)，如图3所示。

由图3的表格可知，春雷霉素在柑橘全果中添加浓度为0.05、0.1和1.0mg/kg时，平均回收率分别为76％、77％和76％，相对标准偏差分别为2.4％、6.1％和4.1％。春雷霉素在柑橘橘肉中添加浓度为0.05、0.1和1.0mg/kg时，平均回收率分别为76％、79％和76％，相对标准偏差分别为5.7％、2.7％和5.5％。春雷霉素在柑橘橘皮中添加浓度为0.05、0.1和1.0mg/kg时，平均回收率分别为78％、73％和82％，相对标准偏差分别为6.6％、4.8％和4.8％。超高效液相色谱串联质谱仪(UPLC-MS/MS)对春雷霉素的最小检出量为5×10^-12g。

根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及柑橘全果、橘肉、橘皮样品中春雷霉素最低添加浓度0.05mg/kg的样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出：春雷霉素在柑橘全果、橘肉、橘皮样品中的最低检测浓度均为0.05mg/kg。

Claims (3)

1.春雷霉素在柑橘中的检测方法，其特征是，包括以下步骤：

（1）柑橘分离：将柑橘全果分离为柑橘橘肉和柑橘橘皮；

（2）柑橘橘肉前处理：

（2.1）柑橘橘肉提取：称取5g柑橘橘肉样品，置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后在4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL相同的上述提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45µm有机滤纸后，待净化；

（2.2）柑橘橘肉净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5%氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用 2mL定容液将洗脱液溶解定容到2.0 mL，过0.22 µm有机针式滤器，待测定；

（3）柑橘橘皮前处理：

（3.1）柑橘橘皮提取：称取5g柑橘橘皮样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取后4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL相同的上述提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45µm有机滤纸后，待净化；

（3.2）柑橘橘皮净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5%氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用 2mL定容液溶解定容到2.0 mL，过0.22 µm有机针式滤器，待测定；

或者，以步骤（4）替代步骤（1）-（3）；

（4）柑橘全果前处理：

（4.1）柑橘全果提取：称取5g柑橘全果样品置于50mL离心管中，加入20mL提取液，超声提取30分钟，提取液4000rpm离心5min后，转移到旋转蒸发瓶中，样品中加入10mL相同的上述提取液，超声提取15分钟，并按照上述步骤重复提取2次，提取完毕后收集所有的提取液到旋转蒸发瓶中，40℃条件下旋转蒸发掉甲醇，提取液用水补充到大于28mL，用氨水调pH值到5.0，用水定容至30mL，过0.45µm有机滤纸后，待净化；

（4.2）柑橘全果净化：5mL甲醇和5mL水依次分别添加进活化MCX小柱；12mL提取液上样、5mL水和5mL甲醇依次分别淋洗MCX小柱，固相萃取装置抽空MCX小柱2min；6mL含5%氨水的甲醇洗脱MCX小柱，洗脱液在40℃条件下吹干，用 2mL定容液溶解定容到2.0 mL，过0.22 µm有机针式滤器，待测定；

（5）测定：用配制0.005、0.010、0.020、0.051、0.10和0.20 mg/L春雷霉素系列标准工作溶液，分别进样1μL，获得UPLC-MS/MS的响应值，以浓度-峰面积/峰高绘制春雷霉素标准曲线；

（6）回收率试验：根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中分别设定0.05、0.1和1.0 mg/kg三档添加浓度，每档浓度重复添加5次，进行添加回收率试验，得到柑橘全果、柑橘橘肉和橘皮样品中春雷霉素的添加回收率和相对标准偏差；

（7）采用超高效液相色谱串联质谱仪测定春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品的最小检出量；

（8）根据春雷霉素在超高效液相色谱串联质谱仪上的响应情况，以及按春雷霉素最低添加浓度0.05 mg/kg的柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品在仪器上响应值均大于仪器的3倍信号噪音比，得出春雷霉素在柑橘全果、柑橘橘肉和柑橘橘皮样品中的最低检测浓度；所述提取液由甲醇和水按照7:3的体积比配置；

所述定容液由甲醇和水按照1:1的体积比配置。

2.根据权利要求1所述的春雷霉素在柑橘中的检测方法，其特征是，超高效液相色谱串联质谱仪的色谱条件是：

色谱柱：ACQUITY UPLC Hilic，1.7µm，2.1×100mm；

流动相：乙腈/0.1%甲酸水= 55/45；

流速：0.1mL/ min；

进样量：1uL；

柱温：40℃。

3.根据权利要求1所述的春雷霉素在柑橘中的检测方法，其特征是，超高效液相色谱串联质谱仪的质谱条件是：

离子源：ESI⁺；

毛细管电压：3.0KV；

锥孔电压：15V；

离子源温度：150℃；

脱溶剂温度：400℃；

脱溶剂气流量：800L/h；

锥孔气流量：30 L/h；

检测方式：多重反应监测（MRM）模式；母离子：380.33；锥孔电压15；定量离子：112.1，碰撞能量：12eV；定性离子：200.21碰撞能量12eV。

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