CN108426962B - 一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法 - Google Patents

Abstract

本发明属于食品检测技术领域，公开了一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法。将待测果蔬试样用甲酸‑乙腈超声提取，离心，取上清液干燥后加入甲酸水溶液混匀，然后用HLB固相萃取柱萃取，萃取物用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液复溶，得到待测液；用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液配制含有7种典型真菌毒素AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT和OTA的混合标准溶液，采用UHPLC‑MS/MS检测得到标准曲线，同样条件下检测待测液，根据标准曲线计算待测液中7种典型真菌毒素的含量。本发明的方法适用于果蔬中4大类7种真菌毒素的同时测定，弥补了检测目标物单一的缺陷，具有检测限低、检测准确度高的优点。

Description

一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法

技术领域

本发明属于食品检测技术领域，具体涉及一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法。

背景技术

水果和蔬菜含水量高、营养丰富，在生长、采收和储运等过程中，极易受到各种病原菌的侵染而发生腐烂，产生并积累各种真菌毒素。多数真菌毒素性质稳定，常规的贮运和加工条件难以将其彻底清除，就会对人类和动物的健康造成潜在威胁。研究显示，污染果蔬的真菌毒素主要包括交链孢毒素、赭曲霉毒素A(OTA)、展青霉素(PAT)和单端孢霉烯族毒素等。交链孢毒素是由交链孢霉产生的一系列代谢产物，交链孢霉是具有腐生和寄生作用的植物致病性菌，其中交链孢酚(AOH)、交链孢酚单甲醚(AME)、细交链格孢酮酸(TeA)和腾毒素(TEN)是果蔬中最常见的4种交链孢毒素。

动物实验结果表明，AOH和AME对多个体系具有致突变性和遗传毒性作用。链孢毒素可使果实内部腐烂而表皮无明显变化，不能通过冲洗，分拣操作去除毒素，因此新鲜果蔬及其制品的交链孢毒素污染已成为重要的公共卫生问题。

OTA具有较强的肝毒性和肾毒性，并有致畸、致癌和致突变作用。

PAT具有神经毒性、遗传毒性、致畸和潜在的免疫毒性，大多数欧美国家规定PAT的限量为0-50μg/kg，我国规定苹果、山楂半成品的限量为100μg/kg。

单端孢霉烯族毒素具有致畸、致癌和致突变作用，且耐热和耐酸，在加工中难以脱除；脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)是其中污染最为广泛的一种，摄取含有DON的食物后会造成头疼、恶心、腹疼、贫血、免疫力下降；如果长期摄入，会造成致癌、致畸、遗传毒性、肝细胞毒性、中毒性肾损害、生殖紊乱、免疫抑制的发生。

目前真菌毒素的检测方法主要有免疫学检测方法、高效液相色谱法、液相色谱-质谱/质谱法和毛细管电泳等。在前处理方面，常结合样品基质和目标真菌毒素的特性，采用常规固相萃取柱或免疫亲和柱富集、净化，或采用QuEChERS法净化，各有其优缺点。

但是当前新鲜果蔬中真菌毒素的检测报道较少，已报道的果蔬中真菌毒素的检测研究多为单一目标物或同一种属的几个真菌毒素的检测。由于果蔬在储藏过程中会出现不同种属真菌毒素的污染，因此开展不同种属真菌毒素的高通量检测研究势在必行。

发明内容

针对以上现有技术存在的缺点和不足之处，本发明的目的在于提供一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法。本发明采用HLB固相萃取和UHPLC-MS/MS检测方法，可以同时检测果蔬中7种典型真菌毒素AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT和OTA(其分子结构式图如附图1所示)。该检测方法前处理方法简单，可以简单、快速、准确的同时测定果蔬样品中的多种真菌毒素，回收率高、重现性好，能够满足痕量的分析要求。

本发明目的通过以下技术方案实现：

一种同时检测果蔬中7种典型真菌毒素的方法，包括如下步骤：

(1)样品前处理

将待测果蔬试样匀浆均质后用甲酸-乙腈混合溶剂超声提取，离心，取上清液干燥后加入甲酸水溶液混匀，得到试样溶液；将试样溶液用HLB固相萃取柱萃取，采用甲酸水溶液为淋洗液，甲醇为洗脱液，收集洗脱液干燥，固相残渣用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液复溶，过滤除去不溶物，得到待测液；

(2)标准溶液的配制

用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液配制含有7种典型真菌毒素AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT和OTA的混合标准溶液，备用；

(3)UHPLC-MS/MS(超高效液相色谱-二级质谱)检测

将步骤(2)的混合标准溶液采用UHPLC-MS/MS检测得到标准曲线，同样条件下检测步骤(1)的待测液，根据标准曲线计算待测液中7种典型真菌毒素AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT和OTA的含量。

优选地，步骤(1)中所述甲酸-乙腈混合溶剂中甲酸的体积百分含量为1％。

优选地，步骤(1)中所述超声的时间为0～30min，更优选超声的时间为20min。

优选地，步骤(1)中所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为1％。

优选地，步骤(1)中所述乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液中乙酸铵水溶液的浓度为10mmol/L，乙酸铵水溶液和乙腈的体积比为8:2。

优选地，步骤(3)中所述UHPLC检测的色谱柱为BEH C18色谱柱，流动相为乙腈和乙酸铵水溶液的混合洗脱剂；更优选UPLC检测条件如下：

色谱柱：BEH C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相：A：10mmol/L乙酸铵水溶液，B：乙腈；梯度洗脱程序：0.0～2.0min，15％B(vt.％)；2.0～6.0min，15％～60％B；6.0～7.0min，60％～90％B；7.0～8.0min，90％B；8.0～8.5min，90％～15％B；8.5～11.0min，15％B；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；柱温：30℃。

优选地，步骤(3)中所述MS检测条件如下：

电喷雾电离(ESI)正、负模式，检测模式：动态多反应监测(MRM)模式；ESI^-模式下：气帘气(Curtain gas)：40Psi；碰撞气(Collision gas)：8Psi；喷雾电压(ion SprayVoltage)：-3800V；雾化温度(Temperature)：550℃；雾化气(Ion Source Gas 1)：40Psi；辅助气(Ion Source Gas 2)：60Psi；

ESI⁺模式下：气帘气(Curtain gas)：40Psi；碰撞气(Collision gas)：8Psi；喷雾电压(ion Spray Voltage)：4000V；雾化温度(Temperature)：550℃；雾化气(Ion SourceGas 1)：40Psi；辅助气(Ion Source Gas 2)：60Psi。

相对于现有技术，本发明的检测方法具有如下优点及有益效果：

(1)样品前处理是真菌毒素分析过程中的关键环节，直接影响后续超高效液相色谱-串联质谱的分析结果，本发明真菌毒素的提取方法，可快速、高效提取样品中的真菌毒素，方法简单可靠，提取得到的样品能够满足分析要求。

(2)本发明方法设计合理，通过标准品的调谐实验，得到了最优化的真菌毒素的色谱质谱测定参数，如流动相、色谱、质谱条件等；本发明的方法适用于果蔬中4大类7种真菌毒素的同时测定，弥补了检测目标物单一的缺陷，本方法检测限低、检测准确度高、对于果蔬中真菌毒素的方法定量限可达到0.2～10.0μg/kg。

(3)由于二级质谱通过同时扫描待测无机阴离子的母离子分子离子峰和子离子分子离子峰的方式，达到针对待测无机阴离子准确定性的效果，而且能够有效排除假阳性。

附图说明

图1为7种典型真菌毒素AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT和OTA的分子结构式图。

图2为采用实施例2优化后的色谱条件下，7种典型真菌毒素的提取离子色谱图。

图3为实施例3中采用1％甲酸-乙腈(FA-AC)、0.1mol/L HCl-乙腈(HCl-ACN)、1％甲酸-乙酸乙酯(FA-EAC)、0.1mol/L HCl-乙酸乙酯(HCl-EAC)4种提取溶剂对阴性生菜样品进行加标实验的回收率结果对比图。

图4为实施例4中采用三种不同吸附材料(PSA、C18、GCB)在不同用量下QuEChERS净化实验结果图。

图5为实施例4中采用不同固相萃取柱和不同淋洗液条件下的固相萃取净化实验结果图。

图6为实施例6中草莓在不同温度条件(室温25℃、低温4℃)和不同保鲜膜(PVDC膜、PE膜和SPEEK膜)包装进行储藏条件下，AOH含量变化图。

图7为实施例6中草莓在不同温度条件(室温25℃、低温4℃)和不同保鲜膜(PVDC膜、PE膜和SPEEK膜)包装进行储藏条件下，AME含量变化图。

图8为实施例6中西红柿在不同温度条件(室温25℃、低温4℃)和不同保鲜膜(PVDC膜、PE膜和SPEEK膜)包装进行储藏条件下，TeA含量变化图。

具体实施方式

下面结合实施例及附图对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式不限于此。

实施例1

本实施例质谱条件的建立：

7种目标物中，TEN含有氨基，在ESI正模式下获得较高响应的[M+H]⁺峰；OTA含有苯基丙氨酸基团，在ESI正、负模式下均有响应，但在正模式下分子离子峰丰度更高，信号更稳定，故选择正模式检测；其余5种化合物均在ESI负模式下获得较高丰度的[M-H]^-峰。根据2002/657/EC，每种化合物均选择2个主要特征碎片离子作为定性与定量离子，通过优化碰撞电压等参数，使特征碎片离子强度达到最大，经优化的质谱条件见表1。结合本发明最终确定的色谱条件和7种待测物的色谱分离情况，本发明采用ESI正、负模式动态切换进行检测。

表1 7种真菌毒素的保留时间和质谱分析条件

^a定量离子对。

实施例2

本实施例色谱条件的建立：

实验以BEH C18(100mm×2.1mm,1.7μm)色谱柱作为分离柱，比较了乙腈-水、乙腈-0.1％甲酸水、乙腈-0.05％氨水、乙腈-10mmol/L乙酸铵、乙腈-10mmol/L碳酸氢铵5组流动相体系对目标物响应和分离效果的影响。结果显示，7种待测化合物在乙酸铵体系中峰形和整体响应最好；PAT在碳酸氢铵体系中未见色谱峰；氨水体系、甲酸水体系分别对ESI正、负模式检测的化合物有严重抑制，TeA在水、氨水和甲酸水体系中峰形都出现较严重拖尾，且PAT和DON在碱性条件下不稳定。因此，本发明最终选择乙腈-10mmol/L乙酸铵流动相体系。

进一步优化梯度洗脱程序，使各目标物获得理想的分离效果和响应值。7种待测目标物中，TeA(一元酸类化合物，pKa＝3.5)和PAT极性较大，且分子量较小，在反相色谱分离体系中的保留系数相对较小，需重点考虑延长保留时间，以避免极性大的、早流出的基质干扰；而AOH、TEN和AME极性较小，在反相色谱分离体系中的保留系数较大，需加快洗脱；OTA(弱酸性，苯基丙氨酸部分的pKa＝4.4，酚羟基pKa＝7.5)中等极性。经反复比较，最终确定流动相初始水相比例为85％，保持2min，以尽量延迟TeA和PAT的保留时间，并获得良好峰形和响应；然后逐步提高有机相乙腈的比例，使OTA流出后，再进一步将乙腈提高至90％，以快速洗脱极性较小的AOH、TEN和AME。本实施例最终确定优化的UPLC检测条件如下：

色谱柱：BEH C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相：A：10mmol/L乙酸铵水溶液，B：乙腈；梯度洗脱程序：0.0～2.0min，15％B(vt.％)；2.0～6.0min，15％～60％B；6.0～7.0min，60％～90％B；7.0～8.0min，90％B；8.0～8.5min，90％～15％B；8.5～11.0min，15％B；流速：0.3mL/min；进样量：5μL；柱温：30℃。在上述优化好的仪器条件下，7种典型真菌毒素的提取离子色谱图见附图2。

实施例3

本实施例提取条件的优化：

PAT易溶于水和乙酸乙酯、丙酮、乙醇等有机溶剂；OTA和DON可溶于甲醇、乙醇、乙腈、乙酸乙酯等极性有机溶剂；AOH、AME、TeA和TEN也能溶于大部分有机溶剂；TeA(pKa＝3.5)和OTA(pKa＝4.4)呈酸性，提取体系pH值低于pKa值时，有利于促进这2种待测物在有机相的分配。根据上述性质和“相似相溶”原则，并尽量减少其它基质组分的同提取出，实验对比了1％甲酸-乙腈(FA-ACN,体积比)、0.1mol/L HCl-乙腈(HCl-ACN)、1％甲酸-乙酸乙酯(FA-EAC,体积比)、0.1mol/L HCl-乙酸乙酯(HCl-EAC)4种提取体系的提取效果。

选取阴性生菜样品进行加标实验，考察不同提取溶剂的回收率情况。称取1g样品(12份，每种提取溶剂做3次平行实验)，其中甲酸-乙腈和甲酸-乙酸乙酯的用量为10mL，0.1mol/L HCl-乙腈或乙酸乙酯体系是依次加入3mL 0.1mol/L HCl和10mL乙腈或乙酸乙酯，萃取后通过盐析(NaCl)分层。4种提取溶剂的回收率情况如附图3所示，可见1％甲酸-乙腈(体积比)和1％甲酸-乙酸乙酯(体积比)的回收率整体较好。但实验发现，由于叶绿素的脂溶性较好，乙酸乙酯可以共提取出大量的叶绿素，提取液呈鲜绿色；叶绿素在乙腈中的溶解度较小，提取液呈黄绿色。因此，本发明最终确定以1％甲酸-乙腈(体积比)作为提取溶剂。

超声可以促进果蔬中的真菌毒素向提取溶剂迁移。实验对比了不同超声时间(0、10、15、20、25和30min)对提取回收率的影响。结果表明，不经超声提取(0min)，AME、AOH、OTA和TeA 4种待测物的回收率只在35％～70％之间，随着超声时间的延长，4种待测物的回收率逐步增加，在20min时基本达到平衡，回收率增至80％～95％，超声除了提高提取效率外，还可能破坏了基质对这4种待测物的吸附作用；PAT、DON和TEN这3种待测物跟超声时间相关性不大。因此，本发明最优的超声提取时间为20min。

实施例4

本实施例净化条件的优化：

由于提取液中含有叶绿素、黄酮类等共提取杂质，污染检测设备和产生基质效应(DON出现基质增强，AME和TeA呈基质抑制)，需要进一步净化。本实施例对比了QuEChERS净化方法和固相萃取净化方法。

QuEChERS净化实验是分别采用PSA、C18和GCB进行单因素实验，以阴性蔬菜提取液(10mmol/L乙酸铵溶液:乙腈＝8:2，体积比)配制基质标准溶液，分别以PSA(50、100和200mg)、GCB(20、30和40mg)和C18(50、100和200mg)对1.0mL基质标准溶液进行涡旋净化，考察净化效果和回收率情况。

QuEChERS净化实验结果如附图4所示，PSA、C18和GCB三种吸附材料均没有很好的祛除色素，净化后溶液呈茶褐色，而且，PSA对OTA和AOH的吸附作用较强，随着PSA用量的增加，回收率约由30％下降至10％；C18对AME基本全部吸附，对TEN、OTA和AOH有较强的吸附，随着C18用量的增加，回收率约由40％下降至10％；GCB对TEN、OTA、AOH和AME基本全部吸附。

固相萃取净化实验比较了HLB固相萃取柱(60mg/3mL，Waters公司)和C18ODS固相萃取柱(200mg/3mL，Agilent公司)对1.0mL基质标准溶液进行净化，HLB和C18先依次用5mL甲醇和3mL水活化，然后分别以1％甲酸水溶液(1％FA)和10mmol/L乙酸铵溶液(AmAc)作为每一种固相萃取柱的平衡液(3mL)及上样后的淋洗液(3mL)，最后以6mL甲醇洗脱。

固相萃取净化实验结果如附图5所示，2种柱净化后溶液较澄清；HLB柱的净化效果整体较好，其中HLB-1％甲酸水溶液(HLB-1％FA)的回收率最高，在85％～108％之间；采用C18柱净化，DON的回收率为0，TeA、PAT、AME和AOH的回收率在18％～68％之间。综上，本发明的方法最终选择HLB固相萃取柱净化，且采用1％甲酸水溶液作为萃取柱的平衡液和上样后的淋洗液。

实施例5

本实施例对新鲜果蔬中7种真菌毒素的检测：

(1)样品提取和净化条件

已称取1g切碎后的样品于50mL聚四氟乙烯离心管中，加入5mL 1％甲酸-乙腈(体积比)，匀浆，再用5mL 1％甲酸-乙腈分2次清洗匀浆机刀头，一并倒入离心管中，涡旋振荡2min，超声提取20min，取出后涡旋混匀，4000r/min离心5min，吸取上清液于15mL玻璃氮吹管中，40℃水浴中氮气吹至近干，加入1mL 1％甲酸水，混匀。然后倾入已预先活化平衡的HLB固相萃取柱，待试样溶液全部流出，用3mL 1％甲酸水淋洗固相萃取柱，用6mL甲醇洗脱，收集洗脱液于氮吹管中，置于40℃水浴中氮气吹至近干，用10mmol/L乙酸铵溶液:乙腈＝8:2(体积比)复溶残渣并定容至1.0mL，过0.22μm PFTE滤膜后为待测液。

(2)色谱和质谱条件

色谱柱：BEH C18色谱柱(100mm×2.1mm，1.7μm)；流动相：A.10mmol/L乙酸铵溶液，B.乙腈，梯度洗脱程序：0.0～2.0min，15％B；2.0～6.0min，15％～60％B；6.0～7.0min，60％～90％B；7.0～8.0min，90％B；8.0～8.5min，90％～15％B；8.5～11.0min，15％B。流速：0.3mL/min；进样量：5μL；柱温：30℃。7种待测物的保留时间见表1。

质谱条件：电喷雾电离(ESI)正、负模式，检测模式：动态多反应监测(MRM)模式。ESI^-模式下：气帘气：40Psi；碰撞气：8Psi；喷雾电压：-3800V；雾化温度：550℃；雾化气：40Psi；辅助气：60Psi。ESI⁺模式下：气帘气：40Psi；碰撞气：8Psi；喷雾电压：4000V；雾化温度：550℃；雾化气：40Psi；辅助气：60Psi。7种待测物监测离子对(m/z)及碰撞能等参数见表1，每个离子对的驻留时间均为50ms。

(3)选择性和确定性

取阴性果蔬试样20个，按本发明的样品前处理方法和仪器条件进行前处理和检测，考察样品中其他组分对待测物的测定是否存在干扰。结果表明，由于三重四极杆质谱具有高选择性，试样溶液中的共存物质对待测物的定性定量无干扰。

(4)线性关系、检出限和基质效应

以纯溶剂配制的系列纯溶剂标准溶液，按本实验仪器条件测定，以待测物定量离子对峰面积y为纵坐标，以相应的待测物质量浓度x(μg/L)为横坐标进行线性回归，绘制相应的纯溶剂标准曲线。对阴性试样进行加标，经前处理后的样液进行检测，计算检出限方法定量限。7种待测物的线性回归方程、相关系数、仪器检出限、方法检出限和方法定量限见表2。可见，各目标物在相应的浓度范围内线性关系良好，相关系数均大于0.9990；MLOQ为0.2-10.0μg/kg。

将20个阴性果蔬样品混合，按本发明方法前处理后获得的基质溶液配制系列基质校准溶液，与上述配制的系列纯溶剂标准溶液浓度相同，均按本实验仪器条件进行检测，分别绘制标准曲线(n＝3)，然后计算基质效应。实验结果见表2，七种目标真菌毒素的基质效应在88％～116％之间，基本可以忽略基质效应。

表2

(5)方法回收率、准确度和精密度

方法回收率、准确度和精密度通过阴性样品的添加回收试验(n＝6)进行考察。即分别在阴性试样中添加3个浓度水平(均为1倍定量限、2倍定量限和10倍定量限)的混合标准溶液，按本实验条件进行样品处理和测定，平行6次试验，取中间添加水平连续测定5天，计算回收率、日内精密度(n＝6)和日间精密度(n＝5)，结果见表3。可见，在3个添加水平，日内平均回收率为81.1％～116％，日内精密度(n＝6)在3.0％～6.2％之间；日间平均回收率为83.3％～101％，日间精密度(n＝5)为4.2％～6.1％。表明本发明的方法具有较高的回收率，良好的准确度和精密度。

表3

(6)实际果蔬样品的检测

使用本发明方法测定了30份生鲜果蔬样品，包括6个圣女果样品、6个生菜样品、6个上海青样品、6个草莓样品和6个西红柿样品。结果均未检出7种真菌毒素。

实施例6

本实施例对果蔬在储藏过程中7种真菌毒素的监测：

果蔬经过不同温度条件(室温25℃、低温4℃)和不同保鲜膜(PVDC膜、PE膜和SPEEK膜)包装进行储藏，每隔一定时间取出样品，利用本发明的方法对其中的真菌毒素含量进行实时监测。其中草莓在储藏一段时间后，AOH(附图6)和AME(附图7)含量不断升高；西红柿在储藏过程中，TeA含量不断升高(见附图8)。

上述实施例为本发明较佳的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其它的任何未背离本发明的精神实质与原理下所作的改变、修饰、替代、组合、简化，均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。

Claims (4)

1.一种同时检测果蔬中 7 种典型真菌毒素的方法，其特征在于包括如下步骤：

（1）样品前处理

将待测果蔬试样匀浆均质后用甲酸-乙腈混合溶剂超声提取，离心，取上清液干燥后加入甲酸水溶液混匀，得到试样溶液；将试样溶液用 HLB 固相萃取柱萃取，采用甲酸水溶液为淋洗液，甲醇为洗脱液，收集洗脱液干燥，固相残渣 用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液复溶，过滤除去不溶物，得到待测液；

（2）标准溶液的配制

用乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液配制含有 7 种典型真菌毒素 AOH、AME、 TeA、TEN、DON、PAT 和 OTA 的混合标准溶液，备用；

（3）UHPLC-MS/MS 检测

将步骤（2）的混合标准溶液采用 UHPLC-MS/MS 检测得到标准曲线，同样条件下检测步骤（1）的待测液，根据标准曲线计算待测液中 7 种典型真菌毒素 AOH、AME、TeA、TEN、DON、PAT 和 OTA 的含量；

步骤（1）中所述甲酸-乙腈混合溶剂中甲酸的体积百分含量为1%；

步骤（1）中所述甲酸水溶液中甲酸的体积百分含量为1%；

步骤（3）中所述 UHPLC 检测条件如下：

色谱柱：BEH C18 色谱柱；流动相：A：10 mmol/L 乙酸铵水溶液，B：乙 腈；梯度洗脱程序：0.0~2.0 min，15% B；2.0~6.0 min，15%~60% B；6.0~7.0 min， 60%~90% B；7.0~8.0min，90% B；8.0~8.5 min，90%~15% B；8.5~11.0 min，

15% B；流速：0.3 mL/min；进样量：5 μL；柱温：30℃；

步骤（3）中所述 MS 检测条件如下：

电喷雾电离正、负模式，检测模式：动态多反应监测模式；ESI-模式下，气 帘气：40Psi，碰撞气：8 Psi，喷雾电压：-3800 V，雾化温度：550℃，雾化气： 40 Psi，辅助气：60Psi；ESI+模式下，气帘气：40 Psi，碰撞气：8 Psi，喷雾电 压：4000 V，雾化温度：550℃，雾化气：40 Psi，辅助气：60 Psi。

2.根据权利要求 1 所述的一种同时检测果蔬中 7 种典型真菌毒素的方法， 其特征在于：步骤（1）中所述超声的时间为0~30min。

3.根据权利要求 1 所述的一种同时检测果蔬中 7 种典型真菌毒素的方法， 其特征在于：步骤（1）中所述乙酸铵水溶液和乙腈的混合溶液中乙酸铵水溶液 的浓度为 10mmol/L，乙酸铵水溶液和乙腈的体积比为 8:2。

4.根据权利要求 1 所述的一种同时检测果蔬中 7 种典型真菌毒素的方法， 其特征在于：步骤（1）中所述干燥为采用氮气吹至近干。

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