CN104614461A

CN104614461A - 感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法

Info

Publication number: CN104614461A
Application number: CN201510066348.5A
Authority: CN
Inventors: 文君; 洪斌; 韩风; 崔生法; 肖亚宝
Original assignee: ZHEJIANG TAILISON PHARMACEUTICAL CO Ltd
Current assignee: ZHEJIANG TAILISON PHARMACEUTICAL CO Ltd
Priority date: 2015-02-09
Filing date: 2015-02-09
Publication date: 2015-05-13

Abstract

本发明公开了一种感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，采用反相高效液相色谱法测定，以盐酸吗啉胍为对照品，以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为80:20的三乙胺-乙腈为流动相，其中三乙胺的pH值用磷酸调节至3.0。本发明具有专属性强、精密度和重复性好、线性保持和稳定性强等优点，可以对感冒清胶囊中盐酸吗啉胍的含量进行有效检测，以更好地控制产品的质量，确保该药物制剂的安全、有效。

Description

感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法

技术领域

本发明涉及到一种药物制剂中有效成份的含量检测方法，具体地说是一种治疗感冒的中药胶囊制剂中盐酸吗啉胍的含量检测方法，属于药品质量控制技术领域。

背景技术

感冒清胶囊是一种治疗感冒的中药胶囊制剂，具有疏风解表，清热解毒之功效，临床用于风热感冒、发烧、头痛、鼻塞流涕、喷嚏、咽喉肿痛、全身酸痛等症，处方由南板蓝根、大青叶等6味中药和对乙酰氨基酚、盐酸吗啉胍、马来酸氯苯那敏三种化学药组成，其具体的制备方法及用途已记载于国家药品标准修订批件(2002ZFB0245)所附质量标准中。感冒清胶囊中所含的盐酸吗啉胍能抑制病毒的DNA和RNA聚合酶，从而抑制病毒繁殖，临床用于流感病毒及疱疹病毒感染。感冒清胶囊现行质量标准仅规定了对乙酰氨基酚的含量测定，并未规定对盐酸吗啉胍的含量测定。而关于盐酸吗啉胍的含量检测方法虽有一些相关文献报道，比如HPLC法同时测定感冒清胶囊中三组分的含量、高效液相色谱法同时测定感冒清胶囊中两组分的含量等，包括公开号为CN103091443A的中国发明专利申请公开了一种“混合制剂中盐酸吗啉胍含量和乙酸铜含量的检测方法”等，其采用的流动相有乙酸钠‐乙酸、甲醇‐水‐冰乙酸等，但这些检测方法的分离度均不够理想，影响分析结果的准确性，均未被国家标准收载。为了更好地控制感冒清胶囊的质量，保证临床用药的安全、有效，有必要建立一种可行的盐酸吗啉胍的含量检测方法以更好地控制感冒清胶囊的质量。

发明内容

本发明所要解决的技术问题在于提出一种感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，以更好地控制产品的质量，确保该药物制剂的安全、有效。

为解决上述技术问题，本发明感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法用反相高效液相色谱法测定，它以盐酸吗啉胍为对照品，以体积比为80:20的三乙胺-乙腈为流动相，所述三乙胺的pH值用磷酸调节至3.0。

上述感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，所述高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为80:20的0.05mol/L三乙胺-乙腈为流动相，检测波长237nm，理论板数按盐酸吗啉胍峰计算不低于1200。

上述感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，它包括如下操作步骤：

Ⅰ.对照品溶液的制备：称取在105℃温度条件下干燥至恒重的盐酸吗啉胍对照品12mg，置50mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至50mL刻度线，摇匀，即得(每1mL中含盐酸吗啉胍0.21mg)；

Ⅱ.供试品溶液的制备：取被测试品细粉适量(约相当于盐酸吗啉胍12mg)，称定，置具塞锥形瓶中，加入流动相50mL，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

Ⅲ液相色谱测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

本发明由于采用了上述技术方案，它通过采用与现有技术不同的流动相和pH调节剂，不同的进样体积和定量限(检测范围)以及不同的供试液的制备方法(包括采用了超声处理技术，使样品能完全溶解)，具有专属性强、精密度和重复性好、线性保持和稳定性强等优点，可以对感冒清胶囊中盐酸吗啉胍的含量进行有效检测，以更好地控制产品的质量，确保该药物制剂的安全、有效。

具体实施方式

本发明感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法用反相高效液相色谱法测定，它以盐酸吗啉胍为对照品，以三乙胺(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈(体积比为80:20)为流动相。其中高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为80:20的0.05mol/L三乙胺(用磷酸调节pH至3.0)-乙腈为流动相，检测波长237nm，理论板数按盐酸吗啉胍峰计算不低于1200。具体操作步骤如下：

1)对照品溶液的制备：称取在105℃温度条件下干燥至恒重的盐酸吗啉胍对照品12mg，置50mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至50mL刻度线，摇匀，即得(每1mL中含盐酸吗啉胍0.21mg)；

2)供试品溶液的制备：取被测试品细粉适量(约相当于盐酸吗啉胍12mg)，称定，置具塞锥形瓶中，加入流动相50mL，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

3)液相色谱测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。

为证明本发明方法的效果及较佳条件和参数选择，发明人对含量检测方法的可行性进行了方法学验证，具体实验如下：

1.样品、对照品来源，仪器与试剂

感冒清胶囊样品：浙江泰利森药业有限公司

盐酸吗啉胍对照品：中国食品药品检定研究院

仪器：岛津UV-2550紫外分光光度计，岛津高效液相色谱仪(LC-10ATvp泵，SPD-10Avp紫外检测器，依利特AS120自动进样器，浙江大学N2000色谱工作站)。

试剂：乙腈(色谱纯)，甲醇(色谱纯)，磷酸(分析纯)，三乙胺(分析纯)。

2.检测波长的确定

取市售不同厂家的盐酸吗啉胍原料各适量，分别溶于水、0.05mol/L三乙胺(磷酸调节pH至3.0)-乙腈(体积比为60:40)、0.05mol/L三乙胺(磷酸调节pH至3.0)-乙腈(体积比为75:25)三种溶液中，配成浓度约为5ug/mL的溶液，在200～300nm波长范围内进行UV扫描，结果其最大吸收波长均为237nm，故本方法中测定波长选择237nm。

3.流动相选择

色谱柱：GL Inertsil ODS-3 5μm 4.6×250mm S/N.1II86137

柱温：30℃，保护柱：汉邦，流速：0.8mL/min，进样体积：10uL，检测波长：237nm

流动相1：0.05mol/L三乙胺(磷酸调节pH至3.0)-乙腈(体积比为60:40)

流动相2：0.05mol/L三乙胺(磷酸调节pH至3.0)-甲醇(体积比为75:25)

称取盐酸吗啉胍对照品约12mg溶于50mL流动相1中，作为盐酸吗啉胍对照溶液。称取阴性对照、感冒清胶囊样品约0.25g分别溶于50mL流动相1中，超声15min，过滤，取续滤液作为阴性对照溶液和感冒清胶囊样品溶液。以流动相1为流动相按上述色谱条件进样，记录色谱图至20min。

称取盐酸吗啉胍对照品约12mg溶于50mL流动相2中，作为盐酸吗啉胍对照溶液。称取阴性对照、感冒清胶囊样品约0.25g分别溶于50mL流动相2中，超声15min，过滤，取续滤液作为阴性对照溶液和感冒清胶囊样品溶液。以流动相2为流动相按上述色谱条件进样，记录色谱图至20min。

比较两个流动相体系下的色谱图，采用流动相1时主峰与辅料峰的分离效果较好，调节有机相比例，在乙腈为20％时分离度能达到1.5以上，故确定流动相体系为0.05mol/L三乙胺(磷酸调节pH至3.0)-乙腈(体积比为80:20)。

4.供试品制备方法的确定

4.1对照品溶液(及供试品)溶液浓度的选择

根据感冒清胶囊的生产工艺，参考感冒清胶囊国家药品标准中对乙酰氨基酚的含量测定法，对照品溶液定为12mg至50mL流动相中，作为对照品溶液；供试品则称取相应量至50mL流动相中，超声15min，过滤，取续滤液作为供试品溶液。

4.2超声时间考察

称取4份等量(0.2536g～0.2541g)的感冒清胶囊样品，溶于50mL流动相中，分别超声5min、10min、15min、20min，过滤，取续滤液作为供试品溶液，按确定的色谱条件进样，记录色谱图至20min。超声15min后主峰面积不再增加，故定超声时间为15min。

5.专属性

按上述确定的方法制备盐酸吗啉胍对照溶液、阴性对照溶液、感冒清胶囊样品溶液各一份。按确定的色谱条件进样，记录色谱图至20min。结果表明，制剂其他物料对盐酸吗啉胍含量测定基本无干扰，方法专属性强。

6.进样精密度

在进行重复性实验和准确度实验时，盐酸吗啉胍对照品溶液1连续进样5针，计算其峰面积的RSD，结果均小于0.1％，方法精密度良好。峰面积检测结果见下表。

重复性项下的进样精密度：

序号	1	2	6	4	5	RSD％
							峰面积	14361495	14359968	14370748	14372761	14366047	0.04

准确度项下的进样精密度：

序号	1	2	6	4	5	RSD％
							峰面积	14251383	14258330	14275288	14276145	14280921	0.09

7.重复性

按确定的检测方法对同一批样品连续测定六次，峰面积的RSD为0.48％，小于2％的标准，显示方法重复性良好。结果见下表。

序号	1	2	3	4	5	6	平均	RSD％
									含量％	4.69	4.73	4.73	4.73	4.68	4.70	4.71	0.48

8.回收率

取盐酸吗啉胍对照品适量，配成三个浓度的中间溶液(0.09690mg/mL、0.11900mg/mL、0.14375mg/mL)。取已测得含量的感冒清胶囊样品(含量为4.71％)适量，按供试品溶液制备方法用上述中间溶液溶解，每个浓度三份，制成80％、100％、120％加标溶液。按含量测定方法进行测定，3个浓度9份样品的平均回收率100.41％，RSD为0.99％，结果显示方法准确度符合要求。检测结果见下表。

9.线性

配制检测所需浓度的盐酸吗啉胍对照品溶液(240.4ug/mL)，按确定的色谱条件进样，调整进样量使其在50％‐150％范围内有较均匀的6个线性点，结果见下表。

进样量(uL)	5	7	9	10	12	15
							峰面积	6662587	9348795	12058541	13376279	15899914.5	19321822

线性方程：y＝1270307.75789x+500032.67368，R²＝0.99846，浓度范围120.2ug/mL～360.6ug/mL。

将上述对照品溶液稀释为1/50(4.808ug/mL)，按确定的色谱条件进样，调整进样量使其在50％‐200％范围内有较均匀的7个线性点，结果见下表。

线性方程：y＝28015.61716x‐1814.44834，R2＝0.99987，浓度范围2.404ug/mL～9.616ug/mL。

结果显示，高低浓度时线性均保持良好。

10.溶液稳定性

按已确定的方法制备对照品溶液和供试品溶液各一份，在0、2、6、8及12h分别进样，记录峰面积，峰面积RSD均小于0.1％，显示溶液12小时内保持稳定。结果见下表。

时间(h)	0	2	4	8	12	RSD％
							对照品	13623521	13615418.5	13619292.5	13638687	13630371.5	0.07
供试品	13707771.5	13076801.5	13080313.5	13083347.5	13093016	0.05

Claims

1.感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，用反相高效液相色谱法测定，其特征在于，它以盐酸吗啉胍为对照品，以体积比为80:20的三乙胺-乙腈为流动相，所述三乙胺的pH值用磷酸调节至3.0。

2.如权利要求1所述的感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，其特征在于，所述高效液相色谱条件为：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以体积比为80:20的0.05mol/L三乙胺-乙腈为流动相，检测波长237nm，理论板数按盐酸吗啉胍峰计算不低于1200。

3.如权利要求1或2所述的感冒清胶囊中盐酸吗啉胍含量的检测方法，其特征在于，它包括如下操作步骤：

Ⅰ. 对照品溶液的制备：称取在105℃温度条件下干燥至恒重的盐酸吗啉胍对照品12mg，置50mL量瓶中，用流动相溶解并稀释至50mL刻度线，摇匀，即得；

Ⅱ. 供试品溶液的制备：取约相当于盐酸吗啉胍12mg的被测试品细粉适量，称定，置具塞锥形瓶中，加入流动相50mL，密塞，称定重量，超声处理15分钟，放冷，再称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

Ⅲ.液相色谱测定：分别吸取对照品溶液与供试品溶液各10μL，注入液相色谱仪，测定，即得。