CN105092723B - 一种石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法，基于高效液相色谱谱技术测定石柑子中阿魏酰酪胺成分的含量。该方法属于快速测定方法，方法简单、准确，灵敏度高，精密度、稳定性好，非常有利于在制药过程中石柑子药材快速质量控制中的应用。
Description
技术领域
本发明涉及中药质量检测技术领域，具体涉及一种石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法。
背景技术
石柑子是天南星科石柑属植物石柑子Pothos chinensis(Raf.)Merr.的干燥全草，别名葫芦钻、柚子枫、石蜈蚣、爬崖香等，是瑶族地区治疗跌打损伤、风湿骨痛的常用药之一。然而由于瑶族无自身文字，瑶族医药知识的继承和传播完全靠耳口相传，导致瑶药在使用过程中存在同名异物和同物异名的混乱状况，临床用药的安全性和有效性难以得到保证，同时也给瑶药进一步的开发利用和质量标准的制定带来了巨大的困难。目前，石柑子仅收载于《全国中草药汇编》和各地方植物志。
石柑子作为瑶族常用中药，目前仅以性状鉴别作为鉴别依据，缺乏量化指标和手段，方法十分粗浅，不仅缺乏专属性，且也难以对药材的真伪和优劣进行准确的评价。
发明内容
本发明的目的在于提供石柑子中阿魏酰酪胺的含量快速测定方法，利用高效液相色谱技术对石柑子中阿魏酰酪胺成分进行含量测定，旨在建立一种石柑子的质量评价方法，该方法满足制药过程中石柑子药材质量控制的要求。
本发明为实现上述目的所提供的技术方案是：
一种石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法，其特征在于该方法包括以下步骤和条件：
(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4％磷酸溶液(35∶65)为流动相；检测波长为318nm；
(2)对照品溶液的制备：取阿魏酰酪胺对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含143.6μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得；
(5)对阿魏酰酪胺对照品溶液的线性范围的考察及精密度、稳定性、重复性、加样回收试验：
(51)线性范围的考察：精密吸取阿魏酰酪胺对照品溶液1，2，4，6，8，10mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为14.36，28.72，57.44，86.16，114.88，143.60μg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪中，按照步骤(1)色谱条件进行测定；以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以进样量(ng)为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程Y＝3.32×102X+9.46×102，r＝0.99998，结果表明牡荆苷在143.6～1436.0ng范围内，其进样量与峰面积呈良好线性关系；
(52)精密度试验：精密吸取同一对照品溶液(阿魏酰酪胺71.8μg/mL)10μL，注入液相色谱仪，按照色谱条件重复进样6次，记录色谱图，结果表明，阿魏酰酪胺的峰面积值RSD为0.29％，表明仪器稳定，精密度良好；
(53)稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液(S9)10μL，分别于0，1，2，4，8，12，24h注入液相色谱仪，按照色谱条件进行测定，记录色谱图，结果表明，阿魏酰酪胺的峰面积值RSD为0.24％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好；
(54)重复性试验：取同一批石柑子样品(S9)，平行精密称取6份，按照步骤(3)方法制备供试品溶液，按照色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品中阿魏酰酪胺的含量，结果表明阿魏酰酪胺的平均含量为，RSD为0.85％。表明此方法重现性良好；
(55)加样回收试验：取同一批含阿魏酰酪胺0.065％的石柑子样品(S9)9份，每份1g，精密称定，分别精密加入一定量的阿魏酰酪胺对照品溶液25mL，按照步骤(3)方法制备供试品溶液，按照色谱条件进行测定，计算回收率，结果表明，阿魏酰酪胺的平均回收率为99.53％，RSD为1.31％(n＝9)，表明本测定方法回收率良好，准确度较高。
本发明的优点在于：本发明的测定方法简单、快速、准确、灵敏度高、精密度、稳定性好，可测定石柑子样品中阿魏酰酪胺的含量，可用于制药过程中石柑子药材质量控制
下面结合附图与具体实施方式，对本发明进一步详细说明。
附图说明
图1，阿魏酰酪胺全波长扫描图；
图2，石柑子中阿魏酰酪胺含量测定HPLC色谱图；
图3，阿魏酰酪胺标准曲线。
具体实施方式
本发明提供的石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法，该方法包括以下步骤和条件：
(1)色谱条件：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.4％磷酸溶液(35∶65)为流动相；检测波长为318nm；理论板数按阿魏酰酪胺峰计算应不低于1500；
(2)对照品溶液的制备：取阿魏酰酪胺对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含143.6μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取本品粉末(过四号筛)约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理(功率250W，频率40kHz)30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得，并记录色谱图，见图2(A：阿魏酰酪胺对照品；B：供试品)。
其中，仪器选用Waters e2695-2489型高效液相色谱仪(美国)：PAD检测器，四元梯度泵，Empower2数据处理软件系统；Millipore Advantage A10超纯水系统(美国)；MettlerToledo XS205DU型电子分析天平(瑞士)；KQ5200DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；HH-8型数显恒温水浴锅(金坛市科析仪器有限公司)。
试剂选用阿魏酰酪胺(自制，纯度≥99.5％)；液相用甲醇为色谱纯(Merck)；液相用水为超纯水；提取用水为广东省第二中医院制剂室自制纯化水；其余试剂均为分析纯。
步骤(1)中，色谱条件的建立：采用PDA二极管阵列检测器，对阿魏酰酪胺对照品进行全波长扫描。结果表明，阿魏酰酪胺在318nm有最大吸收，见图1。故选择318nm作为含量测定的检测波长。
色谱柱：Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱(4.6×250mm，5μm)；流动相：甲醇-0.4％磷酸(35∶65)；检测波长：318nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃。
所述石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法还包括以下步骤：
(51)线性范围的考察：精密吸取阿魏酰酪胺对照品溶液1，2，4，6，8，10mL，分别置于10mL量瓶中，加甲醇定容至刻度，摇匀，制成浓度分别为14.36，28.72，57.44，86.16，114.88，143.60μg/mL的对照品溶液。精密吸取上述对照品溶液各10μL，注入液相色谱仪中，按照步骤(1)下色谱条件进行测定。以峰面积积分值为纵坐标(Y)，以进样量(ng)为横坐标(X)进行线性回归，得回归方程Y＝3.32×102X+9.46×102，r＝0.99998。结果表明牡荆苷在143.6～1436.0ng范围内，其进样量与峰面积呈良好线性关系。参见表1，图3。
表1阿魏酰酪胺线性关系考察结果
(52)精密度试验：精密吸取同一对照品溶液(阿魏酰酪胺71.8μg/mL)10μL，注入液相色谱仪，按照色谱条件重复进样6次，记录色谱图。结果表明，阿魏酰酪胺的峰面积值RSD为0.29％，表明仪器稳定，精密度良好。见表2。
表2精密度试验结果
(53)稳定性试验：精密吸取同一供试品溶液(S9)10μL，分别于0，1，2，4，8，12，24h注入液相色谱仪，按照色谱条件进行测定，记录色谱图。结果表明，阿魏酰酪胺的峰面积值RSD为0.24％，表明供试品溶液在24h内稳定性良好。见表3。
表3稳定性试验结果
(54)重复性试验：取同一批石柑子样品(S9)，平行精密称取6份，按照步骤(3)方法制备供试品溶液，按照步骤(1)下色谱条件进行测定，记录色谱图，计算供试品中阿魏酰酪胺的含量。结果表明阿魏酰酪胺的平均含量为，RSD为0.85％。表明此方法重现性良好。见表4。
表4重复性试验结果
(55)加样回收试验：取同一批已知含量(含阿魏酰酪胺0.065％)的石柑子样品(S9)9份，每份1g，精密称定，分别精密加入一定量的阿魏酰酪胺对照品溶液25mL，按照步骤(3)方法制备供试品溶液，按照步骤(1)色谱条件进行测定，计算回收率。结果表明，阿魏酰酪胺的平均回收率为99.53％，RSD为1.31％(n＝9)。表明本测定方法回收率良好，准确度较高。结果见表5。
表5加样回收率试验结果
样品测定结果：取12批石柑子样品粉末(过四号筛)，按照步骤(3)方法制备供试品溶液，按照步骤(1)色谱条件进行测定，记录色谱图，并计算样品中阿魏酰酪胺的含量，结果见表6。
表6 12批石柑子含量测定结果
由以上实验结果可以得出，本发明的测定方法简单、快速、准确、灵敏度高、精密度、稳定性好，可测定石柑子样品中阿魏酰酪胺的含量，可用于制药过程中石柑子药材质量控制。
已经根据上述优选实施例对本发明作出的描述。应当理解的是前面的描述和实施例仅为了举例说明本发明。在不偏离本发明的精神和范围的前提下，本领域技术人员可以设计出本发明的多种替换方案和改进方案，其均应被理解为在本发明的保护范围之内。
Claims (1)
1.一种石柑子中阿魏酰酪胺含量的快速测定方法，其特征在于，该方法包括以下步骤和条件：
(1)色谱条件：采用PDA二极管阵列检测器，对阿魏酰酪胺对照品进行全波长扫描；阿魏酰酪胺在318nm有最大吸收，故选择318nm作为含量测定的检测波长；
色谱柱：Thermo ODS-2 Hypersil色谱柱的规格为4.6×250mm，5μm；流动相：甲醇-0.4％磷酸的比例为35∶65；检测波长：318nm；流速：1.0mL/min；柱温：25℃；
(2)对照品溶液的制备：取阿魏酰酪胺对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1mL含143.6μg的溶液，即得；
(3)供试品溶液的制备：取本品粉末约2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25mL，密塞，称定重量，超声处理30分钟，放冷，再称定重量，用甲醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；
(4)含量测定：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。
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