CN110133153A - 一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及有效成分测定技术领域，具体涉及一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法。采用本发明提供的方法能够实现同时测定绿原酸、木犀草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷、木犀草素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷、3,5‑二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素‑7‑O‑β‑D‑葡萄糖苷的含量。本发明提供的方法分离度好，各组分的分离均能达到基线分离，且线性范围大、灵敏度高、重复性好，加样回收率试验中，5种化学成分的加样回收率均在95％～105％范围内，均符合规定。因此，本发明提供的方法为以此5种化学成分为质量检测指标的菊花药材提供了有效的检测手段，能够较全面地反应菊花药材的质量特征。

Description

一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法
技术领域
本发明涉及有效成分测定技术领域，具体涉及一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法。
背景技术
菊花为菊科植物菊(Chrysanthemum morifolium Ramat.)的干燥头状花序，味甘、苦，微寒，具有散风清热、平肝明目、清热解毒之功效，可用于目赤肿痛、眼目昏花、风热感冒、头痛眩晕等症。菊花主要化学成分为黄酮类化合物、挥发油类化合物、有机酸类化合物、多糖类化合物和氨基酸等。目前，菊花药材化学成分及质量研究文献报道较少，有必要建立菊花药材中指标成分含量的测定方法，以较全面地反应菊花药材的质量特征。
发明内容
本发明的目的在于提供一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法，该方法分离度好、灵敏度高、重复性高、回收率较高，能够较全面地反应菊花药材的质量特征。
本发明提供了一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法，所述5种化学成分为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，包括以下步骤：
采用甲醇水溶液对菊花药材进行提取，得到提取液；
将所述提取液进行高效液相色谱分析，根据绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量；其中，所述高效液相色谱的操作条件包括：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％。
优选地，所述菊花药材为福白菊药材。
优选地，所述甲醇水溶液的体积浓度为65～75％。
优选地，所述甲醇水溶液与菊花药材的用量比为(20～30)mL：0.25g。
优选地，所述提取在超声条件下进行。
优选地，所述超声的频率为65～75kHz。
优选地，所述提取的时间为35～45min。
优选地，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min。
优选地，进行所述高效液相色谱分析时采用的检测波长为348nm。
优选地，进行所述高效液相色谱分析时采用的色谱柱为Shim-packVP-ODS色谱柱，长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm。
优选地，进行所述高效液相色谱分析时的柱温为25～35℃。
本发明提供了一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法，所述5种化学成分为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，首先采用甲醇水溶液对菊花药材进行提取，得到提取液；然后将所述提取液在特定流动相和梯度洗脱程序下进行高效液相色谱分析，根据上述5种化学成分的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中5种化学成分的含量。采用本发明提供的方法能够实现同时测定绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量。本发明提供的方法分离度好，各组分的分离均能达到基线分离，且线性范围大、灵敏度高、重复性好，加样回收率试验中，5种化学成分的加样回收率均在95％～105％范围内，均符合规定。因此，本发明提供的方法为以此5种化学成分为质量检测指标的菊花药材提供了有效的检测手段，能够较全面地反应菊花药材的质量特征。
附图说明
图1为供试品溶液的液相色谱图。
具体实施方式
本发明提供了一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法，所述5种化学成分为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，包括以下步骤：
采用甲醇水溶液对菊花药材进行提取，得到提取液；
将所述提取液进行高效液相色谱分析，根据绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量；其中，所述高效液相色谱的操作条件包括：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％。
在本发明中，所述绿原酸(1)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷(2)、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷(3)、3,5-二咖啡酰基奎宁酸(4)和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷(5)的结构式具体如下所示：
本发明对菊花药材中上述5种化学成分进行测定，能够较全面地反应菊花药材的质量特征，在菊花药材存放过程中，木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷和木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷会水解为木犀草苷，存放时间越久，这2种化学成分含量越低；与通过测定木犀草苷含量反映菊花药材的质量特征相比，本发明提供的方法可以准确测定木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的含量，能够大致判断菊花药材的新鲜程度及存放时间。
本发明采用甲醇水溶液对菊花药材进行提取，得到提取液。在本发明中，所述菊花药材具体是指菊花的头状花序，可以是新鲜药材，也可以是干燥药材，如当年干燥药材；具体的，当采用新鲜药材时，优选是采用剪刀将其剪碎，然后过一号筛，取筛下部分进行提取；当采用干燥药材时，优选是采用粉粹机将其粉碎，然后过一号筛，取筛下部分进行提取。
本发明对于所述菊花药材的具体种类没有特殊的限定，在本发明的实施例中，具体是以福白菊药材为例，验证本发明方法的准确性；福白菊(Chrysanthemum morifolium‘Fubaiju’)主要产自我国湖北省麻城市，种植规模6万亩以上，是我国三大主要白菊品种之一，为湖北省重要道地药材。
在本发明中，所述甲醇水溶液的体积浓度优选为65～75％，更优选为70％；所述甲醇水溶液与菊花药材的用量比优选为(20～30)mL：0.25g，更优选为25mL：0.25g。在本发明中，所述提取优选在超声条件下进行；所述超声的频率优选为65～75kHz，更优选为70kHz；所述提取的时间优选为35～45min，更优选为40min。在本发明中，所述超声优选在室温条件下进行，即不需要额外的加热或降温。
提取完成后，本发明优选将所得体系冷却至室温(超声过程中体系温度会略有升高)，过滤，取续滤液作为提取液；为了保证测定结果的准确性，本发明优选将菊花药材过一号筛的筛下部分与甲醇水溶液混合后称重，之后进行提取，待提取完成后对所得体系再次称重，用甲醇水溶液补足减失的重量；补足减失重量所用甲醇水溶液优选与提取过程中所用甲醇水溶液的浓度一致。
得到提取液后，本发明将所述提取液进行高效液相色谱分析，根据绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量；其中，所述高效液相色谱的操作条件包括：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％。
在本发明中，所述流动相的流速优选为0.8～1.2mL/min，更优选为1.0mL/min。
在本发明中，进行所述高效液相色谱分析时优选采用紫外检测器，检测波长优选为348nm。
在本发明中，进行所述高效液相色谱分析时采用的色谱柱优选为Shim-packVP-ODS色谱柱，长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm。
在本发明中，进行所述高效液相色谱分析时的柱温优选为25～35℃，更优选为30℃。本发明优选通过控制柱温在25～35℃，在保证具有较短分析周期的基础上，还有利于改善各化学成分的分离度，保证各化学成分含量的准确测定。
在本发明中，进行高效液相色谱分析时的进样量优选为10μL。
将所述提取液进行高效液相色谱分析后，本发明根据绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量。在本发明中，所述绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的质量与色谱峰面积的标准曲线。
在本发明中，建立绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷标准曲线的方法优选包括以下步骤：
提供混合对照品溶液，所述混合对照品溶液中的对照品为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷；
将所述混合对照品溶液在不同进样量条件下分别进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，质量为横坐标，峰面积对质量作线性方程，分别得到绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线。
本发明首先提供混合对照品溶液。本发明对于所述混合对照品溶液中溶剂的种类没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的用于配制所述混合对照品溶液的溶剂即可。在本发明的实施例中，具体采用体积浓度为70％的甲醇水溶液作为溶剂。
本发明对于配制混合对照品溶液的方法没有特殊的限定，采用本领域技术人员熟知的配制溶液的技术方案即可。在本发明的实施例中，分别精密称定(精密度为0.01mg)取绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷适量，加体积浓度为70％的甲醇水溶液，摇匀后过滤，取续滤液作为混合对照品溶液，其中，绿原酸的浓度为30.0μg/mL、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的浓度为39.6μg/mL、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的浓度为29.8μg/mL、3,5-二咖啡酰基奎宁酸的浓度为60.4μg/mL、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的浓度为50.0μg/mL。
得到混合对照品溶液后，本发明优选将所述混合对照品溶液在不同进样量条件下分别进行高效液相色谱分析，以峰面积为纵坐标，质量为横坐标，峰面积对质量作线性方程，分别得到绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线。在本发明中，所述混合对照品溶液的进样量优选依次为1.0μL、2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、20.0μL、40.0μL。在本发明中，所述高效液相色谱分析的条件优选与本申请上述技术方案中测定提取液时采用的高效液相色谱分析的条件一致。在本发明的实施例中，所述高效液相色谱分析的条件具体如下：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％；
流动相的流速为1.0mL/min；
检测波长为348nm；
色谱柱为Shim-pack VP-ODS色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；
柱温为30℃。
本发明在上述操作条件下进行高效液相色谱分析，理论塔板数以3,5-二咖啡酰基奎宁酸峰计算不低于8000，且5种化学成分均能达到基线分离。
在本发明中，根据所述5种化学成分的标准曲线和提取液的液相色谱图，可以得到提取液中5种化学成分的含量，进而得到菊花药材中5种化学成分的含量。
下面将结合本发明中的实施例，对本发明中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
实施例1
1药材、试剂与仪器
1.1药材与试剂
福白菊药材(当年干燥药材)采集于湖北省，具体信息见表1(表1中批号含有的数字和字母没有特殊含义，仅代表不同的批次)，经鉴定为福白菊(Chrysanthemummorifolium‘Fubaiju’)。绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品均来源于中国食品药品检定研究院，纯度>98.0％。乙腈和甲醇为色谱纯。
表1福白菊样品采集信息表
1.2仪器
Agilent 1200高效液相色谱仪(美国安捷伦公司)，紫外检测器；AUW120D型电子天平(0.01mg，日本岛津公司)；KQ-5200B型超声波清洗器(昆山超声仪器有限公司)。
2方法与结果
2.1含量测定
2.1.1溶液的制备
混合对照品溶液的制备：分别精密称定取绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷适量，加体积浓度为70％的甲醇水溶液，摇匀后过滤，取续滤液作为混合对照品溶液，其中，绿原酸的浓度为30.0μg/mL、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的浓度为39.6μg/mL、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷的浓度为29.8μg/mL、3,5-二咖啡酰基奎宁酸的浓度为60.4μg/mL、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的浓度为50.0μg/mL。
供试品溶液(即提取液)的制备：将福白菊药材粉碎后过一号筛，取筛下部分约0.25g，精密称定，精密加入体积浓度为70％的甲醇水溶液25mL，称定重量，在70kHz、室温条件下超声提取40min，将所得体系冷却至室温，用体积浓度为70％的甲醇水溶液补足减失的重量，摇匀后过滤，取续滤液作为供试品溶液。
2.1.2高效液相色谱的色谱条件
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％；
流动相的流速为1.0mL/min；
检测波长为348nm；
色谱柱为Shim-packVP-ODS色谱柱(250mm×4.6mm，5μm)；
柱温为30℃；
进样量为10μL。
在上述操作条件下进行高效液相色谱分析，理论塔板数以3,5-二咖啡酰基奎宁酸峰计算不低于8000，且5种化学成分均能达到基线分离。
供试品溶液的高效液相色谱图见图1，5种化学成分的分离度如表2所示(表2以及后续表3～5中“化合物1”代表绿原酸，“化合物2”代表木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷，“化合物3”代表木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷，“化合物4”代表3,5-二咖啡酰基奎宁酸，“化合物5”代表芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷)。由图1和表2可知，5种化学成分能够实现较好的分离。
表2 5种化学成分的分离度数据
2.1.3方法学考察
2.1.3.1线性关系考察
分别吸取1.0μL、2.0μL、4.0μL、6.0μL、8.0μL、10.0μL、20.0μL、40.0μL混合对照品溶液，进行高效液相色谱分析，记录所得色谱图的峰面积。以峰面积(Y)为纵坐标，进样量(X，μg)为横坐标，峰面积对质量作线性方程，结果如表3所示，5种化学成分在对应线性范围内相关系数(r)均大于0.9999，呈良好线性。
表3 5种化学成分的线性关系
2.1.3.2定量限(LOQ)和检测限(LOD)考察
取混合对照品溶液，用体积浓度为70％的甲醇水溶液逐步稀释后进行高效液相色谱分析，取(S/N≥10)和(S/N≥3)信噪比时的进样量分别为定量限和检测限。结果如表3所示，5种化学成分的定量限(S/N≥10)分别为2.4ng、3.2ng、9.5ng、9.7ng、4.0ng，检测限(S/N≥3)分别为0.7ng、1.6ng、2.4ng、4.3ng、1.2ng，表明本方法灵敏度高。
2.1.3.3精密度试验
精密吸取混合对照品溶液，连续进样6次，记录峰面积。结果显示，绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的峰面积RSD分别为0.11％、0.20％、1.00％、1.71％、1.70％，表明本方法精密度较好。
2.1.3.4重复性试验
取同一批福白菊药材(批号161125)6份，按“2.1.1溶液的制备”步骤平行制备6份供试品溶液，进行高效液相色谱分析。结果显示，绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的质量含量分别为0.337％、0.637％、0.480％、1.035％和1.233％，RSD分别为0.72％、0.19％、1.49％、0.85％和0.77％，表明本法重复性较好。
2.1.3.5稳定性试验
精密量取同一供试品溶液10μL，4℃保存，分别于0h、2h、4h、8h、12h、24h进样，进行高效液相色谱分析，记录峰面积。结果显示，绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷峰面积的RSD(n＝6)分别为0.93％、0.36％、0.52％、0.75％和1.36％，表明供试品溶液在4℃放置24h内基本稳定。
2.1.3.6加样回收率试验
精密称定批号为161125的福白菊药材(即与重复性试验所测福白菊药材的批号相同，5种化学成分含量已确定)9份，每份0.25g，分别加入高、中、低浓度的对照品适量(其中，高、中、低浓度分别为重复性试验测定结果的80％、100％、120％)，每个浓度平行设置3份，按“2.1.1溶液的制备”步骤制备供试品溶液，进行高效液相色谱分析，按外标法计算绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的加样回收率和RSD，结果见表4。结果表明，5种成分的加样回收率均在95％～105％范围内，均符合规定。
表4加样回收率试验数据
2.2样品测定
将表1中10批福白菊药材，按“2.1.1溶液的制备”步骤制备供试品溶液，进行高效液相色谱分析，按外标法计算样品中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸、芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量，结果见表5。
表5福白菊药材中5种化学成分的质量含量(％)
由表5可知，本发明采用高效液相色谱法同时测定福白菊药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷5种主要化学成分的含量，10批福白菊药材中上述5种化学成分的含量分别为0.29％～0.65％、0.26％～0.63％、0.30％～0.65％、0.70％～1.34％、0.29％～1.23％，均符合《中国药典》菊花品种的含量要求，其中样品编号为9的福白菊药材(产地：湖北林家湾，批号：181108B3)中各成分含量均较高；药材样品编号为10的福白菊药材(产地：湖北仙石岩，批号：181119A4)中各成分含量较低。因此，本发明提供的方法为以此5种化学成分为质量检测指标的福白菊药材提供了有效的检测手段，能够较全面地反应福白菊药材的质量特征。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员来说，在不脱离本发明原理的前提下，还可以做出若干改进和润饰，这些改进和润饰也应视为本发明的保护范围。

Claims (10)

1.一种同时测定菊花药材中5种化学成分含量的方法，所述5种化学成分为绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷，包括以下步骤：
采用甲醇水溶液对菊花药材进行提取，得到提取液；
将所述提取液进行高效液相色谱分析，根据绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的标准曲线与所得液相色谱图，得到菊花药材中绿原酸、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖醛酸苷、3,5-二咖啡酰基奎宁酸和芹菜素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量；其中，所述高效液相色谱的操作条件包括：
流动相：流动相包括流动相A和流动相B，其中，流动相A为体积浓度为0.1％的磷酸水溶液，流动相B为乙腈；
梯度洗脱程序：0～11min，流动相B由10％增加至18％；11～30min，流动相B由18％增加至20％；30～40min，流动相B保持在20％。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述菊花药材为福白菊药材。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液的体积浓度为65～75％。
4.根据权利要求1～3任一项所述的方法，其特征在于，所述甲醇水溶液与菊花药材的用量比为(20～30)mL：0.25g。
5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述提取在超声条件下进行，所述超声的频率为65～75kHz。
6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述提取的时间为35～45min。
7.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述流动相的流速为0.8～1.2mL/min。
8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述高效液相色谱分析时采用的检测波长为348nm。
9.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，进行所述高效液相色谱分析时采用的色谱柱为Shim-pack VP-ODS色谱柱，长为250mm，内径为4.6mm，填料粒径为5μm。
10.根据权利要求1或9所述的方法，其特征在于，进行所述高效液相色谱分析时的柱温为25～35℃。
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