CN101936966B - 同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法 - Google Patents

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一种同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，包括下述步骤：1、将山楂酊样品用甲醇稀释、过滤；2、以甲酸为流动相添加剂，采用液相色谱-二极管阵列检测器分析，经梯度洗脱，实现烟用香原料中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin,ProcyanidinsB2和ProcyanidinsC1的同时分离测定。本发明的方法与现有技术相比：实现了烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin,ProcyanidinsB2和ProcyanidinsC1的同时测定；通过采用甲酸作为流动相添加剂，避免了色谱峰的托尾，缩短了样品的分析时间，并且实验的重复性好、回收率高，适合卷烟企业大批量烟用样品的分析。

Description

同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法
技术领域
本发明属于化学分析检测技术领域，具体涉及一种同时分离分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的新方法。
背景技术
山楂又名“红果”、“山里红”，蔷薇科，落叶乔木。果实味酸稍甜，富含维生素C、多种有机酸和黄酮等。原花青素(procyanidins )属于缩合单宁，主要由儿茶素和表儿茶素聚合而成的，广泛分布于植物界，也存在于一些水果和山楂中，与人类生活和健康密切相关。
山楂酊是用乙醇浸提成熟的山楂果实，加热连续循环回流萃取，回收溶剂后获得。对于山楂酊的化学成分(如山楂酊中的原花青素)，仍然存在着许多有待揭示的问题，其中之一就是原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1在山楂酊中的含量测定。目前，有关烟用香原料山楂酊中原花青素的测定方法尚无统一标准，文献报道的有正丁醇－盐酸法、香草醛－盐酸法、铁盐催化比色法及流动注射－抑制化学发光法等。对于正丁醇－盐酸法、香草醛－盐酸法和铁盐催化比色法等分光光度法，由于存在其它高聚原花青素的显色干扰，严重时可对分析结果产生较大的正误差；对于流动注射-抑制化学发光法，由于其不具有分离能力，只能测定单个的低聚原花青素。高效液相色谱法具有良好的精密度和准确度，在植物活性成分分析方面应用广泛，被许多国家政府列为药品、食品等领域的规定检测手段。然而由于山楂酊中的低聚原花青素成分存在多种聚合方式和聚合度，使其各成分的分离和测定要复杂得多。因此，对于烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的准确分析，需要建立一种分离测定新方法来解决这一问题。
发明内容
本发明的目的正是针对以往分析山楂中低聚原花青素时存在的问题而提供的一种解决方法，即以甲酸作为流动相添加剂，通过梯度洗脱，实现山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的同时分离测定。
本发明的目的是通过以下具体技术方案来实现的：
本发明的同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法如下：
(1)样品制备：取山楂酊剂，用移液管准确移取山楂酊1.0 mL，用甲醇稀释5倍后，经0.45μm有机相滤膜过滤后使用；
(2)制备好的样品用液相色谱-二极管阵列检测器分析，分析条件如下：
色谱柱：waters symmetry C18柱(4.6mm×250mm×5μm)
流动相A：10％甲醇含0.5 mL/L甲酸，流动相B：30%乙腈含0.5 mL/L甲酸
洗脱梯度：    时间（min）      0     10      30      40     45 
            流动相A（V/V）  100％   100％   60％   45％  100％
进样体积：10μL
流速：0.8mL/min
柱温：30℃
检测波长：280nm。
本方法与原有的山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的分析方法相比，实现了烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的同时测定；本方法通过采用甲酸作为流动相添加剂，避免了色谱峰的托尾，缩短了样品的分析时间，并且实验的重复性好、回收率高，适合卷烟企业大批量烟用样品的分析。
附图说明
图1 三种低聚原花青素标样色谱图。
图中：1、Procyanidins B2，2、(-)-Epicatechin，3、Procyanidins C1。
图2 山楂酊中三种低聚原花青素色谱图。
图中：1、Procyanidins B2，2、(-)-Epicatechin，3、Procyanidins C1。
具体实施方式
下面通过实施实例对本发明进行进一步说明：
实例1
精确称取一定量的Procyanidins B2 、(-)-Epicatechin和Procyanidins C1分别置于不同的10mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，其浓度分别为0.70mg/mL、1.16mg/mL和2.20mg/mL。
液相色谱分析条件：
色谱柱：waters Symmetry C18柱 (4.6mm×250mm×5μm)
流速: 0.8mL/min
柱温：30℃
检测波长：280 nm
进样量：10μL
流动相A：10％甲醇含0.5 mL/L甲酸，流动相B：30%乙腈含0.5 mL/L甲酸
洗脱梯度：    时间（min）      0     10      30      40     45 
            流动相A（V/V）  100％   100％   60％   45％  100％
此色谱条件下，三者能够得到很好分离的色谱图如图1所示。
1. Procyanidins B2, 2. (-)-Epicatechin, 3. Procyanidins C1
实例2
取山楂酊样品1mL，用甲醇稀释5倍后经0.45μm有机相滤膜过滤后，进样分析。
液相色谱分析条件：
色谱柱：waters Symmetry C18柱 (4.6mm×250mm×5μm)
流速: 0.8mL/min
柱温：30℃
检测波长：280 nm
进样量：10μL
流动相A：10％甲醇含0.5 mL/L甲酸，流动相B：30%乙腈含0.5 mL/L甲酸
洗脱梯度：    时间（min）      0     10      30      40     45 
            流动相A（V/V）  100％   100％   60％   45％  100％
此色谱条件下，山楂酊样品的色谱图如图2所示。
1. Procyanidins B2, 2. (-)-Epicatechin, 3. Procyanidins C1
对同一山楂酊样品进行平行5次测定，结果表明，方法的重现性和稳定性良好，山楂酊中三种低聚原花青素 Procyanidins B2, (-)-Epicatechin, 和Procyanidins C1含量测定值的RSD小于5％。方法加标回收率均在93.3-98.9%之间，说明本方法能够较为可靠地测定山楂酊中三种低聚原花青素Procyanidins B2, (-)-Epicatechin, Procyanidins C1。

Claims (2)

1.一种同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，其特征在于：以甲酸作为流动相添加剂，通过梯度洗脱，实现山楂酊中三种低聚原花青素(-)-Epicatechin, Procyanidins B2和Procyanidins C1的同时分离测定，具体步骤如下：
样品制备：取山楂酊剂，用移液管准确移取山楂酊1.0 mL，用甲醇稀释后，经有机相滤膜过滤后使用；
制备好的样品用液相色谱-二极管阵列检测器分析，分析条件如下：
色谱柱：waters symmetry C18柱，其规格为4.6mm×250mm×5μm，
流动相A：10％甲醇含0.5 mL/L甲酸，流动相B：30%乙腈含0.5 mL/L甲酸
洗脱梯度：    时间，其单位为min      0        10         30        40        45 
                    流动相A：V/V     100％    100％    60％     45％    100％
进样体积：10μL
流速：0.8mL/min
柱温：30℃
检测波长：280nm。
2.根据权利要求1所述的同时分析烟用香原料山楂酊中三种低聚原花青素的方法，其特征在于：山楂酊稀释5倍后经0.45μm有机相滤膜过滤后使用。
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