CN107362362A

CN107362362A - Sirt1抑制剂在预防和治疗放射引起的肠道疾病中的应用

Info

Publication number: CN107362362A
Application number: CN201710595602.XA
Authority: CN
Inventors: 华国强; 富国祥
Original assignee: Fudan University
Current assignee: Danwang medical technology (Shanghai) Co.,Ltd.
Priority date: 2017-07-20
Filing date: 2017-07-20
Publication date: 2017-11-21
Anticipated expiration: 2037-07-20
Also published as: CN107362362B; WO2019015279A1

Abstract

本发明公开了SIRT1抑制剂在预防和治疗放射引起的肠道疾病中的应用，其中，具体包括SIRT1抑制剂在制备药物中的用途、一种用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物和一种治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法。本发明能够有效对放射引起的肠道上皮损伤进行预防或治疗，显著提高动物存活率，进而有效解决了目前放射引起的肠道损伤缺乏理想治疗药物和有效治疗方法的问题。

Description

SIRT1抑制剂在预防和治疗放射引起的肠道疾病中的应用

技术领域

本发明属于生物医药技术领域，具体而言，涉及SIRT1抑制剂在预防和治疗放射引起的肠道疾病中的应用。

背景技术

肠粘膜为辐射高度敏感组织，正常肠道组织的辐射损伤是临床腹部肿瘤放疗的最大限制因素，约50％接受腹腔肿瘤放疗的患者会继发放射性肠炎，加重病情并影响患者生存质量。另外，在其它极端情况下，如核泄漏，核恐怖袭击及航天员太空探索，人体暴露于高剂量的辐射，会引发致死性肠道坏死。高剂量的辐射抑制小肠干细胞增殖同时引发大量的干细胞死亡，导致大部以至全部隐窝被破坏，绒毛被覆上皮脱落，失去屏障功能从而引发致死性的肠道损伤。主要的临床表现为腹泻，电解质失衡，感染，败血病，最终导致动物死亡，通常称之为肠型急性放射病(GI Syndrome)。

放射性肠炎是盆腔、腹腔、腹膜后恶性肿瘤经放射治疗引起的肠道并发症。可分别累及小肠、结肠和直肠，其中小肠最为敏感。根据肠道遭受辐射剂量的大小、时间的长短、发病的缓急，一般将放射病分为急性和慢性两种。在早期肠黏膜上皮细胞更新受到抑制，以后小动脉壁肿胀、闭塞，引起肠壁缺血，黏膜糜烂。晚期肠壁引起纤维化，肠腔狭窄或穿孔，腹腔内形成脓肿、瘘道和肠粘连。肠道高度放射敏感性一直制约腹盆部肿瘤放射治疗效果，同时患者在接受腹盆部放射治疗时产生肠道并发症降低了患者的生活质量。因此寻找一种有效的肠道放射保护剂有很大的临床应用价值，目前治疗放射性肠炎一般采用对症治疗，仅能缓解患者症状，但并未有效改善肠粘膜损伤，临床尚缺乏有效防治放射性肠炎药物。

肠型急性放射病是指机体一次或短时间(数日)内分次受到大剂量辐射引起的疾病，根据其临床特点和基本病理改变，分为骨髓型、肠型和脑型三种类型。由于肠上皮是放射性敏感组织，因此，肠型放射病是核事故的主要致死原因。肠型急性放射病是以肠道损伤为基本病变，以频繁呕吐、严重腹泻以及水电解质代谢紊乱为主要临床表现，具有初期、假愈期、极期三阶段病程的严重急性放射病。机体全身或腹部受到大剂量照射后，小肠粘膜发生了广泛坏死脱落。核战争、核恐怖袭击、核事故均可造成大批肠型放射病病人。另外考虑到核事故或者核泄漏往往造成大量人员的转移救治(一般24小时左右)，国家核应急中心或者医院最希望研发药物能够在辐射损伤后24小时给药，并有治疗效果。但目前缺乏特效的肠型放射病药物，特别是照射后24小时后治疗，目前为止还没有FDA批准的药物可用来治疗。一旦动物或者个体暴露于高剂量辐射环境，导致肠道严重受损，存活的希望几乎为零。所以充分研究肠道的辐射生物学，尤其是肠道干细胞放射特性，并研发出相应的辐射损伤缓解治疗药物成为迫切需要解决的医疗问题，并具有广大的医用前景。

发明内容

本发明旨在至少在一定程度上解决相关技术中的技术问题之一。为此，本发明的一个目的在于提出SIRT1抑制剂在预防和治疗放射引起的肠道疾病中的应用。由此，采用SIRT1抑制剂可以有效对放射引起的肠道上皮损伤进行预防或治疗，从而显著提高动物的存活率。因此，本发明可以有效解决放射引起的肠道损伤缺乏理想药物和有效治疗方法的问题。

本发明是基于以下发现完成的：

针对辐射引起的肠道损伤，目前临床上并没有FDA批准的合适对症药物，主要以辅助支持治疗为主(抗感染，补充电解质等)。例如，采用抗生素只能治疗细菌感染等后期并发症，但是不能保护肠道上皮，治标不治本，无法达到治愈目的。现有辐射保护剂研究多用于照射前给药，例如带有巯基基团的氨磷汀(WR-2721)虽然能够消除辐射引起的活性氧自由基(ROS)，具有一定的辐射保护作用，但是对辐射后造成的损伤没有治疗效果，而病人从受到辐射到被发现送往治疗往往已过数小时。因此，辐射后特别是辐射后24小时能够发挥治疗作用药物的研发是一个世界难题。

肠道内上皮细胞增殖更新速度最快，每隔3-4天就完全更新一次，从而导致其辐射敏感。高剂量的辐射导致小肠上皮细胞及隐窝底部干细胞DNA损伤，进一步抑制其增殖是放射性肠损伤发病机理中的初始事件。辐射引发大量的上皮细胞死亡，导致大部以至全部隐窝被破坏，绒毛被覆上皮脱落，失去屏障功能，细菌通过粘膜并感染机体从而引发致死性的肠道损伤。发明人意外发现，SIRT1抑制剂可以明显提高小肠隐窝干细胞辐射后的存活率，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高辐射后动物的存活率。

为此，根据本发明的一个方面，本发明提出了SIRT1抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗放射引起的肠道损伤。

由此，通过采用SIRT1抑制剂可以对放射引起的肠道上皮损伤进行预防或治疗，减少辐射引起的上皮细胞死亡，提高小肠隐窝干细胞辐射后的存活率，促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。因此，本发明提出的SIRT1抑制剂在制备药物中的用途可以有效解决肠型放射病缺乏理想药物和有效治疗方法的问题，具有广阔的市场应用前景。

另外，根据本发明上述实施例的SIRT1抑制剂在制备药物中的用途还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，所述SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。由此可以有效显著提高辐射后动物的存活率。

在本发明的一些实施例中，所述肠道损伤为放射性肠炎和/或肠型急性放射病。由此，可以有效降低由于辐射引发的各种肠道并发症以及肠道坏死的几率，进而提高辐射后动物的存活率。

根据本发明的第二个方面，本发明还提出了一种用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物，所述药物组合物包含SIRT1抑制剂。

由此，通过采用本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物，可以在辐射后给药，并能够从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，减少辐射引起的上皮细胞死亡，提高小肠隐窝干细胞辐射后、特别是针对放射性肠炎以及肠型急性放射病引起的小肠隐窝干细胞辐射后的存活率，而且还能进一步促进上皮细胞辐射后的再生能力，提高动物的存活率。此外，本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物还适于突发核事故中的大规模应用，具有广阔的市场应用前景。

另外，根据本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，所述SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。由此不仅可以有效显著提高辐射后动物的存活率，还有利于实现用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物的大规模应用。

在本发明的一些实施例中，所述肠道损伤为放射性肠炎。由此，可以有效降低由于辐射引发的各种肠道并发症以及肠道坏死的几率，进而提高辐射后动物的存活率。

在本发明的一些实施例中，所述药物组合物的剂型为注射液、片剂、胶囊剂、口服颗粒、灌肠剂。由此，本发明用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。

在本发明的一些实施例中，用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物进一步包含药学上可接受的赋形，所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。由此，本发明用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。

根据本发明的第三个方面，本发明还提出了一种治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法，根据本发明的实施例，该方法包括对动物提供前面实施例所述的药物组合物。

由此，通过对动物提供前面实施例所述的药物组合物，可以有效针对核辐射、治疗放射等引起的肠道损伤进行治疗，能够从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，进而成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。此外，本发明上述实施例的治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法还适于突发核事故中的大规模应用。

另外，根据本发明上述实施例的治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法还可以具有如下附加的技术特征：

在本发明的一些实施例中，在所述动物受辐射后，对所述动物提供所述的药物组合物。由此，可以从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，进而成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。

附图说明

图1是根据本发明一个实施例在体外培养类器官水平上研究SIRT1抑制剂抗辐射效果的技术路线图。

在体外培养类器官水平上研究SIRT1抑制剂salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin或烟酰胺的抗辐射效果

图2是根据本发明一个实施例的采用X射线6Gy照射后对照组及照射后24小时给予烟酰胺10mM处理的治疗组在显微镜下的形貌对比图。

图3是根据本发明一个实施例的培养5天后给予烟酰胺处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图4是根据本发明一个实施例的培养5天后给予烟酰胺处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官大小的对比图。

图5是根据本发明一个实施例的采用X射线8Gy照射后对照组及照射后24小时给予烟酰胺10mM处理的治疗组在显微镜下的形貌对比图。

图6是根据本发明又一个实施例的培养5天后给予烟酰胺处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图7是根据本发明又一个实施例的培养5天后给予烟酰胺处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官大小的对比图。

图8是根据本发明一个实施例的采用X射线8Gy照射后对照组及照射后24小时给予EX527处理的治疗组在显微镜下的形貌对比图。

图9是根据本发明一个实施例的培养5天后给予EX527处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图10是根据本发明一个实施例的培养5天后给予Sirtinol处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图11是根据本发明一个实施例的培养5天后给予Salermide处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图12是根据本发明一个实施例的培养5天后给予Inauhzin处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图13是根据本发明一个对比例的培养5天后给予SIRT2抑制剂处理的治疗组(照射后24小时给药)与对照组类器官的存活率的对比图。

图14是根据本发明一个实施例的采用X射线照射3.5天后对照组与烟酰胺腹腔注射治疗组的小肠横截面在显微镜下的形貌对比图。

图15是根据本发明一个实施例的采用X射线照射3.5天后对照组与照射24小时后给予烟酰胺腹腔注射治疗组的小鼠再生隐窝数量对比图。

图16是根据本发明一个实施例的X射线照射后治疗组与对照组小鼠的生存情况对比图。

图17是根据本发明又一个实施例的X射线照射后治疗组与对照组小鼠的生存情况对比图。

具体实施方式

下面详细描述本发明的实施例，所述实施例的示例在附图中示出，其中自始至终相同或类似的标号表示相同或类似的元件或具有相同或类似功能的元件。下面通过参考附图描述的实施例是示例性的，旨在用于解释本发明，而不能理解为对本发明的限制。

根据本发明的一个方面，本发明提出了SIRT1抑制剂在制备药物中的用途，药物用于预防或治疗辐射引起的肠道损伤。

由此，不仅可以有效解决肠型放射病没有理想药物和疗效方法的问题，还可以在辐射后对肠道上皮损伤进行预防或治疗，减少辐射引起的上皮细胞死亡，提高小肠隐窝干细胞辐射后的存活率，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率，具有广阔的市场应用前景。

其中，需要说明的是，术语“预防”指获病或障碍的风险的减少(即：使疾病的至少一种临床症状在主体内停止发展，该主体可能面对或预先倾向面对这种疾病，但还没有经历或表现出疾病的症状)。

根据本发明的具体实施例，SIRT1抑制剂可以为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。哺乳动物SIRT蛋白家族包含7个成员，可分为四类：SIRT1-3属于第一类，SIRT4属于第二类，SIRT5属于第三类，而SIRT6/7属于第四类，其中，SIRT1是哺乳动物中重要的酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD+)依赖性去乙酰化酶，可以与染色质、许多重要的转录因子(p53，p300等)及转录共调控因子相互作用，通过去乙酰化作用调节基因转录、染色体稳定性和靶蛋白活性，进而参与代谢、衰老、肿瘤发生发展等一系列病理生理过程。发明人发现，上皮细胞作为肠道辐射损伤的主要靶点，如何成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，或者促进上皮细胞辐射后再生能力是研发治疗放射性肠损伤的关键点和方向，当SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin或烟酰胺时，能够对肠道上皮损伤进行有效地预防或治疗，成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高辐射后动物的存活率。此外，上述几种SIRT1抑制剂均为小分子化合物，其制备、运输和储存成本低，不仅适于在突发核事故中的大规模应用，还能有效降低辐射引起的肠道损伤的治疗成本。

根据本发明的具体实施例，肠道损伤可以为放射性肠炎和/或肠型急性放射病。其中，放射性肠炎是盆腔、腹腔、腹膜后恶性肿瘤经放射治疗引起的肠道并发症。目前，放射性肠炎一般采用对症治疗，仅能达到缓解患者症状，但无法从根本上治疗肠粘膜损伤，主要由于临床上缺乏有效防治放射性肠炎的药物。而SIRT1抑制剂对放射引起的肠道上皮损伤具有有效地预防或治疗作用，能够有效减少放射引起的肠道上皮细胞死亡，并促进上皮细胞受辐射后的再生能力。由此，本发明中通过将SIRT1抑制剂制备成药物，从而可以有效地用于预防或治疗辐射引起的肠道损伤，尤其对辐射引发的各种肠道并发症以及肠道坏死具有显著治疗效果，从而从根本上提高辐射后动物的存活率。

另外，肠型急性放射病是指机体一次或短时间(数日)内分次受到大剂量辐射引起的疾病，通常由核事故或者核泄漏引起。而核事故或者核泄漏往往会造成大量人员受伤，辐射损伤发生到伤员转移并能够得到治疗的时间大概在24小时左右，所以国家核应急中心或者医院最希望研发药物能够在辐射损伤后24小时给药，并有治疗效果。而本发明上述实施例提出的SIRT1抑制剂在制备药物中的用途，可以在辐射损伤24小时后给药并达到有效的治疗效果，进而能够有效治疗肠型急性放射病。

根据本发明的第二个方面，本发明还提出了一种用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物，药物组合物包含SIRT1抑制剂。

由此，通过采用本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物，可以在辐射后给药，并从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，减少辐射引起的上皮细胞死亡，提高小肠隐窝干细胞辐射后、特别是针对放射性肠炎以及肠型急性放射病引起的小肠隐窝干细胞辐射后的存活率，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。此外，本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物还适于突发核事故中的大规模应用，具有广阔的市场应用前景。

根据本发明的具体实施例，SIRT1抑制剂可以为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。发明人发现，上皮细胞作为肠道辐射损伤的主要靶点，如何成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，或者促进上皮细胞辐射后再生能力是研发治疗放射性肠损伤的关键点和方向，当SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin或烟酰胺时，能够对肠道上皮损伤进行有效地预防或治疗，成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高辐射后动物的存活率。此外，上述几种SIRT1抑制剂均为小分子化合物，其制备、运输和储存成本低，不仅适于在突发核事故中的大规模应用，还能有效降低辐射引起的肠道损伤的治疗成本。

根据本发明的具体实施例，可以以肠道上皮细胞为靶点，充分利用肠道干细胞培养技术，在体外培养类器官水平上研究SIRT1抑制剂salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin或烟酰胺的抗辐射效果。具体地，如图1所示，可以首先从小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时后用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)照射不同剂量(6Gy或者8Gy)，照射后24小时加入各种不同的SIRT1抑制剂(烟酰胺，EX527，Sirtinol，Salermide、Inauhzin)。培养5天后观察治疗组与对照组类器官存活率及大小差异。然后进一步验证在体外有效的SIRT1抑制剂的最佳浓度，随后在小鼠上体内验证其功效。

根据本发明的具体实施例，肠道损伤可以为放射性肠炎。目前，放射性肠炎一般采用对症治疗，仅能缓解患者症状，但并未有效改善肠粘膜损伤，临床尚缺乏有效防治放射性肠炎药物。而SIRT1抑制剂能够对肠道上皮损伤进行有效地预防或治疗，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力。由此，本发明中通过将SIRT1抑制剂用于制备用于预防或治疗辐射引起的肠道损伤的药物，可以有效降低由于辐射引发的各种肠道并发症以及肠道坏死的几率，进而提高辐射后动物的存活率。

根据本发明的具体实施例，药物组合物的剂型可以为注射液、片剂、胶囊剂、口服颗粒、灌肠剂。由此，本发明用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。

根据本发明的具体实施例，用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物可以进一步包含药学上可接受的赋形，赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。由此，本发明用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物能够被制备成任何便于给药的药物剂型。

根据本发明的第三个方面，本发明还提出了一种利用本发明上述实施例的用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物来治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法。

由此，可以有效针对核辐射、治疗放射等引起的肠道损伤进行治疗，并且能够从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，进而成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。此外，本发明上述实施例的治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法还适于突发核事故中的大规模应用。

根据本发明的具体实施例，可以在动物受辐射后，对动物提供的药物组合物。由此，可以从根本上保护并治疗放射引起的肠道上皮损伤，进而成功保护上皮细胞，减少辐射引起的上皮细胞死亡，并促进上皮细胞辐射后的再生能力，显著提高动物的存活率。

实施例1

(1)研究不同时间给药烟酰胺对X射线6Gy照射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时，取五组小肠类器官，并分别设为空白对照组(无照射)、模型对照组、照前24小时给药组、照后1小时给药组、照后24小时给药组。采用X射线6Gy对模型对照组、照前24小时给药组、照后1小时给药组、照后24小时给药组四组小肠类器官进行照射，其中，模型对照组不给药，照前24小时给药组在照射前给药烟酰胺10mM，照后1小时给药组、照后24小时给药组分别于照后1小时和24小时给药烟酰胺10mM。将上述五组分别培养5天后观察给药组(照前24小时给药组、照后1小时给药组、照后24小时给药组)与对照组(空白对照组、模型对照组)器官存活率。

结果：图2显示了空白对照组(无照射)、模型对照组和照后24小时给药组在显微镜下的形貌图。图3显示了模型对照组、照前24小时给药组、照后1小时给药组、照后24小时给药组的小肠类器官存活率。图4显示了模型对照组与照后24小时给药组存活类器官大小。其中，图3中，照射前24小时给药组存活率为31.28±2.85％、照射后1小时给药组存活率为38.42±5.04％、照射后24小时给药组存活率为63.27±2.25％、模型对照组存活率为52.27±1.75％，(Mean±SD)图4中，照后24小时给药组的存活类器官大小为3.81±1.23×10⁴像素，模型对照组存活类器官大小为2.34±1.10×10⁴像素，(以200X显微镜下面积表示；Mean±SD，p＜0.0001)。

结论：照射前24小时给药组和照射后1小时给药组的存活率低于了模型对照组，由此说明在照射前24小时和照射后1小时给药出现了辐射增敏作用，存活率反而较未给药的模型对照组更低。而只有照射后24小时给药，辐射保护效果明显。所以，发明人发现，给药时间会显著影响辐射保护效果，并且通过上述几个给药时间点对比发现，照射后24小时给药为最佳给药时间点。

(2)加强照射为X射线8Gy，在最佳给药时间点照射后24小时给予烟酰胺10mM对引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时，取两组小肠类器官，并分别设为模型对照组和照后24小时给药组。采用X射线8Gy对模型对照组和照后24小时给药组的小肠类器官进行照射。其中，模型对照组不给药，照后24小时给药组于照射后24小时给药烟酰胺10mM。将上述两组分别培养5天后观察模型对照组和照后24小时给药组的器官大小和存活率。

结果：X射线8Gy照射后培养5天，模型对照组和照后24小时给药组的小肠类器官在显微镜下的形貌如图5所示；模型对照组和照后24小时给药组的小肠类器官的存活率如图6所示，照后24小时给药组的存活率为19.65±2.67％，模型对照组的存活率为3.46±0.74％，(Mean±SD，p＜0.0001)。模型对照组和照后24小时给药组的小肠类器官的大小如图7所示，照后24小时给药组的存活类器官大小为1.64±0.57×10⁴像素，模型对照组存活类器官大小为0.90±0.57×10⁴像素，(以200X显微镜下面积表示；Mean±SD，p＜0.0001)。

结论：通过对上述两项研究的结果图2和图5可以看出，采用X射线照射后，小肠类器官损伤严重，而照射后24小时给予烟酰胺处理的给药组的小肠类器官损伤较轻。从图3和图6可以看出，采用X射线照射24小时后，加入SIRT1抑制剂烟酰胺，小肠类器官存活率均明显好于模型对照组。从图4和图7可以看出，采用X射线照射24小时后，相对于模型对照组，给予烟酰胺处理的给药组的小肠类器官面积相对较大。综上，说明辐射24小时后对小肠类器官给予以SIRT1抑制剂烟酰胺处理，对小鼠的小肠类器官损伤有治疗作用。

另外，通过研究不同时间给药烟酰胺对X射线6Gy照射引起肠道损伤的保护效果发现，照射后24小时给药小肠类器官的存活率明显高于照射前24小时给药和照射后1小时给药(与前面给药时间数据(图3相关联)。进一步对照射后24小时给药的治疗方式进行验证，通过加强照射，采用X射线8Gy，并于照射后24小时给予烟酰胺10mM，观察对引起肠道损伤的保护效果。结果发现，其存活率(19.65±2.67％)显著高于模型对照组(3.46±0.74％)。由此可以确定，最佳给药时间应为照射后24小时给药。

实施例2

研究EX527对放射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时取三组小肠类器官，并分别设为模型对照组、照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给EX527组。采用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)8Gy对模型对照组、照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给EX527组三组小肠类器官进行照射，其中，模型对照组不给药，照后24小时给烟酰胺组在照射后24小时给药烟酰胺10mM，照后24小时给EX527组于照后24小时给EX527(100μM)。将上述三组分别培养5天后观察给药组(照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给EX527组)与模型对照组器官存活率及大小差异。

结果：图8显示了模型对照组和照后24小时给药组在显微镜下的形貌图。图9显示了模型对照组、24小时给烟酰胺组、照后24小时给EX527组的小肠类器官存活率。

其中，X射线8Gy照射后，对照组和照射后24小时给予EX527(100μM)处理的治疗组的在显微镜下的形貌如图8所示。培养5天后，照射后24小时给予EX527处理的治疗组与对照组类器官的存活率如图9所示，照射后24小时给予EX527处理的治疗组的存活率为19.32±1.67％，烟酰胺对照组的存活率为19.65±2.67％，对照组的存活率为6.81±0.33％，(Mean±SD，EX527vs对照p＜0.0001)。

结论：从图8可以看出，采用X射线照射后，小肠类器官损伤严重，照射后24小时给予EX527处理的治疗组的小肠类器官损伤得到有效恢复。从图9可以看出，X射线8Gy照射24小时后，给予EX527处理的治疗组对比对照组类器官存活率明显升高，其作用等同于烟酰胺(10mM)。综上，说明辐射24小时后对小肠类器官给予以SIRT1抑制剂EX527处理，对小鼠的小肠类器官损伤有治疗作用。

实施例3

研究Sirtinol对放射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时，取五组小肠类器官，并分别设为模型对照组、照后24小时给Sirtinol(10μM)组、照后24小时给Sirtinol(50μM)组、照后24小时给Sirtinol(100μM)组、照射后24小时给药烟酰胺(10mM)。后用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)照射8Gy，照射后24小时加入不同浓度的SIRT1抑制剂Sirtinol(10μM、50μM、100μM)，并设DMSO对照及烟酰胺对照。培养5天后观察治疗组与对照组类器官存活率差异。

结果：图10显示了模型对照组、照后24小时给Sirtinol(10μM)组、照后24小时给Sirtinol(50μM)组、照后24小时给Sirtinol(100μM)组、照射后24小时给药烟酰胺(10mM)的小肠类器官存活率。

其中，培养5天后，照射后24小时给予Sirtinol处理的治疗组与对照组类器官的存活率如图10所示，照射后24小时给予Sirtinol(100μM)处理的治疗组的存活率为10.52±0.88％，烟酰胺组的存活率为21.92±0.72％，对照组的存活率为4.00±0.70％，(Mean±SD，Sirtinol vs对照p＜0.001)。

结论：X射线8Gy照射24小时后，给予Sirtinol处理的治疗组对比对照组类器官存活率明显升高，说明辐射24小时后对小肠类器官给予以SIRT1抑制剂Sirtinol处理，对小鼠的小肠类器官损伤有治疗作用。

实施例4

研究Salermide对放射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时，取五组小肠类器官，并分别设为模型对照组、照后24小时给Salermide(10μM)组、照后24小时给Salermide(50μM)组、照后24小时给Salermide(100μM)组、照射后24小时给药烟酰胺(10mM)。后用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)照射8Gy，照射后24小时加入不同浓度的SIRT1抑制剂Salermide(10μM、50μM、100μM)，并设DMSO对照及烟酰胺对照。培养5天后观察治疗组与对照组类器官存活率差异。

结果：图11显示了模型对照组、照后24小时给Salermide(10μM)组、照后24小时给Salermide(50μM)组、照后24小时给Salermide(100μM)组、照射后24小时给药烟酰胺(10mM)的小肠类器官存活率。

其中，培养5天后，照射后24小时给予Salermide处理的治疗组与对照组类器官的存活率如图11所示，照射后24小时给予Salermide(100μM)处理的治疗组的存活率为23.77±0.80％，烟酰胺(10mM)组的存活率为21.92±0.72％，对照组的存活率为4.00±0.70％，(Mean±SD，Salermide vs对照p＜0.001)。

结论：X射线8Gy照射24小时后，给予Salermide(100μM)处理的治疗组对比对照组类器官存活率明显升高，且作用等同于烟酰胺(10mM)，说明辐射24小时后对小肠类器官给予以SIRT1抑制剂Salermide处理，对小鼠的小肠类器官损伤有治疗作用。

实施例5

研究Inauhzin对放射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时，取三组小肠类器官，并分别设为模型对照组、照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给Inauhzin组。采用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)8Gy对模型对照组、照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给Inauhzin组三组小肠类器官进行照射，其中，模型对照组不给药，照后24小时给烟酰胺组在照射后24小时给药烟酰胺10mM，照后24小时给Inauhzin组于照后24小时给Inauhzin(10μM)。将上述三组分别培养5天后观察给药组(照后24小时给烟酰胺组、照后24小时给Inauhzin组)与模型对照组器官存活率差异。

结果：图12显示了模型对照组、24小时给烟酰胺组、照后24小时给Inauhzin(10μM)组的小肠类器官存活率。

其中，培养5天后，照射后24小时给予Inauhzin(10μM)处理的治疗组与对照组类器官的存活率如图12所示，照射后24小时给予Inauhzin(10μM)处理的治疗组的存活率为13.50±0.59％，烟酰胺组的存活率为17.40±0.50％，对照组的存活率为1.60±0.26％，(Mean±SD，Inauhzin vs对照p＜0.001)。

结论：X射线8Gy照射24小时后，给予Inauhzin处理的治疗组对比对照组类器官存活率明显升高，说明辐射24小时后对小肠类器官给予以SIRT1抑制剂Inauhzin处理，对小鼠的小肠类器官损伤有治疗作用。

对比例1

研究SIRT2抑制剂(Splitomicin、Thiomyristoyl、SirReal2、AGK2)对放射引起肠道损伤的保护效果：

从8-12周龄C57BL小鼠分离小肠隐窝，种植于基质胶中加条件培养基，接种24小时后用x-ray(RAD-320X光机(PXI，美国)照射8Gy，照射后24小时加入不同浓度的SIRT2抑制剂Splitomicin((10μM、50μM、100μM)、Thiomyristoyl(100nM、1μM、10μM)、SirReal2(200nM、1μM、10μM)、AGK2(5μM、10μM、50μM))，并设DMSO对照及烟酰胺对照。培养5天后观察治疗组与对照组类器官存活率及大小差异。

结果：图13显示了模型对照组和照后24小时给药组：分别为Splitomicin((10μM、50μM、100μM)、Thiomyristoyl(100nM、1μM、10μM)、SirReal2(200nM、1μM、10μM)、AGK2(5μM、10μM、50μM)的小肠类器官存活率。

其中，培养5天后，照射后24小时给予SIRT2抑制剂(Splitomicin、Thiomyristoyl、SirReal2、AGK2)处理的治疗组与对照组类器官的存活率如图13所示，照射后24小时，给予Splitomicin(100μM)处理的存活率为3.57±0.73％，给予Thiomyristoyl(10μM)处理的存活率为6.30±0.53％，给予SirReal2(10μM)处理的存活率为4.69±0.40％，给予AGK2(50μM)处理的存活率为3.12±0.80％。

结论：X射线8Gy照射24小时后，SIRT2抑制剂(Splitomicin、Thiomyristoyl、SirReal2、AGK2)处理的治疗组比对照组类器官存活率无升高。

实施例6

研究烟酰胺对隐窝的促再生效果：

8-12周龄C57BL/6小鼠12只，分别给予14Gy腹部X射线照射，照射后小鼠随机分为两组设对照组和治疗组，每组6只。治疗组在照射后24小时治疗组小鼠给予烟酰胺(1000mg/Kg)腹腔注射，对照组给予相应溶剂PBS腹腔注射。照射3.5天处死小鼠取小肠做病理切片HE染色，观察小肠横截面再生隐窝数量。

结果：图14显示了模型对照组和治疗组的辐射后3.5天小肠横截面在显微镜下的形貌对比图；图15显示了模型对照组和治疗组的辐射后3.5天再生隐窝数量对比。

其中，14Gy腹部X线照射3.5天后，对照组与治疗组的小肠横截面在显微镜下的形貌如图14所示，对照组与治疗组的小鼠隐窝数量图如图15所示，治疗组的小鼠隐窝数量为25.59±11.31，对照组的小鼠隐窝数量为11.36±6.71，(Mean±SD，p＜0.0001)。

从图14和图15可以得出以下结论：照射后24小时次给予烟酰胺(1000mg/Kg)处理后，小鼠的隐窝数量明显多于对比组，说明X射线照射后，给予烟酰胺处理可以促进隐窝再生。

实施例7

研究烟酰胺对提高辐射后小鼠的存活率效果：

(1)动物实验，8-12周龄C57BL/6小鼠32只，分别给予14Gy腹部X射线照射，照射后小鼠随机分为两组设对照组和治疗组，每组16只。照射后24小时治疗组小鼠给予烟酰胺(1000mg/Kg)腹腔注射，对照组给予相应溶剂PBS腹腔注射。观察生存情况。

结果与结论：图16显示了模型对照组和治疗组(单次给药)辐射后小鼠存活率差异；其中，X射线照射后治疗组与对照组小鼠的生存情况如图16所示，结果显示，照射对照组15只小鼠在5-9天死亡，只有1只小鼠存活。治疗组7只小鼠在5-9天死亡，有9只小鼠存活。治疗组与对照组生存率分别为56.25％和6.25％。

(2)8-12周龄C57BL/6小鼠12只，分别给予15Gy腹部X线照射，照射后小鼠随机分为两组设对照组和治疗组，每组6只。治疗组在照射后分别24小时、72小时治疗组小鼠给予烟酰胺(1000mg/Kg)腹腔注射。对照组给予相应溶剂PBS腹腔注射。观察生存情况。

结果与结论：图17显示了模型对照组和治疗组(两次给药)辐射后小鼠存活率差异；其中，X射线照射后治疗组与对照组小鼠的生存情况如图17所示，结果显示，对照组小鼠在5-9天全部死亡；治疗组小鼠仅2只死亡，剩余4只小鼠生存大于90天。治疗组与对照组生存率分别为66.67％和0。

综上，可以得出以下结论：X线照射24小时后对小鼠给予烟酰胺治疗可以显著提高小鼠的存活率。且X线照射24小时给予烟酰胺治疗后，X线照射72小时再次给予烟酰胺治疗，可以进一步提高小鼠的存活率。

在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不必针对的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。此外，在不相互矛盾的情况下，本领域的技术人员可以将本说明书中描述的不同实施例或示例以及不同实施例或示例的特征进行结合和组合。

尽管上面已经示出和描述了本发明的实施例，可以理解的是，上述实施例是示例性的，不能理解为对本发明的限制，本领域的普通技术人员在本发明的范围内可以对上述实施例进行变化、修改、替换和变型。

Claims

1.SIRT1抑制剂在制备药物中的用途，所述药物用于预防或治疗放射引起的肠道损伤。

2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。

3.根据权利要求1所述的用途，其特征在于，所述肠道损伤为放射性肠炎和/或肠型急性放射病。

4.一种用于预防或治疗放射引起的肠道损伤的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物包含SIRT1抑制剂。

5.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述SIRT1抑制剂为选自salermide、Sirtinol、EX527、Inauhzin和烟酰胺中至少一种。

6.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述肠道损伤为放射性肠炎。

7.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，所述药物组合物的剂型为注射液、片剂、胶囊剂、口服颗粒、灌肠剂。

8.根据权利要求4所述的药物组合物，其特征在于，进一步包含药学上可接受的赋形，所述赋形剂为选自粘合剂、填料、涂膜聚合物、增塑剂、助流剂、崩解剂和润滑剂的至少一种。

9.一种治疗或预防放射引起的肠道损伤的方法，其特征在于，对动物提供权利要求4-8中任一项所述的药物组合物。

10.根据权利要求9所述的方法，其特征在于，在所述动物受辐射后，对所述动物提供所述的药物组合物。