CN107345221A - 一种TGF‑β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法及在类风湿疾病的应用 - Google Patents

一种TGF‑β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法及在类风湿疾病的应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种TGF‑β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法及在类风湿疾病的应用；本发明中所述间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能、具有免疫调节功能，所述TGF‑β1也可促进间充质干细胞的作用并抑制造血细胞因子的产生；TGF‑β1修饰后的间充质干细胞具有可制备治疗类风湿疾病药物的用途。

Description

一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法及在类风湿疾 病的应用
技术领域
本发明涉及生物与新医药技术领域，更具体的说，是一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法及在类风湿疾病的应用。
背景技术
类风湿关节炎(rheumatoid arthritis，RA)是一种慢性全身性自身免疫性疾病。它是以全身关节炎症改变为主的疼痛性疾病。可侵犯全身各处关节，呈多发性和对称性慢性增生性滑膜炎，由此引起关节软骨和关节囊的破坏，最后导致关节强直畸形。免疫系统的主要功能是甄别外来物质并将之清除，在细胞免疫中，巨噬细胞识别外来组织，细胞或抗原等物质，经处理后传递给T细胞，T细胞激活后产生细胞因子，并聚集其他炎症细胞(包括其他T细胞和巨噬细胞)产生更多细胞因子，大量巨噬细胞被激活并且释放了白细胞介素-1(IL-1)和肿瘤坏死因子(TNF)，致使软骨细胞和滑膜细胞释出细胞毒素，造成关节及其周围正常细胞和组织伤害，滑膜增生，骨和软骨受损。T细胞还可激活体液免疫中的B细胞，使之产生抗体，联合补体在炎症部位吸引多形核白细胞，后者释放细胞因子和自由氧残基造成细胞损害。
转化生长因子-β(transforming growth factor-β,TGF-β)是属于一组新近发现的调节细胞生长和分化的TGF-β超家族。TGF-β1、β2和β3功能相似，一般来说，TGF-β对间充质起源的细胞起刺激作用，而对上皮或神经外胚层来源的细胞起抑制作用。TGF-β1具有抑制免疫活性细胞的增殖、抑制淋巴细胞的分化和调节细胞表型等作用。关键是TGF-β1可以抑制细胞因子的产生，如抑制PBMC中IFN-γ和TNF-α的产生。
间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)是干细胞家族的重要成员，来源于发育早期的中胚层和外胚层，属于多能干细胞。MSC最初在骨髓中发现，因其具有多向分化潜能、造血支持和促进干细胞植入、免疫调控和自我复制等特点而日益受到人们的关注。本研究采用的是脐带间充质干细胞，脐带间充质干细胞在体内或体外特定的诱导条件下，可分化为脂肪、骨、软骨、肌肉、肌腱、韧带、神经、肝、心肌、内皮等多种组织细胞，连续传代培养和冷冻保存后仍具有多向分化潜能，可作为理想的种子细胞用于衰老和病变引起的组织器官损伤修复。也可以用于治疗类风湿关节炎和心脑血管疾病、骨和肌肉衰退性疾病。
发明内容
本发明提供了一种TGF-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)修饰脐带间充质干细胞的技术，以及所述间充质干细胞用于治疗类风湿疾病的药物的用途。具体包括：
(1)TGF-β1基因
本发明中委托北京博迈德基因技术有限公司合成TGF-β1基因，并连接到pUC57克隆载体上，进行扩增测序，表1中的引物用于PCR扩增。
表1 TGF-β1引物表
(2)重组病毒表达载体
本发明中使用的载体是慢病毒载体pLent-C-GFP，pLent-C-GFP表达基因载体含有一个原始复制子(origin of replication)，一个巨细胞病毒的启动子序列(CMV)，和限制性内切酶位点(NotI，AsiSI等)，选择性的抗性基因(抗氨苄青霉素)及标签蛋白(绿色荧光蛋白)。通过NotI和AsiSI双酶切后的TGF-β1基因，即目标DNA，在T4连接酶作用下，与载体DNA连接，形成表达TGF-β1的完整载体pLent-TGF-β1(见图1)。
(3)宿主细胞
本发明所用的宿主细胞为脐带间充质干细胞(mesenchymal stem cells,MSC)。MSC是属于中胚层的一类多能干细胞，主要来源于结缔组织。本实验中主要是从脐带中获取，成为脐带间充质干细胞。MSC具有以下优势：(1)MSC具有增值速度快和多向分化潜能；(2)MSC具有具有免疫调节功能；(3)多次传代扩增后仍具有干细胞特性，不存在免疫排斥的特性；(4)面目模糊，表面抗原不明显，异体移植排异较轻，配型要求不严格。
(4)经TGF-β1修饰后脐带间充质干细胞的应用途径及剂量
本发明中包含TGF-β1修饰后脐带间充质干细胞，所用间充质干细胞的数量为0.5×106～1×108/Kg。通常所用的间充质干细胞的剂量为0.5×106-1.0×107/kg。
发明优点：本发明中所述间充质干细胞具有强大的增殖能力和多向分化潜能、具有免疫调节功能，所述TGF-β1也可促进间充质干细胞的作用并抑制造血细胞因子的产生，TGF-β1修饰后的间充质干细胞具有可制备治疗类风湿疾病药物的用途，类风湿疾病是由于分泌过多的细胞因子引起的，而TGF-β1可以抑制细胞因子的产生，间充质干细胞也治疗类风湿疾病，将TGF-β1全长基因导入间充质干细胞中，增强间充质干细胞的作用，达到强强联合的效果。
附图说明
图1为本发明所述的慢病毒表达质粒pLent-TGF-β1的示意图；
图2是本发明脐带间充质干细胞显微镜下视野图；
图3是本发明所述的293T细胞明视野图；
图4是慢病毒表达质粒(pLent-TGF-β1)转染293T细胞的显微镜下视野图；
图5是本发明所述病毒感染间充质干细胞显微镜下视野图；
图6是本发明未感染脐带间充质干细胞流式图；
图7是本发明慢病毒感染脐带间充质干细胞的流式图；
具体实施方式
为了使本发明实现的技术手段、创作特征、达成目的与功效易于明白了解，下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。
下面将结合实施例对本发明的实施方案进行详细描述，本领域技术人员将会理解，下列实施例仅用于说明本发明，而不应视为限定本发明的范围。实施例中未注明具体条件者，按照常规条件或制造商建议的条件进行。所用试剂或仪器未注明生产厂商者，均为可以通过市购获得的常规产品。
实施例1：将基因片段TGF-β1插入慢病毒表达载体pLent-C-GFP
委托北京博迈德基因技术有限公司合成TGF-β1基因全长序列，并将其连接到pUC57克隆载体上，进行测序，在NCBI上比对序列，正确后插入pLent-C-GFP载体(Invitrogen)NotI-AsiSI位点(见图1)，转化到E.coli(TOP10)，使用OMEGA公司的质粒纯化试剂盒提取并纯化质粒，获得各重组表达载体的高品质质粒。
实施例2：pLent-TGF-β1修饰间充质干细胞的制备
(一)脐带间充质干细胞的制备
取新生儿的脐带，在超净工作台中分离出脐带中的华氏胶组织，剪碎至0.5mm2大小的小块，用UltraCULTURE培养基培养，每天用显微镜观察，直至间充质干细胞铺满瓶底，进行传代，传代后细胞生长速度加快，每2-3天传一代，传至P4代用于实验(见图2)。
(二)慢病毒包装质粒脂质体转染293T细胞
从液氮罐中取出冻存的293T细胞，迅速丢入37℃水浴锅中并快速晃动，尽量在1～2min内使细胞溶液完全溶解。将细胞溶液转移到50mL离心管中，并在其中加上5mL新鲜的完全培养基，混匀后离心，1500rpm，5min。去掉上清，加入1mL新鲜的完全培养基重悬细胞沉淀后，转入六孔板中，每个孔中补足到3mL培养基。将六孔板平稳放入37℃、5％CO2和95％相对湿度的培养箱中培养。第二天观察细胞存活率，并更换培养基。以后每天观察细胞生长情况，细胞状态良好时用于实验(见图3)。
取状态良好的6×105个293T细胞在六孔板中培养，为第二天的转染做准备。转染前将六孔板换成新鲜DMEM培养液(购自Gibco公司)，37℃温箱中培养1h。将LipoFiterTM脂质体转染试剂(购自汉恒生物)混匀，pLent-TGF-β1和辅助质粒psPAX2、pMDNA2G三种质粒以4:3:1的比例将4.0μg的DNA溶解于100μL的DMEM培养基中，同时12μL的LipoFiterTM溶于88μL的DMEM培养基中，各自室温静置20分钟。将以上两步中的DNA和LipoFiterTM混匀，室温孵育20分钟。将LipoFiterTM-DNA混合物加入六孔板的一个孔中，培养6小时后，去除LipoFiterTM-DNA培养液，加入新鲜培养基继续培养。48小时后，显微镜下观察293T细胞转染后的形态变化，并用流式细胞技术检测GFP的表达率(图4)。将含有病毒的细胞培养上清吸入EP管中，4℃，2000g离心10min，转移至新的EP管中，测定病毒滴度，4.5μm滤器过滤后-80℃保存。
(三)慢病毒感染脐带间充质干细胞及感染后脐带间充质干细胞的扩增培养
从-80℃拿出2ml病毒液，加入终浓度为8μg/ml的聚凝胺(购自Sigma公司)，用该病毒液重悬传代时的间充质干细胞，使病毒颗粒数与间充质干细胞数比例约为3:1，37℃，5％的CO2培养箱中培养48小时。将感染的细胞进行传代，37℃，5％的CO2培养箱中继续培养48h，流式细胞技术检测病毒的感染效率(见图5)。
(四)利用流式细胞技术检测pLent-TGF-β1在间充质干细胞中的表达效率；
从培养瓶中分别取出2mL感染的脐带间充质干细胞和未感染的间充质干细胞，利用流式细胞仪分别检测感染细胞和未感染细胞的GFP表达率，病毒感染效率非常高，达到99.2％(见图6、图7)。
实施例3：TGF-β1修饰的间充质干细胞治疗类风湿关节炎
(一)治疗前相关工作：
病人在进行间充质干细胞治疗前，一定要进行全身身体检查，尤其是心、肺、肝、肾功能及血液检测，以确保病人治疗安全，具体检查如下：
1：心脏功能检查：
治疗前，对病人心脏功能进行评级，如果病人心脏功能在三级或三级以上，则病人不适宜进行此治疗。
2：肺功能检查：
肺功能检查通常包括肺通气试验和血液中血氧饱和度检查，如果用力吹气试验(FEV1)小于50％或小于200毫升，血氧饱和度低于90％，则病人不适宜进行治疗，需要进行相应的治疗后，然后考虑进行嵌合抗原受体T细胞治疗。
3：血液常规检查：
在治疗前，对病人进行血液常规检查，检查结果要求病人中性白细胞要大于1500个/mm3,血小板大于100000个/mm3,血红蛋白大于8g/dl,如果病人不能满足要求，则需要进行相应治疗以满足上述要求。
4：肝肾功能检查：
血生化检查中，谷丙转氨酶、天门冬氨酸氨基转移酶不能超出正常值上限的两倍，总胆红素不能超出正常值上限的1.5倍，肌酐要小于或等于1.6mg/ml,或肌酐清除率要大于70ml/min/1.73m2。
5：传染性疾病检查：
同时，对病人进行HIV,乙肝、丙肝等检查，以排除病人可能的医院传染。
6：同时要对适龄已婚妇女进行相关检查，排除病人已经怀孕可能。
7：与病人家属签署知情同意书。
(二)治疗前用药：
通过上述检查，病人符合进行间充质干细胞治疗要求，安排病人进行间充质干细胞回输。
回输前30分钟，给予病人苯海拉明20mg,im，同时给予地塞米松5mg，iv。
(三)回输治疗：
本发明中，TGF-β1修饰的间充质干细胞回输的总剂量为3×107个。
在回输过程中，要求静脉滴注速度在5-10ml/min，如果病人因为身体原因不能耐受，可以把滴注速度适当放缓，以满足病人要求。
同时，在回输过程中，用心电检测仪对病人生命体征进行持续监测至回输完成后3小时。
(四)回输后跟踪随访：
病人回输完成后，要密切观察病人的生命体征及可能出现的副作用。
常见的副作用有：
1：皮肤发红、瘙痒
2：病人出现心慌、胸闷、呼吸困难
3：腹泻
4：皮下出血、皮疹
5：持续高热
6：谵妄，臆语等神经系统症状
如果出现上述症状，说明病人可能出现了细胞因子综合征，或者是移植物抗宿主病反应，应给予病人激素及对应治疗，这些症状一般持续一周左右后消失。
以上显示和描述了本发明的基本原理、主要特征及本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界。
序列表（SEQ ID NO.1）
<110> 山东兴瑞生物科技有限公司
<120> 一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法和在类风湿疾病的应用
<130> 2017
<160> 1
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 1170
<212> DNA
<213> 人种（Homo sapiens）
<400> 1
atgccgccct ccgggctgcg gctgctgccg ctgctgctac cgctgctgtg gctactggtg 60
ctgacgcctg gccggccggc cgcgggacta tccacctgca agactatcga catggagctg 120
gtgaagcgga agcgcatcga ggccatccgc ggccagatcc tgtccaagct gcggctcgcc 180
agccccccga gccaggggga ggtgccgccc ggcccgctgc ccgaggccgt gctcgccctg 240
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ctggagccgc tgcccatcgt gtactacgtg ggccgcaagc ccaaggtgga gcagctgtcc 1140
aacatgatcg tgcgctcctg caagtgcagc 1170

Claims (7)

1.一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：将TGF-β1的核苷酸序列合成，连接到pUC57克隆载体上，进行测序；测序后用NotI和AsiSI酶切，构建pLent-TGF-β1质粒，将所述pLent-TGF-β1质粒转染293T细胞，包装成携带有TGF-β1编码基因的慢病毒，将所述携带TGF-β1编码基因的慢病毒感染P4代的脐带间充质干细胞，得到TGF-β1修饰脐带间充质干细胞。
2.如权利要求1所述的一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于：所述的编码TGF-β1的基因片段为序列表SEQ.ID.NO.1所示的核苷酸序列。
3.如权利要求1所述的一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，所述P4代的脐带间充质干细胞如下制备：取新生儿的脐带，分离出其中的华氏胶组织，剪碎至0.5mm2大小的小块，用UltraCUL TURE培养基培养传代，传至P4代时用于此实验。
4.如权利要求1所述的一种TGF-β1修饰脐带间充质干细胞的制备方法，其特征在于，将所述携带TGF-β1编码基因的慢病毒感染P4代的间充质干细胞如下操作：所述携带TGF-β1编码基因的质粒转染293T细胞后，所述293T细胞释放慢病毒颗粒，收集上清，测定病毒滴度，所述慢病毒颗粒感染P4代间充质干细胞。
5.权利要求1所述的TGF-β1修饰脐带间充质干细胞用于制备治疗类风湿疾病的药物的用途。
6.一种治疗类风湿的药物，其特征在于：含有权利要求1所述的TGF-β1修饰脐带间充质干细胞，用来治疗类风湿治病。
7.如权利要求5所述的用于制备治疗类风湿疾病的药物的用途，其特征在于：所述类风湿疾病为类风湿关节炎，但并不局限于类风湿关节炎，还可以治疗超敏性血管炎，血清阴性脊柱关节病，骨性关节炎等类风湿疾病。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111575248A (zh) * 2020-06-01 2020-08-25 艾一生命科技(广东)有限公司 一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用
CN114657144A (zh) * 2022-03-31 2022-06-24 中海峡(福建)细胞生物科技有限公司 一种同时分泌人IL-10和TGF-β的可示踪脐带间充质干细胞的制备及其应用

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102899293A (zh) * 2012-11-01 2013-01-30 上海市肺科医院 促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞、及其构建方法与应用
CN103203025A (zh) * 2012-01-13 2013-07-17 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 一种基因修饰的间充质干细胞在肺纤维化治疗中的应用
CN104862281A (zh) * 2015-06-09 2015-08-26 四川大学 表达bFGF和PDGF-BB的重组载体修饰的间充质干细胞及其制备方法和用途
CN106167791A (zh) * 2016-05-03 2016-11-30 连祺周 MSC‑TNF α‑AB干细胞及其制备方法和应用
CN106282121A (zh) * 2016-09-09 2017-01-04 深圳市茵冠生物科技有限公司 一种携带色素上皮衍生因子基因的重组慢病毒修饰人脐带间充质干细胞及其制备方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN103203025A (zh) * 2012-01-13 2013-07-17 中国人民解放军军事医学科学院放射与辐射医学研究所 一种基因修饰的间充质干细胞在肺纤维化治疗中的应用
CN102899293A (zh) * 2012-11-01 2013-01-30 上海市肺科医院 促血管生成素1基因修饰的间充质干细胞、及其构建方法与应用
CN104862281A (zh) * 2015-06-09 2015-08-26 四川大学 表达bFGF和PDGF-BB的重组载体修饰的间充质干细胞及其制备方法和用途
CN106167791A (zh) * 2016-05-03 2016-11-30 连祺周 MSC‑TNF α‑AB干细胞及其制备方法和应用
CN106282121A (zh) * 2016-09-09 2017-01-04 深圳市茵冠生物科技有限公司 一种携带色素上皮衍生因子基因的重组慢病毒修饰人脐带间充质干细胞及其制备方法

Non-Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
KUO SJ ET AL.: ""Homo sapiens transforming growth factor beta 1 (TGFB1), mRNA，Accession No:NM _000660.6"", 《GENBANK》 *
曹颖光等: ""TGF - β1、EGFP双基因修饰骨髓间充质干细胞的体外实验研究"", 《口腔医学研究》 *
郭晓东等: ""转化生长因子β1基因转染间充质干细胞对关节软骨的保护作用"", 《中华老年医学杂》 *

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111575248A (zh) * 2020-06-01 2020-08-25 艾一生命科技(广东)有限公司 一种慢病毒、重组间充质干细胞及其构建方法和应用
CN114657144A (zh) * 2022-03-31 2022-06-24 中海峡(福建)细胞生物科技有限公司 一种同时分泌人IL-10和TGF-β的可示踪脐带间充质干细胞的制备及其应用

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