CN107344967A - 一种比伐卢定的制备及纯化方法 - Google Patents

一种比伐卢定的制备及纯化方法 Download PDF

Info

Publication number
CN107344967A
CN107344967A CN201710415857.3A CN201710415857A CN107344967A CN 107344967 A CN107344967 A CN 107344967A CN 201710415857 A CN201710415857 A CN 201710415857A CN 107344967 A CN107344967 A CN 107344967A
Authority
CN
China
Prior art keywords
resin
fragment
gly
bivalirudin
otbu
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Pending
Application number
CN201710415857.3A
Other languages
English (en)
Inventor
李振国
陈艳明
刘东明
韦怀福
南志远
郭亚芳
周剑波
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co Ltd
Original Assignee
Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co Ltd
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co Ltd filed Critical Mudanjiang Youbo Pharmaceutical Co Ltd
Priority to CN201710415857.3A priority Critical patent/CN107344967A/zh
Publication of CN107344967A publication Critical patent/CN107344967A/zh
Pending legal-status Critical Current

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/81—Protease inhibitors
    • C07K14/815—Protease inhibitors from leeches, e.g. hirudin, eglin
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02P—CLIMATE CHANGE MITIGATION TECHNOLOGIES IN THE PRODUCTION OR PROCESSING OF GOODS
    • Y02P20/00—Technologies relating to chemical industry
    • Y02P20/50—Improvements relating to the production of bulk chemicals
    • Y02P20/55—Design of synthesis routes, e.g. reducing the use of auxiliary or protecting groups

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)

Abstract

本发明是一种比伐卢定的制备及纯化方法，具体方法为：以2‑Cl‑Resin为载体，以保护的氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，经缩合、脱保护依次得到保护的肽片段，由两个肽片段固相合成比伐卢定，两个肽片段主要在Gly处按一定摩尔比连接，包括10肽+10肽片段法，12肽+8肽片段法，13肽+7肽片段法，最后经裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，得比伐卢定纯品，其中优选10肽+10肽片段制备纯化法。本发明方法制备的比伐卢定纯度和收率高，经检测比伐卢定中未发现光学异构体，同时反应条件温和，成本低，条件简单，易于产业化。

Description

一种比伐卢定的制备及纯化方法
技术领域
本发明为药物合成领域，具体为一种多肽药物比伐卢定的合成方法。
背景技术
比伐卢定，英文名Bivalirudin，商品名Angiomax，由美国Medicines公司申请，2000年12月经FDA批转在美国上市，作为一种直接凝血酶抑制剂，它来源于水蛭素衍生物，是一种化学合成的含20个氨基酸的多肽，是凝血酶直接的、特异的、可逆性抑制剂。其相对分子质量为2180.29，分子式：C98H138N24O33，氨基酸序列为：D-Phe-Pro-Arg-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn-Gly-Asp-Phe-Glu-Glu-Ile-Pro-Glu-Glu-Tyr-Leu-OH。早期的临床研究显示，比伐卢定抗凝疗效确切，且出血事件的发生率较低，和传统的肝素抗凝治疗相比更为安全，对于接受经皮冠状动脉介入治疗(PCI)的患者，比伐卢定可用于替代肝素，并且随着对比伐卢定临床试验的不断研究，其在别的适应症方面亦表现出了不错的治疗效果，因此比伐卢定的未来应用前景极为广阔。
关于比伐卢定的制备方法，国内外已有大量报道。合成方法包括了固相合成、液相合成、固液相合成，本专利主要关注比伐卢定固相合成方法。
多数已报道的固相合成方法采用氨基酸逐个偶联合成，周期长，逐步偶联时树脂反应难以完全，因固相载体选用的取代值限制，总收率较低，同时杂质较多，纯化困难，且随着反应进行，树脂上的肽段变长，对于后上的活性较低的氨基酸，反应困难或不完全。而部分报道虽对上述方法有所改进，在逐个偶联的氨基酸中，部分肽段采用一次性接入的制备方法，但对于后续的其他氨基酸接入，对于氨基酸接入反应的难易度及完全度是一样的，不会有改善。
本发明采用两个肽片段分别固相合成，每个片段的收率都很高，且接入点选择Gly处，由于其活性强，且空间位阻小，使比伐卢定总收率也很高，且经检测比伐卢定中未发现光学异构体，同时反应条件温和，成本低，条件简单，易于产业化。
发明内容
本发明所要解决的技术问题是针对现有方法合成收率低、生产成本高、产品纯化困难等技术的不足，提出一种新的比伐卢定的制备及纯化方法，该方法显著提高了比伐卢定的收率与纯度，反应条件简单可控，易于工业化生产。
为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：
以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以2-Cl-Resin为载体，以保护的氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，经缩合、脱保护依次得到保护的肽片段，由两个肽片段固相合成比伐卢定，两个肽片段主要在Gly处按一定摩尔比连接，包括10肽+10肽片段法，12肽+8肽片段法，13肽+7肽片段法，最后经裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，得比伐卢定纯品，其中优选10肽+10肽片段制备纯化法。
1、其中，所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法中，10肽+10肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[1-10]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，纯化过程中加入有机溶剂，饱和烷烃、醚类、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE、CH2Cl2，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[11-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，得到序列为：Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-树脂
使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中步骤(1)与(2)中所用到的2-Cl-Resin取代度为0.5mmol～2.0mmol/g，优选为0.8～1.5mmol/g；
所述脱保护试剂为20％哌啶DMF溶液，缩合过程中所用的缩合剂组合为HATU或DIC与HOBT的组合。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，缩合过程中所使用的有机碱为DIPEA、TEA、NMR中的任意一种。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸缩合反应时间为0.5-4小时。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸与树脂载样量摩尔比为2∶1～5∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的裂解剂为CH2Cl2-TFE(比例为1～4∶1，V/V)或者CH2Cl2-TFE-AcOH(6～8∶1～2∶1～2，v/v/v)，优选CH2Cl2-TFE(4∶1)，CH2Cl2-TFE-AcOH(8∶1∶1)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的纯化步骤中，加入饱和烷烃、醚类、CH2Cl2、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂、CH2Cl2，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE，CH2Cl2。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，片段1与片段2的摩尔比为1.1～2∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中比伐卢定肽树脂的裂解剂为CH2Cl2-TFA(1～4∶1)或TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)，优选TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中纯化使用高效液相色谱法，纯化条件：以十八烷基键合硅胶为固定相(YMC公司的Triart Prep C18-S)，色谱柱规格为250×30mm，粒径10μm，粒空隙12nm，流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液，检测波长210nm，设置洗脱梯度。
2、其中，所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法中，12肽+8肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，经缩合、脱保护依次得到保护的[1-8]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，纯化过程中加入有机溶剂，饱和烷烃、醚类、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE、CH2Cl2，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[9-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，得到序列为：Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-树脂
使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中步骤(1)与(2)中所用到的2-Cl-Resin取代度为0.5mmol～2.0mmol/g，优选为0.8～1.5mmol/g；
所述脱保护试剂为20％哌啶DMF溶液，缩合过程中所用的缩合剂组合为HATU或DIC与HOBT的组合。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，缩合过程中所使用的有机碱为DIPEA、TEA、NMR中的任意一种。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸缩合反应时间为0.5-4小时。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸与树脂载样量摩尔比为2∶1～5∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的裂解剂为CH2Cl2-TFE(比例为1～4∶1，V/V)或者CH2Cl2-TFE-AcOH(6～8∶1～2∶1～2，v/v/v)，优选CH2Cl2-TFE(4∶1)，CH2Cl2-TFE-AcOH(8∶1∶1)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的纯化步骤中，加入饱和烷烃、醚类、CH2Cl2、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂、CH2Cl2，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE，CH2Cl2。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，片段1与片段2的摩尔比为1.1～2∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中比伐卢定肽树脂的裂解剂为CH2Cl2-TFA(1～4∶1)或TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)，优选TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中纯化使用高效液相色谱法，纯化条件：以十八烷基键合硅胶为固定相(YMC公司的Triart Prep C18-S)，色谱柱规格为250×30mm，粒径10μm，粒空隙12nm，流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液，检测波长210nm，设置洗脱梯度。
3、其中，所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法中，13肽+7肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[1-7]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，纯化过程中加入有机溶剂，饱和烷烃、醚类、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE、CH2Cl2，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[8-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，得到序列为：Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-G]y-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(OtBu)-Leu-树脂
使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中步骤(1)与(2)中所用到的2-Cl-Resin取代度为0.5mmol～2.0mmol/g，优选为0.8～1.5mmol/g；
所述脱保护试剂为20％哌啶DMF溶液，缩合过程中所用的缩合剂组合为HATU或DIC与HOBT的组合。
根据所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，缩合过程中所使用的有机碱为DIPEA、TEA、NMR中的任意一种。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸缩合反应时间为0.5-4小时。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，氨基酸与树脂载样量摩尔比为2∶1～5∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的裂解剂为CH2Cl2-TFE(比例为1～4∶1，V/V)或者CH2Cl2-TFE-AcOH(6～8∶1～2∶1～2，v/v/v)，优选CH2Cl2-TFE(4∶1)，CH2Cl2-TFE-AcOH(8∶1∶1)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(1)中片段1的纯化步骤中，加入饱和烷烃、醚类、CH2Cl2、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂、CH2Cl2，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE，CH2Cl2。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，片段1与片段2的摩尔比为1.1～2∶1。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中比伐卢定肽树脂的裂解剂为CH2Cl2-TFA(1～4∶1)或TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)，优选TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)。
根据所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其中，步骤(3)中纯化使用高效液相色谱法，纯化条件：以十八烷基键合硅胶为固定相(YMC公司的Triart Prep C18-S)，色谱柱规格为250×30mm，粒径10μm，粒空隙12nm，流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液，检测波长210nm，设置洗脱梯度。
本发明采用两个肽片段分别以2-Cl-Resin固相合成，每个片段的收率都很高，且接入点选择Gly处，由于其活性强，且空间位阻小，使比伐卢定总收率也很高，且不会有光学异构体产生，同时该发明方法每步反应所用缩合剂相同，对工业化生产非常有利，氨基酸使用比例不高，成本较低。
本发明涉及的英文缩写所对应的中文名称见下表：
附图说明
图1为未经纯化的片段1的HPLC图
图2为纯化后的片段1的HPLC图
图3为纯化后的片段1的HRMS图
图4为未经纯化的片段1得到的比伐卢定粗肽的HPLC图
图5为纯化片段1后所得比伐卢定粗肽的HPLC图
图6为纯化片段1后所得比伐卢定纯品的HPLC图
图7为纯化片段1后所得比伐卢定纯品的HRMS图
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好的理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的内容仅用于说明本说明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
1、10肽+10肽片段法(实施例1-9)
实施例1：树脂1的制备
固相反应器中加入2-氯三苯甲基氯树脂60.04g(取代度0.8mmol/g)、800ml无水CH2Cl2，浸泡30min充分溶胀后除去溶剂，氮气鼓吹下加入Fmoc-Gly-OH 28.60g(96mmol)、DIPEA 20ml、CH2Cl2(800ml)，室温缓慢搅拌1小时，再加入60ml甲醇继续搅拌15分钟。除去溶剂，树脂经CH2Cl2洗涤(600ml×3次)。35℃减压干燥至恒重，共计干燥15小时，称重得Fmoc-Gly-树脂74.83g，取代度0.83mmol。
实施例2：片段1的制备
取实施例1中获得的Fmoc-Gly-树脂70.05g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液600ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后除去溶剂，树脂DMF洗涤(600ml×3次)，然后依次接入其余2-10个保护的氨基酸，每次偶联加入物料的量分别为：Fmoc-Asn(Trt)-OH64.50g(116.46mmol，596.67)，Fmoc-Gly-OH 34.64g(116.46mmol，297.31)，Fmoc-Gly-OH34.58g(116.46mmol，297.31)Fmoc-Gly-OH 34.57g(116.46mmol，297.31)Fmoc-Gly-OH34.65g(116.46mmol，297.31)，Fmoc-Pro-OH 39.30g(116.46mmol，337.37)，Fmoc-Arg(Pbf)-OH 75.55g(116.46mmol，648.77)，Fmoc-Pro-OH 39.30g(116.46mmol，337.37)，Boc-D-Phe-OH 30.88g(116.46mmol，265.30)HATU 44.3g(116.46，380.23)，DIPEA 41ml(232.93mmol)、DMF600ml，接肽完毕后，DMF洗涤(600ml×3次)，DCM洗涤(600ml×3次)，然后加入CH2Cl2-三氟乙醇-冰乙酸(8∶1∶1，v/v/v)1100ml，室温搅拌1小时过滤除去树脂，滤液充分减压浓缩，水浴温度不超过40℃，得到黄色油状物片段1，所得片段1的HPLC图见图1。
实施例3：片段1的纯化
实施例2所得黄色油状物加入冷正庚烷300ml，强力搅拌30min，静置，上层清液变为淡黄色，倾去上层清液，然后再加入CH2Cl280ml，搅拌使全部溶解，然后缓慢加入MTBE至960ml，搅拌30min，过滤，滤饼经少量MTBE淋洗，得到类白色固体，室温减压干燥过夜，称重得片段85.59g。所得片段1的HPLC图和HRMS图见图2-图3。
实施例4：树脂2的制备
固相反应器中加入2-氯三苯甲基氯树脂50.10g(取代度0.83mmol/g)、800ml无水CH2Cl2，浸泡30min充分溶胀后除去溶剂，氮气鼓吹下加入Fmoc-Leu-OH 29.39g(83.16mmol)、DIPEA 15ml、CH2Cl2(650ml)，室温缓慢搅拌1小时，再加入50ml甲醇继续搅拌15分钟。除去溶剂，树脂经CH2Cl2洗涤(500ml×3次)。35℃减压干燥至恒重，共计干燥15小时，称重得Fmoc-Leu-树脂76.36g。
实施例5：片段2树脂的制备
取Fmoc-Leu-树脂15.11g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液150ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后过滤除去溶剂，树脂DMF洗涤(200ml×3次)，然后依次接入其余2-10个氨基酸，每次偶联加入氨基酸的量分别为：Fmoc-Tyr(tBu)-OH 9.45g(20.57mmol，459.55)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 8.74g(20.57mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 8.75g(20.57mmol，425.47)，Fmoc-Pro-OH 6.94g(20.57mmol，337.37)，Fmoc-Ile-OH7.27g(20.57mmol，353.41)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 8.75g(20.57mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 8.75g(20.57mmol，425.47)，Fmoc-Phe-OH 7.98g(20.57mmol，387.43)，Fmoc-Asp(OtBu)-OH 8.46g(20.57mmol，411.45)，HATU 7.82g(20.57mmol，380.23)，DIPEA 8ml(40.14mmol)、DMF120ml，接肽完毕后，DMF洗涤(120ml×3次)，DCM洗涤(200ml×3次)，35℃真空干燥过夜，得到片段2树脂47.18g。
实施例6：片段2树脂的制备
取Fmoc-Leu-树脂60.03g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液600ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后过滤除去溶剂，树脂DMF洗涤(600ml×3次)，然后依次接入其余2-10个氨基酸，每次偶联加入氨基酸的量分别为：Fmoc-Tyr(tBu)-OH 37.46g(81.52mmol，459.55)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 34.68g(81.52mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 34.68g(81.52mmol，425.47)，Fmoc-Pro-OH 27.50g(81.52mmol，337.37)，Fmoc-Ile-OH28.81g(81.52mmol，353.41)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 34.68g(81.52mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 34.68g(81.52mmol，425.47)，Fmoc-Phe-OH 31.59g(81.52mmol，387.43)，Fmoc-Asp(OtBu)-OH 33.53g(81.52mmol，411.45)，HATU 30.98g(81.52mmol，380.23)，DIPEA28ml(163.04mmol)、DMF500ml，接肽完毕后，DMF洗涤(500ml×3次)，得到片段2树脂。
实施例7：比伐卢定的制备
取实施例2中的片段15.0g溶于DMF 80ml中，再加入DIC 0.91g，HOBT 0.95g，实施例5中的干燥片段24.7g，缓慢搅拌12小时，之后过滤，树脂经过DMF(50ml×3次)洗涤，加入至切割液三氟乙酸-三异丙基硅-水(95∶2.5∶2.5，v/v/v)40ml中室温搅拌2小时，过滤，滤液减压浓缩，残余物加入约60ml冷乙醚搅拌，得到白色悬浮物，过滤，滤饼35℃减压干燥过夜得到粗品肽4.90g，经过HPLC检测其纯度较低，具体见图4。
实施例8：比伐卢定的制备
取实施例3中的片段150.0g溶于DMF 800ml中，再加入DIC 9.1g，HOBT 9.5g，实施例5中的片段2g，缓慢搅拌12小时，之后过滤，树脂经过DMF(500ml×3次)洗涤，加入至切割液三氟乙酸-三异丙基硅-水(95∶2.5∶2.5，v/v/v)500ml中室温搅拌2小时，过滤，滤液减压浓缩，残余物加入约600ml冷乙醚搅拌，得到白色悬浮物，过滤，滤饼35℃减压干燥过夜得到粗品肽50.5g，其HPLC图见图5。
实施例9：比伐卢定粗品纯化
纯化条件：以十八烷基键合硅胶为固定相(YMC公司的Triart Prep C18-S)，色谱柱规格为250×30mm，粒径10μm，粒空隙12nm。流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液。检测波长210nm。设置洗脱梯度。
粗品肽50.5g，经过反相制备色谱制备纯化，冷冻干燥得到成品40.7g，收率80.5％，纯度99.5％。所得比伐卢定HPLC图和HRMS图见图6-图7。
2、12肽+8肽片段法(实施例10-14)
实施例10：树脂1的制备
固相反应器中加入2-氯三苯甲基氯树脂50.10g(取代度1.0mmol/g)、700ml无水CH2Cl2，浸泡30min充分溶胀后除去溶剂，氮气鼓吹下加入Fmoc-Gly-OH 29.73g(100mmol)、DIPEA 21ml、CH2Cl2(700ml)，室温缓慢搅拌1小时，再加入50ml甲醇继续搅拌约15min。除去溶剂，树脂经CH2Cl2洗涤(500ml×3次)。35℃减压干燥至恒重，共计干燥15小时，称重得Fmoc-Gly-树脂64.34g，取代度1.1mmol/g。
实施例11：片段1的制备
取实施例10中获得的Fmoc-Gly-树脂60.03g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液500ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后除去溶剂，树脂DMF洗涤(500ml×3次)，然后依次接入其余2-8个保护的氨基酸，每次偶联加入物料的量分别为：Fmoc-Gly-OH38.14g(128.3mmol，297.31)，Fmoc-Gly-OH 38.14g(128.3mmol，297.31)，Fmoc-Gly-OH38.14g(128.3mmol，297.31)，Fmoc-Pro-OH 43.30g(128.3mmol，337.37)，Fmoc-Arg(Pbf)-OH 83.25g(128.3mmol，648.77)，Fmoc-Pro-OH 43.31g(128.3mmol，337.37)，Boc-D-Phe-OH34.04g(128.3mmol，265.30)，HATU 48.78g(128.3mmol，380.23)，DIPEA 45ml(256.6mmol)、DMF500ml，接肽完毕后，DMF洗涤(500ml×3次)，DCM洗涤(500ml×3次)，然后加入CH2Cl2-三氟乙醇-冰乙酸(8∶1∶1，v/v/v)1200ml，室温搅拌1小时过滤除去树脂，滤液充分减压浓缩，水浴温度不超过40℃，得到淡黄色粘稠油状物，然后乙酸乙酯200ml溶解，缓慢加入冷冻MTBE至淡黄色固体大量析出，搅拌30min，过滤，滤饼室温减压干燥过夜，得到片段149.87g片段1为：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH；
实施例12：树脂2的制备
固相反应器中加入2-氯三苯甲基氯树脂55.10g(取代度1.1mmol/g)、800ml无水CH2Cl2，浸泡30min充分溶胀后除去溶剂，氮气鼓吹下加入Fmoc-Leu-OH 42.72g(121.22mmol)、DIPEA 20ml、CH2Cl2(800ml)，室温缓慢搅拌1小时，再加入60ml甲醇继续搅拌15min。除去溶剂，树脂经CH2Cl2洗涤(600ml×3次)。35℃减压干燥至恒重，共计干燥15小时，称重得Fmoc-Leu-树脂74.25g。
实施例13：片段2树脂的制备
取Fmoc-Leu-树脂35.00g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液400ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后过滤除去溶剂，树脂DMF洗涤(400ml×3次)，然后依次接入其余2-12个氨基酸，每次偶联加入氨基酸的量分别为：Fmoc-Tyr(tBu)-OH 26.26g(57.14mmol，459.55)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 24.31g(57.14mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 24.31g(57.14mmol，425.47)，Fmoc-Pro-OH 19.26g(57.14mmol，337.37)，Fmoc-Ile-OH20.20g(57.14mmol，353.41)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 24.31g(57.15mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 24.31g(57.14mmol，425.47)，Fmoc-Phe-OH 22.15g(57.14mmol，387.43)，Fmoc-Asp(OtBu)-OH 23.51g(57.14mmol，411.45)，Fmoc-Gly-OH 16.97g(57.14mmol，297.31)，Fmoc-Asn(Trt)-OH 34.08g(57.14mmol，596.67)，HATU 21.73g(57.14mmol，380.23)，DIPEA20ml(114.28mmol)、DMF400ml，接肽完毕后，DMF洗涤(400ml×3次)，得到片段2树脂：Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂。
实施例14：比伐卢定的制备
取实施例11中的片段140.2g溶于DMF 500ml中，再加入DIC 7.2g，HOBT 7.7g，实施例13中的片段2，缓慢搅拌12小时，之后过滤，树脂经过DMF(500ml×3次)洗涤，加入至切割液三氟乙酸-三异丙基硅-水(95∶2.5∶2.5，v/v/v)500ml中室温搅拌2小时，过滤，滤液减压浓缩，残余物加入500ml冷乙醚搅拌，得到白色悬浮物，过滤，滤饼35℃减压干燥过夜得到粗品肽71.4g，经过反相制备色谱制备纯化，冷冻干燥得到成品51.7g，收率72.4％，纯度99.4％。
2、13肽+7肽片段法(实施例15-19)
片段1的结构：Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-OH；
实施例15：重复实施例10的方法，制备Fmoc-Gly-树脂，得到Fmoc-Gly-树脂63.24g
实施例16：片段1的制备
取实施例15中获得的Fmoc-Gly-树脂60.00g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液500ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后除去溶剂，树脂DMF洗涤(500ml×3次)，然后依次接入其余2-7个保护的氨基酸，每次偶联加入物料的量分别为：Fmoc-Gly-OH38.77g(130.4mmol，297.31)，Fmoc-Gly-OH 38.77g(130.3mmol，297.31)，Fmoc-Pro-OH43.98g(130.4mmol，337.37)，Fmoc-Arg(Pbf)-OH 84.60g(130.4mmol，648.77)，Fmoc-Pro-OH 44.01g(130.4mmol，337.37)，Boc-D-Phe-OH 34.60g(130.4mmol，265.30)，HATU 49.58g(130.4mmol，380.23)，DIPEA 45ml(260.8mmol)、DMF500ml，接肽完毕后，DMF洗涤(500ml×3次)，DCM洗涤(500ml×3次)，然后加入CH2Cl2-三氟乙醇-冰乙酸(8∶1∶1，v/v/v)1200ml，室温搅拌1小时过滤除去树脂，滤液充分减压浓缩，水浴温度不超过40℃，得到淡黄色粘稠油状物，然后乙酸乙酯200ml溶解，缓慢加入冷冻MTBE至淡黄色固体大量析出，搅拌30min，过滤，滤饼室温减压干燥过夜，得到片段145.46g，片段1为：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-OH
实施例17：树脂2的制备
固相反应器中加入2-氯三苯甲基氯树脂35.10g(取代度1.1mmol/g)、550ml无水CH2Cl2，浸泡30min充分溶胀后除去溶剂，氮气鼓吹下加入Fmoc-Leu-OH 27.32g(77.22mmol)、DIPEA 26ml、CH2Cl2(550ml)，室温缓慢搅拌1h，再加入45ml甲醇继续搅拌15min。除去溶剂，树脂经CH2Cl2洗涤(500ml×3次)。35℃减压干燥至恒重，共计干燥15小时，称重得Fmoc-Leu-树脂46.64g。
实施例18：片段2树脂的制备
取实施例17中树脂242.00g加入至多肽反应器中，20％哌啶-DMF溶液500ml加入至上述所得树脂中，缓慢搅拌30min后过滤除去溶剂，树脂DMF洗涤(500ml×3次)，然后依次接入其余2-13个氨基酸，每次偶联加入氨基酸的量分别为：Fmoc-Tyr(tBu)-OH 39.96g(86.90mmol，459.55)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 36.97g(86.90mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 36.97g(86.90mmol，425.47)，Fmoc-Pro-OH 29.32g(86.90mmol，337.37)，Fmoc-Ile-OH30.70g(86.90mmol，353.41)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 36.97g(86.90mmol，425.47)，Fmoc-Glu(OtBu)-OH 36.97g(86.90mmol，425.47)，Fmoc-Phe-OH 33.67g(86.90mmol，387.43)，Fmoc-Asp(OtBu)-OH 35.75g(86.90mmol，411.45)，Fmoc-Gly-OH 25.83g(86.90mmol，297.31)，Fmoc-Asn(Trt)-OH 51.85g(86.90mmol，596.67)，Fmoc-Gly-OH 25.83g(86.90mmol，297.31)，HATU 33.04g(86.90mmol，380.23)，DIPEA 30ml(173.80mmol)、DMF 600ml，接肽完毕后，DMF洗涤(600ml×3次)，得到片段2树脂：
Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
实施例19：比伐卢定的制备
取实施例16中的片段1 45.0g溶于DMF 500ml中，再加入DIC10.9g，HOBT 11.7g、实施例18中的片段2，缓慢搅拌12小时，之后过滤，树脂经过DMF(500ml×3次)洗涤，加入至切割液三氟乙酸-三异丙基硅-水(95∶2.5∶2.5，v/v/v)600ml中室温搅拌2h，过滤，滤液减压浓缩，残余物加入600ml冷乙醚搅拌，得到白色悬浮物，过滤，滤饼35℃减压干燥过夜得到粗品肽79.4g，经过反相制备色谱制备纯化，冷冻干燥得到成品56.9g，收率71.7％，纯度99.5％。
本发明所阐述的实施例并不是对本发明的限定，上述实施例和说明书中描述的仅为本发明的优选例，任何本领域技术人员根据常规手段可以预见或者微调的变化和改进，均落入本发明的保护范围内。

Claims (13)

1.一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，以2-Cl-Resin为载体，以保护的氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，经缩合、脱保护依次得到保护的肽片段，然后两个肽片段固相合成比伐卢定，两个肽片段主要在Gly处按一定摩尔比连接，所述连接方法包括10肽+10肽片段法，12肽+8肽片段法，13肽+7肽片段法，最后经裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，得比伐卢定纯品，其中优选10肽+10肽片段制备纯化法。
2.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，所述的10肽+10肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[1-10]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-Asn(Trt)-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[11-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
3.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，所述的12肽+8肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[1-8]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[9-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
4.根据权利要求1所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，所述的13肽+7肽片段法，制备及纯化步骤如下：
(1)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc和/或Boc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[1-7]肽树脂，从树脂上裂解下来后进行纯化，得到白色固体片段1，片段1的结构如下：
Boc-D-Phe-Pro-Arg(Pbf)-Pro-Gly-Gly-Gly-OH；
(2)以2-Cl-Resin为载体，通过固相合成方法，以Fmoc保护氨基酸为原料，氨基酸投料量与树脂载样量按一定摩尔比，缩合、脱保护依次得到保护的[8-20]肽树脂，记为片段2，结构如下：
Fmoc-Gly-Asn(Trt)-Gly-Asp(OtBu)-Phe-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Ile-Pro-Glu(OtBu)-Glu(OtBu)-Tyr(tBu)-Leu-树脂；
(3)片段1与片段2按一定摩尔比固相接入片段2树脂，使用裂解剂脱掉保护基及树脂，并经高效液相制备纯化、冷冻干燥，即得比伐卢定纯品。
5.根据权利要求2-4任一项所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，步骤(1)与(2)中所用到的2-Cl-Resin取代度为0.5mmol～2.0mmol/g，优选为0.8～1.5mmol/g；
所述脱保护试剂为20％哌啶DMF溶液，缩合过程中所用的缩合剂组合为HATU或DIC与HOBT的组合。
6.根据权利要求2-4任一项所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于，缩合过程中所使用的有机碱为DIPEA、TEA、NMR中的任意一种。
7.根据权利要求2-4任一项所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于氨基酸缩合反应时间为0.5-4小时。
8.根据权利要求2-4任一项所述的制备方法，其特征在于：氨基酸与树脂载样量摩尔比为2∶1～5∶1。
9.根据权利要求2-4任一项所述的一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于：步骤(1)中片段1的裂解剂为CH2Cl2-TFE(比例为1～4∶1，V/V)或者CH2Cl2-TFE-AcOH(6～8∶1～2∶1～2，v/v/v)，优选CH2Cl2-TFE(4∶1)，CH2Cl2-TFE-AcOH(8∶1∶1)。
10.根据权利要求2-4任一项所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于：步骤(1)中片段1的纯化步骤中，加入饱和烷烃、醚类、CH2Cl2、醚类与烷烃类溶剂的混合溶剂，优选正己烷、正庚烷、乙醚、MTBE、EA-PE，CH2Cl2。
11.根据权利要求2-4任一项所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于：片段1与片段2的摩尔比为1.1～2∶1。
12.根据权利要求2-4任一项所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于：步骤(3)中比伐卢定肽树脂的裂解剂为CH2Cl2-TFA(1～4∶1)或TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)，优选TFA-TIPS-H2O(90～95∶2.5～5∶2.5～5)。
13.根据权利要求2-4任一项所述一种比伐卢定的制备及纯化方法，其特征在于：步骤(3)中纯化使用高效液相色谱法，纯化条件：以十八烷基键合硅胶为固定相(YMC公司的Triart Prep C18-S)，色谱柱规格为250×30mm，粒径10μm，粒空隙12nm，流动相A：0.1％三氟乙酸水溶液，流动相B：0.1％三氟乙酸乙腈溶液，检测波长210nm，设置洗脱梯度。
CN201710415857.3A 2017-06-06 2017-06-06 一种比伐卢定的制备及纯化方法 Pending CN107344967A (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710415857.3A CN107344967A (zh) 2017-06-06 2017-06-06 一种比伐卢定的制备及纯化方法

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201710415857.3A CN107344967A (zh) 2017-06-06 2017-06-06 一种比伐卢定的制备及纯化方法

Publications (1)

Publication Number Publication Date
CN107344967A true CN107344967A (zh) 2017-11-14

Family

ID=60254540

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201710415857.3A Pending CN107344967A (zh) 2017-06-06 2017-06-06 一种比伐卢定的制备及纯化方法

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN107344967A (zh)

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109721654A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 苏州纳微科技股份有限公司 一种比伐芦定的分离纯化方法
CN110204611A (zh) * 2019-06-26 2019-09-06 海南中和药业股份有限公司 一种固相片段法合成比伐卢定
CN112062835A (zh) * 2020-08-24 2020-12-11 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 一种比伐芦定的制备方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102702325A (zh) * 2012-06-19 2012-10-03 深圳翰宇药业股份有限公司 一种抗凝血多肽的制备方法
CN102731624A (zh) * 2012-06-14 2012-10-17 无锡市凯利药业有限公司 一种固相片段法合成比伐卢定的方法
CN102924575A (zh) * 2012-10-31 2013-02-13 深圳翰宇药业股份有限公司 一种比伐卢定的制备方法
CN104031127A (zh) * 2014-07-01 2014-09-10 济南康和医药科技有限公司 一种固液结合制备比伐卢定的方法
CN106397580A (zh) * 2016-12-06 2017-02-15 江苏诺泰生物制药股份有限公司 一种比伐卢定的合成方法

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN102731624A (zh) * 2012-06-14 2012-10-17 无锡市凯利药业有限公司 一种固相片段法合成比伐卢定的方法
CN102702325A (zh) * 2012-06-19 2012-10-03 深圳翰宇药业股份有限公司 一种抗凝血多肽的制备方法
CN102924575A (zh) * 2012-10-31 2013-02-13 深圳翰宇药业股份有限公司 一种比伐卢定的制备方法
CN104031127A (zh) * 2014-07-01 2014-09-10 济南康和医药科技有限公司 一种固液结合制备比伐卢定的方法
CN106397580A (zh) * 2016-12-06 2017-02-15 江苏诺泰生物制药股份有限公司 一种比伐卢定的合成方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
虞娉 等: "比伐卢定合成策略的选择及合成条件的优化", 《浙江中西医结合杂志》 *

Cited By (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN109721654A (zh) * 2019-03-15 2019-05-07 苏州纳微科技股份有限公司 一种比伐芦定的分离纯化方法
CN110204611A (zh) * 2019-06-26 2019-09-06 海南中和药业股份有限公司 一种固相片段法合成比伐卢定
CN110204611B (zh) * 2019-06-26 2023-11-07 海南中和药业股份有限公司 一种固相片段法合成比伐卢定
CN112062835A (zh) * 2020-08-24 2020-12-11 扬子江药业集团四川海蓉药业有限公司 一种比伐芦定的制备方法

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN106632609B (zh) 一种六胜肽的制备方法及其产品
CN104231051B (zh) 一种利那洛肽的制备方法
EP3156413B1 (en) Ganirelix precursor and method for preparing ganirelix acetate by using anirelix precursor
CN102702320B (zh) 一种制备爱啡肽的方法
CN107434820A (zh) 一种维拉卡肽的合成方法
CN107344967A (zh) 一种比伐卢定的制备及纯化方法
CN110894225A (zh) 一种μ-芋螺肽的规模化制备纯化方法以及应用
CN104788546A (zh) 一种含有24个氨基酸残基的线性直链肽的制备方法
WO2012174817A1 (zh) 奈西立肽的制备方法
CN111748019A (zh) 一种多肽衍生化合物的合成方法
CN112062829B (zh) 依降钙素的制备方法
CN107778351B (zh) 一种全固相合成奥曲肽的方法
CN111057129B (zh) 一种用于合成含有两对二硫键的多肽的制备方法及其试剂盒，以及普利卡那肽的制备方法
CN102641506B (zh) 比伐卢定-聚乙二醇化复合物
CN106749611B (zh) 一种艾塞那肽的制备方法及其产品
CN107778353B (zh) 一种合成特利加压素的方法
CN107778350B (zh) 一种合成罗米地辛的方法
CN111944016B (zh) 一种醋酸艾替班特的制备方法
CN113214376A (zh) 一种新的合成蜈蚣毒素RhTx和蜘蛛毒素GsMTx4的方法
CN106397580A (zh) 一种比伐卢定的合成方法
CN113683663A (zh) 一种机体保护多肽粗品的纯化方法
CN115038711A (zh) 一种阿托西班的合成方法
Zeiger et al. Synthesis of a fully protected heptacosapeptide norleucine analog corresponding to positions 21-47 of the primary structure of staphylococcal nuclease
CN114195881B (zh) 一种制备醋酸舍莫瑞林的方法
CN110981939A (zh) 一种普利卡那肽的制备方法

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication
WD01 Invention patent application deemed withdrawn after publication

Application publication date: 20171114