CN110981939A - 一种普利卡那肽的制备方法 - Google Patents

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CN110981939A CN201811346984.3A CN201811346984A CN110981939A CN 110981939 A CN110981939 A CN 110981939A CN 201811346984 A CN201811346984 A CN 201811346984A CN 110981939 A CN110981939 A CN 110981939A
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Abstract

本发明公开了一种普利卡那肽的的制备方法，本发明通过固相合成法制备普利卡那肽树脂、普利卡那肽树脂酸解得到普利卡那肽线性肽、普利卡那肽环化获得普利卡那肽粗品、普利卡那肽粗品纯化得到普利卡那肽精品。本发明方法所制备的普利卡那肽精品，纯度大于99.5%，单一杂质小于0.2%。与现有技术相比，本发明工艺大大降低了普利卡那肽的合成难度，提高了普利卡那肽的粗品纯度，在降低原料使用量的同时，大大降低了纯化的难度。具有广泛的实用价值和应用前景。

Description

一种普利卡那肽的制备方法
技术领域
本发明属于多肽药物制备领域，具体为一种普利卡那肽的制备方法。
背景技术
普利卡那肽是Synergy制药公司开发的一种鸟苷酸环化酶C(GC-C)受体激动剂，于2017年1月被FDA批准用于慢性特发性便秘的治疗。其治疗机理与利那洛肽相似，可诱导液体分泌进入胃肠道，从而增加胃肠蠕动。普利卡那肽为一类新的口服制剂，无需注射即可直接口服使用，可为众多患者接受。
普利卡那肽的CAS号：467426-54-6，英文名Plecanatide，其序列如下：
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专利公开号为CN103694320B，其采用的固相方法合成线性多肽树脂，裂解后获得普利卡那肽线性肽粗品，此后经过两步法环化得到普利卡那肽粗品。由于该方法成环在溶液中分两次进行，且第一为Cys(tBu)保护的巯基用双氧水氧化，其氧化效果非常差，造成普利卡那肽的粗品纯度低，分离纯化难度大。很难进行工业化生产。
南京工业大学的专利(CN104628827A)，采用固相树脂上两步氧化法获得成环的普利卡那肽树脂，经裂解后获得普利卡那肽粗品，经纯化获得普利卡那肽精品。此方法采用固相上进行环化，其环化效果不佳，造成分离纯化困难。亦很难进行工业化生成。
另外，在实际生产过程中，普利卡那肽不仅存在环化后纯度低的问题，而且存在严重的缩聚现象，造成线性肽合成困难。我们也尝试了多种方法用于改善树脂的缩聚问题。我们采用各种离子对试剂干扰氢键的形成。其效果不理想。
发明内容
针对普利卡那肽在合成过程中出来的树脂缩聚而造成合成困难的问题，本发明旨在提供一种普利卡那肽的制备方法，本发明工艺稳定，且杂质含量低、收率高，适合于大规模工业化生成。
为此，本发明采用以下技术方案：一种普利卡那肽的的制备方法，通过固相多肽合成法制备普利卡那肽树脂，普利卡那肽树脂酸解得到普利卡那肽线性肽，普利卡那肽环化获得普利卡那肽粗品，普利卡那肽粗品纯化得到普利卡那肽精品；其中固相多肽合成法制备普利卡那肽树脂的方法为：在Fmoc-Leu-树脂上通过固相偶联合成方法依次接入序列中相应的保护氨基酸或片段，制得普利卡那肽线性肽树脂，
R1-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(R2)-Glu(OtBu)-Leu-Cys(R3)-Val-Asn(Trt)-X-Cys(R2)-Y-Cys(R3)-Leu-树脂，其中R1为Fmoc或Boc或H；X为：Val-(Hmb)Ala或Val-(Dmb)Ala或Val-Ala；Y为：Thr(R4)-(hmb)Gly或Thr(R4)-(Dmb)Gly，其中R4为Trt或tBu；R2和R3选自：Acm、Trt、tBu、MeBzl、MeOBzl、Bzl、Tacm、Mmt，其中，Acm为乙酰氨甲基、Trt为三苯甲基、tBu为叔丁基、MeBzl为对甲基苄基、MeOBzl为对甲氧基苄基、Bzl为苄基、Tacm为新戊酰氨甲基、、Mmt为4-甲氧基三苯甲基；R2和R3为同一种保护基或不同的保护基。
作为对上述技术方案的补充和完善，本发明还包括以下技术特征。
接入X片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：Fmoc-Val-(Hmb)Ala-OH或Fmoc- Val-(Dmb)Ala-OH；或用2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-(Hmb)Ala-OH或Fmoc-(Dmb)Ala-OH或Fmoc-Ala-OH，第二次为Fmoc-Val-OH。
接入Y片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：Fmoc-Thr(R4)-(hmb)Gly-OH或Fmoc- Thr(R4)-(Dmb)Gly-OH；或用2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-(Hmb)Gly-OH或Fmoc-(Dmb)Gly-OH，第二次为Fmoc- Thr(R4)-OH。 其中，上述Fmoc为9-芴甲氧羰基、Trt为三苯甲基、Boc为叔丁氧羰基、OtBu为叔丁氧基、tBu为叔丁基。
接入X以外的其它保护氨基酸分别为：Fmoc- Asn(Trt)-OH或Boc- Asn(Trt)-OH；Fmoc -Asp(OtBu)-OH；Fmoc -Glu(OtBu)-OH；Fmoc -Cys(R2)-OH或Fmoc -Cys(R3)-OH；Fmoc-Leu-OH；Fmoc -Val-OH。其中Boc- Asn(Trt)-OH仅可用于最后一个氨基酸的偶联。
接入各个保护氨基酸或片段时，其用量为载体树脂总摩尔数的1～9倍，优选2-4倍。
所述的Fmoc-Leu-树脂是将树脂与Fmoc-Leu-OH偶联所得，所述的Fmoc-Leu-树脂其Fmoc-Leu取代值为0.1～1.5mmol/g树脂，优选的Fmoc-Leu取代值为0.3～0.8mmol/g树脂。
所述的载体树脂为羟基类型树脂或Trityl-Cl类型树脂，其中羟基类型树脂优选为Wang树脂或对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯（HMP）树脂；Trityl-Cl类型树脂为Trityl-Cl树脂、4-MethylTrityl-Cl树脂、4-MethoxyTrityl-Cl树脂或2-Cl Trity-Cl树脂。
所述固相偶联合成法是：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去Fmoc保护后，再与下一个保护氨基酸偶联反应，偶联反应时间为30～300分钟，优选为60-120分钟。上述偶联时，需要添加缩合试剂和活化试剂，缩合试剂选自N,N-二异丙基碳二亚胺(DIC)、N,N-二环己基碳二亚胺(DCC)、六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基磷(PyBOP)、2-(7-氧化苯并三氮唑)-N,N,N',N'-四甲基脲六氟磷酸酯(HATU)、O-苯并三氮唑-N,N,N',N'-四甲基脲四氟硼酸(TBTU)。优选的为DIC。上述脱去Fmoc保护的试剂为10~30%（V/V）哌啶(PIP)/N,N-二甲基甲酰胺(DMF)溶液，优选的为20%（V/V）。使用的去保护试剂用量为每克投料树脂5-15ml，优选为每克投料树脂8ml。去保护反应时间为5~60分钟，优选为15~25分钟。
活化试剂选自1-羟基苯并三唑(HOBt)、1-羟基-7-偶氮苯并三氮唑(HOAT)，优选的为1-羟基苯并三唑(HOBt)。
缩合试剂和活化试剂的摩尔用量与氨基酸的摩尔用量一致。
普利卡那肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到普利卡那肽的线性肽粗品：
H-Asn-Asp-Glu-Cys(R2)-Glu-Leu-Cys(R3)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(R2)-Thr-Gly-Cys(R3)-Leu-OH，其中R2或/和R3为Trt或Mmt保护基时，可以在切割过程中被酸解；如果为其它保护基时，其不能被酸解。
普利卡那肽树脂酸解时采用的酸解试剂为：三氟醋酸（TFA）、1，2-乙二硫醇（EDT）、三异丙基硅烷（Tis）、苯酚和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的比例为80-95（V/V），EDT的比例为0.5-5%（V/V），Tis的比例为0-5%（V/V），苯酚的比例为0.5-5%（V/V），余量为水。水的比例不超过10%。
所述的酸解剂用量为每克普利卡那肽树脂需要4~20ml酸解剂，优选的，每克普利卡那肽树脂需要8~12ml酸解剂。使用酸解剂裂解的时间为室温条件下1~6小时，优选的为2~3小时。
进一步的，普利卡那肽线性肽粗品经过环化后得到普利卡那肽粗品。上述环化条件，根据所选择的R2和R3保护基，采用不同的环化剂进行环化。
进一步的，环化后的普利卡那肽粗品溶液用0.45μm滤膜过滤后，经高效液相色谱纯化、冻干得到普利卡那肽精品。
本发明可以达到以下有益效果：本发明方法所制备的普利卡那肽精品，纯度大于99.5%，单一杂质小于0.2%。与现有技术相比，本发明工艺大大降低了普利卡那肽的合成难度，提高了普利卡那肽的粗品纯度，在降低原料使用量的同时，大大降低了纯化的难度。具有广泛的实用价值和应用前景。
具体实施方式
实施例1：取代值为0.5mmol/g的Fmoc-Lue-Wang Resin的制备
称取取代值为1.0mmol/g的Wang树脂100g(100mmol)，加入固相反应器中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂60分钟后，取70.6g Fmoc-Leu-OH、27.03g HOBt、25.2g DIC、2.04g DMAP溶于体积比为1：1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应器中，室温反应3小时。反应结束后用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次。然后加入封端液封端30分钟，封端液的比例为： 醋酸酐：DMF：DIEA=10：84：6(V:V:V）。封端后用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-Leu-Wang树脂，检测取代值为0.502mmol/g。
实施例2：取代值为0.7mmol/g的Fmoc-Lue-Wang Resin的制备
称取取代值为1.0mmol/g的Wang树脂100g(100mmol)，加入固相反应器中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂60分钟后，取105.9g Fmoc-Leu-OH、40.55g HOBt、37.8g DIC、3.06gDMAP溶于体积比为1：1的DCM和DMF混合溶液，加入固相反应器中，室温反应3小时。反应结束后用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次。然后加入封端液封端30分钟，封端液的比例为： 醋酸酐：DMF：DIEA=10：84：6(V:V:V）。封端后用DMF洗涤3次，DCM洗涤3次，甲醇收缩抽干，得到Fmoc-Leu-Wang树脂，检测取代值为0.711mmol/g。
实施例3：取代值为0.8mmol/g的Fmoc-Lue-CTC Resin的制备
称取取代值为1.2mmol/g的CTC树脂100g(120mmol)，加入固相反应器中，用DCM洗涤2次，用DCM溶胀树脂30分钟后，取84.7g Fmoc-Leu-OH溶于DCM，加入固相反应器中，再加入104.6ml N，N-二异丙基乙胺（DIPEA）室温反应3小时。再加入100ml甲醇进行封端，封端时间30分钟。封端结束后用DCM洗涤3次，甲醇洗涤3次。抽干后，得到Fmoc-Leu-CTC树脂，检测取代值为0.805mmol/g。
实施例4：普利卡那肽树脂的制备
称取本发明实施例1制备得到的取代值为0.502mmol/g的Fmoc-Lue-Wang Resin 100g（50mmol），加入固相反应器中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，用脱保护液脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤3次。称取62.2g（150mmol）Fmoc-Cys(Trt)-OH，20.26g（150mmol）HOBt，18.93g（150mmol）DIC溶于DMF中，加入固相反应器，室温反应2小时。用茚三酮法进行氨基检测，如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应0.5~1.5小时，至茚三酮法检测无色透明。
重复上述脱除Fmoc保护和加入相应保护氨基酸片段进行偶联的步骤，按照片段的顺序，依次加入Fmoc-(Hmb)Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc -Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH。其用量均为150mmol。
实施例5：普利卡那肽树脂的制备
称取本发明实施例2制备得到的取代值为0.711mmol/g的Fmoc-Lue-Wang Resin 70.3g（50mmol），加入固相反应器中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，用脱保护液脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤3次。称取62.2g（150mmol）Fmoc-Cys(Acm)-OH，20.26g（150mmol）HOBt，18.93g（150mmol）DIC溶于DMF中，加入固相反应器，室温反应2小时。用茚三酮法进行氨基检测，如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应0.5~1.5小时，至茚三酮法检测无色透明。
重复上述脱除Fmoc保护和加入相应保护氨基酸片段进行偶联的步骤，按照片段的顺序，依次加入Fmoc-(hmb)Gly-OH、Fmoc-Thr(tBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-Val-(Hmb)Ala-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc -Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH。其用量均为150mmol。
实施例6：普利卡那肽树脂的制备
称取本发明实施例3制备得到的取代值为0.805mmol/g的Fmoc-Lue-CTC 62.1g（50mmol），加入固相反应器中，用DMF洗涤2次，用DMF溶胀树脂30分钟后，用脱保护液脱除Fmoc保护，然后用DMF洗涤3次。称取62.2g（150mmol）Fmoc-Cys(Acm)-OH，20.26g（150mmol）HOBt，18.93g（150mmol）DIC溶于DMF中，加入固相反应器，室温反应2小时。用茚三酮法进行氨基检测，如果树脂无色透明，则反应完全；如果树脂显色，表示反应不完全，需再偶联反应0.5~1.5小时，至茚三酮法检测无色透明。
重复上述脱除Fmoc保护和加入相应保护氨基酸片段进行偶联的步骤，按照片段的顺序，依次加入Fmoc- Thr(tBu)- (Hmb)Gly- OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc-(Hmb)Ala-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH、Fmoc-Val-OH、Fmoc-Cys(Acm)-OH、Fmoc-Leu-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc-Cys(Trt)-OH、Fmoc -Glu(OtBu)-OH、Fmoc -Asp(OtBu)-OH、Fmoc-Asn(Trt)-OH。其用量均为150mmol。
实施例7：普利卡那肽线性粗肽的制备
取本发明实施例4制备得到的普利卡那肽树脂218g，置于裂解反应器中，以10ml/g树脂的比例加入裂解试剂，裂解试剂的比例如下，TFA：EDT：Tis：苯酚：水=85：2.5：2.5：5：5(V/V)。室温搅拌裂解2.5小时。反应物用砂心漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩。加入冷却的无水乙醚沉淀，用无水乙醚洗涤3次，真空干燥得到普利卡那肽线性粗肽91.1g，其纯度为81.2%。
实施例8：普利卡那肽线性粗肽的制备
取本发明实施例5制备得到的普利卡那肽树脂189g，置于裂解反应器中，以10ml/g树脂的比例加入裂解试剂，裂解试剂的比例如下，TFA：EDT：Tis：苯酚：水=80：5：5：5：5(V/V)。室温搅拌裂解2.5小时。反应物用砂心漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩。加入冷却的无水乙醚沉淀，用无水乙醚洗涤3次，真空干燥得到普利卡那肽线性粗肽90.2g，其纯度为89.3%。
实施例9：普利卡那肽线性粗肽的制备
取本发明实施例6制备得到的普利卡那肽树脂181g，置于裂解反应器中，以10ml/g树脂的比例加入裂解试剂，裂解试剂的比例如下，TFA：EDT：Tis：苯酚：水=84：3：3：5：5(V/V)。室温搅拌裂解2.5小时。反应物用砂心漏斗过滤，收集滤液，树脂再用少量TFA洗涤3次，合并滤液后减压浓缩。加入冷却的无水乙醚沉淀，用无水乙醚洗涤3次，真空干燥得到普利卡那肽线性粗肽88.3g，其纯度为83.4%。
实施例10：普利卡那肽粗肽的制备
取本发明实施例7获得的普利卡那肽线性粗肽60g溶于30L的水中，用氧化还原体系反应24小时后，用HPLC监控反应，反应结束后加入醋酸调pH至4左右。反应体系无色透明。所得反应液即为普利卡那肽粗肽溶液。
实施例11：普利卡那肽粗肽的制备
取本发明实施例8获得的普利卡那肽线性粗肽60g溶于30L的水中，用氨水调PH值至8.5，搅拌反应24小时氧化第一对二硫键。再加入醋酸调pH值至2.0，加入碘甲醇溶液氧化第二对二硫键，反应结束后，缓慢加入抗坏血酸水溶液，将过量的碘单杂消耗完，此时反应体系应无色透明。所得反应液即为普利卡那肽粗肽溶液。
实施例12：普利卡那肽粗肽的制备
取本发明实施例9获得的普利卡那肽线性粗肽60g溶于30L的水中，用氨水调PH值至8.5，搅拌反应24小时氧化第一对二硫键。再加入醋酸调pH值至2.0，加入碘甲醇溶液氧化第二对二硫键，反应结束后，缓慢加入抗坏血酸水溶液，将过量的碘单杂消耗完，此时反应体系应无色透明。所得反应液即为普利卡那肽粗肽溶液。
实施例13：普利卡那肽粗肽的纯化
取本发明实施例10制备得到的普利卡那肽粗肽，采用创新通恒HPLC系统，装填有反相C18的DAC200色谱柱，波长220nm，以体积分数为0.1%的TFA水溶液和乙腈作为流动相A和B。纯化洗脱，收集目标峰的洗脱液，旋转蒸发浓缩，冻干得到普利卡那肽精肽19.4g，纯度为99.5%，最大单杂0.18%。
实施例14：普利卡那肽粗肽的纯化
取本发明实施例11制备得到的普利卡那肽粗肽，采用创新通恒HPLC系统，装填有反相C18的DAC200色谱柱，波长220nm，以体积分数为0.1%的TFA水溶液和乙腈作为流动相A和B。纯化洗脱，收集目标峰的洗脱液，旋转蒸发浓缩，冻干得到普利卡那肽精肽21.2g，纯度为99.7%，最大单杂0.11%。
实施例15：普利卡那肽粗肽的纯化
取本发明实施例12制备得到的普利卡那肽粗肽，采用创新通恒HPLC系统，装填有反相C18的DAC200色谱柱，波长220nm，以体积分数为0.1%的TFA水溶液和乙腈作为流动相A和B。纯化洗脱，收集目标峰的洗脱液，旋转蒸发浓缩，冻干得到普利卡那肽精肽20.5g，纯度为99.5%，最大单杂0.16%。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。

Claims (10)

1.一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：通过固相多肽合成法制备普利卡那肽树脂，普利卡那肽树脂酸解得到普利卡那肽线性肽，普利卡那肽环化获得普利卡那肽粗品，普利卡那肽粗品纯化得到普利卡那肽精品；其中固相多肽合成法制备普利卡那肽树脂的方法为：在Fmoc-Leu-树脂上通过固相偶联合成方法依次接入序列中相应的保护氨基酸或片段，制得普利卡那肽线性肽树脂，
R1-Asn(Trt)-Asp(OtBu)-Glu(OtBu)-Cys(R2)-Glu(OtBu)-Leu-Cys(R3)-Val-Asn(Trt)-X-Cys(R2)-Y-Cys(R3)-Leu-树脂，其中R1为Fmoc或Boc或H；X为：Val-(Hmb)Ala或Val-(Dmb)Ala或Val-Ala；Y为：Thr(R4)-(hmb)Gly或Thr(R4)-(Dmb)Gly，其中R4为Trt或tBu；R2和R3选自：Acm、Trt、tBu、MeBzl、MeOBzl、Bzl、Tacm、Mmt；R2和R3为同一种保护基或不同的保护基。
2.根据权利要求1所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：接入X片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：Fmoc- Val-(Hmb)Ala-OH或Fmoc-Val-(Dmb)Ala-OH；或用2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-(Hmb)Ala-OH或Fmoc-(Dmb)Ala-OH或Fmoc-Ala-OH，第二次为Fmoc-Val-OH。
3.根据权利要求1所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：接入Y片段的步骤如下：用1次偶联直接接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：Fmoc- Thr(R4)-(hmb)Gly-OH或Fmoc- Thr(R4)-(Dmb)Gly-OH；或用2次偶联依次接入，Fmoc-保护氨基酸或片段为：第一次为Fmoc-(Hmb)Gly-OH或Fmoc-(Dmb)Gly-OH，第二次为Fmoc- Thr(R4)-OH。
4.根据权利要求1-3任一项所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：接入X以外的其它保护氨基酸分别为：Fmoc- Asn(Trt)-OH或Boc- Asn(Trt)-OH；Fmoc -Asp(OtBu)-OH；Fmoc -Glu(OtBu)-OH；Fmoc -Cys(R2)-OH或Fmoc -Cys(R3)-OH；Fmoc -Leu-OH；Fmoc -Val-OH，其中Boc- Asn(Trt)-OH仅可用于最后一个氨基酸的偶联。
5.根据权利要求4任一项所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：接入各个保护氨基酸或片段时，其用量为载体树脂总摩尔数的1～9倍。
6.根据权利要求1所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：所述的Fmoc-Leu-树脂是将树脂与Fmoc-Leu-OH偶联所得，所述的Fmoc-Leu-树脂其Fmoc-Leu取代值为0.1～1.5mmol/g树脂。
7.根据权利要求1所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：所述的载体树脂为羟基类型树脂或Trityl-Cl类型树脂，其中羟基类型树脂优选为Wang树脂或对羟甲基苯氧甲基聚苯乙烯树脂；Trityl-Cl类型树脂为Trityl-Cl树脂、4-MethylTrityl-Cl树脂、4-MethoxyTrityl-Cl树脂或2-Cl Trity-Cl树脂。
8.根据权利要求1所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：所述固相偶联合成法是：前一步反应得到的保护氨基酸-树脂脱去Fmoc保护后，再与下一个保护氨基酸偶联反应，偶联反应时间为30～300分钟。
9.根据权利要求1、2、3、5、6、7、8中任一项所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：普利卡那肽树脂经酸解同时脱去树脂及侧链保护基得到普利卡那肽的线性肽粗品：
H-Asn-Asp-Glu-Cys(R2)-Glu-Leu-Cys(R3)-Val-Asn-Val-Ala-Cys(R2)-Thr-Gly-Cys(R3)-Leu-OH，其中R2或/和R3为Trt或Mmt保护基时，可以在切割过程中被酸解；如果为其它保护基时，其不能被酸解。
10.根据权利要求9所述的一种普利卡那肽的的制备方法，其特征在于：普利卡那肽树脂酸解时采用的酸解试剂为：三氟醋酸（TFA）、1，2-乙二硫醇（EDT）、三异丙基硅烷（Tis）、苯酚和水混合溶剂，混合溶剂的配比为：TFA的比例为80-95（V/V），EDT的比例为0.5-5%（V/V），Tis的比例为0-5%（V/V），苯酚的比例为0.5-5%（V/V），余量为水，水的比例不超过10%。
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