CN107312107A - 一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种高效、安全、适宜工业化生产的酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺。主要包括以下步骤：取铁皮石斛，粉碎过20‑80目筛，加入4‑6倍量含有果胶酶：纤维素酶：漆酶(1‑2:1‑3:0.5‑2.5)的重量比例混合制成复合酶系的冰乙酸缓冲溶液(加冰乙酸溶液调节pH值至4.0‑6.0)，控制酶解温度25‑50℃，酶解1‑5h。转移至适宜容器中，加饮用水4‑8倍，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩至相对密度1.25‑1.40(60℃)；加入乙醇使药液含醇量达70‑80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60‑80℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为39.88％‑46.16％，甘露糖提取率为48.26％‑55.63％。

Description

一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺

技术领域

本发明涉及中草药的提取加工技术，具体是关于一种铁皮石斛多糖的酶解法提取工艺。

背景技术

铁皮石斛为兰科植物铁皮石斛Dendrobium officinale Kimura et Migo的干燥茎。具有滋阴养胃、润肺止咳和清热明目之功效，是传统的珍稀名贵中药材之一，名列“九大仙草”之首，因具有抗肿瘤、抗衰老、抗声带疲劳、扩张血管和增强人体免疫力等作用，被称为救命仙草。由于石斛自然繁殖力低，种子需与真菌共生才能萌发，加上长期采挖，使得野生铁皮石斛资源日渐枯竭，成为濒危植物，被列为国家重点保护的野生药材品种，因此铁皮石斛资源的有效利用日益受到科研工作者的关注。

铁皮石斛具有益胃生津、滋阴清热等功效，用于热病津伤，口干烦渴，胃阴不足，食少干呕，病后虚热不退，阴虚火旺，骨蒸劳热，目暗不明，筋骨痿软以及恶性肿瘤的辅助治疗以及慢性咽炎、慢性胃炎、糖尿病和久病体虚免疫功能低下等。经现代药理学研究证明，铁皮石斛中含有的主要活性成分为石斛多糖、石斛碱、氨基酸、芪类及其衍生物、微量元素以及多种挥发性成分等。石解多糖主要由葡萄糖、半乳糖、木糖、甘露糖、鼠李糖、阿拉伯糖、半乳糖醛酸、葡萄糖醛酸等单糖组成，是其具有抗氧化、抗衰老、抗肿瘤、增强免疫功能、降低血糖，抗肝损伤等活性的主要成分。多糖含量的高低是判断铁皮石解质量优劣的重要标准(《中国药典》2015年版一部第282页石斛项下规定)。

传统水提法是提取铁皮石解多糖的主要方法，近年有超声或微波辅助水提法、酶解法、超高压提取法、闪式提法等用于铁皮石斛多糖的提取。叶余原[文献1：超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究[J].中药材,2009,32(04): 617-620.]采用超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究结果以料液比1∶30的，50℃超声水浴，45kHz超声频率，提取1.5h，铁皮石斛多糖的平均提取得率为15.3％。尚喜雨等[文献2：正交实验优选铁皮石斛多糖提取工艺的研究[J].辽宁中医杂志,2010,37(04):708-709.]采用微波辅助提取铁皮石斛多糖，在微波功率400W，pH值为8，微波作用时间6min，料液比1:50的条件下多糖提取量为17.48％。纵伟等[文献3：石斛多糖超高压提取工艺条件的优化[J].郑州轻工业学院学报(自然科学版),2012,27(04):36-39.]采用超高压方法提取铁皮石斛中的多糖成分，将石斛粉碎到80目后，按固液比1∶20，采用300MPa的压力提取6min后，石斛多糖的得率达到19.27％。王培培等[文献4：正交实验法优化铁皮石斛多糖的提取工艺[J].时珍国医国药,2012,23(11):2781-2782.]料液比1∶40，浸提温度70℃，浸提时间2h，浸提2次，铁皮石斛多糖的得率达到31.9％。唐政等[文献5：混合酶提法提取铁皮石斛中石斛多糖的优化工艺研究[J].北方园艺,2014,(06):132-134.]采用纤维素酶与果胶酶的等量混合提取铁皮石斛多糖。结果在工艺条件pH6.5、1％浓度的纤维素酶和果胶酶1∶1等量混合、50℃下提取135min，石斛多糖提取率为41.33％。吴迪等[文献6：铁皮石斛多糖提取工艺优化研究[J].浙江科技学院学报,2016,28(06):444-449.]实验结果表明，料液质量比1∶120、浸提温度70℃、浸提90min时提取铁皮石斛多糖提取率为55.2％。

因此，本领域内技术人员致力于研究一种提高铁皮石斛多糖提取率的提取工艺，从而提高铁皮石斛资源的有效利用。

发明内容

为了解决上述问题，本发明公开了一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺。

本发明为实现上述目的所采用的技术方案是：

一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其包括背板，其包括以下步骤：

(1)以果胶酶、纤维素酶和漆酶按1-2:1-3:0.5-2.5的重量比例混合制成复合酶系，溶解于使用冰乙酸溶液调节pH值至4.0-6.0的缓冲液中；

(2)取铁皮石斛，粉碎过20～80目筛，加入4-6倍量上述含有复合酶系的冰乙 酸缓冲溶液；

(3)控制酶解温度30-50℃，酶解1-3h；

(4)转移至适宜容器中，加饮用水4-8倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25-1.40，温度为60℃；

(5)加入乙醇使药液含醇量达70～80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；

(6)60～80℃真空干燥，即得。

所述复合酶酶解工艺条件为：铁皮石斛粉碎过20-80目筛、pH4.0-5.5的含有药材质量1.5％复合酶的缓冲液、30-50℃条件下处理1～2h；转移至适宜容器中，加饮用水4-6倍体积，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25-1.40温度为60℃；

加入乙醇使药液含醇量达70～80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60～80℃真空干燥，即得。

所述复合酶酶解工艺条件为：铁皮石斛粉碎过20目筛、加入4倍量pH5.0的含有药材质量1.5％复合酶的缓冲液、45℃条件下处理1.5h；

转移至提取器中，加入6倍饮用水，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.40，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为46.16％，甘露糖提取率为55.63％。

取铁皮石斛，粉碎过40目筛；加入5倍量复合酶缓冲液，复合酶缓冲液中果胶酶、纤维素酶和漆酶按1-2:1-3:0.5-2.5的重量比例混合，加冰乙酸溶液调节pH值至4.0，控制酶解温度50℃恒温酶解120min；加饮用水5倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达70％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；70℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为43.27％，甘露糖提取率为52.83％。

取铁皮石斛，粉碎过60目筛；加入6倍量复合酶缓冲液，复合酶缓冲液中 果胶酶、纤维素酶和漆酶按1-2:1-3:0.5-2.5的重量比例混合，加冰乙酸溶液调节pH值至6.0，控制酶解温度55℃恒温酶解120min；

加饮用水4倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.35，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；80℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为39.88％，甘露糖提取率为48.26％。

本发明的有益效果为：本发明具有操作简单、提取加液量少、易干燥、耗时短、提取率高的特点，有利于进一步进行有关药品、功能保健食品、食品、高级饲料的制备。以下是本工艺与有关文献的资料对比：

下面结合附图与具体实施方式，对本发明进一步说明。

附图说明

图1为不同复合酶对铁皮石斛多糖提取率的影响图。

具体实施方式

实施例1，参见图1，本实施例提供的一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺。

1.1实验材料

铁皮石斛(批号YD160326)，购自浙江本草石斛科技有限公司。纤维素酶(批号L1531059)、果胶酶(批号L1531059)均购自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；漆酶(宁夏夏盛实业集团有限公司生产)；D-无水葡萄糖对照品(110833-201506)、D-盐酸氨基葡萄糖对照品(140649-201606)、D-甘露糖对照品(140651-201504)均购自中国食品药品检定研究院。乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

1.2实验方法与结果

1.2.1评价指标选择

1.2.1.1多糖的含量测定(紫外分光光度法)

多糖对照品溶液的制备取无水葡萄糖对照品适量，精密称定，加水制成每lm l含90μg的溶液，即得。

标准曲线的制备精密量取对照品溶液0.2ml、0.4ml、0.6ml、0.8ml、1.0ml，分别置10ml具塞试管中，各加水补至1.0ml，精密加入5％苯酚溶液lm l(临用配制)，摇匀，再精密加硫酸5ml，摇匀，置沸水浴中加热20分钟，取出，置冰浴中冷却5分钟，以相应试剂为空白，照紫外-可见分光光度法(通则0401)，在488nm的波长处测定吸光度，以吸光度为纵坐标，浓度为横坐标，绘制标准曲线。

供试品溶液的制备取本品粉末(过三号筛)约0.3g，精密称定，加水200ml，加热回流2小时，放冷，转移至250ml量瓶中，用少量水分次洗涤容器，洗液并入同一量瓶中，加水至刻度，摇匀，滤过，精密量取续滤液2ml，置15ml离心管中，精密加入无水乙醇10ml，摇匀，冷藏1小时，取出，离心(转速为每分钟4000转)2 0分钟，弃去上清液(必要时滤过)，沉淀加80％乙醇洗涤2次，每次8ml，离心，弃去上清液，沉淀加热水溶解，转移至25ml量瓶中，放冷，加水至刻度，摇匀，即得。

测定法精密量取供试品溶液1ml，置10ml具塞试管中，照标准曲线制备项下的方法，自“精密加入5％苯酚溶液lml”起，依法测定吸光度，从标准曲线 上读出供试品溶液中无水葡萄糖的量，计算，即得。

1.2.1.2甘露糖的含量测定(高效液相色谱法)

色谱条件与系统适用性试验以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；流动相：0.02mol/L乙酸铵(A)-乙腈(B)梯度洗脱，0～20min(B:17％-17％),20～40min(B:17％-37％)；流速：1.00ml/min；检测波长：250nm；柱温：30℃。理论板数按甘露糖峰计算应不低于4000。

校正因子测定取盐酸氨基葡萄糖适量，精密称定，加水制成每lm l含12mg的溶液，作为内标溶液。另取甘露糖对照品约10mg，精密称定，置100ml量瓶中，精密加入内标溶液lml，加水适量使溶解并稀释至刻度，摇匀，吸取400μl，加0.5mol/L的PMP(1-苯基-3-甲基-5-P比唑啉酮)甲醇溶液与0.3mol/L的氢氧化钠溶液各400μl，混匀，70℃水浴反应100分钟。再加0.3mol/L的盐酸溶液500μl，混匀，用三氯甲烷洗涤3次，每次2ml，弃去三氯甲烷液，水层离心后，取上清液10μl，注入液相色谱仪，测定，计算校正因子。

测定法取本品粉末(过三号筛)约0.12g，精密称定，置索氏提取器中，加80％乙醇适量，加热回流提取4小时，弃去乙醇液，药渣挥去乙醇，滤纸筒拆开置于烧杯中，加水100ml，再精密加入内标溶液2ml，煎煮小时并时时搅拌，放冷，加水补至约100ml，混勻，离心，吸取上清液1ml，置安瓿瓶或顶空瓶中，加3.0mol/L的盐酸溶液0.5ml，封口，混匀，110℃水解1小时，放冷，用3.0mol/L的氢氧化钠溶液调节pH值至中性，吸取400μl，照校正因子测定方法，自“加0.5mol/L的PMP甲醇溶液”起，依法操作，取上清液注入液相色谱仪，测定，即得。

1.2.2提取方法

称取铁皮石斛饮片(粉碎成粗颗粒)50.00g，置于500ml烧杯中，加入200g预先用一定PH的冰醋酸水溶液溶解的复合酶溶液，于一定温度的水浴锅中恒温酶解规定的时间；取出，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h,滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，备用。

1.2.3复合酶法提取铁皮石斛多糖工艺筛选

主要对影响提取的复合酶组成、药材粉碎度、酶解PH、酶用量、酶解温度、酶解时间等因素进行单因素考察，优选复合酶法辅助提取铁皮石斛多糖的工艺。

1.2.3.1不同复合酶对铁皮石斛多糖提取率的影响

分别称取粉碎过20目筛的铁皮石斛50g，另取纤维素酶、果胶酶、漆酶组成复合酶，其用量为药材质量的1％，溶于用醋酸调节pH至5.5的缓冲液中，再与铁皮石斛混合，水浴温度40℃酶解1h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h,滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果如图1所示。图1结果显示，复合酶E(纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1:3:2.5))的铁皮石斛多糖的提取率高于其余各组，因此选择复合酶纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1:3:2.5)进行铁皮石斛多糖的进一步提取研究。

1.2.3.2药材粉碎度对对铁皮石斛多糖提取率的影响

分别称取粉碎过10，20，40，60，80目筛的铁皮石斛各50g，加入溶有药材质量的1％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(用醋酸调节pH至5.5)，水浴40℃，酶解1h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h,滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果如表1。

表1药材粉碎度对铁皮石斛多糖提取率的影响

表1结果显示，粉碎度对铁皮石斛多糖的提取率没有显著性影响，考虑到前处理的简易性，以20目的粉碎度进行试验。

1.2.3.3酶解pH对铁皮石斛多糖提取率的影响

称取粉碎过20目筛的铁皮石斛7份，每份50g，分别加入溶有药材质量的1％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5)，水浴40℃，酶解1h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h,滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果如 表2。

表2酶解pH值对铁皮石斛多糖提取率的影响

表2结果显示，pH对铁皮石斛多糖的提取率具有较显著性的影响，复合酶在ph值为5.0时铁皮石斛多糖的提取率最大，因此可以选择酶解的pH值为5.0。

1.2.3.4酶的用量对对铁皮石斛多糖提取率的影响

称取粉碎过20目筛的铁皮石斛7份，每份50g，分别加入溶有药材质量的0.5％、0.75％、1.0％、1.25％、1.5％、1.75％、2.0％……15％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至5.0)，水浴40℃，酶解1h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h,滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果显示，铁皮石斛多糖的提取率随着复合酶用量的增加而增加，当复合酶用量大于药材量的10％，铁皮石斛多糖的提取率增加不明显。因此确定酶解时复合酶(纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5))的用量为原药材的10％。

1.2.3.5温度对对铁皮石斛多糖提取率的影响

称取粉碎过20目筛的铁皮石斛6份，每份50g，分别加入溶有药材质量的1.5％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至5.0)，分别水浴25、30、35、40、45、50℃，酶解1h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果显示，酶解温度对铁皮石斛多糖的提取率具有较显著性的影响，复合酶在酶解温度为45℃时铁皮石斛多糖的提取率最大，因此可以选择酶解的温度为45℃。

1.2.3.6酶解时间对铁皮石斛多糖提取率的影响

称取粉碎过20目筛的铁皮石斛5份，每份50g，分别加入溶有药材质量的10％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至5.0)，分别水浴45℃，酶解0.5、1、1.5、2、3、3.5、4、4.5、5h，转 移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果显示，酶解时间在大于4h后对铁皮石斛多糖的提取率无显著性影响，复合酶在酶解时间为4.5h后铁皮石斛多糖的提取率基本达到平衡，不在增加，因此可以选择酶解的时间为4.5h。

1.3最优验证实验

称取粉碎过20目筛的铁皮石斛3份，每份50g，分别加入溶有药材质量的10％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1︰1︰0.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至5.0)，分别水浴25℃，酶解4.5h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩，转移至200ml容量瓶中，加饮用水至刻度，测定多糖的提取率，结果如表3。

表3优选工艺验证试验结果

表3结果显示，3次验证试验结果基本相近，接近于优选过程中的各试验的最大值，说明优选的条件基本稳定、合理。

1.4浓缩、干燥考察

取粉碎过20目筛的铁皮石斛500g；加入溶有药材质量的1.5％纤维素酶︰果胶酶︰漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)的复合酶缓冲液(分别用醋酸调节pH至5.0)，分别水浴25℃，酶解4.5h，转移至1000ml圆底烧瓶中，补加300g饮用水，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩至相对密度1.40(60℃)，加入乙醇使溶液含醇量达80％，搅拌均匀，静置24h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为46.16％，甘露糖提取率为55.63％。

实施例2

取铁皮石斛，粉碎过40目筛；加入4倍量复合酶缓冲液(果胶酶-纤维素酶-漆酶(1-2:1-3:0.5-2.5)，加冰乙酸溶液调节pH值至4.0)，控制酶解温度50℃ 恒温酶解140min；加饮用水5倍，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩至相对密度1.30(60℃)，加入乙醇使溶液含醇量达75％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇，70℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为43.27％，甘露糖提取率为52.83％。

实施例3

取铁皮石斛，粉碎过60目筛；加入6倍量复合酶缓冲液(果胶酶-纤维素酶-漆酶(1:1:0.5)，加冰乙酸溶液调节pH值至6.0)，控制酶解温度55℃恒温酶解120min；加饮用水4倍，回流提取2h，滤过(120目筛)，滤液浓缩至相对密度1.25(60℃)，加入乙醇使溶液含醇量达70％，静置36h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；80℃真空干燥，即得。分别测定多糖含量和甘露糖含量并计算提取率，结果铁皮石斛多糖提取率为39.88％，甘露糖提取率为48.26％。

以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非对本发明作任何形式上的限制。任何熟悉本领域的技术人员，在不脱离本发明技术方案范围情况下，都可利用上述揭示的技术手段和技术内容对本发明技术方案做出许多可能的变动和修饰，或修改为等同变化的等效实施例。故凡是未脱离本发明技术方案的内容，依据本发明之形状、构造及原理所作的等效变化，均应涵盖于本发明的保护范围内。

Claims (5)

1.一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其包括背板，其特征在于，其包括以下步骤：

(1)以果胶酶、纤维素酶和漆酶按1-2:1-3:0.5-2.5的重量比例混合制成复合酶系，溶解于使用冰乙酸溶液调节pH值至4.0-6.0的缓冲液中；

(2)取铁皮石斛，粉碎过20～80目筛，加入4-6倍量上述含有复合酶系的冰乙酸缓冲溶液；

(3)控制酶解温度30-50℃，酶解1-5h；

(4)转移至适宜容器中，加饮用水4-8倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25-1.40，温度为60℃；

(5)加入乙醇使药液含醇量达70～80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；

(6)60～80℃真空干燥，即得。

2.根据权利要求1所述的酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其特征在于，所述复合酶酶解工艺条件为：铁皮石斛粉碎过20-80目筛、pH4.0-5.5的含有药材质量1.5％复合酶的缓冲液、30-50℃条件下处理1～2h；转移至适宜容器中，加饮用水4-6倍体积，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25-1.40温度为60℃；

加入乙醇使药液含醇量达70～80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60～80℃真空干燥，即得。

3.根据权利要求1所述的酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其特征在于，所述复合酶酶解工艺条件为：铁皮石斛粉碎过20-80目筛、加入4倍量pH5.0的含有药材质量1.5％复合酶的缓冲液、45℃条件下处理1.5h；

转移至提取器中，加入6倍饮用水，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.40，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；60℃真空干燥，即得。

4.根据权利要求1所述的酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其特征在于，取铁皮石斛，粉碎过40目筛；加入5倍量复合酶缓冲液，复合酶缓冲液中果胶酶、纤维素酶和漆酶按1:1:0.5的重量比例混合，加冰乙酸溶液调节pH值至4.0，控制酶解温度50℃恒温酶解120min；加饮用水5倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.25，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达70％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；70℃真空干燥，即得。

5.根据权利要求4所述的酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺，其特征在于，取铁皮石斛，粉碎过60目筛；加入6倍量复合酶缓冲液，复合酶缓冲液中果胶酶、纤维素酶和漆酶按1:1:0.5的重量比例混合，加冰乙酸溶液调节pH值至6.0，控制酶解温度55℃恒温酶解120min；

加饮用水4倍，回流提取2h，120目筛滤过，滤液浓缩至相对密度1.35，温度为60℃，加入乙醇使药液含醇量达80％，搅拌均匀，静置12h后，离心，收集沉淀物，挥去乙醇；80℃真空干燥，即得。