CN116178585A - 一种组合式提取黄秋葵多糖的方法 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，首先将黄秋葵嫩果进行加工处理，制得黄秋葵粉末；然后称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水10‑40ml，室温下浸泡1h，再在95℃下浸提20~60min；浸提后的溶液中加入复合酶混匀，在40‑60℃水浴中酶解60‑100min；然后在95℃下酶解10min，冷却至室温后离心收集上层清液，并加蒸馏水定容至50ml；最后在上层清液中加入无水乙醇静置，离心收集沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml即可。本发明将热水浸提和酶解进行结合再优化，形成的提取方式可以有效降低操作难度，提高提取率。
Description
技术领域
本发明属于农作物栽培领域，尤其涉及一种组合式提取黄秋葵多糖的方法。
背景技术
黄秋葵为锦葵科一年生草本植物，其嫩果富含类黄酮、多酚、氨基酸、多糖等生物活性物质，是一款兼具食用和药用的保健蔬菜。食用黄秋葵具有一定的抗氧化、抗肿瘤、抗癌、抗糖尿病以及免疫调节作用，黄秋葵多糖被认为是与上述生物活性相关的物质。
黄秋葵多糖提取的方式多样，主要有三种类型1）溶剂提取法，包括热水浸提法、酸提法和碱提法； 2）仪器辅助提取法，有微波法、超声法、超高压辅助提法；3）生物提取法，酶提取法。其中：热水浸提法提取率不高，且高温长时加热对保留多糖的生物活性不利；酸提法和碱提法，对于溶剂的用量比较难以把控，容易造成多糖结构的改变，同时容易造成化学残留；利用微波、超声或超高压等仪器进行辅助提取时，需要设置的参数较多；酶提取法条件较为温和，但受秋葵黏液环境影响提取效率较低。
发明内容
本发明的目的在于针对背景技术中的问题，提供一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，将热水浸提和酶解进行结合再优化，形成的提取方式可以有效降低操作难度，提高提取率。
为实现上述目的，本发明提出如下技术方案：一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5~6日的黄秋葵嫩果进行加工处理，制得黄秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水20-40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提20~60min；
C、浸提后的溶液中加入复合酶混匀，在40-60℃水浴中酶解60-100min，酶解期间，每隔20min，需进行一次混匀操作；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后离心收集上层清液，并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入无水乙醇静置，然后离心收集沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml得到多糖溶液。
优选地，所述步骤A中加工处理包括洗净晾干，杀青，烘干，粉碎及过筛。
优选地，所述步骤B中蒸馏水的添加量为30ml，浸提时间为40min。
优选地，所述步骤C中复合酶为果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶的混合，其中果胶酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的1.5~2.5%，纤维素酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的3~4%，中性蛋白酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的2.5~3.5%。
优选地，所述果胶酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的2.5%，纤维素酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的4%，中性蛋白酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的3%。
优选地，所述步骤C中，酶解水浴温度为50℃，酶解时间为80min。
优选地，所述离心步骤为在12000rmp下离心10min。
优选地，所述步骤E中无水乙醇的添加量为上层清液的四倍，静置温度为4℃，静置时间为8~10h。
与现有技术相比，本发明所揭示的组合式提取黄秋葵多糖的方法，具有如下有益效果：
采用热水浸提与酶提取进行结合，先通过热水浸提实现多糖的初步提取，同时缩短浸提时间，不仅提高提取率，还有效避免破坏多糖的生物活性，热水浸提后再通过复合酶进行酶解反应，通过酶解再次破坏植物的细胞壁，从而让细胞里的多糖溢出，使得多糖提取率可以提升3~5倍。
这种组合的形式，不仅操作简单，而且可以极大的提高多糖提取率。
实施方式
下面将结合本发明的内容，对本发明实施例的技术方案进行清楚、完整的描述。
本发明所揭示的一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5~6日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水20-40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提20~60min；
C、浸提后的溶液中加入复合酶混匀，在40-60℃水浴中酶解60-100min，酶解期间，每隔20min，需进行一次混匀，从而确保充分酶解；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心10min以收集上层清液，在获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在定容后的上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置8~10h（过夜），然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml得到多糖溶液。
具体说来，复合酶为果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶的混合，其中果胶酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的1.5~2.5%，纤维素酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的3~4%，中性蛋白酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的2.5~3.5%。
提取后的多糖含量采用苯酚-硫酸法进行测定，具体为：
5%苯酚溶液配制
称取80g苯酚于100ml烧杯中，加蒸馏水溶解完全，然后转至100ml棕色容量瓶中定容，放置于4℃冰箱中避光保存获得80%苯酚溶液，然后吸取80%苯酚溶液5ml，加入75ml蒸馏水，充分混匀，形成5%苯酚溶液；
葡萄糖标准溶液配制
将葡萄糖标准品烘干至恒重，取适当样品加蒸馏水配置成浓度为1mg/mL葡萄糖标准溶液，取适当1mg/mL葡萄糖标准溶液加蒸馏水分别配置成浓度为1mg/mL、0.5mg/mL、0.25mg/mL、0.125mg/mL、0.0625mg/mL的标准品；
多糖含量测定
取1.5mLEP离心管，吸取200ul标准品，加入200ul的5%苯酚溶液和0.5mL浓硫酸，充分混匀后静置5min，放入95℃水浴20min，之后静置10min，冷却至室温，用移液枪将反应后的样品加入比色皿中，于紫外分光光度计（提前预热30Min及以上）490nm下测定吸光度值A。根据吸光度和浓度得到标准曲线，y=15.962x-0.0037，R2=0.9973。取测定样品，按照以上相同方法反应后，测得吸光度值，代入方程中计算得到多糖提取率。
多糖提取率计算公式：Y=c*n*v/M*100%，
式中Y为黄秋葵多糖提取率%、c为所测黄秋葵的质量浓度（mg/mL）、n为多糖提取液的稀释倍数、v为多糖提取也的体积（mL）、M为所测黄秋葵样品质量（g）。
为更好地理解本发明，下面结合具体实施例来进一步分析单纯酶解反应中复合酶配比、酶解条件对提取率的影响，以及添加热水浸提后浸提时间对提取率的影响。
第一部分进行复合酶配比分析，分析时设定酶解条件一致。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水30ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在50℃水浴中酶解80min，其中果胶酶的添加量为1.5%，纤维素酶的添加量为3%，中性蛋白酶的添加量为2.5%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为3.21%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水30ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在50℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为1.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3.5%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为8.64%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水30ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在50℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为10.07%。
根据上述三个实施例可以看出，酶种对多糖提取率的影响是果胶酶大于纤维素酶大于蛋白酶，且果胶酶添加量为2.5%，纤维素酶添加量为4%，蛋白酶添加量为3%时提取率最高。
第二部分进行复合酶条件分析，分析时复合酶配比选择最优配比。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水30ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在60℃水浴中酶解60min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为11.57%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水40ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在60℃水浴中酶解100min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为12.65%
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水40ml，室温下浸泡1h；
C、在浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在40℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为14.57%。
根据上述三个实施例可以看出，在酶解温度40℃，酶解时间80min，蒸馏水容量40ml时提取率最高。
第三部分进行热水浸提时间条件分析，在酶解条件最优的情况下，分析添加热水浸提步骤以及不同浸提时间的提取率情况。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提20min；
C、浸提后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在40℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为16.03%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提40min；
C、浸提后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在40℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为17.59%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提60min；
C、浸提后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在40℃水浴中酶解80min，其中其中果胶酶的添加量为2.5%，纤维素酶的添加量为4%，中性蛋白酶的添加量为3%；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置过夜，然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为17.3%。
实施例
一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，包括如下步骤：
A、取花后5日的黄秋葵嫩果清洗干净，自然晾干后，先在105℃下杀青10min，然后在60℃烘箱中烘干至恒重，再用粉碎机粉碎并过100目筛，得到秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水20ml，室温下浸泡1h；
C、浸泡后的溶液中加入由果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶组成的复合酶混匀，在40℃水浴中酶解60min，其中其中果胶酶的添加量为1.5%，纤维素酶的添加量为3%，中性蛋白酶的添加量为2.5%，混合后溶液的PH值为4；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后，在12000rmp离心收集10min，获得上层清液并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入四倍体的无水乙醇，于4℃下静置8~10h（过夜），然后在12000rmp下离心10min获得沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml。
制备得到的多糖溶液通过苯酚-硫酸法进行测定，得到多糖提取率为3.21%。
通过上述实施例之间以及与对比实施例分析可知，单纯通过优化酶解反应条件可以实现提取率的提升，但在酶解之前添加热水浸提工艺，可以极大的提高多糖提取率，同时热水浸提时间控制住在40min，多糖提取率可以达到常规方法的5倍以上
发明的技术内容及技术特征已揭示如上，然而熟悉本领域的技术人员仍可能基于本发明的教示及揭示而作种种不背离本发明精神的替换及修饰，因此，本发明保护范围应不限于实施例所揭示的内容，而应包括各种不背离本发明的替换及修饰，并为本专利申请权利要求所涵盖。
Claims (8)
1.一种组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于包括如下步骤：
A、取花后5~6日的黄秋葵嫩果进行加工处理，制得黄秋葵粉末；
B、称取黄秋葵粉末1g，加入蒸馏水20-40ml，室温下浸泡1h，然后在95℃下浸提20~60min；
C、浸提后的溶液中加入复合酶混匀，在40-60℃水浴中酶解60-100min，酶解期间，每隔20min，需进行一次混匀操作；
D、然后在95℃下灭酶10min，冷却至室温后离心收集上层清液，并加蒸馏水定容至50ml；
E、在上层清液中加入无水乙醇静置，然后离心收集沉淀物，待沉淀物风干至酒精完全挥发后，加蒸馏水使沉淀物完全溶解，之后再加蒸馏水定容至100ml得到多糖溶液。
2.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述步骤A中加工处理包括洗净晾干，杀青，烘干，粉碎及过筛。
3.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述步骤B中蒸馏水的添加量为30ml，浸提时间为40min。
4.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述步骤C中复合酶为果胶酶，纤维素酶和中性蛋白酶的混合，其中果胶酶的添加量为秋葵粉末添加量的1.5~2.5%，纤维素酶的添加量为秋葵粉末添加量的3~4%，中性蛋白酶的添加量为秋葵粉末添加量的2.5~3.5%。
5.根据权利要求4所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述果胶酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的2.5%，纤维素酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的4%，中性蛋白酶的添加量为黄秋葵粉末添加量的3%。
6.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述步骤C中，水浴温度为50℃，酶解时间为80min。
7.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述离心步骤为在12000rmp下离心10min。
8.根据权利要求1所述的组合式提取黄秋葵多糖的方法，其特征在于：所述步骤E中无水乙醇的添加量为上层清液的四倍，静置温度为4℃，静置时间为8~10h。
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Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103290081A (zh) * | 2012-02-27 | 2013-09-11 | 潘千水 | 一种米糠活性多糖的提取方法 |
| CN104387485A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-04 | 绥化学院 | 一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法 |
| CN106832027A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-06-13 | 浙江海洋大学 | 秋葵多糖的提取方法 |
| CN107312107A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-11-03 | 永春生（广州）生物科技有限公司 | 一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺 |
| CN109988250A (zh) * | 2019-04-18 | 2019-07-09 | 浙江中医药大学 | 一种从腹水草中提取腹水草粗多糖的方法 |
| CN110283860A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-09-27 | 华南理工大学 | 超声波辅助复合酶解提取的细基江蓠多糖及其提取方法 |
| CN111423524A (zh) * | 2020-06-01 | 2020-07-17 | 浙江名希生物技术有限责任公司 | 一种荷叶多糖的提取方法 |
-
2023
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Patent Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103290081A (zh) * | 2012-02-27 | 2013-09-11 | 潘千水 | 一种米糠活性多糖的提取方法 |
| CN104387485A (zh) * | 2014-11-12 | 2015-03-04 | 绥化学院 | 一种复合酶协同高压热水浸提法提取金针菇多糖的方法 |
| CN106832027A (zh) * | 2016-12-30 | 2017-06-13 | 浙江海洋大学 | 秋葵多糖的提取方法 |
| CN107312107A (zh) * | 2017-08-03 | 2017-11-03 | 永春生（广州）生物科技有限公司 | 一种酶解法提取铁皮石斛多糖的工艺 |
| CN109988250A (zh) * | 2019-04-18 | 2019-07-09 | 浙江中医药大学 | 一种从腹水草中提取腹水草粗多糖的方法 |
| CN110283860A (zh) * | 2019-05-31 | 2019-09-27 | 华南理工大学 | 超声波辅助复合酶解提取的细基江蓠多糖及其提取方法 |
| CN111423524A (zh) * | 2020-06-01 | 2020-07-17 | 浙江名希生物技术有限责任公司 | 一种荷叶多糖的提取方法 |
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