CN107286269A - 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 - Google Patents
两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107286269A CN107286269A CN201710685933.2A CN201710685933A CN107286269A CN 107286269 A CN107286269 A CN 107286269A CN 201710685933 A CN201710685933 A CN 201710685933A CN 107286269 A CN107286269 A CN 107286269A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- dendrobium candidum
- candidum leaf
- polyose
- freeze
- polysaccharide
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 241000026010 Dendrobium candidum Species 0.000 title claims abstract description 135
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims description 20
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 title description 7
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 claims abstract description 44
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 claims abstract description 42
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 claims abstract description 42
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims abstract description 19
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims abstract description 18
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 18
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 9
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims abstract description 9
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 9
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 9
- SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N D-mannomethylose Natural products CC1OC(O)C(O)C(O)C1O SHZGCJCMOBCMKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 6
- SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N L-rhamnopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-JFNONXLTSA-N 0.000 claims abstract description 5
- PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N L-rhamnose Natural products CC(O)C(O)C(O)C(O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 5
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 5
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 49
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 30
- XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N Iron Chemical compound [Fe] XEEYBQQBJWHFJM-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 28
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 24
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 23
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 claims description 22
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 20
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 claims description 20
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims description 19
- 239000006286 aqueous extract Substances 0.000 claims description 17
- 239000003480 eluent Substances 0.000 claims description 15
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 15
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 15
- 229910052742 iron Inorganic materials 0.000 claims description 14
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 13
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 claims description 12
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 12
- 238000005238 degreasing Methods 0.000 claims description 11
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 11
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 11
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 claims description 10
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims description 10
- 238000000926 separation method Methods 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 9
- 229920005654 Sephadex Polymers 0.000 claims description 8
- 239000012507 Sephadex™ Substances 0.000 claims description 8
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 8
- 230000006837 decompression Effects 0.000 claims description 7
- 238000000227 grinding Methods 0.000 claims description 7
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 7
- 239000004575 stone Substances 0.000 claims description 7
- 240000004638 Dendrobium nobile Species 0.000 claims description 6
- LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N N-Butanol Chemical compound CCCCO LRHPLDYGYMQRHN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 6
- 239000002955 immunomodulating agent Substances 0.000 claims description 6
- 230000002584 immunomodulator Effects 0.000 claims description 6
- 229940121354 immunomodulator Drugs 0.000 claims description 6
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 6
- 239000013049 sediment Substances 0.000 claims description 6
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 6
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 claims description 4
- 239000002253 acid Substances 0.000 claims description 4
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 claims description 4
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 claims description 4
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 claims description 4
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 claims description 4
- 239000005864 Sulphur Substances 0.000 claims description 3
- 230000000118 anti-neoplastic effect Effects 0.000 claims description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 claims 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 claims 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 claims 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims 1
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims 1
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims 1
- KVYRCBOUKXJXDK-UHFFFAOYSA-N 3,4-dimethylphenazine-1,2-diamine hydrochloride Chemical compound Cl.C1=CC=CC2=NC3=C(C)C(C)=C(N)C(N)=C3N=C21 KVYRCBOUKXJXDK-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 8
- LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N ac1ldcw0 Chemical compound Cl.C1CN(C)CCN1C1=C(F)C=C2C(=O)C(C(O)=O)=CN3CCSC1=C32 LPQOADBMXVRBNX-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 5
- 238000002290 gas chromatography-mass spectrometry Methods 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 3
- 229920005615 natural polymer Polymers 0.000 abstract description 2
- MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N Nitric oxide Chemical compound O=[N] MWUXSHHQAYIFBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 5
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 5
- 239000000463 material Substances 0.000 description 5
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 4
- 238000005227 gel permeation chromatography Methods 0.000 description 4
- 238000005342 ion exchange Methods 0.000 description 4
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 4
- JGEVJQBAHWCNEN-UHFFFAOYSA-N C1(=CC=CC=C1)O.S(=O)(=O)(O)O.C1=CC=CC=C1 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)O.S(=O)(=O)(O)O.C1=CC=CC=C1 JGEVJQBAHWCNEN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000167880 Hirundinidae Species 0.000 description 3
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N Methanol Chemical compound OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 3
- 238000002329 infrared spectrum Methods 0.000 description 3
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 3
- 244000269722 Thea sinensis Species 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 238000007710 freezing Methods 0.000 description 2
- 230000008014 freezing Effects 0.000 description 2
- 239000000413 hydrolysate Substances 0.000 description 2
- 230000010355 oscillation Effects 0.000 description 2
- IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M potassium bromide Chemical compound [K+].[Br-] IOLCXVTUBQKXJR-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 2
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 description 2
- 239000013589 supplement Substances 0.000 description 2
- 239000003643 water by type Substances 0.000 description 2
- 244000025254 Cannabis sativa Species 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-IVMDWMLBSA-N D-allopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-IVMDWMLBSA-N 0.000 description 1
- 241001523681 Dendrobium Species 0.000 description 1
- 241001076416 Dendrobium tosaense Species 0.000 description 1
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N Fucose Natural products C[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)C=O PNNNRSAQSRJVSB-SLPGGIOYSA-N 0.000 description 1
- WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N Hydroxylamine hydrochloride Chemical class Cl.ON WTDHULULXKLSOZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 238000004566 IR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N L-fucopyranose Chemical compound C[C@@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O SHZGCJCMOBCMKK-DHVFOXMCSA-N 0.000 description 1
- 206010037660 Pyrexia Diseases 0.000 description 1
- KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N Sodium Chemical compound [Na] KEAYESYHFKHZAL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical class OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004075 acetic anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 229930013930 alkaloid Natural products 0.000 description 1
- 239000003708 ampul Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 230000003276 anti-hypertensive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 230000003078 antioxidant effect Effects 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 230000006037 cell lysis Effects 0.000 description 1
- 230000006835 compression Effects 0.000 description 1
- 238000007906 compression Methods 0.000 description 1
- 238000001212 derivatisation Methods 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 210000002615 epidermis Anatomy 0.000 description 1
- 150000002170 ethers Chemical class 0.000 description 1
- 239000003337 fertilizer Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000003517 fume Substances 0.000 description 1
- 235000020510 functional beverage Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 201000001421 hyperglycemia Diseases 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 1
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001161 mammalian embryo Anatomy 0.000 description 1
- 239000012982 microporous membrane Substances 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 150000003222 pyridines Chemical class 0.000 description 1
- 238000000197 pyrolysis Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000010183 spectrum analysis Methods 0.000 description 1
- 235000013547 stew Nutrition 0.000 description 1
- 210000002784 stomach Anatomy 0.000 description 1
- 238000010792 warming Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
Abstract
本发明涉及两种从铁皮石斛叶分离的多糖及其制备方法和用途，属于天然高分子领域。其优点表现在：利用GPC测定平均相对分子量和GC‑MS分析单糖组成，发现本发明铁皮石斛叶多糖A‑11平均相对分子量为28342Da，主要由半乳糖，阿拉伯糖和鼠李糖组成，摩尔比为3.21:1.11:0.23，还发现痕量的木糖，葡萄糖和甘露糖；铁皮石斛叶多糖A‑22平均相对分子量为41143Da，主要由葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为3.23:1.02，还发现痕量的木糖、阿拉伯糖。同时，本发明的铁皮石斛叶多糖A‑11，A‑22都可以显著提高巨噬细胞吞噬中性红的能力，并显著促进巨噬细胞产生NO。
Description
技术领域
本发明涉及天然高分子技术领域，具体地说，是两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用。
背景技术
铁皮石斛为兰科石斛属植物铁皮石斛的干燥茎，因表皮呈铁绿色而得名。铁皮石斛作为一种价值极高的珍贵传统中药材，具有生津养胃、退热润肺等滋补功效，素有“千金草”之称。2015版《中华人民共和国药典》中规定铁皮石解的茎作为药用部位，叶为非药用部位。铁皮石斛的茎通常加工成干品，如铁皮枫斗、铁皮石斛功能性饮料等；另外，铁皮石斛的鲜茎可直接食用，或炖汤，或泡茶，或浸酒。然而，铁皮石斛叶常作为废弃物，被焚烧或当肥料，造成了严重的资源浪费。最近几年人们发现铁皮石斛叶对高血压，高血糖，高血脂等症状有较好的辅助疗效，并作为保健茶饮用。因此，我们有必要对铁皮石斛叶资源进行深入研究并合理利用。
铁皮石斛主要含有多糖类、生物碱类，研究表明，多糖与铁皮石斛的药理活性，如提高机体免疫，抗氧化，抗肿瘤，抗衰老等密切相关。目前，人们对铁皮石斛多糖的研究几乎全部集中在茎部，对铁皮石斛叶的研究报道却较少。
中国专利文献CN104740335A、CN104740336A公开了一种具有降尿酸、降压作用的铁皮石斛叶提取物，通过以下方法制备得到：铁皮石斛叶洗净、干燥后，机械粉碎，用体积百分比浓度为0～30％的乙醇溶液回流提取1～3次，每次1～3h，每次用量分别为药材重量的5～20倍，合并滤液，回收乙醇，减压浓缩得铁皮石斛叶提取物。中国专利文献CN105534831A公开了一种具有保湿功效的铁皮石斛叶提取物，由如下步骤的方法制备得到：S1.将铁皮石斛叶以1g:5～20ml的料液比加水回流提取1～5次，每次20～180min，得铁皮石斛叶水提液；S2.将铁皮石斛叶水提液浓缩，然后加入乙醇，使铁皮石斛叶水提液中的乙醇体积浓度达到50％～90％，沉淀8～36h，离心取沉淀即得。中国专利文献CN106581441A公开了一种铁皮石斛叶提取物的制备方法，将新鲜的铁皮石斛叶经过初步筛选去除杂质之后洗净；将干净的铁皮石斛叶进行粉碎；将铁皮石斛叶按固液比6-10倍加入溶剂中，进行微波处理48-60小时，后将处理过的溶液加热回流，加热2-3小时，回流提取，收集滤液，减压浓缩得铁皮石斛叶提取物。但是关于本发明的两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用目前还未见报道。
发明内容
本发明的目的是针对现有技术中的不足，提供两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖。
本发明的再一的目的是，提供两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法。
本发明的另一的目的是，提供两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的用途。
为实现上述目的，本发明采取的技术方案是：一种铁皮石斛叶多糖，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：
(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；
(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；
(3)向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀；将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖；
(4)取粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；收集第3-15管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-1；
(5)多糖A-1配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，收集第9-14管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖。
进一步地，所述的铁皮石斛叶多糖平均相对分子量为28342Da，主要由摩尔比为3.21:1.11:0.23的半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成，以及痕量的木糖、葡萄糖和甘露糖。
进一步地，所述的铁皮石斛叶多糖的紫外图谱如附图9所示，红外图谱如附图10所示。
另一种铁皮石斛叶多糖，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：
(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；
(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；
(3)向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀；将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖；
(4)取粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；收集第66-71管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-2；
(5)多糖A-2配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，收集第14-19管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖。
进一步地，所述的铁皮石斛叶多糖平均相对分子量为41143Da，主要由摩尔比为3.23:1.02的葡萄糖和半乳糖组成，以及痕量的木糖和阿拉伯糖。
进一步地，所述的铁皮石斛叶多糖的紫外图谱如附图9所示，红外图谱如附图10所示。
为实现上述第二个目的，本发明采取的技术方案是：一种铁皮石斛叶多糖的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：(1)铁皮石斛叶经粉碎机器粉碎，再过20目筛得到铁皮石斛叶粉末；(2)铁皮石斛叶粉末经石油醚浸泡脱脂得到脱脂铁皮石斛叶粉末；(3)脱脂铁皮石斛叶粉末水提得到铁皮石斛叶水提液；(4)铁皮石斛叶水提液经Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷冻干燥获得粗多糖；(5)粗多糖经阴离子交换柱层析得到洗脱液；(6)第(5)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥获得多糖A-1；(7)多糖A-1经凝胶柱层析得到洗脱液；(8)第(7)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥得到铁皮石斛叶多糖。
另一种铁皮石斛叶多糖的制备方法，所述的制备方法包括以下步骤：(1)铁皮石斛叶经粉碎机器粉碎，再过20目筛得到铁皮石斛叶粉末；(2)铁皮石斛叶粉末经石油醚浸泡脱脂得到脱脂铁皮石斛叶粉末；(3)脱脂铁皮石斛叶粉末水提得到铁皮石斛叶水提液；(4)铁皮石斛叶水提液经Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷冻干燥获得粗多糖；(5)粗多糖经阴离子交换柱层析得到洗脱液；(6)第(5)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥获得多糖A-2；(7)多糖A-2经凝胶柱层析得到洗脱液；(8)第(7)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥得到铁皮石斛叶多糖。
为实现上述第三个目的，本发明采取的技术方案是：所述的铁皮石斛叶多糖在制备免疫调节剂中的应用。
进一步地，所述的免疫调节剂促进巨噬细胞的吞噬作用。
进一步地，所述的免疫调节剂增加巨噬细胞的一氧化氮的产生量。
所述的铁皮石斛叶多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。
本发明优点在于：
1、本发明首次从铁皮石斛叶中分离出两种多糖，分别测定其平均相对分子量，分析其单糖组成并确定其具体的活性用途。
2、铁皮石斛叶多糖A-11，A-22，经GPC测定，A-11，A-22的平均相对分子量分别为28342Da和41143Da。经GC-MS分析，A-11主要由半乳糖，阿拉伯糖和鼠李糖组成，摩尔比为3.21:1.11:0.23，还发现痕量的木糖，葡萄糖和甘露糖；A-22主要由葡萄糖和半乳糖组成，摩尔比为3.23:1.02，还发现痕量的木糖，阿拉伯糖。
3、铁皮石斛叶多糖A-11，A-22都可显著促进巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力，A-11在5-500μg/mL浓度范围内，A-22在50-800μg/mL浓度范围内，与对照组相比都有显著性差异(P<0.05)，并且A-11促进巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的能力明显强于A-22。另外铁皮石斛叶多糖A-11，A-22都可显著促进巨噬细胞RAW264.7产生NO，A-11在125-500μg/mL浓度范围内，A-22在大于400μg/mL浓度范围内，与LPS对照组相比都有显著性差异(P<0.05)，并且A-11促进巨噬细胞RAW264.7产生NO的能力明显强于A-22。
附图说明
附图1：铁皮石斛叶多糖的提取流程图。
附图2：铁皮石斛叶多糖A的DEAE-52柱洗脱曲线。
附图3：铁皮石斛叶多糖A-1的Sephadex G-100柱洗脱曲线。
附图4：铁皮石斛叶多糖A-2的Sephadex G-100柱洗脱曲线。
附图5：铁皮石斛叶多糖紫外分光图谱。
附图6：铁皮石斛叶多糖红外分光图谱。
附图7：铁皮石斛叶多糖A-11对巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的影响图。
附图8：铁皮石斛叶多糖A-22对巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红的影响图。
附图9：铁皮石斛叶多糖A-11对巨噬细胞RAW264.7产生NO的影响图。
附图10：铁皮石斛叶多糖A-22对巨噬细胞RAW264.7产生NO的影响图。
具体实施方式
下面结合实施例对本发明提供的具体实施方式作详细说明。
实施例1 铁皮石斛叶多糖A-11的制备
将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入石油醚(料液比为1:5)，搅拌使之与石油醚充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复上述操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末。加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液。
利用Sevage法除蛋白，向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂(氯仿:正丁醇＝3:1)，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复上述操作5次。随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩。
向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀。将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖。
取上述粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第3-15管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-1。
上述多糖A-1配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第9-14管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖A-11。
实施例2 铁皮石斛叶多糖A-22的制备
将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入石油醚(料液比为1:5)，搅拌使之与石油醚充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复上述操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末。加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液。
利用Sevage法除蛋白，向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂(氯仿:正丁醇＝3:1)，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复上述操作5次。随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩。
向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀。将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖。
取上述粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第66-71管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-2。
多糖A-2配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，以试管号为横坐标，吸光度为纵坐标绘制洗脱曲线，收集第14-19管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖A-22。
实施例3 两种铁皮石斛叶多糖的表征
一)多糖平均相对分子量的测定
A-11和A-22的平均相对分子量分别通过Waters 2695(7.8×300mm)凝胶渗透色谱系统(GPC)测定，该系统配备HR3，HR4，HR5柱和Waters 2414折射率检测器。上样50μL，流动相为纯水，流速1mL/min，柱温40℃，PEG为标样做标准曲线。
表1 铁皮石斛叶多糖A-11和A-22的GPC测定的结果
二)多糖的单糖组成分析
1、水解多糖为单糖：准确称取铁皮石斛叶纯化多糖A-11、A-22各5.0mg，分别放入两个安瓿瓶中，加入2.0mL三氟乙酸(TFA)溶液，密封，120℃水解8h。将水解产物置于减压真空干燥箱中快速干燥，依次加入甲醇2mL，减压蒸干，重复三次，直至TFA无残留，干燥产物备用。
2、水解单糖的衍生化：上述水解产物中依次加入0.1mL吡啶、5mg盐酸羟胺，通风橱中90℃加热30min，小心混匀冷却至室温，加入1.0mL乙酸酐，继续水浴30min，完成乙酰化衍生后减压浓缩干燥。每管加入色谱级氯仿1mL,振荡溶解，0.45μL微孔滤膜过滤后，进样上机分析。标准品单糖(鼠李糖，阿拉伯糖，岩藻糖，木糖，阿洛糖，甘露糖，葡萄糖和半乳糖)衍生化同以上操作。
3、上机分析条件GC-MS体系Agilent，77890A-5975C,USA；DB-5MS(30mm×0.25mm×0.25μm,Agilent)；N2流速1mL/min，温度程序设置为：进样口温度为270℃，离子源温度230℃，柱温100℃保持2min，然后以20℃/min增加到190℃，再以20℃/min增加到260℃，最终以10℃/min升温到300℃，保持4min。
表2 铁皮石斛叶多糖A-11的GC-MS分析的结果
表3 铁皮石斛叶多糖A-22的GC-MS分析的结果
三)紫外光谱分析
取一定量除去蛋白的多糖溶于重蒸水中，制成浓度为0.5mg/mL溶液，在紫外可见光谱记录仪上扫描分析，波长范围：190nm-700nm；结果如图5，其在260nm和280nm处均无特征吸收峰，表明多糖无蛋白质和核酸。
四)红外光谱分析
准确称取干燥A-11和A-22各2mg，加入干燥的溴化钾粉末混匀研磨，倒入压片模具压片1min，置于样品扫描窗口，在4000～400cm-1的范围内进行红外光谱扫描。结果如图6所示，可以看出：红外光谱分析显示，组分A-11和A-22都在3300～3500cm-1有糖分子-OH伸缩振动引起的特征峰，是-OH形成的分子内、间氢键；2800cm-1左右出现了较强吸收峰，是糖分子-CH、-CH2、-CH3伸缩振动引起的信号峰，这两组峰都为糖类的特征吸收峰，所以两种组分都是糖类物质；在1000～1200cm-1处，两种组分都有明显的吸收峰，为C-O-C环内醚中的C-O伸缩振动，和C-O-H的O-H变角振动是C-H的变角振动，由图谱可知多糖中可能含有3,6-内醚桥；812cm-1处是C-O-S伸缩振动的特征吸收峰，组分中存在半乳糖；872cm-1是D-Man的吸收峰；775cm-1波数处出现比较弱的葡萄吡喃糖环残基吸收峰；在1875～1835cm-1没有糖醛酸的特征峰，表明多糖为中性糖。
实施例4 两种铁皮石斛叶多糖的用途
材料与试剂：铁皮石斛叶多糖A-11，A-22(实施例1、实施例2制备)，DMEM培养基(Sigma)，LPS(Sigma)，胚牛血清(Sigma)，胰蛋白酶(Sigma)，Griess试剂(Sigma)。
仪器恒温培养箱(上海博迅实业公司)，酶标仪(日本CORONA公司)，显微镜(上海光学仪器厂)，96孔板(美国BD公司)。
一、A-11，A-22对巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红功能的影响
巨噬细胞RAW264.7加入到96孔板中(5×105个/孔)，随后每孔分别添加PBS，不同浓度的组分多糖A-11(5、25、125、250、和500μg/mL)和A-22(50、100、200、400、和800μg/mL)进行处理，每个浓度3个平行组，在37℃、5％CO2条件下培养24h。随后，弃上清液，PBS洗涤2次，再逐孔添加100μL 0.075％中性红，摇匀，置于37℃、5％CO2条件下培养30min。随后每孔再弃上清液，并用PBS洗涤3次，添加100μL细胞裂解液至每孔，37℃裂解细胞6h，在酶标仪490nm波长测定吸光值，OD值表示为吞噬作用。结果如图7、图8所示，铁皮石斛叶多糖A-11，A-22在高浓度时都可显著得促进巨噬细胞RAW264.7吞噬中性红能力。
二、A-11，A-22对巨噬细胞RAW264.7产生一氧化氮(NO)的影响
RAW264.7细胞加入到96孔板中(5×105个/孔)，随后每孔分别添加DMSO(空白对照组)，LPS(阳性对照组)，不同浓度的组分多糖A-11(5、25、125、250、和500μg/mL)和A-22(50、100、200、400、和800μg/mL)进行处理，每个浓度3个平行组，在37℃、5％CO2条件下培养24h。之后加入100μL Griess试剂至100μL上清液样品中，混匀后，静置10min。用酶标仪在570nm处测定吸光度值，通过亚硝酸钠标准曲线计算上清液NO的产生量。结果如图9、图10所示，说明铁皮石斛叶多糖A-11，A-22可以显著增强巨噬细胞RAW264.7NO的产生量。
以上所述仅是本发明的优选实施方式，应当指出，对于本技术领域的普通技术人员，在不脱离本发明方法的前提下，还可以做出若干改进和补充，这些改进和补充也应视为本发明的保护范围。
Claims (10)
1.一种铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：
(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；
(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；
(3)向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀；将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖；
(4)取粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；收集第3-15管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-1；
(5)多糖A-1配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，收集第9-14管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖。
2.根据权利要求1所述的铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖平均相对分子量为28342Da，主要由摩尔比为3.21:1.11:0.23的半乳糖、阿拉伯糖和鼠李糖组成，以及痕量的木糖、葡萄糖和甘露糖。
3.根据权利要求1所述的铁皮石斛叶多糖的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)铁皮石斛叶经粉碎机器粉碎，再过20目筛得到铁皮石斛叶粉末；(2)铁皮石斛叶粉末经石油醚浸泡脱脂得到脱脂铁皮石斛叶粉末；(3)脱脂铁皮石斛叶粉末水提得到铁皮石斛叶水提液；(4)铁皮石斛叶水提液经Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷冻干燥获得粗多糖；(5)粗多糖经阴离子交换柱层析得到洗脱液；(6)第(5)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥获得多糖A-1；(7)多糖A-1经凝胶柱层析得到洗脱液；(8)第(7)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥得到铁皮石斛叶多糖。
4.一种铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖由以下步骤的制备方法制得：
(1)将干燥铁皮石斛叶研磨、粉碎、过20目筛，随后向铁皮石斛叶粉末加入5倍量的石油醚，搅拌使充分接触，静置2h，弃上层石油醚，重复操作3次，最后将石油醚减压挥干，得铁皮石斛叶脱脂粉末；加水，铁皮石斛叶脱脂粉末按照料液比1:30，70℃提取2h，得水提液，60℃减压浓缩，得浓缩液；
(2)向浓缩液加入3倍体积的Sevage试剂，所述的Sevage试剂为氯仿:正丁醇＝3:1，剧烈振荡30min，4000rpm离心20min，取上清，重复操作5次；随后60℃减压浓缩除去有机试剂并将溶液浓缩；
(3)向浓缩液加入3倍体积的85％乙醇，室温下静置48h沉淀多糖，4000rpm、20min、4℃离心收集沉淀；将沉淀物溶解于蒸馏水中，冷冻干燥得粗多糖；
(4)取粗多糖0.2g，配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经DEAE-52纤维素离子交换柱分离，依次用浓度为0、0.05、0.1、0.3、0.4、0.5、0.6mol/L NaCl，溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；收集第66-71管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得多糖A-2；
(5)多糖A-2配置成浓度为100mg/mL的溶液，上样量为2mL，经Sephadex G-100柱分离，用0.1mol/L NaCl溶液洗脱，自动部分收集器收集，流速为1mL/min，4min每管；采用苯酚-硫酸法检测，收集第14-19管，合并后经浓缩、透析、冷冻干燥得铁皮石斛叶多糖。
5.根据权利要求4所述的铁皮石斛叶多糖，其特征在于，所述的铁皮石斛叶多糖平均相对分子量为41143Da，主要由摩尔比为3.23:1.02的葡萄糖和半乳糖组成，以及痕量的木糖和阿拉伯糖。
6.根据权利要求4所述的铁皮石斛叶多糖的制备方法，其特征在于，所述的制备方法包括以下步骤：(1)铁皮石斛叶经粉碎机器粉碎，再过20目筛得到铁皮石斛叶粉末；(2)铁皮石斛叶粉末经石油醚浸泡脱脂得到脱脂铁皮石斛叶粉末；(3)脱脂铁皮石斛叶粉末水提得到铁皮石斛叶水提液；(4)铁皮石斛叶水提液经Sevage法除蛋白，85％乙醇沉淀，最后冷冻干燥获得粗多糖；(5)粗多糖经阴离子交换柱层析得到洗脱液；(6)第(5)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥获得多糖A-2；(7)多糖A-2经凝胶柱层析得到洗脱液；(8)第(7)步的洗脱液浓缩、透析、冷冻干燥得到铁皮石斛叶多糖。
7.根据权利要求1、2、4或5任一项所述的铁皮石斛叶多糖在制备免疫调节剂中的应用。
8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的免疫调节剂促进巨噬细胞的吞噬作用。
9.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述的免疫调节剂增加巨噬细胞的一氧化氮的产生量。
10.根据权利要求1、2、4或5任一项所述的铁皮石斛叶多糖在制备抗肿瘤药物中的应用。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710685933.2A CN107286269B (zh) | 2017-08-11 | 2017-08-11 | 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710685933.2A CN107286269B (zh) | 2017-08-11 | 2017-08-11 | 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107286269A true CN107286269A (zh) | 2017-10-24 |
| CN107286269B CN107286269B (zh) | 2019-06-11 |
Family
ID=60105040
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710685933.2A Active CN107286269B (zh) | 2017-08-11 | 2017-08-11 | 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107286269B (zh) |
Cited By (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108464392A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-08-31 | 厦门大学 | 一种铁皮石斛多糖在制备微生态制剂中的应用 |
| CN109400742A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-03-01 | 浙江省医学科学院 | 一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用 |
| CN109651532A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-19 | 浙江农林大学 | 一种铁皮石斛葡甘聚糖 |
| CN110092846A (zh) * | 2019-05-30 | 2019-08-06 | 遵义医科大学 | 一种提取铁皮石斛多糖的方法 |
| CN110240661A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-09-17 | 上海欧润化妆品有限公司 | 一种铁皮石斛的提取方法 |
| CN110755439A (zh) * | 2019-10-14 | 2020-02-07 | 浙江海洋大学 | 一种多糖益生元及其制备方法和应用 |
| CN110818812A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-02-21 | 韶关市丹霞铁皮石斛研究院 | 一种铁皮石斛精制多糖提取物及其应用 |
| CN111320708A (zh) * | 2020-04-10 | 2020-06-23 | 上海海洋大学 | 一种芦根多糖及其制备方法和用途 |
| CN111410699A (zh) * | 2020-04-08 | 2020-07-14 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 西藏灵芝多糖glp-3及其制备方法与应用 |
| CN112794925A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-05-14 | 中山大学 | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 |
| CN113354748A (zh) * | 2021-05-13 | 2021-09-07 | 浙江工业大学 | 一种铁皮石斛叶多糖及其制备和应用 |
| CN113521092A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-10-22 | 浙江工业大学 | 一种铁皮石斛叶微生态制剂的制备方法 |
| CN114539439A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-05-27 | 哈尔滨工业大学 | 一种白术多糖amp1-1及其提取方法与应用 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101015649A (zh) * | 2006-11-23 | 2007-08-15 | 天津市轩宏医药技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖提取物、其药物组合物和其制备方法及其应用 |
| CN103772521A (zh) * | 2014-01-09 | 2014-05-07 | 云南云尚生物技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖的提取方法 |
| CN104892783A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-09-09 | 南昌大学 | 一种铁皮石斛多糖的纯化方法 |
| CN106868072A (zh) * | 2017-03-13 | 2017-06-20 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法 |
-
2017
- 2017-08-11 CN CN201710685933.2A patent/CN107286269B/zh active Active
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN101015649A (zh) * | 2006-11-23 | 2007-08-15 | 天津市轩宏医药技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖提取物、其药物组合物和其制备方法及其应用 |
| CN103772521A (zh) * | 2014-01-09 | 2014-05-07 | 云南云尚生物技术有限公司 | 一种铁皮石斛多糖的提取方法 |
| CN104892783A (zh) * | 2015-05-11 | 2015-09-09 | 南昌大学 | 一种铁皮石斛多糖的纯化方法 |
| CN106868072A (zh) * | 2017-03-13 | 2017-06-20 | 珀莱雅化妆品股份有限公司 | 一种小分子量铁皮石斛多糖的制备方法 |
Non-Patent Citations (3)
| Title |
|---|
| 周桂芬，庞敏霞，陈素红等: "铁皮石斛茎、叶多糖含量及多糖部位柱前衍生化-高效液相色谱指纹图谱比较研究", 《中国中药杂志》 * |
| 张又元: "铁皮石斛茎部和叶部多糖的性质和活性", 《食品与生物技术学报》 * |
| 黄杰: "铁皮石斛多糖对脂多糖诱导的巨噬细胞免疫调节作用", 《中国药学杂志》 * |
Cited By (18)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN108464392A (zh) * | 2018-03-15 | 2018-08-31 | 厦门大学 | 一种铁皮石斛多糖在制备微生态制剂中的应用 |
| CN109400742B (zh) * | 2018-11-09 | 2021-10-29 | 浙江省医学科学院 | 一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用 |
| CN109400742A (zh) * | 2018-11-09 | 2019-03-01 | 浙江省医学科学院 | 一种齿瓣石斛精制多糖及其制备方法和应用 |
| CN109651532A (zh) * | 2018-11-21 | 2019-04-19 | 浙江农林大学 | 一种铁皮石斛葡甘聚糖 |
| CN109651532B (zh) * | 2018-11-21 | 2021-01-26 | 浙江农林大学 | 一种铁皮石斛葡甘聚糖 |
| CN110092846A (zh) * | 2019-05-30 | 2019-08-06 | 遵义医科大学 | 一种提取铁皮石斛多糖的方法 |
| CN110240661A (zh) * | 2019-07-01 | 2019-09-17 | 上海欧润化妆品有限公司 | 一种铁皮石斛的提取方法 |
| CN110755439A (zh) * | 2019-10-14 | 2020-02-07 | 浙江海洋大学 | 一种多糖益生元及其制备方法和应用 |
| CN110755439B (zh) * | 2019-10-14 | 2022-07-01 | 浙江海洋大学 | 一种多糖益生元及其制备方法和应用 |
| CN110818812A (zh) * | 2019-10-30 | 2020-02-21 | 韶关市丹霞铁皮石斛研究院 | 一种铁皮石斛精制多糖提取物及其应用 |
| CN111410699A (zh) * | 2020-04-08 | 2020-07-14 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 西藏灵芝多糖glp-3及其制备方法与应用 |
| CN111410699B (zh) * | 2020-04-08 | 2021-11-23 | 广东省微生物研究所（广东省微生物分析检测中心） | 西藏灵芝多糖glp-3及其制备方法与应用 |
| CN111320708B (zh) * | 2020-04-10 | 2021-08-31 | 上海海洋大学 | 一种芦根多糖及其制备方法和用途 |
| CN111320708A (zh) * | 2020-04-10 | 2020-06-23 | 上海海洋大学 | 一种芦根多糖及其制备方法和用途 |
| CN112794925A (zh) * | 2021-01-29 | 2021-05-14 | 中山大学 | 一种阳春砂多糖及其制备方法和应用 |
| CN113354748A (zh) * | 2021-05-13 | 2021-09-07 | 浙江工业大学 | 一种铁皮石斛叶多糖及其制备和应用 |
| CN113521092A (zh) * | 2021-05-26 | 2021-10-22 | 浙江工业大学 | 一种铁皮石斛叶微生态制剂的制备方法 |
| CN114539439A (zh) * | 2022-04-01 | 2022-05-27 | 哈尔滨工业大学 | 一种白术多糖amp1-1及其提取方法与应用 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN107286269B (zh) | 2019-06-11 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN107286269B (zh) | 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 | |
| Nie et al. | A review on the isolation and structure of tea polysaccharides and their bioactivities | |
| CN101955549B (zh) | 一种白术多糖及其制备方法与应用 | |
| US10835552B2 (en) | Method for preparing linseed polysaccharide having antiviral activity and immunological activity, and use of the linseed polysaccharide | |
| CN105859906B (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖乙酰化修饰产物及其制备方法 | |
| CN108047343B (zh) | 伊贝母总多糖的制备方法及其应用 | |
| CN103848921B (zh) | 一种黑果枸杞碱提多糖及其制备和应用 | |
| CN106084087A (zh) | 一种瓜蒌多糖的制备方法 | |
| CN108892739A (zh) | 一种知母多糖的提取纯化方法 | |
| CN107056851A (zh) | 一种巴戟天总低聚糖的制备方法 | |
| CN108892732B (zh) | 具有免疫调节功能的金昌枣多糖的制备方法及其应用 | |
| CN109180826B (zh) | 一种凉粉草酸性多糖的脱色方法 | |
| CN108424469B (zh) | 一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途 | |
| CN103275237A (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
| CN108359021A (zh) | 一种快速制备具有抗病毒和免疫调节活性的亚麻籽多糖的方法 | |
| CN101643515A (zh) | 注射用香菇多糖的分离纯化方法 | |
| CN109234335B (zh) | 一种竹黄中富含呋喃半乳糖的多糖的制备方法 | |
| CN114957497A (zh) | 一种滇龙胆酸性多糖及其制备方法与应用 | |
| CN110343156B (zh) | 黑豆糖蛋白的提取纯化方法 | |
| CN108948223B (zh) | 桃金娘多糖p1及其分离方法和在制备降血脂药物中的应用 | |
| CN113527411A (zh) | 一种怀山药糖肽的分离纯化方法 | |
| CN106496346A (zh) | 一种白簕多糖的分离纯化方法 | |
| CN106699918B (zh) | 野阳合多糖及其制备方法和应用 | |
| CN111320708A (zh) | 一种芦根多糖及其制备方法和用途 | |
| CN106046187A (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| TR01 | Transfer of patent right |
Effective date of registration: 20240802 Address after: Room 3205, Building 2, Dongfangzhimen Building, No. 199 Xinggang Street, Industrial Park, Suzhou City, Jiangsu Province, 215000 Patentee after: Suzhou Hanhai Boyuan Intellectual Property Services Co.,Ltd. Country or region after: China Address before: 201306, No. 999, Huan Cheng Ring Road, Lingang New Town, Shanghai, Pudong New Area Patentee before: SHANGHAI OCEAN University Country or region before: China |