CN106046187A - 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 - Google Patents
具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN106046187A CN106046187A CN201610489504.3A CN201610489504A CN106046187A CN 106046187 A CN106046187 A CN 106046187A CN 201610489504 A CN201610489504 A CN 201610489504A CN 106046187 A CN106046187 A CN 106046187A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- free radical
- pedicle
- abelmoschi manihot
- leaf
- leaf polyose
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 150000003254 radicals Chemical class 0.000 title claims abstract description 58
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 title claims abstract description 38
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 title claims abstract description 36
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 title claims abstract description 36
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 21
- 241001075517 Abelmoschus Species 0.000 title abstract description 8
- 239000007857 degradation product Substances 0.000 title abstract 5
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 15
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims abstract description 7
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims abstract description 7
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims abstract description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims abstract description 4
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims abstract description 4
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims abstract description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 4
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 claims description 74
- 235000005739 manihot Nutrition 0.000 claims description 74
- 238000005336 cracking Methods 0.000 claims description 52
- 239000000047 product Substances 0.000 claims description 49
- 240000005959 Abelmoschus manihot Species 0.000 claims description 24
- 235000001075 Abelmoschus manihot Nutrition 0.000 claims description 24
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 claims description 8
- 239000008187 granular material Substances 0.000 claims description 7
- 230000036039 immunity Effects 0.000 claims description 7
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims description 6
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 claims description 5
- 239000002775 capsule Substances 0.000 claims description 5
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 5
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 claims description 5
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims description 5
- 238000003756 stirring Methods 0.000 claims description 5
- 238000000502 dialysis Methods 0.000 claims description 4
- 239000000385 dialysis solution Substances 0.000 claims description 4
- 229960004756 ethanol Drugs 0.000 claims description 4
- 230000036541 health Effects 0.000 claims description 4
- 239000001117 sulphuric acid Substances 0.000 claims description 4
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 4
- 240000000530 Alcea rosea Species 0.000 claims description 3
- 235000017334 Alcea rosea Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000017303 Althaea rosea Nutrition 0.000 claims description 3
- 229960000935 dehydrated alcohol Drugs 0.000 claims description 3
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims description 3
- 238000010828 elution Methods 0.000 claims description 3
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 3
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 3
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims description 3
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 238000010992 reflux Methods 0.000 claims description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 claims description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 claims description 2
- 238000002481 ethanol extraction Methods 0.000 claims description 2
- 239000011718 vitamin C Substances 0.000 claims description 2
- 125000000089 arabinosyl group Chemical group C1([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO1)* 0.000 claims 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 claims 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 claims 1
- 239000003826 tablet Substances 0.000 claims 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 abstract description 5
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 abstract description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 abstract description 3
- 239000002699 waste material Substances 0.000 abstract description 3
- 230000008901 benefit Effects 0.000 abstract description 2
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 abstract description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000011347 resin Substances 0.000 abstract description 2
- 229920005989 resin Polymers 0.000 abstract description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 abstract description 2
- 230000003544 deproteinization Effects 0.000 abstract 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 abstract 1
- 238000003809 water extraction Methods 0.000 abstract 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 12
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 11
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 11
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 11
- 239000000463 material Substances 0.000 description 8
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 8
- 229960001031 glucose Drugs 0.000 description 6
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 5
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 3
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 3
- 230000031700 light absorption Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 3
- AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N D-glucopyranuronic acid Chemical compound OC1O[C@H](C(O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1O AEMOLEFTQBMNLQ-AQKNRBDQSA-N 0.000 description 2
- IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N Galacturonsaeure Natural products O=CC(O)C(O)C(O)C(O)C(O)=O IAJILQKETJEXLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229940097043 glucuronic acid Drugs 0.000 description 2
- 239000010977 jade Substances 0.000 description 2
- HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L magnesium stearate Chemical compound [Mg+2].CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O.CCCCCCCCCCCCCCCCCC([O-])=O HQKMJHAJHXVSDF-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Polymers 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 229940100486 rice starch Drugs 0.000 description 2
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 108010062580 Concanavalin A Proteins 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- 241000628997 Flos Species 0.000 description 1
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 208000035199 Tetraploidy Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 238000005903 acid hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003064 anti-oxidating effect Effects 0.000 description 1
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000009514 concussion Effects 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 239000012531 culture fluid Substances 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 238000001035 drying Methods 0.000 description 1
- 238000003912 environmental pollution Methods 0.000 description 1
- IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N ethanol;hydrate Chemical compound O.CCO IDGUHHHQCWSQLU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000105 evaporative light scattering detection Methods 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 125000003010 ionic group Chemical group 0.000 description 1
- 238000002386 leaching Methods 0.000 description 1
- TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N levoglucosan Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]2CO[C@@H]1O2 TWNIBLMWSKIRAT-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 239000000314 lubricant Substances 0.000 description 1
- 210000002751 lymph Anatomy 0.000 description 1
- 235000019359 magnesium stearate Nutrition 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 231100000252 nontoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000003000 nontoxic effect Effects 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000004223 radioprotective effect Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000011084 recovery Methods 0.000 description 1
- 238000007560 sedimentation technique Methods 0.000 description 1
- 206010040872 skin infection Diseases 0.000 description 1
- 230000035943 smell Effects 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000013311 vegetables Nutrition 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/70—Carbohydrates; Sugars; Derivatives thereof
- A61K31/715—Polysaccharides, i.e. having more than five saccharide radicals attached to each other by glycosidic linkages; Derivatives thereof, e.g. ethers, esters
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/0003—General processes for their isolation or fractionation, e.g. purification or extraction from biomass
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K36/00—Medicinal preparations of undetermined constitution containing material from algae, lichens, fungi or plants, or derivatives thereof, e.g. traditional herbal medicines
- A61K36/18—Magnoliophyta (angiosperms)
- A61K36/185—Magnoliopsida (dicotyledons)
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Sustainable Development (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
Abstract
本发明公开了一种黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法，黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物由摩尔比为0.34:18.56:1.0:0.36的甘露糖、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成；分子量为552.36kDa。本发明通过大量实验优选提取分离工艺，采用水提醇沉法得到粗多糖，再脱蛋白，然后采用DEAE‑52纤维素树脂进行纯化，制得纯度高的黄蜀葵茎叶多糖，再采用H2O2‑Vc体系进行降解，纯化，得到黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。本发明充分利用废弃的黄蜀葵茎叶资源，变废为宝，得到可提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物，可实现中药资源的可持续化应用，具有很好的经济价值和生态环境保护意义。
Description
技术领域
本发明涉及一种植物多糖，具体涉及一种具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法。
背景技术
中药资源是保障国民健康、发展民族医药的坚实基础。近年来中药及天然药用生物资源的生产面积已超过2.40×106hm2，药材产量可达5.40×106t，而废弃的植物根系以及地上茎叶的生物量高达1.1×107～1.6×107t，是药材产量2～3倍，造成了严重的资源浪费和环境污染。因此，在中药资源产业化过程中提高药用生物资源的利用价值、尤其是提升其药用价值，对于中医药产业的健康发展以及发展资源节约型、环境友好型的经济具有重大意义。
黄蜀葵(Abelmoschus manihot L.Medic)为锦葵科秋葵属植物，始载于《嘉祐本草》，《本草纲目》中记载：“其花气味甘、寒、滑、无毒，主治小便淋及催生，治诸恶疮脓水久不瘥者，作末敷之即愈，为疮家要药”等。其根、茎、叶均具有一定的药用价值。黄蜀葵花为主要用药部位，在采收过程中其茎叶部分多被丢弃或是焚烧，造成了黄蜀葵茎叶资源的极大浪费以及环境的污染。
多糖是一类结构复杂的高分子物质，具有抗肿瘤、抗病毒、抗氧化、抗突变、抗辐射和增强免疫等多种生物学功效。但一般情况下，天然提取的多糖生物活性较弱。在天然多糖分子中引入某种离子基团并且具有恰当的取代度时，不仅能够显著改善多糖在水中的溶解度，而且可以使多糖链的构象发生改变，从而使其具有某种特定的结构而提高生物活性。
因此，对多糖进行部分降解，把大分子断裂成较小片段，使得某些活性基团暴露出来，改善多糖的活性，是分子修饰的重要方向。目前，国内外对黄蜀葵茎叶多糖的研究主要集中在理化性质以及单糖的分析，对其活性的研究较少。因此，应用羟自由基降解技术改变黄蜀葵茎叶多糖的结构、改善其理化性质，获得真正具有活性的多糖，对黄蜀葵茎叶资源的高效利用以及生态环境的保护意义重大。
发明内容
发明目的：本发明的目的是为了解决现有技术的不足，以黄蜀葵茎叶废弃物为原料，通过优选方法制备得到黄蜀葵茎叶粗多糖，然后对黄蜀葵茎叶多糖进行自由基降解，得到具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
本发明另一个目的是提供黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法和其应用。本发明充分利用废弃的黄蜀葵茎叶资源，变废为宝，得到可提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物，可实现中药资源的可持续化应用，具有很好的经济价值和生态环境的保护意义。
技术方案：为了实现以上目的，本发明采用的技术方案为：
一种黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物，黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物由摩尔比为0.34:18.56:1.0:0.36的甘露糖、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成；黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的分子量为552.36kDa。
本发明所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法，包括以下步骤：
(1)取黄蜀葵茎叶乙醇提取后的药渣，加入药渣重量10～30倍体积的水，回流提取2～3次，每次1～2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩；Sevag法除蛋白，离心，取上清液，加入无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，烘干，得黄蜀葵茎叶粗多糖；
(2)黄蜀葵茎叶粗多糖的分级
称取步骤(1)制备得到的黄蜀葵茎叶粗多糖，加蒸馏水溶解，加样于DEAE-52层析柱中，用0.0、0.1、0.3、0.5mol/L NaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚-硫酸法检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，透析，最后将透析液真空冷冻干燥，获得黄蜀葵茎叶多糖；
(3)黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解
取步骤(2)得到的黄蜀葵茎叶多糖，采用H2O2-维生素C(Vc)体系进行降解，具体操作方法为：准确称取黄蜀葵茎叶多糖，溶于蒸馏水中，加入的H2O2和Vc，30～35℃搅拌降解，反应结束后，调节pH至中性，流水透析，减压浓缩，冻干，得黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
作为优选方案，以上所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法，步骤(3)准确称取黄蜀葵茎叶多糖40mg，溶于蒸馏水中，加入摩尔比为1:1的0.025mol/L的H2O2和Vc，35℃搅拌降解4h，反应结束后，调节pH至中性，流水透析，取透析液，浓缩，冻干，得黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
本发明所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物在制备提高免疫力的药物或保健品中的应用。
作为优选方案，以上所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物在制备提高免疫力的药物或保健品中的应用，把黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或微囊剂型的药物。
本发明通过实验研究表明，本发明制备得到的黄蜀葵茎叶多糖，经过自由基降解的产物具有显著的促进脾淋巴细胞增殖的作用，可用于制备提高免疫力的药物或保健品。
本发明所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物在制备提高免疫力的药物或保健品中的应用，可将黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或微囊剂型的药物。
本发明在制成片剂时，在黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物中添加载体乳糖或玉米淀粉，需要时加入润滑剂硬脂酸镁，混合均匀，然后压片制成片剂。
在制成胶囊剂时，将黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和载体乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，然后装胶囊制成胶囊剂。
本发明在制成颗粒剂时，把黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和稀释剂乳糖或玉米淀粉混合均匀，整粒，干燥，制成颗粒剂。
有益效果：本发明提供的具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和现有技术相比具有以下优点：
1、本发明通过大量实验优选提取分离工艺，首先采用水提醇沉法得到粗多糖，再脱除蛋白，然后采用DEAE-52纤维素树脂进行纯化，制得纯度高的黄蜀葵茎叶多糖，然后再采用H2O2-Vc体系进行降解，纯化，得到黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
本发明充分利用废弃的黄蜀葵茎叶资源，变废为宝，制备得到可提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物，可实现中药资源的可持续化应用，具有很好的经济价值和生态环境的保护意义。
2、本发明经过体外小鼠脾淋巴细胞的增殖活性试验表明，黄蜀葵茎叶多糖并无明显的免疫调节活性，但是黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物具有显著的促进脾淋巴细胞增殖的作用。在50μg/mL剂量时具有最强的增殖作用，增值率为1.219，而修饰前的增殖指数仅为1.078，取得了非常好的预料不到的技术效果。
附图说明
图1为黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物的脾细胞增殖活性柱状图。
具体实施方式
根据下述实施例，可以更好地理解本发明。然而，本领域的技术人员容易理解，实施例所描述的具体的物料配比、工艺条件及其结果仅用于说明本发明，而不应当也不会限制权利要求书中所详细描述的本发明。
实施例1
本发明所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法，包括以下步骤：
(1)黄蜀葵茎叶粗多糖的制备
黄蜀葵茎叶粗粉100g，加入30倍量水，100℃水浴回流提取3次，每次1h。过滤，合并滤液，减压浓缩。Sevag法除蛋白，离心(4000r/min，10min)，取上清液，加入四倍体积的无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，沉淀依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤三次，50℃烘干，即得黄蜀葵茎叶粗多糖。
(2)黄蜀葵茎叶粗多糖的分级
称取粗多糖3g，加适量蒸馏水溶解，配制质量浓度为30mg/mL的多糖溶液，加样于DEAE-52层析柱中。用0.0、0.1、0.3、0.5mol/L NaCl溶液梯度洗脱，流速1.0mL/min(10min/管)，采用苯酚-硫酸法检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，透析，最后将透析液真空冷冻干燥，获得黄蜀葵茎叶多糖。
(3)黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解
取步骤(2)得到的黄蜀葵茎叶多糖采用H2O2-Vc体系进行降解，准确称取黄蜀葵茎叶多糖40mg，溶于20mL蒸馏水中，加入0.025mol/L的H2O2和Vc(H2O2与Vc的摩尔比为1:1)，35℃搅拌降解4h，反应结束后，调节pH至中性，流水透析3天，减压浓缩，冻干，得降黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
实施例2 黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物总糖以及糖醛酸含量的测定
1、实验方法：以D-无水葡萄糖为标准品，采用苯酚-硫酸法测定硫酸化修饰前后黄蜀葵茎叶多糖的总糖含量；采用间羟联苯法测定糖醛酸含量，以D-葡萄糖醛酸为标准品。
2、实验结果：实施例1制备得到黄蜀葵茎叶多糖的总糖含量99.76％，黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的总糖含量有所下降，为95.53％；黄蜀葵茎叶多糖在降解前不含糖醛酸，降解后亦不含糖醛酸，这与单糖组成的结果是一致的。
实施例3 黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物的单糖组成分析
1、实验方法采用三氟乙酸水解多糖样品，以混合单糖为标准品，PMP衍生多糖样品以及混标，利用高效液相色谱法根据出峰时间确定单糖的组成，根据峰面积绘制各单糖的标准曲线测定样品的单糖含量。
2、实验结果：单糖组成分析
实施例1制备得到的黄蜀葵茎叶多糖及降解产物的单糖组成的摩尔比如表1所示，黄蜀葵茎叶多糖由甘露糖、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成，其中葡萄糖的含量最多，其它三种糖的含量较少。自由基降解后，降解产物主要是葡萄糖的比例有所降低，降解成功。
表1黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物的单糖组成摩尔比
实施例4 黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物的分子量测定
1、试验方法：采用HPGPC-ELSD法测定自由基降解前后的分子量，以葡聚糖T系列为标准分子量制作标准曲线。
2、实验结果
实施例1制备得到的黄蜀葵茎叶多糖在自由基降解前的分子量为760.24kDa，降解后的分子量为552.36kDa，分子量大幅降低，进一步表明降解成功。
实施例5 黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物小鼠脾淋巴细胞增殖试验
1、实验方法：无菌取脾，制备小鼠脾淋巴细胞悬液，调整细胞浓度为6×106个/mL，于96孔板接种100μL/孔，再分别加入培养液(空白对照)、10μg/mL ConA(刀豆球蛋白A，阳性对照)及不同浓度的实施例1制备得到的黄蜀葵茎叶多糖及其自由基降解产物溶液各100μL/孔，每个浓度均设4个复孔，混合均匀后置于37℃、5％CO2培养24h。培养结束前4h，每孔加入MTT(5mg/mL)10μL，于上述条件中继续培养4h，离心弃上清，加入100μL DMSO，充分震荡后用酶标仪测定波长570nm的吸光值。
淋巴细胞增殖指数＝样品组吸光值/空白对照组吸光值
2、实验结果：脾细胞增殖活性分析结果如图1所示，图中a表示与对照组相比，增强作用差异显著(p＜0.05)；b表示与对照组相比，增强作用差异极显著(p＜0.01)；c表示与黄蜀葵茎叶多糖组相比，增强作用差异显著(p＜0.05)；d表示与黄蜀葵茎叶多糖组相比，增强作用差异极显著(p＜0.01)。对照组的增殖指数为1.002，阳性组为1.357。
由图1可知，与对照组相比，黄蜀葵茎叶多糖在实验剂量范围内不能刺激脾淋巴细胞的增殖，而黄蜀葵茎叶多糖降解产物具有显著的促进脾淋巴细胞增殖的作用。黄蜀葵茎叶多糖降解产物在50μg/mL剂量时具有最强的增殖作用，增值率为1.219，而修饰前的增殖指数仅为1.078。取得了非常好的技术效果。
本发明通过对黄蜀葵茎叶多糖降解前后的总糖、单糖组成的分析以及分子量的测定，表明降解成功。黄蜀葵茎叶多糖与黄蜀葵茎叶多糖降解产物的体外小鼠脾淋巴细胞的增殖活性试验表明，黄蜀葵茎叶多糖并无免疫调节活性，但是经自由基降解后在50～100μg/mL剂量范围内表现出显著的免疫调节活性。本发明制备得到的黄蜀葵茎叶多糖降解产物，水溶性增加，暴露相关活性基团，使其具备免疫调节活性，为黄蜀葵茎叶资源的有效利用提供技术支持以及应用方向。
以上实施方式只为说明本发明的技术构思及特点，其目的在于让熟悉此项技术的人了解本发明内容并加以实施，并不能以此限制本发明的保护范围，凡根据本发明精神实质所做的等效变化或修饰，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (5)
1.一种黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物，其特征在于，黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物由摩尔比为0.34:18.56:1.0:0.36的甘露糖、葡萄糖、半乳糖以及阿拉伯糖组成；黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的分子量为552.36kDa。
2.权利要求1所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：
(1)取黄蜀葵茎叶乙醇提取后的药渣，加入药渣重量10～30倍体积的水，回流提取2～3次，每次1～2小时，过滤，合并滤液，减压浓缩；Sevag法除蛋白，离心，取上清液，加入无水乙醇，醇沉过夜，抽滤，取沉淀，依次用无水乙醇、丙酮、乙醚洗涤，烘干，得黄蜀葵茎叶粗多糖；
(2)黄蜀葵茎叶粗多糖的分级
称取步骤(1)制备得到的黄蜀葵茎叶粗多糖，加蒸馏水溶解，加样于DEAE-52层析柱中，用0.0、0.1、0.3、0.5mol/L NaCl溶液梯度洗脱，并采用苯酚-硫酸法检测多糖含量，分别收集不同的洗脱峰，减压浓缩，透析，最后将透析液真空冷冻干燥，获得黄蜀葵茎叶多糖；
(3)黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解
取步骤(2)得到的黄蜀葵茎叶多糖，采用H2O2-维生素C体系进行降解，具体操作方法为：准确称取黄蜀葵茎叶多糖，溶于蒸馏水中，加入的H2O2和Vc，30～35℃搅拌降解，反应结束后，调节pH至中性，流水透析，减压浓缩，冻干，得黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
3.根据权利要求2所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物的制备方法，其特征在于，步骤(3)准确称取黄蜀葵茎叶多糖40mg，溶于蒸馏水中，加入摩尔比为1:1的0.025mol/L的H2O2和Vc，35℃搅拌降解4h，反应结束后，调节pH至中性，流水透析，取透析液，浓缩，冻干，得黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物。
4.权利要求1所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物在制备提高免疫力的药物或保健品中的应用。
5.根据权利要求4所述的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物在制备提高免疫力的药物或保健品中的应用，其特征在于，把黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物和药学上可接受的载体制成片剂、胶囊剂、颗粒剂或微囊剂型的药物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610489504.3A CN106046187B (zh) | 2016-06-28 | 2016-06-28 | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201610489504.3A CN106046187B (zh) | 2016-06-28 | 2016-06-28 | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN106046187A true CN106046187A (zh) | 2016-10-26 |
| CN106046187B CN106046187B (zh) | 2018-06-19 |
Family
ID=57166796
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201610489504.3A Expired - Fee Related CN106046187B (zh) | 2016-06-28 | 2016-06-28 | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN106046187B (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112552424A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-03-26 | 浙江省林业科学研究院 | 一种蝉花子实体多糖及其制备和用途 |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1616494A (zh) * | 2004-10-18 | 2005-05-18 | 中国科学院海洋研究所 | 低分子量海藻硫酸多糖的制备方法 |
| CN102526754A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-07-04 | 段金廒 | 从黄蜀葵中提取胶质作为中药凝胶剂基质的应用 |
| CN102964466A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-03-13 | 江苏省中医院 | 具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法 |
| CN103739732A (zh) * | 2013-12-27 | 2014-04-23 | 新疆奇康哈博维药有限公司 | 一种提取蜀葵子多糖的方法 |
-
2016
- 2016-06-28 CN CN201610489504.3A patent/CN106046187B/zh not_active Expired - Fee Related
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN1616494A (zh) * | 2004-10-18 | 2005-05-18 | 中国科学院海洋研究所 | 低分子量海藻硫酸多糖的制备方法 |
| CN102526754A (zh) * | 2011-12-19 | 2012-07-04 | 段金廒 | 从黄蜀葵中提取胶质作为中药凝胶剂基质的应用 |
| CN102964466A (zh) * | 2012-12-18 | 2013-03-13 | 江苏省中医院 | 具有抗肿瘤活性的黄蜀葵花多糖及其制备方法 |
| CN103739732A (zh) * | 2013-12-27 | 2014-04-23 | 新疆奇康哈博维药有限公司 | 一种提取蜀葵子多糖的方法 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| 高素莲 等: "黄蜀葵多糖的分析", 《分析测试学报》 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN112552424A (zh) * | 2020-12-10 | 2021-03-26 | 浙江省林业科学研究院 | 一种蝉花子实体多糖及其制备和用途 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CN106046187B (zh) | 2018-06-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN105859906B (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖乙酰化修饰产物及其制备方法 | |
| CN107286269A (zh) | 两种具有免疫调节的铁皮石斛叶多糖的制备方法及其应用 | |
| CN101124988A (zh) | 从蛹虫草中提取精制虫草素和虫草多糖的方法 | |
| CN108546306A (zh) | 一种蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和用途 | |
| CN100336833C (zh) | 土党参多糖、衍生物及其制备方法和应用 | |
| CN102408494B (zh) | 一种灰树花多糖zzk组分及其制备方法 | |
| CN107033253B (zh) | 一种紫皮石斛多糖及其制备与应用 | |
| CN108503724A (zh) | 蛹虫草培养基多糖及其分离纯化方法和应用 | |
| CN114957497B (zh) | 一种滇龙胆酸性多糖及其制备方法与应用 | |
| CN106046187A (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的自由基降解产物及其制备方法 | |
| CN103275237A (zh) | 一种茄枝多糖的制备方法及其应用 | |
| CN103483460B (zh) | 一种具有抗肿瘤活性的裂片石莼硫酸多糖的制备方法 | |
| CN106008729A (zh) | 一种黄蜀葵茎叶多糖及其制备方法与应用 | |
| CN108424469A (zh) | 一种芡实种仁多糖及其分离提取方法和用途 | |
| CN105968221B (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖的酸法降解产物及其制备方法 | |
| CN108359021A (zh) | 一种快速制备具有抗病毒和免疫调节活性的亚麻籽多糖的方法 | |
| CN104119427A (zh) | 一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途 | |
| CN103374078A (zh) | 紫芝液体深层发酵菌丝体均一多糖及其制备方法以及应用 | |
| CN108948223B (zh) | 桃金娘多糖p1及其分离方法和在制备降血脂药物中的应用 | |
| CN104119428B (zh) | 一种槐耳多糖蛋白及其制备方法和用途 | |
| CN111690073B (zh) | 一种绒白乳菇多糖及其制备方法和应用 | |
| CN105859907B (zh) | 具有提高免疫活性的黄蜀葵茎叶多糖硫酸化修饰产物及其制备方法 | |
| CN114591449B (zh) | 一种老鹳草中性多糖及其制备方法与应用 | |
| CN104945533A (zh) | 一种活性玉米须纯多糖的制备方法 | |
| CN100417390C (zh) | 青蒿多糖有效部位及其制备方法和在制药中的应用 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| C06 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| C10 | Entry into substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CF01 | Termination of patent right due to non-payment of annual fee |
Granted publication date: 20180619 |