CN107056851A - 一种巴戟天总低聚糖的制备方法 - Google Patents

Abstract

本发明公开了一种巴戟天总低聚糖的制备方法，其制备方法包括步骤：将巴戟天鲜药材，去除杂质，粉碎；加蒸馏水提取，提取液减压浓缩，浓缩液加乙醇沉淀，得到巴戟天低总聚糖粗品；将巴戟天总低聚糖粗品复溶于水，经阴离子交换型树脂洗脱，收集洗脱液，洗脱液减压浓缩后加乙醇沉淀，静置，抽滤，干燥，即得巴戟天总低聚糖。本发明简化了巴戟天总低聚糖的制备工艺，溶剂仅使用乙醇和水，未使用其他有害试剂，不对环境造成污染，且本发明中使用原料为鲜品，可以省去药材的加工步骤，充分节约了能源，制备出的总低聚糖纯度达到80%，收率达30%以上，工艺简单易行、成本低廉，适合工业化生产，易形成产业化。

Description

一种巴戟天总低聚糖的制备方法

技术领域

本发明属于医药技术领域，具体涉及一种巴戟天总低聚糖的制备方法。

背景技术

中药巴戟天，又名鸡肠风、鸡眼藤、三角藤等，为茜草科巴戟天属多年生攀援木质藤本植物巴戟天(Morinda officinalis How)的干燥根，主要分布于广东、广西、福建、海南等省区的热带和亚热带地区，是我国著名的四大南药之一。巴戟天味甘、辛，性微温，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。巴戟天始载于《神农本草经》，我国历代出版的本草均有记述，《中华人民共和国药典》从1963年版起历版均收载有该品种。巴戟天是国家卫生部公布的可用于保健食品的物品之一。

巴戟天作为传统的补肾良药，具有抗衰老、增强免疫、调节内分泌、促进造血、抗抑郁、抗肿瘤、抗炎及镇痛等药理作用。以巴戟天为成份之一，现已开发出巴戟胶囊、巴戟补酒、巴戟补肾丸、枸杞巴戟酒、巴戟口服液、海马巴戟胶囊、巴戟振阳胶囊等复方制剂，主要用于补肾、调经等。

巴戟天中含有多种糖类成分，国内外已有报道从巴戟天中分离并鉴定出的成分共有十四种，包括单糖、低聚糖以及多糖，其中以低聚糖（又称寡糖）为主。关于对巴戟天低聚糖的提取方法，有报道用葡聚糖凝胶柱分离，但其含量较低，且葡聚糖凝胶柱较贵。CN200410050872.5公开了一种巴戟天总寡糖的制备方法，其采用乙醇回流，残渣加水提取后再用乙醇沉淀，上清液再依次经弱酸-弱碱-弱酸树脂除杂，最后用活性炭层析脱色，真空浓缩、冷冻干燥即得。该方法工艺复杂，总寡糖的得率只有5%左右，得率较低，不利于工业化生产。

发明内容

为了解决上述问题，本发明的首要目的在于提供一种巴戟天总低聚糖的制备方法，该方法工艺简单异行，巴戟天总低聚糖得率较高，能到达30%以上，且纯度较高。

本发明是通过以下技术方案实现：

一种巴戟天总低聚糖的制备方法，包括如下步骤：

（a）将巴戟天鲜药材，去除杂质，粉碎；

（b）取粉碎后的巴戟天鲜药材，加8-10倍量蒸馏水，煮沸1-2 h，过滤，滤渣再加8-10倍量蒸馏水，煮沸1-2 h，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；

（c）在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置12-24 h，得沉淀，即为巴戟天总低聚糖粗品；

（d）将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50 ℃，调pH至弱酸性，溶液经D-900阴离子交换型树脂，以1.0-1.5 BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70 ℃减压浓缩至相对密度为1 kg：200 ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置12-24 h，静置，抽滤，干燥，即得巴戟天总低聚糖。

优选的，步骤（b）中，所述减压浓缩的温度为60-80 ℃。

优选的，步骤（c）中，将沉淀再复溶于热水、加乙醇沉淀的操作重复多次，以便更好的除去醇溶性杂质。

优选的，步骤（d）中，所述pH为4.5-6.5。

优选的，步骤（d）中，所述干燥为冷冻干燥或减压干燥。

优选的，本发明还进一步包括步骤（e），所述巴戟天总低聚糖采用HPLC-ELSD色谱法测定，具体包括以下步骤：

色谱条件与系统适应性试验：Waters XBridge™ Amide色谱柱，流动相：乙腈A-0.1%三乙胺溶液B，采用梯度洗脱，0～10 min ：87%～65% A ，11～20min：65%～75% A，21～45min：75%～80% A，流速1.0mL·min-1，柱温40 ℃；

检测条件：Waters 2424型蒸发光散射检测器，漂移管温度90 ℃，喷雾器模式加热100%，增益2，空气压40 psi；

对照品溶液制备：分别精密称取蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖对照品适量，加水制成每1 mL含蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖分别为4.99 mg，9.80 mg，2.48 mg，6.6 mg，5.60 mg，5.0 mg的溶液，摇匀，即得。精密称取巴戟甲素对照品适量，加水制成每1 mL含巴戟甲素3.5mg的溶液，作为巴戟甲素对照品溶液。

供试品溶液制备：取巴戟天总低聚糖1 g，研细，取0.1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，依上述色谱条件进行测定，按外标法计算即得。

本发明与现有技术相比，具有如下有益效果：

（1）本发明简化了巴戟天总低聚糖的制备工艺，溶剂仅使用乙醇和水，未使用其他有害试剂，不对环境造成污染，且本发明中使用原料为鲜品，可以省去药材的加工步骤，充分节约了能源，制备出的总低聚糖纯度达到80%，收率达30%以上，工艺简单易行、成本低廉，适合工业化生产，易形成产业化。

（2）本发明进一步采用HPLC-ELSD色谱法对工艺流程进行控制和纯度检测，对制备得到的巴戟天总低聚糖中各成分进行了鉴定和含量测定，为巴戟天总低聚糖的使用起到指导的作用。

附图说明

图1为巴戟天总低聚糖的制备方法的工艺流程图。

图2为对照品溶液的HPLC图谱；其中，1-蔗糖，2-蔗果三糖，3-耐斯糖，4-蔗果五糖，5-蔗果六糖，6-蔗果七糖。

图3为巴戟甲素对照品溶液的HPLC色谱图。

图4为本发明的供试品溶液的HPLC色谱图。

具体实施方式

下面通过具体实施方式来进一步说明本发明，以下实施例为本发明具体的实施方式，但本发明的实施方式并不受下述实施例的限制。

实施例1：

如图1所示，一种巴戟天总低聚糖的制备方法，包括如下步骤：

（a）将巴戟天鲜药材1 kg，去除杂质，粉碎；

（b）取粉碎后的巴戟天鲜药材，加8倍量蒸馏水，煮沸2 h，过滤，滤渣再加8倍量蒸

馏水，煮沸2 h，过滤，合并滤液，60-80 ℃减压浓缩，得到浓缩液；

（c）在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置24 h，将沉淀复溶于热水，

冷却至室温，再加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置24 h，得沉淀，即为巴戟天总低聚糖粗品；

（d）将巴戟天总低聚糖粗品复溶于热水，冷却至50 ℃，调pH至5.0，溶液经D-900阴

离子交换型树脂，以1.0-1.5 BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70 ℃减压浓缩至相对密度为1 kg：200 ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置24 h，静置，抽滤，冷冻干燥，即得巴戟天总低聚糖320 g，收率大于30%，纯度达到80%以上。

结合化学鉴别、HPLC、LC-MS等技术检测，结果显示制备得到的巴戟天总低聚糖中主要含有巴戟甲素、耐斯糖、1F-果呋喃糖基耐斯糖、菊淀粉(即(2→1)果呋喃糖基蔗糖)型六聚糖和七聚糖等多种低聚糖。

为进一步确定巴戟天总低聚糖中各低聚糖成分及含量，本发明采用如下检测方法：

用HPLC-ELSD色谱法测定，具体包括以下步骤：

色谱条件与系统适应性试验：Waters XBridge™ Amide色谱柱（（4.6mm×150mm，3.5µm），流动相：乙腈A-0.1%三乙胺溶液B，采用梯度洗脱，0～10 min ：87%～65% A ，11～20min：65%～75% A，21～45min：75%～80% A，流速1.0mL·min-1，柱温40 ℃；

检测条件：Waters 2424型蒸发光散射检测器，漂移管温度90 ℃，喷雾器模式加热100%，增益2，空气压40 psi；

对照品溶液制备：分别精密称取蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖对照品适量，加水制成每1 mL含蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖分别为4.99 mg，9.80 mg，2.48 mg，6.6 mg，5.60 mg，5.0 mg的溶液，摇匀，即得；精密称取巴戟甲素对照品适量，加水制成每1 mL含巴戟甲素3.5 mg的溶液，作为巴戟甲素对照品溶液；

供试品溶液制备：取巴戟天总低聚糖1 g，研细，取0.1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，依上述色谱条件进行测定，按外标法计算即得。

对巴戟天总低聚糖样品进行测定，结果见图2-4和表1。

表1 各低聚糖成分含量测定结果

实施例2：

一种巴戟天总低聚糖的制备方法，包括如下步骤：

（a）将巴戟天鲜药材5 kg，去除杂质，粉碎；

（b）取粉碎后的巴戟天鲜药材，加10倍量蒸馏水，煮沸1.5 h，过滤，滤渣再加8倍量

蒸馏水，煮沸2 h，过滤，合并滤液，60-80 ℃减压浓缩，得到浓缩液；

（c）在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置24 h，将沉淀复溶于热水，

冷却至室温，再加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置24 h，得沉淀，即为巴戟天总低聚糖粗品；

（d）将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50 ℃，调pH至5.5，溶液经D-900阴

离子交换型树脂，以1.0-1.5BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70 ℃减压浓缩至相对密度为1kg：200ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置15 h，静置，抽滤，减压干燥，即得巴戟天总低聚糖1.61 kg，收率大于30%，纯度达到80%以上。

其余同实施例1。

Claims (6)

1.一种巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：

（a）将巴戟天鲜药材，去除杂质，粉碎；

（b）取粉碎后的巴戟天鲜药材，加8-10倍量蒸馏水，煮沸1-2h，过滤，滤渣再加8-10倍量蒸馏水，煮沸1-2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；

（c）在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置12-24h，得沉淀，即为巴戟天总低聚糖粗品；

（d）将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50℃，调pH至弱酸性，溶液经D-900阴离子交换型树脂，以1.0-1.5BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70℃减压浓缩至相对密度为1kg：200ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90%，冷藏，静置12-24h，静置，抽滤，干燥，即得巴戟天总低聚糖。

2.根据权利要求1所述的巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤（b）中，所述减压浓缩的温度为60-80℃。

3.根据权利要求1所述的巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤（c）中，将沉淀再复溶于热水、加乙醇沉淀的操作重复多次。

4.根据权利要求1所述的巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤（d）中，所述pH为4.5-6.5。

5.根据权利要求1所述的巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，步骤（d）中，所述干燥为冷冻干燥或减压干燥。

6.根据根据权利要求1-5任一项所述的巴戟天总低聚糖的制备方法，其特征在于，还包括步骤（e），所述巴戟天总低聚糖采用HPLC-ELSD色谱法测定，具体包括以下步骤：

色谱条件与系统适应性试验：Waters XBridge™ Amide色谱柱，流动相：乙腈A-0.1%三乙胺溶液B，采用梯度洗脱，0～10 min ：87%～65% A ，11～20min：65%～75% A，21～45min：75%～80% A，流速1.0mL·min-1，柱温40 ℃；

检测条件：Waters 2424型蒸发光散射检测器，漂移管温度90 ℃，喷雾器模式加热100%，增益2，空气压40 psi；

对照品溶液制备：分别精密称取蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖对照品适量，加水制成每1 mL含蔗糖、耐斯糖、蔗果三糖、蔗果五糖、蔗果六糖、蔗果七糖分别为4.99 mg，9.80 mg，2.48 mg，6.6 mg，5.60 mg，5.0 mg的溶液，摇匀，即得；精密称取巴戟甲素对照品适量，加水制成每1 mL含巴戟甲素3.5 mg的溶液，作为巴戟甲素对照品溶液；

供试品溶液制备：取巴戟天总低聚糖1 g，研细，取0.1 g，精密称定，置50 mL具塞锥形瓶中，精密加入水50 mL，密塞，称定重量，超声处理20分钟，放冷，称定重量，用流动相补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得；

测定法：分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液10 μl，依上述色谱条件进行测定，按外标法计算即得。