CN107812019A - 一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂及其制备方法和用途 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法，尤其涉及一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂及其制备方法，所述方法包括：将巴戟天低聚果糖和复合益生菌按照重量比8:1‑15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1‑2:1‑2:1‑2:1‑2:1‑2:1‑2:1‑2双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物。本发明的上述微生态制剂能够显著改善胃肠功能，与单纯的使用复合益生菌例如本发明所述的复合益生菌相比，具有显著的协同辅助作用。
Description
技术领域
本发明涉及一种微生态制剂及其制备方法，尤其涉及一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂及其制备方法和用途。
背景技术
巴戟天，又名鸡肠风、鸡眼藤、三角藤等，为茜草科巴戟天属多年生攀援木质藤本植物巴戟天(Morinda officinalis How.)的干燥根，主要分布于广东、广西、福建、海南等省区的热带和亚热带地区，是我国著名的四大南药之一。
巴戟天味甘、辛，性微温，具有补肾阳、强筋骨、祛风湿之功效。巴戟天始载于《神农本草经》，我国历代出版的本草均有记述，《中华人民共和国药典》从1963年版起历版均收载有该品种。巴戟天是国家卫生部公布的可用于保健食品的物品之一。
目前，对于巴戟天的研究多着眼于中药组合物以及提取，对其进一步的开发应用较少。
发明内容
针对以上不足，本发明提供一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂及其制备方法。
本发明通过以下方案达到上述目的：
在本发明的第一方面，提供一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂的制备方法，所述方法包括：将巴戟天低聚果糖和复合益生菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1-2:1-2:1-2:1-2:1-2:1-2:1-2双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，优选等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g；所述巴戟天低聚果糖的制备方法包括：
(1)将巴戟天，去除杂质，粉碎；
(2)取粉碎后的巴戟天，加8-10倍量水，煮沸1-2h，过滤，滤渣再加8-10倍量水，煮沸1-2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；
(3)在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置12-24h，得沉淀，即为巴戟天低聚果糖粗品；
(4)将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50℃，调pH至弱酸性，溶液经D-900阴离子交换型树脂，以1-1.5BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70℃减压浓缩至相对密度为1kg：200ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置12-24h，冷藏，静置，抽滤，干燥，即得巴戟天低聚果糖。
优选的，一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂的制备方法，所述方法包括：将巴戟天低聚果糖和复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为1ⅹ1010的活菌数/g；所述巴戟天低聚果糖的制备方法如上所述。
其中，所述巴戟天药材优选巴戟天鲜药材。
其中，所述去除杂质是指去除非巴戟天药用部位，包括泥沙、杂草等。
其中，在制备方法中使用的水优选蒸馏水。
优选的，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(2)中的减压浓缩的温度为60-80℃。
优选的，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(3)中的将沉淀再复溶于热水、加乙醇沉淀的操作重复多次，例如2-5次。
优选的，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(4)中的所述pH为4.5-6.5。
优选的，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(4)中的所述干燥为冷冻干燥或减压干燥。
优选的，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物。
优选的，所述复合益生菌中的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性分别为1ⅹ1010的活菌数/g。
在本发明的第二方面，提供一种上述制备方法制备得到的含巴戟天低聚果糖的微生态制剂。
巴戟天中含有多种糖类成分，国内外已有报道从巴戟天中分离并鉴定出的成分共有十四种，包括单糖、低聚糖以及多糖，以低聚糖为主。对本发明中提取得到的巴戟天低聚果糖进行鉴别可知，本发明制备得到的巴戟天低聚果糖主要含有蔗糖(Sucrose)、蔗果三糖(1-kestose)、果三糖(α-D-fructofuranose-((1-2)-β-D-fructofuranose)2)、耐斯糖(Nyslose)、1F-果糖基耐斯糖(1F-fructofuranosylnyslose)、菊淀粉型的六聚糖(Inliuin-type hexasaccharide)、菊淀粉型的七聚糖(Inliuin-type heptasaccharide)、巴戟甲素(Bajijiasu)。
益生菌是一类对宿主有益的活性微生物，是定植于人体肠道、生殖系统内，能产生确切健康功效从而改善宿主微生态平衡、发挥有益作用的活性有益微生物的总称，主要分为三大类，乳杆菌类、双歧杆菌类、革兰氏阳性球菌。本发明通过将七种类型的益生菌进行复配，益生菌之间发挥协同效果，并且结合巴戟天低聚果糖的协同增效作用，能显著提高效果，特别在改善肠胃功能方面，具有现有技术意料不到的有益效果。
在本发明的第三方面，提供一种上述的含巴戟天低聚果糖的微生态制剂在改善胃肠功能方面的用途。
在本发明的第四方面，提供一种上述的含巴戟天低聚果糖的微生态制剂在制备改善胃肠功能药物或保健品方面的用途。
本发明的上述微生态制剂能够显著改善胃肠功能，与单纯的使用复合益生菌例如本发明所述的复合益生菌相比，具有显著的辅助作用。
附图说明
图1为巴戟天总低聚糖的制备方法的工艺流程图；
图2为对照品溶液的HPLC图谱；其中，1-蔗糖，2-蔗果三糖，3-耐斯糖，4-蔗果五糖，5-蔗果六糖，6-蔗果七糖；
图3为巴戟甲素对照品溶液的HPLC色谱图；
图4为本发明的实施例1制备得到的巴戟天总低聚糖的HPLC色谱图；
图5为血清中LPS含量的变化图；
图6为结肠病理切片图；
图7各实验组小鼠肠道菌群在门分类水平上的比例图。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明进行进一步说明。
实施例1：巴戟天低聚果糖的制备
如图1所示，一种巴戟天总低聚糖的制备方法，包括如下步骤：
(1)将巴戟天鲜药材1kg，去除杂质，粉碎；
(2)取粉碎后的巴戟天鲜药材，加8倍量蒸馏水，煮沸2h，过滤，滤渣再加8倍量蒸馏水，煮沸2h，过滤，合并滤液，60-80℃减压浓缩，得到浓缩液；
(3)在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置24h，将沉淀复溶于热水，冷却至室温，再加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置24h，得沉淀，即为巴戟天低聚果糖粗品；
(4)将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50℃，调pH至5.0，溶液经D-900阴离子交换型树脂，以1.0-1.5BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70℃减压浓缩至相对密度为1kg：200ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置24h，静置，抽滤，冷冻干燥，即得巴戟天低聚果糖320g，收率大于30％，纯度达到80％以上。
将得到的巴戟天低聚果糖进行鉴别，HPLC图如图2-图4所示，其中，图2为对照品溶液的HPLC图谱，图3为巴戟甲素对照品溶液的HPLC色谱图，图4为本发明实施例制备得到的巴戟天总低聚糖的HPLC色谱图。
实施例2：含巴戟天低聚果糖的微生态制剂
取实施例1制备得到的巴戟天低聚果糖30重量份，双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌组成的益生菌干粉各3重量份，每种益生菌的活性分别为1.5ⅹ109的活菌数/g，将上述果糖及益生菌干粉混合均匀，分装即得微生态制剂。
试验例1
取SPF级BALB/C小鼠50只，随机分为5组，每组10只。留取1组为正常对照组外，其余4组均直肠注入0.6％三硝基苯磺酸(TNBS)(溶于50％乙醇)0.1ml以制备溃疡性结肠炎模型。
造模成功后，分成巴戟天低聚果糖组、复合益生菌组、本发明实施例2制备的巴戟天低聚果糖与复合益生菌的微生态制剂组、模型组。除正常组外，其他组给以大量抗生素处理，按组别给相对应药物，模型组和正常组灌胃蒸馏水。持续十天后，处死小鼠，取血、小肠、粪便。相关检测结果见图5、图6、图7。
从图5对血清中LPS水平测定结果显示，模型组含量是正常组的210％。给药巴戟天低聚糖和复合益生菌制剂后，小鼠血清中LPS水平皆有明显下降，实施例2的巴戟天低聚糖与复合益生菌共同制备的微生态制剂使用后，血清中LPS含量仅增长40％左右。
从图6的结肠病理切片可以看出，与空白对照组相比，模型组呈现肠黏膜出现弥漫一致性炎症现象，肠黏膜结构改变并出现裂隙状溃疡病变。给药巴戟天低聚糖和复合益生菌的微生态制剂后肠粘膜结构更为规则，裂隙状溃疡改变也较少。
从图7可以看出：与正常组相比，小鼠经TNBS处理后，肠道内放线菌门(Actinobacteria)、厚壁菌门(Firmicutes)和TM7门细菌增多，脱铁杆菌门(Deferribacteres)和变形菌门(Proteobacteria)减少；与TNBS组相比，给药巴戟天低聚糖、复合益生菌和巴戟天低聚糖复合益生菌的微生态制剂后，小鼠肠道内拟杆菌门(Bacteroidetes)、厚壁菌门和变形菌门菌数明显增多；经过大量抗生素处理后，脱铁杆菌门、变形菌门和TM7门细菌几乎被完全杀灭，而给药巴戟天低聚糖、复合益生菌和巴戟天低聚糖+复合益生菌的微生态制剂后各细菌门则得以保持结构完整。
综上可以看到，溃疡性结肠炎小鼠服用巴戟天低聚糖、复合益生菌、巴戟天低聚糖+复合益生菌的微生态制剂后，与正常组相比所有溃疡性结肠炎的症状指标也得到了明显的改善，特别是巴戟天低聚糖+复合益生菌组改善更为明显，具体协同增效作用。
以上所述，仅为本发明的较佳的具体实施例，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围内。
Claims (10)
1.一种含巴戟天低聚果糖的微生态制剂的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将巴戟天低聚果糖和复合益生菌按照重量比8:1-15:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为1-2:1-2:1-2:1-2:1-2:1-2:1-2双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，优选等重量份的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g；所述巴戟天低聚果糖的制备方法包括：
(1)将巴戟天去除杂质，粉碎；
(2)取粉碎后的巴戟天，加8-10倍量水，煮沸1-2h，过滤，滤渣再加8-10倍量水，煮沸1-2h，过滤，合并滤液，减压浓缩，得到浓缩液；
(3)在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置12-24h，得沉淀，即为巴戟天低聚果糖粗品；
(4)将巴戟天低聚果糖粗品复溶于热水，冷却至50℃，调pH至弱酸性，溶液经D-900阴离子交换型树脂，以1-1.5BV/h流速连续洗脱，收集洗脱液，50-70℃减压浓缩至相对密度为1kg：200ml体积，在浓缩液中加入乙醇，调节乙醇浓度至90％，冷藏，静置12-24h，冷藏，静置，抽滤，干燥，即得巴戟天低聚果糖。
2.根据权利要求1所述的制备方法，其特征在于，所述方法包括：将巴戟天低聚果糖和复合益生菌按照重量比10:1混合均匀得到，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌，嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物，所述的双歧杆菌，嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g。
3.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(2)中的减压浓缩的温度为60-80℃。
4.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(3)中的将沉淀再复溶于热水、加乙醇沉淀的操作重复多次，例如2-5次。
5.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(4)中的所述pH为4.5-6.5。
6.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述巴戟天低聚果糖的制备方法的步骤(4)中的所述干燥为冷冻干燥或减压干燥。
7.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述复合益生菌为包含重量比为等重量份的双歧杆菌，嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的混合物。
8.根据权利要求1或2所述的制备方法，其特征在于，所述复合益生菌中的双歧杆菌、嗜酸乳杆菌、干酪乳杆菌、詹氏乳杆菌、粪链球菌、乳球菌、中介链球菌的活性为5ⅹ109-1ⅹ1010的活菌数/g。
9.一种根据权利要求1至9中任一所述的制备方法制备得到的微生态制剂。
10.一种根据权利要求9所述的微生态制剂在制备改善胃肠功能药物或保健品方面的用途。
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| Date | Code | Title | Description |
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| PB01 | Publication | ||
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| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| GR01 | Patent grant | ||
| CP03 | Change of name, title or address |
Address after: 510070 No. 58, courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou, Guangdong Province Patentee after: Institute of Microbiology, Guangdong Academy of Sciences Patentee after: GUANGDONG YUEWEI EDIBLE FUNGI TECHNOLOGY Co.,Ltd. Address before: 510075 courtyard, No. 100, Xianlie Middle Road, Yuexiu District, Guangzhou City, Guangdong Province Patentee before: GUANGDONG INSTITUTE OF MICROBIOLOGY (GUANGDONG DETECTION CENTER OF MICROBIOLOGY) Patentee before: GUANGDONG YUEWEI EDIBLE FUNGI TECHNOLOGY Co.,Ltd. |
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| CP03 | Change of name, title or address | ||
| OL01 | Intention to license declared | ||
| OL01 | Intention to license declared |