CN107271431A - 一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，将植物油与甲醇溶液混匀，反应后离心或者沉降分离，取上清液，利用玉米赤霉烯酮毒素试纸条进行检测。本发明提出的检测方法，利用玉米赤霉烯酮易溶于乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂的理化性质，发明了一种更为简便的检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，有利于推动油以及植物油业的发展。经试验证明，本发明的方法能够快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素，且效率高、耗时少、成本低、回收率高，符合实验室质量控制规范‑食品理化检测标准。

Description

一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法
技术领域
本发明属于检测技术领域，具体涉及一种玉米赤霉烯酮毒素的检测方法。
背景技术
玉米赤霉烯酮(Zearaleuoue，ZEN)，又名F-2毒素，主要是由禾谷镰刀菌(Fusariumgramiuearum)和黄色镰刀菌(F.culmorum)产生的一种非甾体真菌毒素。ZEN具有较强生殖毒性和致畸作用。玉米赤霉烯酮首先从赤霉病玉米中分离，广泛存在于霉变的玉米、高粱、小麦、燕麦、大麦等谷物以及奶制品中，是世界上污染范围最广的一种镰刀菌毒素。玉米赤霉烯酮污染饲料和食品后，不仅使农业经济受到严重影响，而且还会带来严重的食品安全问题，威胁人体健康。由于玉米赤霉烯酮对人体和动物产生的危害，目前己有很多国家制订了食品中米赤霉烯酮的限量标准。澳大利亚规定谷物中玉米赤霉烯酮的质量分数不能超过50μg/kg，我国规定原粮和成品粮包括禾谷、豆类等中玉米赤霉烯酮的质量分数不能超过60μg/kg，饲料中玉米赤霉烯酮的质量分数不得超过500μg/kg。
植物油作为一种日常食用的粮油副食品已经进入千家万户。目前对于植物油中玉米赤霉烯酮毒素含量的检测还没有明确的标准，而食用油中玉米赤霉烯酮毒素已成为影响我国食品安全的重要因素，能否快速、准确地检测玉米油中玉米赤霉烯酮毒素含量也成为我国食用油出口检验检疫的主要内容。因此，建立快速、高效、低成本的玉米赤霉烯酮毒素的检测方法是目前迫在眉睫的事情。
发明内容
针对本领域存在的不足之处，本发明的目的在于提供一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法。
本发明的另一目的在于提出所述方法的应用。
实现本发明上述目的的技术方案为：
一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，将植物油与甲醇溶液混匀，反应后离心或者沉降分离，取上清液，利用玉米赤霉烯酮毒素试纸条进行检测。
玉米赤霉烯酮易溶于乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂，发明人对有机溶剂进行了比较分析，其中甲醇应用于植物油的提取效率为最优。
其中，所述甲醇溶液的质量浓度为60～100％，植物油与甲醇溶液的质量体积比为1g：8～10mL。
优选地，所述甲醇溶液的质量浓度为70％，用分析纯或色谱纯级的甲醇配制而成。
更优选地，植物油与甲醇溶液的质量体积比为1g：9mL
其中，将植物油与甲醇溶液混合，在室温下涡旋混合1～2min，再以8000～15000rpm转速离心分离4～8min，取上清液。
更优选地，将植物油与甲醇溶液混合，在室温下涡旋混合2min，再以10000rpm转速离心分离5min，取上清液。
其中，取100μL上清液与1mL稀释缓冲液混合，混合20s后用玉米赤霉烯酮毒素试纸条进行检测；所述稀释缓冲液为玉米赤霉烯酮毒素试纸条配套的稀释缓冲液。
玉米赤霉烯酮毒素试纸条是市售产品，例如可购自中检环贸公司，其产品配套有稀释缓冲液。
本发明所述的方法在植物油中玉米赤霉烯酮毒素的检测中的应用，所述植物油为玉米油、小麦胚芽油、大豆油、大米胚芽油中的一种、或其混合物。
本发明的有益效果在于：
本发明提出的检测方法，利用玉米赤霉烯酮易溶于乙腈、甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮等有机溶剂的理化性质，发明了一种更为简便的检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，有利于推动油以及植物油业的发展。经试验证明，本发明的方法能够快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素，且效率高、耗时少、成本低、回收率高(<100ng/mL，回收率范围在60-120％；100-1000ng/mL，回收率范围在80-110％)，符合实验室质量控制规范-食品理化检测标准(GB/T 27404)，另外，此方法也极大简便了油及其相关产品中玉米赤霉烯酮毒素的检测，具有极高的推广和应用价值。
具体实施方式
以下实施例用于说明本发明，但不用来限制本发明的范围。
下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
下述实施例中的定量试验，均设置三次重复实验，结果取平均值。
下述实施例中的玉米赤霉烯酮标准品是Sigma公司(美国)的产品。分析级甲醇是北化公司(中国)的产品。色谱级的甲醇和乙腈是Fisher公司(美国)的产品。
如无特别说明，实施例中的手段均为本领域所公知的技术手段。
其中，加标植物油样品的制备方法如下：
用移液器准确量取1g已充分混匀的植物油样品，置于50mL离心管内，分别加入0.1mL 2000ng/mL，1500ng/mL，1000ng/mL玉米赤霉烯酮标准品溶液，室温涡旋2min后待测。
实施例1：
分别利用试纸条和免疫亲和柱检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。具体步骤如下：
1、利用试纸条检测玉米油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量
用移液器准确量取1g已充分混匀的玉米油样品，置于50mL离心管内，加入9mL70％分析级甲醇(用分析级甲醇配的溶液)，室温涡旋2min后，10000rpm离心5min，静置取上清100μL至2mL离心管内，加入1mL稀释缓冲液，上下颠倒20s混匀后，用试纸条进行毒素含量检测。玉米油样品重复3次，取平均值。
2、利用免疫亲和柱检测玉米油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量
用移液器准确量取4g已充分混匀的玉米油样品，置于50mL离心管内，加入21mL84％色谱级乙腈，室温涡旋2min后，10000rpm离心5min，静置取上清3mL至50mL离心管内，加入25mL PBS缓冲液，上下颠倒20s混匀后，用免疫亲和柱进行毒素含量检测。采用高效液相色谱法(HPLC)对样品液进行高效液相色谱分析，以外标法定量进行数据处理。玉米油样品重复3次，取平均值。
高效液相色谱法条件：色谱柱：Agilent TC-C18，4.6×250mm，5μm；流动相：乙腈/水(60/40，V/V)；荧光检测器：安捷伦G1321；检测波长：274nm和440nm；流速：1.0mL/min；柱温30℃；进样量：50μL。收集与玉米赤霉烯酮毒素标准品保留时间(保留时间约前后0.05min)一致的峰的洗脱液，得到原始玉米油样品中的玉米赤霉烯酮毒素含量。
检测结果如表1所示。其中，毒素含量(ng/mL)为分别利用试纸条和免疫亲和柱检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素含量的检测值；平均含量(ng/mL)为毒素含量的平均值；回收率(％)为利用试纸条检测植物油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量平均值(ng/mL)/利用免疫亲和柱检测植物油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量平均值(ng/mL)*100％。
表1 植物油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量检测
实施例2
分别利用试纸条和免疫亲和柱检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。与实施例1不同的参数为：
用移液器准确量取1g已充分混匀的玉米油样品，置于50mL离心管内，分别加入1mL、2mL、5mL 70％分析级甲醇，利用试纸条检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每个样品做三次平行。
检测结果表明，玉米油样品与70％分析级甲醇，1：1，2：1，5：1(质量体积比g：mL)的回收率平均分别为35.01％，48.20％，61.26％。
用移液器准确量取1g已充分混匀的玉米油样品，置于50mL离心管内，分别加入5mL70％分析级甲醇和乙腈，利用试纸条检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每个样品做三次平行。
检测结果表明，玉米油样品与70％分析级甲醇和乙腈的回收率平均分别为61.26％和38.51％。
实施例3
分别利用试纸条和免疫亲和柱检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。与实施例1不同的参数为：
用移液器准确量取1g已充分混匀的玉米油样品，置于50mL离心管内，分别加入9mL100％，9mL 85％分析级甲醇溶液(用分析级甲醇配制)，利用试纸条检测植物油样品(市售玉米油)中玉米赤霉烯酮毒素。每个样品做三次平行。
检测结果表明，玉米油样品与100％、85％甲醇的回收率平均分别为72.14％，68.23％。
实施例4利用试纸条检测加标植物油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量
取1g加标玉米油样品，加入9mL 70％分析级甲醇，室温涡旋2min后，10000rpm离心5min，静置取上清100μL至2mL离心管内，加入1mL稀释缓冲液，上下颠倒20s混匀后，用试纸条进行毒素含量检测。加标玉米油样品重复3次，取平均值。
检测结果如表2所示。其中，实际含量(ng/mL)为玉米油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量的实际平均检测值；理论含量(ng/mL)为玉米油样品中分别加入0，1000ng/mL，1500ng/mL，2000ng/mL玉米赤霉烯酮毒素标准品后的理论含量；回收率(％)为实际含量/理论含量*100％。
当加标浓度为0时，玉米赤霉烯酮毒素含量为183.02ng/mL(即为原始玉米油样品中的玉米赤霉烯酮毒素平均含量)；当加标浓度为1000ng/mL时，玉米赤霉烯酮毒素含量为273.02ng/mL，理论含量为283.02ng/mL(100.00ng/mL+183.02ng/mL)，回收率为96.47％(273.02ng/mL/283.02ng/mL)。当加标浓度为1500ng/mL时，玉米赤霉烯酮毒素含量为316.49ng/mL，理论含量为333.02ng/mL(150.00ng/mL+183.02ng/mL)，回收率为95.04％(316.49ng/mL/333.02ng/mL)。当加标浓度为2000ng/mL时，玉米赤霉烯酮毒素含量为396.00ng/mL，理论含量为382.02ng/mL(200.00ng/mL+383.02ng/mL)，回收率为103.39％(396.00ng/mL/382.02ng/mL)。以上加标回收率均符合实验室质量控制规范-食品理化检测标准(GB/T27404)(加标浓度<100ng/mL，回收率范围在60-120％；100-1000ng/mL，回收率范围在80-110％)，说明本发明检测玉米油中玉米赤霉烯酮毒素的方法是可行的，且该方法更加简便。
表2 加标玉米油样品中玉米赤霉烯酮毒素含量检测
尽管本发明的内容已经通过上述优选实施例作了详细介绍，但应当认识到上述的描述不应被认为是对本发明的限制。对本领域技术人员来说，从本专利公开内容及常识直接导出或联想到的一些变形，或现有技术的替代，以及特征的等效变化或修饰，都能实现本专利描述的功能和效果，均属本专利保护范围。

Claims (8)

1.一种快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，将植物油与甲醇溶液混匀，反应后离心或者沉降分离，取上清液，利用玉米赤霉烯酮毒素试纸条进行检测。
2.根据权利要求1所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，所述甲醇溶液的质量浓度为60～100％，植物油与甲醇溶液的质量体积比为1g：8～10mL。
3.根据权利要求1所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，所述甲醇溶液的质量浓度为70％，用分析纯、色谱纯级的甲醇配制而成。
4.根据权利要求3所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，植物油与甲醇溶液的质量体积比为1g：9mL。
5.根据权利要求1所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，将植物油与甲醇溶液混合，在室温下涡旋混合1～2min，再以8000～15000rpm转速离心分离4～8min，取上清液。
6.根据权利要求5所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，将植物油与甲醇溶液混合，在室温下涡旋混合2min，再以10000rpm转速离心分离5min，取上清液。
7.根据权利要求1～6任一项所述的快速检测植物油中玉米赤霉烯酮毒素的方法，其特征在于，取100μL上清液与1mL稀释缓冲液混合，混合20s后用玉米赤霉烯酮毒素试纸条进行检测；所述稀释缓冲液为玉米赤霉烯酮毒素试纸条配套的稀释缓冲液。
8.权利要求1～7任一所述的方法在植物油中玉米赤霉烯酮毒素的检测中的应用，所述植物油为玉米油、小麦胚芽油、大豆油、大米胚芽油中的一种、或其混合物。
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