CN107236818A - 肺癌临床用药突变基因检测试剂盒 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒。该试剂盒包括：肺癌临床用药突变基因捕获探针，捕获探针通过叠瓦式设计获得，覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合。应用本发明的技术方案，捕获探针覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，这样就可以在DNA水平上检测到断点在外显子和内含子上的多种已知融合和未知融合，对断点位置进行准确定位；探针通过叠瓦式设计获得，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合，从而大大提高了捕获探针覆盖度和捕获效率。
Description
技术领域
本发明涉及生物医学技术领域，具体而言，涉及一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒。
背景技术
靶向治疗，是在细胞分子水平上，针对已经明确的致癌位点(该位点可以是肿瘤细胞内部的一个蛋白分子，也可以是一个基因片段)，来设计相应的治疗药物，药物进入体内会特意地选择致癌位点来相结合发生作用，使肿瘤细胞特异性死亡，而不会波及肿瘤周围的正常组织细胞，所以分子靶向治疗又被称为“生物导弹”。靶向治疗是指以标准化的生物标记物来识别是否存在某种疾病特定的控制肿瘤生长的基因或基因谱，以此确定针对特异性靶点的治疗方法。
但是，由于与肿瘤或癌症相关的基因突变在不同的个体中是不同的，对于不同的基因或不同的位点突变，其对于某种药物的敏感性是不同的，也就是说某些患者可能对某种药物存在天然的耐药性。另外，在靶向治疗的过程，肿瘤有可能产生其他位点的基因突变，而抑制靶向药物的治疗作用，产生获得性耐药性。而耐药性一旦产生，继续用已经不具备治疗的作用的靶向药物，对患者无任何好处，还会增加副作用。为了更好的指导临床用药，需要对患者的基因突变位点进行检测。
市场上已经有很多基因突变位点的检测试剂盒，但是，其通常是在RNA水平上对基因进行检测，因此，对某些基因位于内含子区域的突变难以检出。
发明内容
本发明旨在提供一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，以提高基因检测的覆盖度和捕获效率。
为了实现上述目的，根据本发明的一个方面，提供了一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒。该试剂盒包括：肺癌临床用药突变基因捕获探针，捕获探针通过叠瓦式设计获得，覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合。
进一步地，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒用于检测ROS1-SLC34A2融合断裂点，捕获探针覆盖区域如表1所示：
表1
进一步地，捕获探针的序列包括SLC34A2探针序列和ROS1探针序列，其中，SLC34A2探针序列具体包括SEQ ID NO:103至SEQ ID NO:212的110条探针，ROS1探针序列具体包括SEQ ID NO:213至SEQ ID NO:227的329条探针。
进一步地，捕获探针为探针混合物，探针混合物的浓度为20～30ng/μl，优选为25ng/μl。
进一步地，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括文库构建相关试剂，文库构建相关试剂包括2×HiFi热启动酶缓冲液，2×HiFi热启动酶缓冲液包括：850～950mMTris-HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸。
进一步地，2×HiFi热启动酶缓冲液包括：900mM Tris-HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸。
进一步地，文库构建相关试剂还包括：末端修复加A反应体系、接头连接体系以及文库富集引物；
优选地，末端修复加A反应体系包括末端修复加A反应缓冲液以及末端修复加A酶，更优选地，末端修复加A反应缓冲液包括400～600mM Tris～HCl、80～120mM MgCl2、80～120mM DTT、8～10nM ATP、3～5mM dATP、3～5mM dCTP、3～5mM dGTP、3～5mM dTTP；末端修复加A酶的浓度为0.04～0.06U/μl；
优选地，接头连接体系包括双链寡核苷酸接头、DNA连接酶以及DNA连接酶缓冲液；更优选地，双链寡核苷酸接头包括48对，DNA连接酶的浓度为0.04～0.06U/μl；DNA连接酶缓冲液包括800～900mM的Tris～HCl、40～60mM的MgCl2、40～60mM的DTT及0.5～1.5mM的ATP；
优选地，文库富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
进一步地，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括：肺癌临床用药突变基因捕获试剂，肺癌临床用药突变基因捕获试剂包括：杂交通用引物和杂交index引物；
优选地，杂交通用引物的浓度为225～275μM，更优选为250μM；
优选地，杂交index引物1-48的浓度为22.5～27.5μM，更优选为25μM；
优选地，杂交index引物为48个。
进一步地，肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×杂交缓冲液、杂交组分A以及胎盘DNA，2×杂交缓冲液为2M的四甲基氯化铵缓冲液，杂交组分A为100％的甲酰胺；
优选地，肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×HiFi热启动酶缓冲液和捕获样本富集引物；
更优选，捕获样本富集缓冲液包括：850～950mM Tris～HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/ul高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸；进一步优选，捕获样本富集缓冲液包括900mM Tris～HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸；
更优选地，捕获样本富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
进一步地，试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品，其中，阴性对照品为正常细胞BEAS-2B培养提取的细胞系DNA并进行超声打断后的片段化DNA；阳性对照品为多种肿瘤细胞系DNA混合后超声打断的片段化DNA，所有检测位点均为阳性。
应用本发明的技术方案，捕获探针覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，这样就可以在DNA水平上检测到断点在外显子和内含子上的多种已知融合和未知融合，对断点位置进行准确定位；探针通过叠瓦式设计获得，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合，从而大大提高了捕获探针覆盖度和捕获效率。
具体实施方式
需要说明的是，在不冲突的情况下，本申请中的实施例及实施例中的特征可以相互组合。下面将结合实施例来详细说明本发明。
针对现有技术中肺癌临床用药突变基因检测试剂盒通常是在RNA水平上对基因进行检测，对某些基因位于内含子区域的突变难以检出的技术问题，根据本发明一种典型的实施方式，提供一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒。该试剂盒包括：肺癌临床用药突变基因捕获探针，捕获探针通过叠瓦式设计获得，覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合。
应用本发明的技术方案，捕获探针覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，这样就可以在DNA水平上检测到断点在外显子和内含子上的多种已知融合和未知融合，对断点位置进行准确定位；探针通过叠瓦式设计获得，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合，从而大大提高了捕获探针覆盖度和捕获效率。
根据本发明一种典型的实施方式，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒用于检测ROS1-SLC34A2融合断裂点，捕获探针覆盖区域如表1所示：
表1
当然也可以根据本发明的发明思想，设计其他基因的检测试剂盒。
优选的，捕获探针的序列包括SLC34A2探针序列和ROS1探针序列，其中，SLC34A2探针序列具体包括SEQ ID NO:103至SEQ ID NO:212的110条探针，ROS1探针序列具体包括SEQID NO:213至SEQ ID NO:227的329条探针。采用这些探针可以捕获SLC34A2和ROS1基因外显子区域和内含子区域，可以在DNA水平上检测到断点在外显子和内含子上的多种已知融合和未知融合，对断点位置进行准确定位；探针通过叠瓦式设计获得，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合，从而大大提高了捕获探针覆盖度和捕获效率。具体的探针序列见表18或序列表。
优选的，捕获探针为探针混合物，探针混合物的浓度为20～30ng/μl，优选为25ng/μl。符合此种条件的探针，检测均一性较好。
根据本发明一种典型的实施方式，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括文库构建相关试剂，文库构建相关试剂包括2×HiFi热启动酶缓冲液，2×HiFi热启动酶缓冲液包括：850～950mM Tris～HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸。2×HiFi热启动酶缓冲液具有高保真性，可降低检测的假阳性率。
优选的，2×HiFi热启动酶缓冲液包括：900mM Tris-HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸。
为了方便操作及提高检测的准确性，根据本发明一种典型的实施方式，文库构建相关试剂还包括：末端修复加A反应体系、接头连接体系以及文库富集引物；优选地，末端修复加A反应体系包括末端修复加A反应缓冲液以及末端修复加A酶，更优选地，末端修复加A反应缓冲液包括400～600mM Tris～HCl、80～120mM MgCl2、80～120mM DTT、8～10nM ATP、3～5mM dATP、3～5mM dCTP、3～5mM dGTP、3～5mM dTTP；所述末端修复加A酶的浓度为0.04～0.06U/μl；优选地，所述接头连接体系包括双链寡核苷酸接头、DNA连接酶以及DNA连接酶缓冲液；更优选地，所述双链寡核苷酸接头为24～96个，进一步优选为48个；所述DNA连接酶的浓度为0.04～0.06U/μl；所述DNA连接酶缓冲液包括800～900mM的Tris～HCl、40～60mM的MgCl2、40～60mM的DTT及0.5～1.5mM的ATP；优选地，所述文库富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
根据本发明一种典型的实施方式，肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括：肺癌临床用药突变基因捕获试剂，肺癌临床用药突变基因捕获试剂包括：杂交通用引物和杂交index引物；优选地，杂交通用引物的浓度为225～275μM，更优选为250μM；优选地，杂交index引物1-48的浓度为22.5～27.5μM，更优选为25μM；优选地，杂交index引物为48个。
根据本发明一种典型的实施方式，肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×杂交缓冲液、杂交组分A以及胎盘DNA(COT DNA)，2×杂交缓冲液为2M的四甲基氯化铵缓冲液，杂交组分A为100％的甲酰胺；优选地，肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×HiFi热启动酶缓冲液和捕获样本富集引物；更优选，捕获样本富集缓冲液包括：850～950mM Tris～HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/ul高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸；进一步优选，所述捕获样本富集缓冲液包括900mM Tris～HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸；更优选地，捕获样本富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
为了方便操作及提高检测的准确性，根据本发明一种典型的实施方式，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品，其中，阴性对照品为正常细胞BEAS-2B培养提取的细胞系DNA并进行超声打断后的片段化DNA，所有检测位点均为阴性；阳性对照品为多种肿瘤细胞系DNA混合后超声打断的片段化DNA，所有检测位点均为阳性。
下面将结合实施例进一步说明本发明的有益效果。
实施例1
实验样本：HCC78肿瘤细胞系DNA进行Qubit定量及ddPCR检测。详细信息如下：突变基因SLC34A2-ROS1，突变位点为SLC34A2的4号内含子与ROS1的31号内含子发生融合，ddPCR频率48.28％，Qubit浓度93.8ng/μl。再用各位点均为野生型的BEAS-2B细胞系DNA对母液进行稀释，将突变频率分别稀释成2％、1％、0.5％、0.1％，超声打断后再用ddH2O将DNA浓度稀释至5ng/μl，分别命名为L1、L2、L3和L4。提取HCC78肿瘤细胞系RNA将其反转录成cDNA后，进行Qubit定量和ddPCR检测。详细信息如下：突变基因SLC34A2-ROS1，突变位点为SLC34A2的4号外显子与ROS1的32号外显子发生融合，ddPCR频率为47.3％，Qubit浓度为25.4ng/ul。再用SLC34A2和ROS1未发生融合的细胞系BEAS-2B的cDNA对其进行稀释，将突变频率分别稀释成2％、1％、0.5％、0.1％，超声打断后再用ddH2O将DNA浓度稀释至5ng/μl，分别命名为L5、L6、L7和L8。
阴性样本：对BEAS-2B细胞系DNA、AMO-1细胞系DNA、NCI-H596细胞系DNA和NCI-H929细胞系DNA分别进行Qubit定量得到细胞系DNA的浓度(ng/μl)，根据浓度，每种细胞系DNA各取30μg进行超声打断，打断后用ddH2O稀释至5ng/μl作为阴性参考品N1、N2、N3、N4。
本实施例具体所使用的试剂盒的成分见下表2：
表2
附：Pre-PCR引物：指文库富集引物；Post-PCR引物指捕获样本富集引物；
上述试剂盒中的引物及探针的具体序列见后续的表18。
操作步骤如下：
1.末端修复及加A
取DNA样品和试剂依次加入配制混合液1(见表3)，涡旋震荡混匀后，于PCR仪中20℃孵育30分钟，65℃孵育30分钟。
表3
| 组分 | 加入量 |
| DNA样品 | 大于等于20ng |
| 末端修复&加A缓冲液 | 7μl |
| 末端修复&加A酶 | 3μl |
| 水 | 补足至60μl |
2.添加接头
向末端修复&加A后的混合液1中依次加入试剂配制混合液2(见表4)，用移液器吹打混匀后，于PCR仪中20℃孵育15分钟。
表4
1接头的使用浓度根据如下表5进行调整：
表5
| 模板DNA量/ng | 接头的浓度/μM |
| 1000 | 15 |
| 500 | 15 |
| 250 | 15 |
| 100 | 15 |
| 50 | 15 |
| 25 | 7.5 |
| 10 | 3 |
| 5 | 1.5 |
| 2.5 | 0.75 |
| 1 | 0.3 |
3.添加接头后纯化
(1)将添加接头后的110μl混合液转移至新的1.5ml离心管中，向其中加入88μl纯化磁珠，用移液器吹打混匀，室温静置5～15分钟，使DNA和磁珠充分结合。
(2)将离心管置于磁力架上至溶液澄清后，用移液器吸去上清。
(3)向离心管中加入200μl 80％乙醇，室温静置30秒，用移液器吸去上清。
(4)重复上一步，室温静置3～5分钟至乙醇完全挥发。
注：避免磁珠过干。
(5)乙醇完全挥发后，从磁力架上取下离心管，每个离心管中分别依次加入22μl水，用移液器吹打混匀，室温静置2分钟。
(6)将离心管置于磁力架上至溶液上清澄清后，取1μl上清用于Qubit定量。
4.文库富集
(1)按表6要求依次加入试剂配制混合液3于PCR管中。
表6
| 组分 | 加入量(μl) |
| 上清 | 20 |
| 2×HiFi热启动酶缓冲液 | 25 |
| Pre-PCR引物 | 5 |
| 合计 | 50 |
(2)调整移液器至最佳量程上下吹打混匀液体并盖好PCR管盖，短暂离心。
(3)将配制好的混合液3置于PCR仪，按以下表7反应程序扩增：
表7
2具体循环数可根据如下表8进行调整：
表8
注：扩增后的产物于4℃或-20℃保存，但不超过72小时。
(4)扩增后纯化及片段大小分选
1)将50μl扩增产物转移至新的1.5ml离心管中，加入50μl纯化磁珠，涡旋震荡混匀。室温静置15分钟。
2)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
3)向离心管中加入200μl 80％乙醇，室温静置30秒，用移液器吸去上清。
4)重复上一步，室温静置3～5分钟至乙醇完全挥发。
注：避免磁珠过干。
5)从磁力架上取下离心管，加50μl水，用移液器吹打混匀，室温静置2分钟。
6)离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器移取50μl上清至新的离心管中。
7)向上述50μl上清中加入35μl纯化磁珠，涡旋震荡混匀，室温静置10分钟。
8)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸取上清约85μl于新的离心管中
注：此步需小心留取上清，而非弃上清。
9)向上述85μl上清中，加入10μl纯化磁珠，涡旋震荡混匀，室温静置10分钟。
10)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
11)向离心管中加入200μl 80％乙醇，室温静置30秒，用移液器吸去上清。
12)重复上一步，室温静置数秒至乙醇完全挥发。
注：避免磁珠过干。
13)乙醇完全挥发后，从磁力架上取下离心管，加52μl水，用移液器吹打混匀，室温静置2分钟。
14)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸取1μl进行Qubit定量检测，吸取50μl上清至新的离心管中。
15)DNA文库样品质量分析：对文库样品进行Qubit定量，浓度应不小于2.5ng/μl；用2100生物分析仪分析文库大小，应在于150～500bp之间。
注：纯化后的文库溶液应在-20℃条件下保存，于7天内完成后续处理。
5.文库杂交和捕获
(1)按表9要求依次加入试剂配制混合液4于新的1.5ml离心管中：
表9
| 组分 | 加入量 |
| DNA文库混合样品 | 1μg3 |
| 杂交通用引物 | 1000pmol |
| 杂交Index引物 | 1000pmol4 |
| COT DNA | 5μl |
3根据文库样品浓度计算样本量，按下表10等质量加入文库样本。1个捕获样本至少加入8个文库，至多加入12个文库：
表10
| 组分 | 加入量 |
| DNA文库样品1 | 125 |
| DNA文库样品2 | 125 |
| DNA文库样品3 | 125 |
| DNA文库样品4 | 125 |
| DNA文库样品5 | 125 |
| DNA文库样品6 | 125 |
| DNA文库样品7 | 125 |
| DNA文库样品8 | 125 |
4应加入与接头相对应的杂交Index引物，加入量根据以下表11格调整：
表11
(2)用移液器吹打混匀后，用真空离心浓缩仪在60℃、1350r/min下进行干燥，直至液体完全蒸干。
(3)待液体蒸干后，按下表12加入试剂配制混合液5：
表12
| 组分 | 加入量(μl) |
| 2×杂交缓冲液 | 7.5 |
| 杂交组分A | 3 |
| 合计 | 10.5 |
(4)向干燥后的混合液4中，加入10.5μl混合液5配成杂交混合液，涡旋震荡混匀，短暂离心以去除管壁残留。于恒温金属浴仪95℃孵育10分钟使DNA变性，短暂离心以去除管壁残留。
(5)用移液器将杂交混合液转移至新的PCR管中，加入4.5μl探针，涡旋震荡混匀，短暂离心以去除管壁残留。于PCR仪47℃孵育16～20小时，同时PCR仪加热盖温度设置为57℃以上。
6.文库清洗
(1)缓冲液的稀释方法(见表13)：
表13
(2)取100μl 1×洗脱缓冲液I和400μl 1×洗脱缓冲液IV在47℃预热至少2小时。
(3)取100μl捕获磁珠于新的1.5ml离心管中，将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(4)从磁力架上取下离心管，加入200μl 1×磁珠洗脱缓冲液，涡旋震荡混匀。将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(5)重复上一步。
(6)向离心管加入100μl 1×磁珠洗脱缓冲液，涡旋震荡混匀。将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(7)取杂交后的文库样品15μl，加入到磁珠离心管中，用移液器吹打混匀，于PCR仪47℃孵育45分钟。每间隔15分钟涡旋震荡3秒，使磁珠处于悬浮状态。
(8)孵育结束后，向离心管中加入100μl 47℃预热的1×洗脱缓冲液I，涡旋震荡混匀。
(9)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(10)从磁力架上取下离心管，加入200μl 47℃预热的1×洗脱缓冲液IV，用移液器吹打混匀。于恒温金属浴仪47℃孵育5分钟。
(11)重复一次(9)-(10)的步骤。
(12)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(13)从磁力架上取下离心管，每个离心管中分别依次加入200μl未加热的1×洗脱缓冲液I，涡旋震荡2分钟。将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(14)从磁力架上取下离心管，每个离心管中分别依次加入200μl 1×洗脱缓冲液II，涡旋震荡1分钟。将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(15)从磁力架上取下离心管，每个离心管中分别依次加入200μl 1×洗脱缓冲液III，涡旋震荡30秒。将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(16)从磁力架上取下离心管，加入40μl水，用移液器吹打混匀。将混匀后的液体标记为“1”。
7.捕获样本富集及纯化
(1)按下表14要求配制混合液6
表14
| 组分 | 加入量(μl) |
| 2×HiFi热启动酶缓冲液 | 50 |
| Post-PCR引物 | 10 |
| 合计 | 60 |
(2)将混合液6与“1”混合，涡旋震荡混匀。按50μl/管分装量分装到两个新的PCR管中，按以下表15反应程序扩增：
表15
注：扩增后的产物可于2～8℃保存，但不超过72小时。
(3)将100μl扩增产物转移至新的1.5ml离心管中，加入180μl纯化磁珠，涡旋震荡混匀。室温静置15分钟。
(4)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器吸去上清。
(5)向离心管中加入200μl 80％乙醇，室温静置30秒，用移液器吸去上清。
(6)重复上一步，室温静置3～5分钟至乙醇完全挥发。
注：避免磁珠过干。
(7)乙醇完全挥发后，从磁力架上取下离心管，分别加入52μl水。用移液器吹打混匀，室温静置2分钟。
(8)将离心管置于磁力架上使磁珠进行磁力收集，至溶液上清澄清后，用移液器转移50μl上清于新的离心管中。此时捕获的文库样品处于上清中。
注：纯化后的文库溶液应在-20℃以下保存7天。
8.上机测序
使用Illumina公司生产的NextSeq 500测序仪及相关配套试剂进行上机测序。
生物信息学分析推荐使用臻和(北京)科技有限公司的基因突变分析软件V1.0。
对阴性参考品进行NGS测序，结果如表16：
表16
样品NGS检测结果如表17：
表17
结果表明：采用本发明的试剂盒能够以DNA为模板，既可以检测到断点位置在内含子区域的融合突变也可以检测到断点位置在内含子区域的融合突变。
本申请的上述试剂盒中的引物及探针的具体序列均见下表18。
表18：
对比例1
采用康为世纪公司生产的建库试剂盒(CW2585T)和罗氏公司生产的捕获试剂盒(07145594001)作为对比试剂盒，并按照其说明书进行操作，得到以下结果(表19)：
表19
经过测序发现，断点位置均在外显子上的融合突变可以被检测到，但是断点位置在内含子上的突变无法被检测到。
从以上的描述中，可以看出，本发明上述的实施例实现了如下技术效果：应用本发明的技术方案，捕获探针覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，这样就可以在DNA水平上检测到断点在外显子和内含子上的多种已知融合和未知融合，对断点位置进行准确定位；探针通过叠瓦式设计获得，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合，从而大大提高了捕获探针覆盖度和捕获效率。
以上所述仅为本发明的优选实施例而已，并不用于限制本发明，对于本领域的技术人员来说，本发明可以有各种更改和变化。凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。
SEQUENCE LISTING
<110> 臻悦生物科技江苏有限公司
<120> 肺癌临床用药突变基因检测试剂盒
<130> PN73758ZHKEJ
<160> 329
<170> PatentIn version 3.5
<210> 1
<211> 58
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头1-48第一链
<400> 1
aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct tccgatct 58
<210> 2
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头1-48第一链
<400> 2
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaacgtga tatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 3
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头2第二链
<400> 3
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaaacatc gatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 4
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头3第二链
<400> 4
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacatgccta aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 5
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头4第二链
<400> 5
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagtggtc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 6
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头5第二链
<400> 6
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaccactg tatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 7
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头6第二链
<400> 7
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacattgg catctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 8
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头7第二链
<400> 8
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccagatct gatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 9
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头8第二链
<400> 9
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccatcaag tatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 10
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头9第二链
<400> 10
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccgctgat catctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 11
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头10第二链
<400> 11
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacaagct aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 12
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头11第二链
<400> 12
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacctgtagc catctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 13
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头12第二链
<400> 13
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagtacaa gatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 14
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头13第二链
<400> 14
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaacaacc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 15
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头14第二链
<400> 15
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaaccgag aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 16
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头15第二链
<400> 16
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaacgctt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 17
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头16第二链
<400> 17
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaagacgg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 18
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头17第二链
<400> 18
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacaaggtac aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 19
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头18第二链
<400> 19
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacacaga aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 20
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头19第二链
<400> 20
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacagcag aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 21
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头20第二链
<400> 21
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacctcca aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 22
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头21第二链
<400> 22
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacgctcg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 23
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头22第二链
<400> 23
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacacgtatc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 24
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头23第二链
<400> 24
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacactatgc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 25
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头24第二链
<400> 25
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagagtca aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 26
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头25第二链
<400> 26
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagatcgc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 27
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头26第二链
<400> 27
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagcagga aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 28
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头27第二链
<400> 28
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacagtcact aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 29
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头28第二链
<400> 29
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacatcctgt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 30
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头29第二链
<400> 30
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacattgagg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 31
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头30第二链
<400> 31
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccaaccac aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 32
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头31第二链
<400> 32
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacgactagt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 33
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头32第二链
<400> 33
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccaatgga aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 34
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头33第二链
<400> 34
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccacttcg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 35
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头34第二链
<400> 35
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccagcgtt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 36
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头35第二链
<400> 36
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccatacca aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 37
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头36第二链
<400> 37
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacccagttc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 38
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头37第二链
<400> 38
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacccgaagt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 39
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头38第二链
<400> 39
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacccgtgag aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 40
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头39第二链
<400> 40
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccctcctg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 41
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头40第二链
<400> 41
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccgaactt aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 42
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头41第二链
<400> 42
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccgactgg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 43
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头42第二链
<400> 43
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccgcatac aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 44
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头43第二链
<400> 44
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacctcaatg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 45
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头44第二链
<400> 45
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacctgagcc aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 46
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头45第二链
<400> 46
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacctggcat aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 47
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头46第二链
<400> 47
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacgaatctg aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 48
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头47第二链
<400> 48
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt caccaagact aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 49
<211> 65
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 接头48第二链
<400> 49
gatcggaaga gcacacgtct gaactccagt cacgagctga aatctcgtat gccgtcttct 60
gcttg 65
<210> 50
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pre-PCR引物正向
<400> 50
aatgatacgg cgaccaccga ga 22
<210> 51
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Pre-PCR引物反向
<400> 51
caagcagaag acggcatacg ag 22
<210> 52
<211> 58
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交通用引物
<400> 52
aatgatacgg cgaccaccga gatctacact ctttccctac acgacgctct tccgatct 58
<210> 53
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物1
<400> 53
caagcagaag acggcatacg agatatcacg ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 54
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物2
<400> 54
caagcagaag acggcatacg agatcgatgt ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 55
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物3
<400> 55
caagcagaag acggcatacg agatttaggc atgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 56
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物4
<400> 56
caagcagaag acggcatacg agattgacca ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 57
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物5
<400> 57
caagcagaag acggcatacg agatacagtg gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 58
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物6
<400> 58
caagcagaag acggcatacg agatgccaat gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 59
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物7
<400> 59
caagcagaag acggcatacg agatcagatc tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 60
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物8
<400> 60
caagcagaag acggcatacg agatacttga tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 61
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物9
<400> 61
caagcagaag acggcatacg agatgatcag cggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 62
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物10
<400> 62
caagcagaag acggcatacg agattagctt gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 63
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物11
<400> 63
caagcagaag acggcatacg agatggctac aggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 64
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物12
<400> 64
caagcagaag acggcatacg agatcttgta ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 65
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物13
<400> 65
caagcagaag acggcatacg agattggttg ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 66
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物14
<400> 66
caagcagaag acggcatacg agattctcgg ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 67
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物15
<400> 67
caagcagaag acggcatacg agattaagcg ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 68
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物16
<400> 68
caagcagaag acggcatacg agattccgtc ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 69
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物17
<400> 69
caagcagaag acggcatacg agattgtacc ttgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 70
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物18
<400> 70
caagcagaag acggcatacg agatttctgt gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 71
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物19
<400> 71
caagcagaag acggcatacg agattctgct gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 72
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物20
<400> 72
caagcagaag acggcatacg agatttggag gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 73
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物21
<400> 73
caagcagaag acggcatacg agattcgagc gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 74
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物22
<400> 74
caagcagaag acggcatacg agattgatac gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 75
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物23
<400> 75
caagcagaag acggcatacg agattgcata gtgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 76
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物24
<400> 76
caagcagaag acggcatacg agatttgact ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 77
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物25
<400> 77
caagcagaag acggcatacg agattgcgat ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 78
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物26
<400> 78
caagcagaag acggcatacg agatttcctg ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 79
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物27
<400> 79
caagcagaag acggcatacg agattagtga ctgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 80
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物28
<400> 80
caagcagaag acggcatacg agattacagg atgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 81
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物29
<400> 81
caagcagaag acggcatacg agattcctca atgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 82
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物30
<400> 82
caagcagaag acggcatacg agattgtggt tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 83
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物31
<400> 83
caagcagaag acggcatacg agattactag tcgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 84
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物32
<400> 84
caagcagaag acggcatacg agatttccat tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 85
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物33
<400> 85
caagcagaag acggcatacg agattcgaag tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 86
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物34
<400> 86
caagcagaag acggcatacg agattaacgc tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 87
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物35
<400> 87
caagcagaag acggcatacg agatttggta tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 88
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物36
<400> 88
caagcagaag acggcatacg agattgaact gggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 89
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物37
<400> 89
caagcagaag acggcatacg agattacttc gggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 90
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物38
<400> 90
caagcagaag acggcatacg agattctcac gggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 91
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物39
<400> 91
caagcagaag acggcatacg agattcagga gggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 92
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物40
<400> 92
caagcagaag acggcatacg agattaagtt cggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 93
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物41
<400> 93
caagcagaag acggcatacg agattccagt cggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 94
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物42
<400> 94
caagcagaag acggcatacg agattgtatg cggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 95
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物43
<400> 95
caagcagaag acggcatacg agattcattg aggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 96
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物44
<400> 96
caagcagaag acggcatacg agattggctc aggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 97
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物45
<400> 97
caagcagaag acggcatacg agattatgcc aggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 98
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物46
<400> 98
caagcagaag acggcatacg agattcagat tcgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 99
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物47
<400> 99
caagcagaag acggcatacg agattagtct tggtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 100
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> 杂交Index引物48
<400> 100
caagcagaag acggcatacg agatttcagc tcgtgactgg agttcagacg tgtgctcttc 60
cgatct 66
<210> 101
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Post-PCR引物正向
<400> 101
aatgatacgg cgaccaccga ga 22
<210> 102
<211> 22
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> Post-PCR引物反向
<400> 102
caagcagaag acggcatacg ag 22
<210> 103
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 103
tgtttgaaga gtgggaggat gcagggtgaa ggaacaaaag taaccagggg ctcacagtgg 60
gtcgggaacc agggc 75
<210> 104
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 104
cacagtgggt cgggaaccag ggcagagaga cagagacagg aggcacgtgt gggcagctag 60
tagatttcct gcctt 75
<210> 105
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 105
gggcagctag tagatttcct gccttatcgg ggcagcactg ggaagaggca tggggaagca 60
agattccttg ggtgc 75
<210> 106
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 106
acagccagct ggccttggat ggagacttct gtttactcag tgcccaccta atccccctcg 60
atcacgttgt gattg 75
<210> 107
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 107
tggcaggaca gttcttcagc aacagctcta ttatgtccaa ccctttgttg gggctggtga 60
tcggggtgct ggtga 75
<210> 108
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 108
ctggtgatcg gggtgctggt gaccgtcttg gtgcagagct ccagcacctc aacgtccatc 60
gttgtcagca tggtg 75
<210> 109
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 109
tccatcgttg tcagcatggt gtcctcttca tgtgagtcgg ggcacccatg agcccacctg 60
cattccagac actct 75
<210> 110
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 110
ccacctgcat tccagacact ctcctgtcta tctgagggtg ggaaggacgg gggaggaatt 60
cactctgaat atgtc 75
<210> 111
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 111
aggaattcac tctgaatatg tccaggcctt gccaccattg tcttggtatc ttgccccagc 60
tacaatgtgt ttccc 75
<210> 112
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 112
agctacaatg tgtttccctc ttgatccaag gcaacttcct gtttccattt cgatggcagg 60
atctggaaat agacc 75
<210> 113
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 113
ctggaaatag accctgctgc tggagttctc agctctgaat tctctagtac tgtactttcc 60
agacctgtag ccact 75
<210> 114
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 114
aatataacat tcagttcctc agttgtacta gttacatttc aagtgttaaa gagccacatg 60
tggctggctg gcagc 75
<210> 115
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 115
tgtggctggc tggcagctac cctattgaga agtagagaca tagaacattt ccttcactgc 60
agaaagttag ttctc 75
<210> 116
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 116
tggctggctg gcagctaccc tattgagaag tagagacata gaacatttcc ttcactgcag 60
aaagttagtt ctctg 75
<210> 117
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 117
aacatttcct tcactgcaga aagttagttc tctgggacag ggccactctc agtgctaaga 60
agaaagacaa cttaa 75
<210> 118
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 118
gtgggaggat gcagggtgaa ggaacaaaag taaccagggg ctcacagtgg gtcgggaacc 60
agggcagaga gacag 75
<210> 119
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 119
gagacagaga caggaggcac gtgtgggcag ctagtagatt tcctgcctta tcggggcagc 60
actgggaaga ggcat 75
<210> 120
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 120
atggggaagc aagattcctt gggtgcctgc agcgatggag gctggactct gcaacccaca 60
gccagctggc cttgg 75
<210> 121
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 121
ccttggatgg agacttctgt ttactcagtg cccacctaat ccccctcgat cacgttgtga 60
ttgtttttgt ttgtt 75
<210> 122
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 122
tttgtttgtt tgtttttccc aggaaaaatg gcaggacagt tcttcagcaa cagctctatt 60
atgtccaacc ctttg 75
<210> 123
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 123
cctttgttgg ggctggtgat cggggtgctg gtgaccgtct tggtgcagag ctccagcacc 60
tcaacgtcca tcgtt 75
<210> 124
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 124
cgttgtcagc atggtgtcct cttcatgtga gtcggggcac ccatgagccc acctgcattc 60
cagacactct cctgt 75
<210> 125
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 125
ctcctgtcta tctgagggtg ggaaggacgg gggaggaatt cactctgaat atgtccaggc 60
cttgccacca ttgtc 75
<210> 126
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 126
tgtcttggta tcttgcccca gctacaatgt gtttccctct tgatccaagg caacttcctg 60
tttccatttc gatgg 75
<210> 127
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 127
cgatggcagg atctggaaat agaccctgct gctggagttc tcagctctga attctctagt 60
actgtacttt ccaga 75
<210> 128
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 128
gttgtactag ttacatttca agtgttaaag agccacatgt ggctggctgg cagctaccct 60
attgagaagt agaga 75
<210> 129
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 129
tctgatatcc agcacagaaa tgatgcttcc tggctgggcc tagtggctca cgcctataat 60
cccagcactc tggga 75
<210> 130
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 130
agcctgacca acacggtgaa accccgtctc tactaaaaat acaaaaatta gctggatgtg 60
gtggtgcatg cctcc 75
<210> 131
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 131
tggtggtgca tgcctccagt ctcagctact caggaggctg aggcaagaga atcactttaa 60
cctgggaggt agagg 75
<210> 132
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 132
aatcacttta acctgggagg tagaggttgc agtgagctga gatcgagcca ctgctctcca 60
gcctgggaga cagag 75
<210> 133
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 133
actgatgctt ccttaaaggc gagcctgtgt gccatgcaca actgactcaa ctgtacatgc 60
aagccctgca ctcat 75
<210> 134
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 134
aagccctgca ctcatccacc taagtcctta atcagtgggt gcctcctggt ctccttcagg 60
ctagccttgg atctg 75
<210> 135
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 135
cctcctggtc tccttcaggc tagccttgga tctgcaatag ggaggaagga ggaagctaga 60
aaggcacttt cttca 75
<210> 136
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 136
cctcctggtc tccttcaggc tagccttgga tctgcaatag ggaggaagga ggaagctaga 60
aaggcacttt cttca 75
<210> 137
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 137
tgccatgcac aactgactca actgtacatg caagccctgc actcatccac ctaagtcctt 60
aatcagtggg tgcct 75
<210> 138
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 138
ttcctggctg ggcctagtgg ctcacgccta taatcccagc actctgggag gctgaggtgg 60
gaggctcacc tgagg 75
<210> 139
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 139
cctgaggttg ggaatctgag accagcctga ccaacacggt gaaaccccgt ctctactaaa 60
aatacaaaaa ttagc 75
<210> 140
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 140
tagctggatg tggtggtgca tgcctccagt ctcagctact caggaggctg aggcaagaga 60
atcactttaa cctgg 75
<210> 141
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 141
tgggaggtag aggttgcagt gagctgagat cgagccactg ctctccagcc tgggagacag 60
agcgagatcc atctc 75
<210> 142
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 142
gttggaaaaa gttacactgc ctagaattaa atgtctgata tccagcacag aaatgatgct 60
tcctggctgg gccta 75
<210> 143
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 143
cctagtggct cacgcctata atcccagcac tctgggaggc tgaggtggga ggctcacctg 60
aggttgggaa tctga 75
<210> 144
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 144
acaactgact caactgtaca tgcaagccct gcactcatcc acctaagtcc ttaatcagtg 60
ggtgcctcct ggtct 75
<210> 145
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 145
atgcacaact gactcaactg tacatgcaag ccctgcactc atccacctaa gtccttaatc 60
agtgggtgcc tcctg 75
<210> 146
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 146
aggataaaaa ctacttcttt agaggatacc agcataggta actttagcct gcctccaggc 60
tgcctttcta agctt 75
<210> 147
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 147
ggtaacttta gcctgcctcc aggctgcctt tctaagcttg ctaatggtac ttttccatcc 60
tctagtgctc actgt 75
<210> 148
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 148
taggtaactt tagcctgcct ccaggctgcc tttctaagct tgctaatggt acttttccat 60
cctctagtgc tcact 75
<210> 149
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 149
ccagcatagg taactttagc ctgcctccag gctgcctttc taagcttgct aatggtactt 60
ttccatcctc tagtg 75
<210> 150
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 150
ccttttacct cgttgcactg ctaggagcaa gatgggtcac cagcagctgt actggagcca 60
cccaaaaaaa ttcgg 75
<210> 151
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 151
ttacctcgtt gcactgctag gagcaagatg ggtcaccagc agctgtactg gagccaccca 60
aaaaaattcg gccag 75
<210> 152
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 152
ctcgttgcac tgctaggagc aagatgggtc accagcagct gtactggagc cacccaaaaa 60
aattcggcca gggtt 75
<210> 153
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 153
actgctagga gcaagatggg tcaccagcag ctgtactgga gccacccaaa aaaattcggc 60
cagggttctc gttct 75
<210> 154
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 154
ctaggagcaa gatgggtcac cagcagctgt actggagcca cccaaaaaaa ttcggccagg 60
gttctcgttc ttgtc 75
<210> 155
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 155
agcaagatgg gtcaccagca gctgtactgg agccacccaa aaaaattcgg ccagggttct 60
cgttcttgtc gtgtc 75
<210> 156
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 156
agatgggtca ccagcagctg tactggagcc acccaaaaaa attcggccag ggttctcgtt 60
cttgtcgtgt ctatt 75
<210> 157
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 157
tgggtcacca gcagctgtac tggagccacc caaaaaaatt cggccagggt tctcgttctt 60
gtcgtgtcta ttcaa 75
<210> 158
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 158
tcaccagcag ctgtactgga gccacccaaa aaaattcggc cagggttctc gttcttgtcg 60
tgtctattca aacca 75
<210> 159
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 159
agcagctgta ctggagccac ccaaaaaaat tcggccaggg ttctcgttct tgtcgtgtct 60
attcaaacca gcacg 75
<210> 160
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 160
agctgtactg gagccaccca aaaaaattcg gccagggttc tcgttcttgt cgtgtctatt 60
caaaccagca cggtc 75
<210> 161
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 161
tactggagcc acccaaaaaa attcggccag ggttctcgtt cttgtcgtgt ctattcaaac 60
cagcacggtc tgatc 75
<210> 162
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 162
agccacccaa aaaaattcgg ccagggttct cgttcttgtc gtgtctattc aaaccagcac 60
ggtctgatcc ggaaa 75
<210> 163
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 163
acccaaaaaa attcggccag ggttctcgtt cttgtcgtgt ctattcaaac cagcacggtc 60
tgatccggaa atatg 75
<210> 164
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 164
tcggccaggg ttctcgttct tgtcgtgtct attcaaacca gcacggtctg atccggaaat 60
atggcctcaa taagt 75
<210> 165
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 165
ccagggttct cgttcttgtc gtgtctattc aaaccagcac ggtctgatcc ggaaatatgg 60
cctcaataag tgccg 75
<210> 166
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 166
ttctcgttct tgtcgtgtct attcaaacca gcacggtctg atccggaaat atggcctcaa 60
taagtgccgc caatg 75
<210> 167
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 167
tcgttcttgt cgtgtctatt caaaccagca cggtctgatc cggaaatatg gcctcaataa 60
gtgccgccaa tgttt 75
<210> 168
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 168
cttgtcgtgt ctattcaaac cagcacggtc tgatccggaa atatggcctc aataagtgcc 60
gccaatgttt ctgtc 75
<210> 169
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 169
aggtctcttc cttcactgaa tgtcactacc caccacttac catctgaccc tccagctgca 60
taatttgtgg agcct 75
<210> 170
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 170
cactacccac cacttaccat ctgaccctcc agctgcataa tttgtggagc ctcttgttca 60
aaaacctgga gaaaa 75
<210> 171
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 171
tgtaagttaa acccgggcag gggctgtggc cgtctttgta ctctggtgat ttttaaaaat 60
tgaatctttg tactt 75
<210> 172
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 172
accactttgt atattttgta ataccacctc tgtggccatg cctgccccgc ccactctgta 60
tatatgtaag ttaaa 75
<210> 173
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 173
cactctgtat atatgtaagt taaacccggg caggggctgt ggccgtcttt gtactctggt 60
gatttttaaa aattg 75
<210> 174
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 174
ctcgctgtgt tgctcaggct ggtctcaaac tcctgagatc aagcaatccg cccacctcag 60
cctcccaaag tgctg 75
<210> 175
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 175
cgcccacctc agcctcccaa agtgctgaga tcacaggcgt gagccaccac caggcctgat 60
tgtaattttt ttttt 75
<210> 176
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 176
ctccttggat ctattttata aaaatgtgag gtctcctttt acctcgttgc actgctagga 60
gcaagatggg tcacc 75
<210> 177
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 177
aggagcaaga tgggtcacca gcagctgtac tggagccacc caaaaaaatt cggccagggt 60
tctcgttctt gtcgt 75
<210> 178
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 178
agggttctcg ttcttgtcgt gtctattcaa accagcacgg tctgatccgg aaatatggcc 60
tcaataagtg ccgcc 75
<210> 179
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 179
cctcaataag tgccgccaat gtttctgtca gtacgcgaag gatatcggtt tcattaagtt 60
ggactaaatg atctt 75
<210> 180
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 180
aaaatgtgag gtctcttcct tcactgaatg tcactaccca ccacttacca tctgaccctc 60
cagctgcata atttg 75
<210> 181
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 181
aggctgaggc gggtggatcg gaaggtcagg agatcgagac catcctggct aacacagtga 60
aaccccgtct ctact 75
<210> 182
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 182
tctaatccca gcactttggg agggaggctg aggcgggtgg atcggaaggt caggagatcg 60
agaccatcct ggcta 75
<210> 183
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 183
taccttcttg ctgcattcaa agaaagttct ggtttgaatg gaaagtatgg cctttcagtg 60
ctgtgcgttc tgcca 75
<210> 184
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 184
agtgccatta ccttcttgct gcattcaaag aaagttctgg tttgaatgga aagtatggcc 60
tttcagtgct gtgcg 75
<210> 185
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 185
ttcagcctaa gtgagaaaag acagggtagg gtttcttagt tgttccttgc ttgttttctt 60
ggagtgccat tacct 75
<210> 186
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 186
ctctctgcct tcctgatgag tttaaggaag aactgaaagg aaaaagagca atgggccaca 60
ctttccatat cagca 75
<210> 187
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 187
tacaggcgtg agccacccca cctagcctga cttcactttt tgtgcacatt ctgccaatgc 60
tctctgcctt cctga 75
<210> 188
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 188
tggccaggct ggtctggaac tcctgacctc aagtgatcca cctgccttgg cctcccaaag 60
tactgggatt acagg 75
<210> 189
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 189
agcagctggg attacagacg catgccacca cacccagata atttttgtgt ttttagtcga 60
gacggggttt cacca 75
<210> 190
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 190
caggctagag tgcagtggtg tgatttctgc tcactgcaac ctctgcctcc aggattcaag 60
cgattctcct gcctc 75
<210> 191
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 191
ctctgtcacc caggctagag tgcagtggtg tgatttctgc tcactgcaac ctctgcctcc 60
aggattcaag cgatt 75
<210> 192
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 192
attcaagcga ttctcctgcc tcagcctccc aagcagctgg gattacagac gcatgccacc 60
acacccagat aattt 75
<210> 193
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 193
accacaccca gataattttt gtgtttttag tcgagacggg gtttcaccat gttggccagg 60
ctggtctgga actcc 75
<210> 194
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 194
ctggtctgga actcctgacc tcaagtgatc cacctgcctt ggcctcccaa agtactggga 60
ttacaggcgt gagcc 75
<210> 195
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 195
attacaggcg tgagccaccc cacctagcct gacttcactt tttgtgcaca ttctgccaat 60
gctctctgcc ttcct 75
<210> 196
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 196
tgctctctgc cttcctgatg agtttaagga agaactgaaa ggaaaaagag caatgggcca 60
cactttccat atcag 75
<210> 197
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 197
cactttccat atcagcattt ttcagcctaa gtgagaaaag acagggtagg gtttcttagt 60
tgttccttgc ttgtt 75
<210> 198
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 198
tggtttgaat ggaaagtatg gcctttcagt gctgtgcgtt ctgccaacaa ctgcgctagt 60
caaaataata acatg 75
<210> 199
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 199
aaataataac atgttggttg ggtgcggtgg ctcatgcctc taatcccagc actttgggag 60
ggaggctgag gcggg 75
<210> 200
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 200
agggaggctg aggcgggtgg atcggaaggt caggagatcg agaccatcct ggctaacaca 60
gtgaaacccc gtctc 75
<210> 201
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 201
aggagatcga gaccatcctg gctaacacag tgaaaccccg tctctactaa aaatacaaaa 60
aattagccgg gcatg 75
<210> 202
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 202
gtcacacctc tttgtaggcc agctgtgctg aggaatgaat ccgtattgca gagcacagtg 60
aatttgggct tggaa 75
<210> 203
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 203
caggttgctg ggttccactc gtagctctgt catttactgt ctcaatagca acttcctcat 60
ctggaatatg ggaca 75
<210> 204
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 204
tgtaagtgct tggcatatgg ctctgcctca aaatataggg gatgagcatg catggcagat 60
gtacaagaca cactt 75
<210> 205
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 205
cttggcatat ggctctgcct caaaatatag gggatgagca tgcatggcag atgtacaaga 60
cacacttccc acgct 75
<210> 206
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 206
gcatttttct tcctctgagt atttccaaag tgacatgcca agtcaagaag gctgctatca 60
acccaagaaa ccgag 75
<210> 207
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 207
aggactaagc tggtcacacc tctttgtagg ccagctgtgc tgaggaatga atccgtattg 60
cagagcacag tgaat 75
<210> 208
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 208
ttgcagagca cagtgaattt gggcttggaa tcactcaggt tgctgggttc cactcgtagc 60
tctgtcattt actgt 75
<210> 209
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 209
ctctgtcatt tactgtctca atagcaactt cctcatctgg aatatgggac agtaacactt 60
ggcttcctgt gatta 75
<210> 210
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 210
tactgtaagt gcttggcata tggctctgcc tcaaaatata ggggatgagc atgcatggca 60
gatgtacaag acaca 75
<210> 211
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 211
cagatgtaca agacacactt cccacgcttg tttgcatttt tcttcctctg agtatttcca 60
aagtgacatg ccaag 75
<210> 212
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> SLC34A2探针
<400> 212
tctgagtatt tccaaagtga catgccaagt caagaaggct gctatcaacc caagaaaccg 60
aggccaggac tggcc 75
<210> 213
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 213
tgtcccaggg agatgtgagt tttatctata agtccctgac tggggctgct gcctttcttt 60
cagagatccc ctccc 75
<210> 214
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 214
tgcctttctt tcagagatcc cctccccaga gaggaggaat ctagagaggc agtctggcta 60
cagcaacttt gccac 75
<210> 215
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 215
tctggctaca gcaactttgc cactttgaat ttccctggca gctttgttta caccgtgagg 60
tgaaaaccac cttct 75
<210> 216
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 216
cgtgaggtga aaaccacctt ctcaagcctc agtaatgggg gacgcccctc ccccaaccaa 60
ggtccagtgt cccag 75
<210> 217
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 217
ctcagtaatg ggggacgccc ctcccccaac caaggtccag tgtcccaggt cgatttcaga 60
ctgctgtgcc agcaa 75
<210> 218
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 218
actgctgtgc cagcaagtga taatttcaag ccagtgaatc ttagcttgct gggttttgta 60
ggggtgggat cagct 75
<210> 219
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 219
tgtaggggtg ggatcagctg agctagacca cttggctccc tggcttcagc cccctttcca 60
gggaagcaaa tggtt 75
<210> 220
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 220
agcaaatggt tctgtctcac tggagttcca ggagccactg gtgtatgaaa aaaaaaaaaa 60
gaaactcctg cagct 75
<210> 221
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 221
agctagctca gtgtctgtcc aaacagctgc ccagttttgt gcttgaaccc cagggccctg 60
gtggtgtagg gattc 75
<210> 222
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 222
tgtagggatt cctgagggaa tctcccggtc tgcaggttgc gaagactgtg ggaagagcat 60
aacatctggg ccaga 75
<210> 223
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 223
ctgggccaga atgcactgtc tttcatggca cagtccctca tggcttccct tggcttgggg 60
agggatttcc ctaac 75
<210> 224
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 224
tggcttgggg agggatttcc ctaacccttt gtacttcctt ggtgaggtga tgccccaccc 60
tcctttggct tgtcc 75
<210> 225
<211> 71
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 225
cagggagatg tgagttttat ctataagtcc ctgactgggg ctgctgcctt tctttcagag 60
atcccctccc c 71
<210> 226
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 226
tgaggtgaaa accaccttct caagcctcag taatggggga cgcccctccc ccaaccaagg 60
tccagtgtcc ca 72
<210> 227
<211> 73
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 227
aggggtggga tcagctgagc tagaccactt ggctccctgg cttcagcccc ctttccaggg 60
aagcaaatgg ttc 73
<210> 228
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 228
cttggctccc tggcttcagc cccctttcca gggaagcaaa tggttctgtc tcactggagt 60
tccaggagcc actggtg 77
<210> 229
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 229
gatttcagac tgctgtgcca gcaagtgata atttcaagcc agtgaatctt agcttgctgg 60
gttttgtagg ggtg 74
<210> 230
<211> 80
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 230
gaaactcctg cagctagctc agtgtctgtc caaacagctg cccagttttg tgcttgaacc 60
ccagggccct ggtggtgtag 80
<210> 231
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 231
tgtgcttgaa ccccagggcc ctggtggtgt agggattcct gagggaatct cccggtctgc 60
aggttgcgaa gactgt 76
<210> 232
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 232
cggtctgcag gttgcgaaga ctgtgggaag agcataacat ctgggccaga atgcactgtc 60
tttcatggca cagt 74
<210> 233
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 233
gtctttcatg gcacagtccc tcatggcttc ccttggcttg gggagggatt tccctaaccc 60
tttgtacttc cttgg 75
<210> 234
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 234
ggcttgggga gggatttccc taaccctttg tacttccttg gtgaggtgat gccccaccct 60
cctttggctt gtcctct 77
<210> 235
<211> 71
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 235
tttatctata agtccctgac tggggctgct gcctttcttt cagagatccc ctccccagag 60
aggaggaatc t 71
<210> 236
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 236
tggggttgct cttctcaagg agtatcttag tggtgttctt tatgtttcct gaatttgaat 60
gttgacctgt cttgc 75
<210> 237
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 237
ttgacctgtc ttgctaggtt tgggtagttc tcctagataa tatgctgaag tgtgttttcc 60
aacttggttc cattc 75
<210> 238
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 238
ctgtgtatgc ttcatgaagt tcttgtgctg tgttttcagc tccatcaggt catttatgtt 60
cttctctaag ctggt 75
<210> 239
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 239
ttccttgcat tcggttagaa catgctcctt tagcttggag gagtttgtta ttacccacct 60
tctgaggctt acttc 75
<210> 240
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 240
cttacttctg tcaatccatc caactcattc tccatccagt tttgtttcct tgttggcaag 60
gagttgggat ccttt 75
<210> 241
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 241
tgggatcctt tggaggagaa gaggcattct ggtttttgga gtttgcaggc tttttgcact 60
ggtttttctt catct 75
<210> 242
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 242
tcaggcttct ctgctgcagg tctgctggag tttgctagag gtccactcca gacgctgttt 60
gcctgggtat cacca 75
<210> 243
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 243
accagcaggg actgcagaac agcaaagatt gctggctgtt ccttcctctg gtagcttcat 60
cccagagggg caccc 75
<210> 244
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 244
ctcaaggagt atcttagtgg tgttctttat gtttcctgaa tttgaatgtt gacctgtctt 60
gctaggtttg gg 72
<210> 245
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 245
cctgaatttg aatgttgacc tgtcttgcta ggtttgggta gttctcctag ataatatgct 60
gaagtgtgtt ttcc 74
<210> 246
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 246
cctgtcttgc taggtttggg tagttctcct agataatatg ctgaagtgtg ttttccaact 60
tggttccatt ctccc 75
<210> 247
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 247
gctgaagtgt gttttccaac ttggttccat tctccccatc actttcatgt atatcaatca 60
attgtaggtt tggtc 75
<210> 248
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 248
ctttcttcca cttgatcgat tcagctattg atactgtgta tgcttcatga agttcttgtg 60
ctgtgttttc agctcc 76
<210> 249
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 249
gatactgtgt atgcttcatg aagttcttgt gctgtgtttt cagctccatc aggtcattta 60
tgttcttctc taagctgg 78
<210> 250
<211> 79
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 250
ttcaaggttc ttagcttcct tgcattcggt tagaacatgc tcctttagct tggaggagtt 60
tgttattacc caccttctg 79
<210> 251
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 251
ggttagaaca tgctccttta gcttggagga gtttgttatt acccaccttc tgaggcttac 60
ttctgtcaat ccatcc 76
<210> 252
<211> 79
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 252
tctgaggctt acttctgtca atccatccaa ctcattctcc atccagtttt gtttccttgt 60
tggcaaggag ttgggatcc 79
<210> 253
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 253
ctcattctcc atccagtttt gtttccttgt tggcaaggag ttgggatcct ttggaggaga 60
agaggcattc tggt 74
<210> 254
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 254
cctttggagg agaagaggca ttctggtttt tggagtttgc aggctttttg cactggtttt 60
tcttcatctt catggat 77
<210> 255
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 255
gttgatgttg atgctattcc tttttgtttg ttagttttcc ttctaatggt caggcttctc 60
tgctgcaggt ctgctgg 77
<210> 256
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 256
gctattcctt tttgtttgtt agttttcctt ctaatggtca ggcttctctg ctgcaggtct 60
gctggagttt gctag 75
<210> 257
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 257
agttttcctt ctaatggtca ggcttctctg ctgcaggtct gctggagttt gctagaggtc 60
cactccagac gctgt 75
<210> 258
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 258
tctgctggag tttgctagag gtccactcca gacgctgttt gcctgggtat caccagcagg 60
gactgcagaa cagcaaa 77
<210> 259
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 259
cactccagac gctgtttgcc tgggtatcac cagcagggac tgcagaacag caaagattgc 60
tggctgttcc ttcct 75
<210> 260
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 260
agaacagcaa agattgctgg ctgttccttc ctctggtagc ttcatcccag aggggcaccc 60
gccagatgcc ggccaga 77
<210> 261
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 261
gaggtgtctc ccagtcagga agcatggggt cagggaccca cttggggaga cagtctgtcc 60
catagcagaa cttg 74
<210> 262
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 262
gaagcatggg gtcagggacc cacttgggga gacagtctgt cccatagcag aacttgagca 60
ctgtgctggg agat 74
<210> 263
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 263
gacagtctgt cccatagcag aacttgagca ctgtgctggg agatctgctg ctctcttcag 60
agatggcagg caggaacg 78
<210> 264
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 264
caggaagcat ggggtcaggg acccacttgg ggagacagtc tgtcccatag cagaacttga 60
gcactgtgct gggag 75
<210> 265
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 265
tcttcaccct tttctgactt gtagggtttc tgcagagaga tccactctta gtctgatggg 60
cttccctttg taggt 75
<210> 266
<211> 79
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 266
ctgggttgaa aattctttaa cgatgttgaa tattggtctt cacccttttc tgacttgtag 60
ggtttctgca gagagatcc 79
<210> 267
<211> 79
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 267
cttcaccctt ttctgacttg tagggtttct gcagagagat ccactcttag tctgatgggc 60
ttccctttgt aggtaaccc 79
<210> 268
<211> 78
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 268
cccttttctg acttgtaggg tttctgcaga gagatccact cttagtctga tgggcttccc 60
tttgtaggta accctatt 78
<210> 269
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 269
cagagagatc cactcttagt ctgatgggct tccctttgta ggtaacccta tttttatctc 60
tggctgccct taacat 76
<210> 270
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 270
tccactctta gtctgatggg cttccctttg taggtaaccc tatttttatc tctggctgcc 60
cttaacattt tttcc 75
<210> 271
<211> 73
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 271
tatacctgtg ttctgaaggg ttgtgcctag gttttcttct aaggttttta tggttttaag 60
tcttaagttt aag 73
<210> 272
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 272
taagtcttaa gtttaagtct ttaatccatc ttcagttaat ttttgtataa gttgtaagga 60
aggggtccag tt 72
<210> 273
<211> 71
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 273
gtctttaatc catcttcagt taatttttgt ataagttgta aggaaggggt ccagtttcag 60
ttttctgtat a 71
<210> 274
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 274
gggttgtgcc taggttttct tctaaggttt ttatggtttt aagtcttaag tttaagtctt 60
taatccatct tcagtt 76
<210> 275
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 275
atgggattgc taggtcaaat ggtatttctg attctagatc cttcaggaat tgccacactg 60
tcttccacaa aggtt 75
<210> 276
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 276
ctgattctag atccttcagg aattgccaca ctgtcttcca caaaggttga attaatttac 60
actcacagca ac 72
<210> 277
<211> 70
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 277
ggaattgcca cactgtcttc cacaaaggtt gaattaattt acactcacag caacagtgta 60
aaagtgttcc 70
<210> 278
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 278
ccacaaaggt tgaattaatt tacactcaca gcaacagtgt aaaagtgttc ctatttctcc 60
acatcctctc cagc 74
<210> 279
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 279
gcaacagtgt aaaagtgttc ctatttctcc acatcctctc cagcatctgt tgtttccttt 60
ttaatgatca cc 72
<210> 280
<211> 77
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 280
ccacatcctc tccagcatct gttgtttcct ttttaatgat caccattcta actggcatga 60
gatagtacct catggcg 77
<210> 281
<211> 73
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 281
ctaactggca tgagatagta cctcatggcg gttttgatgt gcatttctct aatgaccagt 60
gatgatgagc ttt 73
<210> 282
<211> 76
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 282
cctcatggcg gttttgatgt gcatttctct aatgaccagt gatgatgagc ttttttttca 60
tatgattatt ggccgc 76
<210> 283
<211> 74
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 283
gattattggc cgcataaatg tcttcttttg agaagtgtct gttcatatcc tttgcccact 60
ttttgacagg gctg 74
<210> 284
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 284
acagcaacag tgtaaaagtg ttcctatttc tccacatcct ctccagcatc tgttgtttcc 60
tttttaatga tcacc 75
<210> 285
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 285
aatgatggtt tccagcttta cccatgtccc tgtgaaggac atgaactcat ccttttttac 60
ggctgcatag tatcc 75
<210> 286
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 286
agtatcccat ggtgtacatg tgccacattt tctttatcta gtctatcatt gatgggcatt 60
tgggttggtt ccaag 75
<210> 287
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 287
catggtgtac atgtgccaca ttttctttat ctagtctatc attgatgggc atttgggttg 60
gttccaagtc tccga 75
<210> 288
<211> 70
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 288
cggctgcata gtatcccatg gtgtacatgt gccacatttt ctttatctag tctatcattg 60
atgggcattt 70
<210> 289
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 289
tgaaaatgat ggtttccagc tttacccatg tccctgtgaa ggacatgaac tcatcctttt 60
ttacggctgc atagt 75
<210> 290
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 290
tacggctgca tagtatccca tggtgtacat gtgccacatt ttctttatct agtctatcat 60
tgatgggcat ttggg 75
<210> 291
<211> 72
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 291
tgtattatac tttaagttct gggatacatg tgcagaacgt gcaggttaca taggtataca 60
tgtgccatgg tg 72
<210> 292
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 292
tgggatacat gtgcagaacg tgcaggttac ataggtatac atgtgccatg gtgatttact 60
gcacccatca accca 75
<210> 293
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 293
cagaacgtgc aggttacata ggtatacatg tgccatggtg atttactgca cccatcaacc 60
catcacctac attag 75
<210> 294
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 294
tgcaggttac ataggtatac atgtgccatg gtgatttact gcacccatca acccatcacc 60
tacattagat atttc 75
<210> 295
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 295
ggcttccttg ctcatcagct tgcagacagc ctatcatggg actttacctt gtgatcctgt 60
gagtcaataa tcctt 75
<210> 296
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 296
agcttgcaga cagcctatca tgggacttta ccttgtgatc ctgtgagtca ataatcctta 60
ataaactcct cttta 75
<210> 297
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 297
tcagcttgca gacagcctat catgggactt taccttgtga tcctgtgagt caataatcct 60
taataaactc ctctt 75
<210> 298
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 298
ttccttgctc atcagcttgc agacagccta tcatgggact ttaccttgtg atcctgtgag 60
tcaataatcc ttaat 75
<210> 299
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 299
tcttccagcc ttcatctttc tcctgtgctg gacgcttcct gcccttgaac gtcagaactc 60
caggctcttc agctt 75
<210> 300
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 300
gcttcctgcc cttgaacgtc agaactccag gctcttcagc ttttggactc ttggacttac 60
actagtggtt tgcca 75
<210> 301
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 301
cttcaatctg ggtgggcacc atctagtcag ctgccagcac agctagaata aagcaggcag 60
aggaaagtgg aaagc 75
<210> 302
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 302
acctaacttc aatctgggtg ggcaccatct agtcagctgc cagcacagct agaataaagc 60
aggcagagga aagtg 75
<210> 303
<211> 70
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 303
gttagtctgt ttttattgct tgcaaccaaa agcctgtagt gtatgccaat agcaccagca 60
tcacatacaa 70
<210> 304
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 304
tctcttccat gatgtatttc tgcctggggc cctggagcag ctttgatccc tgtcctttca 60
agatcctcat ctttt 75
<210> 305
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 305
atgatgtatt tctgcctggg gccctggagc agctttgatc cctgtccttt caagatcctc 60
atcttttcct ttgat 75
<210> 306
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 306
cctggggccc tggagcagct ttgatccctg tcctttcaag atcctcatct tttcctttga 60
ttctgtgagc tatcc 75
<210> 307
<211> 66
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 307
atgctctctc tttttccctg cgtgcacaga taagagactg ggaggggagg cctcaccgga 60
aaccaa 66
<210> 308
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 308
cagttaaggc tattttcact tcttttgtgg atcttcactt gcttcaggcc atctggatgt 60
atacgtgcag gtcac 75
<210> 309
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 309
aggtcacagg ggatatgatg gcttagcttg ggctcagagg cctgacaccc aggagttcaa 60
ggctgcagtg agcca 75
<210> 310
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 310
aggcctgaca cccaggagtt caaggctgca gtgagccaag atcatgccac tgcactctag 60
cctgggtgac agagc 75
<210> 311
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 311
tgtcatcagt taaggctatt ttcacttctt ttgtggatct tcacttgctt caggccatct 60
ggatgtatac gtgca 75
<210> 312
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 312
atctggatgt atacgtgcag gtcacagggg atatgatggc ttagcttggg ctcagaggcc 60
tgacacccag gagtt 75
<210> 313
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 313
gacacccagg agttcaaggc tgcagtgagc caagatcatg ccactgcact ctagcctggg 60
tgacagagca agatc 75
<210> 314
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 314
agggacccac aacgctgctg ttaagagttt gagtgtgagt caatacaaca tttggaggaa 60
gtaatctttg taaaa 75
<210> 315
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 315
acacatccat gtgaagagac caccaaacag gctttgtgtg agcaacaagg ctatttattt 60
cacctgggtg catgt 75
<210> 316
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 316
tgtaatccca gctacttggg agactgaatc aggagaatag tttaaaccca gtgtctcaca 60
catccatgtg aagag 75
<210> 317
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 317
aaaaataaaa ataaattggc tgggtaaggt gctgagagtt tgtaatccca gctacttggg 60
agactgaatc aggag 75
<210> 318
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 318
attggctggg taaggtgctg agagtttgta atcccagcta cttgggagac tgaatcagga 60
gaatagttta aaccc 75
<210> 319
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 319
cccagcactt tgtgagactg aggtgggagg atctcttaag gccaaaagtt caggaccagc 60
ctaggcaacc tagca 75
<210> 320
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 320
tgagactgag gtgggaggat ctcttaaggc caaaagttca ggaccagcct aggcaaccta 60
gcaagctcct atttc 75
<210> 321
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 321
agcactttgt gagactgagg tgggaggatc tcttaaggcc aaaagttcag gaccagccta 60
ggcaacctag caagc 75
<210> 322
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 322
tgtaatccca gcactttgtg agactgaggt gggaggatct cttaaggcca aaagttcagg 60
accagcctag gcaac 75
<210> 323
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 323
tggctcacac ctgtaatccc agcactttgt gagactgagg tgggaggatc tcttaaggcc 60
aaaagttcag gacca 75
<210> 324
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 324
taaagactgc gcatagatgc tgatgactgc ccataaaaag ggacccacaa cgctgctgtt 60
aagagtttga gtgtg 75
<210> 325
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 325
tctttgtaaa attatcggtt gggattaatt acaattgaaa ataggctgag cacggtggct 60
cacacctgta atccc 75
<210> 326
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 326
acggtggctc acacctgtaa tcccagcact ttgtgagact gaggtgggag gatctcttaa 60
ggccaaaagt tcagg 75
<210> 327
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 327
aggtgctgag agtttgtaat cccagctact tgggagactg aatcaggaga atagtttaaa 60
cccagtgtct cacac 75
<210> 328
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 328
aatagtttaa acccagtgtc tcacacatcc atgtgaagag accaccaaac aggctttgtg 60
tgagcaacaa ggcta 75
<210> 329
<211> 75
<212> DNA
<213> Artificial Sequence
<220>
<223> ROS1探针
<400> 329
catgtgaaga gaccaccaaa caggctttgt gtgagcaaca aggctattta tttcacctgg 60
gtgcatgtgg gctga 75
Claims (10)
1.一种肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，包括：肺癌临床用药突变基因捕获探针，所述捕获探针通过叠瓦式设计获得，覆盖待检测基因的外显子区域和内含子区域，且探针密度能够确保每条待检测区域的DNA模板都有对应探针与之结合。
2.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒用于检测ROS1-SLC34A2融合断裂点，所述捕获探针覆盖区域如表1所示：
表1
3.根据权利要求2所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述捕获探针的序列包括SLC34A2探针序列和ROS1探针序列，其中，所述SLC34A2探针序列具体包括SEQID NO:103至SEQ ID NO:212的110条探针，所述ROS1探针序列具体包括SEQ ID NO:213至SEQ ID NO:227的329条探针。
4.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述捕获探针为探针混合物，所述探针混合物的浓度为20～30ng/μl，优选为25ng/μl。
5.根据权利要求1所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括文库构建相关试剂，所述文库构建相关试剂包括2×HiFi热启动酶缓冲液，所述2×HiFi热启动酶缓冲液包括：850～950mM Tris-HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸。
6.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述2×HiFi热启动酶缓冲液包括：900mM Tris-HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸。
7.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述文库构建相关试剂还包括：末端修复加A反应体系、接头连接体系以及文库富集引物；
优选地，所述末端修复加A反应体系包括末端修复加A反应缓冲液以及末端修复加A酶，更优选地，所述末端修复加A反应缓冲液包括400～600mM Tris～HCl、80～120mM MgCl2、80～120mM DTT、8～10nM ATP、3～5mM dATP、3～5mM dCTP、3～5mM dGTP、3～5mM dTTP；所述末端修复加A酶的浓度为0.04～0.06U/μl；
优选地，所述接头连接体系包括双链寡核苷酸接头、DNA连接酶以及DNA连接酶缓冲液；更优选地，所述双链寡核苷酸接头包括48对，所述DNA连接酶的浓度为0.04～0.06U/μl；所述DNA连接酶缓冲液包括800～900mM的Tris～HCl、40～60mM的MgCl2、40～60mM的DTT及0.5～1.5mM的ATP；
优选地，所述文库富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
8.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因检测试剂盒还包括：肺癌临床用药突变基因捕获试剂，所述肺癌临床用药突变基因捕获试剂包括：杂交通用引物和杂交index引物；
优选地，所述杂交通用引物的浓度为225～275μM，更优选为250μM；
优选地，所述杂交index引物1-48的浓度为22.5～27.5μM，更优选为25μM；
优选地，所述杂交index引物为48个。
9.根据权利要求8所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×杂交缓冲液、杂交组分A以及胎盘DNA，所述2×杂交缓冲液为2M的四甲基氯化铵缓冲液，所述杂交组分A为100％的甲酰胺；
优选地，所述肺癌临床用药突变基因捕获试剂还包括2×HiFi热启动酶缓冲液和捕获样本富集引物；
更优选，捕获样本富集缓冲液包括：850～950mM Tris～HCl、3.5～5.5mM MgCl2、0.04U/ul高保真热启动酶和0.5～0.7mM双脱氧核糖核酸；进一步优选，所述捕获样本富集缓冲液包括900mM Tris～HCl、5mM MgCl2、0.04U/μl高保真热启动酶和0.6mM双脱氧核糖核酸；
更优选地，所述捕获样本富集引物的浓度为3～6μM，进一步优选为5μM。
10.根据权利要求5所述的肺癌临床用药突变基因检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒还包括阳性对照品和阴性对照品，其中，所述阴性对照品为正常细胞BEAS-2B培养提取的细胞系DNA并进行超声打断后的片段化DNA；所述阳性对照品为多种肿瘤细胞系DNA混合后超声打断的片段化DNA，所有检测位点均为阳性。
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