CN111534582A - 一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用 - Google Patents

一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用 Download PDF

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CN111534582A CN202010320714.6A CN202010320714A CN111534582A CN 111534582 A CN111534582 A CN 111534582A CN 202010320714 A CN202010320714 A CN 202010320714A CN 111534582 A CN111534582 A CN 111534582A
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虞斌
郭方
杨宇奇
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    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
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    • C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
    • C12Q2600/16—Primer sets for multiplex assays

Abstract

本发明公开了一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用，属于分子生物学和临床检验学技术领域。本发明通过设计针对13个已报道致病基因(DUOX2，TG，TPO，TSHR，TTF1，TTF2，PAX8，NKX2‑5，GNAS，THRA，TSHB，IYD和SLC5A5)外显子扩增的PCR引物，利用设计的引物序列对目标片段扩增，实现对目标区域的富集，大大提高测序深度，其检测极限低至0.1％，从而识别罕见变异，可为先天性甲低相关基因的研究提供经济高效的发现。

Description

一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用
技术领域
本发明属于分子生物学和临床检验学技术领域，具体涉及一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用。
背景技术
先天性甲状腺功能减低症(简称先天性甲低)是最常见的新生儿内分泌疾病，临床表现为甲状腺功能部分或完全丧失导致的生长发育落后和智力发育迟缓，常需要终生进行药物替代治疗。研究发现，约有80％～85％的CH患者与甲状腺发育异常密切相关，是先天性甲低的主要致病机理和病理类型，另有10％～15％由甲状腺激素分泌缺陷引起的。越来越多研究发现CH是一种遗传代谢性疾病，遗传缺陷是导致其发生的重要原因，包括基因突变、拷贝数变异以及表观遗传机制。
由于导致先天性甲减的原因较多，使得筛选其致病基因变的极为困难。以往的研究主要采用连锁分析(Linkage analysis)对先天性甲减家系进行分型，筛选在家系中与疾病产生共分离遗传标记，进而在候选基因组区域内对所含基因进行Sanger测序，筛查与疾病共分离的突变位点。尽管连锁分析在实际研究中已经证实可靠有效，但在对于复杂疾病的研究中，却存在很大的局限性。首先，连锁分析更适用于单基因疾病的遗传研究，而在目前已知的疾病当中，复杂疾病占了绝大多数；其次，连锁分析对于致病性高、数量少的遗传变异具有较好的适用性，但对于中效甚至弱效的突变则显得力不从心；最后，通过连锁分析在染色体上的定位通常是cM级别，这其中可能包含了成百上千的基因，要精细定位出突变位点仍很困难。因此连锁分析只能提供部分参考性意见。其次Sanger测序，成本昂贵，通量过低，手工操作时间长，临床应用尚不广泛。
由于先天性甲减绝大多数为散发性病例，家族性遗传性病例相对较少，因此对于先天性甲减这样的复杂性疾病，采用连锁分析筛查新的致病基因显然不太合适，故急需一种可对尽可能多的基因进行分析的高通量测序分析技术。目前已经得到广泛应用的第二代测序技术(Next generation sequencing，NGS)可同时对一个物种基因组中全部外显子区域进行测序(whole exome-seq，WES)，直接发现与蛋白质功能变异相关的遗传突变，故可以用于发现新的先天性甲减致病因素及研究已知致病因素在人群中频谱分布。但是WES产生数据大，给分析带来不便，其次成本较高，因此需要开发一种权衡成本和效益的检测方法。本发明的主要目的在于克服现有先天性甲低检测技术的不足，开发一种可对先天性甲低多种致病基因进行快速、全面检测的基因检测包，且可降低费用，适用于临床应用。
发明内容
本发明的目的是克服现有CH检测技术的不足，提供一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物，可对导致先天性甲状腺功能减低症的多基因进行快速、全面的检测，且适用于临床患者基因突变检测及疾病分类。
为了实现上述发明目的，本发明采用以下技术方案：
一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物，包括有用于扩增如下13个基因的引物对：DUOX2、TG、TPO、TSHR、TTF1、TTF2、PAX8、NKX2-5、GNAS、THRA、TSHB、IYD和SLC5A5。
具体地：
所述DUOX2基因的引物序列如SEQ ID No：1-SEQ ID No：108所示。
所述TG基因的引物序列如SEQ ID No：109-SEQ ID No：282所示。
所述TPO基因的引物序列如SEQ ID No：283-SEQ ID No：340所示。
所述TSHR基因的引物序列如SEQ ID No：341-SEQ ID No：386所示。
所述TTF1基因的引物序列如SEQ ID No：387-SEQ ID No：428所示。
所述TTF2基因的引物序列如SEQ ID No：429-SEQ ID No：502所示。
所述PAX8基因的引物序列如SEQ ID No：503-SEQ ID No：538所示。
所述NKX2-5基因的引物序列如SEQ ID No：539-SEQ ID No：556所示。
所述GNAS基因的引物序列如SEQ ID No：557-SEQ ID No：630所示。
所述THRA基因的引物序列如SEQ ID No：631-SEQ ID No：668所示。
所述TSHB基因的引物序列如SEQ ID No：669-SEQ ID No：676所示。
所述IYD基因的引物序列如SEQ ID No：677-SEQ ID No：698所示。
所述SLC5A5基因的引物序列如SEQ ID No：699-SEQ ID No：738所示。
上述检测引物在制备先天性甲状腺功能减低症检测试剂盒中的应用。
有益效果：
1、本发明可同时对13种先天性甲低致病基因进行全面，快速的检测。
2、对检测的样本类型没限制，适用血液、唾液、足跟血干血斑，且DNA样本仅需1ng起始量。
3、仅关注需检测的基因序列，生成更小、更容易管理的数据集，有效降低测序成本和数据分析的负荷，极大的加快了分析的速度。
4、通过设计的引物序列对目标片段扩增，实现对目标区域的富集，从而大大提高测序深度。测序深度的提高意味着更高的灵敏度，其检测极限低至0.1％，从而识别罕见变异，可为先天性甲低相关基因的研究提供经济高效的发现。
5、与Sanger测序相比，本发明具有通量高，成本低的优点；与全基因组测序等范围更广的方法相比，本发明仅针对先天性甲低相关致病基因左检测，具有准确度高，特异度好，成本低的优点，因此本发明是一种更加经济高效的方法。
附图说明
图1为实施例1中CH各致病基因异常检出率。
图2为实施例1中69例突变检出CH患者突变特征的分布，其中A为69例CH患者发生突变位点数目的分布图，B为69例CH患者发生突变基因数目的分布图。
具体实施方式
以下实施例进一步说明本发明的内容，但不应理解为对本发明的限制。在不背离本发明精神和实质的情况下，对本发明方法、步骤或条件所作的修改或替换，均属于本发明的范围。实施例中未注明具体条件的实验方法及未说明配方的试剂均为按照本领域常规条件。
实施例1
PCR扩增引物设计
利用IonAmpliSeq Designer设计针对13个已报道致病基因(DUOX2，TG，TPO，TSHR，TTF1，TTF2，PAX8，NKX2-5，GNAS，THRA，TSHB，IYD和SLC5A5)外显子扩增的PCR引物。
设计的富集引物371条，覆盖度为99.62％，累积靶向检测序列长度为45930bp，包括369条扩增子，扩增子平均大小为258bp，最大为275bp，最小为136bp。
扩增子测序是使用高度特异的寡核苷酸库将目标区域扩增并纯化，并用于后续测序，属于靶向测序的一种方法，是检测特定基因集或基因组区域内已知和新型变异的快速简便、经济实惠的方法。扩增子捕获测序技术是一种目标区域高通量测序技术，利用特异性引物来对感兴趣的DNA区域进行PCR扩增，形成高度富集的DNA库，将PCR产物纯化后再进行文库构建和高通量测序。
基于扩增子测序实现靶向重测序技术直接从样品中对感兴趣的基因组区域进行分离测序。这种方式能够更加高效且经济地发挥NGS技术的优势，后续的分析速度也会有跨越性的提升。比如外显子组仅占基因组的1％左右，但却包含了绝大部分的已知致病突变，将外显子区域分离出来后单独进行测序，后续的分析就能降低99％的工作量，极大的加快了分析的速度。通过扩增子测序实现靶向重测序所能达到的灵敏度也是全基因组测序完全无法实现的。由于靶向重测序在测序前就对基因的目标区域进行了分离与富集，目标区域的大幅减少可实现5000×甚至更高的测序深度。测序深度的提高意味着更高的灵敏度(能够检测低频率的变异)，其检测极限低至0.1％。
实施例2
采用扩增子测序对13个已报道致病基因同时进行突变检测
1、选取常州市新生儿疾病筛查中心明确确诊为CH患儿共106例，收集外周血。
先天性甲低患儿筛查如下：
(1)按照新生儿疾病筛查技术规范(2010版)，在新生儿出生72h后、充分哺乳6次后足跟采集4个血斑(滤纸片Schleicher&Schuell 903)。低出生体重者待体重增至2500g或出生20d后采血。血片采集后悬空平置，自然干燥成深褐色，置于封口塑料袋内，置4℃冰箱保存备检。
(2)足跟血TSH水平测定采用配套新生儿促甲状腺素试剂盒，基于PerkinElmer公司AutoDELFIA 1235自动免疫测定平台，采用时间分辨荧光免疫法检测。
(3)足跟血TSH大于或等于9.0mIU/L但小于20.0mIU/L的新生儿召回采取足跟血进行复查，足跟血复查TSH仍大于或等于9.0mIU/L的新生儿需要抽取外周血，进行确诊。
(4)足跟血TSH大于或等于20.0mIU/L的新生儿抽血外周血，进行确诊。
先天性甲低患儿的确诊如下：
抽取需要复查的新生儿的外周血，离心获得血清，基于Cobas e601平台，采用电化学发光法测定血清TSH和FT4的水平。若TSH增高，FT4降低者，则诊断为先天性甲状腺功能减低症。
2、提取患者样本外周血基因组DNA，利用NanoDrop 2000微量紫外分光光度计进行定量，并通过1％琼脂糖凝胶电泳进行质量检测。
提取患者样本外周血基因组DNA采用QIAamp DNA Blood Mini Kit提取，具体步骤如下：
(1)吸取20μL蛋白酶K至1.5mL离心管的底部。
(2)加入200μL外周血，充分混匀。如果样品体积不足200μl，使用PBS补足。
(3)加入200μL Buffer AL至样品中，涡旋振荡15s，充分混匀，56℃孵育10min。
(4)快速离心，去除残留在1.5mL离心管盖子中的液滴。
(5)加入200μL(样品等体积)的乙醇(96-100％)，涡旋振荡15s混匀。振荡完毕后，快速离心，去除残留在1.5mL离心管盖子中的液滴。
(6)得到的混合物转移至QIAamp Mini离心管柱，6000g离心1min。将QIAamp Min离心柱放入一个新的干净2mL接收管中，将滤液连同使用过的收集管丢弃。
(7)打开QIAamp Mini离心柱，加入500μL Buffer AW1。盖紧盖子，6000g离心1min。将QIAamp Mini离心柱转移至一个新的2mL收集管中，将滤液连同使用过的收集管丢弃。
(8)弃滤液，打开QIAamp Mini离心柱，加入500μLBuffer AW2(注意不要将边缘环弄湿)。盖紧盖子，最大转速(20000g；14000rpm)离心3min。
(9)将QIAamp Mini离心柱转移到一个新的2mL收集管，12000rpm离心1min。
(10)将QIAamp Mini离心柱转移到一个新的1.5mL收集管。小心打开离心柱，加入100μLBuffer AE或双蒸水。
(11)室温(15-25℃)孵育1min，然后6000g，离心1min。
(12)将获得的基因组DNA(gDNA)进行浓度及质量测定。
3、对先天性甲减患者外周血DNA进行扩增子富集，构建测序文库，在NGS测序平台上进行高通量测序。具体过程如下：
扩增基因组DNA的目标区域，具体步骤如下：
(1)准备1个离心管，将以下组分加入离心管内，用移液枪吹打充分混匀(mastermix)。
成分 体积
5X Ion AmpliSeq <sup>TM</sup> HiFi Mix 5μL
gDNA 5μL
Nuclease-free Water 2.5μL
总体积 12.5μL
(2)分别吸取5μL master mix至两个PCR管，PCR管1中加入5μL引物池1引物，PCR管2加入5μL引物池2。
(3)将PCR管置于PCR仪内，运行以下程序以扩增基因组目标区域。
阶段 温度 时间
酶活化 99℃ 2分钟
变性 99℃ 15秒
退火/延伸 60℃ 4分钟
-- 10℃ --
(4)将上一步扩增好的离心管2内的液体全部转移至PCR管1，总体积约为20μL。
构建测序文库，具体步骤如下：
(1)上述体系加入2μL FuPa Reagent，总体系达到22μL。
(2)充分振荡混匀，轻度离心将液体收集到管底。
(3)将PCR管放入PCR仪，按以下程序运行。
温度 时间
50℃ 10分钟
55℃ 10分钟
60℃ 20分钟
10℃ --
(4)分别按顺序加入4μL Switch溶液和2μL接头混合物。
(5)加入2μL DNA连接酶，充分振荡混匀，轻度离心将液体收集到管底。
(6)将PCR管放入PCR仪，按以下程序运行，加入接头。
温度 时间
22℃ 30分钟
68℃ 5分钟
72℃ 5分钟
10℃ --
(7)将加完接头的文库转移至1.5mL离心管内，加入45μL(1.5x样本体积)的
Figure BDA0002461296910000061
Figure BDA0002461296910000062
XP试剂，用枪吹打5次使DNA与磁珠悬浮液充分混匀。
(8)将混合液置于室温5分钟。
(9)将1.5mL离心管置于DynaMagTM-96Side Magnet磁力架上，静置2分钟或者等溶液变清澈。小心地吸走并弃掉上清，不要扰动磁珠。
(10)向离心管中加入150μL新鲜配制的70％乙醇，在磁力上来回移动1.5mL离心管来洗涤磁珠，然后小心地弃去上清，不要扰动磁珠。
(11)重复第10步，进行第二次洗涤。
(12)确保乙醇液滴已全部从孔中吸走。将1.5mL离心管放置于磁力架上，室温空气干燥5分钟。
(13)将1.5mL离心管从磁力架上拿开，在每管中加入50μL Low TE充分浸润磁珠。充分振荡混匀，轻度离心将液体收集到管底。
(14)将1.5mL离心管置于磁力架上2分钟。
(15)将1.5mL EP管从磁力架上取下，加50μL
Figure BDA0002461296910000063
PCR SuperMix HighFidelity和2μL of Library Amplification Primer Mix。
Figure BDA0002461296910000064
PCR SuperMix HighFidelity和Library Amplification Primer Mix需要事先混合好。充分漩涡震荡后简单离心。
(16)将1.5mL EP管放在磁力架上至少2分钟，将上清约50μL转移到一个干净的200μL PCR内。
(17)运行以下PCR程序，对文库进行扩增。
温度 时间
98℃ 2分钟
98℃ 15秒
64℃ 1分钟
10℃ --
对扩增后的文库进行纯化，具体步骤如下：
第一轮纯化
(1)加入25μL(0.5X的样品体积)
Figure BDA0002461296910000071
XP Reagent到每个样品管中，用移液枪吹吸5次。
(2)室温下静置5分钟。
(3)将样品管放在磁力架上至少5分钟，直至溶液变澄清。
(4)小心的将上清移入另一个干净的PCR管中。
第二轮纯化
(1)在第一轮纯化取到的上清中加入60μL
Figure BDA0002461296910000072
XP Reagent，用枪头反复吹吸5次。
(2)室温下静置5分钟。
(3)将样品管放在磁力架上至少3分钟，直至溶液变澄清，将上清吸除。
(4)加入150μL新鲜配置的70％的酒精，缓慢旋转两圈，将上清吸除。
(5)重复步骤4。
(6)保酒精完全被移除，打开管盖，常温干燥5分钟。
(7)将样品管从磁力架上取下，加入50μL Low TE，充分漩涡震荡，简单离心，或将移液枪调至40μL吹吸5次。
(8)将样品管放入磁力架后，静置两分钟，将上清转移到新的1.5mL离心管。
Qubit定量
(1)制备
Figure BDA0002461296910000073
dsDNA HS reagent稀释液：1μL
Figure BDA0002461296910000074
dsDNA HS reagent加199μL
Figure BDA0002461296910000075
dsDNA HS Buffer。
(2)在10μL的amplified Ion AmpliSeqTM library中加入190μL的dye reagent，混合充分后静置2分钟。
(3)1μL样品中加入199μL dye reagent进行测样。
高通量测序及数据分析，具体步骤如下：
反应液相准备及上机
(1)按照如下表格顺序室温配置体系，试剂来自Ion PGM Template OT2200 Kit。
Figure BDA0002461296910000081
(2)将上述体系涡旋震荡5s，稍离心；
(3)将Ion PGMTM Template OT2 200 Ion SphereTM Particles最大速漩涡混匀1min，上下吸打5次后，吸取100μL，加入第1步配好的液相体系中，上下吸打混匀，室温放置备用；
(4)将Ion PGM OneTouchTM Plus Reaction Filter置于15mL离心管上，将配制好的液相体系漩涡混匀5s，短暂离心2s；用1000μL移液器将所有的液相缓慢从距离另外两个孔较远的样品孔注入reaction filter；
(5)用1000μL移液器从此孔缓慢加入1000μL Ion OneTouchTM Reaction Oil，更换一个新的1000μL Universal Fit Filter Tip移液头，再缓慢加入500μL Ion OneTouchTMReaction Oil；
(6)将加样孔置于左侧，顺时针倒转reaction filter，避免管内导管接触反应液相；
(7)将reaction filter插入Ion OneTouchTM相应位置；
(8)选择Protocol模式，制备反应模板ISP。
(9)准备芯片上样，基于Ion Torrent测序技术平台开始测序。
数据分析
(1)基于Torrent Suite对测序数据进行过滤和筛选，参数包括Total addresswells>60％，Live ISP>90％，Live Library>90％，Polyclonal<50％。Primer Dimer<10％，Low Quality<20％。
(2)采用比对软件TMAP(Torrent Mapper)将测得的各条序列(reads)，定位到基因组上，与人类参考基因组序列(hg19)进行比对(Alignment)，得到reads在基因组上的位置，进行比对并输出标准的BAM比对格式。
(3)采用覆盖度分析插件(Coverage Analysis Plug-in)对扩增子测序结果的捕获率和均一性等方面进行评估分析，主要包括扩增子测序的特异性、平均测序深度和扩增子测序的均一性。
(4)基于Torrent Variant Caller，采用GATK Genotyper和GATK read walker，对SNP，indel进行检测，然后合并SNP与indel的结果作为variant call的输出
(5)通过Ion Reporter Uploader将数据转入Ion Reporter，对结果进行注释，利用dbSNP、千人基因组数据库、HGMD等数据库，过滤人群中存在的多态性位点。
(6)利用PolyPhen-2、SIFT和MutationTaster对突变进行预测分析，挑选可能损害(damaging)蛋白功能的变异。
(7)对候选致病突变参照ACMG(American College ofMedical Genetics andGenomics)制定的标准进行评分，评价突变的临床意义。
结果证明，在选取的109例中，有69例(65％)检测出132个突变，涉及83个不同的突变位点，以杂合突变为主。69.70％(92/132)突变与甲状腺素合成障碍有关，包括DUOX2(n＝49)，TG(n＝35)和TPO(n＝8)；21.21％(28/132)突变与甲状腺发育不良有关，包括TSHR(n＝19)，TTF1(n＝5)，TTF2(n＝1)，PAX8(n＝2)和NKX2-5(n＝1)；9.09％(12/132)突变与甲状腺素抵抗有关，突变均发生在GNAS基因，如图1所示。通过对突变频率前10位的突变位点进行总结，发现前10位突变位点共检出出现47次，占总检出突变的35.60％，如表1。
表1 69例CH患儿中突变频率前10的突变位点
Figure BDA0002461296910000101
在69例突变检出的CH患者中，有40.58％的患者为单位点突变，有59.42％的患者为多位点突变。根据发生突变的基因数目统计，有56.52％的患者检测出单个基因突变，有43.48％的患者同时检测出多个基因的突变，如图2所示。该结果提示，多位点或多基因突变在常州地区CH人群中具有较高的频率。根据发生突变的基因在甲状腺发育或甲状腺激素合成中的作用机制，对CH患者的病理类型进行基因学分类。发明人发现57.97％的CH患者为甲状腺激素合成障碍，占绝对优势，见表2。该结果提示中国人群CH的病例类型可能以甲状腺激素合成障碍为主，该结果与西方人群CH患者以甲状腺发育不良为主的观点不一致，提示中国CH人群遗传变异复杂多样，和其他人群存在差异。
表2 CH患者根据突变基因的病理类型分类
Figure BDA0002461296910000102
注：TDH:thyroid dyshormonogenesis，甲状腺激素合成障碍；TD:thyroiddysgenesis，甲状腺发育不良；TR:thyrotropin resistance，甲状腺激素抵抗
由以上结果可知，本发明通过设计的引物序列对目标片段扩增，实现对目标区域的富集，大大提高测序深度，其检测极限低至0.1％，从而识别罕见变异，可为先天性甲低相关基因的研究提供经济高效的发现。
序列表
<110> 常州市妇幼保健院
<120> 一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物及其应用
<130> 20200418
<160> 738
<170> SIPOSequenceListing 1.0
<210> 1
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 1
ccctccagga atgaccaaga atgta 25
<210> 2
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 2
ttgggagaat attgacccag acaat 25
<210> 3
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 3
tgggcttgaa gccttagtca ttcca 25
<210> 4
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 4
tatgagaact tctgagcctg tcctc 25
<210> 5
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 5
ggcacttcca gaaagtgctg aaccg 25
<210> 6
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 6
gatgaggtca gctgttaaag gggga 25
<210> 7
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 7
cccattctct gtctcttggg ctatg 25
<210> 8
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 8
ttcgagccct tcttcaactc cctgc 25
<210> 9
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 9
ccagatctac ttcatctggg tgaca 25
<210> 10
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 10
atggattggc agcgtaaggc aggat 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 11
aacttggagg gaggttggtg gtata 25
<210> 12
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 12
acatcatcca agaggtggag gagaa 25
<210> 13
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 13
ctctcttggc agctgtacct tgatg 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 14
cgaattgtga cccgcatcaa gtggt 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 15
gcccttccct atcctgagac tagaa 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 16
tcaggagtgg cataaatttg aggtg 25
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<211> 25
<212> DNA
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gaggccccaa ggctttgagt acaag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aggatctctg cccttcccta tcctg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acaggtgcct atcagtcctc aggta 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctcagggaga tctactcatc cccaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 21
cctgagttgt actaactggc cgtgt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 22
atcttcagac atggggagac agttc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaaagaggga gaattggatc caaga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggcaatcatc tatggaggtg acaag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 25
cccaagctga agtcctgaga ctact 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aaagagggag aattggatcc aagat 25
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<212> DNA
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ggaaaggagt catgctgtgt tgtga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aatactcact tgtctatact ggcca 25
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tatacctcca tctctcctcc ctatg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gaaaaagaaa taggcaggcc gggcg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcgtctcctt catgttctct tatat 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cttatacctc catctctcct cccta 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtggaaagc cctctgatcc taaga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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taaccttcct gcgagagact ttcct 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agcagtacaa gcgcttcgtg gagaa 25
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tgatcctaag agtctgcatg ggaga 25
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<212> DNA
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cctttcatgg agtggcatta aggga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtgcttactg taagagttcc aggct 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctattaattc attttgtgcc ttgcc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccaaagagac atggagagaa gtctt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 41
gcctcttgtt cttttctcta ggtat 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctcatggtag cacaaacatt ccagc 25
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tctaatcctg agacttcctg gtgtg 25
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aggctatcca agaatccagg ggtct 25
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ctgacctgcg agctgagcag ggccg 25
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aactaagctt ccgctctatg gcctg 25
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<400> 59
ctcccctcaa cccaagatcc attga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcttcttcag acaccttttt gctca 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 61
aggtcaacct catcctgtcc aacaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgactccatt atcacaagcg aggcc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctcacagagg aattgacctg aaggc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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actgttcctt ctgatccact tcagt 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gccttccctt aggtgagctc ttagg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 69
cacatagcgg gatcctcaga ctttg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 70
gctatttggt accgtttgag accag 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 71
agcccctctg ggtctctttt ctcac 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agtggccaga gaaggatcaa gattg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 73
acaaccagga cctatcccag ctaga 25
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ccagaccctc tgtctagcct tagac 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcccatagtc tagtcttctc tcctc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gttccaaacc ctttacatat gttga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggtactaaag tggtccaggc tgaga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgctcaatcc tagtgaaccc ccact 25
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ggaaaagcaa caatcccagt tcttg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggacacctgt gcggagaatc ctgag 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctaagaaagg tgcagaatga gctgc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acccttcctg gtctcatctc cacac 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 88
aatcctgagg ggaaggagac aggtg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tggttccttg tggggacagg cctca 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ctcgcactcc tggagcgacg cgctg 25
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tcggggcaga gagagggaac cggga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgcaggccaa ccaggtgacg ggctg 25
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atcacgctac cgctcgtctc ctccc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcccagcaac ccccgggacc tggtg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcctcgcact cctggagcga cgcgc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gagaccccgt gttcgacccc gacca 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 98
tctcgacccg ggctcacccg ccgcg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 99
cttttggctc ctgaggacac ttgga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 100
acggagtccc agcaaccccc gggac 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 101
agccaattac gccgacggtg tgtat 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 102
ctacgcagca cttcgagact gcctt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 103
acccttgagg gaaggttctg tcagt 25
<210> 104
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 104
caaccgcacc gtactggggg tcttc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 105
gaggggtagc tgggagcgta gtgct 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 106
ctacacagcg caatcttatg cgctc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 107
ggcatagagg acgccctaac agtgg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 108
gagactggaa ggtcatttcg ccgtg 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 109
tgacatgtgg gaatttgtga agatt 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 110
gagcttttat agagctgccg ttggc 25
<210> 111
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 111
atgcttttta tggcatcttg gacct 25
<210> 112
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 112
ttccagggtc atcatcatta cctat 25
<210> 113
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 113
gctcattcct ggaagtgagt tgtcc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 114
ttccattctt gcaagttttg gttcg 25
<210> 115
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 115
ctcagtgaaa ctcacatcgc tttgg 25
<210> 116
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 116
atagaactgc agggaaattt ccagg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 117
cctaaatgtg ttggatcgca gtgag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 118
atctgctgtt tctgtagctg acaaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 119
ttgtagctgt ggaccagatc aaaaa 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 120
tatttctgca gtcgagcagc atatg 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 121
ctcttaattc cttatcatgc tgcac 25
<210> 122
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 122
tttcttattt cacagctcct tggac 25
<210> 123
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 123
agtcactcta gctgtgcttt acaag 25
<210> 124
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 124
agtcatcaca agcttttcct gtaga 25
<210> 125
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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accatagcaa ctttgaaacc caaga 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gatggtctca ttcagaaagg aagcc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 127
gaccaaagct ggttgctgta aaccg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggaatctgcc agagatgact gattg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 129
gaggaccgcc aaagtaatat gatcc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gatcctttag gtagtaagaa gccag 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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agttggctta ttcatagtac catcc 25
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cagtcaattt tgtccttaac tgaag 25
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tagtacaagc agggacaaac aaggt 25
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ccagcctcat acagactttg aataa 25
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gtagcatgct ggagttagag agcag 25
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tttaagatct gccagaagag gtagg 25
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ctcatgatct tcactagcag cttgg 25
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ataccctccc actagacatc ctttt 25
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ggtattggct gagttggcca tttaa 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ccgccaggcg aatggcgtaa tcact 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tacccaccat tactgcaata gcccc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 215
aaactcttgg tgcacccatt tagtc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 218
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 219
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 220
caacttcctg cacctttaac tctag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acagtttatg cagatctctc caagt 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 222
tctacagggg agaataatct ctaca 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 223
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtgtgatttt agtttttgtg gggtc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gctgtgattg tgtcatcttc tttga 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 226
tgaggacaaa tgagtaaaat acaga 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ttaactggga aacatttaga aatcc 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggattcttag ctttgaggtt ctttc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 229
taaagtgatg atcactggac tagga 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 230
tgggtccgca tcgcaccgtc gttca 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gcatggctgg gaaatagtta actaa 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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ggaaactgag tacaatggaa gagtc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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aagaggagaa agaagatgaa tgagg 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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taagttgaga atcttgagca gcact 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtgagtaaca aagacagccg tgtat 25
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gggcttacct ggcttccggt agatg 25
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cagcatagaa catacatctc acagc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 241
gcagcatatg gaactccaag gaact 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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accctgcaag tgtctaattt ctaaa 25
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ttgctctaga attttctctc tggga 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 302
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 305
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 307
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<400> 308
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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acacggagta aacagaaata tgcag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cgtgtccagt tatcgggaga gggtc 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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cagtaacagc acacacttga tacaa 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<212> DNA
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gtgagtctca ataagcttcc tgtga 25
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ctggagcccc aagattatca gtcaa 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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gtccagtgtt gaaaatgcca ctaaa 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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caatgagaga ggcagagttg atctt 25
<210> 473
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 473
gcttacacac agctatggaa gtctg 25
<210> 474
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 474
ttaagaaacc caagagtaaa acgtc 25
<210> 475
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 475
ccatctccta aacaagataa tctgg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 476
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 477
gattaccaaa ggtctgccag tagag 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 478
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 480
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 481
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 482
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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attcggtcac aagcttgatc ttcaa 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tcaaaaaccc taagcagcac atcta 25
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<212> DNA
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 527
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 529
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 530
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 531
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 535
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 537
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 539
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 540
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 541
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 542
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 543
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 544
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 545
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 546
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 547
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 552
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 553
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 554
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 562
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 563
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 564
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 565
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<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 567
cctttccttc tcacctcctt tccac 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 568
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 569
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 570
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 572
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 573
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 574
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 575
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 576
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 579
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
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tgtgcgataa ctcgggaaag ccccg 25
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 581
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<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 582
aatctcgaac gggggtccgg agatc 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 583
atcggctgcg aatgccccgg agtca 25
<210> 584
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 584
ggagaccttg atgggcgggc cgtca 25
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<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 585
gctggggcag tgggagcccc tgcgt 25
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<400> 586
ggagtcggga tcttctgggg ttgcc 25
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<400> 703
ggggcccctt ccgttaaagc accga 25
<210> 704
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 704
catagcgata ggcctccgac ggcac 25
<210> 705
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 705
cgggctagtg aaggctgacg ctctc 25
<210> 706
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 706
cagattcttg cacgtggggg ccccg 25
<210> 707
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 707
ggcgcaaact tagtcttggg ttctc 25
<210> 708
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 708
agaagggtgg tcccagaata tgggc 25
<210> 709
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 709
ttcactataa agatgaggac actgg 25
<210> 710
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 710
cgcaaactta gtcttgggtt ctcct 25
<210> 711
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 711
gccaccgcac tggtcccagc cccat 25
<210> 712
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 712
gatgggggac ctggccttca gtggt 25
<210> 713
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 713
gcgcctggtt cacgccatac atgga 25
<210> 714
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 714
cttatagggg acatttggag tgggt 25
<210> 715
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 715
agcgctggac acgatcagga acagg 25
<210> 716
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 716
aagtccagaa tgtatagcgg ctcct 25
<210> 717
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 717
ccaccaagct agtgagggag tgcag 25
<210> 718
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 718
gatagcctca ggctggtgga ggggg 25
<210> 719
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 719
gggactgatg gacaggtcca gaaca 25
<210> 720
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 720
tctgtcctga tgctgcacgt cccca 25
<210> 721
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 721
ccacggtgag acaggccgat ccgta 25
<210> 722
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 722
atatggagag accgtccaca ccatc 25
<210> 723
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 723
aaacatagaa gtgagttctg ccact 25
<210> 724
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 724
gagtgctgta gtggatgagg atggc 25
<210> 725
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 725
caggaacatt cccaagatga aggct 25
<210> 726
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 726
tggaggcaaa gacactgatt atctc 25
<210> 727
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 727
tctgctcgct gggtgggtac agcgt 25
<210> 728
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 728
gagtaggtgg aagtggggct gaggg 25
<210> 729
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 729
acagagtgca gggcaagtaa gtttc 25
<210> 730
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 730
tagtcccgcg aggacgccct ggggg 25
<210> 731
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 731
cctccctgct gggtggagcc ttgag 25
<210> 732
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 732
aaagctgttc caacctcacc ccctg 25
<210> 733
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 733
gtggtcacgt cctaaagtca cttgg 25
<210> 734
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 734
aggagaaagg agatccctgg tctat 25
<210> 735
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 735
caagaaaaac agacgatcct cattg 25
<210> 736
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 736
caaaatttcc atgcgcttct cttcc 25
<210> 737
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 737
gcatacaagg caatccagcc aatca 25
<210> 738
<211> 25
<212> DNA
<213> 人工序列(Artificial Sequence)
<400> 738
cttgtttcca gtggggagtt cttca 25

Claims (3)

1.一组先天性甲状腺功能减低症的多基因检测引物，其特征在于：包括有用于扩增如下13个基因的引物对：DUOX2、TG、TPO、TSHR、TTF1、TTF2、PAX8、NKX2-5、GNAS、THRA、TSHB、IYD和SLC5A5。
2.根据权利要求1所述的检测引物，其特征在于：
所述DUOX2基因的引物序列如SEQ ID No：1-SEQ ID No：108所示；
所述TG基因的引物序列如SEQ ID No：109-SEQ ID No：282所示；
所述TPO基因的引物序列如SEQ ID No：283-SEQ ID No：340所示；
所述TSHR基因的引物序列如SEQ ID No：341-SEQ ID No：386所示；
所述TTF1基因的引物序列如SEQ ID No：387-SEQ ID No：428所示；
所述TTF2基因的引物序列如SEQ ID No：429-SEQ ID No：502所示；
所述PAX8基因的引物序列如SEQ ID No：503-SEQ ID No：538所示；
所述NKX2-5基因的引物序列如SEQ ID No：539-SEQ ID No：556所示；
所述GNAS基因的引物序列如SEQ ID No：557-SEQ ID No：630所示；
所述THRA基因的引物序列如SEQ ID No：631-SEQ ID No：668所示；
所述TSHB基因的引物序列如SEQ ID No：669-SEQ ID No：676所示；
所述IYD基因的引物序列如SEQ ID No：677-SEQ ID No：698所示。
所述SLC5A5基因的引物序列如SEQ ID No：699-SEQ ID No：738所示。
3.权利要求1或2所述的检测引物在制备先天性甲状腺功能减低症检测试剂盒中的应用。
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