CN107207496A - 作为沉默调节蛋白调节剂的取代的桥环脲类似物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及新的取代的桥环脲化合物、对应的相关类似物、药物组合物以及它们的使用方法。调节沉默调节蛋白的本发明化合物可以用于增加细胞寿命，以及治疗和/或预防广泛的疾病和病症，其包括但不限于，例如，与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红，以及将得益于增加线粒体活性的疾病或病症。本发明还涉及包含调节沉默调节蛋白的化合物和其它治疗剂的组合物。

Description

作为沉默调节蛋白调节剂的取代的桥环脲类似物
相关申请的相互参考
本申请为2014年5月13日提交的国际申请号PCT/US2014/037767的部分延续案，该国际申请号PCT/US2014/037767要求2013年5月13日提交的美国临时申请号61/822,758的优先权，将其引入本文作为参考。
技术领域
总体上，本发明涉及新的式(I)的取代的桥环脲化合物或药学上可接受的盐，相应的药物组合物，该化合物的制备方法，以及该化合物在沉默调节蛋白调节中的用途和用于增加细胞寿命、治疗和/或预防广泛的疾病和病症的方法，所述疾病和病症包括但不限于，例如，与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或病症。本发明还涉及包含调节沉默调节蛋白的化合物和其它治疗剂的组合物。
背景技术
沉默信息调节剂(Silent Information Regulator，SIR)基因家族代表存在于范围从古细菌(archaebacteria)至真核生物的生物体的基因组中的高度保守的一组基因。编码的SIR蛋白参与从基因沉默的调节至DNA修复的各种过程。此家族中充分表征的基因为酿酒酵母SIR2(S.cerevisiae SIR2)，其包含在含有指定酵母交配型、端粒位置效应及细胞老化的信息的沉默HM基因座中。酵母Sir2蛋白属于组蛋白脱乙酰基酶的家族。由SIR基因家族成员编码的蛋白显示：250个氨基酸的核心结构域具有高度序列保守。于鼠伤寒沙门氏菌(Salmonella typhimurium)中的Sir2同系物CobB起到NAD(烟酰胺腺嘌呤二核苷酸)-依赖性ADP-核糖基转移酶的作用。
Sir2蛋白为使用NAD作为协同底物的第III类脱乙酰基酶。不同于其它脱乙酰基酶，这些中的许多涉及基因沉默，Sir2对第I类及第II类组蛋白脱乙酰基酶抑制剂(例如制滴菌素A(trichostatin A，TSA))不具敏感性。
通过Sir2进行的乙酰基-赖氨酸的脱乙酰基化与NAD水解作用紧密结合，产生烟酰胺与新的乙酰基-ADP核糖化合物。Sir2的NAD-依赖性脱乙酰基酶活性对于可以将其生物学作用与酵母中的细胞代谢作用结合的这一功能而言是必需的。哺乳动物Sir2同系物具有NAD-依赖性组蛋白脱乙酰基酶活性。
生物化学的研究已显示，Sir2可容易地将组蛋白H3与H4的氨基末端尾部脱乙酰基化，导致形成2’/3’-O-乙酰基-ADP-核糖(OAADPR)与烟酰胺。具有SIR2的额外拷贝的菌株显示rDNA沉默增加且寿命增长30％。还已经表明，秀丽隐杆线虫(C.elegans)SIR2同系物(sir-2.1)及果蝇(D.melanogaster)dSir2基因的额外拷贝会延长那些生物体的寿命。这暗示了针对老化的SIR2-依赖性调节途径在进化早期出现且已经是相当保守的。现今，认为Sir2基因已经进化为增强生物体的健康与应激抵抗，以增加其逆境存活(survivingadversity)的机会。
在人中有7种Sir2样基因(SIRT1-SIRT7)，它们共享Sir2的保守催化结构域。SIRT1为具有与Sir2最高程度序列相似性的核蛋白。SIRT1通过脱乙酰化作用调节多种细胞靶点，包括肿瘤抑制基因p53、细胞信号传导因子NF-kB和FOXO转录因子。
SIRT3为SIRT1的同系物，其在原核生物与真核生物中具保守性。SIRT3蛋白通过位于N-末端的独特结构域而靶向至线粒体嵴(cristae)。SIRT3具有NAD+-依赖性蛋白脱乙酰基酶活性，且普遍表达，特别是在代谢活性的组织中。在转移至线粒体后，SIRT3被线粒体基质加工肽酶(MPP)裂解成更小的活性形式。
70年前已经知晓，热量限制(caloric restriction)增进哺乳动物的健康并延长寿命。酵母寿命(如后生动物的)也通过类似热量限制(例如低葡萄糖)的介入来增长。发现缺乏SIR2基因的酵母与蝇类在热量限制时并不活得更长，这为SIR2基因介导限制性热量饮食的有益健康功效提供了证据。而且，降低酵母葡萄糖-响应性cAMP(腺苷3＇，5＇-单磷酸)-依赖性(PKA)途径活性的突变延长了野生型细胞的寿命，但在突变型sir2菌株中则不会延长，这证明SIR2可能是热量限制途径的关键下游组分。
除了治疗潜力，SIRT1活性的结构和生物物理研究以及经小分子沉默调节蛋白调节剂的活化将用于推进对沉默调节蛋白的生物学功能的了解、进一步了解沉默调节蛋白活化的作用机理以及帮助研发用于鉴定新的沉默调节蛋白调节剂的试验。
发明概述
总体上，本发明涉及式(I)的新的取代的桥环脲化合物或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，制备所述化合物的方法和所述化合物在沉默调节蛋白调节中的用途，以及增加细胞寿命、治疗和/或预防广泛的疾病和病症的方法，所述疾病和病症包括但不限于，例如，与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或病症。本发明还涉及包含调节沉默调节蛋白的化合物和其它治疗剂的组合物。
本发明提供了新的调节沉默调节蛋白的化合物及其使用方法。
一方面，本发明提供了调节沉默调节蛋白的结构式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIIa)、(IIIb)和(IV)的化合物，如下所详述。
在另一方面，代表性的本发明化合物分别为表1和/或表10(即，其它代表性化合物实施例)中例示或阐明的化合物结构，或它们相应的药学上可接受的盐，如本说明书所定义。
在另一个方面，本发明提供了使用调节沉默调节蛋白的化合物或包含调节沉默调节蛋白的化合物的组合物的方法。
在一些具体实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以用于多种治疗应用，包括例如，增加细胞寿命和治疗和/或预防广泛的疾病和病症，包括但不限于，例如与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、化疗诱导的神经病、与局部缺血事件有关的神经病、眼科疾病和/或病症、心血管疾病、凝血障碍、炎症、和/或潮红等。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物还可以用于治疗将得益于增加线粒体活性的受试者中的疾病或病症、用于增强肌肉功能、用于增加肌肉ATP水平，或用于治疗或预防与缺氧或缺血有关的肌肉组织损伤。在其它实施方案中，降低沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以用于多种治疗应用，包括例如，增加细胞对应激的敏感性、增加凋亡、治疗癌症、刺激食欲和/或刺激增重等。如下进一步详述，所述方法包括向需要的受试者给药药学上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物。
基于前述，本发明可以用于治疗与老化或应激有关的其它疾病或病症、糖尿病和其它代谢功能障碍和相关病症，包括但不限于脂肪肝、脂肪性肝炎(hepaticsteatohepatitis)和肥胖症。本发明还可以用于治疗神经变性疾病、心血管疾病、癌症、炎性疾病，其包括但不限于银屑病(psoriasis)、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症，以及由SIRT1表达或活性降低导致的其它疾病或病症。
在具体方面，调节沉默调节蛋白的化合物可以单独给药或与其它化合物(包括其它调节沉默调节蛋白的化合物或其它治疗剂)组合给药。
附图说明
图1展示化合物1的1H-NMR谱。
图2展示化合物1的13C-NMR和APT NMR谱。
图3描述(A)全长SIRT1的HDX-MS，(B)CBS对SIRT1cc活性的作用的酶表征，(C)小hSIRT1(AN)与小hSIRT1的STAC活化的透视图对比，(D)小hSIRT1(ΔCBS)与小hSIRT1的STAC活化的透视图对比，和(E)小hSIRT1(E230K)与小hSIRT1的STAC活化的透视图对比。
图4展示合成的SIRT1活化剂(1、4-9)、抑制剂(2)和荧光偏振分析探针(3)的化学结构。
图5描述在存在或不存在STAC时小hSIRT1的尺寸排阻色谱(SEC)。
图6描述(A)结合至CBS肽后的SIRT1cc的HDX-MS性质的差分扰动，(B)小hSIRT1/1复合物和ySIR2的结构比较，(C)小hSIRT1/1复合物、小hSIRT1/1/2复合物和小hSIRT1/1/Ac-p53-7mer/CarbaNAD四元复合物的N末端SBD的结构比较。
图7描述使用含Ac-p53(W5)底物的OAcADPr分析比较野生型和(A)I223A或(B)E230K SIRT1的活化剂量响应曲线。
图8描述野生型对比突变的全长hSIRT1的活化比较。
图9描述(A)小hSIRT1/Ac-p53相互作用的界面。(B)小hSIRT1/carbaNAD相互作用的界面。(C)小hSIRT1/2相互作用的界面。
图10描述(A)FP探针3与SIRT1的结合。(B)4与SIRT1/3复合物的竞争。
图11描述经全长I223R hSIRT1减弱的STAC结合。
图12描述小hSIRT1(R446A)与小hSIRT1的STAC活化的透视图对比。
发明详述
本发明涉及式(I)的新的取代的桥环脲化合物或其药学上可接受的盐，相应的药物组合物，制备所述化合物的方法和所述化合物在沉默调节蛋白调节中的用途，以及增加细胞寿命、治疗和/或预防广泛的疾病和病症的方法，所述疾病和病症包括但不限于，例如，与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或病症。
本发明还涉及包含调节沉默调节蛋白的化合物和其它治疗剂的组合物。
1.定义
用于本文的下列术语及短语应具有于下文所叙述的含义。除非另行定义，否则在本文中使用的所有技术与科学术语具有与本领域技术人员通常理解的相同含义。
本文中术语“药剂(agent)”用于表示化合物、化合物的混合物、生物大分子(例如核酸、抗体、蛋白或其部分(例如肽))、或从生物材料例如细菌、植物、真菌或动物(特别是哺乳动物)细胞或组织制得的提取物。
当涉及化合物时，术语“生物可利用的”为本领域所公知的，且是指化合物形式，其中所给药化合物的量的全部或一部分能够被所给药的受试者或患者吸收、引入或以其它方式在生理学上被利用。
“沉默调节蛋白的生物学活性部分”是指具有生物活性(例如脱乙酰基化能力(“催化活性”))的沉默调节蛋白的一部分。沉默调节蛋白的催化活性部分可包含沉默调节蛋白的核心结构域。具有GenBank登录号NP_036370的SIRT1的催化活性部分(例如包括NAD+结合结构域与底物结合结构域)可包括但不限于GenBank登录号NP_036370的氨基酸240-664或240-505，其由GenBank登录号NM_012238的多核苷酸所编码。因此，此区域有时被称作核心结构域。SIRT1的其它催化活性部分(有时也被称作核心结构域)包括GenBank登录号NP_036370的大致氨基酸261至447，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸834至1394所编码；GenBank登录号NP_036370的大致氨基酸242至493，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸777至1532所编码；或GenBank登录号NP_036370的大致氨基酸254至495，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸813至1538所编码。SIRT1的其他“生物学活性”部分为GenBank登录号NP_036370的氨基酸62-293或183-225，其包括对于化合物结合位点重要的在核心结构域N-末端的结构域。
术语“陪伴动物”是指猫与狗。用于本文的术语“狗”是指家犬(Canis familiaris)的任一成员，其中有许多不同品种。术语“猫”是指猫科动物，包括驯养猫及家猫(familyFelidae，genus Felis)的其它成员。
“糖尿病”是指高血糖或酮酸中毒，以及因长期高血糖状态或葡萄糖耐受性降低所引起的慢性、一般性代谢异常。“糖尿病”包含该疾病的I与II型(非胰岛素依赖性糖尿病或NIDDM)两种形式。糖尿病的危险因素包括下列因素：男子腰围超过40英寸或女子腰围超过35英寸，血压为130/85mmHg或以上，甘油三酸酯高于150mg/dl，空腹血糖大于100mg/dl，或男子高密度脂蛋白少于40mg/dl或女子高密度脂蛋白少于50mg/dl。
术语“ED50”是本领域公知的有效量的度量。在一些实施方案中，ED50是指产生其最大响应或功效的50％时的药物剂量，或者在50％的测试受试者或制品(例如分离的组织或细胞)中产生预定响应的剂量。术语“LD50”是本领域公知的致死剂量的度量。在一些实施方案中，LD50是指使50％的测试受试者致死的药物剂量。术语“治疗指数”为本领域所公知的术语，是指药物的治疗指数，定义为LD50/ED50。
术语“高胰岛素血症”是指个体血液中胰岛素水平高于正常值的状态。
术语“胰岛素抵抗”是指这样的一种状态，其中相对于在不具有胰岛素抵抗的受试者中的生物响应而言，正常量胰岛素产生低于正常(subnormal)生物响应的状态。
本文所讨论的“胰岛素抵抗病症”是指由胰岛素抵抗所引起或促成的任何疾病或状况。实例包括：糖尿病、肥胖症、代谢综合征、胰岛素抵抗综合征、综合征X、胰岛素抵抗、高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、高脂血症、动脉粥样硬化疾病，包括中风、冠状动脉疾病或心肌梗塞、高血糖症、高胰岛素血症和/或高胰岛素原血症、葡萄糖耐受不良、延迟胰岛素释放、糖尿病并发症，包括冠心病、心绞痛、充血性心脏衰竭、中风、痴呆的认知功能、视网膜病、周围神经病、肾病、肾小球肾炎、肾小球硬化症、肾病变综合征、高血压性肾硬化、一些癌症类型(如子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不调、不育、不定期排卵、多囊卵巢性综合征(PCOS))、脂肪代谢障碍、胆固醇相关病症，例如胆结石、胆囊炎与胆石病，痛风、阻塞性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、骨关节炎，以及骨丢失，例如尤其是骨质疏松症。
术语“家畜动物”是指经驯化的四足动物，其包括那些为肉类与各类副产品而饲养的动物，例如牛类动物，包括牛与牛属(genus Bos)的其它成员，猪类动物，包括驯养猪与猪属(genus Sus)的其它成员，羊类动物，包括绵羊与其它羊属(genus Ovis)的成员、驯养山羊与山羊属(genus Capra)的其它成员；为特定任务例如用做负重畜牲而饲养的经驯化的四足动物，例如马类动物，包括驯养马与马科马属(family Equidae，genus Equus)的其它成员。
术语“哺乳动物”为本领域已知的，且示例性哺乳动物包括人、灵长类、家畜动物(包括牛类、猪类等)、陪伴动物(例如犬类、猫类等)及啮齿类(例如小鼠与大鼠)。
“肥胖”个体或患有肥胖症的个体，一般指具有的体重指数(BMI)为至少25或以上的个体。肥胖可以与或不与胰岛素抵抗相关。
术语“经肠胃外给药”及“经肠胃外进行给药”为本领域公认的，且指非肠给药与局部给药的给药模式，一般经由注射，且包括但不限定于：静脉内、肌肉内、动脉内、鞘内、囊内、眶内、心内、真皮内、腹膜内、经气管、皮下、表皮下、关节内、囊下、蛛网膜下、脊柱内与胸骨内注射及输注给药。
“患者”、“受试者”、“个体”或“宿主”是指人或非人动物。
术语“药学上可接受的载体”为本领域公认的，且是指与携带或运送任何主题组合物或其组分有关的药学上可接受的材料、组合物或载体，例如液体或固体填充剂、稀释剂、赋形剂、溶剂或包封物料。各种载体就其可与主题组合物或其组分相容的意义而言必须为“可接受的”，且对患者是无害的。可用作药学上可接受载体的材料的一些实例包括：(1)糖类，例如乳糖、葡萄糖与蔗糖；(2)淀粉，例如玉米淀粉与马铃薯淀粉；(3)纤维素与其衍生物，例如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素和醋酸纤维素；(4)成粉末的西黄耆胶；(5)麦芽；(6)明胶；(7)滑石粉；(8)赋形剂，例如可可脂与栓剂蜡；(9)油类，例如花生油、棉籽油、红花油、芝麻油、橄榄油、玉米油与大豆油；(10)二醇类，例如丙二醇；(11)多元醇类，例如甘油、山梨糖醇、甘露糖醇与聚乙二醇；(12)酯类，例如油酸乙酯与月桂酸乙酯；(13)琼脂；(14)缓冲剂，例如氢氧化镁与氢氧化铝；(15)藻酸；(16)无热源水；(17)等渗盐水；(18)林格氏溶液；(19)乙醇；(20)磷酸盐缓冲溶液；及(21)其它用于医药制剂的无毒性相容物质。
术语“预防”为本领域所公知的，且与涉及在病症(例如局部复发(如疼痛))、疾病(例如癌症)、综合征(例如心力衰竭)或任何其他医学病症使用时，其在本领域中是公知的，包括给药组合物，其与没有接受该组合物的受试者相比，其在受试者中降低了医学病症的症状的频率或延迟了其发作。因此，癌症的预防包括，例如，在接受预防性治疗的患者群中降低了可检测到的癌生长的数量(相对于未治疗的对照人群)，和/或在治疗的人群中延迟了可检测癌生长的出现(与未治疗的对照人群相比)，例如，通过具有统计学和/或临床显著性的量。感染的预防包括，例如，在治疗的人群中降低了诊断的感染的数量(与未治疗的对照人群相比)，和/或在治疗的人群中延迟了感染症状的发作(与未治疗的对照人群相比)。疼痛的预防包括，例如，在治疗的人群中降低了由该受试者觉察到的疼痛感的程度或者延迟了该感觉(与未治疗的对照人群相比)。
术语“预防性”或“治疗性”治疗为本领域所公知的，且指将药物给药至宿主。如果在不希望病症(例如，宿主动物的疾病或其它不希望状态)临床显现之前进行给药，则该治疗为预防性，即其保护宿主不会发展成该不希望病症，而如果在不希望病症显现之后进行给药，则该治疗为治疗性的(即意在减少、改善或维持现有的不希望病症或由其产生的副作用)。
在涉及组合物时，术语“无热源(pyrogen-free)”是指热源含量不会在已给药该组合物的受试者中导致有害作用(例如，刺激、发热、炎症、腹泻、呼吸窘迫、内毒素性休克等)的组合物。例如，该术语既定包括不含或基本上不含诸如脂多糖(LPS)等内毒素的组合物。
细胞的“复制寿命”是指由单个“母细胞”所产生的子细胞数量。另一方面，“自然老化(chronological aging)”或“自然寿命”是指一群不分裂的细胞当被除去养分时仍保持存活的时间长度。当应用于细胞或生物体时，“增加细胞寿命”或“延长细胞寿命”是指增加由一个细胞所产生的子细胞数量；增加细胞或生物体对抗应激及对抗损伤(例如对DNA、蛋白的应激和损伤)的能力；和/或增加细胞或生物体可于特别条件例如应激(如热休克、渗透压力、高能量照射、化学诱导的应激、DNA损伤、不合适的盐水平、不合适的氮水平或不充足的营养物水平)下存活更长时间和生存状态存在更长时间的能力。使用本文中所述的方法，寿命可增加至少约10％、20％、30％、40％、50％、60％，或20％至70％、30％至60％、40％至60％或以上。
“调节沉默调节蛋白的化合物”是指增加沉默调节蛋白水平和/或增加沉默调节蛋白的至少一种活性的化合物。在示例性的实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可使沉默调节蛋白的至少一种生物活性增加至少约10％、25％、50％、75％、100％或以上。沉默调节蛋白的示例性生物活性包括例如组蛋白与p53的脱乙酰基化；延长寿命；增加基因组的稳定性；沉默转录作用；及调控母细胞与子细胞间的经氧化蛋白的分离。
蛋白质包括脱乙酰化，例如，乙酰化肽底物。
“沉默调节蛋白”是指沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白家族或优选指sir2家族的成员，其包括酵母Sir2(GenBank登录号P53685)、秀丽隐杆线虫Sir-2.1(GenBank登录号NP_501912)及人SIRT1(GenBank登录号NM_012238与NP_036370(或AF083106))与SIRT2(GenBank登录号NM_012237、NM_030593、NP_036369、NP_085096与AF083107)蛋白。其它家族成员包括称作“HST基因”(Sir2的同系物)的四种其它酵母Sir2类基因HST1、HST2、HST3与HST4，及五种其它人同系物hSIRT3、hSIRT4、hSIRT5、hSIRT6与hSIRT7(Brachmann等人，(1995)Genes Dev.9：2888及Frye等人(1999)BBRC 260：273)。
“SIRT1蛋白”是指沉默调节蛋白的脱乙酰基酶的Sir2家族的成员。在一些实施方案中，SIRT1蛋白包括酵母Sir2(GenBank登录号P53685)、秀丽隐杆线虫Sir-2.1(GenBank登录号NP_501912)、人SIRT1(GenBank登录号NM_012238或NP_036370(或AF083106))、小鼠SIRT1(GenBank登录号NM_019812或NP_062786)及其等同物与片段。在另一个实施方案中，SIRT1蛋白包括多肽，其包含由或基本上由示于GenBank登录号NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369或P53685中的氨基酸序列所组成的序列。SIRT1蛋白包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的多肽及其功能性片段：示于GenBank登录号NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369或P53685中的氨基酸序列；示于GenBank登录号NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369或P53685中的具有1至约2、3、5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨基酸序列；与GenBank登录号NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369或P53685至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。本发明中的多肽也包括GenBank登录号NP_036370、NP_501912、NP_085096、NP_036369或P53685的同源物(直系同源物(orthologs)与旁系同源物(paralogs))、变体或片段。
在此使用的“SIRT2蛋白”、“SIRT3蛋白”、“SIRT4蛋白”、“SIRT5蛋白”、“SIRT6蛋白”和“SIRT7蛋白”指的是其他的哺乳动物(例如人)的沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白(其与SIRT1蛋白同源，尤其在约275个氨基酸保守催化结构域)。例如，“SIRT3蛋白”指的是沉默调节蛋白的脱乙酰基酶蛋白家族的成员(其与SIRT1蛋白同源)。在一个实施方案中，SIRT3蛋白包括人SIRT3(GenBank登录号AAH01042、NP_036371或NP_001017524)与小鼠SIRT3(GenBank登录号NP_071878)蛋白，及其等同物与片段。在一些实施方案中，SIRT4蛋白包括人SIRT4(GenBank登录号NM_012240或NP_036372)。在一些实施方案中，SIRT5蛋白包括人SIRT5(GenBank登陆编号NM_012241或NP_036373)。在一些实施方案中，SIRT6蛋白包括人SIRT6(GenBank登录号NM_016539或NP_057623)。在另一个实施方案中，SIRT3蛋白包括多肽，其包含由或基本上由示于GenBank登录号AAH01042、NP_036371、NP_001017524或NP_071878中的氨基酸序列所组成的序列。SIRT3蛋白包括含有下列氨基酸序列的全部或一部分的多肽及其功能性片段：示于GenBank登录号AAH01042、NP_036371、NP_001017524或NP_071878中的氨基酸序列；示于GenBank登录号AAH01042、NP_036371、NP_001017524或NP_071878中的具有1至约2、3、5、7、10、15、20、30、50、75或更多保守性氨基酸取代的氨基酸序列；与GenBank登录号AAH01042、NP_036371、NP_001017524或NP_071878至少60％、70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％相同的氨基酸序列。本发明中的多肽也包括GenBank登录号AAH01042、NP_036371、NP_001017524或NP_071878的同源物(直系同源物与旁系同源物)、变体或片段。在一些实施方案中，SIRT3蛋白包括以线粒体基质加工肽酶(MPP)和/或线粒体中间物肽酶(MIP)裂解而产生的SIRT3蛋白片段。
本文中所使用的术语“立体异构体”为本领域所公知的，且指具有相同分子组成且仅在空间上它们的原子的三维排列不同的任意两个或多个异构体。当在文中用于描述化合物或通式化合物时，立体异构体包括该化合物的任一部分或全部化合物。例如，非对映异构体和对映异构体是立体异构体。
术语“全身性给药”和“全身地给药”为本领域所公知的，且指将主题组合物、治疗剂或其它物质肠内给药或肠胃外给药。
本文中使用的术语“互变异构体”为本领域所公知的，且指由互变异构现象造成可能存在的任一可能的结构式变化，其指的是构造异构形式，其中结构可以以两种或多种构造排列形式存在，尤其是在连接至氧的氢的位置方面。当在文中用于描述化合物或通式化合物时，进一步理解“互变异构体”是容易互相转变的且处于平衡状态。例如，酮式和烯醇式互变异构体以一定的比例存在，这取决于给定条件或设定条件下的平衡位置：
术语“治疗剂”为本领域所公知的，且是指可于受试者内局部或全身性起作用的生物学、生理学或药理学活性物质。该术语也是指欲用于诊断、治愈、减轻、治疗或预防疾病的任何物质，或用于增进动物或人的希望的身体或精神发展和/或状况的物质。
术语“治疗功效”为本领域所公知的，且指动物(特别是哺乳动物，且更特别地为人)中由药理学活性物质产生的有益的局部或全身性功效。术语“治疗上有效量”是指，使物质能以任何治疗的合理效益/风险比应用的，产生某种所希望的局部或全身功效的量。此类物质的治疗上有效量将随欲受治疗的受试者与疾病状况、受试者的体重与年龄、疾病状况的严重度、给药方式等而有所变化，其可由本领域技术人员容易地确定。例如，本文所述的一些组合物能以此治疗的合理效益/风险比应用的产生所希望功效的足够量来进行给药。
“治疗”病症或疾病是指治愈以及改善该病症或疾病的至少一种症状。
术语“视力损伤”是指视力减弱，其在进行治疗(例如手术)时往往仅部分可逆或不可逆。特别严重的视力损伤称为“盲”或“视力丧失”，其是指视力完全丧失、视力差于20/200以致无法经由矫正镜片改善，或视野小于20度直径(10度半径)。
2.化合物
本发明涉及式(I)的新的取代的桥环脲化合物或其药学上可接受的盐，以及相应的药物组合物。
一方面，本发明提供了新的化合物，用于治疗和/或预防广泛的疾病和病症，包括例如，与老化或应激有关的疾病或病症、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、眼科疾病和病症、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红等。目标化合物，例如增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，还可以用于治疗将得益于增加线粒体活性的受试者中的疾病或障碍、用于增强肌肉功能、用于增加肌肉ATP水平，或用于治疗或预防与缺氧或缺血有关的肌肉组织损伤。本申请公开的化合物适合用于药物组合物和/或一种或多种本文所述方法中。
在一些具体实施方案中，本发明化合物表示为结构式(I)：
本发明包括结构式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIIa)、(IIIb)和(IV)的任意化合物或上文提及的其他化合物的药物组合物。结构式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIIa)、(IIIb)和(IV)的化合物的药物组合物可以包括一种或多种药学上可接受的载体或稀释剂。
在一个实施方案中，本发明的调节沉默调节蛋白的化合物表示为结构式(I)或其盐：
其中：
m为1或2；
n为2或3；
p为0至4；
R1选自碳环和杂环，其中R1任选被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、氟-取代的C1-C4烷基、-C≡N、-Y、-X-C(＝O)-Y、-X-O-Y、-X-OR4、-X-C(＝O)-NR3R3、-X-NH-C(＝O)-Y-NR3R3、-X-NH-C(＝O)-O-Y、-X-NR3R3、＝O、-NH-S(＝O)2-R3、-S(＝O)2-R3、-S-R3、-(C3-C7)环烷基、-C(＝N)-NR3R3、-C(＝N)-NH-X-NR3R3、-X-NH-C(＝O)-Y、-C(＝O)-NH-X、-NH-X、苯基、-O-苯基、3-至6-元饱和或不饱和的杂环和-O-(5-至6-元饱和杂环)，其中R1的任一苯基、3-至6-元饱和或不饱和的杂环或-O-5-至6-元饱和杂环取代基任选在任意可取代的碳原子上被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-OR4、-X-O-Y、-CF3、-Y、-X-R3R3、-X-NH-C(＝O)-Y-NR3R3、-X-NH-C(＝O)-O-Y-(5-至6-元饱和杂环或碳环)、-X-C(＝N)-NR3R3和-S-Y，并且任选在任意可取代的氮原子上被以下取代：-Y、-C(＝O)-Y、-C(＝O)-O-Y、-C(＝O)-OR4、-Y-C(＝O)-Y-NR3R3、-Y-NH-C(＝O)-O-Y、-Y-NH-C(＝O)-OR4、-Y-NH2、-C(＝O)-NH-Y或-C(＝O)-3-至5-元饱和碳环；
R2选自碳环和杂环，其中R2任选被一个或多个独立地选自以下的取代基取代：卤素、C1-C4烷基、氟-取代的C1-C4烷基、-C≡N、-Y、-X-OR4、-X-O-Y、-SO2-R3、-X-NR3R3、-NH-S(＝O)2R3、-C(＝O)-NR3R3、-C(＝O)-Y、-C(＝O)-O-Y、-SO2-Ry、-SO2-NH-Ry、-SO2-NR3R3、3-至6-元饱和碳环或杂环和苯基，其中R2的任一3-至6-元饱和杂环取代基任选在任意碳原子上被一个或多个选自以下的取代基取代：卤素、-CF3、-Y、-X-O-Y、-NH-Y和-N(Y)2，并且任选在任意氮原子上被一个或多个选自以下的取代基取代：-C(＝O)-O-Y、-Y和-C(＝O)-Y，并且当R2为N-连接的5-至7-元饱和或不饱和的杂环时，其还进一步在任意氮原子上被一个或多个选自以下的取代基取代：-C(＝O)-O-Y、-Y和-C(＝O)-Y；
各R3独立地选自氢、-C(＝N)-NH2、-C(＝O)-Y、-Y、-Y-NH-C(＝O)-O-Y、-Y-NH-C(＝O)-OH、-Y-NH-C(＝O)-CF3、-C(＝O)-Y-3-至5-元饱和杂环、-C(＝O)-O-Y-(3-至5-元饱和杂环)、-C(＝O)-CF3、-C(＝O)-O-Y、-C(＝O)-OH、-C(＝O)-O-CF3、-S(＝O)2-Y、-S(＝O)2-OH；
两个R3与它们所连接的氮或碳原子一起形成4-至8-元饱和杂环，其任选包括一个额外的独立地选自N、S、S(＝O)、S(＝O)2和O的杂原子，其中两个R3形成的杂环任选在任意碳原子上被一个或多个OH、卤素、Y、NH2、NH-Y、N(Y)2、O-Y取代，并且任选在任意可取代的氮原子上被C(＝O)-O-Y、Y或C(＝O)-Y取代；
各R4独立地选自氢、Y、-CF3、-C(＝O)-Y、-C(＝O)-O-Y、-Y-C(＝O)-Y或-Y-C(＝O)-O-Y；
R5和R6独立地选自氢、-OH、-OCF3、-O-Y、-O-C(＝O)-Y、-O-C(＝O)-O-Y、-O-C(＝O)-NH-Y、-O-C(＝O)-N(Y)2、-O-C(＝O)-5-至6-元饱和或不饱和的杂环或碳环，其中R5和R6中仅有一个是O-C(＝O)-5-至6-元饱和或不饱和的杂环或碳环，并且当R5或R6为O-C(＝O)-5-至6-元饱和或不饱和的杂环或碳环时，其进一步被卤素、-OH、Y、-O-Y、-OCF3或-O-C(＝O)-Y取代；或
R5和R6可以与它们所连接的碳原子一起形成＝O；
R7和R8独立地选自氢、卤素、-OH、-O-Y和Y；
R9选自氢、卤素、-OH、-OCF3、-O-Y、Y、-O-C(＝O)-Y、-NH-Y和-N(Y)2；
各X为C0-C5直链或支链的烷基、烯基或炔基；和
各Y为C1-C5直链或支链的烷基、烯基或炔基；
其中任意Y或X任选被一个或多个-OH、-C1-C4直链或支链烷基、-C1-C4烯基、-C1-C4炔基、-O-(C1-C4烷基)、-O-(C1-C4烯基)、-O-(C1-C4炔基)、-C(＝O)-C1-C4直链或支链烷基、-C(＝O)-C1-C4烯基、-C(＝O)-C1-C4炔基、-C(＝O)-O-C1-C4直链或支链烷基、-C(＝O)-O-C1-C4烯基、-C(＝O)-O-C1-C4炔基、卤素、-NH2、-NH(C1-C4烷基)、-N(C1-C4烷基)2、-(C1-C3直链或支链烷基)-NH-(＝NH)-NH2、-NH(烷氧基-取代的C1-C4烷基)、-NH(羟基-取代的C1-C4烷基)、-N(烷氧基-取代的C1-C4烷基)(羟基-取代的C1-C4烷基)、-N(羟基-取代的C1-C4烷基)2或-N(烷氧基-取代的C1-C4烷基)2取代。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于结构式(IIa)表示的结构：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于结构式(IIIa)表示的结构：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于结构式(IIb)或(IIIb)表示的结构：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于结构式(IV)表示的结构：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于p＝0(即，C(O)-NH和R1之间无亚甲基)。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于p＝1-4(即，C(O)-NH和R1之间有1至4个亚甲基)。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于-(CH2)p-R1基团选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R1基团为苯基、饱和或不饱和的5-至6-元杂环或稠合双环的8-至11-元饱和或不饱和的碳环或杂环。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R1为稠合双环的8-至11-元饱和或不饱和的杂环。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R1基团选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R1基团选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R2基团选自5-至7-元饱和碳环或杂环、N-连接的杂环和8-至11-元饱和或不饱和的杂环。
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R2基团为N-连接的5-至7-元饱和或不饱和的杂环。
在上述的一些具体实施方案中，化合物选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R2基团为稠合双环的8-至11-元饱和或不饱和的杂环。
在上述的一些具体实施方案中，化合物选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R2基团选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐特征在于R2基团选自：
在一些具体实施方案中，结构式(I)的化合物或盐选自：
在一些具体实施方案中，结构式(IIa)化合物或盐选自：
在一些具体实施方案中，结构式(IIIa)化合物或盐选自：
在一些具体实施方案中，结构式(IIb)化合物或盐选自：
在一些具体实施方案中，结构式(IIIb)化合物或盐选自：
在一些具体实施方案中，结构式(IV)化合物或盐选自：
在其它一些实施方案中，代表性的本发明化合物分别为表1和/或表10(即，其它代表性化合物实施例)中例示或阐明的化合物结构，或它们相应的药学上可接受的盐，如本说明书所定义。
本发明化合物，包括新的本发明化合物，还可以用于药物组合物和本文所用方法中。
在上述实施方案的任一个中，C1-C4烷氧基-取代的基团可包括一个或多个烷氧基取代基(如1、2或3个甲氧基或一个甲氧基和一个乙氧基)。示例性C1-C4烷氧基取代基包括甲氧基、乙氧基、异丙氧基和叔丁氧基。
在上述实施方案的任一个中，羟基-取代的基团可包括一个或多个羟基取代基，如2或3个羟基。
在上述实施方案的任一个中，“卤素-取代的”基团包括1个卤素取代基至全卤素取代。示例性卤素-取代的C1-C4烷基包括CFH2、CClH2、CBrH2、CF2H、CCl2H、CBr2H、CF3、CCl3、CBr3、CH2CH2F、CH2CH2Cl、CH2CH2Br、CH2CHF2、CHFCH3、CHClCH3、CHBrCH3、CF2CHF2、CF2CHCl2、CF2CHBr2、CH(CF3)2和C(CF3)3。全卤素-取代的C1-C4烷基，例如，包括CF3、CCl3、CBr3、CF2CF3、CCl2CF3和CBr2CF3。
在上述实施方案的任一个中，“碳环”基团可是指单环碳环实施方案和/或多环碳环实施方案，如稠合的、桥连的或双环的碳环实施方案。本发明的“碳环”基团可进一步是指芳香碳环实施方案和/或非芳香碳环实施方案，或在多环实施方案的情况下，碳环具有一个或多个芳环和/或一个或多个非芳环。多环碳环实施方案可为双环、稠合环或桥连双环。非限制性示例性碳环包括苯基、环己烷、环戊烷、或环己烯、金刚烷胺、环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1，5-环辛二烯、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘、金刚烷、十氢化萘、萘、1，2，3，4-四氢萘、降冰片烷、十氢化萘、螺戊烷、美金刚、比哌立登、金刚乙胺、樟脑、胆固醇、4-苯基环己醇、双环[4.2.0]辛烷、美金刚和4，5，6，7-四氢-1H-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。
在上述实施方案的任一个中，”杂环”基团可是指单环杂环实施方案和/或多环杂环实施方案，如稠合的、桥连的或双环的杂环实施方案。本发明的“杂环”基团可进一步是指芳香杂环实施方案和/或非芳香杂环实施方案，或在多环实施方案的情况下，杂环具有一个或多个芳环和/或一个或多个非芳环。多环杂环实施方案可为双环、稠合环或桥连双环。非限制性示例性杂环包括吡啶基、吡咯烷、哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、嘧啶、苯并呋喃、吲哚、喹啉、内酯、内酰胺、苯并二氮杂吲哚、喹啉、嘌呤、腺嘌呤、鸟嘌呤、4，5，6，7-四氢苯并[d]噻唑、六亚甲基四胺(hexamine)和乌洛托品(methenamine)。
本发明的具体化合物可以以特定的几何异构或立体异构形式存在。本发明包括所有的此类化合物，包括顺式-和反式-异构体、(R)-和(S)-对映异构体、非对映异构体、(D)-异构体、(L)-异构体、其外消旋混合物，和它们的其他混合物，如落入本发明范围内的那些。其他的不对称碳原子可存在于取代基(例如烷基)中。所有此类异构体及其混合物均包括于本发明中。
本文中所述的化合物及其盐也可以相应的水合物(例如，半水合物、单水合物、二水合物、三水合物、四水合物)或溶剂合物存在。用于制备溶剂合物和水合物的适宜溶剂通常可由本领域技术人员选择。
化合物及其盐可以以无定形或结晶(包括共晶体和多晶型)形式存在。
本发明的调节沉默调节蛋白的化合物有利地调节沉默调节蛋白的水平和/或活性，尤其是沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性。
另外地或除了上述性质外，本发明的具体调节沉默调节蛋白的化合物在有效调节沉默调节蛋白(例如，SIRT1和/或SIRT3蛋白)的脱乙酰化活性的浓度，基本上不具有一个或多个下列活性：抑制PI3-激酶、抑制糖醛还原酶(aldoreductase)、抑制酪氨酸激酶、转活化EGFR酪氨酸激酶、冠状动脉扩张或解痉活性。
“烷基”或“烷烃”是完全饱和的直链的或支链的非芳香烃基。典型地，直链的或支链的烷基具有1至大约20个碳原子，优选具有1至大约10个碳原子，除非另有说明。直链的和支链的烷基的实例包括甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。C1-C4直链的或支链的烷基也称为＂低级烷基＂。
术语“烯基”(“烯烃”)和“炔基”(“炔烃”)指的是与上述的烷基在长度上类似的不饱和的脂肪族基团，且是对上述的烷基的可行取代，但各自包含至少一个双键或叁键。
术语“芳香碳环”指的是包含至少一个芳香环的芳香性烃环体系。该环可稠合至或以其它方式连接至其他的芳香碳环上或非芳香碳环上。芳香碳环基团的实例包括碳环芳香基团例如苯基、萘基和蒽基。
“氮杂双环”指的是在环骨架中包含氮原子的双环分子。双环的两个环可以在两个互相键接的原子处稠合，例如吲哚，跨越一系列的原子稠合，例如氮杂双环[2.2.1]庚烷，或在单个原子处连接，例如，螺环。
“双环”或“双环的”指的是二环体系，其中这两个环之间共享一个、两个或三个或多个原子。双环包括稠合双环，其中两个相邻的原子被这两个环各自所共享，例如，十氢化萘、吲哚。双环也包括螺双环，其中两个环共享一个原子，例如，螺[2.2]戊烷、1-氧杂-6-氮杂螺[3.4]辛烷。双环还包括桥连的双环，其中至少三个原子被两个环所共享，例如，降莰烷。
“桥连双环”化合物为双环体系，其中至少三个原子被该体系的两个环共享，即它们包括连接两个桥头原子的一个或多个原子的至少一个桥。桥连的氮杂双环指的是在至少一个环中包含氮原子的桥连的双环分子。
术语“Boc”是指叔丁基氧基羰基(常用的胺保护基)。
在此使用的术语“碳环”和“碳环的”指的是饱和的或不饱和的环，其中该环的各个原子是碳。术语碳环包括芳香碳环和非芳香碳环两者。非芳香碳环包括环烷烃环(其中所有的碳原子是饱和的)和环烯烃环(其包含至少一个双键)两者。“碳环”包括5-7元单环和8-12元双环。双环碳环的各个环可选自非芳香和芳香环。碳环包括双环分子，其中一个、两个或三个或多个原子被这两个环所共享。术语“稠合碳环”指的是其中该环的各个环与另一个环共享两个相邻的原子的双环碳环。稠合碳环的各个环可选自非芳香和芳香环。在示例性的实施方案中，芳香环(例如苯基)可以稠合至非芳香或芳香环，例如，环己烷、环戊烷或环己烯。非芳香和芳香双环的任一组合(只要价键允许)包括于碳环的定义中。示例性的“碳环”包括环戊烷、环己烷、双环[2.2.1]庚烷、1，5-环辛二烯、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛-3-烯、萘和金刚烷。示例性的稠合碳环包括十氢化萘、萘、1，2，3，4-四氢萘、双环[4.2.0]辛烷、4，5，6，7-四氢-1H-茚和双环[4.1.0]庚-3-烯。“碳环”可在任一个或多个能够带氢原子的位置被取代。
“环烷基”基团为完全饱和(非芳香)的环状烃环。典型地，环烷基具有3至大约10个碳原子，更典型地3至8个碳原子，除非另有规定。“环烯基”基团为包含一个或多个双键的环状烃。
“卤素”是指F、Cl、Br或I。
“卤素-取代的”或“卤素”取代是指用F、Cl、Br或I替代一个或多个氢。
术语“杂芳基”或“芳香杂环”包括取代的或未取代的芳香单环结构，优选地5至7-元环，更优选地5至6元环，其中环结构包括至少一个杂原子，优选地1-4个杂原子，更优选地1或2个杂原子。术语“杂芳基”还包括具有其中至少一个环为杂芳香环(例如)且另一环可为环烷基、环烯基、环炔基、芳香碳环、杂芳基和/或杂环基的一个或两个环的环体系。杂芳基包括，例如，吡咯、呋喃、噻吩、咪唑、噁唑、噻唑、吡唑、吡啶、吡嗪、哒嗪和嘧啶。
本文中使用的术语“杂环”和“杂环的”指的是非芳香或芳香环，其包含一个或多个选自例如N、O、B和S原子，优选N、O或S的杂原子。术语“杂环”包括“芳香杂环”和“非芳香杂环”两者。杂环包括4-7元单环和8-12元双环。杂环包括双环分子，其中一个、两个或三个或多个原子为两个环所共享。双环杂环的各个环可以选自非芳香和芳香环。术语“稠合杂环”指的是双环杂环，其中每个环与其他环共享两个相邻的原子。稠合杂环的各个环可选自非芳香和芳香环。在示例性的实施方案中，芳香环(例如吡啶基)可以稠合至非芳香或芳香环，例如环己烷、环戊烷、吡咯烷、2，3-二氢呋喃或环己烯。“杂环”基团包括，例如，哌啶、哌嗪、吡咯烷、吗啉、嘧啶、苯并呋喃、吲哚、喹啉、内酯和内酰胺。示例性的“稠合杂环”包括苯并二氮杂环庚三烯、吲哚、喹啉、嘌呤和4，5，6，7-四氢苯并[d]噻唑。“杂环”可在任一个或多个能够带氢原子的位置被取代。
“单环”包括5-7元芳香碳环或杂芳基、3-7元环烷基或环烯基，和5-7元非芳香杂环基。示例性的单环基团包括取代的或未取代的杂环或碳环，例如，噻唑基、噁唑基、噁嗪基、噻嗪基、二硫杂环己烷基、二噁烷基、异噁唑基、异噻唑基、三唑基、呋喃基、四氢呋喃基、二氢呋喃基、吡喃基、四唑基、吡唑基、吡嗪基、哒嗪基、咪唑基、吡啶基、吡咯基、二氢吡咯基、吡咯烷基、哌啶基、哌嗪基、嘧啶基、吗啉基、四氢噻吩基、噻吩基、环己基、环戊基、环丙基、环丁基、环庚基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丙烷基、氧杂环丙烷基、氮杂环丙烷基和硫吗啉基。
如在此使用的“取代的”指的是用不是氢的原子或分子替换结构中的氢原子。可取代的原子(例如“可取代的氮”)是在至少一种共振形式中带有氢原子的原子。氢原子可以被取代为另一原子或基团，如CH3或OH基团。例如，哌啶分子中的氮是可取代的(如果该氮原子连接至氢原子)。例如，如果哌啶的氮连接至非氢的原子，则该氮是不可取代的。在任何共振形式不可能带有氢原子的原子是不可取代的。
本发明预计的取代基与变体的组合仅是形成稳定化合物的那些。本文所使用的术语“稳定的”是指化合物具有允许其制备的足够稳定性，且可使该化合物的完整性维持足够时间以用于本文中所详述的目的。
本文中所公开的化合物也包括经部分及完全氘代的变体。在一些实施方案中，氘代的变体可用于动力学研究。本领域技术人员可选择所述氘原子存在的部位。
本发明也包括本文所述的化合物的盐，特别是药学上可接受的盐。具有足够酸性、足够碱性或该二性的官能团的本发明化合物，可以和许多的无机碱、及无机与有机酸中的任一种反应形成盐。或者，本身带有电荷的化合物(例如具有季氮的化合物)可和适当抗衡离子(例如，卤离子如溴离子、氯离子或氟离子，特别是溴离子)形成盐。
一般用于形成酸加成盐的酸为无机酸，例如氢氯酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、磷酸等，及有机酸，例如对-甲苯磺酸、甲磺酸、草酸、对-溴苯基-磺酸、碳酸、琥珀酸、柠檬酸、苯甲酸、醋酸等。此类盐的实例包括硫酸盐、焦硫酸盐、硫酸氢盐、亚硫酸盐、亚硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸一氢盐、磷酸二氢盐、偏磷酸盐、焦磷酸盐、氯化物、溴化物、碘化物、醋酸盐、丙酸盐、癸酸盐、辛酸盐、丙烯酸盐、甲酸盐、异丁酸盐、己酸盐、庚酸盐、丙炔酸盐、草酸盐、丙二酸盐、琥珀酸盐、辛二酸盐、癸二酸盐、反丁烯二酸盐、顺丁烯二酸盐、丁炔-1，4-二酸盐、己炔-1，6-二酸盐、苯甲酸盐、氯苯甲酸盐、甲基苯甲酸盐、二硝基苯甲酸盐、羟基苯甲酸盐、甲氧基苯甲酸盐、酞酸盐、磺酸盐、二甲苯磺酸盐、苯基乙酸盐、苯基丙酸盐、苯基丁酸盐、柠檬酸盐、乳酸盐、γ-羟基丁酸盐、乙醇酸盐、酒石酸盐、甲磺酸盐、丙磺酸盐、萘-1-磺酸盐、萘-2-磺酸盐、扁桃酸盐等。
碱加成盐包括衍生自无机碱，例如铵或碱金属或碱土金属氢氧化物、碳酸盐、碳酸氢盐等的那些盐。因此此类可用于制备本发明盐的碱包括氢氧化钠、氢氧化钾、氢氧化铵、碳酸钾等。
根据另一实施方案，本发明提供了制备以上定义的化合物的方法。所述化合物可使用常规技术合成。有利地，这些化合物方便地从易于获得的起始原料合成。
用于合成本文所述的化合物的合成化学转化和方法是本领域已知的且包括，例如，以下所描述的那些：R.Larock，Comprehensive Organic Transformations(1989)；T.W.Greene and P.G.M.Wuts，Protective Groups in Organic Synthesis，2d.Ed.(1991)；L.Fieser and M.Fieser，Fieser and Fieser＇s Reagents for OrganicSynthesis(1994)；和L.Paquette，ed.，Encyclopedia of Reagents for OrganicSynthesis(1995)。
在一个示例性的实施方案中，该治疗性化合物可能穿过细胞的胞质膜。例如，化合物可具有至少约20％、50％、75％、80％、90％或95％的细胞-通透性。
本文所述的化合物也可具有一个或多个下列特性：该化合物可基本上对细胞或受试者无毒性；该化合物可为有机分子或具有2000amu或小于2000amu，1000amu或小于1000amu的小分子；该化合物可于正常大气条件下具有至少约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期；该化合物于溶液中可具有至少约30天、60天、120天、6个月或1年的半衰期；该化合物可于溶液中稳定，较白藜芦醇稳定至少约50％、2倍、5倍、10倍、30倍、50倍或100倍；该化合物可促进DNA修复因子Ku70的脱乙酰基化作用；该化合物可促进RelA/p65的脱乙酰基化作用；该化合物可增加一般转换率，及增强细胞对TNF-所诱发细胞凋亡的敏感性。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物在(例如体内)有效调节沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有抑制第I类组蛋白脱乙酰基酶(HDAC)、和/或第II类HDAC的任何实质能力。例如，在优选的实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物为以下调节沉默调节蛋白的化合物，其抑制HDAC I和/或HDAC II的EC50值是对活化沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的EC50值的至少5倍，且甚至优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。用于分析HDAC I和/或HDAC II活性的方法为本领域所熟知，且进行此类分析的试剂盒可市场上购得。参见例如，BioVision，Inc.(Mountain View，CA；网址biovision.com)及ThomasScientific(Swedesboro，NJ；网址thomassci.com)。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物不具有调节沉默调节蛋白同系物的任何实质能力。在一些实施方案中，人沉默调节蛋白的活化剂，在(例如活体内)有效活化人沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，可能不具有活化得自低等真核生物，特别是酵母或人病原体的沉默调节蛋白的任何实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物对活化酵母沉默调节蛋白(例如Sir2(如念珠菌属、酿酒酵母等))的EC50值是对于活化人沉默调节蛋白(例如SIRT1和/或SIRT3)脱乙酰基酶活性的EC50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。在另一实施方案中，得自低等真核生物(特别是酵母或人病原体)的沉默调节蛋白的抑制剂，在(例如活体内)有效抑制得自低等真核生物的沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有抑制得自人的沉默调节蛋白的任何实质能力。例如，沉默调节蛋白的抑制性化合物对抑制酵母沉默调节蛋白(例如Sir2(如念珠菌属、酿酒酵母等))的IC50值是对于抑制人沉默调节蛋白(例如SIRT1和/或SIRT3)的脱乙酰基酶活性的IC50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可具有调节一种或多种沉默调节蛋白同系物，诸如一种或多种人SIRT1、SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的能力。在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物具有调节SIRT1及SIRT3蛋白的能力。
在其它实施方案中，SIRT1调节剂在(例如活体内)有效调节人SIRT1的脱乙酰基酶活性的浓度下，不具有调节其它沉默调节蛋白同系物，诸如一种或多种人SIRT2、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的任何实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物可选择具有对调节人SIRT1脱乙酰基酶活性的ED50值，所对应的活性为调节一种或多种人SIRT2、SIRT3、SIRT3、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的ED50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍的那些化合物。在一些实施方案中，SIRT1调节剂不具有调节SIRT3蛋白的任何实质能力。
在其它实施方案中，SIRT3调节剂在有效调节人SIRT3的脱乙酰基酶活性的浓度(例如，在体内)不具有任何调节其它沉默调节蛋白蛋白同源物(例如人SIRT1、SIRT2、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7中的一个或多个)的实质能力。例如，调节沉默调节蛋白的化合物对调节一种或多种人SIRT1、SIRT2、SIRT4、SIRT5、SIRT6或SIRT7的ED50值是对调节人SIRT3脱乙酰基酶活性的ED50值的至少5倍，且甚至更优选至少10倍、100倍或甚至1000倍。在一个实施方案中，SIRT3调节剂不具有调节SIRT1蛋白的任何实质能力。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物对沉默调节蛋白的结合亲和力为约10-9M、10-10M、10-11M、10-12M或以下。调节沉默调节蛋白的化合物可减少(活化剂)或增加(抑制剂)沉默调节蛋白对于其底物或NAD+(或其它辅因子)的表观Km值达至少约2、3、4、5、10、20、30、50或100倍。在一些实施方案中，Km值使用本文所述的质谱分析测定。优选的活化化合物减少沉默调节蛋白对于其底物或辅因子的Km值，至较由白藜芦醇在相似浓度下所引起的更大的程度，或减少沉默调节蛋白对于其底物或辅因子的Km值，相似于由白藜芦醇在较低浓度下所引起的Km值。调节沉默调节蛋白的化合物可增加沉默调节蛋白的Vmax值至少约2、3、4、5、10、20、30、50或100倍。调节沉默调节蛋白的化合物对调节SIRT1和/或SIRT3蛋白的脱乙酰基酶活性的ED50值少于约1nM，少于约10nM，少于约100nM，少于约1μM，少于约10μM，少于约100μM，或从约1-10nM，从约10-100nM，从约0.1-1μM，从约1-10μM或从约10-100μM。调节沉默调节蛋白的化合物可调节SIRT1和/或SIRT3蛋白的脱乙酰基酶活性达至少约5、10、20、30、50或100倍，通过细胞分析或以细胞为基础的分析(cell based assay)测定。调节沉默调节蛋白的化合物可诱导沉默调节蛋白的脱乙酰基酶活性，相对于相同浓度的白藜芦醇为至少约10％、30％、50％、80％、2倍、5倍、10倍、50倍或100倍。调节沉默调节蛋白的化合物对调节SIRT1和/或SIRT3的ED50值是对调节SIRT5的ED50值的至少约10倍、20倍、30倍、50倍。
3.示例性的用途
在一些方面，本发明提供了用于调节沉默调节蛋白的水平和/或活性的方法，及其使用方法。
在一些实施方案中，本发明提供了使用调节沉默调节蛋白的化合物的方法，其中调节沉默调节蛋白的化合物活化沉默调节蛋白，例如增加沉默调节蛋白的水平和/或活性。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于各种治疗应用，包括例如增加细胞寿命，及治疗和/或预防许多种疾病与病症，包括例如与老化或应激有关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖、神经变性疾病、心血管疾病、凝血病症、炎症、癌症和/或潮红等。该方法包含将药学上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物(例如调节沉默调节蛋白的化合物)给药于对其有需要的患者。
基于前述，本发明可以用于治疗与老化或应激有关的其它疾病或病症、糖尿病和其它代谢功能障碍和相关病症，包括但不限于脂肪肝、脂肪性肝炎和肥胖症。本发明还可用于治疗神经变性疾病、心血管疾病、癌症、炎性疾病，其包括但不限于银屑病、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症，以及SIRT1表达或活性降低导致的其它疾病或病症。
不希望受限于理论，但相信本发明的活化剂可在沉默调节蛋白内的相同部位(例如，活性位置或影响该活性位置的Km或Vmax的位置)与沉默调节蛋白相互作用。认为此即一些类沉默调节蛋白的活化剂与抑制剂为何能具有实质结构相似性的原因。
在一些实施方案中，本文中所述的调节沉默调节蛋白的化合物可单独使用或与其它化合物组合使用。在一些实施方案中，可将两种或更多种调节沉默调节蛋白的化合物的混合物给药于对其有需要的受试者。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种下列化合物一起给药：白藜芦醇、紫铆花素、非瑟素、白皮杉醇(piceatannol)或槲皮素。在一个示例性的实施方案中，将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与烟酸或烟酰胺核糖苷组合给药。
在另一个实施方案中，减少沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种下列化合物一起给药：烟酰胺(NAM)、苏拉明(suramin)；NF023(一种G-蛋白拮抗剂)；NF279(一种嘌呤能受体拮抗剂)；托洛索(Trolox)(6-羟基-2，5，7，8-四甲基色满-2-甲酸)；(-)-表没食子儿茶酚(羟基位于3，5，7，3′，4′，5′位)；(-)-表没食子儿茶酚没食子酸酯(羟基位于5，7，3′，4′，5′位，且没食子酸酯位于3位)；氯化花青素(3，5，7，3′，4′-五羟基氯化黄(flavylium)盐)；氯化翠雀色素(3，5，7，3′，4′，5′-六羟基氯化黄盐)；杨梅黄酮(大麻双酮；3，5，7，3′，4′，5′-六羟基黄酮)；3，7，3′，4′，5′-五羟基黄酮；棉黄素(3，5，7，8，3′，4′-六羟基黄酮)、sirtinol；及splitomicin。
在另一实施方案中，一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物可与一种或多种用于治疗或预防各种疾病包括例如癌症、糖尿病、神经变性疾病、心血管疾病、凝血、炎症、潮红、肥胖、老化、应激等的治疗剂一起进行给药。在多种实施方案中，包含调节沉默调节蛋白的化合物的组合疗法可涉及(1)包含一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种治疗剂(例如，一种或多种于本文中所描述的治疗剂)的药物组合物；及(2)共同给药一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种治疗剂，其中所述调节沉默调节蛋白的化合物与治疗剂尚未配制在同一组合物中(但是可存在于相同试剂盒或包装，例如泡罩包装或其它多隔室包装内；存在于可由使用者自行分开的相连结的、分别密封的容器(例如锡箔小袋)内；或存在于其中该化合物与其它治疗剂处于分开的容器中的试剂盒内)。当使用分开的制剂时，调节沉默调节蛋白的化合物可与另一治疗剂的给药同时、间歇、交错、在其之前、在其之后，或这些方式的组合进行给药。
在一些实施方案中，使用本文所述的化合物以减轻、预防或治疗疾病或障碍的方法也可包括增加沉默调节蛋白(例如人SIRT1、SIRT2和/或SIRT3，或其同系物)的蛋白水平。增加蛋白水平可通过将编码沉默调节蛋白的一个或多个核酸拷贝引入细胞中而完成。例如，可通过将编码沉默调节蛋白的核酸引入哺乳动物细胞中，而增加哺乳动物细胞中沉默调节蛋白的水平，例如通过将编码示于GenBank登录号NP_036370中的氨基酸序列的核酸引入，而增加SIRT1的水平，和/或通过将编码示于GenBank登录号AAH01042中的氨基酸序列的核酸引入，而增加SIRT3的水平。
经引入细胞中以增加沉默调节蛋白水平的核酸，可编码与沉默调节蛋白(例如SIRT1和/或SIRT3蛋白)的序列至少约80％、85％、90％、95％、98％或99％相同的蛋白。例如，编码该蛋白的核酸可与编码SIRT1(例如GenBank登录号NM_012238)和/或SIRT3(例如GenBank登录号BC001042)蛋白的核酸至少约80％、85％、90％、95％、98％或99％相同。核酸也可为优选于严格杂交条件下与编码野生型沉默调节蛋白(例如SIRT1和/或SIRT3蛋白)的核酸杂交的核酸。严格杂交条件可包括在0.2×SSC中于65℃杂交并且清洗。当使用编码与野生型沉默调节蛋白不同的蛋白(例如其为野生型沉默调节蛋白的片段的蛋白)的核酸时，该蛋白优选是生物学活性的，例如能够进行脱乙酰基化作用。仅需要在细胞中表达沉默调节蛋白具有生物学活性的部分。例如，与具有GenBank登录号NP_036370的野生型SIRT1不同的蛋白，优选含有其核心结构。该核心结构有时指GenBank登录号NP_036370的氨基酸62-293，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸237至932编码，其包含NAD结合以及底物结合结构域。SIRT1的核心结构域也可指GenBank登录号NP_036370的大约氨基酸261至447，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸834至1394所编码；指GenBank登录号NP_036370的大约氨基酸242至493，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸777至1532所编码；或指GenBank登录号NP_036370的大约氨基酸254至495，其由GenBank登录号NM_012238的核苷酸813至1538所编码。可根据本领域已知的方法测定蛋白是否保留生物功能，例如脱乙酰基化能力。
在一些实施方案中，使用调节沉默调节蛋白的化合物以减轻、预防或治疗疾病或障碍的方法也可包括降低沉默调节蛋白(例如人SIRT1、SIRT2和/或SIRT3，或其同系物)的蛋白水平。降低沉默调节蛋白水平可根据本领域已知的方法实现。例如，可于细胞中表达靶向沉默调节蛋白的siRNA、反义核酸或核酶。也可使用显性阴性(dominant negative)的沉默调节蛋白的突变体，例如不能进行脱乙酰基化的突变体。例如，可使用经描述于例如Luo等人(2001)Cell 107：137中的SIRT1突变体H363Y。或者，可使用抑制转录作用的试剂。
用于调节沉默调节蛋白水平的方法也包括调节编码沉默调节蛋白的基因转录作用的方法，稳定化/去稳定化相对应mRNA的方法，及本领域已知的其它方法。
老化/应激
在一个方面，本发明提供通过将细胞与本发明的增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物接触，而延长细胞寿命、增加细胞增殖能力、减缓细胞老化、促进细胞存活、延迟细胞老化、模拟摄热量限制功效、增加细胞对应激的抗性或防止细胞凋亡的方法。在一个示例性的实施方案中，该方法包含将细胞与调节沉默调节蛋白的化合物接触。
本文所述的方法可用于增加细胞、特别是初生细胞(即得自生物体，例如人的细胞)在细胞培养物中可保持存活的时间量。胚胎干细胞(ES)与多潜能细胞(pluripotentcell)及由其分化的细胞，也可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物来处理，以使细胞或其子代在培养物中保持较长的时间。此类细胞也可用于例如在进行离体修饰(ex vivo modification)后移植入受试者中。
在一个方面，可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理要长时间保存的细胞。细胞可存在于悬浮液(例如血细胞、血清、生物学生长培养基等)中，或存在于组织或器官中。例如，可用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理收集自个体的供输血的血液，使血细胞保存较长的时间。此外，用于法医目的血液也可使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物进行保存。其它可经处理以延长其寿命或保护其对抗凋亡的细胞，包括供消耗的细胞例如得自非人哺乳动物的细胞(例如肉类)，或植物细胞(例如蔬菜)。
也可在哺乳动物、植物、昆虫或微生物的发育及生长期施用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以例如改变、减缓或加速发育和/或生长过程。
在另一个方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于处理用于供移植或细胞疗法的细胞，包括例如固体组织移植物、器官移植物、细胞悬浮液、干细胞、骨髓细胞等。细胞或组织可为自体移植物、同种异基因移植物(allograft)、同种同基因移植物(syngraft)或异种移植物。可将细胞或组织于给药/植入之前、于给药/植入的同时、和/或于给药/植入受试者之后，以调节沉默调节蛋白的化合物进行处理。可将细胞或组织于从供给者个体取出之前、于从供给者个体取出后离体地(exvivo)、或于植入接受体之后进行处理。例如，可用调节沉默调节蛋白的化合物对供给者或接受体个体进行全身性处理，或用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物对细胞/组织的子集(subset)进行局部性处理。在一些实施方案中，可另外地用另一种用于延长移植物存活的治疗剂，例如免疫抑制剂、细胞因子、血管生成因子等处理细胞或组织或供给者/接受者个体。
在其它的实施方案中，可在体内用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物处理细胞，以增加其寿命或防止细胞凋亡。例如，可通过用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物来处理皮肤或表皮细胞，而保护皮肤以防老化(例如，形成皱纹、丧失弹性等)。在一个示例性的实施方案中，将皮肤与包含增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的药物组合物或化妆品组合物接触。可根据本文所述方法处理的示例性皮肤疾病或皮肤病症，包括与炎症、晒伤或自然老化相关或由其引起的病症或疾病。例如，组合物可用于预防或治疗接触性皮炎(包括刺激性接触性皮炎与过敏性接触性皮炎)、特应性皮炎(也称作变应性湿疹)、光化性角化病、角质化病症(包括湿疹)、大疱性表皮松解病(包括天疱疮)、剥脱性皮炎、脂溢性皮炎、红斑(包括多形红斑与结节性红斑)、由日晒或其它光源引起的损伤、盘状红斑性狼疮、皮肌炎、银屑病、皮肤癌及自然老化作用。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗创伤和/或烧伤以促进愈合，包括例如第一度、第二度或第三度烧伤和/或热烧伤、化学烧伤或电烧伤。可将制剂局部地给药至皮肤或粘膜组织。
包含一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的局部制剂，也可用作为预防性(例如化学预防性)组合物。当使用于化学预防性方法中时，在特定个体中出现可见病症之前处理易感染的皮肤。
可将调节沉默调节蛋白的化合物局部或全身性地递送至受试者。在一个实施方案中，通过注射、局部制剂等，将调节沉默调节蛋白的化合物局部地给药至受试者的组织或器官。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防因受试者中细胞老化所诱发或加重的疾病或障碍；用于减低受试者老化速度(例如在开始老化之后)的方法；用于延长受试者寿命的方法；用于治疗或预防与寿命有关的疾病或障碍的方法；用于治疗或预防与细胞增殖能力有关的疾病或障碍的方法；及用于治疗或预防由细胞损伤或死亡所导致的疾病或障碍的方法。在一些实施方案中，该方法并非通过减低那些缩短受试者寿命的疾病的发生率而起作用。在一些实施方案中，该方法并非通过减低由疾病(例如癌症)所引起的致死率而起作用。
在另一个实施方案中，为了一般性地增加受试者的细胞寿命以及为了保护其细胞对抗应激和/或对抗凋亡的目的，可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者。可以相信以本文所述的化合物治疗受试者，类似于使受试者经历毒物刺激作用(hormesis)即，对生物体有益且可延长其寿命的温和应激。
可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，以预防老化及与老化有关的后果或疾病，例如中风、心脏病、心脏衰竭、关节炎、高血压及阿尔茨海默病。其它可被治疗的病症包括眼疾病，例如与眼睛老化有关的眼科病症，例如白内障、青光眼及黄斑变性。也可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，用来治疗与细胞死亡有关的疾病，例如慢性疾病，以保护细胞不死亡的目的。示例性疾病包括那些与神经细胞死亡、神经元功能障碍、或肌肉细胞死亡或功能障碍有关的疾病，例如帕金森病、阿尔茨海默病、多发性硬化、肌萎缩性侧索硬化(amniotropic lateral sclerosis)与肌肉营养不良；AIDS；暴发性肝炎；与脑退化相关的疾病，例如克-雅病(Creutzfeldt-Jakob disease)、色素性视网膜炎与小脑变性；脊髓发育不良例如再生障碍性贫血；缺血性疾病例如心肌梗塞与中风；肝病例如酒精性肝炎、乙型肝炎与丙型肝炎；关节疾病例如骨关节炎；动脉粥样硬化；脱发；由UV光引起的皮肤损伤；扁平苔藓；皮肤萎缩；白内障；以及移植物排斥。细胞死亡也可由手术、药物治疗、化学品接触或放射接触所引起。
也可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于患有急性疾病，例如器官或组织伤害的受试者，例如患有中风或心肌梗塞的受试者，或罹患脊髓损伤的受试者。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于修复酒精性肝(alcoholic’liver)。
心血管疾病
在另一个实施方案中，本发明提供一种治疗和/或预防心血管疾病的方法，其通过将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于有需要的受试者。
可使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗或预防的心血管疾病，包括心肌病或心肌炎，例如特发性心肌病、代谢性心肌病、酒精中毒性心肌病、药物引发的心肌病、缺血性心肌病及高血压性心肌病。也可使用本文所述化合物与方法治疗或预防的疾病为例如主动脉、冠状动脉、颈动脉、脑血管动脉、肾动脉、髂动脉、股动脉及腘动脉(popliteal arteries)等主要血管的粥样硬化病症(大血管疾病)。其它可被治疗或预防的血管疾病包括那些与血小板聚集、视网膜小动脉、肾小球小动脉(glomerulararteriole)、神经滋养血管(vasa nervorum)、心小动脉，及眼、肾脏、心脏与中枢及周围神经系统相关的毛细血管床相关的血管疾病。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加个体血浆内的HDL水平。
可以用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的其它病症包括再狭窄(例如在冠状动脉介入治疗后)，及与高密度及低密度胆固醇异常水平有关的病症。
在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与另一种心血管药剂一起给药。在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与抗心率失常药剂一起给药。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以作为组合疗法的一部分与其它心血管药剂一起给药。
细胞死亡/癌症
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可给药于最近已接受或可能将接受一定剂量辐射或毒素的受试者。在一个实施方案中，接受辐射或毒素的剂量作为工作相关程序或医药程序的一部分，例如作为预防措施(prophylacticmeasure)给药。在一些实施方案中，非故意地接受辐射或毒素的暴露。在这种情况下，优选在暴露后尽快给药所述化合物，以抑制细胞凋亡及后续发展成急性辐射综合征。
调节沉默调节蛋白的化合物还可以用于治疗和/或预防癌症。在一些实施方案中，该增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗和/或预防癌症。能量限制已经与年龄相关疾病(例如癌症)的发病率的降低建立起了联系。相应地，沉默调节蛋白的水平和/或活性的增加可有利地用于治疗和/或预防年龄相关疾病(例如癌症)的发病率。可以利用调节沉默调节蛋白的化合物治疗的示例性的癌症为脑部和肾脏的癌症；激素-依赖的癌症，包括乳腺癌、前列腺癌、睾丸癌和卵巢癌；淋巴瘤和白血病。在与实体肿瘤有关的癌症中，可将调节性化合物直接给药于该肿瘤。血液细胞的癌症(例如白血病)可通过将调节性化合物给药至血流中或骨髓中而进行治疗。也可治疗良性细胞生长例如疣。可被治疗的其它疾病包括自身免疫疾病，例如全身性红斑狼疮、硬皮病及关节炎，其中应将自身免疫细胞去除。也可通过给药调节沉默调节蛋白的化合物治疗与病毒感染(例如疱疹、HIV、腺病毒及HTLV-1)有关的恶性与良性病症。或者，可自受试者获取细胞，经体外处理以去除一些不希望的细胞(例如癌细胞)，并再给药于相同或不同的受试者。
也可将化学治疗剂与本文所述具有抗癌活性的调节性化合物(例如诱发细胞凋亡的化合物、减短寿命的化合物或使细胞对应激敏感的化合物)共同给药。化学治疗剂本身可与本文所述可诱发细胞死亡或减短寿命或增加对应激敏感的调节沉默调节蛋白的化合物，和/或与其它化学治疗剂组合使用。除了常规化学治疗剂之外，本文所述的调节沉默调节蛋白的化合物也可与反义RNA、RNAi，或其它抑制会引起不希望细胞增殖的细胞组分表达的多核苷酸一起使用。
包含调节沉默调节蛋白的化合物与常规化学治疗剂的组合疗法可能优于本领域已知的组合疗法，因为该组合可使常规化学治疗剂在较低剂量下起更大功效。在优选的实施方案中，对于化学治疗剂或常规化学治疗剂的组合的有效剂量(ED50)而言，当与调节沉默调节蛋白的化合物组合使用时，所对应的活性为单独的该化学治疗剂的ED50的至少2倍，且甚至更优选5倍、10倍或甚至25倍。反之，对于此类化学治疗剂或此类化学治疗剂的组合的治疗指数(TI)而言，当与本文所述调节沉默调节蛋白的化合物组合使用时，相较于单独的常规化学治疗方案的TI为至少2倍，且甚至更优选地高5倍、10倍或甚至25倍。
神经元疾病/病症
在一些方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗患有神经变性疾病，及中枢神经系统(CNS)、脊髓或周围神经系统(PNS)的创伤或机械性损伤的患者。神经变性疾病通常涉及人脑部质量与体积的减少，其可能由于脑细胞萎缩和/或死亡所致，这比健康人因老化所引起的人脑部质量与体积的减少更显著。神经变性疾病可在执行长期正常脑功能后，由于特定脑区域的渐进性退化(例如神经细胞功能不足及死亡)而逐渐进展。另一方面，神经变性疾病可快速发作(onset)，例如那些与创伤或毒素相有关的神经变性疾病。脑退化的实际发作可能较临床表达早许多年。神经变性疾病的实例包括(但不限定于)阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)、亨廷顿病(HD)、肌萎缩性侧索硬化(ALS；罗杰里格氏病(Lou Gehrig’s disease))、弥散性路易体病(diffuse Lewy bodydisease)、舞蹈病-棘红细胞增多症、原发性侧索硬化、眼疾病(眼神经炎)、化学疗法诱发的神经病变(例如来自长春新碱、紫杉醇、硼替佐米)、糖尿病诱发的神经病变及佛里德赖希共济失调。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗这些病症及如下文所描述的其它病症。
AD为导致记忆丧失、异常行为、个性改变及思考能力衰退的CNS病症。这些丧失与特定类型的脑细胞死亡、及脑细胞间的连结与其支撑网络(例如神经胶质细胞)损坏有关。最早期症状包括丧失最近的记忆、错误判断及个性改变。PD为导致身体运动不受控制、僵硬、颤抖及运动障碍的CNS病症，与脑部制备多巴胺的区域中的脑细胞死亡关联。ALS(运动神经元疾病)为攻击运动神经元(CNS中将脑与骨骼肌连结的组分)的CNS病症。
HD为另一种引起运动不受控制、智力丧失及情绪失调的神经变性疾病。泰-萨病(Tay-Sachs disease)与桑德霍夫病(Sandhoff disease)，是其中GM2神经节苷脂与β-氨基己糖苷酶(hexosaminidase)的相关糖脂类底物累积于神经系统中并引发急性神经变性的糖脂储存疾病(glycolipid storage diseases)。
已熟知，细胞凋亡在免疫系统的AIDS病变方面起作用。然而，HIV-1也诱发可以用本发明的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的神经学疾病。
神经元丧失(neuronal loss)也为朊病毒病(prion diseases)(例如人克-雅病、牛BSE(疯牛病)、绵羊与山羊的瘙痒病及猫的猫类海绵状脑病(FSE))的突出特征。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防由这上述朊病毒病引起的神经元丧失。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防任何涉及轴突病(axonopathy)的疾病或障碍。远端轴突病为一类由周围神经系统(PNS)神经元的某种代谢或毒性错乱所产生的周围神经病。其为神经对代谢或毒性紊乱的最通常响应，而因此可能由代谢性疾病例如糖尿病、肾衰竭、缺乏综合征例如营养不良及酒精中毒，或由毒素或药物的作用所引起。那些患有远端轴突病的患者通常呈现对称性手套-袜样感觉-运动紊乱。在受影响区域也发生深层腱反射及自主神经系统(ANS)功能丧失或缩减。
糖尿病性神经病变为与糖尿病有关的神经病症。可能与糖尿病性神经病变有关的较常见病症包括第三神经麻痹；单一神经病变；多发性单神经炎；糖尿病性肌肉萎缩；疼痛性多神经病；自主神经病；及胸腹神经病。
周围神经病变为用于对周围神经系统的神经损伤的医学术语，其可能是由神经疾病或由全身性疾病的副作用所引起。周围神经病变的主要原因包括癫痫发作、营养缺乏及HIV，虽然糖尿病是最可能的原因。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防多发性硬化(MS)，包括复发性MS与单症状MS，及其它脱髓鞘病症(demyelinating condition)，例如慢性炎性脱髓鞘多神经病(CIDP)或与其有关的病症。
在又一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于治疗神经创伤，包括由于疾病、损伤(包括手术介入)或环境创伤(例如神经毒素、酒精中毒等)所引起的创伤。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于预防、治疗及缓解各种PNS病症的症状。术语“周围神经病变”涵括广范围的位于脑与脊髓外部的神经(即周围神经)已经受损的病症。周围神经病变也可指周围神经炎，或者如果涉及许多神经时，可使用术语多神经病或多神经炎。
可以用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物治疗的PNS疾病包括：糖尿病、麻疯、夏-马-图三氏病(Charcot-Marie-Tooth disease)、格-巴二氏综合征(Guillain-Barré syndrome)和壁神经丛神经病(Brachial Plexus Neuropathy)(颈与第一胸根、神经干、索(cord)及臂神经丛的周围神经组分的疾病)。
在另一个实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防多谷氨酰胺疾病。示例性多谷胺酰胺疾病包括脊髓延髓肌肉萎缩(肯尼迪病)、亨廷顿病(HD)、齿状核红核苍白球丘脑下部核萎缩(Dentatorubral-pallidoluysian atrophy)(郝乌河综合征(HawRiver syndrome))、1型脊髓小脑性共济失调、2型脊髓小脑性共济失调、3型脊髓小脑性共济失调(马-约病(Machado-Joseph disease))、6型脊髓小脑性共济失调、7型脊髓小脑性共济失调及17型脊髓小脑性共济失调。
在一些实施方案中，本发明提供治疗中枢神经系统细胞以防止因响应于血液流向细胞减低所引起的伤害的方法。通常可被预防的伤害严重度，将大部分取决于血液流向细胞的减低程度及减少的持续时间。在一个实施方案中，可预防凋亡性或坏死细胞死亡。在再一个实施方案中，可预防缺血所介导的伤害，例如细胞毒性水肿或中枢神经系统组织缺氧血症。在各实施方案中，中枢神经系统细胞可为脊髓细胞或脑细胞。
另一方面包括将调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者，以治疗中枢神经系统缺血性病症。有许多中枢神经系统缺血性病症可由本文所述的调节沉默调节蛋白的化合物治疗。在一个实施方案中，缺血性病症为导致任何类型缺血性中枢神经系统损伤，例如凋亡性或坏死性细胞死亡、细胞毒性水肿或中枢神经系统组织缺氧的中风。中风可能影响脑部任何区域，或由任何一般已知会导致中风发生的病因所引起。在该实施方案的另一选择中，中风为脑干中风。在本实施方案的另一选择中，中风为小脑中风。在本实施方案的另一选择中，中风为栓塞性中风(embolic stroke)。在本实施方案的另一选择中，中风为出血性中风。在其它实施方案中，中风为血栓性中风。
在另一方面，可给药调节沉默调节蛋白的化合物，以在中枢神经系统缺血性病症后减少缺血核心的梗塞大小。而且，也可有益地给药调节沉默调节蛋白的化合物，以在中枢神经系统缺血性病症后，减少缺血性半影或过渡区域的大小。
在一个实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防神经变性性病症、或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种沉默调节蛋白的活化剂与一种或多种抗神经变性药物。
凝血病症
在其它方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防凝血病症(或止血病症)。如可交换地用于本文，术语“止血”、“凝血”及“血液凝结”是指控制流血，包括血管收缩与凝结的生理特性。凝血协助维持哺乳动物在受伤、炎症、疾病、先天缺陷、功能障碍或其它破坏(disruption)后的循环完整性。而且，血块的形成在受伤的情况中不仅限制出血(止血作用)，也可能在动脉粥样硬化疾病方面，因阻塞重要动脉或静脉而导致严重器官损伤及死亡。因此血栓是在错误时间及地点形成的血液凝块。
于是，本发明提供目的在于抑制血液凝块形成，以预防或治疗凝血病症，例如心肌梗塞、中风、因周围动脉疾病的肢体损失或肺栓塞的抗凝结与抗血栓治疗。
本文可交换地使用的术语“调制止血”及“调节止血”包括诱导(例如刺激或增加)止血，也包括抑制(例如减低或减少)止血。
在一方面，本发明提供通过给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减低或抑制受试者中止血的方法。本文所公开的组合物或方法可用于治疗或预防血栓形成疾病。本文使用的术语“血栓形成病症”包括以过量或不希望的凝血或止血活性，或凝固性过高的状态为特征的任何病症或疾病。血栓形成疾病包括涉及血小板粘附与血栓形成的疾病或障碍，且可能显示为形成血栓的可能性增加，例如形成血栓数量增加、在低年龄期(early age)出现血栓形成、血栓形成的家族性倾向(familialtendency towards thrombosis)及在罕见部位(unusual site)出现血栓形成。
在另一个实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防凝血病症，或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，与一种或多种抗凝结或抗血栓形成药物。
体重控制
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防受试者的体重增加或肥胖。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于例如治疗或预防遗传性肥胖症、饮食性肥胖症、激素相关的肥胖症、与给药药物有关的肥胖症，用于减轻受试者体重或防止受试者体重增加。需要此类治疗的受试者可为其已经肥胖、有可能变成肥胖、过重或有可能变成过重的受试者。可能变成肥胖或过重的受试者，可例如基于家族史、遗传学、饮食、活动程度、药物摄取或其各种不同组合来确定。
在其它的实施方案中，可将增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物给药于患有各种可通过促进受试者的体重减轻而治疗或预防的其它疾病与病症。此类疾病包括例如高血压、血压过高、高血胆固醇、血脂异常、II型糖尿病、胰岛素抵抗、葡萄糖耐受不良、高胰岛素血症、冠心病、心绞痛、充血性心力衰竭、中风、胆结石、胆囊炎与胆石病、痛风、骨关节炎、阻碍性睡眠呼吸暂停与呼吸问题、一些类型癌症(例如子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌与结肠癌)、妊娠并发症、雌性生殖健康变差(例如月经不规则、不孕、不规则排卵)、膀胱控制问题(例如压迫性尿失禁)；尿酸肾石病；精神性病症(例如忧郁、进食障碍病(eating disorders)、体象障碍与自尊降低)。最后，患有AIDS的患者会对于AIDS的组合疗法响应，而发展成脂肪营养障碍或胰岛素抵抗。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于在体外或体内抑制脂肪形成或脂肪细胞分化。此类方法可用于治疗或预防肥胖症。
在其它实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低食欲和/或增加饱食感，因此引起体重减轻或避免体重增加。需要此类治疗的受试者可为已经过重、肥胖的受试者，或有可能变成过重或肥胖的受试者。该方法包含将一定剂量(例如呈丸剂(pill)的形式)每日或每二日或一周一次给药于受试者。该剂量可为“食欲减低剂量”。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可以以治疗或预防体重增加或肥胖症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种抗肥胖剂组合给药。
在另一个实施方案中，可给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减低由药物引发的体重增加。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，能够与可以刺激食欲或引起体重增加(尤其是由于除了保留水分以外的因素引起的体重增加)的药物通过组合疗法进行给药。
代谢病症/糖尿病
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防代谢病症，例如胰岛素抵抗、前期糖尿病、II型糖尿病、和/或其并发症。增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的给药可增加受试者的胰岛素敏感性和/或减低胰岛素水平。需要此类治疗的受试者可为具有胰岛素抵抗或II型糖尿病的其它前驱症状(precursor symptom)、具有II型糖尿病或有可能发展任何这些病症的受试者。例如，该受试者可为具有胰岛素抵抗，例如具有高胰岛素循环水平和/或相关联病症，例如高血脂症、脂肪生成障碍、高胆固醇血症、葡萄糖耐受不良、高血糖水平、综合征X的其它表征、高血压、动脉粥样硬化及脂肪代谢障碍的受试者。
在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可以以治疗或预防代谢病症的组合疗法进行给药。例如，可将一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物与一种或多种抗糖尿病剂组合给药。
炎性疾病
在另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防与炎症有关的疾病或障碍。可于引发炎症发作前、发作时或发作之后给药增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物。当预防性使用时，该化合物优选在任何炎症反应或症状之前给药。该化合物的给药可预防或减弱炎症反应或症状。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防变态反应及呼吸病症，包括哮喘、支气管炎、肺纤维化、过敏性鼻炎、氧气毒性、肺气肿、慢性支气管炎、急性呼吸窘迫综合征及任何慢性闭塞性肺病(COPD)。该化合物可用于治疗肝炎感染，包括乙型肝炎及丙型肝炎。
此外，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗自身免疫疾病，和/或与自身免疫疾病有关的炎症，例如关节炎，包括类风湿性关节炎、银屑病关节炎和强直性脊柱炎，以及器官-组织自身免疫疾病(例如雷诺氏综合征(Raynaud′s syndrome))、溃疡性结肠炎、节段性回肠炎、口腔粘膜炎、硬皮病、重症肌无力、移植排斥、内毒素休克、脓毒病、银屑病、湿疹、皮炎、多发性硬化、自身免疫甲状腺炎、葡萄膜炎、全身性红斑狼疮、阿狄森病(Addison′s disease)、自身免疫多腺疾病(也称为自身免疫多腺综合征)及格雷夫斯病。
在一些具体实施方案中，一种或多种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可单独使用，或与用于治疗或预防炎症的其它化合物组合使用。
潮红
另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低作为病症的症状的潮红和/或热潮红(hot flash)的发生率或严重性。例如，主题方法(subject method)包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，单独或与其它药剂组合使用，以减低癌症患者的潮红和/或热潮红的发生率或严重性。在其它实施方案中，该方法提供使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物以减低绝经及绝经后妇女的潮红和/或热潮红的发生率或严重性。
另一方面，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用作减低作为另一种药物疗法的副作用的潮红和/或热潮红(例如，药物诱发的潮红)的发生率或严重度的疗法。在一些实施方案中，用于治疗和/或预防药物诱发的潮红的方法包括将含有至少一种诱发潮红的化合物与至少一种增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物的制剂给药于有需要的患者。在其它实施方案中，用于治疗药物所诱发的潮红的方法包括，分别给药一种或多种诱发潮红的化合物与一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物，例如其中调节沉默调节蛋白的化合物与潮红诱发药物未经配制于同一组合物中。当使用分开的制剂时，可将调节沉默调节蛋白的化合物(1)在与潮红诱发药物的给药的同时给药，(2)与潮红诱发药物一起周期性地给药，(3)与潮红诱发药物错开给药，(4)在潮红诱发药物给药之前给药，(5)于潮红诱发剂给药之后给药，及(6)以其各种不同组合进行给药。示例性潮红诱发药物包括例如烟酸、雷洛昔芬(faloxifene)、抗忧郁剂、抗精神病药、化学治疗剂、钙通道阻断剂及抗生素。
在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少血管扩张剂或抗血脂药(包括抗胆固醇血症药物与抗脂肪肝药)的潮红副作用。在一个示例性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少与给药烟酸有关的潮红。
在另一个实施方案中，本发明提供治疗和/或预防高血脂症并减低潮红副作用的方法。在另一代表性的实施方案中，该方法包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减少雷洛昔芬的潮红副作用。在另一代表性的实施方案中，该方法包括使用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，以减少抗忧郁药或抗精神病药的潮红副作用。举例而言，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与5-羟色胺再吸收抑制剂，或5HT2受体拮抗剂共同使用(分开或一起给药)。
在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用作5-羟色胺再吸收抑制剂(SRI)的治疗的一部分以减少潮红。在另一代表性的实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少化学治疗剂如环磷酰胺及他莫昔芬的潮红副作用。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少钙通道阻断剂如氨氯地平的潮红副作用。
在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于减少抗生素的潮红副作用。例如，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可与左氧氟沙星组合使用。
眼科病症
本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗视力损伤的方法，该方法通过将治疗剂量的选自本文所公开化合物的沉默调节蛋白的调节剂或其药学上可接受的盐、前药或代谢衍生物给药于患者。
在本发明的一些方面，视力损伤是由于对视神经或中枢神经系统的伤害所引起。在具体的实施方案中，视神经伤害由高眼内压(例如由青光眼引起的高眼内压)所引起。在其它具体的实施方案中，视神经伤害由神经肿胀(其往往与感染或免疫(例如自身免疫)反应(如在视神经炎中)有关)所引起。
在本发明的一些方面，视力损伤由视网膜的伤害所引起。在具体的实施方案中，视网膜的伤害由流向眼睛的血流中的障碍(例如，动脉粥样硬化、血管炎)所引起。在具体的实施方案中，视网膜的伤害是由黄斑破坏(disruption of macula)(例如，渗出性或非渗出性黄斑变性)所引起。
示例性视网膜的疾病包括渗出性年龄相关的黄斑变性、非渗出性年龄相关的黄斑变性、视网膜电子假体和RPE移植年龄相关的黄斑变性、急性多病灶板状色素上皮病、急性视网膜坏死、先天性黄斑变性、视网膜分支动脉闭塞、视网膜分支静脉闭塞、癌症关联和相关的自身免疫视网膜病、视网膜中央动脉阻塞、视网膜中央静脉阻塞、中心性浆液性脉络膜视网膜病变(Central Serous Chorioretinopathy)、伊尔斯病(Eales Disease)、黄斑前膜(Epimacular Membrane)、点阵变性、巨动脉瘤、糖尿病性黄斑水肿、艾尔温-盖斯黄斑水肿(Irvine-Gass Macular Edema)、黄斑裂孔(Macular Hole)、视网膜下新血管膜、弥散性单侧亚急性视神经视网膜炎、非假晶状体囊样黄斑水肿(Nonpseudophakic Cystoid MacularEdema)、眼假组织胞浆菌病综合征(Presumed Ocular Histoplasmosis Syndrome)、渗出性视网膜脱离、手术后视网膜脱离、增殖性视网膜脱离、孔源性视网膜脱离、牵引性(tractional)视网膜脱离、色素性视网膜炎、CMV视网膜炎、成视网膜细胞瘤、早熟性视网膜病、散弹状视网膜病(Birdshot Retinopathy)、背景性糖尿病性视网膜病、增殖性糖尿病性视网膜病、血红蛋白病性视网膜病、普尔沙视网膜病(Purtscher Retinopathy)、瓦尔萨尔瓦视网膜病(Valsalva Retinopathy)、青年性视网膜劈裂症(Juvenile Retinoschisis)、老年性视网膜劈裂症、泰尔松综合征(Terson Syndrome)及白点综合征(White DotSyndromes)。
其它示例性疾病包括眼细菌感染(例如，结膜炎、角膜炎、结核病、梅毒、淋病)、病毒感染(例如眼单纯疱疹病毒(Ocular Herpes Simplex Virus)、水痘带状疱疹病毒、巨细胞病毒视网膜炎、人免疫缺陷病毒(HIV))以及继发于HIV或其它HIV-关联及其它免疫缺陷-关联性眼疾病的进行性外部视网膜坏死。此外，眼疾病包括真菌感染(例如念珠菌性脉络膜炎(Candida choroiditis)、组织胞浆菌病)、原生动物感染(例如弓形体病)及其它例如眼弓蛔虫病与肉样瘤病(sarcoidosis)。
本发明的一方面为用于抑制、减低或治疗以化学治疗药物(例如，神经毒性药物、升高眼内压力的药物例如类固醇)治疗的受试者视力损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。
本发明的另一方面为用于抑制、减低或治疗在进行手术包括眼或其它于俯卧位(prone position)的手术，例如脊髓手术时的受试者视力损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。眼手术包括白内障、虹膜切开术和晶状体置换。
本发明的另一方面为治疗(包括抑制与预防性治疗)年龄相关的眼疾病，包括白内障、干眼症、年龄相关的黄斑变性(AMD)、视网膜损害等的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。
本发明的另一方面为预防或治疗由应激、化学伤害或照射所引起的眼睛损伤的方法，其通过将治疗剂量的本文所公开的沉默调节蛋白的调节剂给药于有此类治疗需要的受试者。对眼睛的照射或电磁性损伤可包括由CRT或暴露于阳光或UV所引起的那些损伤。
在一些实施方案中，组合药物疗法可包括用于治疗或预防眼科病症，或与这些病症有关的继发病症的药物或化合物。因此，组合药物疗法可包括一种或多种沉默调节蛋白的活化剂与一种或多种用于治疗眼科病症的治疗剂。
在一些实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于减低眼内压力的疗法结合进行给药。在另一个实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防青光眼的疗法结合进行给药。在另一实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防视神经炎的疗法结合进行给药。在一些实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防CMV视网膜病的疗法结合进行给药。在另一个实施方案中，可将沉默调节蛋白的调节剂与用于治疗和/或预防多发性硬化的疗法结合进行给药。
线粒体有关的疾病与病症
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法。该方法包含将治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物给药于需要的受试者。线粒体活性增加是指在维持线粒体的总量(例如线粒体的质量)的同时增加线粒体的活性、增加线粒体的数量并因此增加线粒体的活性(例如，通过刺激线粒体的生物生成(biogenesis))，或其组合。在一些实施方案中，因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍，包括与线粒体功能障碍有关的疾病或障碍。
在一些实施方案中，用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法可包括确定患有线粒体功能障碍的受试者。用于诊断线粒体功能障碍的方法可包括分子遗传学、病理学和/或生物化学分析。与线粒体功能障碍有关的疾病或障碍包括这样的疾病和病症，其中线粒体的呼吸链活性不足导致哺乳动物中此类疾病或障碍的病理生理学的发展。因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍一般包括例如，由自由基介导的氧化损伤导致的组织变性的疾病、细胞不适当地进行凋亡的疾病，及细胞无法进行凋亡的疾病。
在一些实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法，该方法包括将一种或多种调节沉默调节蛋白的化合物与另一种治疗剂(例如可用于治疗线粒体功能障碍的药剂，或可用于减少与涉及线粒体功能障碍的疾病或障碍有关的症状的药剂)组合给药于有需要的受试者。
在示例性的实施方案中，本发明提供用于治疗因线粒体活性增加而获益的疾病或障碍的方法，通过将治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物给药于受试者。示例性疾病或障碍包括例如神经肌肉病症(例如佛里德赖希共济失调(Friedreich’s Ataxia)、肌肉营养不良、多发性硬化等)、神经元不稳定性病症(例如癫痫发作、偏头痛等)、发育迟缓、神经变性病症(例如阿尔茨海默病、帕金森病、肌萎缩性侧索硬化等)、缺血、肾小管性酸中毒、年龄相关的神经变性与认知衰退、化学疗法疲劳、年龄相关或化学疗法诱发的绝经或月经周期或排卵不规则、线粒体性肌病、线粒体损害(例如钙累积、兴奋性中毒、接触一氧化氮、缺氧等)及线粒体失调。
肌肉营养不良指一类涉及肌肉神经组织构造与功能恶化的疾病，其往往导致骨骼肌萎缩及心肌功能障碍，例如杜兴氏肌肉营养不良(Duchenne muscular dystrophy)。在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于减低肌肉功能能力的衰退速率，及用于增强患有肌肉营养不良患者肌肉的功能状态。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗线粒体性肌病。线粒体性肌病范围从外眼部肌肉的轻微缓慢进行性衰弱，到严重致命的婴儿期肌病与多系统脑脊髓病(encephalomyopathy)。一些综合征已经确定，它们之间有些重叠。影响肌肉的已确立的综合征包括进行性外眼肌麻痹、卡-塞综合征(Kearns-Sayre syndrome)(具有眼肌麻痹、色素性视网膜病、心脏传导缺陷、小脑共济失调与感觉神经性耳聋)、MELAS综合征(线粒体性脑脊髓病、乳酸性酸中毒与类中风事件(stroke-like episodes))、MERFF综合征(肌阵挛型癫痫、不整齐的红纤维(ragged red fibers))、肢带分配衰弱(limb-girdledistribution weakness)及婴儿肌病(良性、重度与致死)。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗患有对线粒体的毒性损害，例如由于钙累积、兴奋性中毒、一氧化氮接触、药物诱导的毒性损害或缺氧引起的毒性损害的患者。
在一些实施方案中，调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗与线粒体失调(mitochondrial deregulation)有关的疾病或障碍。
在其它实施方案中，本发明还可以用于治疗与老化或应激有关的其它疾病或病症、糖尿病和其它代谢功能障碍和相关病症，包括但不限于脂肪肝、脂肪性肝炎和肥胖症。本发明还可用于治疗神经变性疾病、心血管疾病、癌症、炎性疾病，其包括但不限于银屑病、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症，以及由SIRT1表达或活性降低导致的其它疾病或病症。
肌肉性能
在其它实施方案中，本发明提供用于增强肌肉性能的方法，其通过给药治疗上有效量的调节沉默调节蛋白的化合物。例如，调节沉默调节蛋白的化合物可用于改善身体耐久力(例如，进行身体工作例如运动、体力劳动、运动活动等)、抑制或延迟身体疲劳、增加血液氧水平、增进健康个体的能量、加强工作能力与持久性、减少肌肉疲劳、减低压力、增强心脏与心血管功能、改善性能力、增加肌肉ATP水平和/或减少血液中的乳酸。在一些实施方案中，该方法包括给药一定量的线粒体活性增加、增进线粒体的生物生成和/或增加线粒体质量的调节沉默调节蛋白的化合物。
运动性能是指运动员的肌肉在参与运动活动时所呈现的能力。所增强的运动效能、强度、速度及持久力，是通过肌肉收缩强度的增加、肌肉收缩幅度的增加、在刺激与收缩之间的肌肉反应时间的缩短而进行测量。运动员指以任何程度参与运动，以及寻求能在其机能上达到增进强度、速度与耐久力水平的个人，例如健身者(body builder)、自行车运动员、长跑运动员、短跑运动员等。所增强的运动效能由能克服肌肉疲劳的能力、保持较长时间活力的能力及具有更有效锻炼的能力显示。
在运动员肌肉性能的场所(arena)，期望产生允许在长期的更高耐性程度下进行比赛或训练的状况。
预期本发明的方法也有效于治疗肌肉相关的病理病症，包括急性肌肉减少症(acute sarcopenia)，例如肌肉萎缩和/或与烧伤、卧床、肢体固定术或胸部、腹部和/或整形外科大手术有关的恶病质。
在一些实施方案中，本发明提供包含沉默调节蛋白的调节剂的新型饮食组合物，其制备方法及使用该组合物以改善运动效能的方法。于是，本发明向涉及广泛定义的运动，包括需要耐力的运动与需要重复性肌肉运动的劳动的人们提供具有改善身体耐力和/或抑制身体疲劳的作用的治疗组合物、食品与饮料。此类饮食组合物可另外包含电解质、咖啡因、维生素、碳水化合物等。
其它用途
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于治疗或预防病毒感染(例如流感病毒、疱疹病毒或乳头状瘤病毒感染)或作为抗真菌剂。在一些实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可以作为组合药物疗法的一部分与另一种用于治疗病毒性疾病的治疗剂一起给药。在另一个实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，可作为组合药物疗法的一部分与另一种抗真菌剂一起给药。
可如本文所述进行治疗的受试者包括真核生物，例如哺乳动物例如人、羊类、牛类、马类、猪类、犬类、猫类、非人灵长类、小鼠及大鼠。可处理的细胞包括真核细胞，例如得自前述受试者的细胞，或植物细胞、酵母细胞及原核细胞例如细菌细胞。例如，可将调节性化合物给药于农场动物，以改善其能更长期承受农场条件的能力。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加植物寿命、应激抗性及对于细胞凋亡的抗性。在一个实施方案中，将化合物施予植物(例如定期)，或施予真菌。在另一些实施方案中，植物经遗传修饰以产生化合物。在另一个实施方案中，将植物与果实在采收与运送前先以化合物处理，以增加在运送期间对于损伤的抗性。也可将植物种子与本文所述的化合物接触，以例如使其防腐(preserVe)。
在其它实施方案中，增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物可用于调节酵母细胞的寿命。其中希望延长酵母细胞寿命的情况包括其中使用酵母的任何工艺过程，例如啤酒、酸奶与烘焙物品(例如面包)的制备。使用具有延长寿命的酵母，可以使用更少酵母，或使酵母具有活性的时间更长。也可将用于重组制备蛋白的酵母或其它哺乳动物细胞进行如本文所述的处理。
增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物也可用于增加昆虫寿命、应激抗性及对于细胞凋亡的抗性。在此实施方案中，化合物将被施用至有用的昆虫，例如蜜蜂及其它涉及植物授粉的昆虫。在一个具体的实施方案中，化合物将被施用至涉及生产蜂蜜的蜜蜂。一般而言，本文所述的方法可应用至任何生物体，例如具有商业重要性的真核生物。例如，可将本文所述的化合物应用至鱼类(水产养殖)及鸟类(例如鸡与家禽)。
也可使用较高剂量的增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物作为杀虫剂，这是通过干扰发育期间沉默基因的调节以及细胞凋亡的调节进行的。在该实施方案中，可通过本领域已知的方法将该化合物施用至植物，并确保该化合物对于昆虫幼虫(且不是对于植物)为生物可利用的。
至少就生殖与寿命间的联系的观点而言，可施用增加沉默调节蛋白的水平和/或活性的调节沉默调节蛋白的化合物，来影响诸如昆虫、动物及微生物等生物体的生殖。
4.测试
在本文中所涵盖的其它方法包括用于鉴定调节沉默调节蛋白的化合物或试剂的筛选方法。所述试剂可为核酸，例如适体(aptamer)。分析可以基于细胞或不含细胞的形式进行。例如，分析可包含在沉默调节蛋白可被已知调节沉默调节蛋白的试剂所调节的条件下，将沉默调节蛋白与测试剂温育(或接触)，并相对于缺乏测试剂，在该测试剂存在下监控或测定沉默调节蛋白的调节水平。沉默调节蛋白的调节水平可通过测定其将底物脱乙酰基化的能力而确定。示例性底物为可购自BIOMOL(Plymouth Meeting，PA)的乙酰化肽类。优选底物包括p53的肽类，例如那些包含乙酰化K382的肽类。尤其优选的底物为Fluor de Lys-SIRT1(BIOMOL)，即乙酰化肽Arg-His-Lys-Lys。其它底物为得自人组蛋白H3与H4的肽类或乙酰化氨基酸。底物可为荧光的(fluorogenic)。所述沉默调节蛋白可为SIRT1、Sir2、SIRT3或其部分。例如，重组SIRT1可得自BIOMOL。反应可进行约30分钟，并例如以烟酰胺终止。可使用HDAC荧光活性分析/药物发现试剂盒(drug discovery kit)(AK-500，BIOMOLResearch Laboratories)测定乙酰化水平。类似的分析经描述于Bitterman等人(2002)J.Biol.Chem.277：45099中。可将分析中的沉默调节蛋白的调节程度，与在一种或多种本文所述化合物(其可作为阳性或阴性对照组)(分开或同时)存在下的沉默调节蛋白的调节程度进行比较。用于分析的沉默调节蛋白可为全长沉默调节蛋白或其部分。因为在本文中已显示活化化合物表现出与SIRT1的N-末端作用，故用于分析的蛋白包括沉默调节蛋白的N-末端部分，例如SIRT1的大致为氨基酸1-176或1-255；Sir2的大致为氨基酸1-174或1-252部分。
在一些实施方案中，筛选试验包括(i)在无测试剂存在下在适合沉默调节蛋白将底物脱乙酰化的条件下，使沉默调节蛋白与测试剂及乙酰化底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化水平，其中在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较低则表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度，相对于无该测试剂存在下较高则表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。
在另一实施方案中，该筛选试验可检测沉默调节蛋白介导的NAD依赖性脱乙酰化的2’/3’-O-乙酰基-ADP-核糖产物的形成。该O-乙酰基-ADP-核糖产物以与沉默调节蛋白脱乙酰化反应的脱乙酰化肽产物等摩尔量形成。相应地，该筛选试验可包括(i)在无测试剂存在下在适合沉默调节蛋白将底物脱乙酰化的条件下，使沉默调节蛋白与测试剂及乙酰化底物接触；及(ii)测定O-乙酰基-ADP-核糖形成的量，其中O-乙酰基-ADP-核糖形成在测试剂存在下相对于不存在该测试剂时的量增加表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而O-乙酰基-ADP-核糖形成在测试剂存在下相对于不存在该测试剂时的量降低表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。
用于鉴定于体内调节(例如刺激)沉默调节蛋白的试剂的方法可包括(i)在第I类与第II类HDAC的抑制剂存在下，在适合沉默调节蛋白在无测试剂存在下将底物脱乙酰化的条件下，使细胞与测试剂及能够进入细胞的底物接触；及(ii)测定底物的乙酰化程度，其中在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较低则表示：该测试剂刺激由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用，而在该测试剂存在下底物的乙酰化程度相对于无该测试剂存在下较高则表示：该测试剂抑制由沉默调节蛋白进行的脱乙酰化作用。优选底物为乙酰化肽，其也优选为荧光的，如本文中进一步描述的。该方法可进一步包含将细胞裂解(1ysing)，以测定底物的乙酰化程度。可将底物以范围介于约1μM至约10mM，优选地约10μM至1mM，甚至更优选约100μM至1mM，例如约200μM的浓度加至细胞中。优选底物为乙酰化赖氨酸，例如ε-乙酰基赖氨酸(Fluor de Lys，FdL)或Fluor de Lys-SIRT1。第I类与第II类HDAC的优选抑制剂为制滴菌素A(trichostatin A)(TSA)，其可以范围介于约0.01μM至100μM，优选约0.1μM至10μM，例如1μM的浓度使用。细胞与测试化合物及底物的温育可进行约10分钟至5小时，优选约1-3小时。因为TSA抑制所有第I类与第II类HDAC，且一些底物例如Fluor deLys对于SIRT2为较差的底物，对于SIRT3-7为甚至更差的底物，故此类分析可用于鉴定体内SIRT1的调节剂。
5.药物组合物
本文所述的化合物可以通过常规方法，使用一种或多种生理学上或药学上可接受的载体或赋形剂配制。例如，该化合物及其药学上可接受的盐与溶剂合物可经配制成用于通过例如注射(例如SubQ、IM、IP)、吸入或吹入(通过口或鼻)或口服、口腔、舌下、经皮、鼻、肠胃外或直肠给药的制剂。在一些实施方案中，该化合物可局部地，在标靶细胞存在的部位，即在特定组织、器官或体液(例如血液、脑脊髓液等)中进行给药。
该化合物可配制成用于各种给药方式，包括全身及局部或区域性给药的制剂。技术与制剂一般可见于Remington’s Pharmaceutical Sciences，Meade Publishing Co.，Easton，PA。对于肠胃外给药，以注射为优选，包括肌肉内、静脉内、腹膜内及皮下。对于注射，可将所述化合物配制成液态溶液，优选用生理学上相容的缓冲液，例如汉克氏溶液或林格氏溶液。此外可将所述化合物配制成固体形式，并于使用前立即再溶解或悬浮。也可包括冷冻干燥形式。
对于口服给药，药物组合物可采用例如通过常规方法，用药学上可接受的赋形剂例如粘合剂(例如，预凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯基吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如硬脂酸镁、滑石或硅石)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或湿润剂(例如月桂基硫酸钠)制备的片剂、锭剂或胶囊的形式。片剂可通过本领域已熟知的方法包衣。用于口服给药的液体制剂可采用例如溶液、糖浆或悬浮液的形式，或它们可制成干燥产物，在使用前以水或其它适宜载体配制。此类液体制剂可通过常规方法，用药学上可接受的添加剂例如悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化食用脂类)；乳化剂(例如卵磷脂或金合欢胶)；非水载体(例如扁桃油、酯油类、乙醇或分馏植物油)；及防腐剂(例如对-羟基苯甲酸甲基酯或对-羟基苯甲酸酯丙基酯或山梨酸)制备。如果适当，该制剂也可含有缓冲盐、调味剂、着色剂与甜味剂。用于口服给药的制剂可适宜地配制，以使活性化合物受控的释放。
对于通过吸入(例如肺递送)给药，可方便地将化合物以从经加压包装或喷雾器中使用适宜的推进剂例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它适合气体的气溶胶喷雾制剂形式来递送。在经加压气溶胶的情况下，剂量单位可通过提供用于递送已计量的量的阀来确定。可配制用于吸入器或吹入器的例如明胶胶囊或药筒(cartridge)，其含所述有化合物与适宜粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末混合物。
该化合物可经配制成用于通过注射，例如通过推注或持续输注的肠胃外给药。用于注射的配制剂可以单位剂量形式提供，例如，以安瓿或多剂量容器(添加防腐剂)提供。组合物可采用诸如在油性或含水载体中的悬浮液、溶液或乳液的形式，且可含有配制剂，例如悬浮剂、稳定剂和/或分散剂。或者，活性成分可以是粉末形式，在使用前可以用适宜载体，例如灭菌无热源水构成。
该化合物也可配制成直肠组合物，例如栓剂或保留灌肠剂，例如含有常规的栓剂基质如可可脂或其它甘油酯类。
除了先前所述的制剂外，化合物也可配制成储存制剂(depot preparation)。此类储存制剂可通过植入(例如以皮下或肌肉内)，或经由肌肉内注射给药。因此，例如，可将化合物用适宜的聚合或疏水性材料(例如在可接受油中的乳液)或离子交换树脂配制，或呈微溶性衍生物，例如呈微溶性盐。受控释放配制剂也包括贴剂。
在一些实施方案中，本文所述的化合物可配制成用于递送至中枢神经系统(CNS)(见综述，Begley，Pharmacology&Therapeutics 104：29-45(2004))。用于药物递送至CNS的常规方法包括：神经外科策略(例如脑内注射或脑室内输注)；试剂的分子操作(例如包含与药剂组合的转运肽的嵌合融合蛋白的生成，所述转运肽对内皮细胞表面分子具有亲合力，而所述药剂本身不能穿越BBB)，以尝试开发BBB的内源性运送途径之一；设计用于增加试剂的脂溶度的药理策略(例如，将水溶性试剂缀合(conjugation)至脂质或胆固醇载体)；及通过高渗破坏短暂破坏BBB完整性(源自将甘露糖醇溶液输注入颈动脉中或使用生物活性剂例如血管紧张肽)。
脂质体为另一种容易可注射的药物递送系统。于是，在本发明方法中也可将活性化合物以脂质体递送系统的形式给药。脂质体为本领域技术人员已熟知的。脂质体可由各种磷脂例如胆固醇、磷酯酰胆碱的硬脂胺形成。可用于本发明方法的脂质体包含所有类型脂质体，包括但不限定于小单层囊泡、大单层囊泡及多层囊泡。
另一种制备本文所述的化合物的制剂(尤其是溶液)的方法是通过使用环糊精。环糊精是指α-、β-或γ-环糊精。环糊精详细描述于Pitha等人，U.S专利4,727,064中(将其引入本文作为参考)。环糊精为葡萄糖的环状寡聚物；这些化合物与任何药物形成包合复合物(inclusion complex)，所述药物的分子能适合于环糊精分子的亲脂搜寻空腔(lipophile-seeking cavity)中。
快速崩解或溶解剂型可用于医药活性剂的快速吸收，尤其是口腔与舌下吸收。快速溶解(fast melt)剂型对具有吞咽常见的固体剂型例如囊片(caplet)与片剂困难的患者(例如老年人及幼儿患者)有益。此外，快速溶解剂型克服了与例如咀嚼剂型有关的缺点，其中活性剂在患者口中保持的时间长度，在确定味觉掩盖量及患者可能感受到活性剂的喉咙粗砂质感的程度方面起重要作用。
药物组合物(包括化妆品制剂)可包含约0.00001％至100％，例如0.001至10％或0.1％至5％(按重量计)的一种或多种本文所述的化合物。在其他实施方案中，该药物组合物包含：(i)0.05至1000mg的本发明化合物或其药学上可接受的盐，和(ii)0.1至2克的一种或多种药学上可接受的赋形剂。
在一些实施方案中，将本文所述的化合物混入含有一般适用于局部药物给药的局部给药载体，且包含本领域已知的任何此类物质的局部制剂中。可选择局部给药载体以使组合物呈所希望的形式，例如呈软膏、洗剂、乳膏、微乳剂、凝胶、油、溶液等，且其可由天然存在或合成来源的材料组成。优选所选择的载体不会有害地影响活性剂或局部制剂的其它组分。用于本文的适宜局部给药载体实例包括水、醇类及其它无毒性有机溶剂、甘油、矿物油、硅酮、凡士林、胶冻剂、脂肪酸、植物油、对羟基苯甲酸酯、蜡类等。
制剂可为无色无味的软膏、洗剂、乳膏、微乳剂及凝胶。
该化合物可混入一般为半固体制剂的软膏中，其通常以凡士林或其它石油衍生物为基质。所使用的本领域技术人员所了解的具体软膏基质是能够提供最佳药物递送，且优选可提供其它所希望特征以及例如软化性或类似特性的基质。与其它载体或赋形剂一样，软膏基质应为惰性、稳定、无刺激性且非致敏性的。
该化合物可混入洗剂中，其一般为要无摩擦施用于皮肤表面的制剂，且通常为其中固体颗粒(包括活性剂)存在于水或醇类基质中的液态或半液态制剂。洗剂通常为固体的悬浮液，且可包括水包油型的液体油性乳液。
该化合物可混入乳膏中，其一般为粘稠性液体或半固态乳液，为水包油或油包水型。乳剂基质为可水洗，且含有油相、乳化剂与水相。油相一般由凡士林与脂肪醇，例如鲸蜡醇或硬脂醇所组成；水相通常(虽然不必然)在体积上超过油相，且一般含有湿润剂。乳膏制剂中的乳化剂如于前述Reminton的文献中所说明的，一般为非离子型、阴离子型、阳离子型或两性表面活性剂。
该化合物可混入微乳剂中，其一般为两种不相混溶的液体(例如油与水)经由表面活性剂分子的界面膜稳定化的热动力学上稳定、各向同性的澄清的分散体(Encyclopediaof Pharmaceutical Technology(New York：Marcel Dekker，1992)，第9卷)。
该化合物可混入凝胶制剂中，其一般为由小的无机粒子组成的悬浮液(二相系统)，或基本上均匀分布于整个载体液体(单相凝胶)中的大的有机分子所组成的半固体系统。虽然凝胶一般使用含水载体液体，也可使用醇类与油类作为载体液体。
在制剂中也可包括其它活性剂，例如其它消炎剂、镇痛剂、抗微生物剂、抗真菌剂、抗生素、维生素、抗氧化剂及一般存在于防晒制剂中的阳光阻断剂，包括但不限定于邻氨基苯甲酸酯、二苯甲酮(尤其是二苯甲酮-3)、樟脑衍生物、肉桂酸酯(例如甲氧基肉桂酸辛酯)、二苯甲酰基甲烷(例如丁基甲氧基二苯甲酰基甲烷)、对-氨基苯甲酸(PABA)及其衍生物，及水杨酸酯(例如水杨酸辛酯)。
在一些局部制剂中，活性剂以该制剂的大约0.25重量％至75重量％，优选地为该制剂的大约0.25重量％至30重量％，更优选地为该制剂的大约0.5重量％至15重量％，且最优选地为该制剂的大约1.0重量％至10重量％的范围存在。
眼疾病可通过例如全身性、局部眼内注射化合物，或通过安插可释放化合物的持续释放装置而治疗或预防。可将化合物在药学上可接受的眼载体中进行递送，以使该化合物能保持与眼表面接触足够的时间以让该化合物穿透角膜与眼睛的内部区域，例如前室、后室、玻璃体、房水、玻璃体液、角膜、虹膜/睫状体(ciliary)、晶状体、脉络膜/视网膜及巩膜。药学上可接受的眼载体可例如为软膏、植物油或包封材料。另一方面，可将本发明化合物直接注射入玻璃体液与房水中。在另一选择中，该化合物可全身性给药(例如通过静脉内输注或注射)用于眼的治疗。
本文所述的化合物可储存于无氧环境中。例如，可将组合物配制于供口服给药的不透气胶囊中，例如购自Pfizer，Inc.的Capsugel中。
可将例如本文中所述的化合物体外处理的细胞，根据用于将移植物给药于患者的方法进行给药，其可伴随例如给药免疫抑制药物例如环孢菌素A。关于药物配制的一般原理，读者可参考Cell Therapy：Stem Cell Transplantation，Gene Therapyand CellularImmunotherapy，G.Morstyn和W.Sheridan编，剑桥大学出版社，1996；及HematopoieticStem Cell Therapy，E.D.Ball，J.Lister和P.Law，Churchill Livingstone，2000。
化合物的毒性与治疗功效可通过用细胞培养物或实验动物的标准药学方法测定。LD50为对于50％群体致死的剂量。ED50为对于50％群体治疗上有效的剂量。毒性与治疗功效间的剂量比值(LD50/ED50)为治疗指数。优选具有高治疗指数的化合物。虽然可使用具有毒副作用的化合物，但应小心设计将此类化合物靶向至受感染组织位置的递送系统，以使得可以将对于未受感染细胞可能的伤害减至最低，并由此减少副作用。
得自细胞培养试验及动物研究的数据，可用于配制在人中使用的剂量范围。此类化合物的剂量可在其包括具有较小或无毒性的ED50值的循环浓度范围内。该剂量可在此范围内根据所使用的剂型及所利用的给药途径而有所变化。对于任何化合物，可最初由细胞培养试验评估治疗上有效的剂量。可用动物模型调配剂量，以达到包括如在细胞培养中所测定的IC50值(即，达到对症状的一半最大抑制作用的测试化合物浓度)的循环血浆浓度范围。此类信息可用于更准确地测定人的有效剂量。可例如通过高效液相色谱法测量血浆中的浓度。
6.试剂盒
本发明也提供试剂盒，例如用于治疗目的试剂盒，或用于调节细胞寿命或调节细胞凋亡的试剂盒。试剂盒可包括一种或多种例如以预先测量的剂量的本文中所述的化合物。试剂盒可任选地包括用于将细胞与所述化合物接触的装置及使用说明书。该装置包括注射器、支架及其它用于将化合物导入患者(例如患者的血管)中，或将其涂覆于患者皮肤的装置。
在另一个实施方案中，本发明提供一种物质组合物，其包含本发明化合物与另一种治疗剂(用于组合疗法及组合组合物中的那些相同的治疗剂)，存在于独立的剂型中，但彼此互相关联。本文使用的术语“互相关联”是指，将独立的剂型包装在一起，或者相互依附，从而使得可以容易地明白这些独立的剂型欲被销售，且欲以相同方案的一部分给药。优选将该化合物和其他药剂一起包装于泡罩包装或其它多室包装中，或作为可由使用者自行分开(例如，通过在两个容器间的刻划线处撕开)的连结的、分开密封的容器(例如锡箔小袋等)中。
在另一个实施方案中，本发明提供试剂盒，其包含存在于独立的容器中的a)本发明化合物；及b)另一种治疗剂，例如那些描述于说明书其它部分的治疗剂。
除非另有说明，本发明方法的实施将利用本领域技术人员所知的细胞生物学、细胞培养、分子生物学、转基因生物学、微生物学、重组DNA及免疫学的常规技术。这些技术在文献中有详尽的解释。参见，例如：Molecular Cloning A Laboratorymanual，第2版，Sambrook、Fritsch和Maniatis编著(Cold Sp Spring Harbor Laboratory Press：1989)；DNA Cloning，第I与II卷(D.N.Glover编著，1985)；Oligonucleotide Synthesis(M.J.Gait编著，1984)；Mullis等人U.S.专利No：4,683,195；Nucleic Acid Hybridization(B.D.Hames&S.J.Higgins编著1984)；Transcription And Translation(B.D.Hames&S.J.Higgins编著，1984)；Culture of Animal Cells(R.I.Freshney，Alan R.Liss，Inc.，1987)；Immobilized Cells And Enzymes(IRLPress，1986)；B.Perbal，Practical GuideTo Molecular Cloning(1984)；专题论文，Methods In Enzymology(Academic Press，Inc.，N.Y.)；Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells(J.H.Millerh和M.P.Calos编著，1987，Cold Spring Harbor Laboratory)；Methods In Enzymology，卷154和155(Wu等人编著)，Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology(Mayer和Walker编著，Academic Press，London，伦敦，1987)；Handbook of Experimental Immunology，卷I-IV(D.M.Weir和C.C.Blackwell编著，1986)；Manipulating the Mouse Embryo(ColdSpring Harbor Laboratory Press，Cold Spring Harbor，N.Y.，1986)。
范例
现已概括描述了本发明，通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例仅用于例示本发明的具体方面和实施方案的目的，并非旨在以任何方式限定本发明。
所用仪器
具有PDA的LCMS：
Waters Allaince2695-2996/Quattromicro
Agilent-1200/SQD
具有UV检测器的制备型LC(制备型HPLC)：
Waters-2545/2998PDA和2487 UV
Shimadzu-LC-20AP/20AV-UV
Gilson-333，334/115-UV
手性HPLC：
Waters Alliance-2695/2998&2996
SFC纯化系统：
Thar-SFC-80
Waters SFC-200
NMR(400MHz)：
Varian-400MHz
用2014 ACD实验室软件生成1H-NMR列表。
所用LCMS方法
获取方法条件：RND-ABC-6-MIN
柱：XBridge BEH C18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：A：5mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH-10)：ACN
时间(min)/％ACN：0/5，0.5/5，1/15，3.3/98，5.2/98，5.5/5，6.0/5
柱温：35℃，流速：1.3ml/min
MS参数：
质量范围：100-1000
扫描时间：0.5Sec
扫描间延迟：0.1sec
运行时间：6.0min
获取方法条件：RND-FA-4.5-MIN
柱：Acquity BEH C18(50mmx2.1mm，1.7um)
流动相：A：0.1％FA的水溶液；B：0.1％FA的ACN溶液
时间(min)/％B：0/3，0.4/3，3.2/98，3.8/98，4.2/3，4.5/3
柱温：35℃，流速：0.6mL/min
MS参数：
质量范围：100-1000
扫描时间：0.5Sec
扫描间延迟：0.1sec
运行时间：4.5min
获取方法条件：RND-FA-4.5-MIN
柱：Acquity BEH C18(50mmx2.1mm，1.7um)
流动相：A：0.1％FA的水溶液；B：0.1％FA的ACN溶液
时间(min)/％B：0/3，0.4/3，3.2/98，3.8/98，4.2/3，4.5/3
柱温：35℃，流速：0.6mL/min
MS参数：
质量范围：100-1000
碎裂电压：100
步长：0.1
运行时间：4.5min
获取方法条件：RND-ABC-6.5-MIN
柱：XBridge BEH C18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：A：5mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH-10)：ACN
时间(min)/％ACN：0/5，0.5/5，1/15，3.3/98，6.0/98，6.1/5，6.5/5
柱温：35℃，流速1.3ml/min
MS参数：
质量范围：100-1000
碎裂电压：100
步长：0.1
运行时间：6.5min
获取方法条件：RND-ABC-10-MIN
柱：XBridge BEH C18(50mmx4.6mm，2.5μm)
流动相：A：5mM碳酸氢铵水溶液(用氨水调节至pH-10)：ACN
时间(min)/％ACN：0/5，0.5/5，1.5/15，7/98，9.0/98，9.5/5，10/5
柱温：35℃，流速1.3ml/min
MS参数：
质量范围：100-1000
碎裂电压：100
步长：0.1
运行时间：10.0min
化学中间体的实验操作
合成双环吡啶核
合成(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯
向配备温度计、回流冷凝器和机械搅拌器的2L烧瓶中加入2，6-二氯-3-硝基吡啶(100g，0.52mol)、(S)-天冬氨酸二甲酯盐酸盐(205g，1.04mol)、NaHCO3(174g，2.07mol)和四氢呋喃(1L)。将反应物在40℃搅拌16h，并通过HPLC监测2，6-二氯吡啶的消失。反应完成后，将固体滤除，并用乙酸乙酯(3x 300mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，并将残余物溶于1L乙酸乙酯。将溶液与木炭(200g)在室温搅拌2h，并将木炭滤除和用额外乙酸乙酯(3x 200mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，得到粗品(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(180g，＞100％)，其为黄色油状物。将其不经进一步纯化直接用于下一步。LRMS(m/z)：318.0[M+H]+；HRMS(m/z)：C11H13N3O6Cl的[M+H]+计算值318.0493；测得值318.0492；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ9.00(d，J＝7.9Hz，1H，-NH)，8.50(d，J＝8.6Hz，1H)，6.92(d，J＝8.6Hz，1H)，5.23(m，J＝5.7，7.9Hz，1H，-CHNH)，3.67(s，3H)，3.63(s，3H)，3.06(m，J＝5.8Hz，2H，-CHCH2)；13C-NMR(APT)(75MHz，DMSO-d6)：δ170.93(C)，170.65(C)，154.65(C)，150.59(C)，138.82(CH)，127.28(C)，112.81(CH)，52.23(CH3)，51.74(CH3)，50.20(CH)，35.31(CH2)。
合成(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯
向配备温度计、回流冷凝器和机械搅拌器的5L三颈烧瓶中装入粗品(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(180g，0.52mol)、铁粉(146g，2.59mol)、2-丙醇(2L)和水(700mL)。将混合物在40℃搅拌，然后加入乙酸(15.5g，0.259mmol)，并且加入速率足以保持内部温度低于70℃。将反应物在70℃搅拌30min，HPLC指示反应完成。将混合物冷却至40℃，然后加入Na2CO3(165g，1.55mol)，并将混合物搅拌1h。将固体过滤，并将固体用四氢呋喃(3x 500mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，然后将残余物在乙醇(1L)中搅拌12小时。将固体过滤并用冷乙醇洗涤，并在真空中干燥，得到(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯，其为米色固体(91g，68％)。LRMS(m/z)：256.0[M+H]+；HRMS(m/z)：C10H11N3O3Cl的[M+H]+计算值256.0489；测得值256.0487；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ10.55(br s，1H，-NHCO)，7.35(br s，1H，-NHCH)，6.92(d，J＝7.9Hz，1H)，6.57(d，J＝7.8Hz，1H)，4.43(m，J＝1.4，5.1Hz，1H，-NHCH)，3.57(s，3H，-CO2Me)，2.79(m，J＝5.1，16.4Hz，2H，-CHCH2)；13C-NMR(APT)(75MHz，DMSO-d6)：δ170.32(C)，164.96(C)，146.13(C)，140.32(C)，122.41(CH)，119.47(C)，111.31(CH)，51.81(CH)，51.39(CH3)，37.01(CH2)。
合成(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇
向配备机械搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的5L三颈烧瓶中装入LiAlH4(60g，1.58mol)。将烧瓶用冰浴冷却，并加入四氢呋喃(500mL)。将搅拌的混合物冷却至0℃，然后加入(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(81g，0.32mol)在四氢呋喃(2L)中的溶液，同时保持内部温度低于5℃。加入完成后，将反应物加热回流16h，同时通过HPLC监测产物的出现。酯还原迅速发生，而内酰胺还原需要较长时间才能完全还原。将反应物冷却至5℃，然后加入水(60mL)，同时保持内部温度低于10℃。加入完成后，将反应物搅拌15min，然后加入15％(w/w)NaOH(aq)(60mL)，同时保持内部温度低于5℃。加入完成后，将反应物搅拌15min，然后加入水(180mL)，并将混合物在室温搅拌1h。将固体滤除并用四氢呋喃(3x 150mL)洗涤。将滤液和洗液在真空中浓缩，然后将固体残余物在真空中干燥，得到(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇，其为棕色固体(55g，81％)。LRMS(m/z)：214.1[M+H]+；HRMS(m/z)：C9H13N3OCl的[M+H]+计算值214.0747；测得值214.0743；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ6.60(brs，1H，-NHCH(CH2)2OH)，6.58(d，J＝7.8Hz，1H)，6.32(d，J＝7.8Hz，1H)，5.69(m，1H，-NHCH2)，4.57(t，J＝5.0Hz，1H，-OH)，3.56(m，J＝5.8Hz，2H，-CH2OH)，3.47(m，1H，-NHCH(CH2)2OH)，3.22(m，J＝2.7，11.1Hz，1H，-NHCHH’)，2.84(m，J＝1.6，6.7，11.1Hz，1H，-NHCHH’)，1.65(m，J＝6.7Hz，1H，-CHH’CH2OH)，1.54(m，J＝6.3Hz，1H，-CHH’CH2OH)；13C-NMR(APT)(75MHz，DMSO-d6)：δ146.75(C)，134.44(C)，128.20(C)，118.97(CH)，110.59(CH)，57.97(CH2)，47.47(CH)，43.99(CH2)，36.60(CH2)。
合成(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
向(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(5；50g，0.234mol)在CH2Cl2(500mL)中的溶液中加入三乙胺(95g，0.936mol)。将混合物在室温搅拌直至成为均相，然后冷却至0℃。向反应混合物中滴加POCl3(54g，0.351mol)，同时维持温度在0-5℃之间。除去冷却，并将反应物在室温搅拌2h，同时通过HPLC监测起始醇的消失。反应完成后，加入1.2MNaHCO3(水溶液)(200mL)。分离各层并将水层用CH2Cl2萃取。将合并的CH2Cl2层用1MHCl(水溶液)(4x 300mL)萃取，并将合并的HCl层用固体NaHCO3调节至pH 8。将所得混合物用CH2Cl2(4x 300mL)萃取，并将该CH2Cl2层干燥(Na2SO4)，过滤，并用木炭(50g)处理。将混合物在室温搅拌3h，过滤，并将木炭用CH2Cl2(200mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，并将固体残余物在真空中干燥，得到(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为近白色结晶固体(30g，66％)。LRMS(m/z)：196.1[M+H]+；HRMS(m/z)：C9H11N3Cl的[M+H]+计算值196.0642；测得值196.0637；1H-NMR(300MHz，DMSO-d6)：δ7.47(br d，J＝4.5Hz，1H，-NH)，7.09(d，J＝7.7Hz，1H)，6.39(d，J＝7.7Hz，1H)，3.89(m，J＝5.0Hz，1H，CHNH)，2.95-3.13(m，2H，-NCH2CH2CHNH)，2.77(m，2H，-NCHH’CHNH)，1.98(m，J＝5.0Hz，1H，-NHCHCHH’CH2N)，1.86(m，J＝6.9Hz，1H，-NHCHCHH’CH2N)；13C-NMR(APT)(75MHz，DMSO-d6)：δ153.45(C)，144.50(C)，134.32(CH)，133.19(C)，109.73(CH)，59.88(CH2)，53.07(CH2)，50.08(CH)，38.38(CH2)。
合成(R)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯
在氮气下，向(R)-2-氨基琥珀酸二甲酯盐酸盐(25g，127mmol)在四氢呋喃(THF)(130mL)中的悬浮液中加入碳酸氢钠(21.25g，253mmol)和2，6-二氯-3-硝基吡啶(12.21g，63.3mmol)。将反应混合物在40℃搅拌16小时。将反应混合物过滤，并用EtOAc(3X 25mL)洗涤，并将滤液浓缩，得到粗产物，然后将其加载至硅胶柱，并用(9∶1)Hex/EtOAc洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(16g，49.4mmol，39.0％)，LCMS(m/z)318.1[M+H]+。
合成(R)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯
向(R)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(16g，50.4mmol)在异丙醇(200mL)和水(60mL)中的溶液中加入铁(14.06g，252mmol)，并加热至40℃。向上述反应混合物中加入乙酸(1.442mL，25.2mmol)，并加热至70℃保持1小时。将反应混合物冷却至室温，经硅藻土过滤并用EtOAc(3X 20mL)洗涤，将滤液浓缩和干燥。将反应粗品从乙醇重结晶，得到所需产物(11.5g，43.4mmol，86％)，LCMS(m/z)256.1[M+H]+。
合成(R)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇
在0℃，在氮气气氛下，向氢化铝锂(8.54g，225mmol)在四氢呋喃(THF)(12mL)中的悬浮液中滴加(R)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(11.5g，45.0mmol)在四氢呋喃(THF)(60mL)中的溶液。将反应混合物加热至70℃保持16小时。将反应混合物冷却至0℃，用水(8mL)淬灭，保持内部温度低于5℃。加入完成后，将反应物搅拌15min。接下来，加入10mL 15％(W/W)NaOH(水溶液)，保持内部温度低于5℃，加入完成后，将反应物搅拌15min。为了完成后处理，加入12mL水，然后将混合物在室温搅拌1h。将固体过滤，并用THF(3x20mL)洗涤。将滤液和洗液在真空中浓缩。将粗品加载至硅胶柱，并用(3∶7)Hex/EtOAc洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(6g，27.0mmol，60.1％)，LCMS(m/z)214.1[M+H]+。
合成(4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
在氮气下，向(R)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(7g，32.8mmol)在二氯甲烷(DCM)(70mL)中的溶液中加入三乙胺(18.27mL，131mmol)。将混合物在室温搅拌直至成为均相，然后将其冷却至0℃。接下来，滴加POCl3(4.58mL，49.1mmol)，并维持温度为0℃至5℃。将反应混合物在25℃搅拌2小时。反应完成后，加入100mL 1.2MNaHCO3(水溶液)。分离各层，并将水层用DCM(2x200mL)萃取。将合并的有机层浓缩至干。将固体残余物在真空中干燥。将粗产物8g加载至硅胶柱，并用70％EtOAc/石油醚洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(5.2g，26.5mmol，81％产率)，LCMS(m/z)195.9[M+H]+。
合成(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯
向40.0g(207mmol)的2，6-二氯-3-硝基吡啶、87.7g(414mmol)的L-谷氨酸二甲酯盐酸盐和69.6g(829mmol)的NaHCO3的混合物中加入600mL四氢呋喃。将混合物在40℃搅拌24h，通过HPLC监测2，6-二氯-3-硝基吡啶的消失。反应完成后，将固体滤除，并用乙酸乙酯(3x 100mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，然后将残余物通过硅胶色谱纯化，用10/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到(60g，87％)产物，其为黄色固体，LCMS(m/z)332.1[M+H]+。
合成(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯
向20g(60.2mmol)的(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯和16.8g(301mmol)铁粉的混合物中加入375mL 2-丙醇，然后加入125mL水。向搅拌的混合物中加入5.5g(90.3mmol)乙酸，然后将反应物回流搅拌1h。通过HPLC监测反应中起始原料的消失。反应完成后，将固体滤除，并用2-丙醇(3x 50mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，然后将残余物在真空中干燥，得到15g(81％)产物，其为深黄色固体。将其不经进一步纯化直接用于下一步，LCMS(m/z)270.1[M+H]+。
合成(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇
在N2下，以控制气体逸出的速度，向17.78g(133.3mmol)的AlCl3在260mL四氢呋喃(THF)中的溶液中滴加200mL 2M LiAlH4的THF溶液。得到氢化铝(AIH3)在THF中的溶液。在单独的烧瓶中，在N2下，制备26.0g(96.4mmol)的(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯在460mL THF中的溶液，然后用干冰/丙酮浴冷却。伴随搅拌，经2h向其中滴加氢化铝溶液。当加入完成时，撤去冷却浴，并将反应物温热至室温。1.5h后，LCMS分析显示反应完成。接下来，缓慢加入17.6g NaOH在65mL水中的溶液，以控制H2逸出。将悬浮液搅拌18h，然后将固体滤除。将沉淀用乙酸乙酯洗涤，然后将滤液和洗液在真空中浓缩。将产物通过硅胶色谱纯化，用CH2Cl2然后0至10％甲醇的CH2Cl2梯度洗脱，得到15.21g(69％)橙黄色固体，LCMS(m/z)228.1[M+H]+。
合成(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向12g(52.7mmol)的(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇中加入160mL 48％(w/w)HBr水溶液，然后将反应物在90℃搅拌18h。通过HPLC监测反应在起始醇的消失。反应完成后，将其冷却至室温，然后加入1.2M NaHCO3水溶液直至pH＝8。将混合物用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取，然后将合并的有机相用饱和食盐水(1x 100mL)洗涤，经Na2SO4干燥和过滤，然后将滤液浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱纯化，用2/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到6.0g(55％)产物，其为亮黄色固体，LCMS(m/z)210.1[M+H]+。
合成4取代的双环吡啶核
合成2，6-二氯-4-甲基-3-硝基吡啶
在氮气下，在0℃，将硝酸(1.5mL，33.6mmol)加入至硫酸(2.5mL，46.9mmol)中。然后在0℃加入2，6-二氯-4-甲基吡啶(0.500g，3.09mmol)。然后将反应混合物在100℃搅拌16小时。通过TLC监测反应。完成后，将反应混合物用碎冰淬灭，并用NH4OH溶液中和，过滤固体并在真空下干燥，得到所需产物(0.300g，1.443mmol，46.8％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)206.8[M+H]+。
合成(S)-2-((6-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯
在0℃，在氮气下，将2，6-二氯-4-甲基-3-硝基吡啶(300mg，1.449mmol)和碳酸氢钠(243mg，2.90mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL))中的悬浮液中加入(S)-2-氨基琥珀酸二甲酯盐酸盐(430mg，2.174mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。通过TLC监测反应。将反应物质过滤并用EtOAc(2x 30mL)洗涤。将滤液在减压下浓缩，得到粗品。将粗产物加入至中性氧化铝柱，并用Hex/EtOAc(9∶1)洗脱。在减压下浓缩收集的级分，得到所需产物(250mg，0.742mmol，51.2％产率)，其为黄色胶状液体，LCMS(m/z)339.1(M+H)+。
合成(S)-2-(6-氯-8-甲基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯
向在40℃搅拌的(S)-2-((6-氯-4-甲基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(6.0g，18.09mmol)和铁(5.05g，90mmol)在异丙醇(80mL)和水(20mL)中的悬浮液中加入乙酸(1.553mL，27.1mmol)。将反应混合物在80℃搅拌1小时。通过TLC监测反应。将反应混合物冷却至室温，并用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并用EtOAc萃取。将有机层用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到所需产物(4.0g，14.32mmol，79％产率)，LCMS(m/z)269.9[M+H]+。
合成(S)-2-(6-氯-8-甲基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇
以控制气体逸出的速度，向在氮气下搅拌的氯化铝(0.173g，1.298mmol)在四氢呋喃(THF)(2.5mL)中的溶液中滴加2M氢化铝锂(2.220mL，4.44mmol)的THF溶液。得到氢化铝(AIH3)的THF溶液。在单独的烧瓶中，在氮气下，制备(S)-2-(6-氯-8-甲基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(0.250g，0.927mmol)在四氢呋喃(THF)(5mL)中的溶液，经15分钟，在-78℃，向其中滴加氢化铝溶液。当加入完成时，撤去冷却浴，并将反应物温热至室温。通过TLC监测反应。在0℃，将反应混合物用10％NaOH溶液淬灭，搅拌1小时，并用EtOAc萃取。将EtOAc层用水洗涤，然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到所需产物(150mg，0.407mmol，43.9％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)228.2[M+H]+。
合成(4S)-7-氯-9-甲基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
向(S)-2-(6-氯-8-甲基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(1.8g，7.91mmol)中加入HBr(4mL，35.4mmol)，将反应混合物在90℃搅拌18小时。通过TLC监测反应。完成后，将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭，并用EtOAc萃取。将EtOAc层用水洗涤，然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗产物。将粗产物加载至中性氧化铝，并用20％EtOAc/己烷洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(0.900g，4.27mmol，54.0％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)210.2[M+H]+。
氯化物偶联反应
合成(4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-甲酸甲酯
向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(5g，25.55mmol)在无水MeOH(250ml)中的脱气的溶液中加入TEA(17.77mL，127.77mmol)和Pd(dppf)Cl2(934mg，1.2755mmol)，并将反应混合物在300psi一氧化碳气氛下，在110℃搅拌20h。将悬浮液冷却至室温，并将混合物在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(100-200硅胶，用2％甲醇的DCM溶液洗脱)纯化，得到(4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-甲酸甲酯(3g，13.68mmol，53.5％产率)，其为淡棕色固体(TLC系统：5％甲醇的DCM溶液，Rf值：0.2)，LCMS(m/z)220.3[M+H]+。
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(30g，153mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(25.2g，184mmol)和磷酸三钾(65.1g，307mmol)在1-丁醇(300mL)和水(50.0mL)中的脱气的溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(O)(7.02g，7.67mmol)和二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-[1，1′-联苯]-2-基)膦(7.31g，15.33mmol)。将反应混合物在100℃加热3h。将n-丁醇溶剂在减压下蒸除。将所得残余物用水(200ml)稀释，并用DCM(2x 400ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗产物用乙醚和正戊烷(1∶1)研磨3次(3X250mL)，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(25g，99.2mmol，62％)，其为近白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.2)，LCMS(m/z)252.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.45(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，7.73(dt，J＝1.4，0.7Hz，1H)，7.67-7.60(m，1H)，7.24-7.16(m，2H)，7.10(d，J＝7.7Hz，1H)，3.93(td，J＝5.0，2.5Hz，1H)，3.19-2.98(m，2H)，2.92-2.71(m，2H)，2.50(s，3H)，2.11-1.96(m，1H)，1.94-1.81(m，1H)。
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(10g，51.1mmol)、(6-甲基吡啶-3-基)硼酸(10.50g，77mmol)和磷酸三钾(21.70g，102mmol)在1，4-二噁烷(100mL)和水(20.0mL)中的脱气的溶液中加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(4.68g，5.11mmol)和x-phos(4.87g，10.22mmol)。将反应混合物在100℃加热8h。将溶剂在减压下蒸除；将获得的残余物用水(200ml)稀释，并用DCM(2x 100ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗产物用乙醚和正戊烷(1∶1)研磨3次(3X100mL)，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(11.2g，44.4mmol，65％)，其为近白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.3)。LCMS(m/z)：253.1[M+H]，Rt＝2.86min。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 8.97(d，J＝2.19Hz，1H)，8.06(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.28-7.11(m，1H)，6.94(d，J＝7.89Hz，1H)，6.74(d，J＝7.67Hz，1H)，5.21(s，1H)，4.08-3.98(m，1H)，3.36-3.12(m，3H)，2.99-2.89(m，1H)，2.56(s，3H)，2.17-2.10(m，2H)。
合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(20g，102mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(29.1g，153mmol)和Cs2CO3(100g，307mmol)在1，4-二噁烷(100mL)和水(10mL)中的悬浮液搅拌，并在室温用氩气脱气15分钟。接下来，将乙酸钯(II)(0.574g，2.56mmol)和2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(2.437g，5.11mmol)加入至反应混合物。然后将反应混合物在110℃搅拌2小时。将反应物质经硅藻土过滤并浓缩。将残余物用EtOAc稀释，并用饱和NaHCO3然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将粗产物加载至硅胶柱，并用Hex/EtOAc(1∶1)洗脱。蒸发收集的级分，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(18g，58.3mmol，57.0％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)306.1(M+H)+。
合成2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(3g，14.31mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)吡啶(3.91g，14.31mmol)和碳酸铯(4.66g，14.31mmol)在1，4-二噁烷(60ml)和水(6ml)中的溶液在室温搅拌，并将反应物质用氩气脱气20min。接下来，一次性将固体乙酸钯(II)(3.21g，14.31mmol)和x-phos(6.82g，14.31mmol)加入反应物质中。将反应混合物在105℃搅拌3-4小时。将反应物质经硅藻土床过滤并浓缩。将粗品溶于乙酸乙酯并用碳酸氢钠溶液和水洗涤。将有机相用硫酸钠干燥，并浓缩。将残余物用正戊烷(3x 50mL)研磨。将所得固体经布氏漏斗过滤，用正戊烷冲洗，收集所需产物(4g，86％)，LCMS(m/z)321.3(M+H)+。
合成(9S)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向在氮气下在25℃搅拌的(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(3g，14.31mmol)、(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)硼酸(5.46g，28.6mmol)和Cs2CO3(13.99g，42.9mmol)在四氢呋喃(THF)(60ml)和水(4ml)中的溶液用氩气吹扫20分钟。然后加入乙酸钯(II)(0.080g，0.358mmol)和X-Phos(227mg)。将反应混合物在110℃搅拌16小时。接下来，将反应混合物浓缩，并将残余物溶于DCM(100mL)。将溶液用水和饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将粗产物加载至硅胶柱，并用Hex/EtOAc(1∶1)洗脱，蒸发收集的级分得产物，其为近白色固体(3.6g，11.1mmol 76％)，LCMS(m/z)321.2[M+H]+。
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向在氮气下在25℃搅拌的(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(10g，47.7mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(8.49g，62.0mmol)和磷酸钾(30.4g，143mmol)在1-丁醇(300ml)和水(100ml)中的溶液用氩气吹扫20分钟。加入X-Phos(2.274g，4.77mmol)、Pd2(dba)3(2.184g，2.385mmol)。将反应混合物在120℃搅拌16小时。浓缩前将残余物溶于DCM(700mL)。将溶液用水和饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到棕色半固体粗产物。将粗产物通过用己烷清洗纯化，得到近白色固体产物(9g，32.4mmol，67.9％产率)，LCMS(m/z)：267.3(M+H)+。
合成(4S)-9-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
将(4S)-7-氯-9-甲基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.900g，4.29mmol)、(6-甲基吡啶-3-基)硼酸(0.882g，6.44mmol)和磷酸三钾(2.73g，12.88mmol)在1，4-二噁烷(14.4mL)和水(3.6mL)中的悬浮液搅拌并用氩气在室温脱气15分钟。然后将Pd2(dba)3(0.393g，0.429mmol)和X-Phos(0.409g，0.858mmol)加入反应混合物。将反应混合物在90℃搅拌16小时。通过TLC(50％EtOAc/己烷)监测反应。将反应混合物冷却至室温，并经硅藻土过滤，用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，并溶解于EtOAc。将EtOAc层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗品(4S)-9-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.700g，2.60mmol，60.7％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)267.0[M+H]+。
合成(2R)-2-乙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(900mg，4.60mmol)、(R)-2-乙基吗啉(1060mg，9.20mmol)和KOtBu(1032mg，9.20mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(20mL)中的悬浮液在氮气下搅拌，并在室温脱气15min，加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(120mg，0.184mmol)。将反应混合物在90℃搅拌12小时。将反应物质经硅藻土垫过滤，并将滤液浓缩。将反应混合物用水稀释，并用EtOAc(2x 20mL)萃取。将有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥。将有机层在减压下浓缩。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，用20％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱。在减压下将收集的级分蒸发，并在高真空下干燥，得到(2R)-2-乙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(750mg，2.73mmol，59.4％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)275.3[M+H]+。
合成(2S，6S)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.800g，4.09mmol)、(2S，6S)-2，6-二甲基吗啉(0.942g，8.18mmol)和KOtBu(0.918g，8.18mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(30mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(II)(0.106g，0.164mmol)至反应混合物。然后将反应混合物在90℃搅拌16小时。通过TLC监测反应。完成后，将反应物质经硅藻土过滤，并将滤液在减压下浓缩。将所得反应混合物用EtOAc稀释，并用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品。将粗产物加载至中性氧化铝，并用(1∶2)EtOAc/己烷洗脱。蒸发收集的级分，得到(2S，6S)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.780g，2.79mmol，68％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)275.3[M+H]+。
合成(2R，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.800g，4.09mmol)、(2R，6R)-2，6-二甲基吗啉(0.942g，8.18mmol)和KOtBu(0.918g，8.18mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(30mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.106g，0.164mmol)至反应混合物。然后将反应混合物在90℃搅拌16小时。通过TLC(TLC：100％EtOAc，Rf值：0.2)监测反应。将反应物质经硅藻土过滤，完全蒸馏除去溶剂。反应混合物用EtOAc稀释，并用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品。将粗产物加载至中性氧化铝，并用(1∶1)EtOAc/己烷洗脱。蒸发收集的级分，得到(2R，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.800g，2.75mmol，67.3％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)275.0[M+H]+。
合成(2S，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.00g，5.11mmol)、(2S，6R)-2，6-二甲基吗啉(1.177g，10.22mmol)和KOtBu(1.147g，10.22mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(20mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(II)(0.133g，0.204mmol)至反应混合物。将反应混合物在90℃搅拌16小时。将反应物质经硅藻土过滤，并将溶剂蒸发。经反应混合物用EtOAc稀释，并用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(2S，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.820g，2.86mmol，56.0％产率)。将粗产物加载至中性氧化铝，并用20％EtOAc/己烷洗脱，得到(2S，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.820g，2.86mmol，56.0％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)275.2[M+H]+。
合成2-环丙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-吗啉
向在0℃搅拌的(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1g，5.11mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(15mL)中的溶液中加入2-环丙基吗啉(0.650g，5.11mmol)和叔丁醇钾(0.574g，5.11mmol)。然后将溶液脱气15min，并加入肉桂基氯[1，3-双(二异丙基苯基)-2-咪唑烷基(imidazolidinyliin)]Pd(II)(3.32g，5.11mmol)。然后将反应物在90℃搅拌16h。将反应混合物用15ml水淬灭，并用15ml乙酸乙酯萃取。将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物加载至100-200硅胶柱，并用2％DCM/MeOH洗脱2-环丙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(1g，3.49mmol，68.3％产率)，得到产物，其为近白色固体，LCMS(m/z)287.2[M+H]+。
合成2，2-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.0g，5.11mmol)、2，2-二甲基吗啉(1.177g，10.22mmol)和KOtBu(1.147g，10.22mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(20mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.133g，0.204mmol)至反应混合物。将反应混合物在90℃搅拌16小时。将反应物质经硅藻土过滤，并将溶剂蒸发。经反应混合物用EtOAc稀释，并用水然后用饱和食盐水溶液洗涤。将溶液用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗产物。将粗产物加载至中性氧化铝柱，并用DCM洗脱，得到2，2-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.800g，2.67mmol，52.3％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)275.0[M+H]+。
合成(9S)-2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在氮气气氛下，在室温，向(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、(R)-2-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和KOtBu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(10mL)中的悬浮液中加入固体[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯][3-苯基烯丙基]钯(II)(1.549g，2.385mmol)，并在80℃搅拌16h。将反应物质冷却至室温，经硅藻土过滤，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗品残余物。将粗品残余物用EtOAc(100mL)稀释，并用水(50mL x2)然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1∶1Hex/EtOAc洗脱)纯化，得到(9S)-2-((2R)-2-(三氟甲基)环戊基)-6，7，8，9，10，10a-六氢-4aH-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.596mmol，64.6％产率)，其为亮绿色固体(TLC：Rf 0.3，洗脱剂：80％EtOAc的己烷溶液)，LCMS(m/z)313.2[M+H]+。
合成(9S)-2-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、(S)-2-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和KOtBu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(10mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。接下来，加入[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯][3-苯基烯丙基]钯(II)(1.549g，2.385mmol)至反应混合物。然后将反应混合物在80℃搅拌16小时。完成后，将反应物质经硅藻土过滤，并浓缩至干。将所得残余物用EtOAc稀释，并用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将粗产物加载至硅胶柱，用Hex/EtOAc(1∶1)洗脱。蒸发收集的级分，得到(9S)-2-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.868mmol，78％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)313.3[M+H]+。
合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将KOtBu(0.321g，2.86mmol)加入至(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.3g，1.431mmol)和3-(三氟甲基)吡咯烷(0.398g，2.86mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(10mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.037g，0.057mmol)至反应混合物。将反应物在80℃搅拌16h。将反应物冷却至室温，经硅藻土过滤并在减压下蒸发。将反应混合物在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤并将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到(85∶15)混合物，并通过SFC进一步纯化，得到纯的(9S)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.151g，0.473mmol，33.1％产率)，其为米色固体。
分析型SFC条件：峰II柱/尺寸：
Chiralpak AD-H(250X 4.6)mm，5u
制备型SFC条件
LCMS(m/z)313.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ6.87(d，J＝8.1Hz，1H)，6.49(d，J＝4.9Hz，1H)，5.58(d，J＝8.1Hz，1H)，3.60(dd，J＝10.8，8.4Hz，1H)，3.47(s，1H)，3.39(dd，J＝10.6，5.8Hz，2H)，3.30(s，2H)，3.14-2.98(m，2H)，2.90(d，J＝4.5Hz，1H)，2.50(qd，J＝3.2，2.2，1.6Hz，1H)，2.31-2.13(m，1H)，2.05(d，J＝7.1Hz，1H)，1.72(dt，J＝7.0，3.0Hz，2H)，1.44(s，1H)，1.16(d，J＝14.4Hz，1H)。
合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
在室温，将(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(0.062g，0.095mmol)加入至(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，2.385mmol)、3-(三氟甲基)吡咯烷(0.663g，4.77mmol)和KOtBu(0.535g，4.77mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(20mL)中的脱气的悬浮液中。将反应混合物进一步脱气10min，并在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并经硅藻土垫过滤。将滤液蒸发，得到棕色残余物。将残余物在水(15mL)和EtOAc(2X 25mL)之间分配。将有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤并将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：80％EtOAc/己烷，Rf值：0.4，UV活性)。将粗品通过柱色谱(100-200目)使用硅胶纯化，并将产物用50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到对映异构体的(30∶70)混合物，将其通过SFC进一步纯化，得到(9S)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.125g，0.393mmol，16.46％产率)，其为棕色固体。
分析型SFC条件：峰I(主要)
Chiralpak AD-H(250X 4.6)mm，5u
制备型SFC条件
LCMS(m/z)313.31[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ7.03(dd，J＝8.2，0.6Hz，1H)，5.67(d，J＝8.2Hz，1H)，4.91(s，1H)，3.71(dd，J＝10.8，8.5Hz，1H)，3.62(s，1H)，3.52(dd，J＝10.8，7.2Hz，2H)，3.43(dt，J＝9.6，7.5Hz，1H)，3.24-3.08(m，3H)，2.99(d，J＝8.2Hz，1H)，2.83(d，J＝12.0Hz，1H)，2.27-2.08(m，2H)，1.91-1.75(m，2H)，1.65(d，J＝5.0Hz，2H)，1.26(t，J＝6.6Hz，1H)。
合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.750g，3.58mmol)、3-(三氟甲基)哌啶(1.096g，7.15mmol)和KOtBu(1.204g，10.73mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(30mL)中的悬浮液搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后将(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.093g，0.143mmol)加入反应混合物。反应混合物在80℃搅拌16h。将反应物质经硅藻土过滤，并在减压下完全蒸除。将反应混合物用EtOAc稀释(50ml)，用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将粗产物加载至硅胶柱，并用Hex/EtOAc(1∶1)洗脱。蒸发收集的级分，并将所得残余物通过手性SFC分离纯化，得到纯的(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.450g，1.371mmol，38.3％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf值：0.4，80％EtOAc/己烷)。
分析型SFC条件：峰I
制备型SFC条件
LCMS(m/z)327.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ6.89(dd，J＝8.2，0.7Hz，1H)，6.56(d，J＝4.6Hz，1H)，5.89(d，J＝8.3Hz，1H)，4.58-4.33(m，1H)，3.97(d，J＝12.8Hz，1H)，3.48(s，1H)，3.17-2.98(m，2H)，2.92(d，J＝4.4Hz，1H)，2.76-2.57(m，2H)，2.50(p，J＝1.9Hz，2H)，1.96(d，J＝10.6Hz，1H)，1.74(dd，J＝9.4，3.3Hz，3H)，1.61-1.32(m，3H)，1.25-1.08(m，1H)。
合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将KOtBu(0.803g，7.15mmol)加入至(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.750g，3.58mmol)和3-(三氟甲基)哌啶(1.096g，7.15mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(DME)(20mL)中的搅拌的溶液。将反应物搅拌，并用氩气在室温脱气15分钟。然后加入(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.093g，0.143mmol)至反应混合物。将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应物冷却至室温，经硅藻土过滤和完全蒸发，并在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到(69∶31)混合物，并通过SFC进一步纯化，得到纯的(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，1.310mmol，36.6％产率)，其为淡黄色固体。
分析型SFC条件：峰II
柱/尺寸：Chiralpak AD-H(250X 4.6)mm，5u
制备型SFC条件
LCMS(m/z)327.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 6.89(d，J＝8.11Hz，1H)，6.55(br d，J＝3.95Hz，1H)，5.89(d，J＝8.33Hz，1H)，4.49(dt，J＝12.44，1.78Hz，1H)，3.96(d，J＝13.15Hz，1H)，3.48(br s，1H)，3.15-2.96(m，2H)，2.94-2.80(m，1H)，2.74-2.56(m，2H)，2.55-2.41(m，2H)，2.12-1.84(m，1H)，1.82-1.64(m，3H)，1.58-1.32(m，3H)，1.32-1.08(m，1H)。
合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
在30℃，向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，2.56mmol)、3-(三氟甲基)哌啶(783mg，5.11mmol(S-异构体，含有不等对映异构混合物))在1，2-二甲氧基乙烷(15mL)中的脱气的溶液中加入叔丁醇钾(574mg，5.11mmol)和Umicore催化剂(33.2mg，0.051mmol)。将反应混合物在80℃加热17h。将反应混合物冷却至室温，并倒入冷水(70mL)，用乙酸乙酯(2x150mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：1至3％甲醇的乙酸乙酯溶液)纯化，得到400mg的(4S)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯。手性HPLC指示为53∶44对映异构混合物，将该对映异构体的不等混合物通过手性制备型HPLC纯化，得到两个单独的峰(手性制备条件：4g-40％-100巴100.5％DEA的甲醇溶液，Chiralpak，AD-H(4.6mm*250mm))作为最快的洗脱峰：210mg(峰I，0.673mmol，15％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)和最慢的洗脱峰：310mg(峰II，310mg，0.993mmol，22％)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)313.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 6.92(d，J＝8.33Hz，1H)，6.56(d，J＝4.38Hz，1H)，5.83(d，J＝8.11Hz，1H)，4.43(d，J＝12.28Hz，1H)，3.93(d，J＝12.28Hz，1H)，3.87-3.72(m，1H)，3.10-2.83(m，2H)，2.82-2.71(m，1H)，2.70-2.55(m，3H)，2.46-2.18(m，1H)，2.11-1.86(m，2H)，1.86-1.65(m，2H)，1.55-1.32(m，2H)。
合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
在30℃，向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，2.56mmol)、(R-异构体，含有不等对映异构混合物)3-(三氟甲基)哌啶(783mg，5.11mmol)在1，2-二甲氧基乙烷(15mL)中的脱气的溶液中加入叔丁醇钾(574mg，5.11mmol)和Umicore催化剂(33.2mg，0.051mmol)。将反应混合物在80℃加热17h。将反应混合物冷却至室温，并倒入冷水(70mL)，用乙酸乙酯(2x150mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：1至3％甲醇的乙酸乙酯溶液)纯化，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯。柱色谱分离后，得到500mg化合物，手性HPLC指示为36∶63对映异构混合物，将该对映异构体的不等混合物通过手性制备型HPLC纯化，得到两个单独的峰(手性制备条件：4g-40％-100巴100.5％DEA的甲醇溶液，Chiralpak，AD-H(4.6*250)mm5u)，作为最快的洗脱峰：140mg(峰I)和最慢的洗脱峰：310mg(峰II，310mg，0.993mmol，22％)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)313.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 6.92(d，J＝8.33Hz，1H)，6.56(d，J＝4.60Hz，1H)，5.83(d，J＝8.33Hz，1H)，4.41(dt，J＝12.50，1.86Hz，1H)，3.93(d，J＝12.50Hz，1H)，3.81(td，J＝4.88，2.74Hz，1H)，3.07-2.88(m，2H)，2.80-2.55(m，4H)，2.48-2.27(m，1H)，2.01-1.88(m，2H)，1.85-1.65(m，2H)，1.52-1.38(m，1H)，1.36-1.20(m，1H)。
基本脲中间体
合成(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在0℃搅拌的(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.2g，6.13mmol)在四氢呋喃(THF)(50mL)中的溶液中加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(1.768g，7.36mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16小时，然后倒入冷水(100mL)，并用乙酸乙酯(200mL)萃取。将有机层连续用水(70mL)和饱和食盐水(70mL)洗涤，用无水硫酸钠在减压下干燥。将粗品残余物通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，使用30％至70％的梯度混合物作为洗脱剂，得到1.3g(66％)标题化合物，其为近白色物质，LCMS(m/z)316.2(M+H)+。
合成(4R)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在0℃搅拌下加入吡嗪-2-甲酸(800mg，6.45mmol)、DPPA(3548mg，12.89mmol)和三乙胺(4.49mL，32.2mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液。将反应物搅拌并温热至室温保持2h。接下来，加入(4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1009mg，5.16mmol)。将反应混合物在90℃搅拌16小时。将反应混合物用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(200mL X2)萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，在减压下浓缩，得到半纯的化合物。将粗产物加载至硅胶柱，并用Hex/EtOAc洗脱。收集级分，得到所需产物(1.4g，3.71mmol，58％)，LCMS(m/z)317.2(M+H)+。
合成(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将DIPEA(31.9mL，183mmol)然后将DPPA(15.09g，54.8mmol)加入至吡啶-3-甲酸(4.5g，36.6mmol)在四氢呋喃(THF)(60mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌2h。然后加入(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(5.01g，25.6mmol)至反应混合物，并在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用水(60mL)稀释，用乙酸乙酯(2X50mL)萃取，用饱和食盐水(50mL)洗涤。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，1％甲醇的DCM溶液，得到所需产物(4g，12.03mmol，32.9％产率)，LCMS：(m/z)316.2(M+H)+。
合成(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向吡嗪-2-甲酸(4.08g，32.9mmol)在四氢呋喃(THF)(100ml)中的搅拌的溶液中加入叠氮磷酸二苯酯(14.19ml，65.8mmol)，然后加入TEA(22.94ml，165mmol)。将溶液温热至室温，并继续搅拌3h。接下来，加入固体(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(5.6g，28.6mmol)，并将混合物加热至回流。将反应物回流搅拌2h，然后冷却至室温，并继续搅拌过夜。第二天，将混合物用水稀释，并用EtOAc萃取(三次)。将合并的EtOAc萃取液用Na2SO4干燥，浓缩，得到粗产物。将深色残余物通过硅胶色谱纯化：330g柱，100ml/min，0-25％EtOAc/MeOH，经30min。将含有产物的级分合并，得到所需产物，其为黄色油状物。向该油状物中加入Et2O(50ml)，并将其在减压下浓缩。这导致产物析出为亮黄色固体(6.9g，76％产率)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ＝12.61(s，1H)，9.47(d，J＝1.4Hz，1H)，8.68-7.99(m，2H)，7.50(d，J＝8.0Hz，1H)，6.96(d，J＝8.0Hz，1H)，5.65(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.30-3.15(m，1H)，3.11(dt，J＝12.1，2.1Hz，1H)，3.00(dd，J＝12.1，3.2Hz，1H)，2.39-2.22(m，1H)，2.11-1.97(m，2H)；LCMS(m/z)316.9(M+H)+。
合成(4S)-7-氯-N-(哒嗪-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在THF(10mL)中向哒嗪-4甲酸(0.5g，4.03mmol)的溶液中加入叠氮磷酸二苯酯(1.308mL，6.04mmol)和DIPEA(2.111mL，12.09mmol)，将其在氮气下在0℃搅拌。将反应混合物在30℃搅拌2h，并在30℃加入(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.473g，2.417mmol)。将反应混合物在90℃搅拌6h。将THF在减压下蒸除，并将残余物用水稀释，并萃取至DCM中。将有机层用水、饱和食盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。将溶剂在减压下蒸除。将粗品化合物通过用乙醚和正戊烷(1∶1)研磨纯化，得到产物(320mg，0.91mmol，23％产率)，其为米色固体。LCMS(m/z)316.9[M+H]+。
合成(4S)-N-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-7-氯-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，2.56mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(758mg，2.56mmol)，并在室温搅拌30min，然后加入三乙胺(0.356mL，2.56mmol)和3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-胺(417mg，3.07mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。通过TLC(10％甲醇的DCM溶液)监测反应。将反应混合物用25ml水淬灭，并用25ml乙酸乙酯萃取。将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物加载至100-200硅胶柱，并用3％DCM/MeOH洗脱，得到纯的化合物(4S)-N-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-7-氯-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(200mg，0.527mmol，20.63％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)357.9[M+H]+。
合成进一步中间体
合成3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮
在氮气下，在室温搅拌的吡啶-2-甲酸(1g，8.12mmol)在甲苯(25mL)中的溶液中加入叠氮磷酸二苯酯(2.235g，8.12mmol)和TEA(1.132mL，8.12mmol)，并在室温搅拌30min。之后，将反应混合物在80℃搅拌2小时。接下来，将反应混合物冷却至室温并过滤，将固体用甲苯洗涤，得到化合物3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(600mg，2.352mmol，29.0％产率)，LCMS(m/z)241.2[M+H]+。
合成(R)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在密封管中加入(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.000g，22.70mmol)、4-氯吡啶-2-胺(1.459g，11.35mmol)和钠(0.522g，22.70mmol)的悬浮液。将反应混合物在140℃搅拌16h。接下来，将反应混合物冷却至室温，溶于MeOH并倒入冰水，并用EtOAc萃取。将有机相用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶，并用2-3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的化合物(1.1g，21％)，LCMS(m/z)225.2[M+H]+。
合成(S)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺
在密封管中加入(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.000g，22.70mmol)、4-氯吡啶-2-胺(1.459g，11.35mmol)和钠(0.522g，22.70mmol)的悬浮液。将反应混合物在140℃搅拌16h，然后冷却至室温，溶于MeOH，并倒入冰水并用EtOAc萃取。将有机相用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和蒸发。将粗品通过硅胶柱色谱纯化，用2-3％MeOH/DCM洗脱，得到所需产物(1.2g，22％)，LCMS(m/z)225.2[M+H]+。
合成(R)-2-(四氢呋喃-3-基氧基)嘧啶-4-胺
向(R)-四氢呋喃-3-醇(2.72g，30.9mmol)在THF(30mL)中的搅拌的溶液中加入NaH(0.926g，23.16mmol)，并在室温搅拌30min。经大约15min向其中分批加入2-氯嘧啶-4-胺(2.0g，15.44mmol)，并在70℃加热16h。使反应混合物降至室温，然后冷却至0℃，用冰冷的水淬灭，并用乙酸乙酯(3x50ml)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，得到(R)-2-(四氢呋喃-3-基氧基)嘧啶-4-胺(1.6g，8.839mmol，51.5％产率)，其为近白色固体。
合成(R)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
在氮气下，在0℃搅拌下加入6-氯吡嗪-2-胺(5g，38.6mmol)、氢化钠(2.316g，57.9mmol)和(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(5.61g，42.5mmol)在四氢呋喃(THF)(50mL)中的溶液。将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物用冰冷的水淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用Na2SO4干燥。将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗产物加载至硅胶柱，并用DCM/MeOH洗脱。将含有产物的级分合并，并在减压下蒸发，得到所需产物(2.8g，11.9mmol，31％)，LCMS(m/z)225.9[M+H]+。
合成(S)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺
将6-氯吡嗪-2-胺(0.980g，7.57mmol)、(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(2g，15.13mmol)和钠(0.348g，15.13mmol)放入密封管，并在130℃加热16小时，然后将反应混合物用甲醇和冰冷的水(100mL)淬灭，并用乙酸乙酯(5x 50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到产物(1g，4.26mmol，28.2％产率)，LCMS(m/z)265.1[M+H]+。
合成(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
经15min，在氮气下，向在室温搅拌的(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(10.20g，77mmol)和NaH(4.63g，116mmol)在四氢呋喃(THF)(50mL)中的悬浮液中分批加入2-氯嘧啶-4-胺(5g，38.6mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16小时。接下来，将反应混合物用NaHCO3水溶液淬灭，然后用EtOAc萃取，用Na2SO4干燥，蒸发。将粗产物加载至硅胶柱，并用50％Hex/EtOAc洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(3g，11.84mmol，30.7％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)226.2[M+H]+。
合成(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺
在室温，经1min向氢化钠(0.817g，34.1mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入(R)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3g，22.70mmol)在THF(5mL)中的溶液，并在室温搅拌15min，然后在室温分批加入2-氯嘧啶-4-胺(2.059g，15.89mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到4.0g粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200硅胶目，并用2-3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的化合物(2.5g，10.42mmol，46％)，LCMS(m/z)226.2[M+H]+。
合成(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺
向2-氯吡啶-4-胺(1.459g，11.35mmol)、(S)-(2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(3.0g，22.70mmol)中加入钠(0.522g，22.70mmol)。将反应混合物在140℃搅拌16小时，监测反应进程。
将反应混合物溶于MeOH，倒入冰水并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到4.0g粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200目硅胶，用2-3％MeOH/DCM洗脱，得到(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(2.5g，10.73mmol，47.3％产率)，LCMS(m/z)225.3[M+H]+。
合成(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺
在室温在密封管中加入2-氯吡啶-4-胺(4g，31.1mmol)、(R)-(2，2-二二基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲醇(2.056g，15.56mmol)和钠(0.715g，31.1mmol)。将反应混合物在140℃搅拌48小时。将反应混合物冷却至室温，并用MeOH然后用水淬灭。然后将反应物质用EtOAc萃取。然后将有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和完全蒸除。将粗产物加载至硅胶柱，并用Hex/EtOAc(1∶1)洗脱，蒸发收集的级分，得到所需产物(2.250g，9.93mmol，31.9％产率)，LCMS(m/z)225.0[M+H]+。
合成(S)-2-((四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-胺
在室温，经5min，分批向2-氯嘧啶-4-胺(2g，15.44mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的搅拌的溶液中加入NaH(0.741g，30.9mmol)。然后将反应物在30℃搅拌大约10min。在30℃，向上述反应中加入(S)-四氢呋喃-3-醇(1.088g，12.35mmol)，并在80℃搅拌8小时。将反应混合物用冰冷的水在0℃淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机层用水彻底洗涤，并用Na2SO4干燥。将溶剂在减压下蒸除，得到产物。将粗产物用石油醚研磨，LCMS(m/z)182.2[M+H]+。
合成(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸苯酯
在0℃，将氯甲酸苯酯(2.90g，18.53mmol)加入吡啶(3.12mL，38.6mmol)在二氯甲烷(DCM)(50mL)中的搅拌的溶液，并搅拌15min，然后在相同温度加入1-甲基-1H-吡唑-4-胺(1.5g，15.45mmol)。将反应混合物在室温搅拌4h。起始原料消耗后(通过TLC监测)，加入冰冷的水，分离有机层，用水和饱和食盐水洗涤。将有机层经硫酸钠过滤，并浓缩，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用60-120(硅胶)，并用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到所需产物(1.6g，6.41mmol，42％产率)，其为亮棕色固体，LCMS(m/z)218.1(M+H)+。
合成吡啶-3-基氨基甲酸苯酯
在氮气下，在室温搅拌的氯甲酸苯酯(2.163g，13.81mmol)和吡啶(1.375mL，17.00mmol)在二氯甲烷(DCM)(30mL)中的溶液中加入吡啶-3-胺(1.0g，10.63mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层，并将水层用DCM(50ml)萃取。将合并的DCM层用水洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和在高真空浓缩，得到粗产物。将粗产物加载至硅胶柱，并用20％EtOAc/己烷洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(1.3g，6.01mmol，57％)，其为白色固体，LCMS(m/z)215.1(M+H)+。
合成嘧啶-2-基氨基甲酸苯酯
在氮气下，在室温搅拌的氯甲酸苯酯(2.140g，13.67mmol)和吡啶(1.361mL，16.82mmol)在二氯甲烷(DCM)(10mL)中的溶液中加入嘧啶-2-胺(1.0g，10.51mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层，并将水层用DCM(50ml)萃取。将合并的DCM层用水洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和在高真空下浓缩，得到粗产物。将其加载至硅胶柱，并用20％EtOAc/己烷洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(1.6g，6.49mmol，61.7％)，LCMS(m/z)216.3(M+H)+。
合成(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯酯
在氮气下，在室温搅拌的氯甲酸苯酯(1.397g，8.92mmol)和吡啶(0.721mL，8.92mmol)在二氯甲烷(DCM)(40mL)中的溶液中加入5-氟吡啶-2-胺(1.0g，8.92mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层，并将水层用DCM(20ml)萃取。将合并的有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和在真空下浓缩，得到所需产物(1.4g，5.94mmol，67％)，LCMS(m/z)233.2(M+H)+。
合成(2-甲基-2H-吲唑-5-基)氨基甲酸苯酯
在氮气下，在室温搅拌的氯甲酸苯酯(1.064g，6.79mmol)和吡啶(0.550mL，6.79mmol)在二氯甲烷(DCM)(40mL)中的溶液中加入2-甲基-2H-吲唑-5-胺(1g，6.79mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。将反应混合物用饱和碳酸氢钠溶液淬灭。分离有机层，将水层用DCM(20ml)萃取。将合并的有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，和在真空下浓缩，得到(2-甲基-2H-吲唑-5-基)氨基甲酸苯酯(1.3g，4.82mmol，70.9％产率)，LCMS(m/z)268.1(M+H)+。
合成(5-乙基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯
在室温，将吡啶(1.051mL，12.99mmol)滴加至氯甲酸苯酯(1.324mL，10.56mmol)在二氯甲烷(DCM)(20ml)中的搅拌的溶液中，并搅拌30分钟。然后在室温滴加溶于二氯甲烷(DCM)(10ml)中的5-乙基吡嗪-2-胺(1g，8.12mmol)，并在50℃搅拌16h。将反应混合物升至室温，用DCM(3X50mL)稀释，用水(2X30mL)和饱和食盐水(30mL)洗涤。分离有机层，并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，通过10％乙酸乙酯的石油醚溶液作为洗脱剂，得到所需产物，其为近白色松散固体(1.6g，6.58mmol，81％)，LCMS(m/z)244.2(M+H)+。
合成(5-环丙基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯
在0℃将吡啶(0.598mL，7.40mmol)滴加至氯甲酸苯酯(0.928mL，7.40mmol)在二氯甲烷(DCM)(15ml)中的搅拌的溶液中，并在室温搅拌30分钟。然后在0℃滴加溶于二氯甲烷(DCM)(5ml)的5-环丙基吡嗪-2-胺(1g，7.40mmol)，并在室温搅拌3h。将反应混合物用DCM(3X50mL)稀释，用水(2X20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤。分离有机层，并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，10％乙酸乙酯的石油醚溶液作为洗脱剂，得到所需产物(1.4g，5.31mmol，72％)，其为近白色松散固体，LCMS(m/z)256.2(M+H)+。
合成(6-乙氧基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯
在室温将吡啶(0.930mL，11.50mmol)加入至氯甲酸苯酯(1.463g，9.34mmol)在DCM(15mL)中的溶液中，并搅拌20min，然后加入6-乙氧基吡嗪-2-胺(1.0g，7.19mmol)的DCM(15mL)溶液，并继续搅拌另外40min。将反应混合物用DCM(2X20mL)稀释，用水(20mLx2)和饱和食盐水(10mL)洗涤。将有机萃取物用Na2SO4干燥，并将溶剂在真空中除去，得到所需产物(1.65g，5.22mmol，72.6％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)260.2(M+H)+。
合成哒嗪-3-基氨基甲酸苯酯
经5min，在氮气下，在25℃搅拌的氯甲酸苯酯(1.070g，6.83mmol)、吡啶(0.665g，8.41mmol)在二氯甲烷(10ml)中的溶液中加入哒嗪-3-胺(0.5g，5.26mmol)在二氯甲烷(5ml)中的悬浮液。将反应混合物在25℃搅拌1小时。接下来，将有机相用水3mL、饱和食盐水3mL洗涤，用硫酸钠干燥和在真空中浓缩，得到粗产物，其为白色固体。将化合物用己烷洗涤，在减压下干燥，LCMS(m/z)216.2(M+H)+。
合成嘧啶-4-基氨基甲酸苯酯
经5min，在氮气下，在25℃搅拌的氯甲酸苯酯(1.070g，6.83mmol)、吡啶(0.665g，8.41mmol)在DCM(15ml)中的溶液中滴加嘧啶-4-胺(0.5g，5.26mmol)在DCM(5ml)中的悬浮液。将反应混合物在25℃搅拌1小时。将有机相用水3mL、饱和食盐水3mL洗涤，用硫酸钠干燥和在真空下浓缩，得到粗产物，其为米色固体。将粗品化合物用己烷洗涤，然后在减压下干燥，得到所需产物(500mg，1.95mmol，37％)，LCMS(m/z)215.9(M+H)+。
合成进一步双环中间体
合成(4S)-N-(4-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(499.5mg，1.636mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中加入TEA(1.368mL，9.82mmol)、三光气(486mg，1.636mmol)。将其在室温搅拌15min，然后经5min滴加(R)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(1101mg，4.91mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16h，然后倒入水中，并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗产物。将粗品化合物通过反相色谱(0.1％HCOOH&水)/MeOH纯化，得到所需产物(450mg，49％)，LCMS(m/z)555.9(M+H)+。
合成(4S)-N-(6-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(R)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(803mg，3.57mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中加入三光气(423mg，1.427mmol)，并在相同温度搅拌30min。在室温加入TEA(1.657mL，11.89mmol)然后加入(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。通过TLC和粗略的LCMS监测反应。将THF在减压下蒸除，将残余物用水稀释，并用DCM萃取。将有机层用Na2SO4干燥，将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶作为固定相(100-200目)，和2-3％MeOH/EtOAc作为洗脱剂。收集纯的级分和在减压下浓缩，得到纯的产物0.4g，其为近白色固体(450mg，0.71mmol，30％)，LCMS(m/z)504.3(M+H)+。
合成(4S)-N-(4-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(545mg，1.785mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中加入TEA(1.493mL，10.71mmol)、三光气(530mg，1.785mmol)。然后将反应混合物搅拌15min，然后经5min滴加(S)-4-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-胺(1201mg，5.36mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16h，然后冷却至室温，并倒入水中并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗产物。将其通过反相柱色谱(0.1％HCOOH&水)/MeOH纯化，得到所需产物(500mg，49％)，LCMS(m/z)556.3(M+H)+。
合成(4S)-N-(6-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(850mg，2.78mmol)在40mL THF(密封管)中的搅拌的溶液中加入三光气(324mg，1.093mmol)，并搅拌30min。向该反应混合物中加入(R)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(938mg，4.16mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并将混合物倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶；100-200目，用1至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(6-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(900mg，1.618mmol 57％产率)，其为白色固体(TLC：洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)557.3(M+H)+。
合成(4S)-N-(6-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(723mg，2.368mmol)在四氢呋喃(THF)(25mL)中的溶液加入三光气(351mg，1.184mmol)，并将反应混合物在室温搅拌30min，然后加入TEA(1.650mL，11.84mmol)和(S)-6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(800mg，3.55mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时，然后冷却至室温，并倒入水中并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物，将其通过反相柱纯化，并用83％(0.1％HCOOH&水)/MeOH洗脱，得到纯的化合物(300mg，0.534mmol，23％)，LCMS(m/z)557.4(M+H)+。
合成(4S)-N-(2-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，1.965mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(583mg，1.965mmol)、TEA(1.644mL，11.79mmol)，在室温搅拌15min，并经1min加入(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(1328mg，5.90mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16小时，然后倒入水中并用EtOAc萃取(3X50mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到600mg。将粗品化合物通过反相柱纯化，并用90％(0.1％HCOOH&水)/MeOH洗脱，得到所需化合物(450mg，0.76mmol，39％)，LCMS(m/z)557.2(M+H)+。
合成(4S)-N-(2-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，1.965mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入TEA(1.644mL，11.79mmol)、三光气(583mg，1.965mmol)，搅拌15min，并分批加入(S)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(1322mg，5.90mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时，通过TLC监测反应进程。将反应混合物倒入冰水中并用EtOAc萃取(3X100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗产物。粗品化合物通过反相柱纯化，并用93％(0.1％HCOOH&水)/MeOH洗脱，得到所需产物(450mg，0.807mmol，41.1％产率)，LCMS(m/z)556.4(M+H)+。
合成(4S)-N-(2-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.310mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液加入TEA(1.096mL，7.86mmol)、三光气(389mg，1.310mmol)，在室温搅拌15min，加入(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-胺(885mg，3.93mmol)在THF(2.0mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥和蒸发至干。将粗品化合物通过反相柱纯化，并用90％(0.1％HCOOH&水)/MeOH洗脱，得到纯的化合物(350mg，0.602mmol，46％)，LCMS(m/z)557.0(M+H)+。
合成(4S)-N-(2-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1g，3.28mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的溶液中加入TEA(2.74mL)和三光气的溶液，在氮气下室温搅拌30分钟。向其中加入(R)-2-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-胺(2.204g，9.83mmol)在四氢呋喃(THF)(8mL)(2.204g)中的溶液。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物浓缩，并将残余物溶于DCM(100mL)。将溶液用水和饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将粗产物加载至硅胶柱，并用EtOAc/石油醚(60∶20)洗脱，蒸发收集的级分，得到所需产物(600mg，0.92mmol，28％)，其为近白色半固体，LCMS(m/z)556.3(M+H)+。
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，向在室温搅拌30min的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)、三乙胺(1.105mL，7.93mmol)和三光气(282mg，0.951mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中经5min滴加2-(吡啶-3-基)乙胺(387mg，3.17mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16小时，并通过TLC监测反应进程。将反应混合物倒入冰水中并用EtOAc萃取(3X 100mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物。将粗品化合物通过反相柱纯化，并用25-30％(0.1％HCOOH&水)/MeOH洗脱，得到终产物(250mg，0.599mmol，37.8％产率)，LCMS(m/z)401.1(M+H)+。
合成4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在20℃，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)和哌嗪-1-甲酸叔丁酯(706mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中依次加入Cs2CO3(1852mg，5.68mmol)、xphos(361mg，0.758mmol)和PdOAc2(85mg，0.379mmol)。将反应混合物在100℃搅拌16小时。将反应混合物倒入冷水(20mL)中，并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物加载至硅胶柱，并用3％DCM/MeOH洗脱，得到4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(359mg，0.616mmol，32.5％产率)，LCMS(m/z)467.3(M+H)+。
合成3-甲基-4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在20℃，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(800mg，2.53mmol)、3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1012mg，5.05mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中依次加入Cs2CO3(2469mg，7.58mmol)、xphos(482mg，1.010mmol)和PdOAc2(113mg，0.505mmol)。将反应混合物在100℃搅拌16小时。通过TLC监测反应。将反应混合物倒入冷水(20mL)中，并用乙酸乙酯(50mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗品。将粗产物加载至硅胶柱，并用2％DCM/MeOH洗脱。蒸发收集的级分，得到所需产物(397.5mg，0.670mmol，26.5％产率)，LCMS(m/z)481.1(M+H)+。
合成(4S)-7-(4-苄基-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在20℃，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.579mmol)、1-苄基-2-甲基哌嗪(601mg，3.16mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中依次加入Cs2CO3(1543mg，4.74mmol)和肉桂基[1，3-双(二异丙基苯基)-2-咪唑烷基]氯化钯(II)(51.3mg，0.079mmol)。将反应混合物在110℃搅拌16小时。将反应混合物倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(200mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物加载至硅胶柱，并用3％DCM/MeOH洗脱，得到(4S)-7-(4-苄基-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(501.5mg，0.885mmol，56.0％产率)，LCMS(m/z)471.3(M+H)+。
合成4-溴-2-(二氟甲基)吡啶
在0℃，将DAST(0.620mL，4.69mmol)滴加至4-溴吡啶-2-甲醛(700mg，3.76mmol)在氯仿(21mL)中的溶液中。将反应混合物在20℃搅拌12h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(20mL)中，并用DCM(2X 20mL)萃取。将DCM层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到4-溴-2-(二氟甲基)吡啶(400mg，1.870mmol，49.7％产率)，其为亮黄色固体，LCMS(m/z)208.0[M+H]+。
合成(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)硼酸
在28℃，将乙酸钾(472mg，4.81mmol)加入至4-溴-2-(二氟甲基)吡啶(400mg，1.923mmol)和双(频哪醇基)二硼(610mg，2.404mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入PdCl2(dppf)(4.22mg，5.77μmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在80℃搅拌48小时。将反应混合物冷却至28℃，蒸发，并将粗品在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离EtOAc层，并用无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液蒸发，得到(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)硼酸(330mg，1.107mmol，57.6％产率)，其为棕色固体，LCMS(m/z)174.1[M+H]+。
合成4-苄基-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯
在0℃，向3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，4.99mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(DMF)(100mL)中的溶液中加入K2CO3(2.070g，14.98mmol)。在0℃搅拌10min后，滴加溴苄(0.891mL，7.49mmol)，并将反应混合物在35℃搅拌16小时，并通过TLC监测反应。将反应混合物倒入NaHCO3水溶液(50mL)中，并用乙酸乙酯(200mL)萃取，并用水然后用饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗品。将粗产物加载至硅胶柱，并用10％Hex/EtOAc洗脱。蒸发收集的级分，得到4-苄基-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1g，3.17mmol，63.4％产率)，LCMS(m/z)174.1[M+H]+。
合成1-苄基-2-甲基哌嗪
在0℃，向4-苄基-3-甲基哌嗪-1-甲酸叔丁酯(1.4g，4.82mmol)在二氯甲烷(DCM)(25mL)中的溶液中加入TFA(1.857mL，24.10mmol)，并将反应混合物在35℃搅拌3小时。通过TLC监测反应。将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将残余物用乙醚(2x 50mL)研磨。将所得固体过滤，并用乙醚洗涤。将其在减压下干燥，得到1-苄基-2-甲基哌嗪三氟乙酸盐(800mg，2.63mmol，54.5％产率)。
合成((R)-2-甲基吗啉代)(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮：
在室温，将三光气(0.529g，1.783mmol)加入至三乙胺(1.243mL，8.92mmol)和(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.45g，1.783mmol)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌1h，然后加入(R)-2-甲基吗啉盐酸盐(0.368g，2.68mmol)，并加热至70℃保持15h。冷却至室温，并用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释。将分离的有机层用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的乙酸乙酯溶液；UV活性；Rf～0.4)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(R)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮(0.2g，0.514mmol，32.4％产率)，其为胶状化合物，LCMS(m/z)380.3(M+H)+。
合成((S)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮
在室温，将三光气(0.470g，1.585mmol)加入至三乙胺(1.105mL，7.93mmol)和(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.4g，1.585mmol)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌1h，然后加入(S)-2-甲基吗啉盐酸盐(0.327g，2.378mmol)，并加热至70℃保持15h。冷却至室温，并用乙酸乙酯(100mL)和水(100mL)稀释。将分离的有机层用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的乙酸乙酯溶液；UV活性；Rf～0.4)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(S)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮(0.2g，0.514mmol，32.4％产率)，其为胶状化合物，LCMS(m/z)480.3(M+H)+。
实施例
实施例1.制备(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯：
向配备温度计、回流冷凝器和机械搅拌器的2L烧瓶中加入(100g，0.52mol)2，6-二氯-3-硝基吡啶、(205g，1.04mol)(S)-天冬氨酸二甲酯盐酸盐、(174g，2.07mol)NaHCO3和1L四氢呋喃。将反应物在40℃搅拌16h，并通过HPLC监测2，6-二氯吡啶的消失。反应完成后，将固体滤除，并用乙酸乙酯(3x 300mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，并将残余物溶于1L乙酸乙酯。经溶液与200g木炭在室温搅拌2h，并将木炭滤除，并用额外乙酸乙酯(3x200mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，得到粗产物(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(180g)，其为黄色油状物。将其不经进一步纯化直接用于下一步。MS(ESI)计算值C11H12ClN3O6：317.0；测得值：318.0(M+H)+。
类似操作可以用于制备(R)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯，通过用(R)-天冬氨酸二甲酯盐酸盐起始。
步骤2.合成(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯：
将配备温度计、回流冷凝器和机械搅拌器的5L三颈烧瓶装入粗品(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯(180g，0.52mol)、铁粉(146g，2.59mol)、2L的2-丙醇和700mL水。将混合物在40℃搅拌，以足以保持内部温度低于70℃的速度加入乙酸(15.5g，0.259mmol)。将反应物在70℃搅拌30min，HPLC指示反应完成。将混合物冷却至40℃，然后加入Na2CO3(165g，1.55mol)，并将混合物搅拌1h。将固体滤除，然后将固体用四氢呋喃(3x500mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，然后将残余物在1L乙醇中搅拌12小时。将固体过滤，并用冷乙醇洗涤。将其在真空中干燥，得到(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(91g，68％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C10H10ClN3O3：255.0；测得值：256.0(M+H)+。
类似操作可以用于制备(R)-甲基2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸盐，通过用(R)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二甲酯起始。
步骤3。合成(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇：
将配备机械搅拌器、回流冷凝器和氮气入口的5L 3颈烧瓶装入LiAlH4(60g，1.58mol)。将烧瓶用冰浴冷却，然后加入500mL四氢呋喃。将搅拌的混合物冷却至0℃，加入(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯(81g，0.32mol)在2L四氢呋喃中的溶液，同时保持内部温度低于5℃。加入完成后，将反应加热回流16h，通过HPLC监测产物的出现。酯还原迅速发生，但是内酰胺还原需要较长时间才能完全还原。将反应物冷却至5℃，然后加入60mL水，保持内部温度低于10℃。加入完成后，将反应物搅拌15min。接下来，加入60mL 15％(w/w)NaOH(水溶液)，保持内部温度低于5℃。加入完成后，将反应物搅拌15min。为完成后处理，加入180mL水，然后将混合物在室温搅拌1h。将固体过滤，并用四氢呋喃(3x 150mL)洗涤。将滤液和洗液在真空中浓缩，然后将固体残余物在真空中干燥，得到(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(55g，81％)，其为棕色固体。MS(ESI)计算值C9H12ClN3O：213.1；测得值：214.1(M+H)+。
类似操作可以用于制备(R)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇，通过用(R)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸甲酯起始。
步骤4.合成(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
向(S)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(50g，0.234mol)在500mL CH2Cl2中的溶液中加入三乙胺(95g，0.936mol)。将混合物在室温搅拌直至变为均相，然后将其冷却至0℃。接下来，滴加POCl3(54g，0.351mol)，维持温度在0℃5。撤去冷却，并将反应物在室温搅拌2h，通过HPLC监测起始醇的消失。反应完成后，加入200mL 1.2MNaHCO3(水溶液)。分离各层，并将水层用CH2Cl2萃取。将合并的CH2Cl2层用1M HCl(水溶液)(4x300mL)萃取，并将合并的HCl层用NaHCO3(饱和)调节至pH＝8。将所得混合物用CH2Cl2(4x300mL)萃取，并将合并的CH2Cl2层用Na2SO4干燥，过滤，并用50g木炭处理。将混合物在室温搅拌3h，经木炭过滤，并将木炭用额外200mL CH2Cl2洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干。将固体残余物在真空中干燥，得到(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(30g，66％)，其为近白色结晶固体。MS(ESI)计算值C9H10ClN3：195.1；测得值：196.1(M+H)+。
类似操作可以用于制备(4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过用(R)-2-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇起始。
步骤5.合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.88g，9.6mm0l)、(3-三氟甲基苯基)硼酸(2.4g，12.6mmol)、Pd(OAc)2(0.228g，1.02mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(0.972g，2.04mmol)和Cs2CO3(6.6g，20.4mmol)的混合物溶于二噁烷/H2O(50mL，v/v＝9∶1)。将反应混合物加热至90℃过夜。冷却至室温后，将其用EtOAc稀释(120mL)，并用水洗涤。将水层用EtOAc萃取，并将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(0至100％EtOAc的戊烷溶液梯度)纯化，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为亮黄色固体(2.26g，77％)。MS(ESI)计算值C16H14F3N3：305.1；测得值：306[M+H]。
使用Pd(OAc)2的类似偶联操作可以用于制备(4S)-7-(3-取代的苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过使用合适的3-取代的苯基硼酸或酯。使用(4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯起始可以制得类似的对映异构体。
步骤6.合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.100g，0.328mmol)和Et3N(160μL，1.15mmol)在THF(4mL)中的溶液中加入三光气(0.050g，0.164mmol)。在室温搅拌30min后，加入2-吡啶基胺(0.092g，0.983mmol)。将反应混合物加热至60℃过夜，并将反应混合物浓缩，并将残余物溶于CH2Cl2(30mL)。将溶液用水和饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(0至100％EtOAc的戊烷溶液梯度)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.086g，62％)。MS(ESI)计算值C22H18F3N5O：425.2；测得值：426.2[M+H]。
类似操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-三氟methly苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的胺部分替代2-吡啶基胺。通过用(4R)-7-(3-三氟甲基苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨起始可以制得类似的对映异构体。类似地，(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-N-(芳基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰胺可以通过该基本操作由(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯和合适的胺部分制备。
实施例2.制备(4S)-N-苯乙基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在0℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.100g，0.326mmol)在CH2Cl2(10mL)中的溶液中加入吡啶(0.0775g，0.980mmol)和氯甲酸苯酯(0.06117g，0.392mmol)。2h后，将混合物用饱和Na2CO3水溶液淬灭，用CH2Cl2(3x 75mL)萃取，用饱和食盐水洗涤，用Na2SO3干燥，浓缩。将残余物通过快速硅胶色谱纯化，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯(0.120g，产率84％)。
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯、2-苯基乙胺(0.057g，0.470mmol)和DMAP(0.035g，0.282mmol)在MeCN(3mL)中的溶液在80℃搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物浓缩，并将残余物通过制备型TLC纯化，用CH2Cl2∶MeOH(10∶1)洗脱，得到(4S)-N-苯乙基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.020g，产率18％)。MS(ESI)计算值C25H23F3N4O：452.18；测得值：453[M+H]。
实施例3。制备(4S)-N-(3-(3-氨基丙-1-炔-1-基)-5-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(3-(3-氨基丙-1-炔-1-基)-5-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(A，0.050g，0.08mmol)在4N HCl的二噁烷溶液(10mL)中的悬浮液在室温搅拌16h。将混合物在减压下浓缩，并用CH3CN研磨。将残余物溶于CH3CN：H2O并冻干，得到(4S)-N-(3-(3-氨基丙-1-炔-1-基)-5-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.030g，产率70％)。MS(ESI)计算值C29H23F3N6O2：544.18；测得值：545[M+H]。
实施例4.制备(4S)-N-甲基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.267g，0.63mmol)溶于二甲基乙酰胺，并加入一当量NaH(0.025g，60％在油中)。将溶液搅拌5分钟，然后加入MeI(39μL)。将混合物在室温搅拌过夜，然后用乙酸乙酯稀释，并依次用饱和食盐水(2×)、水(2×)和饱和食盐水洗涤。将溶液干燥(Na2SO4)和在减压下浓缩，并加载至硅胶柱(乙酸乙酯：戊烷洗脱剂)。浓缩纯的级分，得到纯的(4S)-N-甲基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。MS(ESI)计算值C23H20F3N5O：439.16；测得值：440.1[M+H]。
实施例5.制备(4S)-N-(3-氟吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将氯甲酸苯酯(1.46g，9.37mmol)滴加至3-氟吡啶-4-胺(1g，8.92mmol)和吡啶(0.95mL，11.16mmol)在THF(10mL)中的冷却的溶液中。将反应物在室温搅拌过夜。通过制备型TLC纯化，得到(3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸苯酯，其为黄色固体。
将(3-氟吡啶-4-基)氨基甲酸苯酯(72mg，0.31mmol)、(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(50mg，0.16mmol)和DMAP(24mg，0.20mmol)在3mL乙腈中的混合物在60℃搅拌过夜。将混合物直接加载至制备型TLC，并使用乙酸乙酯/石油醚＝1∶3～1∶8作为洗脱剂纯化，得到(4S)-N-(3-氟吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(18mg，25％)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C22H17F4N5O：443.1；测得值：444.1[M+H]。
该使用氨基甲酸苯酯的通用脲形成操作可以用于制备多种(4S)-7-(芳基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的(4S)-7-(芳基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯代替(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，并通过使用合适的胺部分代替3-氟吡啶-4-胺。通过用(4R)-7-(芳基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯起始可以制备对映异构体系列。
实施例6.制备(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
向二噁烷/H2O(10mL/1mL)中加入(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，2.56mmol)、(3-氯苯基)硼酸(807mg，5.11mmol)、Pd(dppf)Cl2(212mg，0.26mmol)和Cs2CO3(2.08g，6.4mmol)。将混合物在90℃搅拌过夜。将混合物浓缩，并通过柱色谱(乙酸乙酯/石油醚＝1/4)纯化，得到(4S)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(506mg，81％)。MS(ESI)计算值C15H14ClN3：271.1，测得值：272.1[M+H]。
类似操作可以用于制备(4S)-7-(3-氟苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯或(4S)-7-(3-甲氧基苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过使用合适的硼酸或酯。通过用合适的(4R)-7-(3-取代的苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯起始可以制备对映异构体系列。还通过该方法使用合适的起始氯化物制得的是：(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、(9R)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、3-((9R)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯甲腈、3-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯甲腈、(9S)-2-(5-(甲基磺酰基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、(9S)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、N，N-二甲基-3-((9R)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯胺、N，N-二甲基-3-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯胺、(9S)-2-(6-甲基吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、(9S)-2-(吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯、(9S)-2-(3-氯苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯。
步骤2.合成(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将氯甲酸苯酯(6.99mL，55.79mmol)滴加至2-吡啶基胺(5g，53.10mmol)和吡啶(5.65mL，66.41mmol)在THF(50mL)中的冷却的溶液中。将反应物在室温搅拌过夜。缓慢加入饱和食盐水，并将混合物用乙酸乙酯萃取。分离各层，并将有机层用饱和碳酸氢钠和饱和食盐水洗涤。然后将有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩。将残余物用石油醚洗涤，得到吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(2.1g，18％)。
将吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(66mg，0.30mmol)、(4S)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(40mg，0.15mmol)和DMAP(23mg，0.18mmol)在3mL乙腈中的混合物在65℃搅拌过夜。通过TLC和LC-MS监测反应进程。将混合物直接加载至制备型TLC，使用乙酸乙酯/石油醚＝1∶3～1∶8作为洗脱剂，得到(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(28mg，48％)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C21H18ClN5O：391.1；测得值：392.1[M+H]。
该使用氨基甲酸苯酯的通用脲形成操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-氯、-氟或-甲氧基苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用(4S)-7-(3-氯、-氟或-甲氧基苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯和合适的胺部分。通过用合适的(4R)-7-(3-取代的苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯起始可以制备对映异构体系列。类似地，(9S)-2-(5-氟-或氯吡啶-3-基)-N-(芳基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰胺可以通过该脲形成操作制备；参见制备起始(9S)-2-(5-氟-或氯吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯的实施例。
用于制备(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(上述步骤1和2)的类似操作可以用于制备以下化合物，由市售可得的硼酸酯起始：
实施例7.制备(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯：
步骤1.合成(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯：
该部分使用以下方案制备。向40.0g(207mmol)的2，6-二氯-3-硝基吡啶、87.7g(414mmol)的L-谷氨酸二甲酯盐酸盐和69.6g(829mmol)的NaHCO3中的混合物中加入600mL四氢呋喃。将混合物在40℃搅拌24h，通过HPLC监测2，6-二氯-3-硝基吡啶的消失。反应完成后，将固体滤除，并用乙酸乙酯(3x 100mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，然后将残余物通过硅胶色谱纯化，用10/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到60g(87％)产物，其为黄色固体。MS(ESI)计算值C12H14ClN3O6：331.0；测得值：332.1(M+H)+。
步骤2.合成(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯：
该部分使用以下方案制备。向20g(60.2mmol)的(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯和16.8g(301mmol)铁粉中的混合物中加入375mL的2-丙醇，然后加入125mL水。向搅拌的混合物中加入5.5g(90.3mmol)乙酸，然后将反应物回流搅拌1h。通过HPLC监测反应中起始原料的消失。反应完成后，将固体滤除，并用2-丙醇(3x 50mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，然后将残余物在真空中干燥，得到15g(81％)产物，其为深黄色固体。将其不经进一步纯化直接用于下一步。MS(ESI)计算值C11H12ClN3O3：269.0；测得值：270.1。
步骤3。合成(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇：
该部分使用以下方案制备。在N2下，以控制气体逸出的速度，向17.78g(133.3mmol)的AlCl3在260mL四氢呋喃(THF)中的溶液中滴加200mL的2M LiAlH4的THF溶液。得到氢化铝(AlH3)的THF溶液。在单独的烧瓶中，在N2下，制备26.0g(96.4mmol)的(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯在460mL的THF中的溶液，然后用干冰/丙酮浴冷却。伴随搅拌，经2h向其中滴加氢化铝溶液。当加入完成时，将冷却浴撤去，并将反应温热至室温。1.5h后，LCMS分析显示反应完成。接下来，缓慢加入17.6g NaOH在65mL水中的溶液，以控制H2逸出。将悬浮液搅拌18h，然后将固体滤除。将沉淀用乙酸乙酯洗涤，然后将滤液和洗液在真空中浓缩。将产物通过硅胶色谱纯化(330g预装柱)，用CH2Cl2、然后用0至10％甲醇的CH2Cl2溶液梯度洗脱，得到15.21g(69％)橙黄色固体。MS(ESI)计算值C10H14ClN3O：227.1；测得值：228.1。
步骤4.合成(5R，9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯.
向12g(52.7mmol)的(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇中加入160mL 48％(w/w)HBr(水溶液)，然后将反应物在90℃搅拌18h。通过HPLC监测反应中起始醇的消失。反应完成后，将其冷却至室温，然后加入1.2M NaHCO3(水溶液)，直至pH＝8。将混合物用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取，然后将有机相用饱和食盐水(1x 100mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱纯化，用2/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到6.0g(55％)产物，其为亮黄色固体。MS(ESI)计算值C10H12ClN3：209.1；测得值：210.1。
步骤5.合成(9S)-2-氯-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯：
将(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.3g，6.19mmol，注释：包含5R立体化学)、Boc2O(2.02g，9.28mmol，1.5当量)和DMAP(1.51g，12.38mmol，2.0当量)在5mL THF中的混合物在60℃搅拌2h。通过TLS和LC/MS监测反应进程。加入水(30mL)，并将混合物用DCM(3x15mL)萃取。将有机浓缩，并将残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到(9S)-2-氯-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯，其为白色固体(1.3g，92％)。MS(ESI)计算值C15H20ClN3O2：309.1。
步骤6.合成(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯：
向二噁烷/水(10mL/1mL)的脱气的混合物中加入(9S)-2-氯-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯(650mg，2.096mmol)、(5-氯吡啶-3-基)硼酸(658mg，4.19mmol)、Pd(dppf)Cl2(171mg，0.209mmol)和Cs2CO3(2.04g，6.29mmol)。将混合物在110℃搅拌12h，然后浓缩，并通过柱色谱(PE/EA＝3/1)纯化，得到(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯(600mg，63％)。MS(ESI)计算值C20H23ClN4O2：386.2。
(9S)-2-(5-氟吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯通过洗脱方法制备，用(5-氟吡啶-3-基)硼酸起始。
步骤7.合成(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯：
该部分使用以下方案制备。将(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酸叔丁酯(600mg，1.55mmol)溶于HCl/MeOH(1M，20mL)，并将反应物在室温搅拌1.5h，然后在真空中浓缩。加入水(20mL)和K2CO3(3g)，并将混合物在室温搅拌2h，然后用DCM(3x15mL)萃取，得到(9S)-2-(5-氯吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(450mg，定量产率)。MS(ESI)计算值C15H15ClN4：286.1。
(9S)-2-(5-氟吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯通过相同方法制备。
这些部分用于制备脲化合物，通过之前实施例中所述的通用脲偶联操作。
实施例8.制备(9S)-2-(5-甲基吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯：
该部分使用以下方案制备。向脱气的1，4-二噁烷/H2O(20ml，v/v＝10/1)中加入(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，2.87mmol)、5-甲基吡啶-3-基硼酸(1.18g，3.0当量)、PCy3(644mg，0.8当量)和Pd2(dba)3(330mg，0.2当量)。将混合物在密封管中加热至110℃。在110℃搅拌12小时后，将黑色悬浮液冷却至室温，并在减压下浓缩。将浓缩物悬浮于EtOAc(300ml)，用水(4x80ml)、饱和食盐水(80ml)洗涤，用Na2SO4干燥和在减压下浓缩。将浓缩物通过柱(DCM/MeOH＝10/1)纯化，得到产物，其为亮棕色固体(756mg，99％)。MS(ESI)计算值C16H18N4：266.1；测得值：267.2[M+H]。
这些条件还用于制备(9S)-2-(4-甲基吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯和4-(3-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯基)吗啉，通过用合适的硼酸起始。
所得部分用于制备脲化合物，通过上述通用脲偶联操作。
实施例9.制备(9S)-N-(哒嗪-3-基)-2-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
该部分通过(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨所述的类似氨基甲酸酯方案制备，使用氨基甲酸对氯苯酯代替氨基甲酸苯酯。MS(ESI)计算值C20H19N7O：373.2；测得值：374.3[M+H]。
实施例10.制备(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(6-(2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向6-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-胺(83mg，0.37mmol)和吡啶(29mg，1.37mmol)在3mL的THF中的混合物中加入三光气(43mg，0.14mmol)。将上述混合物在60℃搅拌2小时。然后加入(4S)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(50mg，0.18mmol)至反应混合物中，并在60℃搅拌过夜。将粗产物通过制备型TLC纯化，得到脲中间体，其为黄色固体。向该物质在THF(3mL)中的溶液中加入浓HCl，并将反应物在室温搅拌15min。加入饱和NaHCO3调节pH至7-8。将反应混合物用EtOAc萃取，并将有机层用饱和食盐水洗涤。通过制备型TLC纯化，得到(4S)-7-(3-氯苯基)-N-(6-(2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(8.9mg，40％)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C23H23ClN6O4：482.2；测得值：483.1[M+H]。
该使用三光气的通用脲形成操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-氯或-氟苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，也通过使用(4S)-7-(3-氟苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯和合适的胺部分。
实施例11.制备(9S)-2-(3-氰基苯基)-N-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
在室温，将DIPEA(97μL，0.54mmol)加入3-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯甲腈(50mg，0.18mmol)和三光气(27mg，0.10mmol)在THF(12mL)中的混合物中。将混合物在60℃加热30分钟。加入3-氨基吡啶(102mg，1.09mmol)，并将反应混合物加热回流32h。冷却至室温后加入CH3OH。将混合物浓缩，并通过制备型HPLC纯化。将TFA盐悬浮于CH3CN，加入1N HCl，并将混合物冻干，得到(9S)-2-(3-氰基苯基)-N-(吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(48mg，61％)，其为盐酸盐。MS(ESI)计算值C23H20N6O：396.2；测得值：397.1[M+H]。
实施例12.制备(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
在密封管，将吡啶-2-基氨基甲酸4-氯苯酯(325mg，1.31mmol)、(9S)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(70mg，0.22mmol)和DMAP(160mg，1.31mmol)在DMF(3mL)中的混合物在100℃加热24h。将混合物冷却至室温，然后在EtOAc/H2O(60mL/30mL)之间分配。分离有机层，用水、饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩。将粗产物通过制备型TLC纯化(用CH2Cl2/EtOAc/CH3OH，120∶40∶2洗脱)，得到(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨，其为黄褐色固体(80mg，83％)。MS(ESI)计算值C22H19F3N6O：440.2；测得值：441.2[M+H]。
实施例13。制备(4S)-N-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]-二氮杂环庚三烯(500mg，2.55mmol)在脱气的二噁烷/H2O(14mL，v/v＝10/1)中的溶液中加入2-甲基吡啶-4-硼酸(1.048g，7.65mmol)、PCy3(286mg，1.02mmol)、K3PO4·3H2O(1.698g，6.375mmol)和Pd2(dba)3(234mg，0.255mmol)。将所得混合物在110℃搅拌过夜。将混合物冷却至室温，然后浓缩。将残余物在EtOAc和水(各50mL)之间分配。将有机层用水和饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(CH2Cl2/THF＝3/2)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(418mg，82％)，其为亮黄色固体。MS(ESI)计算值C15H16N4：252.1；测得值：253.2[M+H]。
以下中间体使用上述方案，替换合适的硼酸和2-氯吡啶来制备。2-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)苯甲腈、5-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)吡啶-3-甲腈
步骤2.合成(4S)-N-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向氯甲酸苯酯(0.2mL，1.6mmol)和吡啶(0.16mL，1.95mmol)在CH2Cl2(18mL)中的溶液中加入2-甲基-2H-吲唑-5-胺(180mg，1.22mmol)。将混合物在室温搅拌30min，然后用饱和NaHCO3溶液(10mL)淬灭。将水相用CH2Cl2(10mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，并浓缩至干。将残余物用己烷(5mL x 3)洗涤，得到(2-甲基-2H-吲唑-5-基)氨基甲酸苯酯(304mg，93％)。
在密封管中，将(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(90mg，0.36mmol)、(2-甲基-2H-吲唑-5-基)氨基甲酸苯酯(285mg，1.07mmol)和DMAP(130mg，1.07mmol)在THF(3mL)中的混合物加热至80℃。在80℃加热36小时后，将混合物冷却至室温和浓缩。将残余物悬浮于EtOAc(60mL)，并过滤。将滤液用水(20mL x 3)、然后用饱和食盐水(20mL)洗涤，并用Na2SO4干燥和在减压下浓缩。将浓缩物通过制备型TLC(CH2Cl2/EtOAc/MeOH＝23/1/数滴)纯化，得到(4S)-N-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(60mg，40％)，其为棕色固体。MS(ESI)计算值C24H23N7O：425.2；测得值：426.3[M+H]。
该使用氨基甲酸苯酯的通用脲形成操作可以用于制备多种(4S)-N-(芳基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的胺部分。
实施例14：制备(4S)-N-(2，6-二乙基苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在氮气气氛下，向2，6-二乙基苯胺(39.1mg，0.262mmol，2.0eq)和吡啶(0.5ml，过量)在无水THF(3mL)中的混合物中加入三光气(54.4mg，0.183mmol)。将混合物在60℃搅拌2小时，并加入(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(40mg，0.131mmol，1.0eq)至反应混合物中，并搅拌冷却18小时。加入饱和碳酸氢钠溶液(5ml)和二氯甲烷(10ml)至反应混合物中；将有机层连续用水(10mL)和饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和在真空下浓缩。将粗产物通过制备型TLC纯化，使用15∶1乙酸乙酯的CH2Cl2溶液作为洗脱剂，得到(4S)-N-(2，6-二乙基苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色固体(5.1mg，8％产率)。MS(ESI)计算值C27H27F3N4O：480.21；测得值：481[M+H]。
该使用三光气的通用脲形成操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-三氟甲基苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的胺部分替代2，6-二乙基苯胺。
实施例15.制备(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封烧瓶中，将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，2.04mmol)、吡嗪-2-基氨基甲酸苯酯(1.32g，6.13mmol)和DMAP(249mg，2.04mmol)在DMF(8mL)中的混合物加热至82℃。加热22小时后，将混合物冷却至室温，并用EtOAc(100mL)稀释。将混合物用水(8mL x 9)、然后用饱和食盐水洗涤，并用Na2SO4干燥，浓缩。将残余物通过柱色谱(CH2Cl2/MeOH＝50/1)纯化，得到(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，93％)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C14H13ClN6O：316.1。
该通用操作可以用于制备多种(4S)-7-氯-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的氨基甲酸酯部分替换吡嗪-2-基氨基甲酸苯酯。
步骤2.合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在氮气气氛下，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(40mg，0.126mmol)、2-甲基吡啶-4-硼酸(44mg)和NaHCO3(32mg)在甲苯/EtOH/H2O(1.9mL，v/v/v＝10/6/3)中的混合物中加入PdCl2(PPh3)2(9mg)。将反应混合物加热回流6小时。加入另一批2-甲基吡啶-4-硼酸(44mg)、NaHCO3(32mg)和PdCl2(PPh3)2(8mg)，并将混合物脱气。在回流搅拌过夜，将反应混合物冷却至室温和浓缩。将浓缩我悬浮于EtOAc(30mL)和水(5mL)。将水性悬浮液用EtOAc(8mL)萃取。将合并的EtOAc相用饱和食盐水(10mL)洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。通过制备型TLC(CH2Cl2/MeOH＝50/1)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(18mg，38％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C20H19N7O：373.2；测得值：374.3[M+H]。
该使用PdCl2(PPh3)2的通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺和(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的(4S)-7-氯-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨和合适的硼酸或酯。
实施例16.制备(4S)-7-(3-((R)-3-氟吡咯烷-1-基)苯基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封烧瓶中，将(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(40mg，0.126mmol)、(R)-3-氟-1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷(74mg，0.252mmol)、Pd(OAc)2(2mg，0.0126mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(12mg，0.0252mmol)和Cs2CO3(82mg，0.252mmol)在二噁烷/H2O(1.5mL，v/v＝9/1)中的混合物在110℃加热。加热过夜后，将混合物冷却，并过滤除去不溶物质。将滤液用EtOAc(30mL)稀释，用H2O(5mL x 2)洗涤，用饱和食盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。通过制备型TLC(CH2Cl2/EtOAc＝3/1)纯化，得到(4S)-7-(3-((R)-3-氟吡咯烷-1-基)苯基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(18mg，32％)，其为淡黄色固体。MS(ESI)计算值C24H24FN7O：445.2；测得值：446.3[M+H]。
该使用Pd(OAc)2的通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-and 2-取代的苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺和(4S)-7-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的(4S)-7-氯-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨和合适的硼酸或酯。
实施例17.制备(4S)-7-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封烧瓶中，将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.53mmol)、吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(986mg，4.59mmol)和DMAP(188mg，1.53mmol)在DMF(6mL)中的混合物脱气，并加热至80℃。在80℃搅拌过夜后，将反应混合物冷却至室温，并在EtOAc/H2O(150mL/50mL)之间分配。将有机相用水(20mL x 6)、饱和食盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥和在减压下浓缩。然后将浓缩物通过柱(CH2Cl2/EtOAc＝1/1)纯化，得到(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(409mg，84％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C15H14ClN5O：315.1；测得值：316.1[M+H]。
步骤2.(4S)-7-(3-羟基苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封管中，将(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(80mg，0.284mmol)、(3-羟基苯基)硼酸(78mg，0.568mmol)、Pd(OAc)2(6mg，0.0384mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(27mg，0.0568mmol)和Cs2CO3(185mg，0.568mmol)在二噁烷/H2O(3mL，v/v＝9/1)中的混合物脱气，并在110℃加热过夜，然后冷却至室温和在减压下浓缩。将浓缩物悬浮于EtOAc(20mL)，用水(5mL x 2)、饱和食盐水(5mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。将残余物通过柱(CH2Cl2/EtOAc＝1/1)纯化，得到(4S)-7-(3-羟基苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(65mg，61％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C21H19N5O2：373.2；测得值：374.2[M+H]。
步骤3。合成(4S)-7-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-7-(3-羟基苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(90mg，0.241mmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入NaH(24mg，0.603mmol)。在室温搅拌30min后，加入(S)-4-(氯甲基)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷(217mg，1.45mmol)，并将混合物在密封烧瓶中加热至85℃保持32小时。将混合物冷却至室温，并用EtOAc稀释，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机相用Na2SO4干燥，浓缩。将浓缩物溶于CH2Cl2(3mL)，并加入HCl的二噁烷溶液(6mL)。将由此获得的混合物在室温搅拌4小时。将溶剂在减压下除去，并将浓缩物悬浮于饱和NaHCO3(5mL)。将混合物用CH2Cl2(5mL x 3)萃取，并将合并的有机相用Na2SO4干燥，浓缩。通过制备型TLC纯化，得到(4S)-7-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(24mg，33％)，其为米色粉末。MS(ESI)计算值C24H25N5O4：447.2；测得值：448.3[M+H]。
该通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(3-((S)-2，3-二羟基丙氧基)苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的(4S)-7-(3-羟基苯基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。
实施例18.制备(4S)-7-(1-丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(999mg，3.26mmol，1.0eq)和DIEA(1.7mL，9.78mmol，3.0eq)混合至二氯甲烷(30mL)中，并在冰浴上冷却至0℃。然后分小份加入三光气(482mg，1.63mmol，0.5eq)至搅拌的溶液中。撤去冰浴，并将反应温热至室温。然后将反应物搅拌过夜。然后经几分钟分小份缓慢加入吡啶-3-胺(800mg，3.60mmol，1.1eq)。然后将混合物在室温搅拌2小时。然后将混合物用水(100mL)处理，用EtOAc(100mL)稀释。分离各相，并将有机相用Na2SO4干燥，浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，使用15-100％(EtOAc/戊烷)梯度，得到(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(761mg，产率47％)。MS(ESI)计算值C15H14ClN5O 315.1；测得值：315.7[M+H]。
步骤2.(4S)-7-(1-丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
标题化合物使用以下方案制备：将(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(100mg，0.32mmol，1.0eq)、1-乙基-1H-吡唑-4-硼酸(151mg，0.64mmol，2.0eq)、Pd(dppf)Cl2(26.7mg，0.06mmol，0.2eq)和Cs2CO3(208mg，0.64mmol，2.0eq)在二噁烷/H2O(5mL)中的混合物在100℃搅拌6h。加入水，并将混合物用EtOAc萃取。将有机层用无水Na2SO4干燥，浓缩并通过制备型TLC纯化，得到(4S)-7-(1-丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(37.1mg，产率30％)。MS(ESI)计算值C21H23N7O 389.2；测得值：390.3[M+H]。
该使用Pd(dppf)Cl2的通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(吡啶-3-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的硼酸或酯部分替换2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-硼酸。
实施例19：制备(4S)-7-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮：
标题化合物使用以下方案制备：将10.0g吡啶-2-甲酸(81.2mmol，1eq)悬浮于250mL甲苯。加入20.0mL叠氮基磷酸二苯酯(92.6mmol，1.14eq)。滴加13.4mL三乙胺(95.8mmol，1.18eq)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在80℃搅拌2小时。将反应混合物冷却至室温。将固体过滤，并用乙酸乙酯和戊烷洗涤。将固体在高真空下干燥。获得6.46g(66％产率)棕色固体。MS(ESI)计算值C15H14ClN5O：240.06；测得值：241.31[M+H]。
该通用操作可以用于制备3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮和3-(吡嗪-2-基)-2H-吡嗪并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮，通过用在6元芳香环的2位带有氮杂原子的合适的杂芳基羧酸。
步骤2.合成(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
标题化合物使用以下方案制备：在室温，将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(2.0g，10.2mmol，1.0eq)溶于2-甲基-四氢呋喃(40mL)，并用NaH(1.7g，30.6mmol，3.0eq)处理。然后将所得混合物在室温搅拌30分钟。然后加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(2.4g，10.2mmol，1.0eq)，并将反应安装回流冷凝器并加热至80℃过夜。然后将反应物冷却至室温，放入冰浴中，并缓慢添加NaHCO3(65mL)淬灭。将粗品反应物用3份EtOAc(各75mL)萃取，并将有机物用无水MgSO4干燥，浓缩。将反应通过柱色谱纯化，使用10-100％EtOAc/戊烷梯度，得到(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(2.5g，78％)。MS(ESI)计算值C15H14ClN5O：315.09；测得值：316.10[M+H]。
步骤3..合成(4S)-7-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(79mg，0.250mmols，1.0eq)与Pd2(dba)3(2.3mg，0.006mmols，0.02eq)、K3PO4(80mg，0.380mmols，2eq)、S-Phos(4.8mg，0.012mmol，0.05eq)混合，并将烧瓶填充N2并密封。然后经注射器加入N-丁醇(1mL)，并将反应加热至100℃保持3小时。然后将反应物冷却至室温，过滤，然后直接通过反相色谱使用5-95％CH3CN/H2O(0.1％TFA)梯度纯化，得到(4S)-7-(2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(11mg，10％)。C15H14ClN5O：437.13；测得值：438.17[M+H]。
该使用Pd(dppf)Cl2的通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(吡啶-2-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺和(4S)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，通过用合适的硼酸或酯部分替换2，2-二氟苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-硼酸。
实施例20.制备(4S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-7-(2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-氯-N-(5-氟吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封烧瓶中，将(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(280mg，1.43mmol)、(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸4-氯苯酯(1.14g，4.29mmol)和DMAP(174mg，1.43mmol)在DMF(7mL)中的混合物加热至80℃。在80℃搅拌过夜后，将反应混合物冷却至室温，并用EtOAc(100mL)稀释。将有机相用水(50mL x 1，10mL x 6)、然后用饱和食盐水(50mL)洗涤，并用Na2SO4干燥，浓缩。然后将浓缩物通过柱(CH2Cl2/EtOAc＝1/1)纯化，得到(4S)-7-氯-N-(5-氟吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(360mg，75％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C15H13ClFN5O：333.1。
步骤2.合成(4S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-7-(2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在密封烧瓶中，将(4S)-7-氯-N-(5-氟吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(50mg，0.149mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)吡啶(102mg，0.298mmol)、PCy3(8mg，0.0298mmol)、Pd2(dba)3(14mg，0.0149mmol)和K3PO4·3H2O(79mg，0.373mmol)在脱气的二噁烷/H2O(2mL，v/v＝9/1)中的混合物加热至120℃。搅拌过夜后，将混合物冷却至室温，并于EtOAc(60mL)稀释。将稀释的溶液用H2O(20mL x 1，10mL x 5)和饱和食盐水(20mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。通过制备型TLC(CH2Cl2/EtOAc/MeOH＝3/1/2滴)纯化，得到(4S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-7-(2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(54mg，71％)，其为米色固体。MS(ESI)计算值C25H23F4N7O：513.2；测得值：514.3[M+H]。
该使用Pd2(dba)3的通用操作可以用于制备多种(4S)-7-(2-(3-取代的-吡咯烷-1-基)吡啶-4-基)-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过使用合适的(4S)-7-氯-N-(芳基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨和合适的硼酸或酯。
实施例21.制备(4S)-7-(3-氯苯基)-9-甲氧基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成2，6-二氯-4-甲氧基吡啶：
向2，4，6-三氯吡啶(30g，165mmol)在MeOH中的溶液中缓慢加入甲醇钠(10.7g，197mmol)。将混合物搅拌过夜，并用300ml水淬灭。将悬浮液过滤，用水和石油醚洗涤，得到2，6-二氯-4-甲氧基吡啶，其为白色固体(18.0g，61％产率)。MS(ESI)计算值C6H5Cl2NO：176.97。
步骤2.合成2，6-二氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶：
在0℃，向2，6-二氯-4-甲氧基吡啶(18.1g，102mmol)在硫酸(110mL)中的溶液中滴加硝酸(15.6mL)，然后将混合物加热至100℃保持2小时。将反应混合物倒入冰水中，并将悬浮液过滤和用水洗涤，得到2，6-二氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶，其为白色固体(19.9g，88％产率)。MS(ESI)计算值C6H4Cl2N2O3：221.96。
步骤3..合成(S)-2-((6-氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二叔丁酯：
向2，6-二氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶(14.5g，65mmol)和(S)-1，4-二-叔-丁氧基-1，4-二氧代丁-2-铵氯化物(22g，78mmol)在DMF(150mL)中的溶液中加入DIEA(32.3mL)，并将混合物加热至80℃保持3小时。将DMF在真空下除去，并将残余物溶于乙酸乙酯，用饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并通过快速色谱法(10％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到(S)-2-((6-氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二叔丁酯，其为黄色油状物(4.8g，16％产率)。MS(ESI)计算值C18H26ClN3O7：431.15。
步骤4.合成(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸叔丁酯：
向(S)-2-((6-氯-4-甲氧基-3-硝基吡啶-2-基)氨基)琥珀酸二叔丁酯(4.7g，10.9mmol)在AcOH(60ml)中的混合物中加入铁粉(6.107g，109mmol)，并将反应混合物在100℃搅拌2小时。将反应用1N NaOH淬灭，并用乙酸乙酯萃取。将有机物用饱和食盐水洗涤，并通过快速色谱法(40％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸叔丁酯，其为黄色油状物(1.87g，52％产率)。MS(ESI)计算值C14H18ClN3O4：327.10。
步骤5.合成(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇：
向(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙酸叔丁酯(1.7g，5.2mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入BH3-Me2S(5.2mL，10M的Me2S溶液，52mL)，然后将反应混合物在50℃加热过夜。冷却至室温后，将反应用滴加水淬灭，然后加入1N HCl水溶液(10mL)，并将混合物在50℃搅拌2小时。加入饱和NaHCO3，并将混合物用CH2Cl2萃取和浓缩，得到油状物。将油状物用TFA(15mL)的CH2Cl2(15mL)溶液处理2小时，然后在真空下除去DCM和TFA。将残余物溶于MeOH(20mL)，并加入Cs2CO3(2g)。将混合物搅拌1小时，浓缩并通过快速色谱法(30∶1CH2Cl2/MeOH)纯化，得到(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇，其为黄色油状物(997mg，79％产率)。MS(ESI)计算值C10H14ClN3O2：243.08。
步骤6.合成(4S)-7-氯-9-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
向PPh3(1.003g，3.83mmol)在CH2Cl2(50mL)中的溶液中加入DDQ(869mg，3.83mmol)，然后加入(S)-2-(6-氯-8-甲氧基-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙醇(620mg，2.55mmol)。将混合物搅拌30min，浓缩，并通过快速色谱法(33至100％乙酸乙酯的石油醚溶液)纯化，得到(4S)-7-氯-9-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为黄色固体(413mg，72％产率)。MS(ESI)计算值C10H12ClN3O：225.07。
步骤7.合成(4S)-7-(3-氯苯基)-9-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将(4S)-7-氯-9-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(226mg，1.0mmol)、(3-氯苯基)硼酸(187mg，1.2mmol)、Cs2CO3(654mg，2.0mmol)和Pd(dppf)Cl2.DCM(40mg，0.05mmol)在10∶1二噁烷/水(6mL)中的混合物微波加热(130℃ x1h)。将反应混合物浓缩至干，悬浮于CH2Cl2，用饱和NaHCO3、水、饱和食盐水洗涤，用MgSO4干燥，浓缩。将反应混合物最初通过硅胶色谱(0至10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度)纯化，然后通过制备型HPLC纯化。将反应以相同规模重复2次，并将合并的HPLC级分冻干，得到(4S)-9-甲氧基-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(199mg，33％产率)。MS(ESI)计算值C16H16ClN3O：301.10；测得值：302[M+H]。
该通用操作可以用于制备(4S)-9-甲氧基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过用(3-(三氟甲基)苯基)硼酸替换(3-氯苯基)硼酸。
步骤8.合成(4S)-7-(3-氯苯基)-9-甲氧基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-7-(3-氯苯基)-9-甲氧基-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(60mg，0.2mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入60％NaH在矿油中的悬浮液(24mg，1mmol)。将混合物加热至回流1小时，加入3-(吡嗪-2-基)-2H-吡嗪并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(73mg，0.3mmol)，并将混合物加热回流另外2小时。将反应混合物冷却至室温，浓缩至干，用饱和NaHCO3稀释，并用CH2Cl2(3x)萃取。将有机物用饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩并通过制备型HPLC纯化，并冻干，得到(4S)-7-(3-氯苯基)-9-甲氧基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(54mg，64％产率)。MS(ESI)计算值C21H19ClN6O2：422.13；测得值：423[M+H]。
实施例22.制备(4S)-9-甲氧基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(191.6mg，0.8995mmol)、(4S)-9-甲氧基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(150mg，0.4477mmol)和DMAP(65.55mg，0.5373mmol)在15ml乙腈中的混合物在60℃搅拌过夜。将混合物直接加载至制备型TLC并纯化(使用乙酸乙酯作为洗脱剂)，得到(4S)-9-甲氧基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色固体(150mg，产率：74％)。MS(ESI)计算值C23H20F3N5O2：455.2；测得值：456[M+H]。
该通用操作可以用于制备(4S)-9-甲氧基-N-(芳基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的氨基甲酸酯部分替换吡啶-2-基氨基甲酸苯酯。
实施例23..制备(4S)-9-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在0℃，在氮气气氛下，向(4S)-9-甲氧基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(50mg，0.1098mmol)在3ml无水CH2Cl2中的混合物中滴加BBr3(0.5mL，0.5494mmol)。然后将反应混合物在50℃搅拌过夜。加入碳酸氢钠溶液(5mL)和二氯甲烷(10mL)至反应混合物中，并将有机层用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，在真空下浓缩。将粗产物通过制备型TLC纯化，使用(1∶20MeOH的CH2Cl2溶液)作为洗脱剂，得到(4S)-9-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色固体(18mg，35％产率)。MS(ESI)计算值C22H18F3N5O2：441.1；测得值：442[M+H]。
该通用操作可以用于制备((4S)-9-羟基-N-(芳基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的(4S)-9-甲氧基-N-(芳基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨替换(4S)-9-甲氧基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。
实施例24.制备(4S)-N-(4-((3-(3-甲基-3H-二氮杂环丙烯-3-基)丙酰胺基)甲基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(49mg，0.1mmol)、3-(3-甲基-3H-二氮杂环丙烯-3-基)丙酸2，5-氧代吡咯烷-1-基酯(23mg，0.1mmol)和三乙胺(70μL，0.5mmol)在DMF(2mL)中的溶液在室温搅拌1小时。加入水(10mL)和饱和NaHCO3(5mL)，并将反应混合物用CH2Cl2(3x)萃取，并浓缩至干。将粗产物在硅胶色谱(0至10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度)上纯化，浓缩，用乙醚和戊烷处理，并在真空下干燥，得到(4S)-N-(4-((3-(3-甲基-3H-二氮杂环丙烯-3-基)丙酰胺基)甲基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色泡沫(39mg，68％产率)。MS(ESI)计算值C29H28F3N7O2：563.23；测得值：564[M+H]。
实施例25：制备(4S)-N-(3-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(46mg，0.15mmol)和三光气(36mg，120mmol)在CH2Cl2(2mL)中的溶液中加入三乙胺(56μL，0.45mmol)。将反应混合物在40℃搅拌2.5小时，并加入溶于CH2Cl2(1mL)的3-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苯胺(40mg，0.2mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时。将有机层用饱和NaHCO3、水、饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩。将残余物通过快速色谱法(首先用0至100％CH2Cl2的戊烷溶液梯度、然后0至10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度洗脱)纯化，得到(4S)-N-(3-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(40mg，50％产率)。MS(ESI)计算值C25H18F6N6O：532.14；测得值：533[M+H]。
上述3-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苯胺根据Biasotti B.等，Bioorganic and Medicinal Chemistry，2003，11，2247-2254制备。
该通用操作用于制备多种(3-(3-(三氟甲基)-3H-二氮杂环丙烯-3-基)苯基)脲，通过将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯替换为合适的胺。
实施例26.制备(3R，4R)-7-氯-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
步骤1.合成(S)-2-苯甲酰胺基琥珀酸二甲酯。
向配备温度计、冷凝器和机械搅拌器的5L三颈烧瓶中加入161g(1.00mol)的L-天冬氨酸二甲酯、2500mL二氯甲烷和198g(1.96mol)三乙胺。将溶液冷却至-5℃，然后滴加156g(1.11mol)苯甲酰氯，保持内部温度在-5℃。将混合物在-5℃搅拌1h，然后将其过滤。将沉淀用额外二氯甲烷洗涤三次，然后将合并的滤液和洗液用饱和K2CO3水溶液萃取。将二氯甲烷层用Na2SO4干燥，然后在真空中浓缩，得到200g(75％)产物，其为白色固体。MS(ESI)计算值C13H15NO5：265.1。
步骤2.合成(4S，5S)-2-苯基-4，5-二氢噁唑-4，5-二甲酸二甲酯
向配备温度计、机械搅拌器和N2入口的10L四烧瓶中加入100g(0.377mol)的(S)-2-苯甲酰胺基琥珀酸二甲酯，然后加入4L无水四氢呋喃。将混合物搅拌并冷却至0℃。向溶液中加入770mL(0.77mol)的1.0M双(三甲基硅基)氨基锂的四氢呋喃溶液，加入期间保持内部温度在0℃。将反应物在0℃搅拌30min，然后将其冷却至-78℃。在-78℃，向其中滴加195g(0.77mol)碘在2L四氢呋喃中的溶液。将反应物在-78℃搅拌1h，然后将其通过加入2L饱和NH4Cl(水溶液)和400g(2.53mol)的Na2S2O3淬灭。将混合物在室温搅拌30min，然后加入2L乙酸乙酯，并分离各层。将水相用额外乙酸乙酯(3 x 2L)萃取。将合并的乙酸乙酯层用Na2SO4干燥，然后在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，用20∶1(v/v)庚烷：乙酸乙酯洗脱，得到30g(30％)产物，其为白色固体。MS(ESI)计算值C13H13NO5：263.1。
步骤3..合成(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸
向配备回流冷凝器的500mL烧瓶中加入13g(50mmol)的(4S，5S)-2-苯基-4，5-二氢噁唑-4，5-二甲酸二甲酯和200mL(2.4mol)的12M HCI(水溶液）。将反应物在50℃搅拌16h，然后将溶剂在真空中除去。将残余物溶于1000mL水，并用乙酸乙酯萃取，直至通过HPLC发行水层中没有苯甲酸。将有机层弃去，并将水层在真空中浓缩，得到8.6g(94％)的(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸盐酸盐，其为白色结晶固体。MS(ESI)计算值C4H7NO5：149.0。
步骤4.合成(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二甲酯
向配备回流冷凝器的500mL三颈烧瓶中加入170mL甲醇。将甲醇冷却至-5℃，然后滴加23.6g(198mmol)的SOCl2。加入完成后，加入8.6g(46mmol)的(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸HCl盐，并将溶液在室温搅拌16h。将溶剂在真空中除去，得到粗品(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二甲酯HCl盐，其为黄色油状物，将其不经进一步纯化直接用于下一步。MS(ESI)计算值C6H11NO5：177.1。
步骤5.合成(2S，3S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯。
向配备回流冷凝器的500mL圆底烧瓶中加入18g(84.3mmol)的(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二甲酯HCl、29g(150mmol)的2，6-二氯-3-硝基吡啶、42.5g NaHCO3(506mmol)和350mL THF。将反应物在40℃搅拌36h。将固体滤除，并用额外THF(30mL x 3)洗涤。将滤液和洗液合并，并在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，用5∶1(v/v)至1∶1(v/v)庚烷：乙酸乙酯的梯度洗脱，得到22g(63％)的(2S，3S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯，其为黄色结晶固体。MS(ESI)计算值C11H12ClN3O7：333.0。
该通用操作可以用于制备2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯，通过用2-氨基-3-羟基琥珀酸二甲酯盐酸盐替换(2S，3S)-2-氨基-3-羟基琥珀酸二甲酯盐酸盐。
步骤6.合成(S)-2-((S)-6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)-2-羟基乙酸甲酯
倾倒10g雷尼镍在H2O中的浆液以除去水，用2-丙醇稀释，并再次倾倒，得到湿混合物，称重10g。向500mL烧瓶中加入10g(30mmol)的(2S，3S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯、200mL的2-丙醇，和10g雷尼镍。将反应放在真空下，并填充氢气3次，然后将其在1大气压H2下搅拌3h，或直至HPLC不再发现起始硝基化合物。将雷尼镍滤除，然后将滤液放入500mL圆底烧瓶中，并加入5mL(87mmol)冰乙酸。将烧瓶安装回流冷凝器，然后将反应物在80℃搅拌16h，直至HPLC不再发现中间体二氨基吡啶。将溶剂在真空中除去。将残余物通过硅胶色谱纯化，用5/1(v/v)庚烷/乙酸乙酯洗脱，得到6g(72％)产物，其为亮黄色固体。MS(ESI)计算值C10H10ClN3O4：271.0。
该操作可以用于制备2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)-2-羟基乙酸甲酯，通过用2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯替换(2S，3S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)-3-羟基琥珀酸二甲酯。
步骤7.合成(S)-1-((R)-6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙烷-1，2-二醇
向配备回流冷凝器和温度计的100mL 3颈圆底烧瓶中加入20mL四氢呋喃，然后加入1.19g(30mmol)的LiAlH4。将搅拌的混合物冷却至-5℃，然后滴加0.5g(2mmol)的(S)-2-((S)-6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)-2-羟基乙酸甲酯在20mL四氢呋喃中的溶液。将反应物在70℃搅拌16h，或直至HPLC发现反应完成。(内酰胺还原比酯还原慢)。将反应物冷却至-10℃，然后滴加1.2mL水，并将反应物搅拌10min。接下来，滴加1.2mL的15％(w/v)NaOH(水溶液)，并将反应物搅拌20min。为完成过量LiAlH4的淬灭，滴加另外3.6mL水，然后将反应物搅拌20min。将反应过滤，然后将沉淀用四氢呋喃(3 x 20mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，得到大约1.5g固体。将其用16mL乙酸乙酯稀释，并过滤。将滤液在真空中浓缩，得到310mg(80％)产物，其为棕色固体。MS(ESI)计算值C9H12ClN3O2：229.1。
该操作可以用于制备1-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙烷-1，2-二醇，通过用2-((S)-6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)-2-羟基乙酸甲酯替换(S)-2-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)-2-羟基乙酸甲酯。
步骤8.合成(1S，4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇
向配备回流冷凝器的10mL圆底烧瓶中加入250mg(1.1mmol)的(S)-1-((R)-6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙烷-1，2-二醇，然后加入5mL的48％HBr(水溶液）。将反应物在105℃加热16h，或直至HPLC显示所有起始原料已经消耗。将反应物冷却，然后缓慢加入K2CO3(固体)直至pH＝8。将溶剂在真空中除去，然后将残余物通过硅胶色谱纯化，用20/1(v/v)二氯甲烷/甲醇洗脱，得到110mg(47％)产物，其为白色结晶固体。MS(ESI)计算值C9H10ClN3O：211.1。
该操作可以用于制备7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇，通过用6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙烷-1，2-二醇替换(S)-1-((R)-1-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)乙烷-1，2-二醇。
步骤9.合成(1S，4R)-7-氯-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
向10mL圆底烧瓶中加入1.68g(7.9mmol)的(1S，4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇、5mL的N，N-二甲基甲酰胺和2.8mL(24mmol)的2，6-二甲基吡啶。将混合物搅拌直至成为均相，然后在室温滴加1.5mL(12mmol)三甲基氯硅烷。将反应物在室温搅拌3h，然后将其用100mL二氯甲烷稀释，并用饱和NaHCO3(水溶液)(1 x 50mL)、然后用饱和食盐水(3 x 50mL)萃取，并在真空中浓缩，得到2.04g(91％)产物，其为白色结晶固体。MS(ESI)计算值C12H18ClN3OSi：283.1。
该操作可以用于制备7-氯-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过用7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇替换(1S，4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇。
实施例27.制备(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将(3R，4R)-7-氯-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(283mg，1.0mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(285mg，1.5mmol)、XPhos(24mg，0.05mmol)、Pd(OAc)2(5.6mg，0.025mmol)、Cs2CO3(977mg，3.0mmol)在10∶1二噁烷∶水(8.8mL)中的混合物脱气，并在100℃微波加热25min。将二噁烷层浓缩，并通过快速色谱法(0至7％MeOH的CH2Cl2溶液梯度)纯化，得到(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯。将积分浓缩，溶于EtOAc，用饱和NaHCO3、水、饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩，得到(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(338mg，85％产率)。MS(ESI)计算值C19H22F3N3OSi：393.15；测得值：394[M+H]。
该使用氢化钠的通用偶联操作可以用于制备(3R，4R)-3-羟基-N-芳基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，通过用合适的芳基异氰酸酯或芳基异氰酸酯二聚体替换3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮。用7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯起始可以制备非立体特异性系列。
实施例28.制备(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(215mg，0.55mmol)和60％NaH在矿油中的悬浮于(66mg，1.65mmol)在THF(30mL)中的溶液加热至回流20min。加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(197mg，0.82mmol)，并将反应混合物加热回流2小时。将反应混合物冷却，浓缩至干，用CH2Cl2稀释。将有机层用饱和NaHCO3、水、饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩至干。将残余物通过制备型HPLC纯化，并将级分浓缩至干，并用乙醚和戊烷混合物研磨，得到(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨2，2，2-三氟乙酸盐，其为白色固体(132mg，44％产率)。MS(ESI)计算值C22H18F3N5O2：441.14；测得值：442[M+H]。
实施例29.制备(4R)-3-氧代-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨2，2，2-三氟乙酸盐(92mg，0.166mmol)在CH2Cl2(20mL)中的溶液中加入Dess-Martin高碘烷(105mg，0.25mmol)。将反应混合物在室温搅拌1.5小时。加热第二等份的Dess-Martin高碘烷(105mg，0.25mmol)，并将反应混合物在室温搅拌0.5小时。加入饱和NaHCO3(水溶液)，并将反应混合物用CH2Cl2萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩，得到白色泡沫。将残余物通过快速色谱法(0至100％乙酸乙酯的戊烷(Penate)溶液)纯化，然后通过制备型HPLC纯化并冻干，得到(4R)-3-氧代-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨2，2，2-三氟乙酸盐(62mg，67％产率)。MS(ESI)计算值C22H16F3N5O2：439.13；测得值：440[M+H]。
该通用操作用于制备(4R)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-3-氧代-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，通过用(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨替换(3R，4R)-3-羟基-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。
实施例30.制备(3S，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在-78℃，在氮气气氛下，向(4R)-3-氧代-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨2，2，2-三氟乙酸盐(50mg，0.09mmol)在THF(10mL)中的溶液中滴加1MSuperHydride的THF溶液(0.45mL，0.45mmol)。将反应混合物在-78℃搅拌30min，通过加入EtOAc(5mL)淬灭，温热至室温和浓缩。将残余物通过快速色谱法(0至10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度)纯化，得到(3S，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(22mg，55％产率)。MS(ESI)计算值C22H18F3N5O2：441.14；测得值：442[M+H]。
实施例31.制备乙酸(3S，4R)-5-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-基酯：
向(3S，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(15mg，0.034mmol)在CH2Cl2中的溶液中加入三乙胺(10μL，0.07mmol)，然后加入DMAP(1mg)和乙酸酐(10μL，0.011mmol)。将反应混合物在室温搅拌2小时，浓缩至干，并通过制备型HPLC纯化。将级分冻干，得到乙酸(3S，4R)-5-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-基酯2，2，2-三氟乙酸盐(5.9mg，29％产率)。MS(ESI)计算值C24H20F3N5O3：483.15；测得值：484[M+H]。
该通用操作用于制备乙酸(3R，4R)-5-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-基酯，通过用(3S，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨替换(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。
该通用操作用于制备苯甲酸(3R，4R)-5-(吡啶-2-基氨基甲酰基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-基酯，通过用(3S，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨替换(3R，4R)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，并用乙酸酐和苯甲酸酐。
实施例32.制备(3R，4R)-3-羟基-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(284mg，0.722mmol)、(3-(噁唑-5-基)苯基)氨基甲酸苯酯(404mg，1.44mmol)和DMAP(44mg，0.36mmol)在CH3CN(20mL)中的溶液在60℃加热(过夜)，然后在80℃加热(2h)。然后向反应混合物中加入额外量的(3-(噁唑-5-基)苯基)氨基甲酸苯酯(202mg，0.72mmol)和DMAP(88mg，0.72mmol)。将反应混合物在80℃加热过夜和浓缩至干。将反应混合物最初通过柱色谱(0至100％乙酸乙酯的戊烷溶液梯度)纯化，然后通过制备型HPLC纯化，并冻干，得到(3R，4R)-3-羟基-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为三氟乙酸盐(161mg，36％)。MS(ESI)计算值C26H20F3N5O3：507.15；测得值：508[M+H]。
实施例33..制备(3R，4R)-7-(3-氯苯基)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
在N2下，在-20℃，将TBSOTf(111mg，0.42mmol)缓慢加入至(3R，4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇(90mg，0.28mmol)在2mL的CH2Cl2中的溶液。将混合物搅拌1h，然后用1N HCl和水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并蒸发至干。将残余物通过制备型TLC(DCM/EA＝20∶1)纯化，得到(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为黄色固体(90mg，73％产率)，MS(ESI)计算值C15H24ClN3OSi：325.14；
步骤2.合成(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯.
在微波反应器中，将(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.08g，3.32mmol)、(3-氯苯基)硼酸(570mg，3.65mmol)、CS2CO3(2.48g，7.63mmol)、Pd(dppf)Cl2(300mg，0.33mmol)在二噁烷/H2O(11mL，10∶1)中的混合物在130℃加热2.5h。将混合物倒入水中，并用EtOAc稀释。将有机相用水和饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并蒸发至干。将残余物通过制备型HPLC纯化，得到(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为亮黄色固体(850mg，63％产率)，MS(ESI)计算值C21H28ClN3OSi：401.17；
该通用操作用于制备(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯。
步骤3..合成(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(86mg，0.20mmol)、(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(80mg，0.20mmol)和DMAP(24mg，0.20mmol)在5ml的MeCN中的混合物在65℃搅拌过夜。将粗品反应混合物通过制备型TLC纯化，用DCM∶EA＝20∶1洗脱，得到(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(110mg)。MS(ESI)计算值C27H32ClN3O2Si：521.2；
步骤4.合成(3R，4R)-7-(3-氯苯基)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(110mg，0.21mmol)在10mL的THF和浓HCl(1mL)中的溶液在室温搅拌48h。将混合物在减压下浓缩。将pH用饱和NaHCO3水溶液调节至8。将混合物用EtOAc萃取，用饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩。将残余物在EtOAc中研磨，得到(3R，4R)-7-(3-氯苯基)-3-羟基-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(34mg，39％产率)，其为白色固体MS(ESI)计算值C21H18ClN5O2：407.1；测得值：408[M+H]。
实施例34.制备(3R，4R)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-3-羟基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇：
将(3R，4R)-7-氯-3-((三甲基硅基)氧基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1g，3.53mmol)、((3-三氟甲基)苯基)硼酸(1.34g，7.06mmol)、CS2CO3(3.44g，10.6mmol)、Pd(dppf)Cl2(300mg，0.35mmol)在二噁烷/H2O(30mL，10∶1)中的混合物在微波下在130℃反应2.5h。然后将反应混合物倒入水中，用EtOAc萃取，用水然后用饱和食盐水洗涤，干燥(Na2SO4)，浓缩。将残余物通过硅胶色谱(PE/EA＝4∶1)纯化，得到(3R，4R)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇(600mg，39％产率)。MS(ESI)计算值C16H14F3N3O：321.1；
步骤2.合成(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将TBSCl(338mg，2.24mmol)、(3R，4R)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-3-醇(600mg，1.87mmol)、三乙胺(415mg，4.11mmol)和DMAP(22mg，0.20mmol)中的混合物搅拌48h。需要额外TBSCl和TEA来消耗起始原料。将粗品残余物通过柱色谱纯化，得到(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(90mg，73％产率)。MS(ESI)计算值C22H28F3N3OSi：435.20；
步骤3..合成(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4，5-二甲基噻唑-2-基)氨基甲酸苯酯(25mg，0.10mmol)、(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(30mg，0.05mmol)和DMAP(6mg，0.05mmol)在5ml的MeCN中的混合物在65℃搅拌过夜。将粗品反应混合物通过制备型TLC纯化，得到(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(30mg，定量产率)。MS(ESI)计算值C28H34F3N5O2SSi：589.22；
步骤4.合成(3R，4R)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-3-羟基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(3R，4R)-3-((叔丁基二甲基硅基)氧基)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(30mg，0.051mmol)在THF(2mL)中的溶液中加入TBAF/THF(0.1mL，0.1mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，倒入水中并用EtOAc萃取。将有机层用水然后用饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤和蒸发至干。将残余物通过制备型TLC(EtOAc)纯化，得到(3R，4R)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-3-羟基-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色固体(12mg，50％产率)。MS(ESI)计算值C22H20F3N5O2S：475.13；测得值：476[M+H]。
实施例35：制备(4S)-N-(4-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
经1.5h，向冷却至0℃的4-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺(500mg，3.10mmol)在吡啶(780μL，9.65mmol)和二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入氯甲酸苯酯(466μL，3.72mmol)。将反应物在0℃搅拌2h。缓慢加入水(15mL)，并加入额外二氯甲烷。将分离有机层，用饱和碳酸钠(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，并将所有溶剂在真空中除去。将残余物悬浮于5∶1石油醚∶乙酸乙酯中保持30min，然后将悬浮液过滤，得到(4-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)氨基甲酸苯酯(547mg，1.94mmol，63％产率)。
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(110mg，0.361mmol)，、(4-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)氨基甲酸苯酯(203mg，0.722mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(53.0mg，0.434mmol)在乙腈(5mL)中的溶液在60℃搅拌过夜。将混合物通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(4-(噁唑-5-基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(24.3mg，0.0493mmol，14％产率)。MS(ESI)计算值C25H19F3N6O2：492.2；测得值：493.2[M+H]。
实施例36：合成(4S)-N-(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)氨基甲酸苯酯：
将3，5-双(噁唑-5-基)苯胺(100mg，0.44mmol)、氯甲酸苯酯(76mg，0.48mmol)和吡啶(0.20mL)在二氯甲烷(15mL)中的混合物在室温搅拌2h。将溶剂在真空中除去，并将剩余物质通过制备型TLC(1∶1石油醚∶乙酸乙酯)纯化，得到(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)氨基甲酸苯酯(140mg，0.40mmol，92％产率)。MS(ESI)计算值C19H13N3O4：347.1。
步骤2.合成(4S)-N-(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(70mg，0.23mmol)、(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)氨基甲酸苯酯(140mg，0.40mmol)和DMAP(56mg，0.46mmol)在乙腈(2mL)中的混合物回流过夜。将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过制备型TLC(10∶1二氯甲烷∶甲醇)纯化，得到(4S)-N-(3，5-双(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(13.7mg，0.0245mmol，11％产率)。MS(ESI)计算值C29H21F3N6O3：558.2；测得值：559.0。
实施例37.制备((1-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯：
向三光气(214mg，0.721mmol)在乙腈(5mL)中的溶液中加入((1-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(417mg，1.44mmol)在乙腈(5mL)中的溶液和三乙胺(2mL)。将所得悬浮液在室温搅拌10min，然后加入固体(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(化合物#；302mg，0.989mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(122mg，1.00mmol)。将反应物在80℃搅拌15min。将反应物冷却至室温，加入甲醇(2mL)，并将反应倒入饱和碳酸氢钠(50mL)，并用二氯甲烷(3 x50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，将溶剂在真空中除去，并将剩余物质通过快速色谱法(0％至8％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到((1-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(579mg，0.933mmol，94％产率)。MS(ESI)计算值C31H31F3N8O3：620.3；测得值：621.0[M+H]。
实施例38.制备(4S)-N-(3-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将((1-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(160mg，0.258mmol)溶于三氟乙酸(1.6mL)。将反应物在50℃搅拌10min，然后将所有溶剂在真空中除去，得到(4S)-N-(3-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨三氟乙酸盐(164mg，0.258mmol，100％产率)。MS(ESI)计算值C26H23F3N80：520.2；测得值：521.0[M+H]。
实施例39：合成(4S)-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1：制备(4S)-N-(6-溴吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向三光气(1.81g，6.10mmol)在乙腈(25mL)中的溶液中加入6-溴吡啶-2-胺(2.26g，13.1mmol)在乙腈(25mL)中的溶液。加入三乙胺(8.00mL，57.4mmol)，并将反应物在80℃搅拌30min。加入固体(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.04g，3.41mmol)和4-(二甲基氨基)吡啶(410mg，3.36mmol)，并将反应物在80℃搅拌1h。将反应物冷却至室温，倒入水(30mL)中，并用二氯甲烷(2 x 50mL)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，并将所有溶剂在真空中除去。将剩余残余物通过快速色谱法(30％至100％乙酸乙酯的戊烷溶液)纯化，得到(4S)-N-(6-溴吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(1.12g，2.22mmol，65％产率)。MS(ESI)计算值C22H17BrF3N5O：503.1；测得值：503.8[M+H]。
步骤2：制备(4S)-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在微波瓶中装入(4S)-N-(6-溴吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(46.0mg，0.0912mmol)、四(三苯基膦)钯(4.8mg，0.0042mmol)、氟化铯(180mg，1.18mmol)、1-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(60.0mg，0.288mmol)、DME(1.5mL)和水(150μL)。将微波瓶密封，并在微波中在100℃加热3h。分离有机层，并将水层用10∶1乙酸乙酯∶甲醇(2 x 2mL)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物溶于DMSO(4mL)，过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(6-(1-甲基-1H-吡唑-5-基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨三氟乙酸盐(28.4mg，0.0460mmol，50％产率)。MS(ESI)计算值C26H22F3N7O：505.2；测得值：506.0[M+H]。
实施例40：合成(4S)-N-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b1[1，41二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在瓶中装入三光气(75.0mg，0.253mmol)，并将其溶于乙腈(2.5mL)。加入(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(150mg，0.491mmol)在乙腈(2.5mL)中的溶液，然后加入三乙胺(0.50mL，3.59mmol)。将反应物在室温搅拌4h，并加入固体4-(3-氨基苄基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(480mg，1.65mmol)加入，然后加入DMAP(360mg，2.95mmol)。将反应在80℃搅拌16h，并将所有溶剂在真空中除去。将剩余物质溶于三氟乙酸(5.0mL)，并将溶液在50℃搅拌20min。将过量三氟乙酸在真空中除去，将剩余物质溶于DMSO，并将所得溶液通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(3-(哌嗪-1-基甲基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨三氟乙酸盐(89.1mg，0.140mmol，29％产率)。MS(ESI)计算值C28H29F3N6O：522.2。
实施例41：合成(4S)-N-(4-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成4-(2-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯：
在0℃，向4-(2-氨基嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(200mg，0.716mmol)在THF(20mL)中的溶液中加入双(三甲基硅基)氨基钠溶液(1.0M的THF溶液，1.50mL，1.50mmol)。将反应温热至室温，并搅拌30min，并加入(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯(327mg，1.07mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应物在室温搅拌1.5h，然后将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过制备型TLC(3∶1石油醚∶乙酸乙酯)纯化，得到4-(2-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.262mmol，37％产率)。MS(ESI)计算值C30H33F3N8O3：610.3。
步骤2.合成(4S)-N-(4-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将4-(2-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(160mg，0.262mmol)溶于氢氯酸的乙酸乙酯溶液(2M，10mL)，并搅拌30min。将所有溶剂在真空中除去，得到(4S)-N-(4-(哌嗪-1-基)嘧啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(47mg，0.092mmol，35％产率)。MS(ESI)计算值C25H25F3N8O：510.2；测得值：511.0[M+H]。
实施例42：合成(2-(4-(3-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：
将瓶中装入三光气(180mg，0.607mmol)，并将其溶于二氯甲烷(3mL)。加入(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(320mg，1.00mmol)的溶液和N，N-二异丙基乙基胺(1.00mL，5.74mmol)。将反应物在室温搅拌25min，然后加入(2-(4-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(415mg，1.37mmol)在二氯甲烷(5mL)中的溶液。将反应物在40℃搅拌16h，然后在微波中在120℃加热1h。冷却后，将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过快速色谱法(0％至8％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到(2-(4-(3-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(99.0mg，0.153mmol，15％产率)。MS(ESI)计算值C33H35F3N8O3：648.3。
实施例43：制备(4S)-N-(3-(2-(胍基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将1H-吡唑-1-甲脒盐酸盐(15mg，0.10mmol)和DIEA(17μL，0.10mmol)在DMF(1mL)中的溶液在室温搅拌10min，加入(4S)-N-(3-(2-(氨基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(52mg，0.10mmol)。将反应混合物在室温搅拌过夜，然后通过制备型HPLC纯化并冻干，得到(4S)-N-(3-(2-(胍基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨三氟乙酸盐(25.5mg，38％产率)。MS(ESI)计算值C28H25F3N8O2：562.21；测得值：563[M+H]。
该通用操作用于制备其他胍，通过将(4S)-N-(3-(2-(氨基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨替换为合适的胺。
实施例44：合成(4S)-N-(嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯：
向20mL微波瓶张装入磁力搅拌子。(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(629mg，3.00mmol)、[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯]烯丙基钯(II)(62.1mg，0.120mmol)、3-三氟甲基哌啶(919mg，6.00mmol)和叔丁醇钾(673mg，6.00mmol)。加入DME(7.0mL)，将微波瓶盖盖，并加热至90℃保持2h。冷却至室温后，加入甲醇(5mL)和硅胶(5g)，并将所有溶剂在真空中除去。将剩余硅胶浆液加载至40g硅胶柱顶部，并用快速色谱法(50％至100％乙酸乙酯的戊烷溶液)纯化，得到(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯2，其为非对映异构体的1∶1混合物(713mg，2.18mmol，73％产率)。MS(ESI)计算值C16H21F3N4：326.2。
步骤2.合成(4S)-N-(嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(40.0mg，0.128mmol)在乙腈(2mL)和吡啶(1mL)中的溶液中加入固体三光气(26.0mg，0.0876mmol)。将所得红色溶液在50℃搅拌1h。然后加入固体4-氨基嘧啶(95.0mg，1.00mmol)，并将反应物在70℃搅拌6h。6h后，将大多数乙腈在氮气流下除去，并加入甲醇(1mL)和DMSO(2mL)至反应。将所得溶液通过制备型HPLC纯化，并将分离的物质从乙腈/1N HCl水溶液中冻干，得到(4S)-N-(嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(34.9mg，0.0743mmol，58％产率)。MS(ESI)计算值C20H22F3N7O：433.2。
实施例45：合成(4S)-7-((S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(3S)-N，N-二甲基-1-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡咯烷-3-胺：
将20mL微波瓶中装入磁力搅拌子、(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(978mg，5.00mmol)、[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯]烯丙基钯(II)(51.7mg，0.100mmol)、(S)-N，N-二甲基吡咯烷-3-胺(1.14g，10.00mmol)和叔丁醇钾(1.12mg，10.00mmol)。加入DME(10.0mL)，将微波瓶盖盖，并加热至100℃保持4h。冷却至室温后，加入甲醇(20mL)和硅胶(5g)，并将所有溶剂在真空中除去。将剩余硅胶浆液加载至40g硅胶柱顶部，并用快速色谱法(0％至10％甲醇的戊烷溶液)纯化，得到(3S)-N，N-二甲基-1-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡咯烷-3-胺(524mg，1.92mmol，38％产率)。MS(ESI)计算值C15H23N5：273.2。
步骤2.合成(4S)-7-((S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(3S)-N，N-二甲基-1-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡咯烷-3-胺(40.0mg，0.146mmol)在乙腈(540μL)和吡啶(150μL)中的溶液中加入三光气(28.9mg，0.0975mmol)在乙腈(310μL)中的溶液。将反应物在50℃搅拌30min，然后加入三乙胺(40μL)。加入固体3-氨基吡啶(94mg，1.00mmol)，并将反应物在60℃搅拌16h。16h后，将反应物冷却至室温，加入甲醇(1mL)，并将所得溶液通过制备型HPLC纯化。将分离的物质从乙腈/1N HCl水溶液中冻干，得到(4S)-7-((S)-3-(二甲基氨基)吡咯烷-1-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(30.6mg，0.0712mmol，49％产率)。MS(ESI)计算值C21H27N7O：393.2。
实施例46：合成4-((9S)-10-(嘧啶-4-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯：
步骤1.合成4-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯：
将20mL微波瓶中装入磁力搅拌子、(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，2.38mmol)、[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯]烯丙基钯(II)(12.4mg，0.0240mmol)、高哌嗪-1-甲酸叔丁酯(953mg，4.76mmol)和叔丁醇钾(534mg，4.76mmol)。加入DME(5.0mL)，将瓶密封，并在微波中在85℃加热4h。冷却至室温后，加入甲醇(20mL)和硅胶(5g)，将所有溶剂在真空中除去，并将剩余硅胶浆液加载至40g硅胶柱顶部。用快速色谱法(0％至8％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到4-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(550mg，1.48mmol，62％产率)。MS(ESI)计算值C20H31N5O2：373.2；测得值：374.2[M+H]。
步骤2.合成4-((9S)-10-(嘧啶-4-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯：
将4-((9S)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(500mg，1.34mmol)、嘧啶-4-基-氨基甲酸苯酯(570mg，2.65mmol)、4-二甲基氨基吡啶(190mg，1.56mmol)在乙腈(30mL)中的混合物在60℃搅拌3.5h。将溶剂在减压下除去，将残余物溶于二氯甲烷中，用水、饱和食盐水洗涤，并将有机层用无水Na2SO4干燥。将所有溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过硅胶色谱用二氯甲烷∶乙酸乙酯(2∶1)纯化，然后用制备型薄层色谱用3％甲醇的二氯甲烷溶液纯化，得到4-((9S)-10-(嘧啶-4-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(363mg，0.734mmol，55％产率)。MS(ESI)计算值C25H34N8O3：494.3；测得值：495.4[M+H]。
实施例47：合成(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
将4-((9S)-10-(嘧啶-4-基氨基甲酰基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-2-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(400mg，0.808mmol)溶于1M HCl的MeOH溶液(20mL)，并将反应混合物在室温搅拌1.5h。将所有溶剂在真空中除去。加入水(20mL)和碳酸钾(344mg，2.42mmol)，并将混合物在室温搅拌1h。用二氯甲烷(3x5mL)萃取，并将溶剂在真空中干燥，得到(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(300mg，0.761mmol，94％产率)。MS(ESI)计算值C20H26N8O：394.2。
实施例48：合成(9S)-2-(4-(甲基磺酰基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
向(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(60.0mg，0.152mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入三乙胺(46.1mg，0.457mmol)和甲烷磺酰氯(18.1mg，0.152mmol)。将混合物在0℃搅拌1h。将溶液用水、饱和食盐水洗涤，并将有机层用无水Na2SO4干燥。将剩余溶液通过制备型薄层色谱用3％甲醇的二氯甲烷溶液纯化，得到(9S)-2-(4-(甲基磺酰基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(30.0mg，0.0635mmol，42％产率)。MS(ESI)计算值C21H28N8O3S：472.2。
实施例49：合成(9S)-2-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
向(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(100mg，0.254mmol)在甲醇(3mL)中的溶液中加入甲醛(37％水溶液，20μL)和10％钯/碳(10mg)。将反应物在氢气氛搅拌1h。将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过制备型薄层色谱用3％甲醇的二氯甲烷溶液纯化，得到(9S)-2-(4-甲基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(22.2mg，0.0543mmol，21％产率)。MS(ESI)计算值C2]H28N8O：408.2。
实施例50：合成(9S)-2-(4-异丙基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
向(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(50.0mg，0.127mmol)在二氯甲烷(3mL)中的溶液中加入丙酮(12.9mg，0.254mmol)。将混合物搅拌30min，并加入固体氰基硼氢化钠(20.1mg，0.0759mmol)，并将反应物在室温搅拌过夜。将是所有溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过制备型薄层色谱(100％乙酸乙酯)纯化，得到(9S)-2-(4-异丙基-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(16.8mg，0.0385mmol，30％产率)。MS(ESI)计算值C23H32N8O：436.3。
实施例51：合成(9S)-N-(嘧啶-4-基)-2-(4-(2，2，2-三氟乙基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
向(9S)-2-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(100mg，0.254mmol)在DMF(3mL)中的溶液中加入碳酸钠(80.7mg，0.761mmol)和三氟甲磺酸2，2，2-三氟乙基酯(163mg，0.508mmol)。将反应物在室温搅拌过夜，然后用二氯甲烷(10mL)稀释，并用水、饱和食盐水洗涤，并用硫酸钠干燥。将所有溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过制备型薄层色谱用3％甲醇的二氯甲烷溶液纯化，得到(9S)-N-(嘧啶-4-基)-2-(4-(2，2，2-三氟乙基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(19.5mg，0.0409mmol，16％产率)。MS(ESI)计算值C22H27F3N8O：476.2。
实施例52：合成(4S)-7-(4-(2，2，2-三氟乙基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
步骤1.合成4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯：
向(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，2.56mmol)、N-Boc高哌嗪(953mg，4.76mmol)、叔丁醇钾(534mg，4.76mmol)在DME(5mL)中的溶液中加入[1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基]氯]烯丙基钯(II)(12.4mg，0.0240mmol)。将混合物加热至90℃保持3h。冷却后，加入水，并将混合物用乙酸乙酯(3x15mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将剩余残余物通过硅胶色谱(5∶1 戊烷∶乙酸乙酯)纯化，得到4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(610mg，1.70mmol，66％产率)。MS(ESI)计算值C19H29N5O2：359.2。
步骤2.合成(4S)-7-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯(610mg，1.70mmol)和HCl的EtOAc溶液(5M，10mL)的混合物在室温搅拌30min。将溶剂除去，得到(4S)-7-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(418mg，1.61mmol，95％产率)。MS(ESI)计算值C14H21N5：259.2。
步骤3..合成(4S)-7-(4-(2，2，2-三氟乙基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
向(4S)-7-(1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(418mg，1.61mmol)在DMF(5mL)中的溶液中加入三氟甲磺酸2，2，2-三氟乙基酯(748mg，3.23mmol)和碳酸钾(666mg，4.83mmol)。将反应物在室温搅拌过夜。将反应用水稀释，用乙酸乙酯(3x10mL)萃取，并将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将剩余残余物通过硅胶色谱(6∶1 戊烷∶乙酸乙酯)纯化，得到(4S)-7-(4-(2，2，2-三氟乙基)-1，4-二氮杂环庚烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(320mg，0.937mmol，58％产率)。MS(ESI)计算值C16H22F3N5：341.2。
实施例53：合成(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-((R)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨和(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-((S)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(120mg，0.241mmol)加载至30x250mm Chiralcel OD-H柱。用20∶80 乙醇∶庚烷洗脱，首先洗脱(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-((R)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(41.3mg，0.0828mmol，34％产率)，[α]D 25＝+32(c，0.09，MeOH)，然后洗脱(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-((S)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(44.8mg，0.0899mmol，37％产率)[α]D 25＝+18.5(c，0.11，MeOH)。MS(ESI)计算值C25H25F3N6O2：498.2；测得值：499.3[M+H]。
实施例54.制备(5S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-4，5-二氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯-6(3H)-甲酰氨1，1-二氧化物：
步骤1.合成(S)-(1-((2，6-二氯吡啶-3-基)磺酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯：
向2，6-二氯吡啶-3-磺酰氯(Org.Process Res.Dev.2009，13，875-879)(3.40g，13.8mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入(S)-吡咯烷-3-基氨基甲酸叔丁酯(2.82g，14.5mmol)，然后加入三乙胺(3.00mL，21.5mmol)。将反应物在室温搅拌30min，然后倒入饱和碳酸氢钠，并用二氯甲烷萃取。将有机层用饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂在真空中除去，得到(S)-(1-((2，6-二氯吡啶-3-基)磺酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(5.47g，13.8mmol，100％产率)。
步骤2.合成(5S)-8-氯-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物：
向(S)-(1-((2，6-二氯吡啶-3-基)磺酰基)吡咯烷-3-基)氨基甲酸叔丁酯(5.47g，13.8mmol)在二氯甲烷(30mL)中的溶液中加入三氟乙酸(10mL)。将反应物在室温搅拌过夜，并将所有溶剂在真空中除去。将剩余残余物溶于DMF(30mL)，并加入碳酸钠(10.0g，94.3mmol)。将反应物在90℃搅拌2h。将反应物冷却至室温，倒入冰水中，并将所得溶液过滤，并将固体用水洗涤。将收集的固体干燥，并通过硅胶色谱纯化，得到(5S)-8-氯-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(1.80g，6.93mmol，50％产率)。
步骤3..合成(5S)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物：
将(5S)-8-氯-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(800mg，3.08mmol)、3-三氟甲基苯硼酸(1.17g，6.16mmol)、碳酸铯(3.00g，9.21mmol)和[1，1′-双(二苯基膦基)二茂铁]二氯化钯(II)(370mg，0.453mmol)在10∶1 二噁烷∶水(45mL)中的混合物在110℃搅拌过夜。冷却后，将溶剂在真空中除去，并将残余物在二氯甲烷和水之间分配。分离有机层，用水、饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂在真空中除去。将剩余残余物通过硅胶色谱纯化，得到(5S)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(1.00g，2.71mmol，88％产率)。
步骤4.合成(5S)-8-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物：
将(S)-3-氟吡咯烷盐酸盐(1.10g，8.76mmol)加入至(5S)-8-氯-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(800mg，3.08mmol)和碳酸钠(1.60g，15.1mmol)在DMF(10mL)中的溶液中。将反应物在90℃搅拌6h，然后倒入碎冰中，搅拌和过滤。将收集的固体用水洗涤，干燥，并通过硅胶色谱纯化，得到(5S)-8-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(680mg，2.18mmol，71％产率)。
步骤5.合成(5S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-4，5-二氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯-6(3H)-甲酰氨1，1-二氧化物：
将(5S)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4，5，6-四氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯1，1-二氧化物(70.0mg，0.190mmol)溶于DMF(3mL)，并加入氢化钠(54mg，60％在油中，1.35mmol)。将反应物在室温搅拌2h，并加入(5-氟吡啶-3-基)氨基甲酸苯酯(176mg，0.768mmol)。将反应物在室温搅拌1h，倒入水中，并用二氯甲烷萃取。将有机层在真空中浓缩，并将剩余残余物通过制备型薄层色谱纯化，得到(5S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-8-(3-(三氟甲基)苯基)-4，5-二氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯-6(3H)-甲酰氨1，1-二氧化物(24.0mg，0.0473mmol，25％产率)。MS(ESI)计算值C22H17F4N5O3S：507.1；测得值：508.1(M+H)+。
以下化合物以类似方式制备：(5S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-8-((S)-3-氟吡咯烷-1-基)-4，5-二氢-2，5-亚甲基吡啶并[2，3-g][1，2，6]硫杂二氮杂环辛四烯-6(3H)-甲酰氨1，1-二氧化物。
实施例55.合成(4S)-N-(3-(4-((6-氨基己酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将((1-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(190mg，0.306mmol)在三氟乙酸(3.0mL)中的溶液在室温搅拌1h，然后将过量三氟乙酸在真空中除去。将剩余残余物溶于DMF(5.0mL)和三乙胺(1.0mL)，并加入6-((叔-丁氧基羰基)氨基)己酸2，5-二氧代吡咯烷-1-基酯(250mg，0.761mmol)。将反应物在80℃搅拌30min，然后冷却至65℃，并加入4N HCl(4mL)。将反应物在65℃搅拌2h，然后过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化。将分离的物质从乙腈/1N HCl中冻干，得到(4S)-N-(3-(4-((6-氨基己酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(208mg，0.310mmol，100％产率)。MS(ESI)计算值C32H34F3N9O2：633.3；测得值：634.3(M+H)+。
实施例56.合成(4S)-N-(3-(4-((6-(5-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)戊酰胺基)己酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-N-(3-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(44.2mg，0.0850mmol)在乙腈(1.3mL)和三乙胺(0.13mL，0.933mmol)中的溶液中加入生物素氨基己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(40.9mg，0.090mmol)。将反应物在65℃搅拌2h，然后加入DMF(1mL)，并将所得反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(3-(4-((6-(5-((3aS，4S，6aR)-2-氧代六氢-1H-噻吩并[3，4-d]咪唑-4-基)戊酰胺基)己酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(43.6mg，0.0448mmol，53％产率)。
实施例57.合成(4S)-N-(3-(4-((3-(3′，6′-二羟基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9′-氧杂蒽]-5-基)硫脲基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-N-(3-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(44.2mg，0.0850mmol)在乙腈(1.3mL)和三乙胺(0.13mL，0.933mmol)中的溶液中加入荧光素异硫氰酸酯异构体I(35.0mg，0.090mmol)。将反应物在65℃搅拌2h，然后加入DMF(1mL)，并将所得反应混合物过滤，并将滤液通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(3-(4-((3-(3′，6′-二羟基-3-氧代-3H-螺[异苯并呋喃-1，9′-氧杂蒽]-5-基)硫脲基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(51.0mg，0.0498mmol，58％产率)。
实施例58.合成(4S)-N-(3-(4-((3-((Z)-2-((1-(二氟硼基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-2H-吡咯-5-基)丙酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
向(4S)-N-(3-(4-(氨基甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(12.2mg，0.0234mmol)在乙腈(0.35mL)和三乙胺(0.035mL，0.251mmol)中的溶液中加入4，4-二氟-5，7-二甲基-4-硼杂-3a，4a-二氮杂-s-引达省-3-丙酸琥珀酰亚胺基酯(10mg，0.0257mmol)。将反应物在60℃搅拌30min，然后将反应混合物通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(3-(4-((3-((Z)-2-((1-(二氟硼基)-1H-吡咯-2-基)亚甲基)-2H-吡咯-5-基)丙酰胺基)甲基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(5.8mg，0.0064mmol，27％产率)。
实施例59.合成(9S)-N-(4-(乙酰胺基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
向(9S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐(108mg，0.214mmol)在吡啶(3.0mL)中的溶液中加入乙酸酐(28.0μL，0.300mmol)。将反应物在室温搅拌4h，并将反应混合物通过制备型HPLC纯化，得到(9S)-N-(4-(乙酰胺基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨三氟乙酸盐(111mg，0.178mmol，83％产率)。MS(ESI)计算值C27H26F3N5O2：509.2；测得值：510.2(M+H)+。
实施例60.制备(4S)-N-(3-(吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1：合成3-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(A7，0.150g，0.490mmol)溶于5ml二氯甲烷，并用DIEA(193ul，1.08mmol)处理。将混合物在室温搅拌30分钟。然后加入3-(3-氨基苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.141g，0.539mmol)，并将溶液在室温搅拌过夜。将反应用5ml二氯甲烷稀释，并用10ml碳酸氢钠饱和溶液洗涤。收集有机，并浓缩至干。通过二氧化硅柱色谱纯化，使用5-100％乙酸乙酯的戊烷溶液，得到3-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯(0.077g，26％)。MS(ESI)计算值C32H34F3 N5O3：593.3，测得值：594[M+H]。
步骤2：合成(4S)-N-(3-(吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(S)-3-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)吡咯烷-1-甲酸叔丁酯：(0.077g，0.130mmol)溶于5mL 4N HCl的1，4-二噁烷溶液，并在氮气下在室温搅拌3小时。然后将所有溶剂在减压下除去，并将所得固体在真空下干燥过夜，得到(4S)-N-(3-(吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.078g，100％)。MS(ESI)计算值C27H26F3N5O：493.21；测得值：494[M+H]。
实施例61.制备(4S)-N-(3-(1-(2-氨基-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(3-(吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(B579，0.029g，0.058mmol)溶于2ml二氯甲烷，然后用DIEA(31ul，0.174mmol)处理。然后加入氯乙酰胺(0.006g，0.064mmol)，并将反应加热至60℃过夜。然后将反应物冷却至室温，并用5ml二氯甲烷稀释，并用10ml碳酸氢钠饱和溶液洗涤。将有机物浓缩至干，并通过C18反相色谱纯化，使用5-95％乙腈的水溶液(含0.1％三氟乙酸作为添加剂)洗脱，得到(4S)-N-(3-(1-(2-氨基-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.008g，23％)。MS(ESI)计算值C29H29F3N6O2：550.2；测得值：551[M+H]。
实施例62：制备(4S)-N-(3-(1-(2-氨基-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-N-(3-(吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(B579，0.020g，0.038mmol)溶于1.5ml二氯甲烷，然后用DIEA(13ul，0.076mmol)处理。然后加入乙酰氯(0.005g，0.042mmol)，并将反应物在室温搅拌过夜。然后将反应用5ml二氯甲烷稀释，并用10ml碳酸氢钠饱和溶液洗涤。将有机物浓缩至干，并通过C18反相色谱纯化，得到(4S)-N-(3-(1-(2-氨基-2-氧代乙基)吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.023g，88％)。MS(ESI)计算值C29H28F3N5O2：535.2；测得值：536[M+H]。
该通用酰基化操作用于制备(4S)-N-(3-(1-丙酰基吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨和(4S)-N-(3-(1-(环丙烷羰基)吡咯烷-3-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨。
实施例63.制备((5-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基甲酸苄酯：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.276g，0.902mmol)在4mL二氯甲烷中的溶液与DIEA(400uL，2.261mmol)和三光气(0.200g，0.676mmol)混合。然后将混合物加热至65℃，此时缓慢滴加((5-(3-氨基苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基甲酸苄酯(0.321g，0.992mmol)在4mL二氯甲烷中的溶液。然后将混合物在65℃加热5小时。然后将反应物冷却至室温，然后缓慢加入10mL二氯甲烷、然后用50mL碳酸氢钠洗涤。收集有机层，并在减压下浓缩至干。然后将残余物通过硅胶色谱纯化，得到((5-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基甲酸苄酯(0.082g，14％)。MS(ESI)计算值C35H29F3N6O4：654.22；测得值：655[M+H]。
实施例64.制备(4S)-N-(3-(2-(氨基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将((5-(3-((4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5-甲酰胺基)苯基)噁唑-2-基)甲基)氨基甲酸苄酯(0.040g，0.06mmol)溶于10mL乙酸乙酯，并在真空下脱气三次。然后加入大约5mg钯(10％钯碳，degaussa型)，并将反应容器充入氮气，然后安装氢气球。然后开始搅拌，并将混合物在氢气下搅拌2小时。然后将反应容器抽真空并充入氮。通过过滤除去固体，并将溶剂在减压下除去，得到(4S)-N-(3-(2-(氨基甲基)噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.032g，100％)，其不经纯化直接使用。MS(ESI)计算值C27H23F3N6O2：520.51；测得值：521[M+H]。
实施例65.制备(4S)-N-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
步骤1.合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯：
在0℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.5g，4.92mmol)和吡啶(0.74mL，9.84mmol)在DCM(15mL)中的溶液中滴加氯甲酸苯酯(1.1mL，8.85mmol)。将所得混合物在该温度搅拌2h，然后用饱和NaHCO3水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，浓缩，得到粗品氨基甲酸苯酯(1.8g)，其为棕色油状物，将其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤2.合成(4S)-N-(5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在0℃，向胺5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-胺(30mg，0.18mmol)在无水THF(5mL)中的溶液中一次性加入NaH(18mg，0.75mmol)，将反应混合物在室温搅拌30min。然后加入(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯(157mg，0.37mmol)，并将混合物搅拌过夜。将所得混合物用MeOH(2mL)淬灭，通过蒸发器在真空中浓缩。将残余物通过制备型TLC纯化，得到2-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(50mg，产率54.9％)，其为白色固体。
该使用(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸苯酯的通用操作可以用于制备多种甲酰胺，通过使用合适的芳基-胺替换5-苯基-1，3，4-噁二唑-2-胺。
实施例66.制备(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-硫代甲酰胺
步骤1.合成5-(3-异硫氰酸酯基苯基)噁唑：.
在0℃，在氩气氛中，经10min向3-(噁唑-5-基)苯胺(160mg，1.0mmol)和TEA(0.4mL，3.0mmol)在无水THF(6mL)中的溶液中滴加硫光气(0.152mL，2.0mmol)在无水THF(1.5mL)中的溶液。将反应混合物在室温搅拌30min，TLC显示3-(噁唑-5-基)苯胺完全消耗。将溶剂通过蒸发器在减压下除去，将残余物用水(10mL)和乙酸乙酯(25mL)稀释，并分离有机层。将水相用乙酸乙酯(3x30mL)萃取，将合并的有机层用饱和NaHCO3水溶液、然后用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到5-(3-异硫氰酸酯基苯基)噁唑，将其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤2.合成(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-硫代甲酰胺：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(244mg，0.8mmol)溶于无水DMF(5mL)，并在0℃，在氩气氛中分批加入NaH(128mg，60％，3.2mmol)。将混合物温热至室温并搅拌1h。滴加如上制备的5-(3-异硫氰酸酯基苯基)噁唑在DMF(3mL)中的溶液，并将反应混合物在室温搅拌过夜。然后将所得混合物用饱和NH4Cl水溶液淬灭，用乙酸乙酯(3x15mL)萃取，用水和饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将粗品通过硅胶色谱使用DCM∶MeOH＝10∶1纯化，得到标题化合物(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-硫代甲酰胺(186.1mg，产率46％)。
实施例67.制备(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(S)-2-((5-溴-2-硝基苯基)氨基)琥珀酸二甲酯：
将4-溴-2-氟-1-硝基苯(15.0g，68mmol)、(S)-2-氨基琥珀酸二甲酯盐酸盐(15g，75mmol)和DIPEA(36mL)在DMSO(127mL)中的混合物在100℃搅拌2h。冷却后，加入水(200mL)，并将混合物用乙酸乙酯(3×300mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到(S)-二甲基2-((5-溴-2-硝基苯基)氨基)琥珀酸盐(12.4g，产率51％)。
步骤2.合成(S)-2-(7-溴-3-氧代-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙酸甲酯(SundiaE655-523-23)：
将(S)-二甲基2-((5-溴-2-硝基苯基)氨基)琥珀酸盐(12.4g，34.4mmol)、Fe(22g，392mmol)和AcOH(1.2mL)在i-PrOH(250mL)和水(50mL)中的混合物搅拌回流2h。冷却后，将固体过滤，并将滤液浓缩。将残余物用DCM(300mL)和水(300mL)稀释，分离有机层，并将水相用DCM(3×300mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过硅胶色谱(石油醚/乙酸乙酯＝4/1)纯化，得到(S)-2-(7-溴-3-氧代-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙酸甲酯(8.8g，产率86％)。1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ10.43(s，1H)，6.84(s，1H)，6.75-6.73(m，1H)，6.66-6.63(m，1H)，6.32(s，1H)，4.19-4.16(m，1H)，3.60(s，3H)，2.78-2.72(m，1H)，2.68-2.61(m，1H)。
步骤3..合成(S)-2-(7-溴-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙醇：
在0℃经15min，分批向(S)-甲基2-(7-溴-3-氧代-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙酸盐(4.4g，14.7mmol)在THF(30mL)中的溶液中加入BH3Me2S(10M，10mL)。将反应加热至回流过夜。冷却后，将混合物用6N HCl(10mL)淬灭，并将所得混合物在50℃搅拌2h。然后将混合物使用2N NaOH碱化至pH～8。将混合物用DCM(3x50mL)萃取，并将合并的有机层用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过硅胶色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(S)-2-(7-溴-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙醇(2.4g，产率63％)。
步骤4.合成(4S)-7-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯：
在室温将DDQ(2.7g，11.7mmol)加入至PPh3(3.0g，11.7mmol)在DCM(100mL)中的溶液中。加入(S)-2-(7-溴-1，2，3，4-四氢喹喔啉-2-基)乙醇(2.0g，7.8mmol)。将混合物在室温搅拌2h。除去溶剂后，将残余物通过硅胶色谱(DCM/MeOH＝40/1)纯化，得到(4S)-7-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.5g，产率81％)。
步骤5.合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯：
在室温，在N2气氛下，向(4S)-7-溴-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.5mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(950mg，5.0mmol)、Cs2CO3(2.4g，7.5mmol)在二噁烷(60mL)和水(6mL)中的混合物中加入Pd(dppf)Cl2(204mg，0.25mmol)。将混合物在110℃搅拌过夜。冷却后，将固体过滤，并将滤液浓缩。将残余物用DCM(30mL)和水(30mL)稀释，分离有机层，并将水相用DCM(3×30mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过硅胶色谱(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，产率95％)。
步骤6.合成(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(50mg，0.16mmol)、TEA(0.1mL)和三光气(40mg，0.13mmol)在THF(5mL)中的混合物在60℃搅拌2h。加入3-(噁唑-5-基)苯胺(38mg，0.24mmol)。将混合物在60℃搅拌过夜。冷却后，将所得混合物浓缩，将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(4S)-N-(3-(噁唑-5-基)苯基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(26.1mg，产率33％)。
实施例68.制备(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(50mg，0.16mmol)、DMAP(52mg，0.42mmol)和吡啶-2-基氨基甲酸苯酯(89mg，0.42mmol)在CH3CN(2.5mL)中的混合物回流过夜。冷却后，将溶剂除去。将残余物通过制备型TLC(DCM/MeOH＝20/1)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(24.4mg，产率35％)。
实施例69.制备(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成(4S)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
该部分使用上述通用Negishi偶联操作制备，得到(4S)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，其为非对映异构体的11∶1混合物(482mg，36％)。MS(ESI)计算值C16H20F3N3：311.16；测得值：312[M+H]。
步骤2.合成(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
这些化合物使用上述三光气脲偶联操作制备，得到(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为非对映异构体的9∶1混合物(38mg，62％)。MS(ESI)计算值C22H24F3N5O：431.19；测得值：432[M+H]。
实施例70.制备(4S)-N-(嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
该非对映异构体混合物使用以下方案制备。将羰基二咪唑(CDI，21mg，0.13mmol)在DCM(1.5mL)形成浆液，然后加入4-氨基嘧啶(13mg，0.13mmol)。为了获得溶液，加入二噁烷(0.5mL)。将混合物在氮气气氛下在室温搅拌1h。将(4S)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(41mg，0.13mmol)加入DCM(1mL)，并将反应物搅拌过夜，然后加入更多CDI(21mg)，并将反应加热回流4h。将反应通过LCMS监测，并且中间体(加入4-氨基嘧啶前)为主要的反应成分。将反应物冷却至室温，浓缩，然后加入更多4-氨基嘧啶(25mg)在1mL DMSO(为了更佳溶解)中。将反应温热至60℃过夜，然后在密封管中在100℃再过一夜。加入更多4-氨基嘧啶(25mg)，并将反应密封并在微波下加热至120℃保持1h。加入DCM(10mL)，然后加入1N HCl(3mL)。将其用DCM(3x15mL)萃取。将合并的有机物用饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将粗产物通过硅胶柱色谱(0-10％MeOH/DCM)纯化，然后通过制备型HPLC再次纯化，得到(4S)-N-(嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(4mg，7％)。MS(ESI)计算值C21H23F3N6O：432.19；测得值：433[M+H]。
实施例71.制备(4S)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
该非对映异构体混合物使用以下方案制备。
氨基甲酸酯形成的通用操作：
经1.5h，将氯甲酸苯酯(2.09g，13.3mmol，1.05当量)滴加至4，5-二甲基噻唑-2-胺(1.63g，12.7mmol，1.0当量)和吡啶(3.01g，38.2mmol，3.0当量)在DCM(16mL)中的冷却的溶液中。将反应继续冷却并搅拌2h。经30min，缓慢加入水(15mL)，然后将混合物用DCM稀释。分离各层，并将有机层用饱和碳酸钠水溶液(20mL)，然后用饱和食盐水(20mL)洗涤。然后将有机层用Na2SO4干燥，然后在减压下浓缩。将残余物悬浮于EA/PE(1∶5)中30min，然后过滤，得到(4，5-二甲基噻唑-2-基)氨基甲酸苯酯(1.7g，54％)。
通过氨基甲酸酯的脲偶联的通用操作：
将(4，5-二甲基噻唑-2-基)氨基甲酸苯酯(80mg，0.322mmol，2.0当量)、(4S)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(75mg，0.161mmol，1.0当量)和DMAP(24mg，0.193mmol，1.2当量)在乙腈(4mL)中的混合物在60℃搅拌过夜。使用TLC和LC/MS监测反应进程。将混合物通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-7-(3-(三氟甲基)环己基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(14.5mg，12％)。MS(ESI)计算值C22H26F3N5OS：465.18；测得值：466[M+H]。
实施例72.制备N-(哒嗪-3-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1：3-氨基戊-2-稀二酸二乙酯
在250mL的3颈烧瓶中装入6.00g(29.7mmol)的1，3-丙酮二甲酸二乙酯、4.70g(59.4mmol)碳酸氢铵和80mL乙醇。将反应物在室温搅拌24h，然后将其在真空中浓缩。将残余物溶于100mL水，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(1x200mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到5g(87％)产物，其为物色油状物。将其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤2：3-氨基戊二酸二乙酯
在250mL的3颈烧瓶中装入5.00g(24.8mmol)的3-氨基戊-2-稀二酸二乙酯、40mL乙醇、10mL冰乙酸和3.1g(49.6mmol)的NaBH3CN。将反应物在室温搅拌2h，然后将溶剂在真空中除去。将残余物溶于水，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的乙酸乙酯层用饱和食盐水(1x200mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和在真空中浓缩，得到4g(80％)产物，其为无色油状物。将其不经进一步纯化直接用于下一步。
步骤3：3-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二乙酯
在250mL的3颈烧瓶中装入1.8g(9.8mmol)的2，6-二氯-3-硝基吡啶、4.0g(19.7mmol)粗品3-氨基戊二酸二乙酯、3.2g(39.0mmol)的NaHCO3和60mL四氢呋喃。将反应物在40℃搅拌24h，然后将溶剂在真空中除去。将残余物溶于100mL水，然后用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机相用饱和食盐水(1x200mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，用20/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到2.7g(80％)产物，其为亮黄色固体。
步骤4：3-((3-氨基-6-氯吡啶-2-基)氨基)戊二酸二乙酯
在配备温度计和磁力搅拌子的250mL 3颈烧瓶中装入2.7g(7.5mmol)的3-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二乙酯、2.1g(37.5mmol)铁粉、60mL的2-丙醇、20mL水和675mg(11.0mmol)乙酸。将混合物在100℃搅拌1h，通过HPLC监测起始硝基化合物的消失。反应完成后，将固体过滤，并用2-丙醇(3x50mL)洗涤，然后将合并的滤液和洗液在真空中浓缩。将残余物溶于100mL水，并用二氯甲烷(3x50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(1x50mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩至干。将粗产物通过硅胶色谱纯化，用4/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到1.8g(75％)产物，其为灰色固体。
步骤5：2-(7-氯-2-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-基)乙酸乙酯
在配备温度计和回流冷凝器的100mL 3颈烧瓶中装入1.8g(5.4mmol)的3-((3-氨基-6-氯吡啶-2-基)氨基)戊二酸二乙酯、20mL甲苯和1.0mL(13.4mmol)三氟乙酸。将混合物在回流搅拌5h，然后将反应通过HPLC监测起始原料的消失。反应完成后，将溶剂在真空中除去，然后将残余物通过硅胶色谱纯化，用3/1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱，得到1.1g(70％)产物，其为米色固体。
步骤6：2-(7-氯-2，3，4，5-四氢-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-基)乙醇
在配备氮气入口、回流冷凝器和温度计的50mL 3颈烧瓶中装入1.0g(3.5mmol)的2-(7-氯-2-氧代-2，3，4，5-四氢-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-基)乙酸乙酯、530mg(14.0mmol)的LiAlH4和10mL四氢呋喃。将反应物在N2下在60℃搅拌6h，通过HPLC监测产物的出现。酯迅速还原，但内酰胺需要较长时间才能完成还原。当反应完成后，将混合物用冰浴冷却，加入530μL水，同时保持内部温度低于5℃，然后将混合物搅拌15min。接下来，加入530μL的15％(w/w)NaOH(水溶液)，同时保持内部温度低于5C，然后将混合物搅拌15min。为了完成后处理，加入1590μL水，然后将混合物在室温搅拌30min。将固体过滤，然后将沉淀用四氢呋喃(3x50mL)洗涤。将滤液在真空中浓缩，然后将残余物通过硅胶色谱纯化，用2/1 己烷/乙酸乙酯洗脱，得到520mg(65％)产物，其为亮黄色固体。
步骤7：7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯
在50mL的3颈烧瓶中装入500mg(2.2mmol)的2-(7-氯-2，3，4，5-四氢-1H-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-4-基)乙醇和10mL的40％(w/w)HBr(水溶液)。将混合物在回流搅拌18h，然后将其冷却至室温，并用饱和NaHCO3(水溶液)中和。将水性混合物用乙酸乙酯(3x50mL)萃取，然后将合并的有机层用饱和食盐水(1x50mL)反萃取，用Na2SO4干燥，过滤和在真空中浓缩。将残余物通过硅胶色谱纯化，用3/1 己烷/乙酸乙酯洗脱，得到320mg(70％)产物，其为米色固体。
步骤8.合成7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
将二噁烷/水混合物(10mL/1mL)脱气，并加入7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(250mg，1.196mmol)，然后加入3-(三氟甲基)苯基硼酸(454mg，2.392mmol)、Pd(dppf)Cl2(97mg，0.19mmol)和Cs2CO3(1.16g，3.588mmol)。将混合物在110℃搅拌12小时，然后浓缩并通过柱色谱(PE/EtOAc＝4/1)纯化，得到7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(200mg，48％)。MS(ESI)计算值C17H16F3N3：319.13。
步骤9.合成N-(哒嗪-3-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
使用以下通用脲偶联操作：
将哒嗪-3-胺(53.9mg，0.25mmol，2.0当量)的氨基甲酸酯、7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(40mg，0.12mmol，1.0当量)和DMAP(18.4mg，0.15mmol，1.2当量)在乙腈(5mL)中的混合物在60℃搅拌过夜。通过TLC和LC/MS监测反应进程。将反应混合物直接加载至制备型TLC，使用100％EtOAc作为洗脱剂，得到N-(哒嗪-3-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨，其为白色固体(16.9mg，30.6％)。MS(ESI)计算值C22H19F3N6O：440.16；测得值：440.9[M+H]。
该通用脲偶联操作可以用于制备多种7-(3-(三氟甲基)苯基)-、7-(3-氯苯基)-、7-(5-氯吡啶-3-基)-和7-(5-氟吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺，通过用合适的胺部分替换哒嗪-3-胺。
实施例73..制备7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成7-氯-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯：
该部分使用以下方案制备。将7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(3.0g，14.31mmol)、(Boc)2O(4.6g，21.05mmol，1.5当量)和DMAP(3.49g，28.62mmol，2.0当量)在THF(5mL)中的混合物在60℃搅拌2h。TLC和LC/MS用于监测反应进程。加入水(30mL)，并将混合物用DCM(3x15mL)萃取。将有机物浓缩，并将残余物通过柱色谱纯化，得到7-氯-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯，其为白色固体(4.5g，92％)。MS(ESI)计算值C15H20ClN3O2：309.12。
步骤2.合成7-(3-氯苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯：(Sundia Prop.455)
该部分使用以下方案制备。向二噁烷/水(20mL/1mL)的脱气的混合物中加入7-氯-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.5g，4.85mmol)、(3-氯苯基)硼酸(1.51g，9.70mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.396g，0.485mmol)和Cs2CO3(4.74g，14.56mmol)。将混合物在110℃搅拌12h，然后浓缩并通过柱色谱(PE/EA＝2/1)纯化，得到7-(3-氯苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.2g，89％)。MS(ESI)计算值C21H24ClN3O2：385.16。
该通用偶联操作可以用于制备多种7-(3-取代的苯基或吡啶基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯，通过用合适的硼酸或硼酸酯部分替换(3-氯苯基)硼酸。
步骤3..合成7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：(Sundia Prop.455)
该部分使用以下方案制备。将7-(3-氯苯基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.2g，3.1mmol)溶于HCl/MeOH(1M，20mL)，并将反应混合物在室温搅拌1.5h，然后在真空中浓缩。加入水(20mL)和K2CO3(3g)。将混合物在室温搅拌2h，然后用DCM(3x15mL)萃取。将有机物浓缩，得到7-(3-氯苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(800mg，90％)。MS(ESI)计算值C16H16ClN3：285.10。
步骤4.合成7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
该化合物使用通用脲偶联操作制备，得到7-(3-氯苯基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(20.4mg，24％)。MS(ESI)计算值C22H20ClN5O：405.14；测得值：406[M+H]。
实施例74.制备7-(5-氟吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
步骤1.合成7-(5-氟吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯：
该部分使用以下方案制备。向二噁烷/水(30mL/3mL)的脱气的混合物中加入7-氯-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.39g，4.5mmol)、(5-氟吡啶-3-基)硼酸(1.27g，9.0mmol)、Pd(dppf)Cl2(0.37g，0.45mmol)和Cs2CO3(4.40g，13.5mmol)。将混合物在110℃搅拌12h，然后浓缩并通过柱色谱(PE/EA＝2/1)纯化，得到7-(5-氟吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.5g，89％)。MS(ESI)计算值C20H23FN4O2：370.18。
步骤2.合成7-(5-氟吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯：
该部分使用以下方案制备。将TFA(20mL)加入至7-(5-氟吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酸叔丁酯(1.50g)在DCM(20mL)中的溶液中，并将反应混合物在室温搅拌3h，然后在真空中浓缩。将残余物用饱和NaHCO3溶液碱化，并用DCM(3x15mL)萃取。将有机物浓缩，得到7-(5-氟吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.2g，100％)。MS(ESI)计算值C15H15FN4：270.13。
步骤3..合成7-(5-氟吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
该化合物使用通用脲偶联操作制备，得到7-(5-氟吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚乙基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(12.8mg，15％)。MS(ESI)计算值C21H19FN6O：390.16；测得值：391[M+H]。
实施例75.制备3-溴-5-(噁唑-5-基)苯胺：
步骤1.合成5-(3-溴-5-硝基苯基)噁唑：
向3-溴-5-硝基苯甲醛(1g，4.34mmol)在DME(10mL)中的溶液中加入K2CO3(1.2g，8.68mmol)，然后加入1-((异氰基甲基)磺酰基)-4-甲基苯(891mg，4.56mmol)。将反应混合物在回流搅拌过夜。冷却至室温后，加入EtOAc，并将混合物用H2O洗涤两次，然后用饱和食盐水洗涤两次。将有机层用MgSO4干燥，过滤和浓缩。通过硅胶色谱(0％至100％EtOAc的戊烷溶液梯度)纯化，得到5-(3-溴-5-硝基苯基)噁唑(762mg，65％)，其为橙色固体。MS(ESI)计算值C9H5BrN2O3：268.0，270.0。
步骤2.合成3-溴-5-(噁唑-5-基)苯胺：
向5-(3-溴-5-硝基苯基)噁唑(762mg，2.83mmol)在THF(14mL)中的溶液中加入乙酸(13.6mL)，然后加入铁粉(474mg，8.49mmol)。将反应混合物在60℃搅拌过夜。冷却至室温后，将混合物倒入饱和Na2CO3溶液(175mL)中，并用EtOAc萃取(50mL x 2)。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用MgSO4-干燥，过滤和浓缩，得到3-溴-5-(噁唑-5-基)苯胺(697mg)，其为棕色油状物。该原料不经进一步纯化直接使用。MS(ESI)计算值C9H7BrN2O：238.0，240.0。
该噁唑形成和硝基还原的通用两步操作可以用于制备4-溴-5-(噁唑-5-基)苯胺，通过使用4-溴-5-硝基苯甲醛。
实施例76.制备6-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺：
步骤1.合成6-氨基-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺：
向6-氨基吡啶-2-甲酸(10.0g，72.5mmol)在乙腈(150mL)中的浆液中加入N，O-二甲基盐酸羟胺(8.52g，87.0mmol)、1-羟基苯并三唑(11.8g，87.0mmol)、N-(3-二甲基氨基)-N’-乙基碳二亚胺盐酸盐(16.7g，87.0mmol)和N，N-二异丙基乙基胺(37.7mL，217mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，并将溶剂在真空中除去。将残余物在1N NaOH和乙酸乙酯之间分配，并将水层用乙酸乙酯萃取三次。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在真空中除去。将剩余残余物通过快速色谱法(乙酸乙酯，含0.1％三乙胺)纯化，得到6-氨基-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(4.30g，23.7mmol，33％产率)。MS(ESI)计算值C8H11N3O2：181.1。
步骤2.合成6-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺：
将氢化铝锂(1.08g，28.5mmol)加入至6-氨基-N-甲氧基-N-甲基吡啶-2-甲酰胺(4.30g，23.7mmol)在THF(30mL)中的溶液中。将反应物在室温搅拌90min。缓慢加入乙酸乙酯(30mL)，并将反应过滤，取滤液并将所有溶剂在真空中除去，得到6-氨基吡啶-2-甲醛，其以粗品用于下一步。
向上述醛在甲醇(20mL)中的溶液中加入p-甲苯磺酰甲基异腈(13.9g，71.2mmol)和碳酸钾(19.4g，140mmol)。将反应物回流搅拌2h，然后将所有溶剂在真空中除去。将残余物在乙酸乙酯(150mL)和水(70mL)之间分配。将有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在真空中除去。将剩余残余物通过快速色谱法(10％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到6-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺(2.00g，12.4mmol，52％产率，经两步)。MS(ESI)计算值C8H7N3O：161.1。
以下化合物以类似方式制备：4-(噁唑-5-基)吡啶-2-胺；5-(噁唑-5-基)吡啶-3-胺。
实施例77：合成3，5-双(噁唑-5-基)苯胺：
步骤1.合成N1，N3-二甲氧基-N1，N3-二甲基-5-硝基异邻苯二甲酰胺：
向5-硝基异邻苯二甲酸(5.00g，23.7mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入草酰氯(5.00mL，59.1mmol)，并将溶液冷却至0℃。经30min滴加DMF(1.0mL)。将混合物温热至室温，并搅拌4h。将所有溶剂在真空中除去
在0℃，向N，O-二甲基盐酸羟胺(4.6g，47.1mmol)和三乙胺(6.60mL，47.4mmol)在二氯甲烷(80mL)中的混合物中加入上述酰氯在二氯甲烷(20mL)中的溶液。一旦反应完成，将反应混合物在真空中浓缩。将残余物在1N氢氧化钠和乙酸乙酯之间分配，分离有机层，并将水层用乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用硫酸钠干燥，将溶剂在真空中除去，并将残余物通过硅胶色谱(1∶1石油醚∶乙酸乙酯)纯化，得到N1，N3-二甲氧基-N1，N3-二甲基-5-硝基异邻苯二甲酰胺(4.00g，13.5mmol，57％产率)。MS(ESI)计算值C12H15N3O6：297.1。
步骤2.合成5-硝基异邻苯二甲醛：
在-40℃，将氢化铝锂(2.70g，71.1mmol)加入至N1，N3-二甲氧基-N1，N3-二甲基-5-硝基异苯二甲酰胺(5.00g，16.9mmol)在THF(150mL)中的搅拌的溶液中。将反应物在-40℃搅拌4h。缓慢加入10％氢氧化钠溶液(2.7mL)，然后加入水(2.7mL)。将所得固体过滤，然后将滤液在真空中浓缩，得到5-硝基异邻苯二甲醛(1.37g，7.65mmol，45％产率)。MS(ESI)计算值C8H5NO4：179.0。
步骤3..合成5，5′-(5-硝基-1，3-次苯基)双(噁唑)：
将1-异氰基甲烷磺酰基-4-甲基-苯(7.40g，37.8mmol)和无水碳酸钾(5.20g，37.8mmol)加入至5-硝基异邻苯二甲醛(1.37g，7.65mmol)在甲醇(100mL)中的溶液中。将反应物在氮气下回流2h。冷却后，将溶剂在真空中除去。将残余物在乙酸乙酯(150mL)和水(70mL)之间分配。将有机层除去，并将水层用乙酸乙酯(3x 150mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，浓缩，得到粗品5，5′-(5-硝基-1，3-次苯基)双(噁唑)(1.70g，6.61mmol，86％产率)。MS(ESI)计算值C12H7N3O4：257.0。
步骤4.合成3，5-双(噁唑-5-基)苯胺：
将5，5′-(5-硝基-1，3-次苯基)双(噁唑)(1.70g，6.61mmol)和钯/碳(200mg)在乙酸乙酯(50mL)中的混合物中在氢气下搅拌4h。将固体过滤，并将滤液在真空中浓缩。将剩余残余物通过硅胶色谱(4∶1石油醚∶乙酸乙酯)纯化，得到3，5-双(噁唑-5-基)苯胺(1.30g，5.72mmol，87％产率)。MS(ESI)计算值C12H9N3O2：227.1。
实施例78.制备(2-(4-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：
在20mL微波瓶中装入(2-溴乙基)氨基甲酸叔丁酯(551mg，2.50mmol)、叠氮化钠(460mg，7.05mmol)和DMF(5mL)。将瓶密封，并在微波中在110℃加热12h。将反应混合物倒入水(8mL)中，并用乙酸乙酯(2x 10mL)萃取。将合并的有机层用硫酸镁干燥，并将所有溶剂在真空中除去，得到粗品(2-叠氮基乙基)氨基甲酸叔丁酯。
将粗品(2-叠氮基乙基)氨基甲酸叔丁酯溶于THF(5mL)和三乙胺(1mL)。加入3-乙炔基苯胺(350mg，2.99mmol)，然后加入碘化亚铜(I)(15.0mg，0.0788mmol)。将反应物在60℃搅拌2h，然后将所有溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过快速色谱法(50％至100％乙酸乙酯的戊烷溶液)纯化，得到(2-(4-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-1-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(415mg，1.37mmol，55％产率，经2步)。MS(ESI)计算值C15H21N5O2：303.2。
实施例79.制备((1-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯：
向3-叠氮基苯胺(Chem.Commun.2004，888)(1.34g，9.99mmol)在THF(9.0mL)和三乙胺(1.0mL)中的溶液中加入丙-2-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(1.55g，9.99mmol)和碘化亚铜(I)(40mg，0.210mmol)。将反应物在60℃搅拌1h，然后将所有溶剂在真空中除去。将剩余残余物通过快速色谱法(0％至80％乙酸乙酯的戊烷溶液)纯化，得到((1-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-4-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(化合物#；1.71g，5.91mmol，59％产率)。MS(ESI)计算值C14H19N5O2：289.1；测得值：290.1[M+H]。
实施例80：制备((1-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯：
向含有3-叠氮基苯胺(1.33g，9.92mmol)、丙-2-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(1.55g，9.99mmol)和五甲基环戊二烯基双(三苯基膦)氯化钌(II)(15.9mg，0.020mmol)的瓶中加入甲苯(10mL)。将反应物在100℃搅拌72h，然后将反应物冷却至室温。加入二氯甲烷(5mL)以溶解固体，并将剩余溶液通过硅胶色谱(50％至80％乙酸乙酯的戊烷溶液)纯化，得到((1-(3-氨基苯基)-1H-1，2，3-三唑-5-基)甲基)氨基甲酸叔丁酯(970mg，3.35mmol，34％产率)。MS(ESI)计算值C14H19N5O2：289.2。
实施例81：制备N4，N4-二甲基嘧啶-2，4-二胺：
在密封管中将4-氯-2-氨基嘧啶(495mg，3.82mmol)溶于二甲胺水溶液(33％)，并将反应物在100℃搅拌过夜。冷却后，将反应用水稀释，用二氯甲烷萃取。将有机层用水和饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在真空中除去，得到N4，N4-二甲基嘧啶-2，4-二胺(400mg，2.89mmol，76％产率)。MS(ESI)计算值C6H10N4：138.1。
实施例82：制备4-(2-氨基嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯：
将THF(20mL)加入至4-氯-2-氨基嘧啶(500mg，3.87mmol)和N-Boc哌嗪(7.21g，38.7mmol)的混合物中。将反应物在70℃搅拌过夜。冷却后，将溶剂在真空中除去，并将剩余残余物通过硅胶色谱(1∶1石油醚∶乙酸乙酯)纯化，得到4-(2-氨基嘧啶-4-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(650mg，2.33mmol，60％产率)。MS(ESI)计算值C13H21N5O2：279.2。
以下化合物以类似方式制备：4-(4-甲基哌嗪-1-基)嘧啶-2-胺。
实施例83..制备(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
步骤1.合成2-溴-5-硝基苯甲醛：
经1h在0℃，分批向2-溴苯甲醛(10.0g，53.7mmol)在H2SO4(100mL)中的溶液中加入KNO3(5.43g，53.7mmol)。将混合物搅拌40min，并加入额外KNO3(0.72g)。将反应混合物在0℃搅拌3h，然后倒入冰水中。将所得沉淀通过过滤收集，用水冲洗，并从EtOAc/戊烷中重结晶，得到2-溴-5-硝基苯甲醛(11.7g，94％产率)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C7H4BrNO3：228.9。
步骤2.合成5-(2-溴-5-硝基苯基)噁唑：
将2-溴-5-硝基苯甲醛(1.0g，4.33mmol)、K2CO3(1.79g，12.9mmol)和TosMIC(2.12g，10.8mmmol)在MeOH中的混合物在60℃加热1.5h。将混合物浓缩。加入水，并将固体通过过滤收集，用水、MeOH和石油醚冲洗，得到5-(2-溴-5-硝基苯基)噁唑(750mg，产率65％)，其为灰色固体。MS(ESI)计算值C9H5BrN2O3：228.9。
步骤3..合成(3-(4-硝基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
在N2下，向5-(2-溴-5-硝基苯基)噁唑(300mg，1.11mmol)在DME(20mL)中的溶液中加入丙-2-炔-1-基氨基甲酸叔丁酯(431mg，2.77mmol)。加入CuI(21mg，0.11mmol)和Pd(dppf)Cl2(78mg，0.11mmol)，然后加入TEA(0.5mL)。将反应混合物在80℃加热4h，冷却至室温，倒入水中，并用EtOAc萃取(3x 50mL)。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，干燥和浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱(EtOAc∶戊烷＝1∶5)纯化，得到(3-(4-硝基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，产率92％)，其为黄色油状物。MS(ESI)计算值C17H17N3O5：343.1。
步骤4.合成(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯：
将(3-(4-硝基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3.8g，11.1mmol)和Fe(4.96g，8.86mmol)在饱和NH4Cl/MeOH水溶液(V/V＝1∶3)中的悬浮液在60℃加热4.5h。将混合物冷却至室温，通过硅藻土垫，并将滤液浓缩。将残余物溶于EtOAc，用水洗涤，干燥(Na2SO4)和浓缩。将粗品残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(1.51g，产率44％)，其为黄色油状物。MS(ESI)计算值C17H19N3O3：228.9。
以与(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯相似的方式，从3-溴-5-硝基苯甲醛制备(3-(3-氨基-5-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯。
实施例84.制备(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙基)氨基甲酸叔丁酯：
将(3-(4-硝基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯(3.0g，8.75mmol)和10wt％Pd/C(1.0g)在MeOH(100mL)中的混合物在H2气氛(50psi)下搅拌16h。将混合物通过过滤除去催化剂，并将滤液浓缩。将残余物通过硅胶柱色谱纯化，得到(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙基)氨基甲酸叔丁酯(940mg，产率35％)，其为黄色油状物。MS(ESI)计算值C17H23N3O3：228.9。
以与(3-(4-氨基-2-(噁唑-5-基)苯基)丙基)氨基甲酸叔丁酯相似的方式，从(3-(3-硝基-5-(噁唑-5-基)苯基)丙-2-炔-1-基)氨基甲酸叔丁酯制备(3-(3-氨基-5-(噁唑-5-基)苯基)丙基)氨基甲酸叔丁酯。
实施例85.制备2-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶：
将2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(1g，4.48mmol)、3，3-二氟吡咯烷盐酸盐(1.9g，13.4mmol)和K2CO3(3g，22.4mmol)在NMP(13mL)中的混合物在110℃搅拌过夜。加热第二批3，3-二氟吡咯烷盐酸盐(0.5g)，并搅拌过夜。将混合物过滤，用水洗涤，加热2N HCl调节pH至1。将混合物用EtOAc洗涤以除去残留的2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶。将水层用K2CO3溶液调节至pH 13，然后用EtOAc萃取，得到2-(3，3-二氟吡咯烷-1-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(220mg，17％)。MS(ESI)计算值C15H21BF2N2O2：310.2。
该通用操作可以用于制备4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)吡啶，通过使用3-(三氟甲基)吡咯烷盐酸盐。
实施例86.制备(S)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶：
将2-氟-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(200mg)、(S)-3-氟吡咯烷盐酸盐(350mg)和Na2CO3(480)在IPA(3.5mL)中的混合物在91℃搅拌17小时。将混合物过滤和浓缩。加热2N HCl以调节pH至1，并用EtOAc萃取。将水层用Na2CO3溶液调节至pH 7，并用甲苯除去水。将残余物溶于EtOAc，过滤和浓缩，得到(S)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(95mg，36％)。MS(ESI)计算值C15H22BFN2O2：292.2。
该通用操作可以用于制备(R)-2-(3-氟吡咯烷-1-基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶，通过使用(R)-3-氟吡咯烷盐酸盐。
实施例87.制备3，3-二氟-1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷：
步骤1.合成1-(3-溴苯基)-3，3-二氟吡咯烷：
在N2气氛下，将1，3-二溴苯(1g，4.24mmol)、3，3-二氟吡咯烷盐酸盐(669mg，4.66mmol)、Pd2(dba)3(134mg，0.233mmol)、Cs2CO3(3.32g，10.2mmol)和BINAP(264mg，0.424mmol)在甲苯(20mL)中的混合物加热至回流。搅拌过夜后，将混合物冷却至室温和浓缩。将浓缩物悬浮于EtOAc(50mL)，用水(20mL x 3)和饱和食盐水(20mL)洗涤，用Na2SO3干燥，浓缩。通过柱色谱(己烷/EtOAc＝100/1)纯化，得到1-(3-溴苯基)-3，3-二氟吡咯烷(645mg，＞100％)，其为无色油状物。MS(ESI)计算值C10H10BrF2N：261.0。
步骤2。合成3，3-二氟-1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷：
在N2气氛下，将1-(3-溴苯基)-3，3-二氟吡咯烷(899mg，3.43mmol)、4，4，4′，4′，5，5，5′，5′-八甲基-2，2′-二(1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷)(957mg，3.77mmol)、Pd(dppf)Cl2(75mg，0.103mmol)、KOAc(1g，10.29mmol)在二噁烷(18mL)中的悬浮液加热至85℃。搅拌过夜后，将悬浮液冷却至室温并过滤。将滤液浓缩，并通过柱色谱(己烷，然后己烷/EtOAc＝100/1)纯化，得到3，3-二氟-1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)吡咯烷(化合物A#；873mg，82％)，其为白色固体。MS(ESI)计算值C16H22BF2NO2：309.2。
该通用两步操作可以用于制备1-(3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)苯基)-3-(三氟甲基)吡咯烷，通过使用3-(三氟甲基)吡咯烷盐酸盐。
实施例88.制备2-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷：
步骤1.合成1-烯丙基-3-溴苯：
在N2气氛下，在3颈烧瓶中，将金属Mg(1.78g，73.76mmol)浸入无水乙醚(20mL)中。将1/3体积的1，3-二溴苯(15g，63.58mmol)在无水乙醚(20mL)中的溶液加入至混合物中。加入1，2-二溴乙烷(0.1mL)引发反应。回流稳定后，以维持回流的滴加速率滴加剩余量的1，3-二溴苯溶液。完成滴加后，将混合物在回流搅拌1小时。然后，滴加烯丙基溴化物(7.87g，65.12mmol)在无水乙醚(20mL)中的溶液。完成加入后，将悬浮液在回流搅拌1小时。将反应用饱和NH4Cl(100mL)淬灭，并将混合物分离。将水相用乙醚(20mL x 2)萃取。将合并的有机相用水(70mL x 2)和饱和食盐水(30mL)洗涤，用Na2SO4干燥，浓缩，得到1-烯丙基-3-溴苯(146g)，其为无色油状物。该原料不经进一步纯化直接使用。MS(ESI)计算值C9H9Br：196.0。
步骤2。合成3-(3-溴苯基)丙烷-1，2-二醇：
向1-烯丙基-3-溴苯(A#；1g，5.08mmol)在CH3CN/H2O(20mL，v/v＝4/1)中的溶液中加入NMO(1.3g，11.16mmol)和K2OsO4·2H2O(187mg，0.508mmol)。将混合物在室温搅拌2天。将CH3CN在减压下除去，并将浓缩物用EtOAc稀释。将混合物经硅藻土过滤，并将滤液浓缩，得到3-(3-溴苯基)丙烷-1，2-二醇(化合物A#)。该原料不经进一步纯化直接使用。MS(ESI)计算值C9H11BrO2：230.0。
步骤3.合成4-(3-溴苄基)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷：
向3-(3-溴苯基)丙烷-1，2-二醇(A#；1.17g，5.06mmol)在丙酮(25mL)中的溶液中加入2，2-二甲氧基丙烷(1.8mL，15.18mmol)和PTSA(96mg，0.506mmol)。将混合物在室温搅拌过夜。将反应混合物浓缩，并通过柱色谱(己烷/EtOAc＝20/1)纯化，得到4-(3-溴苄基)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷(化合物A#；200mg，15％)，其为淡黄色油状物。MS(ESI)计算值C12H15BrO2：270.0。
步骤4.合成2-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷：
在N2下，将4-(3-溴-苄基)-2，2-二甲基-[1，3]二氧杂环戊烷(A#；800mg，2.95mmol)和双(频哪醇基)二硼(822mg，1.1eq)、Pd(dppf)Cl2(216mg，0.1eq)和KOAc(868mg，3.0eq)在二噁烷(15mL)中的混合物脱气，并加热至85℃。在85℃搅拌过夜后，将黑色悬浮液冷却至室温，并经硅藻土过滤。将滤液浓缩，并通过柱色谱(己烷/EtOAc＝40/1)纯化，得到2-(3-((2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲基)苯基)-4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷(化合物A#；800mg，85％)，其为无色油状物。MS(ESI)计算值C18H27BO4：318.2。
实施例89.制备(9S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐和2-(6-羟基-3-氧代-3H-氧杂蒽-9-基)-5-((6-氧代-6-((4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基)氨基)己基)氨基甲酰基)苯甲酸：
试剂和条件：a)NaHCO3，THF，40℃；b)Fe，AcOH，IPA/水，回流；c)AlH3，THF，-78℃至室温；d)48％HBr；e)3-三氟苯基硼酸，Pd(OAc)2，X-Phos，Cs2CO3，二噁烷/水；f)三光气，DIEA，CH2Cl2；g)4N HCl，二噁烷；h)DIEA，6[荧光素-5(6)-甲酰胺基]己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯，CH3CN.
步骤1.合成(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯。向2，6-二氯-3-硝基吡啶(40.0g，207mmol)、L-谷氨酸二甲酯盐酸盐(87.7g，414mmol)和NaHCO3(69.6g，829mmol)的混合物中加入四氢呋喃(600mL)。将混合物在40℃搅拌24h，同时通过HPLC监测2，6-二氯-3-硝基吡啶的消失。反应完成后，将固体过滤，并用乙酸乙酯(3x 100mL)洗涤。将合并的滤液和洗液在真空中浓缩，并将残余物通过硅胶色谱(用10∶1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱)纯化，得到(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯，其为黄色固体。(60g，87％)。LRMS(m/z)332.1[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C12H15N3O6Cl，332.0649；测得值332.0651。
步骤2.合成(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯
向(S)-2-((6-氯-3-硝基吡啶-2-基)氨基)戊二酸二甲酯(20g，60.2mmol)和铁粉(16.8g，301mmol)中的混合物中加入2-丙醇(375mL)和水(125mL)。向搅拌的混合物中加入乙酸(5.5g，90.3mmol)，并将反应物回流搅拌1h，同时通过HPLC监测起始原料的消失。反应完成后，将固体过滤，并用2-丙醇(3x 50mL)洗涤。将合并的滤液和洗液浓缩至干，然后将残余物在真空中浓缩，得到(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯，其为深黄色固体，其不经进一步纯化直接用于下一步(15g，81％)。LRMS(m/z)270.1[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C11H13N3O3Cl，270.0645；测得值270.0645。
步骤3.合成(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇
在N2下，以控制气体逸出的速度，向AlCl3(17.78g，133.3mmol)在四氢呋喃(260mL)中的溶液中滴加2M LiAlH4的THF溶液(200mL，400mmol)。得到氢化铝(AlH3)在THF中的溶液。在单独的烧瓶中，在N2下，制备(S)-3-(6-氯-2-氧代-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙酸甲酯(26.0g，96.4mmol)在THF(460mL)中的溶液，然后用干冰/丙酮浴冷却。经2h，伴随搅拌，向其中加入氢化铝溶液。当加入完成时，将冷却浴撤去，并将反应温热至室温。1.5h后，LCMS分析显示反应完成，并缓慢加入NaOH(17.6g)在水(65mL)中的溶液以控制H2逸出。将悬浮液搅拌18h，之后，将固体通过过滤除去。将沉淀用乙酸乙酯洗涤，然后将滤液和洗液在真空中浓缩。将产物通过硅胶色谱(0至10％MeOH的CH2Cl2溶液梯度)出的，得到(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇，其为橙黄色固体(15.21g，69％)。LRMS(m/z)228.1[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C10H15N3OCl，228.0904；测得值228.0903。
步骤4.合成(5R，9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-，亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
向(S)-3-(6-氯-1，2，3，4-四氢吡啶并[2，3-b]吡嗪-3-基)丙-1-醇(12g，52.7mmol)中加入48％(w/w)HBr(水溶液)(160mL)，并将反应物在90℃搅拌18h，同时通过HPLC监测起始醇的消失。反应完成后，将其冷却至室温，然后加入1.2M NaHCO3水溶液直至达到pH8。将混合物用乙酸乙酯(3x 100mL)萃取，然后将有机相用饱和食盐水(1x 100mL)洗涤，干燥(Na2SO4)，过滤和浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(用2∶1(v/v)己烷/乙酸乙酯洗脱)纯化，得到(5R，9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯，其为亮黄色固体(6.0g，55％)。LRMS(m/z)210.1[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C10H13N3Cl，210.0798；测得值210.0800。
步骤5.合成(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯
将(9S)-2-氯-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯3.0g，15.4mmol)、(3-(三氟甲基)苯基)硼酸(4.4g，23.1mmol)、乙酸钯(344mg，1.54mmol)、2-二环己基膦基-2′，4′，6′-三异丙基联苯(X-Phos，476mg，3.08mmol)和碳酸铯(15g，46.2mmol)在1，4-二噁烷和水(60mL)的10∶1(v/v)混合物中的溶液在90℃搅拌24小时。然后将反应物冷却至室温，并用乙酸乙酯(150mL)稀释。将混合物用饱和NaHCO3水溶液(200mL x 3)洗涤，然后将有机层干燥(MgSO4)和浓缩至干。将所得残余物通过硅胶色谱(10-100％乙酸乙酯梯度的戊烷溶液)纯化，得到(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯，其为亮黄色固体(3.7g，75％)。LRMS(m/z)320.2[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C17H17N3F3，320.1375；测得值320.1375。
步骤6.合成4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基氨基甲酸叔丁酯
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(999mg，3.23mmol)在CH2Cl2(30mL)中的溶液中加入N，N-二异丙基乙基胺(1.7mL，9.78mmol)，并用冰浴将反应混合物冷却至0℃。然后分四批加入三光气(482mg，1.63mmol)。将冰浴撤去，并将混合物温热至室温。通过取出500uL等份并与甲醇混合，经过形成中间体氯甲酸酯分析转化为氨基甲酸甲酯来监测反应进程。如果剩余起始原料，则加入额外的三光气(200mg)，并将反应混合物在室温搅拌5小时。接下来，以两等份(各400mg)加入4-氨基苄基氨基甲酸叔丁酯(800mg，3.60mmol)至上述混合物中，并将所得混合物在室温搅拌2小时。加入饱和NaHCO3水溶液(30mL)，然后将有机相分离，并在减压下浓缩至干。将残余物通过硅胶色谱(15-100％乙酸乙酯的戊烷溶液梯度)纯化，得到4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基-氨基甲酸叔丁酯，其为白色固体。(761mg，42％)。LRMS(m/z)568.2[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C30H33N5O3F3，568.2536；测得值568.2538。
步骤7.合成(9S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐
将4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基氨基甲酸叔丁酯(759mg，1.34mmol)溶于4NHCl(10mL)和1，4-二噁烷，并在氮气下在室温搅拌1小时。将溶剂在减压下除去，并将所得固体在真空下干燥过夜，得到(9S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐，其为亮黄褐色固体(763mg，100％)。LRMS(m/z)468.1[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C25H25N5OF3，468.2011；测得值468.2010。
步骤8.合成2-(6-羟基-3-氧代-3H-氧杂蒽-9-基)-5-((6-氧代-6-((4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基)氨基)己基)氨基甲酰基)苯甲酸
将(9S)-N-(4-(氨基甲基)苯基)-2-(3-(三氟-甲基)苯基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐(39mg，0.10mmol)溶于乙腈(2mL)和甲醇(0.2mL)。然后加入N，N-二异丙基乙基胺(32μL，0.20mmol)，然后加入6-[荧光素-5(6)-甲酰胺基]己酸N-羟基琥珀酰亚胺酯(50mg，0.085mmol)。将混合物在室温搅拌过夜，然后将产物通过反相HPLC(5-95％乙腈在水中的溶液梯度，用0.1％TFA改性)分离，得到2-(6-羟基-3-氧代-3H-氧杂蒽-9-基)-5-((6-氧代-6-((4-((9S)-2-(3-(三氟甲基)苯基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10-甲酰胺基)苄基)氨基)己基)氨基甲酰基)苯甲酸，其为棕色固体(26mg，35％)。LRMS(m/z)939.2[M+H]+；HRMS(m/z)：[M+H]+计算值C52H46N6O8F3，939.3329；测得值939.3328。
实施例90.小hSIRT1设计和表征
在全长hSIRT1蛋白上进行质子-氘核交换质谱(HDX-MS)以鉴定和表征hSIRT1的关键功能区。H-D交换的速率高度依赖于蛋白的动态性质，在溶剂暴露和/或柔性区域发生更快的交换，并且在更多覆盖和/或结构刚性区域发生较慢的交换(Hamuro，Y等，(2003)Jbiomol Techniques：JBT 14，171)。与以前关于hSIRT1(19-747)的研究(Hubbard，B.P等，(2013)Science 339，1216)一致，全长hSIRT1包含三个主要结构域：催化核心区残基229-516(以下称为hSIRT1cc)(Jin，L.等，(2009)J Biol Chem 284，24394和Frye，R.A.(2000)Biochem Biophys Res Commun 273，793)，紧接在催化核心之前的190-230的N-末端区域和在催化核心后约640-670的C-末端的远端区域。
为了探测hSIRT1上的STAC结合位点，在存在或不存在STAC 1的情况下进行HDX-MS。加入1降低hSIRT1的N-末端结构域中残基190-230附近的H-D交换速率，表明该区域涉及STAC结合。此外，15N-标记的hSIRT1(180-230)的1H，15N HSQC谱是充分分散的，表明它形成自主折叠的结构域。加入1至15N-标记的hSIRT1(180-230)导致显著的化学位移扰动，进一步支持1与该区域(以下称为STAC-结合结构域(SBD))的直接相互作用。在p53-衍生的肽底物(Ac-p53(W5))(Dai，H.等，(2010)J Biol Chem 285，32695)的存在下，加入1至hSIRT1导致同时在SBD周围和催化核心中的假定的底物结合位点(残基417-424)处出现H-D交换速率的扰动，表明N-末端结构域中的STAC结合和hSIRT1的催化核心内的底物结合相关。这与以前的观察一致，STAC增强底物与hSIRT1的结合，从而提高hSIRT1催化效率(Milne，J.C.等，(2007)Nature 450，712)。
与SBD不同，由HDX-MS鉴定的C-末端结构元件(641-665)与催化核心相隔约150个残基，并且预测含有若干β-链(这里称为C-末端β-链/片层(CBS)，类似于之前报道的鼠SIRT1活性必需(Essential for SIRT1 Activity，ESA)肽(19)。使用先前报道的脱乙酰化分析条件(Dai，H.等，(2010)J Biol Chem 285，32695)，hSIRT1cc仅显示全长酶活性的约八分之一。CBS肽将hSIRT1cc的反式催化活性恢复到全长hSIRT1的80％，EC50＝59nM，与先前的观察一致(Kang，H.等，(2011)Mol Cell 44，203和Marmorstein，R.等，(2012)J Biol Chem287，2468)。我们还设计了仅覆盖β-链区域(642-658)的最小CBS片段，其性质与亲本CBS肽类似。动力学表征显示，CBS肽通过将hSIRT1cc的肽底物和NAD+的KM值降低至1/4-1/5来恢复活性(参见表1)。
表1.存在或不存在CBS肽的情况下hSIRT1催化核心的稳态动力学a
a数据来自PNC1/GDH分析。
bNAD+浓度固定在1mM。
cAc-p53(W)浓度固定在500μM。
总之，上述数据表明了最小功能的hSIRT1的三部分体系结构，包括：1)构成基本催化机构的中心核心，2)介导STAC结合和活化的N-末端SBD，以及3)C-末端CBS肽，其稳定催化核心，产生更有效的脱乙酰酶活性。基于此，我们设计了包含共价结合的所有三种最小结构元件的hSIRT1构建体，我们称之为小hSIRT1。构建体跨越183-505或183-516，其通过柔性多甘氨酸/丝氨酸连接基(GS、(GGGS)2或(GGGS)3)连接到CBS肽(Sauer，R.T.和Robinson，C.R.(1998)Proceedings of Nat Academy of Sciences of USA 95，5929)。KM和kcat值在小hSIRT1构建体和全长酶之间是相当的，如同非竞争性hSIRT1抑制剂EX-527或烟酰胺(NAM)的IC5050值，证实了小hSIRT1的功能保真度(参见表2)。此外，就STAC-介导的活化跨越广泛的化学型而言，小hSIRT1和全长酶之间具有很好的相关性。去除SBD完全消除STAC-介导的小hSIRT1的活化，证实了该结构域对于活化的关键重要性。相比之下，缺乏CBS的小hSIRT1保留了显著水平的STAC活化，表明CBS增强STAC-介导的活化，但不是必需的。最后，E230K突变也减弱了小hSIRT1中的STAC-介导的活化，如同全长酶一样(Hubbard，B.P.等，(2013)Science 339，1216)。总之，这些观察结果表明，在分子大小仅为全长hSIRT1的一半时，小hSIRT1是全长hSIRT1的完全功能和可活化的替代物。
表2.小hSIRT1构建体的稳态动力学a
a数据来自PNC1/GDH分析。
bNAD+浓度固定在2mM。
cAc-p53(W)浓度固定在400μM。
d值来自(1)
实施例91.小hSIRT1/STAC复合物的结构
虽然已经报道了hSIRT1催化核心的x射线晶体结构(Zhao，X.等，(2013)J MedChem 56，963)，但是仍不知道全长酶的结构。全长hSIRT1的结构一直是个挑战，部分原因是扩展的N-和C-末端结构域的构象柔性。小hSIRT1构建体使我们有机会结晶全长酶的等效功能替代物。我们通过在HDX-MS实验中使用的STAC 1成功地结晶了小hSIRT1(183-505-(GGGS)2-CBS)，并通过分子置换在确定了复合物(小hSIRT1/1)的结构，其使用了基于SIRT3的同源性模型的搜索模型(Jin，L.等，(2009)J Biol chem 284，24394)。小hSIRT1由一个催化核心组成，它呈现出所有沉默调节蛋白共同的Rossmann折叠大叶和锌-结合小叶，N-末端三螺旋束SBD和C-末端β-发夹CBS。有趣的是，在晶格中观察到与晶体对称性相关的小hSIRT1的STAC-介导的二聚体。尺寸排阻色谱(SEC)证实，在STAC 1存在下，小hSIRT1在溶液中形成二聚体。然而，对于相同化学型的相似STAC 7，没有观察到小hSIRT1二聚体的形成。鉴于这一观察结果和用于结晶的STAC浓度远高于生物化学分析测量活化中使用的STAC浓度的事实，在晶体结构中观察到的二聚化似乎不是STAC活化hSIRT1必须的。
CBS与催化结构域的Rossmann折叠的六股β-片层介导β-增强，与CBS结合时hSIRT1cc扰动的HDX-MS结果一致。CBS-介导的β-增强似乎稳定hSIRT1催化核心的活性位点，其恢复观察到的乙酰化肽和NAD+底物二者的KM值。N-末端SBD形成独立折叠的三螺旋束，其1个结合到SBD内的螺旋-转角-螺旋(H2-T-H3)基序，与HDX-MS、NMR和酶动力学结果一致。主要的小hSIRT1/1结合位点是相对较浅的疏水表面，具有偏心、更深的疏水口袋，其被1的CF3基团占据。这与观察到的在多个STAC化学型得出的构效关系(SAR)一致，表明通过分子内氢键保持的核心骨架的整体平坦度的要求(Vu，等，(2009)J Med Chem，52，1275)。在小hSIRT1结构和酵母Sir2之间观察到在结构域构型方面的显著相似性，二者均具有N-末端螺旋束，并且通过β-发夹的C-末端β-增加超出典型的Rossmann折叠大叶(Hsu，H.C.等，(2013)Genes&Dev 27，64)。然而，酵母Sir2不包括在hSIRT1中观察到的150个氨基酸插入，并且在酵母中表现为天然的“小SIRT1”。Sir2中的N-末端结构域似乎对于另一种酵母蛋白Sir4的变构活化是重要的(Hsu，H.C.等，(2013)Genes&Dev 27，64)。尽管Sir2N-端结构域的结构与hSIRT1 SBD不同，但两者似乎在催化核心的变构活化中具有保守功能的作用。
实施例92.STAC结合口袋的定向诱变
我们使用全长hSIRT1的定点诱变来确认由小hSIRT1结构鉴定的SBD的关键残基。产生全长hSIRT1的以下点突变体探测三类残基：a)看起来与活化剂(T219A、I223A、N226A和I227A)直接相互作用的残基，b)偶联调节剂Glu230(Hubbard，B.P.等，(2013)Science 339，1216)(E230K，E230A，and E230Q)，和c)在活化剂结合中没有明显作用的SBD残基(Q222A和V224A)。无一突变体显著损害基础催化活性(使用Ac-p53(W5)底物)或影响抑制(通过EX-527(TFA-p53肽(Ac-RHK-KTFA-L-Nle-F-NH2)或烟酰胺(NAM))(见表4和表5)。
通过比较野生型与突变型全长SIRT1的折叠活化(使用在25μM固定浓度下测试的246个STAC的结构多样性集合)来评估突变对活化的一般影响。另外，我们通过使用一组五个化合物(STACs 1、6-9)监测其EC50和最大活化值的变化来研究突变对STAC结合与活化的影响。与野生型hSIRT1相比，T219A、I223A和I227A均显示出活化的广泛损害(EC50增加)，暗示符合结构的活化剂结合受损(参见表6)。有趣的是，I223A是化合物依赖性最强的突变体，其STAC-介导的活化从减弱到增强。显示增强活化的STAC富含含有邻CF3取代的苯环的结构。在晶体结构中，Ile223直接位于活化剂的下方，并列于1的间位CF3插入的口袋。预期由Ile223突变为Ala产生的空穴将更好地适应邻位取代基而非间位取代。这一观察进一步验证了STAC结合的关键分子相互作用，并指出改变STAC与SBD相互作用的策略。
表4.野生型和突变型全长hSIRT1的稳态底物动力学
a数据来自PNC1/GDH分析。
b数据来自OAcADPr分析。
c值来自(1)
表5.野生型和突变型全长hSIRT1的抑制
a数据来自OAcADPr分析，使用Ac-p53(W5)底物。
bTFA-p53肽序列：Ac-RHKK(TFA)L-Nle-F-NH2。
表6.全长hSIRT1活化或抑制分析中所用的底物浓度
Asn226似乎在其甲酰胺氮和在蛋白表面上的1的羰基氧之间形成氢键。然而，与野生型相比，N226A的活化仅受到最小的损害。这种氢键的小贡献可能是由于其高溶剂暴露。
近来据报道，将Glu230突变为Lys或Ala广泛削弱了STAC的活化，尽管发生这种情况的机制尚不清楚(Hubbard，B.P.等，(2013)Science 339，1216)。我们测试了E230K、E230A和E230Q全长hSIRT1蛋白的活化。在所有三种Glu230突变体中，最大活化受损却不改变EC50(参见表7和8)，表明Glu230在hSIRT1的活化构象的形成或稳定中起作用。E230Q的活化也受到广泛的削弱，表明Glu230的负电荷对于稳定hSIRT1的活化构象是重要的，并且Glu230可能与活化构象中带正电荷的残基相互作用。
表7.hSIRT1突变体对活化剂EC50值的影响
a变化倍数＝(突变型EC50/野生型EC50)
由使用等式1的活化剂量响应曲线确定EC50值。使用具有Ac-p53(W5)底物的OAcADPr分析测量活化。
表8.hSIRT1突变体对STAC的最大活性的作用
a变化倍数＝(野生型RVmax-1)/(突变型RVmax-1)
由使用等式1的活化剂量响应曲线确定最大活化值(RVmax)。使用具有Ac-p53(W5)底物的OAcADPr分析测量活化。
与上述突变体不同，Q222A和V224A显示正常的活化，这与它们的位置远离小hSIRT1/1结构中的STAC的一致。重要的是，使用全长hSIRT1获得的所有这些数据与小SIRT1晶体结构预测进一步验证这些结构的生化意义一致。
尽管上述突变体的广泛影响，但没有一个完全消除hSIRT1的活化，如去除SBD所见。由于Ile223直接位于结合的STAC之下，并且I223A的活化是高度化合物依赖性的，我们假设I223R hSIRT1至今构成最高活性受损的全长酶。从Ile到Arg的取代增大体积并在疏水性STAC结合位点引入电荷，这将预期会破坏基于结构的化合物结合。I223R不改变Ac-p53(W5)或FOXO-3a底物肽的基础催化活性或通过EX-527、TFA-p53肽或NAM的抑制(参见表4、5和9)。然而，对于两种底物，所有246个活化剂的活化完全丧失。
表9.具有FOXO-3a 21-聚体的全长hSIRT1的稳态动力学a
a数据来自PNC1/GDH分析。
实施例93.STAC和底物底物结合之间的变构偶联
我们研究了STAC激活hSIRT1的机理。为此，我们确定了小hSIRT1、1、衍生自p53(Ac-p53)的7个氨基酸的肽底物和不可水解的NAD+类似物carbaNAD的四元复合物的结构，以及小hSIRT1/1与占据肽和NAD+结合位点的新的活性位点定向抑制剂2的复合物的结构。在四元复合物结构中，Ac-p53肽和carbaNAD结合到大叶和小叶之间的活动位点裂缝。Ac-p53采取了伸展构象，其中主链酰胺基与小叶的残基Gly415和Glu416，大叶的残基Lys444和Arg446形成氢键。肽+1位置的酰胺与Arg446的酰胺之间的氢键在疏水性+1残基的侧链之间产生潜在的相互作用，这可能在STAC-介导的hSIRT1活化中是重要的(Dai，H.等，(2010)J Biol Chem 285，32695)。乙酰赖氨酸侧链插入由Phe414、Leu418和Val445构成的疏水腔。乙酰基夹在His363和Phe297之间，乙酰赖氨酸的ε-N与Val412的羰基氧形成氢键，维持乙酰赖氨酸侧链的取向和伸展构象。CarbaNAD还与hSIRT1形成多点接触，其大部分与hSIRT1催化核心/NAD/EX-527类似物的三元复合物中观察到的相似(Zhao，X.等，(2013)J Med Chem56，963)。注意到一些差异，例如烟酰胺环的酰胺基与C-口袋中的Ile347和Asp348形成氢键。此外，烟酰胺侧上的呋喃核糖的2’和3’羟基与乙酰赖氨酸的羰基氧原子形成氢键，这有助于使NAD的C-1′原子定向于肽N-ε-乙酰基的随后亲核进攻。抑制剂2占据了小hSIRT1的乙酰赖氨酸结合位点和烟酰胺结合C-口袋，与最近报道的SIRT3/2复合物的结构相似。与SIRT3类似，底物或活性位点定向抑制剂的结合导致结构域闭合，使小叶和大叶片连在一起(Szczepankiewicz，B.G.等，(2012)J Org chem 77，7319和Jin，L.等，J Biol Chem(2009)284，24394)。活性位点占据后更突出的构象变化是N-末端结构域的向上移动，其似乎铰合在Arg234附近，并通过一致的运动使SBD更接近活性位点，为STAC结合和底物结合位点的变构偶联提供了潜在的机理。铰链残基Arg234位于多碱性连接基(残基233-238)内，并通过其胍基和Asp475的羧酸盐基团之间形成的盐桥将N-末端SBD锚定到催化核心，并与His473和Val459的羰基形成氢键。这三种结构中SBD的比较表明，该结构域是相对刚性的，具有重叠的STAC-结合的螺旋-转角-螺旋(H2-T-H3)基序，且只有第一个螺旋略微倾斜浸入小hSIRT1/1/2复合物结构。我们评估了SBD和锚定Arg234之间的短连接基(230-233)是否对通过突变Pro231和Pro232至Gly的连接基的刚性来调节变构偶联是重要的。实际上，P231G/P232G显示出小hSIRT1明显减弱STAC活化，支持这种短连接基介导SBD移动以及由此导致的STAC结合和底物结合的偶联的重要性。
HDX-MS数据显示，与野生型hSIRT1相比，STAC与E230K突变体结合不再赋予E230K/1/Ac-p53(W5)复合物中肽结合位点周围的保护。这表明E230K突变可能危及STAC和底物结合位点之间的偶联。为了进一步探索，开发了荧光偏振(FP)分析来测量STAC与hSIRT1的结合，并研究在底物存在下的偶联效果。使用荧光素连接的STAC(3)(其以0.3μM的Kd结合全长hSIRT1)作为FP探针，并且有效被母体化合物4竞争掉。对于I223R hSIRT1，3的结合严重受损，确认小hSIRT1/1结构中所示的该残基直接参与全长酶中的STAC结合。在存在或不存在例如5所示的Ac-p53(W5)底物的情况下，在FP分析中测试了STAC，其中5在存在Ac-p53(W5)的情况下显示出增强的结合亲和力(Ki)，与用于激活的KM降低机理一致。虽然与野生型相比，E230K突变体显示出与大多数STAC相似的结合亲和力，但Ac-p53(W5)的这种结合的增强不存在或被严重减弱。HDX-MS和激活数据一起表明Glu230不直接参与STAC结合，而是介导STAC和底物结合的偶联以促进活化的关键残基。通过用化合物1和2确定E230K小hSIRT1蛋白的结构进一步得以证实。总体结构与野生型小hSIRT1/1/2三元复合物的结构相似，证实Glu230不直接参与STAC结合中，但在变构偶联过程中可能起到动态作用。此外，用E230K小hSIRT1/STAC结构观察到晶体二聚体，与野生型蛋白结构相似，进一步表明STAC对hSIRT1的生化活化不太可能需要二聚化。
为了评估用于STAC-介导的SIRT1活化的乙酰底物上的疏水部分的一般要求(Dai，H.等，(2010)J Biol Chem 285，32695)，我们基于Arg446与+1位置的接近将潜在的+1Trp相互作用残基Arg446突变为Ala。R446A hSIRT1h对于Ac-p53(W5)具有增加的KM值(见表2)。然而，它也显示减弱的活化，类似于E230K/A突变体观察到的。鉴于此观察、Arg446的阳离子性质和活性位点与STAC结合位点之间的偶联，我们制备了小hSIRT1R446E/E230K双突变体，以测试Arg446是否是E230的可能静电配偶体，使用E230K和R446E小hSIRT1作为对照。鉴于E230K或R446E导致小hSIRT1的STAC活化显著减弱，与E230K或R446E相比，R446E/E230K双突变体部分恢复STAC-介导的小hSIRT1活化。这些数据支持在激活构象中存在Glu230和Arg446之间的盐桥，并且与所提出的SBD在活化状态下运动至与催化核心相互作用是一致的。
我们在本文中讨论的所有小hSIRT1构建体重现了全长hSIRT1的三个主要特征：1)稳态酶动力学和抑制，2)跨多个化学型的STAC活化性质，3)和E230K损害STAC活化。然后，我们使用小hSIRT1构建体获得具有结合STAC的hSIRT1的完全功能形式的首次报道结构。生化和结构表征揭示了CBS和催化核心之间的hSIRT1分子内相互作用，这对hSIRT1的基础脱乙酰活性至关重要。更重要的是，小hSIRT1/STAC复合物的结构揭示了STAC结合位点的详细结构，为未来基于结构的药物设计提供重要信息。结合不同配体的hSIRT1结构的比较表明，N-末端SBD沿着构象反应坐标向上运动，尽管SBD的确切位置可能受到晶体堆积的影响。因此可以推断出STAC活化的潜在机理，即SBD的向上运动和催化核心的结构域闭合是一致的运动，以耦合STAC结合和底物结合。使用FP和使用全长hSIRT1的定点诱变的生物物理学表征与支持该STAC结合和活化模型的小hSIRT1/STAC复合物的结构观察完全一致。据我们所知，这里报道的小hSIRT1/STAC复合物的结构仅代表除葡萄糖激酶之外与酶结合的合成变构活化剂的第二个实例(Grimsby，J.等，(2005)Science 301，370)。总而言之，本文提供的结果提供了具有肽底物的小分子对hSIRT1进行直接变构活化的明确的视觉和功能证据，并为进一步阐明了STAC以及潜在地hSIRT1的内源性调节剂活化hSIRT1的机理。
实施例94.蛋白克隆、表达和纯化
将小hSIRT1构建体克隆到改进的pET21b载体(Novagen)中。蛋白在大肠杆菌BL21-Gold(DE3)细胞(Stratagene)中表达，其与具有整合的TEV蛋白酶位点的六组氨酸亲和标签的N-末端融合。将单个菌落接种在含有100μg/ml氨苄青霉素的LB培养基中，在37℃，250rpm下直至A600达到0.3。然后将培养物转移至16℃，250rpm直至A600达到0.6。加入异丙基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷(IPTG)至终浓度为0.2mM，并在16℃，250rpm下继续表达过夜。通过离心收集细胞，将沉淀物重悬于裂解缓冲液(25mM HEPES，pH 7.5、200mM NaCl、5％甘油和5mM2-巯基乙醇)中并超声处理以破坏细胞。通过在4℃以10,000xg离心40min将上清液与细胞碎片分离，并加载至用含有25mM HEPES，pH 7.5、200mM NaCl、5％甘油、5mM 2-巯基乙醇和20mM咪唑的缓冲液平衡的Ni-NTA柱(Qiagen)上。将柱用5个柱体积的含有25mM HEPES，pH7.5、200mM NaCl、5％甘油、5mM 2-巯基乙醇和50mM咪唑的缓冲液洗涤，并用含有25mMHEPES，pH 7.5、200mM NaCl、5％甘油、5mM 2-巯基乙醇和250mM咪唑的缓冲液洗脱。将洗脱的蛋白在裂解缓冲液中透析，并用TEV蛋白酶(Invitrogen)消化，以在4℃除去N-末端His标签过夜。将蛋白加载至用裂解缓冲液平衡的第二个Ni-NTA柱上。通过含有25mM HEPES，pH7.5、200mM NaCl、5％甘油、5mM 2-巯基乙醇和5mM咪唑的缓冲液洗脱未标记的蛋白。将纯化的蛋白用含有20mM Tris-HCl，pH 8.0、250mM NaCl、5％甘油和10mM DTT的透析缓冲液透析，并浓缩。通过由考马斯亮蓝R-250染色的SDS-PAGE分析评估的S200柱(GE Healthcare)将蛋白进一步纯化至95％纯度，并在透析缓冲液中浓缩至10-15mg/ml。
将人hsirt1 180-230克隆到改进的pET21b载体(Novagen)中的BamHI和XhoI之间，其在T7-lacO启动子的控制下表达。蛋白在大肠杆菌BL21-Gold(DE3)细胞(Stratagene)中表达，其为与具有整合的TEV蛋白酶位点的六组氨酸亲和标签的N-末端融合。将单个菌落接种在含有100ug/ml氨苄青霉素的100ml LB培养基中，在37℃，250rpm下过夜。然后将20mlLB培养基接种到含有15NH4Cl的1L M9培养基中，并在37℃在轨道振荡器(200rpm)上孵育，直到OD600为约0.8。然后将培养物转移至16℃，250rpm直至A600达到1.0。加入异丙基1-硫代-β-D-吡喃半乳糖苷至终浓度为0.3mM，并在16℃，200rpm下继续表达过夜。通过离心收集细胞，将沉淀重悬于裂解缓冲液(50mM Hepes、200mM NaCl，5％甘油、5mMβ-ME，pH7.5)中，并超声处理以打开细胞。通过在4℃以10,000xg离心40min将上清液从细胞碎片中分离，并加载至用含有50mM Hepes、200mM NaCl、5％甘油、5mMβ-ME，pH 7.5的缓冲液平衡的Ni-NTA柱(Qiagen)。将柱用20个柱体积的含有50mM Hepes、200mM NaCl、5％甘油、5mM B-ME和20mM咪唑，pH 7.5的缓冲液洗涤，然后用含有50mM Hepes、200mM NaCl、5％甘油、5mMβ-ME和250mM咪唑，pH7.5洗脱。将洗脱的蛋白在裂解缓冲液中透析，并用TEV蛋白酶(Invitrogen)消化，以在4℃除去N-末端His标签过夜。将蛋白加载至用裂解缓冲液平衡的第二个Ni-NTA柱上。通过含有50mM Hepes、200mM NaCl、5％甘油、5mMβ-ME和10mM咪唑，pH7.5的缓冲液洗脱未标记的蛋白质。将纯化的蛋白浓缩并通过S200柱(GE Healthcare)进一步纯化，得到95％纯度，通过由考马斯亮蓝R-250染色的SDS-PAGE分析评估，并在50mM HEPES、50mM NaCl、0.5mMTCEP，pH 6.5中浓缩至10mg/ml。
实施例95.全长SIRT1生成
全长人SIRT1(hSIRT1)蛋白与C-末端His6标签表达，并按照Hubbard.等，(2013)Science 339，1216所述进行纯化，除了Q222A和I223R SIRT1使用AKTAxpressTM(GELifesciences)纯化。在冰上，将每个细胞浆料重新悬浮于补充有完全、不含EDTA的蛋白酶抑制剂混合片剂(Roche)的1,000U Benzonase核酸酶(Sigma Aldrich)的缓冲液A(50mMTris-HCl pH 7.5、250mM NaCl、25mM咪唑和0.1mM TCEP)中。通过脉冲超声处理(在40W，50％打开和50％关闭达12分钟)使细胞破碎。通过离心除去不溶碎片。澄清的上清液直接加载至1mL HisTrap FF Crude柱(GE Lifesciences)上。用缓冲液A洗涤后，用缓冲液B(50mMTris-HCl pH 7.5、250mM NaCl、500mM咪唑和0.1mM TCEP)洗脱SIRT1。使用Hi-loadSuperdex 20016/60色谱柱(GE Lifesciences)，通过尺寸排阻层析在缓冲液C(50mM Tris-HCl pH 7.5、300mM NaCl、0.1mM TCEP)中进一步纯化蛋白。通过使用BSA作为标准品的Bradford测定测定酶浓度。通过凝胶光密度法评估最终蛋白纯度。通过LC/MS证实蛋白。除了V224A和T219A(80％)和E230A(85％)外，所有蛋白均大于90％纯度。
实施例96.SIRT1脱乙酰化反应
在25℃在反应缓冲液(50mM HEPES-NaOH，pH 7.5、150mM NaCl、1mM DTT和1％DMSO)中进行SIRT1脱乙酰化反应，使用连续PNC1/GDH偶联分析监测烟酰胺生成(Smith，B.C.等，(2009)Anal Biochem 394，101)或通过质谱法(Hubbard.等，(2013)Science 339，1216)监测O-乙酰基ADP核糖(OAcADPr)生成。使用的PNC1/GDH偶联系统组分的最终浓度为20单位/mL牛GDH(Sigma-Aldrich)、1uM酵母PNC1、3.4mMβ-酮戊二酸盐和220μM NADH或NADPH。使用6.22mM-1cm-1的消光系数和0.81cm的光程将340nm处的吸光度转换成所使用的150μL反应的产物浓度。在0.05％BSA的反应缓冲液中进行监测OAcADPr生成的分析，并通过用终浓度为1％甲酸和5mM烟酰胺的终止溶液淬灭脱乙酰化反应来取时间点。淬灭的反应用1∶1乙腈∶甲醇稀释5倍，并以5,000x g离心10分钟以沉淀蛋白，然后用与配有电喷雾电离源的ABSciex API 4000质谱仪联用的Agilent RapidFire 200高通量质谱系统(Agilent，Wakefield，MA)来分析。从Biopeptide，Inc.获得基于p53的Ac-p53(W5)(Ac-RHKKAcW-NH2)和FOXO-3a 21-聚体(Ac-SADDSPSQLSKAcWPGSPTSRSS-NH2)肽。脱乙酰化分析使用Ac-p53(W5)底物，除非另有说明。
通过在第二底物的固定饱和浓度下改变一种底物浓度来进行底物KM测定。在25℃，在含0.05％BSA的反应缓冲液中进行SIRT1活化和抑制分析，并使用OAcADPr分析进行分析。在加入底物之前，将酶和化合物预孵育20分钟。对于全长hSIRT1的活化筛选，将结构多样化的246种化合物以一式两份进行测试，最终浓度各为25μM。为了对KM-调节活化剂敏感，使用其KM值的约十分之一的底物浓度(参见表5)。测试了五种化合物的剂量依赖性，并且活化倍数数据由等式1描述
其中vx/v0是存在活化剂(X)时的反应速率(vx)与不存在活化剂(X)时的反应速率(v0)之比，RVmax是无限活化剂浓度下的相对速度，EC50是产生一半RVmax所需的活化剂的浓度，且b是vx/v0的最小值。
表5.抑制野生型和突变的全长hSIRT1
a数据来自OAcADPr分析，使用Ac-p53(W5)底物。
bTFA-p53肽序列：Ac-RHKK(TFA)L-Nle-F-NH2。
实施例97.蛋白质结晶、数据收集和结构确定
通过悬滴蒸气扩散法在18℃获得小hSIRT1/1二元复合物的晶体。该滴由1μl蛋白/化合物混合物和1μl的0.2M氯化镁、0.1M Tris pH8.5和16％w/v PEG 4000的结晶缓冲液组成。通过悬滴蒸气扩散法在18℃获得小hSIRT1/1/2的晶体。该滴由1μl蛋白/化合物混合物和1μl的0.55M氯化钠、0.1M MES pH 6.5和20％w/v PEG 4000的结晶缓冲液组成。通过悬滴蒸气扩散法在18℃获得小hSIRT1/1/p53-7聚体/carbaNAD复合物。该滴由1μl蛋白/底物混合物和1μl的5％v/v Tacsimate，pH.00.1M HEPES pH 7.0和10％w/v PEG 5000MME的结晶缓冲液组成。通过悬滴蒸气扩散法在18℃得到小hSIRT1(E230K)/1/2晶体。该滴由1μl蛋白/化合物混合物和1μl的0.2M硫酸锂、0.1M Bis-Tris pH 6.5、29％w/v PEG 3350的结晶缓冲液组成。
将晶体在含有20％甘油的母液中冷冻保护，然后在液氮中快速冷冻。在SSRFBL17U1、APS 21-ID-D或APS 21-ID-G光束处收集衍射数据，并使用Xia2程序(Winter，G(2010)J Appl Crystallogr 43，186)进行处理。基于SIRT3的同源性模型(PDB号：3GLU)，使用分子替代软件Phaser(McCoy，A.J.等，(2007)J Appl Crystallogr 40，658)来解析包含残基242-494的搜索模型。在CCP4包装((1994)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr50，760)和Coot等，(2004)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 60，2126)的Refmac5(Murshudov，A.A.等，(1997)Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 53，240)之间进行迭代结构精修和模型构建。有关衍射数据、精修和结构统计的详细信息列于表3中。
表3.数据处理和精修统计
*括号内的值为最高分辨率壳
实施例98.核磁共振(NMR)谱
在存在或不存在400μM 1的情况下，使用含有约200μM15N-标记的SIRT1(180-230)的样品的冷冻探针在Bruker AVANCE III 600MHz NMR波谱仪上在25℃进行1H，15N HSQCNMR实验。所有NMR数据用NMRPipe(Delaglio，F.等，(1995)J Biomol NMR 6，277)处理，并用NMRView(Johnson，等，(1994)J Biomol NMR 4，603)进行分析。
实施例99.尺寸排阻色谱(SEC)分析
使用Superdex 75 10/300 GL柱(GE healthcare)，在存在或不存在100μM STAC的情况下进样100μL含有10μM小hSIRT1的样品(溶解在50mM HEPES-NaOH，pH 7.5、150mM NaCl和0.5mM TCEP中)。将结合反应在室温孵育1h，然后进样到柱中。
实施例100.荧光偏振(FP)分析
在25℃，在20μL分析缓冲液(50mM HEPES-NaOH，pH 7.5、150mM NaCl和1mM DTT)中进行FP实验。在PHERAstar FS上读取384孔板，激发和发射波长分别为502nm和533nm。对于探针结合，将增加浓度的SIRT1加入到10nM探针3中。结合等温线由等式2描述。对于竞争性结合模式，在存在或不存在或15μM Ac-p53(W5)的情况下，将增加浓度的竞争剂加入到10nM3和0.3μM SIRT1野生型或E230K突变体的混合物中。竞争数据由等式3描述。IC50至Ki的转化由等式4描述，其中Kd是3与SIRT1的结合亲和力，F0是结合的探针的分数B/(B+F)，L0是探针3的浓度。
实施例101.氢-氘交换质谱(HDX-MS)
SIRT1的正向交换实验
使用全自动化系统进行胃蛋白酶消化、脱盐、HPLC分离和MS分析的H/D-交换反应，在其它地方详细描述(Hamuro，Y.等，(2003)J Biomol Techniques：JBT 14，171)。特别是对这组实验，通过混合20μL的SIRT1储备溶液(0.77mg/mL SIRT1、±3.88mM Ac-p53(W5)、±192μM配体，在1.9％DMSO中)和20μL的100mM磷酸盐的D2O溶液(pH读数为7.0)开始正向交换反应。将50％D2O混合物在0℃孵育15、50、150、500、1,500或5,000s。对于SIRT1(229-516)，通过将4μL的SIRT1储备溶液(1.36mg/mL SIRT1(229-516)、±1.67mM Trp-25聚体)和36μL的200mM磷酸盐的D2O溶液(pH读数为7.0)混合，开始正向交换反应。将90％D2O混合物在0℃搅拌15、50、150、500、1,500或5,000s。加入20μL的1.6M盐酸胍(GuHCl)、0.8％甲酸，pH 2.3，淬灭正向交换反应，然后立即分析。
实施例102.对于标准HDX样品的通用蛋白处理
按照制造商的说明，用0.05％TFA水溶液(200μL/min)将淬灭的溶液经过填充固定在Poros 20 AL培养基(Life Technologies，Carlsbad，CA)上的猪胃蛋白酶(Sigma，StLouis，MO)的胃蛋白酶柱(104μL床体积)共2分钟。将消化的片段暂时收集在反相捕集柱(4μL床体积)上并脱盐。然后将肽片段从捕集柱洗脱，并经23min用C18柱(BioBacis-18；ThermoScientific，San Jose，CA)以13％溶剂B至40％溶剂B的线性梯度分离(溶剂A，0.05％TFA的水溶液；溶剂B，95％乙腈，5％缓冲液A；流速10μL/min)。使用LTQ OrbiTrap XL质谱仪(Thermo Fisher Scientific，San Jose，CA)，以200℃的毛细管温度进行质谱分析。
实施例103.SIRT1的消化/分离优化和非氘代实验
在H/D-交换实验之前，优化消化和分离条件，以在非氘代条件下通过高分辨率的消化片段产生SIRT1的高序列覆盖率。在该步骤中，通过加入20μL各种酸性缓冲液来猝灭20μL的0.77mg/mL(9.2μM)SIRT1和20μL的H2O的混合物。对于SIRT1(229-516)，通过加入20μL的各种酸性缓冲液淬灭4μL的SIRT1储备溶液(1.36mg/mL SIRT1(229-516)、±1.67mM Trp-25聚体)和36μL的H2O的混合物。将淬灭的混合物进行上述通用蛋白处理。非氘代消化片段通过Proteome Discoverer 1.1(Thermo Fisher Scientific，San Jose，CA)中的Sequest鉴定。
实施例104.SIRT1的全氘代实验
通过将45μL的0.77mg/mL(9.2μM)SIRT1和45μL的100mM TCEP的D2O溶液(pH 2.5)的混合物在60℃搅拌3小时的孵育来制备全氘代样品。对于SIRT1(229-516)，通过将9μL的1.36mg/mL(41.7μM)SIRT1(229-516)和81μL的100mM TCEP的D2O溶液(pH 2.5)的混合物在60℃搅拌3小时的孵育来制备全氘代样品。孵育后，将样品保持在0℃，然后与正向交换溶液同样地淬灭，并进行通用蛋白处理。
实施例105.正向交换反应之后，各肽的氘代水平的确定
使用与Sierra Analytics(Modesto，CA)合作开发的内部程序测量肽同位素包封的质心。在蛋白加工步骤期间使用以下标准等式5(Zhang，Z.等，(1993)Protein Science2，522)进行反向交换的校正。
其中m(P)、m(N)和m(F)分别是部分氘代(正向交换的)肽、非氘代肽和全氘化肽的质心值。
实施例106.生物活性
基于质谱的分析用于鉴定SIRT1活性的调节剂。该基于TAMRA的分析使用具有如下所示的20个氨基酸的肽：
Ac-EE-K(生物素)-GQSTSSHSK(Ac)NleSTEG-K(5TMR)-EE-NH2(SEQ ID NO：1)
其中K(Ac)是乙酰化的赖氨酸残基，Nle是正亮氨酸。该肽在C-末端用荧光团5TMR(激发540nm/发射580nm)标记。该肽底物的序列基于具有几处修饰的p53。另外，用正亮氨酸代替天然存在于序列中的甲硫氨酸残基，因为甲硫氨酸在合成和纯化期间对氧化敏感。基于Trp的分析使用具有如下所示的氨基酸的肽：
Ac-R-H-K-K(Ac)-W-NH2(SEQ ID NO：2)
该基于TAMRA的质谱分析如下进行：在25℃，在反应缓冲液(50mM Tris-乙酸盐，pH8，137mM NaCl，2.7mM KCl，1mM MgCl2，5mM DTT，0.05％BSA)中，将0.5μM肽底物和120μMβNAD+与10nM SIRT1温育25分钟。SIRT1蛋白如下得到：将SirT1基因克隆到含有T7-启动子的载体中，然后将其在BL21(DE3)细菌细胞中转化并表达。将测试化合物以各种浓度添加到该反应混合物中，监测得到的反应。与SIRT1温育25分钟后，添加10μL的10％甲酸以终止反应。将得到的反应密封，并冷冻用于之后的质谱分析。测定由沉默调节蛋白介导的NAD-依赖性脱乙酰化反应形成的脱乙酰化的底物肽的量(或者，生成的O-乙酰基-ADP-核糖(OAADPR)的量)，可以精确测量相对SIRT1活性(各种浓度的测试化合物存在下对比缺少测试化合物的对照反应)。
Trp质谱分析进行如下：在25℃，在反应缓冲液(50mM HEPES pH 7.5、1500mMNaCl、1mM DTT、0.05％BSA)中，将0.5μM肽底物和120μMβNAD+与10nM SIRT1温育25分钟。SIRT1蛋白如下得到：将SirT1基因克隆到含有T7-启动子的载体中，然后在BL21(DE3)细菌细胞中表达，并纯化，如下面进一步详述的。将测试化合物以各种浓度添加到该反应混合物中，监测得到的反应。与SIRT1温育25分钟后，添加10μL的10％甲酸以终止反应。将得到的反应密封，并冷冻用于之后的质谱分析。然后通过测定由NAD-依赖性沉默调节蛋白脱乙酰化反应形成的O-乙酰基-ADP-核糖(OAADPR)的量(或者，生成的脱乙酰化Trp肽的量)，测量相对SIRT1活性(各种浓度的测试化合物存在下对比缺少测试化合物的对照反应)。测试试剂通过SIRT1活化脱乙酰化的程度表达为EC1.5(即，增加SIRT1活性50％需要的化合物的浓度，相对于缺少测试化合物的对照)，和最大活化百分数(即，对于测试化合物得到的相对于对照(100％)的最大活性)。
在反应开始时，通过加入1μL的500mM烟酰胺作为阴性对照(例如，允许测定最大沉默调节蛋白抑制)来进行沉默调节蛋白活性抑制的对照。沉默调节蛋白活性的活化的对照是如下进行的：使用10nM沉默调节蛋白，用1μL DMSO代替化合物，在分析的线性范围内，在给定时间点测定底物的脱乙酰化量。该时间点与试验化合物所使用的时间点相同，并且在线性范围内，端点代表速度变化。
对于上述分析，SIRT1蛋白表达并纯化如下。将SirT1基因克隆到含有T7-启动子的载体中，并转化到BL21(DE3)中。在18℃，通过用1mM IPTG(作为N-末端His-标记融合蛋白)诱导来表达该蛋白过夜，并在30,000xg下收获。在裂解缓冲液(50mM Tris-HCl，2mM Tris[2-羧乙基]膦(TCEP)，10μM ZnCl2，200mM NaCl)中，用溶菌酶将细胞裂解，并进一步用超声处理10分钟，以便完全裂解。用Ni-NTA柱(Amersham)纯化蛋白，并合并含有纯蛋白的级分，浓缩，使其经过用分级柱(Sephadex S200 26/60 global)。收集含有可溶性蛋白的峰，并通过离子交换柱(MonoQ)。梯度洗脱(200mM-500mM NaCl)得到纯蛋白。将该蛋白浓缩，并用渗析缓冲液(20mM Tris-HCl，2mM TCEP)进行渗析过夜。将蛋白等分，并在-80℃冷冻，直到进一步使用为止。
使用上述分析，鉴定活化SIRT1的式(I)的调节沉默调节蛋白的化合物，如下表1和表10(即，其它代表性化合物实施例)所示，其记载了其它代表性本发明化合物。
EC1.5值代表导致SIRT1的150％活化的试验化合物的浓度。式(I)的活化化合物的EC1.5值由A(EC1.5＜1μM)、B(EC1.5：1-25μM)、C(EC1.5＞25μM)代表。最大活化倍数百分数由A(活化倍数≥150％)或B(活化倍数＜150％)代表。“NT”表示未测试；“ND”表示测不到。表中编号的化合物从化合物编号10开始，和括号编号(#)对应的是图4的STAC编号系统和实施例90-106(即，化合物编号68也是STAC 1，因此将其表示为68(1)，还有STAC：546(3)、444(4)、314(5)、816(7)、76(8)和81(9))。
表1.式(I)化合物.
在具体实施方案中，所述化合物为以下化合物号中的任一个：1、3、4、5、7、8、9、10、11、12、13、14、15、16、17、18、19、20、23、25、27、28、29、30、31、32、33、34、36、38、39、40、41、42、45、46、47、48、49、53、54、56、57、59、61、63、66、68、75、76、80、81、83、86、87、90、93、95、99、101、102、107、110、118、119、120、121、122、128、129、130、133、135、136、138、139、140、141、142、145、150、151、153、156、159、160、161、162、163、164、165、166、168、170、173、174、175、176、177、178、179、180、181、182、184、189、191、194、197、207、212、214、216、218、220、222、223、230、233、235、239、250、254、260、261、264、268、271、273、274、275、276、277、278、279、280、281、282、283、285、286、288、289、290、292、293、295、299、314、316、322、324、325、329、330、332、333、335、341、344、347、348、350、351、352、353、354、356、359、360、361、365、366、367、369、373、375、376、377、378、379、380、383、385、387、388、389、391、392、393、394、396、401、402、403、404、405、406、407、408、409、410、411、412、415、417、419、421、422、423、425、427、428、430、431、435、452、459、461、463、470、472、473、474、475、480、481、483、485、491、492、496、497、498、499、500、502、503、504、505、506、507、509、515、517、519、523、526、527、530、538、540、541、542、556、557、559、562、563、574、575、580、581、583、588、589、590、591、592、593、594、595、596、601、604、605、606、607、611、617、623、625、626、629、630、635、636、637、638、639、640、642、643、645、646、647、648、651、652、653、654、655、656、657、658、659、660、663、665、666、667、668、670、671、672、676、683、692、693、694、698、703、706、708、709、710、714、717、718、719、720、721、722、723、724、725、727、730、731、733、736、737、739、740、741、742、743、746、747、748、749、750、751、752、753、754、756、757、758、760、763、765、766、767、770、776、777、780、788、790、792、797、798、799、801、803、804、806和808。
在一方面或实施方案中，本发明化合物为下表10中所示的本发明化合物的任一个和/或其相应的药学上可接受的盐。
表A-其它代表性化合物
在另一方面或实施方案中，本发明涉及表10(即，其它代表性化合物实施例)的化合物和至少一种药学上可接受的载体。
在另一个方面，本发明还涉及药物组合物，其包含本文所定义的本发明化合物(即，本文所定义的式(I)、(IIa)、(IIb)、(IIIa)、(IIIb)和(IV)，并且其还包括但不限于表1和表10(即，其它代表性化合物实施例)的化合物)，和本申请所定义的其它活性剂。
在另一个方面，本发明涉及药物组合物，其包含本发明化合物和至少一种药学上可接受的载体。
在另一个方面，本发明涉及本发明的药物组合物，其还包含其它活性剂。
在另一个方面，本发明涉及在受试者中治疗胰岛素抵抗、代谢综合症、糖尿病或其并发症，或增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药本发明化合物。
在另一个方面，本发明涉及在受试者中治疗胰岛素抵抗、代谢综合症、糖尿病或其并发症，或增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药本发明药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与本发明化合物接触的步骤。
在另一个方面，本发明涉及在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与本发明药物组合物接触的步骤。
在另一个方面，本发明涉及治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明涉及治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者给药本发明药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及治疗SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症的方法，其包括向需要的受试者给药本发明化合物或其药学上可接受的盐。
在另一个方面，本发明涉及治疗SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症的方法，其包括向需要的受试者给药本发明药物组合物。
在另一个方面，本发明涉及的SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症选自但不限于老化或应激、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病。
在另一个方面，本发明涉及的与老化或应激有关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自银屑病、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症。
在另一个方面，本发明涉及治疗银屑病的方法，其包括向需要的受试者给药本发明化合物。
在另一个方面，本发明涉及治疗银屑病的方法，其包括向需要的受试者给药本发明药物组合物。
实施例107
(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在20℃，向((4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)、4-(三氟甲基)哌啶(679mg，4.43mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中依次加入二环己基(2＇，4＇，6＇-三异丙基-[1，1＇-联苯]-2-基)膦(423mg，0.887mmol)、碳酸钾(919mg，6.65mmol)和乙酸钯(II)(100mg，0.443mmol)，并将反应混合物在密封管中在90℃搅拌16小时。将反应混合物倒入冷水(70mL)，并用乙酸乙酯(150mL)萃取。分离有机物，并用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物加载至硅胶柱，并用1％至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱。收集级分，得到500mg。将其通过GRACE反相HPLC再次纯化，得到(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(320mg，0.710mmol，32％)。MS(ESI)计算值C21H23F3N6O：433.2。
其它新实施例
实施例108
合成(4S)-7-氯-N-(2-(3，3，3-三氟丙基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，将在室温搅拌的(4S)-7-氯-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(250mg，1.278mmol)溶于四氢呋喃(THF)(10mL)，并依次加入三光气(190mg，0.639mmol)、TEA(0.534mL，3.83mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。向其中加入2-(3，3，3-三氟丙基)苯胺(483mg，2.56mmol)，并在密封管中在80℃搅拌16h。使反应混合物降至室温，并用15ml水淬灭，并用2x25ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥和在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，得到(4S)-7-氯-N-(2-(3，3，3-三氟丙基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(240mg，0.563mmol，44.1％产率)，其为白色固体(Rf值：0.35，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：411.16[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：6ppm 11.49(s，1H)，7.79(dd，J＝8.00，0.99Hz，1H)，7.61(d，J＝8.11Hz，1H)，7.35-7.31(m，1H)，7.24-7.29(m，1H)，7.17-7.09(m，2H)，5.44(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.21-2.90(m，6H)，2.66-2.53(m，2H)，2.20(dddd，J＝13.67，9.95，6.08，3.62Hz，1H)，1.91(dt，J＝13.70，6.96Hz，1H)。
实施例109
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向((4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)、4-(三氟甲基)哌啶(679mg，4.43mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入二环己基(2＇，4＇，6＇-三异丙基-[1，1＇-联苯]-2-基)膦(423mg，0.887mmol)、碳酸钾(919mg，6.65mmol)和乙酸钯(II)(100mg，0.443mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃搅拌16h。冷却至室温，并将混合物倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶；100-200目，用1至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(320mg，32％产率)，其为白色固体(TLC：洗脱剂；乙酸乙酯，Rf＝0.4)，LCMS(m/z)：433.22[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.15(s，1H)，8.34-8.18(m，1H)，8.09(dt，J＝8.39，0.96Hz，1H)，7.77(ddd，J＝8.55，7.13，1.86Hz，1H)，7.36(d，J＝8.77Hz，1H)7.04(ddd，J＝7.29，4.88，0.99Hz，1H)6.51(d，J＝8.55Hz，1H)5.43(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)4.39(d，J＝12.93Hz，2H)，3.17-3.04(m，1H)，3.02-2.76(m，5H)，2.72-2.52(m，1H)，2.25-2.04(m，1H)，1.96-1.76(m，3H)，1.57-1.39(m，2H)。
实施例110
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((R)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(750mg，2.375mmol)和(70∶30-R/S)-3-(三氟甲基)哌啶(728mg，4.75mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入碳酸钾(985mg，7.13mmol)和乙酸钯(II)(107mg，0.475mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃搅拌16h。将反应物冷却至室温，并倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1％至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((R/S)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨的(70∶30，R∶S)非对映异构混合物(310mg，产率29.6％)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂，100％乙酸乙酯，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：433.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.10-12.94(m，1H)，8.22(d，J＝5.15Hz，1H)，8.15-7.98(m，1H)，7.76(t，J＝7.48Hz，1H)，7.45-7.28(m，1H)，7.04(ddd，J＝7.34，4.93，0.88Hz，1H)，6.54(d，J＝8.55Hz，1H)，5.48-5.32(m，1H)，4.35-4.12(m，2H)，-3.12-2.89(m，5H)，2.88-2.78(m，1H)，2.61-2.52(m，1H)，2.25-2.04(m，1H)，2.04-1.92(m，1H)，1.90-1.74(m，2H)，1.71-1.46(m，2H)。
实施例111
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((S)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(550mg，1.742mmol)、(33∶66-R/S)-3-(三氟甲基)哌啶(534mg，3.48mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入碳酸钾(722mg，5.23mmol)、二环己基(2＇，4＇，6＇-三异丙基-[1，1＇-联苯]-2-基)膦(332mg，0.697mmol)和乙酸钯(II)(78mg，0.348mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃搅拌16h。将反应物冷却至室温，并倒入冷水(70mL)中。将粗产物用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((S/R)-3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨的(33∶67，S∶R)非对映异构混合物(250mg，33.2％产率)，其为白色固体(TLC：洗脱剂，100％乙酸乙酯，Rf0.4)，LCMS(m/z)：433.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.06-12.99(m，1H)，8.22(d，J＝5.01Hz，1H)，8.07(dt，J＝8.33，0.88Hz，1H)，7.76(ddd，J＝8.55，7.13，1.86Hz，1H)，7.47-7.29(m，1H)，7.04(ddd，J＝7.29，4.88，0.99Hz，1H)，6.54(d，J＝8.55Hz，1H)，5.51-5.36(m，1H)，4.37-4.15(m，2H)，3.12-2.80(m，6H)，2.60-2.52(m，1H)，2.25-2.04(m，1H)，2.04-1.93(m，1H)，1.90-1.74(m，2H)，1.72-1.48(m，2H)。
实施例112
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)、(R)-2-(三氟甲基)吡咯烷(617mg，4.43mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入二环己基(2＇，4＇，6＇-三异丙基-[1，1＇-联苯]-2-基)膦(423mg，0.887mmol)、碳酸钾(919mg，6.65mmol)和乙酸钯(II)(100mg，0.443mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(220mg，0.52mmol，32％产率)，其为近白色固体(TLC：100％乙酸乙酯，Rf＝0.4)，LCMS(m/z)：419.21[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.16(s，1H)，8.20(d，J＝6.33，1H)，8.06(d，J＝8.33Hz，1H)，7.77(td，J＝7.84，1.86Hz，1H)，7.40(d，J＝8.55Hz，1H)，7.05(ddd，J＝7.29，4.88，0.99Hz，1H)，6.36(d，J＝8.77Hz，1H)，5.40(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，5.28-5.06(m，1H)，3.84(dt，J＝10.14，5.12Hz，1H)，3.65-3.36(m，1H)，3.17-2.91(m，2H)，2.90-2.80(m，2H)，2.25-2.04(m，5H)，1.84(dt，J＝13.65，7.10Hz，1H)。
实施例113
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(2-(三氟甲基)吗啉代)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)、2-(三氟甲基)吗啉(688mg，4.43mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-[1，1′-联苯]-2-基)膦(423mg，0.887mmol)、碳酸钾(919mg，6.65mmol)和乙酸钯(II)(100mg，0.443mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃加热16h，并冷却至室温，然后倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1至2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(2-(三氟甲基)吗啉代)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.69mmol，46％产率)，其为近白色固体(TLC：100％乙酸乙酯，Rf＝0.4)，LCMS(m/z)：435.20[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 12.99(d，J＝4.82Hz，1H)，8.20(dt，J＝4.82，0.88Hz，1H)，8.07(dd，J＝8.44，0.77Hz，1H)，7.77(td，J＝7.84，1.86Hz，1H)，7.43(d，J＝8.55Hz，1H)，7.05(ddd，J＝7.29，4.88，0.77Hz，1H)，6.62(d，J＝8.55Hz，1H)，5.44(ddd，J＝9.98，6.25，3.29Hz，1H)，4.34(dd，J＝7.13，3.40Hz，1H)，4.25(d，J＝12.28Hz，1H)，4.14(dd，J＝11.62，1.75Hz，1H)，4.10-3.94(m，1H)，3.87-3.67(m，1H)，3.15-2.91(m，6H)，2.30-2.14(m，1H)，1.72-1.65(m，1H)。
实施例114
合成(4S)-N-(4-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，经5min向(4S)-N-(4-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(450mg，0.810mmol)在二氯甲烷(12mL)和水(1.12mL)中的搅拌的溶液中滴加4.0M氯化氢的二噁烷溶液(1.68mL，0.810mmol)。然后将反应混合物在30℃搅拌3h，然后蒸发溶剂。将反应混合物用碳酸氢钠溶液中和，并用乙酸乙酯(3X50mL)萃取，然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.2；UV活性)。粗品化合物用正戊烷洗涤，得到纯的(4S)-N-(4-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(340mg，0.635mmol，78.0％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：516.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.42(s，1H)8.54-8.44(m，2H)8.10(d，J＝5.92Hz，1H)7.85-7.81(m，1H)7.80-7.68(m，4H)6.71(dd，J＝5.70，2.41Hz，1H)5.51(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)5.01(d，J＝5.26Hz，1H)4.70(t，J＝5.70Hz，1H)4.11(dd，J＝9.76，3.84Hz，1H)3.96(dd，J＝9.87，6.36Hz，1H)3.87-3.79(m，1H)3.51-3.42(m，2H)3.26-3.17(m，1H)3.15-3.06(m，2H)2.96(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)2.25(dddd，J＝13.65，9.92，6.14，3.62Hz，1H)1.95(dt，J＝13.81，6.91Hz，1H)。
实施例115
合成(4S)-N-(4-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
经1min向在氮气下在0℃搅拌的(4S)-N-(4-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，0.900mmol)在二氯甲烷(12.5mL)和水(1.25ml)中的溶液中一次性加入4.0M氯化氢的二噁烷溶液(2mL，0.900mmol)。将反应混合物在30℃搅拌3h，蒸发溶剂。将反应混合物用碳酸氢钠溶液中和，并用乙酸乙酯(3X50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥并蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.2；UV活性)。粗品化合物用正戊烷洗涤，得到纯的(4S)-N-(4-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(340mg，0.612mmol68.0％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：516.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.42(s，1H)8.58-8.44(m，2H)8.10(d，J＝5.70Hz，1H)7.85-7-68(m，5H)6.71(dd，J＝5.81，2.30Hz，1H)5.52(dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)5.01(d，J＝5.26Hz，1H)4.70(t，J＝5.59Hz，1H)4.11(dd，J＝9.76，3.84Hz，1H)3.96(dd，J＝9.76，6.25Hz，1H)3.87-3.79(m，1H)3.50-3.43(m，2H)3.27-3.17(m，1H)3.16-3.05(m，2H)2.96(dd，J＝12.06，3.07Hz，1H)2.30-2.20(m，1H)1.95(dt，J＝13.92，7.07Hz，1H)。
实施例116
合成(4S)-N-(2-(((R)-四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，1.965mmol)在THF(20mL)中的搅拌的溶液中加入三乙胺(0.822mL，5.90mmol)和三光气(292mg，0.983mmol)，并在相同温度搅拌1h。然后在30℃加入(R)-2-((四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-胺(1068mg，5.90mmol)，并将反应物在70℃加热16h。使反应物降至室温，并将溶剂在减压下蒸除，将获得的残余物用水(15ml)稀释，并用DCM(2x 20ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，并用无水硫酸钠干燥。将有机溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过制备型HPLC(甲酸水溶液和乙腈30％)纯化，得到(4S)-N-(2-(((R)-四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(310mg，0.605mmol，30.6％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf＝0.25，10％MeOH的EtOAc溶液)，LCMS(m/z)：513.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.61(s，1H)，8.50(d，J＝7.49Hz，1H)，8.45(d，J＝5.62Hz，1H)，8.25(s，1H)，7.87(d，J＝7.67Hz，1H)，7.81-7.68(m，4H)，5.47(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，5.32(ddt，J＝6.49，4.36，2.14，2.14Hz，1H)，3.91-3.76(m，1H)，3.76-3.59(m，3H)，3.28-3.05(m，3H)，2.96(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.38-2.15(m，1H)，2.14-1.88(m，3H)。
实施例117
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)、(S)-2-(三氟甲基)吡咯烷(617mg，4.43mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的脱气的溶液中加入二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-[1，1′-联苯]-2-基)膦(423mg，0.887mmol)和乙酸钯(II)(100mg，0.443mmol)。将反应混合物在密封管中在90℃加热16h。将反应混合物倒入冷水(70mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用1至2％of MeOH的DCM溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(250mg，0.598mmol，35％产率)，其为白色固体(TLC：100％乙酸乙酯，Rf＝0.4)，LCMS(m/z)：419.18[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.13(s，1H)，8.30-8.18(d，J＝7.2，1H)，8.18-7.96(d，J＝8.40，1H)，7.77(ddd，J＝8.55，7.13，1.86Hz，1H)，7.41(d，J＝8.55Hz，1H)，7.04(ddd，J＝7.23，4.82，1.10Hz，1H)，6.38(d，J＝8.55Hz，1H)，5.48(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，5.12-5.01(m，1H)，3.84(m，1H)，3.49(q，J＝9.65，J＝5.70Hz，1H)，3.04-2.90(m，4H)，2.33-2.12(m，5H)，1.72-1.80(m，1H)。
实施例118
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，将NaH(0.254g，10.57mmol)加入至在室温搅拌的(9S)-2-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.550g，1.761mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后在室温加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.635g，2.64mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用75-80％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-((S)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.275g，0.631mmol，35.8％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：433.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.60(s，1H)，8.20-8.29(m，1H)，8.09(dt，J＝8.33，0.88Hz，1H)，7.72-7.81(m，1H)，7.37(d，J＝8.55Hz，1H)，7.05(ddd，J＝7.29，4.88，0.99Hz，1H)，6.45(d，J＝8.55Hz，1H)，5.11-5.19(m，1H)，4.74(br s，1H)，3.91(dt，J＝10.19，5.21Hz，1H)，3.50-3.62(m，1H)，3.27(d，J＝1.75Hz，1H)，3.11-3.22(m，1H)，3.01-3.08(m，1H)，2.81(br d，J＝13.37Hz，1H)，2.07-2.28(m，4H)，1.94-2.02(m，1H)，1.81-1.92(m，1H)，1.21-1.40(m，2H)。
实施例119
合成(9S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在30℃，向(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.561mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三乙胺(0.653mL，4.68mmol)和三光气(232mg，0.780mmol)，并室温搅拌1h。然后在30℃加入5-氟吡啶-3-胺(525mg，4.68mmol)，并将反应物在70℃加热16h。将THF在减压下蒸除，并将获得的残余物用水稀释，并用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗品化合物，将其通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(9S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(200mg，0.4366mmol，35％产率)，其为米色固体(TLC：Rf＝0.3，10％MeOH的EtOAc溶液)，LCMS(m/z)：459.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.19(s，1H)，8.93(d，J＝5.04Hz，1H)，8.47(s，1H)，8.37(s，1H)，8.33-8.21(m，2H)，8.03(d，J＝11.18Hz，1H)，7.88(d，J＝8.11Hz，1H)，7.78(d，J＝8.11Hz，1H)，4.83(s，1H)，3.43(d，J＝12.06Hz，1H)，3.25(s，2H)，2.90(d，J＝13.81Hz，1H)，2.11-1.84(m，2H)，1.33(s，2H)。
实施例120
合成(9S)-N-(嘧啶-5-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在0℃，向(9S)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.873mmol)、三乙胺(0.783mL，5.62mmol)在THF(12mL)中的溶液中加入三光气(0.278g，0.937mmol)，并在室温搅拌30min。然后加入嘧啶-5-胺，并将反应混合物在65℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去，得到粗品，用二氯甲烷稀释，用水和饱和食盐水溶液洗涤，并用无水Na2SO4干燥，在减压下蒸发有机层，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用2％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)纯化，得到(9S)-N-(嘧啶-5-基)-2-(5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(459mg，1.016mmol，54.2％产率)，其为白色固体(TLC：80％EtOAc的己烷溶液，Rf＝0.5)，LCMS(m/z)：442.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.19(s，1H)，9.48(d，J＝2.19Hz，1H)，9.08(s，1H)，8.96(s，1H)，8.88(s，1H)，8.71(s，1H)，7.85(d，J＝8.11Hz，1H)，7.77(d，J＝7.89Hz，1H)，4.84(s，1H)，3.43(dd，J＝13.59，1.97Hz，1H)，3.33(s，2H)，2.90(d，J＝13.81Hz，2H)，1.95(d，J＝10.30Hz，2H)，1.33(m，2H)。
实施例121
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在室温，将NaH(0.297g，12.39mmol)加入至(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.550g，2.065mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的搅拌的溶液中。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.744g，3.10mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：70％EtOAc的己烷溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用50-60％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-2-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.292g，0.751mmol，36.4％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：387[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.99(s，1H)，8.59(d，J＝5.48Hz，1H)，8.41-8.45(m，1H)，8.27(s，1H)，8.18(d，J＝8.33Hz，1H)，7.97(br d，J＝3.73Hz，1H)，7.82-7.86(m，2H)，7.71(d，J＝7.89Hz，1H)，7.11-7.16(m，1H)，4.86(br s，1H)，3.40(br d，J＝13.37Hz，1H)，3.29(s，2H)，2.91(br d，J＝13.15Hz，1H)，2.64(s，3H)，1.93-2.05(m，2H)，1.32(br s，2H)。
实施例122
合成(4S)-N-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己二烯-6-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌1h。然后依次加入2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己二烯-6-胺(899mg，5.94mmol)和三乙胺(1.381mL，9.91mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用1％甲醇的二氯甲烷溶液梯度作为洗脱剂)，得到(4S)-N-(2，3-二氢苯并[b][1，4]二氧杂环己二烯-6-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(315mg，0.734mmol，51％产率)，其为棕色固体(TLC：5％甲醇的二氯甲烷溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：430.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 12.69(s，1H)，8.59(d，J＝5.26Hz，1H)，7.75-7.59(m，4H)，7.16(s，1H)，6.96-6.75(dd，J＝5.81，2.41，2H)，5.46(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，4.27-4.10(m，4H)，3.24-3.02(m，2H)，3.00-2.76(m，2H)，2.50(s，3H)，2.25-2.09(m，1H)，1.91-1.71(m，1H)。
实施例123
合成(4S)-N-(6-乙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(25ml)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌1h。然后依次加入6-乙基吡嗪-2-胺(317mg，2.58mmol)、三乙胺(1.381mL，9.91mmol)，并将反应混合物在密封管中在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：1％甲醇的二氯甲烷溶液)纯化，得到(4S)-N-(6-乙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.640mmol，32.3％产率)，其为淡黄色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：402.23[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.47(s，1H)，9.23(s，1H)，8.59(d，J＝5.26Hz，1H)，8.29(s，1H)，8.02(d，J＝4.82Hz，2H)，7.88(s，1H)，7.64-7.84(d，J＝7.68Hz，1H)，5.52(dd，J＝6.03，2.96Hz，1H)，3.08-3.33(m，2H)，2.89-3.08(m，2H)，2.78(q，J＝7.60Hz，2H)，2.57(s，3H)，2.39-2.13(m，1H)，2.12-1.88(m，1H)1.21-1.30(m，3H)。
实施例124
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在0℃和在氮气下，经5min向(9S)-2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(500mg，1.601mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中滴加氢化钠(419mg，9.61mmol)，并在室温搅拌30min。然后加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(1154mg，4.80mmol)，并将反应混合物在80℃加热16h。将反应混合物用冰水淬灭，经硅藻土过滤，将滤液用EtOAc(2x50ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-((R)-2-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(280mg，0.646mmol，40.3％产率)，其为米色固体(TLC：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：433.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.66(s，1H)，8.26(dt，J＝4.93，0.93Hz，1H)，8.09(d，J＝8.33Hz，1H)，7.59-7.84(m，1H)，7.38(d，J＝8.77Hz，1H)，7.05(ddd，J＝7.23，4.82，0.66Hz，1H)，6.43(d，J＝8.55Hz，1H)，5.25(br t，J＝7.67Hz，1H)，4.70(br s，1H)，3.91(dt，J＝10.03，5.18Hz，1H)，3.39-3.57(m，1H)，3.23-3.35(m，1H)，2.96-3.23(m，3H)，2.81(br d，J＝13.59Hz，1H)，2.14-2.34(m，2H)，2.10(br s，1H)，2.00(d，J＝13.81Hz，1H)，1.73-1.92(m，1H)，1.16-1.40(m，2H)。
实施例125
合成(4S)-N-(6-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，经5min向(4S)-N-(6-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.078mmol)在CH2Cl2(16mL)和水(1.6mL)中的溶液中滴加4N HCl的二噁烷溶液(2.24mL，8.96mmol)。然后将反应物在室温搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物用水稀释，并用碳酸氢钠(15ml)中和，并将水层用EtOAc(2x15ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，并用无水Na2SO4干燥，将有机溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗产物用乙醚研磨，得到(4S)-N-(6-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(346mg，64％产率，0.67mmol)，其为近白色固体(TLC：5％MeOH的CH2Cl2溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：517.18[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.14(s，1H)，8.95(s，1H)，8.36(d，J＝7.7Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.99(s，1H)，7.89-7.79(m，2H)，7.74(q，J＝8.0Hz，2H)，5.54(s，1H)，4.95(d，J＝5.1Hz，1H)，4.64(t，J＝5.5Hz，1H)，4.09(qd，J＝10.7，5.1Hz，2H)，3.77(d，J＝5.2Hz，1H)，3.45-3.33(m，2H)，3.23-3.06(m，3H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.25(ddt，J＝14.0，9.8，4.8Hz，1H)，1.97(dt，J＝14.1，7.3Hz，1H)。
实施例126
合成(9S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在室温向搅拌的(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入三乙胺(1.884mL，13.52mmol)和三光气(0.669g，2.253mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。接下来，在室温加入5-氟吡啶-3-胺(0.758g，6.76mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温。将反应混合物在减压下浓缩，然后在水(20mL)和二氯甲烷(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用100％EtOAc洗脱，得到纯的(9S)-N-(5-氟吡啶-3-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.314g，0.770mmol，34.2％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：405.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.71(s，1H)，8.74-8.55(m，1H)，8.44(d，J＝1.7Hz，1H)，8.29(d，J＝2.6Hz，1H)，8.18-7.99(m，1H)，7.81(d，J＝1.7Hz，1H)，7.73(d，J＝2.8Hz，3H)，4.82(s，1H)，3.39(d，J＝1.9Hz，1H)，3.30(s，2H)，2.92(s，1H)，2.57(s，3H)，2.01(s，2H)，1.32(s，2H)。
实施例127
合成(9S)-N-(哒嗪-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在25℃，在氮气下，向(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.4g，1.249mmol)、哒嗪-3-基氨基甲酸苯酯(0.806g，3.75mmol)在THF(8mL)中的搅拌的溶液中加入DMAP(0.458g，3.75mmol)。将反应混合物在80℃加热16h。冷却至室温，并将溶剂在真空中除去，将得到的粗品用CH2Cl2稀释，并用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥。将有机层在真空中浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：4％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，得到(9S)-N-(哒嗪-3-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(320mg，0.711mmol，56.9％产率)，其为白色固体(TLC：80％EtOAc的己烷溶液Rf：0.6)，LCMS(m/z)：442.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.27(s，1H)，8.98(dd，J＝4.7，1.5Hz，1H)，8.90(d，J＝5.1Hz，1H)，8.59-8.48(m，2H)，8.38(dd，J＝9.0，1.5Hz，1H)，8.01(d，J＝8.1Hz，1H)，7.79(d，J＝8.1Hz，1H)，7.71(dd，J＝9.0，4.7Hz，1H)，5.25-4.49(m，1H)，3.42(dd，J＝13.7，1.9Hz，1H)，3.30(s，2H)，2.94(dt，J＝13.8，2.5Hz，1H)，2.02(m，2H)，1.34(q，J＝5.2，4.4Hz，2H)。
实施例128
(4S)-7-((R)-2-甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.210mmol)、(R)-2-甲基吗啉盐酸盐(335mg，2.431mmol)、Cs2CO3(1440mg，4.42mmol)和2-二环己基膦基-2′，4’，6’-三异丙基联苯(421mg，0.884mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(99mg，0.442mmol)。然后将反应混合物在100℃加热16h。使反应混合物降至室温，用2x15ml水淬灭，并用2x50ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱纯化，得到(4S)-7-((R)-2-甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(275mg，0.696mmol，31.5％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf值：0.3，5％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：383.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.40(s，1H)，9.38(d，J＝1.3Hz，1H)，8.46-8.17(m，2H)，7.40(d，J＝8.6Hz，1H)，6.53(d，J＝8.6Hz，1H)，5.44(dd，J＝6.1，3.1Hz，1H)，4.20-4.04(m，1H)，4.00-3.93(m，1H)，3.91-3.80(m，1H)，3.70-3.53(m，2H)，3.17-3.05(m，1H)，3.03-2.92(m，2H)，2.87(ddd，J＝19.7，11.9，3.4Hz，2H)，2.58(dd，J＝12.6，10.4Hz，1H)，2.21-2.12(m，1H)，1.86(dd，J＝14.3，7.2Hz，1H)，1.22(d，J＝6.2Hz，3H)。
实施例129
合成(4S)-7-((S)-2-甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.210mmol)、(S)-2-甲基吗啉盐酸盐(335mg，2.431mmol)、Cs2CO3(1440mg，4.42mmol)和2-二环己基膦基-2′，4’，6’-三异丙基联苯(421mg，0.884mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(99mg，0.442mmol)。然后将反应混合物在100℃加热16h。使反应混合物降至室温，用2x15ml水淬灭，并用2x50ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱纯化，得到(4S)-7-((S)-2-甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(285mg，0.725mmol，32.8％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf值：0.3，5％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：383.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.40(s，1H)，9.38(d，J＝1.4Hz，1H)，8.40-8.14(m，2H)，7.40(d，J＝8.6Hz，1H)，6.53(d，J＝8.6Hz，1H)，5.44(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，4.12(s，1H)，3.96(ddd，J＝11.5，3.6，1.4Hz，1H)，3.86(d，J＝12.8Hz，1H)，3.62(dd，J＝11.8，2.8Hz，2H)，3.09(dd，J＝11.4，8.4Hz，1H)，2.96(s，2H)，2.93-2.78(m，2H)，2.58(dd，J＝12.6，10.4Hz，1H)，2.17(s，1H)，1.85(dt，J＝14.3，7.3Hz，1H)，1.23(d，J＝6.2Hz，3H)。
实施例130
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在室温，向(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.250g，0.780mmol)在THF(5mL)中的溶液中一次性加入氢化钠(0.156g，3.90mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min。然后加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.562g，2.341mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16h。冷却至室温，并用冰冷的水萃取，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，得到(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(302mg，0.681mmol，87％产率)，其为白色固体(TLC：70％EtOAc的己烷溶液，Rf：0.5)，LCMS(m/z)：441.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.85(s，1H)，8.94(d，J＝5.2Hz，1H)，8.64(dd，J＝1.7，0.9Hz，1H)，8.55-8.50(m，1H)，8.34(ddd，J＝4.8，2.0，0.9Hz，1H)，8.15(dt，J＝8.3，1.0Hz，1H)，7.98(d，J＝8.1Hz，1H)，7.86-7.79(m，1H)，7.77(d，J＝8.0Hz，1H)，7.12(ddd，J＝7.3，4.9，1.0Hz，1H)，4.87(t，J＝2.6Hz，1H)，3.41(dd，J＝13.6，1.9Hz，1H)，3.30(s，2H)，2.92(d，J＝14.0Hz，1H)，2.09-1.86(m，2H)，1.34(d，J＝8.5Hz，2H)。
实施例131
合成(4S)-N-(3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]二氧杂环庚二烯-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌1h。然后依次加入3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]二氧杂环庚二烯-7-胺(426mg，2.58mmol)和三乙胺(1.381mL，9.91mmol)，并将反应混合物在密封管中在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶；100-200目，使用1％MeOH的DCM溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-N-(3，4-二氢-2H-苯并[b][1，4]二氧杂环庚二烯-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(394mg，0.889mmol，68％产率)，其为淡黄色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：444.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 12.76(s，1H)，8.59(d，J＝5.04Hz，1H)，7.79-7.58(m，3H)，7.24-7.06(m，2H)，6.96(d，J＝8.77Hz，1H)，5.46(dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)，4.10(dt，J＝19.51，5.37Hz，4H)，3.15-3.02(m，1H)，3.02-2.77(m，3H)，2.50(s，3H)，2.46-2.18(m，1H)，2.17-2.01(m，2H)，2.01-1.83-(m，2H)。
实施例132
合成(4S)-N-(2-((R)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-N-(2-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(450mg，0.809mmol)在二氯甲烷(12mL)、水(1.2mL)中的溶液中加入4.0M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(1.68mL，0.809mmol)。将反应混合物在30℃搅拌3h和浓缩溶剂。将反应混合物在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。将有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品用正戊烷洗涤纯化，并悬浮于水(5mL)中，搅拌15min，并过滤，得到纯的(4S)-N-(2-((R)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.480mmol，59.4％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：517.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.58(s，1H)，8.60(d，J＝7.5Hz，1H)，8.46(d，J＝5.6Hz，1H)，8.27(s，1H)，7.91-7.78(m，3H)，7.75-7.60(m，2H)，5.48(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，4.91(d，J＝4.8Hz，1H)，4.62(t，J＝5.5Hz，1H)，4.22(dd，J＝10.8，4.4Hz，1H)，4.13(dd，J＝10.7，5.9Hz，1H)，3.80(q，J＝5.4Hz，1H)，3.43(t，J＝5.7Hz，2H)，3.21(s，1H)，3.16-3.05(m，2H)，2.96(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.29-2.10(m，1H)，2.04-1.84(m，1H)。
实施例133
合成(4S)-N-(6-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
0℃，经1min向(4S)-N-(6-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.539mmol)在二氯甲烷(8.0mL)、水(0.8mL)中的溶液中加入(滴加)4.0M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(1.12mL，0.539mmol)。将反应混合物在30℃搅拌3h和浓缩溶剂。将反应混合物在水(10mL)和乙酸乙酯(25mL)之间分配。将有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥和蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物用正戊烷洗涤，并悬浮于水(5mL)中，搅拌15min，并过滤，得到纯的(4S)-N-(6-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(280mg，0.533mmol，99％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：517.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.15(s，1H)，8.95(s，1H)，8.36(d，J＝7.7Hz，1H)，8.22(s，1H)，7.99(s，1H)，7.86(t，J＝7.8Hz，1H)，7.80(d，J＝7.8Hz，1H)，7.74(q，J＝8.0Hz，2H)，5.52(dd，J＝5.8，3.0Hz，1H)，4.95(d，J＝5.1Hz，1H)，4.64(t，J＝5.5Hz，1H)，4.14(dd，J＝10.7，4.0Hz，1H)，4.03(dd，J＝10.7，6.1Hz，1H)，3.77(q，J＝5.2Hz，1H)，3.36(hept，J＝5.8Hz，2H)，3.22(s，1H)，3.12(d，J＝11.3Hz，2H)，2.97(dd，J＝11.9，3.3Hz，1H)，2.26(t，J＝7.0Hz，1H)，2.03-1.90(m，1H)。
实施例134
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
将NaH(0.277g，11.53mmol)加入至(9S)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，1.921mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中，并搅拌30min。然后在室温加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.692g，2.88mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24h。将反应混合物冷却至室温，并在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：70％EtOAc的己烷溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用50-60％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到(9∶1)立体异构体混合物，将其进一步通过SFC纯化，得到纯的(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.422g，0.973mmol，50.6％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：433.3[M+H]+。
分析型SFC条件：峰I柱/尺寸：Chiralcel OX-H(250X4.6)mm，5u
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.81(s，1H)，8.23-8.18(m，1H)，8.11(dt，J＝8.3，1.0Hz，1H)，7.76(ddd，J＝8.5，7.4，1.9Hz，1H)，7.32(d，J＝8.5Hz，1H)，7.04(ddd，J＝7.3，4.9，1.0Hz，1H)，6.24(d，J＝8.5Hz，1H)，4.71(s，1H)，3.96(d，J＝8.5Hz，1H)，3.78(d，J＝7.0Hz，1H)，3.74(s，1H)，3.66(d，J＝4.1Hz，2H)，3.59-3.38(m，1H)，3.26(d，J＝1.9Hz，1H)，3.12(dd，J＝12.7，3.5Hz，1H)，3.05(s，1H)，2.80(d，J＝13.4Hz，1H)，2.41-2.29(m，1H)，2.15(dd，J＝12.7，8.1Hz，1H)，1.96(s，1H)，1.83(s，2H)，1.31(s，2H)。
实施例135
合成(9S)-N-(嘧啶-4-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在25℃，将(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.561mmol)、三乙胺(0.653mL，4.68mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中一次性加入碳酸双(三氯甲基)酯(0.232g，0.780mmol)。将反应混合物在25℃搅拌30min。然后一次性加入嘧啶-4-胺(0.445g，4.68mmol)，并将反应物在65℃搅拌16h。冷却至室温，并将溶剂在真空下除去，将粗品用DCM稀释，用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，并在真空下浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过制备型HPLC纯化，得到(9S)-N-(嘧啶-4-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(199mg，0.446mmol，28.6％产率)，其为白色固体(TLC：70％EtOAc的己烷溶液，Rf：0.6)，LCMS(m/z)：442.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.18(s，1H)，8.97(d，J＝5.1Hz，1H)，8.85(d，J＝1.2Hz，1H)，8.69(d，J＝5.8Hz，1H)，8.60(dd，J＝1.9，0.8Hz，1H)，8.50(dd，J＝5.1，1.7Hz，1H)，8.12(dd，J＝5.8，1.3Hz，1H)，8.02(d，J＝8.1Hz，1H)，7.80(d，J＝8.1Hz，1H)，4.93-4.73(m，1H)，3.42(dd，J＝13.7，1.9Hz，1H)，3.32(d，J＝8.2Hz，2H)，2.93(dt，J＝13.9，2.5Hz，1H)，2.12-1.83(m，2H)，1.33(d，J＝7.8Hz，2H)。
实施例136
合成(4S)-N-(6-乙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将DMAP(726mg，5.94mmol)和(6-乙氧基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯(1541mg，5.94mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF中的搅拌的溶液中。将混合物在密封管中加热至80℃保持20h。冷却至室温后，将溶剂蒸发，并将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，5％MeOH的DCM溶液为洗脱剂)纯化。将回收的材料溶于乙醇，并将固体通过过滤分离，得到(4S)-N-(6-乙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(416mg，0.978mmol，49.3％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：418.28[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.18(s，1H)，8.95(s，1H)，8.53(dd，J＝5.0，1.0Hz，1H)，7.98(d，J＝0.5Hz，1H)，7.86-7.79(m，2H)，7.73(s，2H)，5.51(dd，J＝5.9，3.1Hz，1H)，4.22(qd，J＝7.1，2.3Hz，2H)，3.25-3.17(m，1H)，3.11(dt，J＝11.7，2.4Hz，2H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.58(s，3H)，2.25(dddd，J＝13.7，9.9，6.2，3.8Hz，1H)，2.04-1.90(m，1H)，1.27(t，J＝7.0Hz，3H)。
实施例137
合成(9S)-N-(嘧啶-5-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在25℃，在氮气气氛下，向(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.561mmol)、三乙胺(0.653mL，4.68mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入碳酸双(三氯甲基)酯(0.232g，0.780mmol)，并在室温搅拌30min。然后加入嘧啶-5-胺(0.445g，4.68mmol)，并将反应混合物在65℃加热16h。冷却至室温后，将溶剂在旋转蒸发仪上除去，将粗品用CH2Cl2(20ml)稀释，并用水(5ml)、饱和食盐水溶液(5ml)洗涤，然后用硫酸钠干燥。将有机溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过制备型HPLC(甲酸，ACN 25％)纯化，得到(9S)-N-(嘧啶-5-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(250mg，0.56mmol，45％产率)，其为近白色固体(TLC：80％EtOAc的己烷溶液，Rf：0.5)，LCMS(m/z)：442.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.07(s，1H)，9.08-8.72(m，4H)，8.38(dd，J＝1.7，0.9Hz，1H)，8.28(dd，J＝5.2，1.6Hz，1H)，7.90(d，J＝8.0Hz，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，4.85(t，J＝2.7Hz，1H)，3.43(dd，J＝13.7，1.9Hz，1H)，3.33(d，J＝10.1Hz，2H)，2.91(d，J＝13.7Hz，1H)，2.15-1.79(m，2H)，1.33(s，2H)。
实施例138
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.189mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(176mg，0.594mmol)，并搅拌30min。30分钟后，加入三乙胺(0.829mL，5.94mmol)和1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-胺(191mg，1.427mmol)。将反应混合物在密封管中在65-70℃搅拌16h。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x15ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗品混合物通过柱色谱纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-吡唑并[3，4-c]吡啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(330mg，0.764mmol，64.3％产率)，其为淡黄色固体(Rf值：0.25，纯乙酸乙酯)，LCMS(m/z)：413.24[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.47(s，2H)，8.89(t，J＝1.1Hz，1H)，8.71-8.57(m，1H)，8.44(t，J＝1.0Hz，1H)，8.28-8.10(m，2H)，8.05-7.93(m，1H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，5.56(dd，J＝5.9，3.1Hz，1H)，3.22(tt，J＝8.1，3.0Hz，1H)，3.15-3.04(m，2H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.67(s，3H)，2.36-2.16(m，1H)，1.96(dd，J＝14.0，7.1Hz，1H)。
实施例139
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(喹喔啉-5-基)-3，4-.二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌1h。然后在室温依次加入喹喔啉-5-胺(374mg，2.58mmol)和三乙胺(1.381mL，9.91mmol)，并将反应混合物在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用1％MeOH的DCM溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(喹喔啉-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.709mmol，55％产率)，其为淡黄色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：424.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.50(s，1H)，8.91(s，1H)，8.68(dd，J＝7.89，1.10Hz，1H)，8.48(d，J＝5.26Hz，1H)，7.92-7.80(m，2H)，7.80-7.62(m，4H)，5.58(dd，J＝5.81，2.96Hz，1H)，3.20-3.08(m，4H)，3.08-2.86(m，1H)，2.26(s，4H)，2.00-1.95(m，1H)。
实施例140
合成(4S)-N-(2-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，经1min向(4S)-N-(2-(((S)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(450mg，0.810mmol)在二氯甲烷(12mL)、水(1.2mL)中的溶液中滴加4.0M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(1.68mL，0.810mmol)。将反应混合物在30℃搅拌3h和浓缩溶剂。将反应混合物在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。将有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥和蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品化合物用正戊烷洗涤，并将化合物悬浮于水(5mL)，搅拌15min，并过滤，得到纯的(4S)-N-(2-((R)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(310mg，0.600mmol，74.0％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：516.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.02(s，1H)，8.27-8.15(m，2H)，7.94(d，J＝5.7Hz，1H)，7.89(d，J＝7.8Hz，1H)，7.82(t，J＝7.7Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，7.11(d，J＝1.8Hz，1H)，6.80(dd，J＝5.8，1.9Hz，1H)，5.47(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，4.85(d，J＝5.1Hz，1H)，4.59(t，J＝5.7Hz，1H)，4.23(dd，J＝10.9，4.6Hz，1H)，4.13(dd，J＝10.9，6.2Hz，1H)，3.81-3.65(m，1H)，3.43(t，J＝5.6，1.3Hz，2H)，3.25-3.03(m，3H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.25(m，J＝13.8，9.7，4.7Hz，1H)，1.95(m，J＝14.3，7.6Hz，1H)。
实施例141
(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-吡唑并[4，3-b]吡啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并搅拌30min，向其中加入三乙胺(1.657mL，11.89mmol)和1H-吡唑并[4，3-b]吡啶-5-胺(319mg，2.378mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16h。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x15ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱(100-200目)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-吡唑并[4，3-b]吡啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(265mg，0.622mmol，26.2％产率)，其为淡黄色固体(TLC：Rf值：0.25，纯乙酸乙酯)，LCMS(m/z)：413.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.55(s，1H)，13.27(s，1H)，8.66(dd，J＝5.4，0.8Hz，1H)，8.32(d，J＝9.2Hz，1H)，8.16-7.94(m，4H)，7.94-7.51(m，2H)，5.55(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.21(d，J＝8.7Hz，1H)，3.18-3.05(m，2H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.69(s，3H)，2.35-2.17(m，1H)，1.96(dt，J＝14.2，7.6Hz，1H)。
实施例142
合成(4S)-N-(2-((S)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，经1min向(4S)-N-(2-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(350mg，0.629mmol)在二氯甲烷(8mL)、水(0.8mL)中的溶液中滴加4.0M氯化氢的1，4-二噁烷溶液(1.12mL，0.629mmol)。将反应混合物在30℃搅拌3h和浓缩溶剂。将反应混合物在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。将有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用无水Na2SO4干燥和蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品通过手性分离纯化，得到(4S)-N-(2-((S)-2，3-二羟基丙氧基)嘧啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(210mg，0.405mmol，64.3％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：517.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.59(s，1H)，8.60(d，J＝7.5Hz，1H)，8.46(d，J＝5.7Hz，1H)，8.27(s，1H)，7.90-7.78(m，3H)，7.76-7.69(m，2H)，5.48(dd，J＝5.8，3.0Hz，1H)，4.91(d，J＝5.0Hz，1H)，4.63(t，J＝5.5Hz，1H)，4.46-4.01(m，2H)，3.80(h，J＝5.5Hz，1H)，3.44(t，J＝5.5Hz，2H)，3.21(s，1H)，3.12(dd，J＝10.1，5.5Hz，2H)，2.96(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.24(d，J＝8.7Hz，1H)，2.03-1.90(m，1H)。
实施例143
合成(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(2，6-二甲基吡啶-4-基)硼酸(343mg，2.273mmol)在1-丁醇(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(355mg，0.916mmol，48.3％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：387.44[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz，)：δ13.77(s，1H)，9.43(d，J＝1.5Hz，1H)，8.53-8.28(m，2H)，7.91-7.59(m，4H)，5.51(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.25-2.81(m，4H)，2.56-2.46(m，6H)，2.26(dddd，J＝13.7，9.9，6.1，3.7Hz，1H)，1.97(dq，J＝14.4，7.5，6.8Hz，1H)。
实施例144
合成(4S)-7-(2-环丙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(670mg，3.16mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.579mmol)、(2-环丙基吡啶-4-基)硼酸(309mg，1.894mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(72.3mg，0.079mmol)和X-phos(75mg，0.158mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-环丙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.645mmol，40.8％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：400.28[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.75(s，1H)，9.43(d，J＝1.5Hz，1H)，8.54(d，J＝5.4Hz，1H)，8.46-8.28(m，2H)，8.19-8.01(m，1H)，7.89-7.62(m，3H)，5.52(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.30-2.86(m，4H)，2.27(ddd，J＝13.2，6.4，4.1Hz，2H)，1.98(dt，J＝14.5，7.6Hz，1H)，1.17-0.88(m，4H)。
实施例145
合成(4S)-7-(2-异丙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(670mg，3.16mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(500mg，1.579mmol)、(2-异丙基吡啶-4-基)硼酸(313mg，1.894mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(72.3mg，0.079mmol)和X-phos(75mg，0.158mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-异丙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(320mg，0.793mmol，50.2％产率)，其为近白色固体。LCMS(m/z)：402.33[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.65(s，1H)，9.57(d，J＝1.5Hz，1H)，8.68(d，J＝5.2Hz，1H)，8.44-8.07(m，2H)，8.02-7.87(m，1H)，7.75-7.58(m，2H)，7.48(d，J＝8.0Hz，1H)，5.73(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.43-3.14(m，4H)，3.04(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.35(dt，J＝11.7，5.0Hz，1H)，2.22-2.00(m，1H)，1.41(dd，J＝6.9，0.9Hz，6H)。
实施例146
合成(4S)-N-(1-甲基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(0.588g，1.982mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.5g，1.982mmol)在四氢呋喃(20mL)中的搅拌的溶液中，然后加入三乙胺(0.829mL，5.94mmol)，并在0℃搅拌30min。加入1-甲基-1H-1，2，3-三唑-4-胺盐酸盐(0.4g，2.97mmol)，并在70℃加热48h。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和乙酸乙酯(50mL)之间分配。分离有机层，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物通过100-200硅胶纯化，通过用5％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-N-(1-甲基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.260g，0.686mmol，34.6％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：377.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.52(s，1H)，8.58(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，8.07(s，1H)，8.00(d，J＝1.7Hz，1H)，7.85-7.75(m，2H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，5.46(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，4.06(s，3H)，3.30(s，1H)，3.24-3.05(m，2H)，2.96(dd，J＝12.0，3.2Hz，1H)，2.63(s，3H)，2.23(dd，J＝13.7，9.8，6.1，3.7Hz，1H)，2.00-1.86(m，1H)。
实施例147
合成(4S)-7-(2-乙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、(2-乙基吡啶-4-基)硼酸(343mg，2.273mmol)在n-丁醇(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌5小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.2；UV活性)。将粗品化合物通过(100-200目)硅胶纯化，用20％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-乙基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(418mg，1.074mmol，56.7％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：388.26[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.72(s，1H)，9.43(d，J＝1.5Hz，1H)，8.62(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，8.53-8.21(m，2H)，8.08(d，J＝1.7Hz，1H)，7.97-7.64(m，3H)，5.52(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.30(s，1H)，3.23-3.08(m，3H)，3.03-2.81(m，2H)，2.34-2.16(m，1H)，1.99(d，J＝6.8Hz，1H)，1.31(t，J＝7.6Hz，3H)。
实施例148
合成(4S)-7-(2-乙氧基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、(2-乙氧基吡啶-4-基)硼酸(380mg，2.273mmol)在1-丁醇(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌4小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(100mL)和EtOAc(120mL)之间分配。分离EtOAc层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.4；UV活性)。将粗品化合物通过(100-200目)硅胶纯化，用10％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-乙氧基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(435mg，1.063mmol，56.1％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：404.28[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.73(s，1H)，9.39(d，J＝1.5Hz，1H)，8.50-8.33(m，1H)，8.31-8.21(m，2H)，7.79(d，J＝8.0Hz，1H)，7.77-7.62(m，2H)，7.60(d，J＝2.2Hz，1H)，5.50(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，4.37(q，J＝7.0Hz，2H)，3.30(s，1H)，3.25-3.03(m，2H)，2.97(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.36-2.12(m，1H)，2.07-1.87(m，1H)，1.38(t，J＝7.0Hz，3H)。
实施例149
合成(4S)-7-(2-甲氧基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(2-甲氧基吡啶-4-基)硼酸(348mg，2.273mmol)在1，4-二噁烷(12mL)和水(2.000mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌5小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(25mL)和EtOAc(60mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物通过(100-200目)硅胶纯化，用20％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲氧基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(310mg，0.793mmol，41.8％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：390.20[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.71(s，1H)，9.38(d，J＝1.5Hz，1H)，8.43(dd，J＝2.5，1.5Hz，1H)，8.38(s，1H)，8.37(d，J＝2.5Hz，1H)，7.75(d，J＝22.0Hz，1H)，7.77-7.62(m，2H)，7.60(s，1H)，5.50(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，3.94(s，3H)，3.30(s，1H)，3.25-3.03(m，2H)，3.03-2.88(m，1H)，2.25(dd，J＝9.9，3.9Hz，1H)，1.98(dd，J＝14.2，7.2Hz，1H)。
实施例150
合成(4S)-7-(2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-基)硼酸(380mg，2.273mmol)在1，4-二噁烷(12mL)和水(2.000mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌5小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(25mL)和EtOAc(60mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.3；UV活性)。将粗品化合物通过(100-200目)硅胶纯化，用20％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲氧基-6-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(225mg，0.547mmol，28.9％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：404.24[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.72(s，1H)，9.41(d，J＝1.5Hz，1H)，8.55-8.26(m，2H)，7.86-7.64(m，3H)，7.31(dd，J＝1.4，0.7Hz，1H)，5.51(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.91(s，3H)，3.22-3.00(m，3H)，2.97(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.63-2.41(m，3H)，2.25(dddd，J＝13.8，9.8，6.1，3.6Hz，1H)，1.97(dt，J＝14.3，7.6Hz，1H)。
实施例151
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
将NaH(0.110g，4.60mmol)加入至(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰II，0.250g，0.766mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的搅拌的溶液中，在氮气下，在室温搅拌。将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后在室温加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.276g，1.149mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应物冷却至室温，并在水(10mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：70％EtOAc的己烷溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用50-60％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.2g，0.439mmol，57.3％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：447.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.50(s，1H)，8.32-8.18(m，1H)，8.16-8.03(m，1H)，7.76(ddd，J＝8.8，7.4，2.0Hz，1H)，7.35(d，J＝8.6Hz，1H)，7.05(dd，J＝7.8，4.5Hz，1H)，6.60(d，J＝8.7Hz，1H)，4.72(d，J＝2.7Hz，1H)，4.27(s，2H)，3.31-3.24(m，1H)，3.22-2.89(m，4H)，2.80(d，J＝13.3Hz，1H)，2.51(s，1H)，1.99(t，J＝12.7Hz，2H)，1.85(d，J＝11.6Hz，2H)，1.75-1.43(m，2H)，1.25(s，2H)。
实施例152
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在25℃，向(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.350g，1.314mmol)、DMAP(0.482g，3.94mmol)在THF(7mL)中的搅拌的溶液中加入嘧啶-4-基氨基甲酸苯酯(0.848g，3.94mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。将溶剂在真空下除去，并将粗品用CH2Cl2(20ml)稀释，并用水(5mL)、饱和食盐水溶液(5mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用3％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)纯化，得到(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(207mg，0.529mmol，40.3％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.7)，LCMS(m/z)：388.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.32(s，1H)，8.95(d，J＝1.3Hz，1H)，8.69(d，J＝5.8Hz，1H)，8.61(d，J＝5.3Hz，1H)，8.17(d，J＝1.7Hz，1H)，8.15(dd，J＝5.8，1.3Hz，1H)，7.95(dd，J＝5.3，1.8Hz，1H)，7.86(d，J＝8.1Hz，1H)，7.74(d，J＝8.1Hz，1H)，4.90-4.67(m，1H)，3.40(dd，J＝13.7，1.9Hz，1H)，3.28(s，2H)，3.00-2.81(m，1H)，2.64(s，3H)，2.13-1.71(m，2H)，1.41-1.14(m，2H)。
实施例153
合成(4S)-N-(1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(0.588g，1.982mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.5g，1.982mmol)在四氢呋喃(20mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌30min。在0℃，加入三乙胺(0.829mL，5.94mmol)和1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-胺(0.486g，4.95mmol)。将反应混合物在70℃搅拌48h。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和DCM(50mL)之间分配。将分离的有机层用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过(100-200目)硅胶纯化，并用5％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-N-(1-甲基-1H-1，2，4-三唑-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(0.215g，0.563mmol，28.4％产率)，其为亮黄色固体，LCMS(m/z)：377.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.44(s，1H)，8.55(d，J＝5.2Hz，1H)，8.36(s，1H)，7.96(s，1H)，7.86-7.61(m，3H)，5.44(dd，J＝5.8，3.0Hz，1H)，3.83(s，3H)，3.27(d，J＝30.5Hz，3H)，2.95(dd，J＝12.0，3.2Hz，1H)，2.59(s，3H)，2.23(ddt，J＝16.9，9.7，4.4Hz，1H)，1.91(dt，J＝14.7，7.4Hz，1H)。
实施例154
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.700g，2.63mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入三乙胺(2.198mL，15.77mmol)和三光气(0.780g，2.63mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温加入吡嗪-2-胺(0.750g，7.88mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物浓缩至干，然后在水(20mL)和二氯甲烷(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na28O4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，得到纯的(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：388.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.27(s，1H)，9.59(d，J＝0.9Hz，1H)，8.67-8.60(m，1H)，8.32(d，J＝1.0Hz，2H)，8.10(dt，J＝1.9，0.7Hz，1H)，7.74-7.67(m，1H)，7.62-7.50(m，2H)，5.06-5.00(m，1H)，3.51-3.27(m，3H)，3.03(d，J＝13.6Hz，1H)，2.74(s，3H)，2.26(s，1H)，2.08-1.84(m，1H)，1.43(d，J＝6.2Hz，2H)。
实施例155
合成(4S)-7-(2-(甲基氨基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.579mmol)、N-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(443mg，1.894mmol)和磷酸三钾(670mg，3.16mmol)在1，4-二噁烷(15mL)和水(2mL)中的脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(17.72mg，0.079mmol)和二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-[1，1′-联苯]-2-基)膦(75mg，0.158mmol)，并将反应混合物在120℃加热4h。将n-丁醇溶剂在减压下蒸除，并将获得的残余物用水稀释，并用DCM(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(2-(甲基氨基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4--2氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(325mg，0.820mmol，51.9％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.2)，LCMS(m/z)：389.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.64(s，1H)，9.40(d，J＝1.53Hz，1H)，8.46-8.31(m，2H)，8.14(d，J＝5.48Hz，1H)，7.71(m，J＝8.11Hz，1H)，7.61(d，J＝8.11Hz，1H)，7.22(dd，J＝5.37，1.64Hz，1H)，7.03(d，J＝0.88Hz，1H)，6.40(q，J＝4.75Hz，1H)，5.51(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.35-3.04(m，3H)，2.96(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.85(d，J＝5.04Hz，3H)，2.25(dddd，J＝13.59，9.87，6.03，3.62Hz，1H)，1.97(dt，J＝13.87，6.99Hz，1H)。
实施例156
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在25℃，向(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.150g，0.563mmol)、哒嗪-3-基氨基甲酸苯酯(0.364g，1.690mmol)在THF(3mL)中的搅拌的溶液中加入DMAP(0.206g，1.690mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去，将粗品化合物用DCM(10ml)稀释，用水(3ml)、饱和食盐水溶液(3ml)洗涤，用Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，得到(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-3-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(271mg，0.692mmol，123％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的CH2Cl2溶液，Rf：0.6)，LCMS(m/z)：388.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.66(s，1H)，8.94(dd，J＝4.7，1.5Hz，1H)，8.66(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，8.50(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，8.29(d，J＝1.8Hz，1H)，7.74(dd，J＝5.4，1.8Hz，1H)，7.57(d，J＝4.3Hz，2H)，7.46(dd，J＝9.0，4.7Hz，1H)，5.00(p，J＝2.6Hz，1H)，3.50-3.22(m，3H)，3.12-2.96(m，1H)，2.82(s，3H)，2.39-2.10(m，1H)，1.95(tdd，J＝14.2，5.5，3.0Hz，1H)，1.58-1.33(m，2H)。
实施例157
(4S)-N-(1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)溶于四氢呋喃(THF)(10mL)的溶液中加入三光气(412mg，1.387mmol)，并在室温搅拌30min，向其中加入三乙胺(1.933mL，13.87mmol)和1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-胺(372mg，2.77mmol)，然后将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x15ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱(100-200目)纯化，得到纯的化合物(4S)-N-(1H-咪唑并[4，5-c]吡啶-4-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(225mg，0.531mmol，19.14％产率)，其为淡黄色固体。(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：413.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.03(s，1H)，11.93(s，1H)，8.65(d，J＝5.3Hz，1H)，8.35-7.86(m，3H)，7.86-7.37(m，4H)，5.72(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，3.21(m，3H)，3.06(dd，J＝12.2，3.3Hz，1H)，2.78(s，3H)，2.38(dddd，J＝14.0，9.9，6.2，4.2Hz，1H)，2.13(dt，J＝14.3，7.2Hz，1H)。
实施例158
合成(4S)-7-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将磷酸钾(402mg，1.894mmol)和(2-甲氧基嘧啶-5-基)硼酸(175mg，1.137mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.947mmol)在1-丁醇(6mL)和水(2.0mL)的混合物中的搅拌的溶液中，并用氩气脱气混合物25min，然后加入Pd2(dba)3(43.4mg，0.047mmol)和X-phos(45.2mg，0.095mmol)，在120℃加热2h。使反应混合物降至室温，用水(40mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x30mL)萃取，用饱和食盐水(30mL)洗涤。将分离的有机层浓缩，并通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，80％乙酸乙酯的石油醚溶液为洗脱剂)洗脱。将回收的材料通过使用乙醇和戊烷重结晶，得到(4S)-7-(2-甲氧基嘧啶-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(190mg，0.481mmol，50.8％产率)，其为近白色固体。(流动相：100％乙酸乙酯，Rf：0.1)，LCMS(m/z)：391.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.64(s，1H)，9.52(d，J＝1.5Hz，1H)，9.24(s，2H)，8.40-8.25(m，2H)，7.64(d，J＝7.9Hz，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，5.70(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，4.12(s，3H)，3.33-3.13(m，3H)，3.02(d，J＝3.3Hz，1H)，2.36(dddd，J＝13.9，9.9，5.9，4.0Hz，1H)，2.17-2.04(m，1H)。
实施例159
合成(4S)-7-(6-(羟基甲基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将磷酸钾(535mg，2.53mmol)和(6-(羟基甲基)吡啶-3-基)硼酸(232mg，1.515mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.263mmol)在1-丁醇(6mL)和水(2.0mL)的混合物中的搅拌的溶液中。用氩气脱气混合物10min，然后加入Pd2(dba)3(57.8mg，0.063mmol)和X-phos(60.2mg，0.126mmo1)。将混合物在120℃加热20h。冷却反应混合物至室温，并通过硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(10mLx2)洗涤，将滤液在减压下除去溶剂，得到粗品化合物。将上述粗品通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用80％乙酸乙酯的n-己烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-7-(6-(羟基甲基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(225mg，0.558mmol，44.2％产率)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂：100％乙酸乙酯Rf：0.1)，LCMS(m/z)：390.35(M+H)+。
1HNMR(400MHz，CDCl3)：δ13.73(s，1H)，9.54(d，J＝1.3Hz，1H)，9.19(dd，J＝2.3，0.9Hz，1H)，8.51(dd，J＝8.2，2.3Hz，1H)，8.44-8.20(m，2H)，7.64(d，J＝8.0Hz，1H)，7.50-7.39(m，2H)，5.71(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，4.86(d，J＝2.4Hz，2H)，3.67(s，1H)，3.46-3.13(m，3H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.43-2.26(m，1H)，2.19-1.98(m，1H)。
实施例160
合成(4S)-N-(2，3-二氢-[1，4]二氧杂环己二烯并[2，3-b]吡啶-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)溶于四氢呋喃(THF)(10mL)的溶液中加入三光气(412mg，1.387mmol)，并在室温搅拌30min，向其中加入三乙胺(1.933mL，13.87mmol)和2，3-二氢-[1，4]二氧杂环己二烯并[2，3-b]吡啶-7-胺(422mg，2.77mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水萃取，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物(800mg)。将粗产物通过柱色谱纯化，得到纯的化合物(4S)-N-(2，3-二氢-[1，4]二氧杂环己二烯并[2，3-b]吡啶-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(325mg，0.732mmol，26.4％产率)，其为淡黄色固体。Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液，LCMS(m/z)：413.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ12.81(s，1H)，8.58(d，J＝5.2Hz，1H)，7.82(d，J＝2.4Hz，1H)，7.78-7.40(m，5H)，5.45(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，4.46-4.31(m，2H)，4.29-4.16(m，2H)，3.19(d，J＝8.8Hz，1H)，3.14-3.03(m，2H)，2.96(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.55(s，3H)，2.23(d，J＝7.0Hz，1H)，1.93(dd，J＝14.1，7.1Hz，1H)。
实施例161
合成(9S)-N-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气气氛下，在室温，将DMAP(0.550g，4.51mmol)加入至(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.4g，1.502mmol)和(2-甲基-2H-吲唑-5-基)氨基甲酸苯酯(0.803g，3.00mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的搅拌的溶液中。将反应物在70℃搅拌48小时。将反应物冷却至室温和在减压下浓缩。加入EtOAc至反应物质中，并搅拌10分钟，然后过滤，并将固体用EtOAc洗涤。取滤液和浓缩，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用60％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(2-甲基-2H-吲唑-5-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.18g，0.406mmol，27.1％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：440.4[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.44(s，1H)，8.66(d，J＝5.2Hz，1H)，8.18(dd，J＝1.9，0.8Hz，1H)，7.82(d，J＝0.9Hz，1H)，7.69(d，J＝1.6Hz，1H)，7.63(d，J＝9.1Hz，1H)，7.60-7.50(m，2H)，7.40(d，J＝7.9Hz，1H)，7.27-7.19(m，1H)，5.05(t，J＝2.7Hz，1H)，4.20(s，3H)，3.50-3.23(m，3H)，3.01(d，J＝13.5Hz，1H)，2.67(s，3H)，2.28(s，1H)，1.93(s，1H)，1.58(s，2H)。
实施例162
合成(4R)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4R)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.210mmol)、(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(454mg，3.31mmol)和K3PO4(1825mg，6.63mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(5.00mL)中的脱气的溶液中加入X-Phos(211mg，0.442mmol)和Pd2(dba)3(202mg，0.221mmol)。将反应混合物在110℃加热2h，并冷却至室温。用水(100mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱纯化，得到(4R)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(392mg，49.2％产率)，其为米色固体(TLC：洗脱剂；10％甲醇的二氯甲烷溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：374.18[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.76(s，1H)，9.43(d，J＝1.53Hz，1H)，8.59(d，J＝5.26Hz，1H)，8.46(dd，J＝2.63，1.53Hz，1H)，8.39(d，J＝2.41Hz，1H)，8.31(s，1H)，8.16-8.06(m，1H)，7.92-7.78(m，1H)，7.78-7.69(m，1H)，5.52(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.37(m，1H)，3.28-3.06(m，2H)，2.98(dd，J＝11.95，3.18Hz，1H)，2.61(s，3H)，2.41-2.15(m，1H)，2.05-1.84(m，1H)。
实施例163
((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(吗啉代)甲酮
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(412mg，1.387mmol)，并在室温搅拌30min，向其中加入三乙胺(1.933mL，13.87mmol)和吗啉(314mg，3.61mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物加载至100-200硅胶柱，并用4％甲醇的DCM溶液洗脱，得到纯的化合物((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(吗啉代)甲酮(270mg，0.735mmol，26.5％产率)，其为淡棕色固体(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：366.19[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.52(d，J＝5.2Hz，1H)，7.85-7.75(m，1H)，7.70(dd，J＝5.2，1.7Hz，1H)，7.57-7.30(m，1H)，4.38(s，1H)，3.50(d，J＝72.2Hz，8H)，3.23-2.95(m，1H)，2.89(dd，J＝11.6，3.2Hz，1H)，2.58-2.32(m，6H)，2.33-1.92(m，2H)。
实施例164
((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(哌啶-1-基)甲酮
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(412mg，1.387mmol)，并在室温搅拌30min。向其中加入三乙胺(1.933mL，13.87mmol)和哌啶(236mg，2.77mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱纯化，得到纯的化合物((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(哌啶-1-基)甲酮(220mg，0.583mmol，21.03％产率)，其为棕色固体(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：364.21[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.50(d，J＝5.2Hz，1H)，7.79(d，J＝1.8Hz，1H)，7.74-7.62(m，1H)，7.51-7.30(m，2H)，4.33(t，J＝4.2Hz，1H)，3.49(d，J＝71.1Hz，4H)，3.22-2.95(m，2H)，2.88(dd，J＝11.6，3.2Hz，1H)，2.61-2.35(m，6H)，2.24-1.94(m，1H)，1.55(s，5H)。
实施例165
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并在室温搅拌1h。然后，在室温依次加入吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-胺(452mg，3.09mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)，并将反应混合物在密封管中在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(250mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用1％MeOH的DCM溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.613mmol，38％产率)，其为棕色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：425.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.84(s，1H)，9.11(d，J＝1.97Hz，1H)，8.58(d，J＝5.70Hz，1H)，8.37-8.51(m，1H)，8.19(d，J＝1.97Hz，1H)，7.59-7.78(m，5H)，5.54-5.50(m，1H)，3.22-3.33(m，1H)，3.07-3.19(m，1H)，3.00(dd，J＝11.95，3.18Hz，1H)，2.50(dt，J＝3.67，1.78Hz，1H)，2.21-2.33(m，4H)，1.98(dt，J＝13.92，7.07Hz，1H)。
实施例166
合成(4S)-N-(3-甲基噌啉-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并在室温搅拌1h。然后，在室温依次加入3-甲基噌啉-5-胺(492mg，3.09mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)，并将反应混合物在70℃加热16h。将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用1％MeOH的DCM溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-N-(3-甲基噌啉-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(280mg，0.647mmol，42％产率)，其为淡黄色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.25)，LCMS(m/z)：438.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.43(s，1H)，9.11(s，1H)，8.49(d，J＝5.92Hz，1H)，8.39(d，J＝7.45Hz，1H)，8.19(s，1H)，7.81(t，J＝8.11Hz，1H)，7.65(d，J＝7.5Hz 1H)，7.35-7.31(m，3H)，5.77(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.41-3.15(m，3H)，2.91(m，1H)，2.30-2.25(m，3H)，2.24(s，3H)，2.10-1.92(m，1H)。
实施例167
合成(4S)-7-(5-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(5-甲基吡啶-3-基)硼酸(311mg，2.273mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(12.00mL)、水(4.00mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-Phos(90mg，0.189mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌4h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X 10mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200目硅胶，并用1至3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的(4S)-7-(5-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(356mg，0.938mmol，49.5％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：374.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.81(s，1H)，9.57(d，J＝1.4Hz，1H)，8.99(dd，J＝2.1，0.8Hz，1H)，8.52(dd，J＝2.0，0.9Hz，1H)，8.47(m，J＝2.2，1.1Hz，1H)，8.32-8.28(m，2H)，7.64(d，J＝8.0Hz，1H)，7.47(d，J＝8.0Hz，1H)，5.71(dd，J＝6.1，3.2Hz，1H)，3.35-3.16(m，3H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.51(s，3H)，2.35(dddd，J＝14.0，9.9，6.1，4.0Hz，1H)，2.15-2.03(m，1H)。
实施例168
合成(4S)-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(1-甲基-1H-吡唑-4-基)硼酸(286mg，2.273mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(12.00mL)、水(4.00mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-Phos(90mg，0.189mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌4h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X 10mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200目硅胶，并用1.5-3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的(4S)-7-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(354mg，0.963mmol，50.9％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：363.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.09(s，1H)，9.39(d，J＝1.5Hz，1H)，8.51(d，J＝0.8Hz，1H)，8.47(dd，J＝2.6，1.6Hz，1H)，8.37-8.36(m，1H)，8.26(d，J＝0.8Hz，1H)，7.56(d，J＝8.0Hz，1H)，7.34(d，J＝8.0Hz，1H)，5.46(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.92(s，3H)，3.22-3.13(m，1H)，3.12-3.02(m，2H)，2.94(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.24(dddd，J＝13.6，9.8，6.1，3.8Hz，1H)，1.92(m，J＝14.4，7.4Hz，1H)。
实施例169
合成(4S)-7-(6-乙基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(6-乙基吡啶-3-基)硼酸(343mg，2.273mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(12.00mL)、水(3.00mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-Phos(90mg，0.189mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，并再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌4h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X 10mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200目硅胶，并用1.5-3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的(4S)-7-(6-乙基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(354mg，0.883mmol，46.6％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：388.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.77(s，1H)，9.54(d，J＝1.5Hz，1H)，9.22-9.01(d，1H)，8.47(dd，J＝2.5Hz，1H)，8.35(d，J＝2.4Hz，1H)，8.29(d，J＝2.6Hz，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.42(d，J＝8.0Hz，1H)，7.35-7.32(d，1H)，5.70(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.39-3.13(m，3H)，3.02(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.92(q，J＝7.6Hz，2H)，2.35(dddd，J＝13.9，9.9，6.1，4.0Hz，1H)，2.21-1.98(m，1H)，1.38(t，J＝7.6Hz，3H)。
实施例170
合成(4S)-N-(1H-吲唑-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并在室温搅拌1h。然后，在室温，依次加入1H-吲唑-5-胺(412mg，3.09mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)。将反应混合物在密封管中在70℃加热16h，并倒入饱和NaHCO3溶液(180mL)中，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过制备型HPLC(碳酸氢铵和乙腈)纯化，得到(4S)-N-(1H-吲唑-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(210mg，0.489mmol，20.54％产率)，其为淡棕色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：412.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.98(s，1H)，12.92(s，1H)，8.65(d，J＝5.04Hz，1H)，8.09-7.94(d，J＝4.5Hz，1H)，7.58-7.47(m，2H)，7.47-7.41(m，2H)，7.41-7.32(d，J＝8.4Hz，1H)，7.32-7.17(d，J＝8.3Hz，1H)，5.74(dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)，3.37-3.11(m，3H)，3.11-2.86(m，1H)，2.60(s，3H)，2.22(dt，J＝14.03，7.02Hz，2H)，1.99-1.81(m，1H)。
实施例171
合成(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-5-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
将(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)、三乙胺(0.942mL，6.76mmol)和碳酸双(三氯甲基)酯(0.334g，1.126mmol)在THF(12mL)中的溶液在氮气下室温搅拌30min，然后一次性加入嘧啶-5-胺(0.643g，6.76mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去，并将获得的粗品用CH2Cl2(35ml)稀释，用水(5mL)、饱和食盐水溶液(5mL)稀释，用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，获得半纯的化合物。将半纯的化合物通过制备型HPLC(30％ACN/水)再次纯化，得到(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-5-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(261mg，0.667mmol，29.6％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的CH2Cl2溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：388[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.81(s，1H)，9.03(s，2H)，8.94(s，1H)，8.69(dd，J＝5.2，0.9Hz，1H)，7.75-7.55(m，2H)，7.55-7.46(m，1H)，7.43(d，J＝8.0Hz，1H)，5.08-4.89(m，1H)，3.49-3.17(m，3H)，3.02(d，J＝13.7Hz，1H)，2.69(s，3H)，2.36-2.13(m，1H)，2.06-1.79(m，1H)，1.59-1.32(m，2H)。
实施例172
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(412mg，1.387mmol)，并搅拌1h。然后在30℃加入哒嗪-3-胺(792mg，8.32mmol)和三乙胺(1.160mL，8.32mmol)，并将反应混合物在75℃加热16h。将反应物冷却至30℃，并倒入冷水(30mL)中，用DCM(2x35ml)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，溶剂系统)和制备型HPLC((10mM碳酸氢铵(Aq)MP-B：乙腈，柱：xbridge C18(150x30)mm 5μ，方法-t％b0/60，13.5/60，14/100，17/100，17.1/60，流速：30ml/min，溶解：THF+ACN.+水)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(270mg，0.723mmol，25.7％)，其为淡黄色固体(TLC：Rf：0.4，10％MeOH的EtOAc溶液)，LCMS(m/z)：374.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.16(s，1H)，8.94(dd，J＝4.7，1.5Hz，1H)，8.66(d，J＝5.3Hz，1H)，8.48(dd，J＝9.1，1.5Hz，1H)，8.38-830(m，1H)，8.22(s，1H)，7.83-7.50(m，3H)，5.69(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.41-3.16(m，3H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.81(s，3H)，2.35(dddd，J＝13.9，10.0，6.1，4.0Hz，1H)，2.22-2.00(m，1H)。
实施例173
合成(4S)-7-(2，5-二甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、2，5-二甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(662mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15分钟，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为粉色固体(TLC洗脱系统：10％甲醇的EtOAc溶液；Rf＝0.3)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-8％甲醇的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(2，5-二甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(337mg，0.860mmol，45.4％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：388.19[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.48(s，1H)，9.49(d，J＝1.6Hz，1H)，8.46(s，1H)，8.34-8.10(m，2H)，7.63(d，J＝7.8Hz，1H)，7.45(s，1H)，7.15(d，J＝7.9Hz，1H)，5.71(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.51-3.09(m，3H)，3.04(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.63(s，3H)，2.43(s，3H)，2.40-2.27(m，1H)，2.20-1.96(m，1H)。
实施例174
合成(4S)-7-吗啉代-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)和吗啉(0.330mL，3.79mmol)在1，4-二噁烷(6mL)中的脱气的溶液中加入Cs2CO3(1234mg，3.79mmol)、x-phos(361mg，0.758mmol)和Pd(OAc)2(85mg，0.379mmol)。将反应混合物在110℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH/DCM)纯化，得到(4S)-7-吗啉代-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(268mg，0.707mmol，37.3％产率)，其为淡黄色固体(TLC：Rf：0.2，纯EtOAc)，LCMS(m/z)：368[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.41(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，8.37-7.90(m，2H)，7.39(d，J＝8.6Hz，1H)，6.29(d，J＝8.6Hz，1H)，5.62(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.98-3.72(m，4H)，3.62-3.46(m，4H)，3.22(dddd，J＝12.2，8.5，3.7，2.2Hz，1H)，3.18-3.05(m，2H)，2.93(dd，J＝11.8，3.3Hz，1H)，2.27(dd，J＝10.1，4.0Hz，1H)，2.01(d，J＝6.9Hz，1H)。
实施例175
合成(4S)-N-(5-乙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将(5-乙基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯(1446mg，5.94mmol)和DMAP(726mg，5.94mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的搅拌的溶液中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(2X 30mL)稀释，用水(40mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤。分离有机层，并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)和1％甲醇的DCM溶液作为洗脱剂，得到所需产物。将化合物通过使用乙醇和戊烷重结晶，得到(4S)-N-(5-乙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(245mg，0.602mmol，30.4％产率)，其为近白色固体(TLC：5％甲醇的DCM溶液.Rf：0.4UV)，LCMS(m/z)：402.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δ13.46(s，1H)，9.37(s，1H)，8.67(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，8.20(d，J＝0.6Hz，1H)，7.98(ddd，J＝5.4，1.8，0.7Hz，1H)，7.74-7.54(m，2H)，7.48(d，J＝7.9Hz，1H)，5.72(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.37-3.17(m，1H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.80(q，J＝7.6Hz，2H)，2.62(s，3H)，2.35(dddd，J＝14.0，9.9，6.1，4.1Hz，1H)，2.22-1.92(m，3H)，1.32(t，J＝7.6Hz，3H)。
实施例176
合成(4S)-7-(2-甲基噁唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)噁唑(475mg，2.273mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.2；UV活性)。将粗品通过制备型HPLC纯化，得到所需产物(4S)-7-(2-甲基噁唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(153mg，0.418mmol，22.04％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：364.32[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.72(s，1H)，9.54(d，J＝1.5Hz，1H)，8.44-8.17(m，2H)，8.07(s，1H)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H)，7.30-7.13(m，1H)，5.67(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.45-3.08(m，3H)，3.01(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.58(s，3H)，2.34(dddd，J＝14.1，9.9，6.1，4.2Hz，1H)，2.22-1.95(m，1H)。
实施例177
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(700mg，2.77mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(823mg，2.77mmol)，并搅拌1h。然后在30℃加入嘧啶-5-胺(317mg，3.33mmol)和TEA(0.387mL，2.77mmo1)，并将反应混合物在75℃加热16h。将反应物冷却至30℃，并倒入冷水(30mL)中，用DCM(2x50ml)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，3％MeOH的乙酸乙酯溶液)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(嘧啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(275mg，0.737mmol，32％)，其为淡黄色固体(TLC：Rf：0.4，10％MeOH的EtOAc溶液)，LCMS(m/z)：374.22[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.25(s，1H)，9.01(s，2H)，8.94(s，1H)，8.68(d，J＝0.8Hz，1H)，7.67(d，J＝7.9Hz，1H)，7.55(dt，J＝1.6，0.8Hz，1H)，7.47(ddd，J＝5.2，1.7，0.7Hz，1H)，7.39(s，1H)，5.69(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，3.33-3.13(m，3H)，3.04(dd，J＝12.2，3.2Hz，1H)，2.69(s，3H)，2.36(dd，J＝10.1，4.1Hz，1H)，2.15-2.04(m，1H)。
实施例178
合成(4S)-N-(5-环丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将(5-环丙基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯(1214mg，4.76mmol)和DMAP(581mg，4.76mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(2X30mL)稀释，用水(20mL)和饱和食盐水(20mL)洗涤。分离有机层，并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，用2％甲醇的DCM溶液作为洗脱剂，得到所需产物。将化合物通过乙醇和戊烷重结晶，得到(4S)-N-(5-环丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.623mmol，45.2％)，其为近白色固体，(Rf：0.4，TLC：5％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：414.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.59(s，1H)，9.35(d，J＝1.5Hz，1H)，8.62(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，8.20(d，J＝1.5Hz，1H)，8.07(q，J＝0.9Hz，1H)，7.71-7.59(m，2H)，7.48(d，J＝8.0Hz，1H)，5.71(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.37-3.10(m，3H)，3.02(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.74(s，3H)，2.34(dd，J＝10.1，4.1Hz，1H)，2.07(d，J＝8.0Hz，1H)，1.21-0.66(m，5H)。
实施例179
合成(4S)-7-(2-甲基嘧啶-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、(2-甲基嘧啶-5-基)硼酸(314mg，2.273mmol)在1，4-二噁烷(12mL)和水(2.000mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入X-phos(90mg，0.189mmol)和Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌6小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(30mL)和EtOAc(70mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：5％MeOH的CHCl3溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物通过100-200硅胶纯化，通过20％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲基嘧啶-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(353mg，0.938mmol，49.5％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：375.19[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.57(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，9.33(s，2H)，8.38(d，J＝1.6Hz，1H)，8.30(s，1H)，7.66(d，J＝8.0Hz，1H)，7.40(d，J＝8.0Hz，1H)，5.71(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，3.41-3.11(m，3H)，3.04(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.84(s，3H)，2.36(dddd，J＝14.0，9.9，6.1，4.1Hz，1H)，2.11(d，J＝7.1Hz，1H)。
实施例180
合成(4S)-N-(6-环丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，0.198mmol)在THF(30mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(353mg，0.099mmol)，并搅拌30min。然后在室温加入6-环丙基吡嗪-2-胺(321mg，2.378mmol)和Et3N(1.657mL，0.991mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。将反应混合物倒入NaHCO3溶液中，并用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用2％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(6-环丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(208mg，0.479mmol，30.2％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的CH2Cl2溶液，Rf：0.5)，LCMS(m/z)：414.29[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.11(s，1H)，9.29(s，1H)，8.80(d，J＝5.26Hz，1H)，8.57(d，J＝4.60Hz，1H)，8.15(s，1H)，7.97-7.67(m，1H)，7.64(d，J＝7.89Hz，1H)，7.59-7.42(m，1H)，5.72(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.34-3.10(m，3H)，3.39-3.09(m，1H)，2.62(s，3H)，2.44-2.18(m，1H)，2.17-1.97(m，1H)，1.13-0.93(m，4H)。
实施例181
(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-1，2，3-三唑-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(0.588g，1.982mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.5g，1.982mmol)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌的溶液中，然后在0℃加入三乙胺(0.829mL，5.94mmol)和1H-1，2，3-三唑-4-胺盐酸盐(0.597g，4.95mmol)。将反应混合物在70℃搅拌48h。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.35；UV活性)。将粗品化合物通过100-200硅胶纯化，通过用5％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1H-1，2，3-三唑-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(0.21g，0.558mmol，28.2％产率)，其为亮黄色固体，LCMS(m/z)：363.24[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ14.58(s，1H)，13.55(s，1H)，8.58(d，J＝5.2Hz，1H)，7.94(s，2H)，7.84-7.75(m，2H)，7.71(d，J＝8.0Hz，1H)，5.47(dd，J＝5.8，3.0Hz，1H)，3.27-3.16(m，1H)，3.16-3.01(m，2H)，2.97(dd，J＝12.0，3.2Hz，1H)，2.64(s，3H)，2.24(dddd，J＝13.7，9.8，5.9，3.7Hz，1H)，1.94(dddd，J＝14.5，8.7，4.5Hz，1H)。
实施例182
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-((S)-1-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入三光气(588mg，1.982mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)。将反应混合物在搅拌30min，加入(S)-1-(吡啶-2-基)乙胺，并在70℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去，并用水稀释，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水(30mL)、饱和食盐水溶液洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗产物，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％甲醇的二氯甲烷溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用55-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱。将收集的级分在减压下蒸发，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-((S)-1-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(277mg，0.684mmol，34.5％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：401.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.09(d，J＝7.6Hz，1H)，8.56(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，8.36(ddd，J＝4.8，1.8，0.9Hz，1H)，7.78(dt，J＝1.4，0.7Hz，1H)，7.63-7.60(m，2H)，7.59(dd，J＝7.7，1.9Hz，1H)，7.31-7.29(m，2H)，7.11(ddd，J＝7.6，4.8，1.2Hz，1H)，5.64(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，5.32-5.23(m，1H)，3.27-3.06(m，3H)，2.95(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.60(s，3H)，2.22(dd，J＝10.0，4.0Hz，1H)，2.03-1.89(m，1H)，1.62(d，J＝6.9Hz，3H)。
实施例183
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-((R)-1-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液中加入三光气(588mg，1.982mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)。将反应混合物在室温搅拌30min，加入(R)-1-(吡啶-2-基)乙胺(726mg，5.94mmol)，并在70℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去，用水(15mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 50mL)萃取。将合并的有机层用水(30mL)、饱和食盐水溶液洗涤，然后用无水硫酸钠干燥。将溶液过滤和浓缩，得到粗产物，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％甲醇的二氯甲烷溶液，Rf＝0-3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用55-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-((R)-1-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(240mg，0.595mmol，30.0％产率)，其为黄色胶质，LCMS(m/z)：401.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ11.06(d，J＝7.5Hz，1H)，8.57(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，8.43(ddd，J＝4.8，1.8，0.9Hz，1H)，7.78(q，J＝0.9Hz，1H)，7.63(ddd，J＝5.1，1.9，0.7Hz，1H)，7.61(dd，J＝7.8，1.9Hz，1H)，7.55(d，J＝7.9Hz，1H)，7.36-7.30(m，2H)，7.13(ddd，J＝7.6，4.8，1.2Hz，1H)，5.62(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，5.27(p，J＝7.0Hz，1H)，3.30-3.21(m，1H)，3.18(ddd，J＝12.2，9.9，6.9Hz，1H)，3.06(dt，J＝12.0，2.1Hz，1H)，2.92(dd，J＝11.9，3.3Hz，1H)，2.60(s，3H)，2.27(dddd，J＝13.9，9.9，6.1，3.9Hz，1H)，2.07(dt，J＝14.0，7.5Hz，1H)，1.62(d，J＝6.9Hz，3H)。
实施例184
合成(4S)-N-(2-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-N-(2-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.080mmol)的溶液中加入4.0M氯化氢的二噁烷溶液(10mL，1.080mmol)。将反应混合物在室温搅拌3h。将反应混合物蒸发溶剂，并用碳酸氢钠中和，并用EtOAc萃取(3X 50mL)，将合并的有机层用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，蒸发得到350mg粗品化合物。将粗产物加载至硅胶柱，并用2％MeOH/DCM洗脱，蒸发收集的级分，得到(4S)-N-(2-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡啶-4-基)-7-(3-(三氟甲基)苯基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(253mg，0.487mmol，45.1％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf：0.2，5％MeOH/DCM)，LCMS(m/z)：516.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 13.02(s，1H)，8.08-8.33(m，2H)，7.77-8.00(m，3H)，7.76-7.59(m，2H)，7.11(d，J＝1.53Hz，1H)，6.80(dd，J＝5.70，1.75Hz，1H)，5.47(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，4.85(d，J＝5.26Hz，1H)，4.58(t，J＝5.70Hz，2H)，4.23(dd，J＝10.85，4.49Hz，1H)，4.12(dd，J＝10.74，6.14Hz，1H)，3.78(dq，J＝10.69，5.43Hz，1H)，3.53-3.32(m，1H)，3.25-3.05(m，3H)，2.97(dd，J＝11.95，3.18Hz，2H)，2.37-2.18(m，1H)，2.03-1.86(m，1H)。
实施例185
合成(4S)-7-(5，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、(5，6-二甲基吡啶-3-基)硼酸(343mg，2.273mmo1)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(5，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(420mg，1.078mmol，56.9％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：388.19[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.85(s，1H)，9.57(d，J＝1.4Hz，1H)，8.86(d，J＝2.3Hz，1H)，8.54-8.34(m，1H)，8.34-8.19(m，2H)，7.62(d，J＝8.0Hz，1H)，7.44(d，J＝8.0Hz，1H)，5.71(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.45-3.08(m，3H)，3.02(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.59(s，3H)，2.47(d，J＝0.8Hz，3H)，2.35(dddd，J＝14.0，10.0，6.1，4.0Hz，1H)，2.22-2.00(m，1H)。
实施例186
合成(4S)-7-(3-(二甲基氨基)苯基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、(3-(二甲基氨基)苯基)硼酸(469mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在100℃搅拌3小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤，并将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.5；UV活性)。将粗品通过使用柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用0-5％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(3-(二甲基氨基)苯基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(273mg，0.660mmol，34.8％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：402.26[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.66(s，1H)，9.39(s，1H)，8.35(q，J＝2.7Hz，2H)，7.81-7.42(m，1H)，7.44-7.19(m，4H)，6.92-6.77(m，1H)，5.53(dd，J＝5.9，3.1Hz，1H)，3.29-3.00(m，3H)，2.98(s，7H)，2.25(ddd，J＝13.8，10.3，5.4Hz，1H)，1.96(dt，J＝14.9，7.8Hz，1H)。
实施例187
合成((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(吡咯烷-1-基)甲酮
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌30min。30分钟后，加入三乙胺(1.381mL，9.91mmol)和吡咯烷(183mg，2.58mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用水洗涤，并用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过100-200硅胶柱纯化，并用4％甲醇的DCM溶液洗脱，得到纯的化合物((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(吡咯烷-1-基)甲酮(350mg，0.993mmol，50.1％产率)，其为黄色固体(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：350.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.49(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，7.75(dt，J＝1.4，0.7Hz，1H)，7.67(ddd，J＝5.4，1.7，0.7Hz，1H)，7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.44(d，J＝7.9Hz，1H)，4.42(d，J＝3.8Hz，1H)，3.44-3.24(m，4H)，3.14(ddt，J＝12.0，6.1，3.3Hz，1H)，3.03(dd，J＝13.8，5.2Hz，2H)，2.89(dd，J＝11.6，3.3Hz，1H)，2.55(s，3H)，2.23-2.01(m，2H)，1.99-1.86(m，4H)。
实施例188
合成(4-甲基哌嗪-1-基)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌30min。30分钟后，加入三乙胺(1.381mL，9.91mmol)和1-甲基哌嗪(258mg，2.58mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，并用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用水洗涤，并用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物500mg。将粗产物通过柱色谱纯化，得到纯的化合物(4-甲基哌嗪-1-基)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮(280mg，0.725mmol，36.6％产率)，其为黄色固体，(Rf值：0.25，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：379.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.51(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，7.83-7.72(m，1H)，7.70(ddd，J＝5.2，1.7，0.7Hz，1H)，7.53-7.36(m，2H)，4.36(d，J＝3.9Hz，1H)，3.60(s，1H)，3.42(s，2H)，3.22-2.90(m，3H)，2.61-2.44(m，9H)，2.15(d，J＝10.0Hz，5H)。
实施例189
合成(4S)-N-环戊基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌30min。向其中加入三乙胺(1.381mL，9.91mmol)和环戊胺(219mg，2.58mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用水洗涤，并用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物500mg。将粗产物通过柱色谱纯化，得到纯的化合物(4S)-N-环戊基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(275mg，0.727mmol，36.7％产率)，其为黄色固体(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：364.29(M+H)+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 10.30(d，J＝6.58Hz，1H)，8.56(d，J＝5.04Hz，1H)，7.67-7.52(m，4H)，5.41(dd，J＝5.81，2.96Hz，1H)，4.14-4.06(m，1H)，3.21-3.02(m，2H)，2.99-2.85(m，2H)，2.54(s，3H)，2.17(dd，J＝9.76，3.84Hz，1H)，2.03-1.79(m，3H)，1.64-1.43(m，6H)。
实施例190
合成(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在室温，向(9S)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.9g，2.81mmol)在THF(18mL)中的搅拌的溶液中加入碳酸双(三氯甲基)酯(0.417g，1.405mmol)，并搅拌30min。然后加入吡嗪-2-胺和Et3N(2.94ml，21.8mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16h。将有机溶剂在减压下除去，加入CH2Cl2(30ml)。将有机层用水(5ml)、饱和食盐水溶液(5ml)洗涤，用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(2-(三氟甲基)吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(476mg，1.059mmol，37.7％产率)，其为白色固体(TLC：80％EtOAc的己烷溶液，Rf：0.5)，LCMS(m/z)：442.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.06(s，1H)，9.56(d，J＝1.4Hz，1H)，8.87(d，J＝5.1Hz，1H)，8.46(dd，J＝1.8，0.9Hz，1H)，8.37-8.23(m，2H)，8.14(dd，J＝5.1，1.7Hz，1H)，7.63(d，J＝8.0Hz，1H)，7.56(s，1H)，5.15-4.92(m，1H)，3.52-3.26(m，3H)，3.03(d，J＝14.0Hz，1H)，2.26(s，1H)，2.05-1.88(m，1H)，1.53-1.29(m，2H)。
实施例191
合成(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(1H-吡唑-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.947mmol)、(1H-吡唑-5-基)硼酸(127mg，1.137mmol)和K3PO4(402mg，1.894mmol)在1，4-二噁烷(9mL)、水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-phos(45.2mg，0.095mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(43.4mg，0.047mmol)，再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌4h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释，并用EtOAc萃取(3X 10mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用100-200目硅胶，并用2-3％MeOH/DCM洗脱，得到纯的(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(1H-吡唑-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(100mg，0.280mmol，29.5％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：349.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.58(s，1H)，12.8-11.0(br，1H)，9.50(d，J＝1.5Hz，1H)，8.41(dd，J＝2.6，1.5Hz，1H)，8.34(d，J＝2.6Hz，1H)，7.69(d，J＝2.0Hz，1H)，7.60(d，J＝7.9Hz，1H)，7.41(d，J＝7.6Hz，1H)，6.97(d，J＝17.7Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.33-3.14(m，3H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.35(dddd，J＝14.0，9.9，6.1，4.1Hz，1H)，2.17-2.02(m，1H)。
实施例192
合成(9S)-N-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰1,500mg，1.532mmol)在四氢呋喃(500mL)中的溶液中加入DMAP(562mg，4.60mmol)和2-(嘧啶-2-基)乙酸苯酯(985mg，4.60mmol)。将反应混合物在65℃搅拌28小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用EtOAc萃取(2X 75mL)。将合并的有机层用水洗涤，用饱和食盐水溶液饱和，用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗品，其为白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf-0.4；UV活性)。将粗产物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，并将产物用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(9S)-N-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(320mg，0.711mmol，46.4％产率)，其为近白色固体。LCMS(m/z)448.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.80(s，1H)，8.62(d，J＝4.8Hz，2H)，7.36(d，J＝8.6Hz，1H)，7.15(t，J＝4.8Hz，1H)，6.61(d，J＝8.6Hz，1H)，4.69(s，1H)，4.30(d，J＝12.7Hz，1H)，4.20(d，J＝13.0Hz，1H)，3.26(d，J＝1.9Hz，1H)，3.20-2.89(m，4H)，2.79(d，J＝13.4Hz，1H)，2.55(d，J＝10.8Hz，1H)，1.99(d，J＝12.6Hz，2H)，1.82(h，J＝6.1Hz，2H)，1.72-1.44(m，2H)，1.42-1.15(m，2H)。
实施例193
合成4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸
将磷酸三钾(6.03g，28.4mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(3g，9.47mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3-二氧杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酸甲酯(3.02g，11.37mmol)在1，4-二噁烷(25mL)和水(4.17mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(0.434g，0.474mmol)和X-phos(0.452g，0.947mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和EtOAc(200mL)之间分配。将水层用饱和柠檬酸溶液中和，将沉淀的固体过滤和干燥。将粗品固体用甲醇和水研磨，得到4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸(272mg，0.667mmol，7.04％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：20％MeOH的DCM溶液，Rf：0.1；UV活性)，LCMS(m/z)：404.1[M+H]+。
1H NMR(DMSO-d6，400MHz)：δ13.66(s，1H)，9.37(d，J＝0.8Hz，1H)，8.87(d，J＝4.8Hz，1H)，8.62(s，1H)，8.42(s，1H)，8.38-8.34(dd，J＝8.4，2.4Hz，2H)，7.887(d，J＝8Hz，1H)，7.762(d，J＝8.4Hz，1H)5.53-5.51(dd，J＝5.6，2.8Hz，1H)，3.31-3.23(m，1H)，3.15-3.09(m，2H)，3.08-2.97(dd，J＝12，2.8Hz，1H)，2.28-2.24(m，1H)，2.02-1.97(m，1H)。
实施例194
合成(4S)-N-(6-甲基吡啶-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(282mg，0.951mmol)，并搅拌1h。然后在30℃加入Et3N(1.105mL，7.93mmol)和6-甲基吡啶-3-胺(257mg，2.378mmol)，并将反应混合物在65℃加热16h。将反应混合物倒入冷水(50ml)中，并用DCM(2x 50ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：0-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(6-甲基吡啶-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(320mg，0.829mmol，52％产率)，其为米色固体(TLC：4％MeOH的DCM溶液，Rf：0.35)，LCMS(m/z)：387.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.94(s，1H)，8.66(d，J＝5.26Hz，1H)，8.56(d，J＝2.63Hz，1H)，8.00(dd，J＝8.44，2.74Hz，1H)，7.63(d，J＝8.14Hz，1H)，7.57(s，1H)，7.50(d，J＝5.35Hz，1H)，7.25-7.38(m，1H)，7.13(d，J＝8.55Hz，1H)，5.70(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.10-3.35(m，3H)，3.02(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.58(s，3H)，2.48(s，3H)2.03-2.22(m，1H)2.34(dddd，J＝14.03，9.87，5.92，4.17Hz，1H)。
实施例195
合成(9S)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在30℃，向(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(600mg，2.253mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入三乙胺(0.942mL，6.76mmol)和三光气(334mg，1.126mmol)，并搅拌1h。然后在30℃加入4，5-二甲基噻唑-2-胺盐酸盐(556mg，3.38mmol)，并将反应物在70℃加热16h。将溶剂在减压下蒸除，将残余物用水(40ml)稀释，并用DCM(2x 40ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱和制备型HPLC纯化，得到(9S)-N-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(275mg，0.655mmol，42％产率)，其为淡黄色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.3)，LCMS(m/z)：421.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 14.79(s，2H)，8.64(d，J＝5.26Hz，2H)，8.02(s，1H)，7.64(dd，J＝5.26，1.53Hz，1H)，7.54(q，J＝8.11Hz，1H)，4.99(s，1H)，3.42-3.18(m，3H)，3.12-2.89(m，1H)，2.79(s，3H)，2.28(s，3H)，2.22(s，3H)，2.00-1.75(m，1H)，1.52-1.35(m，2H)。
实施例196
合成(4S)-7-(2-(二甲基氨基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.947mmol)、K3PO4(603mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(30mL)和水(0.3mL)中的脱气的溶液中加入x-phos(45.2mg，0.095mmol)和乙酸钯(II)(10.63mg，0.047mmol)。然后将反应混合物在120℃搅拌12h。将溶剂在减压下蒸除，并用DCM(2x 40ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用无水硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(2-(二甲基氨基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(210mg，0.496mmol，52.3％产率)，其为近白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.2)，LCMS(m/z)：403.31[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.56(s，1H)，9.54(s，1H)，8.25-8.11(m，3H)，7.62(m，J＝7.89Hz，1H)，7.41(d，J＝7.89Hz，1H)，7.19-7.01(m，2H)，5.72(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.31-3.14(m，9H)，3.02(dd，J＝12.17，3.18Hz，1H)，2.50-2.23(m，1H)，2.10(d，J＝7.02Hz，1H)。
实施例197
合成(4S)-7-(6-环丙基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将磷酸钾(402mg，1.894mmol)和(6-环丙基吡啶-3-基)硼酸(185mg，1.137mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.947mmol)在1-丁醇(6mL)和水(2.0mL)的混合物中的搅拌的溶液中。充入氩气30min，然后加入Pd2(dba)3(43.4mg，0.047mmol)和X-phos(45.2mg，0.095mmol)，在120℃搅拌反应混合物3h。将反应混合物冷却至室温，用乙酸乙酯(100mL)稀释，用水(30mL)和饱和食盐水(40mL)洗涤。将有机层用Na2SO4干燥，浓缩。将残余物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，80％乙酸乙酯的石油醚溶液为洗脱剂)纯化。将回收的材料通过使用乙醇和戊烷重结晶，得到(4S)-7-(6-环丙基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(130mg，0.322mmol，34.0％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf：0.2)，LCMS(m/z)：400.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.79(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，9.01(dd，J＝2.4，0.8Hz，1H)，8.42-8.22(m，3H)，7.61(d，J＝8.0Hz，1H)，7.45-7.19(m，2H)，5.70(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，3.34-3.16(m，3H)，3.02(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.34(dd，J＝10.1，4.1Hz，1H)，2.19-2.02(m，2H)，1.20-0.96(m，4H)。
实施例198
合成(9S)-N-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.6g，2.253mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入三乙胺(1.884mL，13.52mmol)和三光气(0.669g，2.253mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温加入6-甲氧基吡嗪-2-胺(0.846g，6.76mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温和在减压下浓缩，并在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱使用中性氧化铝纯化，并用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(6-甲氧基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.220g，0.526mmol，23.34％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：418.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.64(s，1H)，9.45-8.78(m，1H)，8.60(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，7.96(d，J＝0.5Hz，1H)，7.80(ddd，J＝5.3，1.7，0.7Hz，1H)，7.62(dt，J＝1.8，0.7Hz，1H)，7.59(s，1H，7.57(s，1H)，7.46(d，J＝8.0Hz，1H)，5.04(t，J＝2.6Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.57-3.26(m，3H)，3.15-2.91(m，1H)，2.64(s，3H)，2.28(d，J＝14.3Hz，1H)，2.12-1.85(m，1H)，1.43(s，2H)。
实施例199
合成(4S)-7-(哌啶-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨.
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)和哌啶(0.375mL，3.79mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中加入Cs2CO3(1852mg，5.68mmol)、x-phos(361mg，0.758mmol)和Pd(OAc)2(85mg，0.379mmol)。将反应混合物在100℃搅拌16h，并将其倒入冷水(20mL)中，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：5％甲醇的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(哌啶-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(284mg，0.762mmol，40.2％产率)，其为淡黄色固体(TLC：Rf：0.2，纯EtOAc)，LCMS(m/z)：366.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.51(s，1H)，9.52(d，J＝1.5Hz，1H)，8.29-8.19(m，1H)，8.18(s，1H)，7.33(d，J＝8.6Hz，1H)，6.29(d，J＝8.6Hz，1H)，5.61(dd，J＝6.1，3.3Hz，1H)，3.55(t，J＝4.9Hz，4H)，3.22(dddd，J＝12.2，8.6，3.7，2.3Hz，1H)，3.16-3.07(m，2H)，2.90(dd，J＝11.8，3.3Hz，1H)，2.34-2.22(m，1H)，2.00(dddd，J＝14.1，8.7，6.8，2.0Hz，1H)，1.78-1.64(m，6H)。
实施例200
合成(4S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(200mg，0.793mmol)、Et3N(0.331mL，2.378mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(118mg，0.396mmol)，并将反应混合物在室温搅拌30分钟。然后滴加1-甲基-1H-吡唑-3-胺(231mg，2.378mmol)在THF(2ml)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16h。将有机溶剂在真空中蒸除，并将粗品用DCM(20ml)稀释。将有机层用水(5mL)、饱和食盐水(5mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在真空中蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(185mg，0.490mmol，61.8％产率)，其为白色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf：0.5)，LCMS(m/z)：376.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.37(s，1H)，8.61(d，J＝5.26Hz，1H)，8.05-7.83(m，1H)，7.68-7.55(m，2H)，7.43(d，J＝7.89Hz，1H)，7.35-7.17(m，1H)，6.63(d，J＝2.19Hz，1H)，5.69(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.84(s，3H)，3.34-3.10(m，3H)，3.00(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.75(s，3H)，2.32(dddd，J＝14.03，9.92，5.97，4.06Hz，1H)2.21-1.99(m，1H)。
实施例201
合成(4S)-N-环丁基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌30min的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)、三乙胺(1.105mL，7.93mmol)和三光气(282mg，0.951mmol)在四氢呋喃(20mL)中的溶液中加入环丁胺(225mg，3.17mmol)在THF(5mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16h，并冷却至室温。将反应混合物倒入冰水中，并用EtOAc萃取(3X 15mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过Grace反相柱纯化，并用30％(0.1％HCOOH的水溶液)/MeOH洗脱，得到(4S)-N-环丁基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(369mg，1.053mmol，66.4％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：350.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ10.76-10.60(m，1H)，8.61(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，7.60(dt，J＝1.6，0.7Hz，1H)，7.55(d，J＝7.8Hz，1H)，7.49(ddd，J＝5.3，1.7，0.7Hz，1H)，7.32(d，J＝7.9Hz，1H)，5.62(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，4.52-4.36(m，1H)，3.28-3.13(m，2H)，3.07(dt，J＝11.9，2.1Hz，1H)，2.94(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.65(s，3H)，2.51-2.39(m，2H)，2.26(dddd，J＝13.9，10.0，6.1，4.1Hz，1H)，2.08-1.90(m，3H)，1.84-1.72(m，2H)。
实施例202
合成((9S)-N-(6-甲基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨：
在25℃，将三光气(0.279g，0.939mmol)加入至(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.25g，0.939mmol)在四氢呋喃(50mL)中的搅拌的溶液中。加入三乙胺(0.654mL，4.69mmol)，然后加入6-甲基吡嗪-2-胺(0.410g，3.75mmol)。将反应混合物在70℃搅拌15h。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和二氯甲烷(50mL)之间分配。将分离的有机层用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.4；UV活性)。将粗品化合物通过使用中性氧化铝纯化，并用100％乙酸乙酯洗脱，得到(9S)-N-(6-甲基吡嗪-2-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.11g，0.272mmol，29.0％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：402.26[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ14.02(s，1H)，9.37(s，1H)，8.68(d，J＝5.26Hz，1H)，8.13-8.26(m，1H)，7.98(dd，J＝5.26，1.75Hz，1H)，7.69-7.80(m，1H)，7.49-7.63(m，2H)，5.03(t，J＝2.19Hz，1H)，3.30-3.47(m，2H)，3.03(br d，J＝13.81Hz，1H)，2.69(s，2H)，2.49-2.59(m，2H)，2.15-2.30(m，1H)，1.84-1.99(m，1H)，1.24-1.66(m，3H)。
实施例203
合成(4S)-N-环丙基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(706mg，2.378mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)和TEA(1.657mL，11.89mmol)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌1hr，并加入环丙胺(272mg，4.76mmol)，并在60℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-N-环丙基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(218mg，0.638mmol，26.8％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：336.24[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.59(s，1H)，8.60(d，J＝5.4Hz，1H)，7.68-7.50(m，2H)，7.42(dd，J＝5.2，1.7Hz，1H)，7.38-7.21(m，1H)，5.66(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，3.36-3.12(m，2H)，3.07(dt，J＝12.0，2.1Hz，1H)，3.01-2.82(m，2H)，2.66(s，3H)，2.27(dddd，J＝13.8，9.9，6.0，4.0Hz，1H)，2.02(dt，J＝14.6，7.3Hz，1H)，0.91-0.79(m，2H)，0.69-0.51(m，2H)。
实施例204
合成(9S)-N-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰II，0.600g，1.838mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入DMAP(0.674g，5.52mmol)和嘧啶-2-基氨基甲酸苯酯(1.187g，5.52mmol)，在65℃搅拌36小时。将反应物冷却至室温，然后在减压下浓缩。将残余物在水(10mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc的己烷溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用35-40％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(嘧啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.375g，0.834mmol，45.4％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：448.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.97(s，1H)，8.59(d，J＝4.8Hz，2H)，7.31(d，J＝8.6Hz，1H)，6.93(t，J＝4.8Hz，1H)，6.40(d，J＝8.6Hz，1H)，4.93(q，J＝2.6Hz，1H)，4.44-4.07(m，2H)，3.31(d，J＝1.9Hz，1H)，3.19(d，J＝3.4Hz，2H)，3.10-2.81(m，3H)，2.44(dtt，J＝15.6，7.7，3.9Hz，1H)，2.29(d，J＝13.4Hz，1H)，2.17-2.07(m，1H)，1.93(dt，J＝13.2，3.3Hz，1H)，1.85(ddd，J＝13.8，5.3，3.1Hz，2H)，1.77-1.68(m，1H)，1.55-1.43(m，1H)，1.31(d，J＝14.0Hz，1H)。
实施例205
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在氮气下，在0℃，将NaH(0.154g，6.43mmol)加入至(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰I，0.350g，1.072mmol)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物在30℃搅拌30分钟，并加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(0.386g，1.609mmol)。将反应混合物在65℃搅拌24小时。将反应混合物冷却至室温，并用甲醇(5mL)淬灭。将反应混合物用水稀释并用EtOAc萃取(2X 100mL)。将有机层用水、然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用Na2SO4干燥，过滤和在减压下浓缩，得到粗品，其为棕色固体。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.320g，0.708mmol，66.0％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：447.34[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.58(s，1H)，8.46-8.04(m，2H)，7.65(ddd，J＝8.9，7.3，1.9Hz，1H)，7.35-7.10(m，1H)，6.94(ddd，J＝7.3，4.9，1.1Hz，1H)，6.38(d，J＝8.6Hz，1H)，5.10-4.73(m，1H)，4.59-4.37(m，1H)，4.31-4.19(m，1H)，3.30(dd，J＝13.4，1.9Hz，1H)，3.26-3.13(m，2H)，3.06-2.88(m，3H)，2.48-2.36(m，J＝16.3，8.3，4.1Hz，1H)，2.21(d，J＝14.4Hz，1H)，2.12(d，J＝12.1Hz，1H)，1.94(s，1H)，1.88-1.68(m，2H)，1.67-1.57(m，1H)，1.50(s，1H)，1.31(d，J＝13.6Hz，1H)。
实施例206
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-3-基甲基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(706mg，2.378mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)和TEA(1.657mL，11.89mmol)在四氢呋喃(30mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌1hr，并加入吡啶-3-基甲胺(514mg，4.76mmol)，并在60℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物通过反相柱(柱：C18，40μm)纯化，并用20％(0.1％HCOOH的水溶液)/MeOH洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-3-基甲基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(193mg，0.498mmol，20.93％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：387.32[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ10.89(t，J＝5.7Hz，1H)，8.75-8.60(m，1H)，8.56(dd，J＝4.8，1.7Hz，1H)，8.40(d，J＝5.3Hz，1H)，7.72(dt，J＝7.9，2.0Hz，1H)，7.57(d，J＝7.9Hz，1H)，7.44-7.21(m，3H)，7.15(dd，J＝5.3，1.8Hz，1H)，5.66(dd，J＝5.9，3.2Hz，1H)，4.63(d，J＝5.4Hz，2H)，3.37-3.15(m，2H)，3.11(dt，J＝12.2，2.1Hz，1H)，2.98(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.49(s，3H)，2.39-2.23(m，1H)，2.05(dt，J＝14.6，7.8Hz，1H)。
实施例207
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-3-基甲基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将三光气(706mg，2.378mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)和TEA(1.657mL，11.89mmol)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物搅拌1hr，并加入吡啶-2-基甲胺(514mg，4.76mmol)，并在60℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。将EtOAc层分离，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.2；UV活性)。将粗品化合物通过反相柱(柱：C18，40μm)纯化，并用20％(0.1％HCOOH的水溶液)/MeOH洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶-2-基甲基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(190mg，0.492mmol，20.67％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：387.22[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ11.04(t，J＝5.4Hz，1H)，8.45(d，J＝5.2Hz，1H)，8.40(dt，J＝4.7，1.5Hz，1H)，7.64(td，J＝7.7，1.9Hz，1H)，7.60-7.49(m，2H)，7.44(dd，J＝5.3，1.7Hz，1H)，7.36(d，J＝7.8Hz，1H)，7.33-7.22(m，1H)，7.22-7.10(m，1H)，5.68(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，4.78(d，J＝5.0Hz，2H)，3.34-3.04(m，3H)，2.97(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.49(s，3H)，2.28(dddd，J＝13.8，10.0，5.9，4.0Hz，1H)，2.06(dt，J＝14.5，7.3Hz，1H)。
实施例208
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1，2，4-三嗪-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.250g，0.991mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入三乙胺(2.486mL，17.83mmol)和三光气(0.294g，0.991mmol)。然后将反应混合物在室温搅拌30分钟。在室温加入1，2，4-三嗪-5-胺(0.286g，2.97mmol)。然后将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，并完全蒸除溶剂，并在水(20mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用100％EtOAc洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(1，2，4-三嗪-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.044g，0.117mmol，11.76％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：375.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.23(s，1H)，10.27(d，J＝2.0Hz，1H)，9.27(d，J＝2.1Hz，1H)，8.65(dd，J＝5.3，0.8Hz，1H)，7.96(dt，J＝1.9，0.7Hz，1H)，7.73-7.61(m，2H)，7.54(d，J＝8.0Hz，1H)，5.69(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.31-3.14(m，3H)，3.05(dd，J＝12.2，3.3Hz，1H)，2.73(s，3H)，2.38(dddd，J＝13.9，9.9，6.1，4.2Hz，1H)，2.15-2.02(m，1H)。
实施例209
(4S)-N-环己基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(294mg，0.991mmol)，并在室温搅拌30min。向其中加入三乙胺(1.381mL，9.91mmol)和环己胺(255mg，2.58mmol)，并将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x15ml水淬灭，并用2x20ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱纯化，得到纯的化合物(4S)-N-环己基-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(265mg，0.701mmol，35.4％产率)，其为近白色固体，(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：378.36[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 10.36(d，J＝7.02Hz，1H)，8.59(d，J＝5.26Hz，1H)，7.56(d，J＝5.26Hz，1H)，7.54-7.52(m，1H)，7.45(dd，J＝5.15，1.21Hz，1H)，7.29(d，J＝7.89Hz，1H)，5.64(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.87-3.74(m，1H)，3.06-3.30(m，3H)，2.95(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.65(s，3H)，2.26(dddd，J＝14.00，9.89，5.92，4.17Hz，1H)，2.14-1.98(m，3H)，1.81-1.61(m，3H)，1.45-1.14(m，5H)。
实施例210
合成(9S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰II，0.600g，1.838mmol)在四氢呋喃(THF)(30mL)中的溶液中加入DMAP(0.674g，5.52mmol)和(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯酯(1.281g，5.52mmol)。将反应混合物在65℃搅拌36小时。将反应物冷却至室温和在减压下浓缩。将残余物在水(10mL)和EtOAc(50mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc的己烷溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用25-30％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.288g，0.608mmol，33.1％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：465.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.62(s，1H)，8.20(ddd，J＝9.2，4.1，0.6Hz，1H)，8.09(s，1H)，7.39(ddd，J＝9.1，7.8，3.0Hz，1H)，7.30(d，J＝8.5Hz，1H)，6.39(d，J＝8.6Hz，1H)，4.87(p，J＝2.8Hz，1H)，4.30(dtt，J＝12.5，3.7，1.8Hz，2H)，3.31(dd，J＝13.4，1.9Hz，1H)，3.25-3.13(m，2H)，3.07-2.85(m，3H)，2.44(dt，J＝7.4，3.6Hz，1H)，2.26-2.05(m，2H)，1.99-1.83(m，2H)，1.78-1.66(m，1H)，1.62(dd，J＝12.4，3.8Hz，1H)，1.53-1.44(m，1H)，1.37-1.26(m，1H)。
实施例211
合成(9S)-N-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来中间体SFC分离的峰I，600mg，1.838mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入DMAP(674mg，5.52mmol)和吡啶-3-基氨基甲酸苯酯(1182mg，5.52mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x75mL)萃取。将合并的有机层用水洗涤，用饱和食盐水溶液饱和，并用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗品，其为白色固体(TLC洗脱剂：100％纯的乙酸乙酯；Rf值：0.4；UV活性)。将粗产物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(9S)-N-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(350mg，0.782mmol，42.5％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：447.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.94(s，1H)，8.62(dd，J＝2.6，0.7Hz，1H)，8.32(dd，J＝4.7，1.5Hz，1H)，8.15(ddd，J＝8.4，2.7，1.5Hz，1H)，7.33(d，J＝8.5Hz，1H)，7.29-7.24(m，1H)，6.41(d，J＝8.6Hz，1H)，4.90(t，J＝2.6Hz，1H)，4.22-4.04(m，2H)，3.31(dd，J＝13.5，1.9Hz，1H)，3.25-3.14(m，2H)，2.99-2.88(m，3H)，2.48-2.36(m，1H)，2.25-2.18(m，1H)，2.13(dd，J＝13.2，4.0Hz，1H)，1.98-1.92(m，1H)，1.85(tdd，J＝13.9，5.2，2.9Hz，1H)，1.71(dtd，J＝16.5，8.3，7.7，4.3Hz，1H)，1.63(d，J＝3.8Hz，1H)，1.57-1.44(m，1H)，1.33(d，J＝14.2Hz，1H)。
实施例212
合成(4S)-N-(1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(30ml)中的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并在室温搅拌1h。然后依次加入1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-胺(415mg，3.09mmol)和三乙胺(1.657mL，11.89mmol)，并将反应物在密封管中在70℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，倒入饱和NaHCO3溶液(150mL)中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用1％甲醇的二氯甲烷溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-N-(1H-咪唑并[4，5-b]吡啶-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(160mg，0.388mmol，25％)，其为淡黄色固体(TLC：5％甲醇的DCM溶液，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：413.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ13.43(s，1H)，12.30-11.54(m，1H)，8.72(d，J＝5.4Hz，1H)，8.34(s，1H)，8.19-8.10(m，3H)，8.04(d，J＝8.7Hz，1H)，7.80(d，J＝8.0Hz，1H)，7.72(d，J＝8.0Hz，1H)，5.55(dd，J＝6.0，3.1Hz，1H)，3.12(d，J＝11.5Hz，2H)，2.98(d，J＝3.3Hz，1H)，2.95(d，J＝3.3Hz，1H)，2.70(s，3H)，2.25(m，J＝13.9，4.7Hz，1H)，1.96(dt，J＝14.3，7.4Hz，1H)。
实施例213
合成(4S)-N-(6-氟吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，将三乙胺(1.105mL，7.93mmol)和三光气(235mg，0.793mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的搅拌的溶液中，30min后，加入6-氟吡嗪-2-胺(359mg，3.17mmol)，并加热至70℃保持16h。将反应混合物冷却至室温后，将有机溶剂通过旋转蒸发仪除去。将残余物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x60mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(60mL)洗涤，并用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，2％MeOH的DCM溶液为洗脱剂)纯化，得到(4S)-N-(6-氟吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(210mg，0.522mmol，32.9％产率)，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：392.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.82(s，1H)，9.48(d，J＝4.6Hz，1H)，8.66(d，J＝5.3Hz，1H)，8.15(d，J＝8.4Hz，1H)，7.92(d，J＝2.2Hz，1H)，7.71-7.40(m，2H)，7.26(s，1H)，5.75-5.63(m，1H)，3.26(dd，J＝9.7，6.9Hz，3H)，3.05(d，J＝3.3Hz，1H)，2.75(s，3H)，2.36(dddd，J＝13.9，9.9，5.9，3.9Hz，1H)，2.16-1.93(m，1H)。
实施例214
合成(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(800mg，2.53mmol)和4-(三氟甲基)哌啶(580mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(15mL)中的脱气的溶液中加入Cs2CO3(2469mg，7.58mmol)，并充入氩气15min，然后加入x-phos(241mg，0.505mmol)、乙酸钯(II)(56.7mg，0.253mmol)。将反应混合物在密封管中在100℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，倒入冷水(30mL)中，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，使用2％MeOH的DCM溶液梯度作为洗脱剂)纯化，得到(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(4-(三氟甲基)哌啶-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(255mg，0.559mmol，22.13％产率)，其为近白色固体(TLC：100％乙酸乙酯，Rf＝0.3)，LCMS(m/z)：434.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.39(s，1H)，9.54(d，J＝1.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.5Hz，1H)，8.19(dd，J＝2.6，1.6Hz，1H)，7.37(d，J＝8.6Hz，1H)，6.32(d，J＝8.6Hz，1H)，5.62(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，4.41-4.30(m，2H)，3.30-3.18(m，1H)，3.16-3.08(m，2H)，3.00-2.88(m，3H)，2.37-2.19(m，2H)，2.09-1.97(m，3H)，1.75-1.61(m，2H)。
实施例215
合成(9S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
在室温，将DMAP(0.573g，4.69mmol)加入至(9S)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(0.5g，1.877mmol)和(1-甲基-1H-吡唑-4-基)氨基甲酸苯酯(1.01g，4.692mmol)在四氢呋喃(10mL)中的搅拌的溶液中，并在密封管中在80℃加热24h。将反应混合物冷却至28℃，并用乙酸乙酯和水稀释。分离有机层，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf-0.4；UV活性)。将粗品化合物通过使用中性氧化铝纯化，并用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(9S)-N-(1-甲基-1H-吡唑-4-基)-2-(2-甲基吡啶-4-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.17g，0.430mmol，22.89％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：390.28[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.27(s，1H)，8.67(d，J＝5.26Hz，1H)，7.87(s，1H)，7.63(d，J＝1.53Hz，1H)，7.53-7.57(m，2H)，7.43(d，J＝0.66Hz，1H)，7.40(s，1H)，4.99(t，J＝2.30Hz，1H)，3.89(s，3H)，3.22-3.42(m，3H)，2.98(br d，J＝13.59Hz，1H)，2.70(s，3H)，2.20-2.28(m，1H)，1.92(tdd，J＝13.67，13.67，5.54，3.07Hz，1H)，1.32-1.50(m，2H)。
实施例216
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐
在0℃，将2.0M氯化氢的乙醚溶液(2mL，4.00mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(250mg，0.624mmol)中。将反应混合物在28℃搅拌4h和浓缩，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物用乙醚(2x5mL)洗涤，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-3-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(274mg，0.606mmol，97％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：401.1[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CD3OD)：δ8.89(s，2H)，8.72(d，J＝4.7Hz，1H)，8.65(d，J＝6.7Hz，1H)，8.44(s，1H)，8.32(s，1H)，8.17(d，J＝7.1Hz，1H)，8.06-7.92(m，2H)，5.67(d，J＝5.2Hz，1H)，3.99-3.75(m，6H)，3.32-3.20(m，2H)，2.93(s，3H)，2.72-2.53(m，1H)，2.42-2.37(s，1H)。
实施例217
合成((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(3-甲基吡咯烷-1-基)甲酮
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1.5g，5.94mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中加入三光气(0.882g，2.97mmol)，并在室温搅拌30min。30分钟后，加入三乙胺(4.14mL，29.7mmol)和3-甲基吡咯烷(0.658g，7.73mmol)，然后将反应混合物在60℃搅拌16小时。将反应混合物用2x25ml水淬灭，并用2x50ml乙酸乙酯萃取，将有机层用硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过柱色谱纯化，并进行SFC，分离的峰为峰I，分离得到((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(3-甲基吡咯烷-1-基)甲酮(210mg，0.574mmol，9.65％产率)，其为淡棕色固体，和峰II，分离得到((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)(3-甲基吡咯烷-1-基)甲酮(180mg，0.494mmol，6.79％产率)，其为淡棕色固体，(Rf值：0.4，10％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：364.32[M+H]+。
峰-1
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.50(d，J＝5.04Hz，1H)，7.76(d，J＝0.66Hz，1H)，7.68(dd，J＝5.26，1.10Hz，1H)，7.52-7.48(m，1H)，7.47-7.38(m，1H)，4.40(br d，J＝2.85Hz，1H)，3.48(br s，3H)，3.16-2.98(m，4H)，2.89(dd，J＝11.62，3.29Hz，1H)，2.53-2.46(m，3H)，2.32-2.20(m，3H)，2.14(br d，J＝4.60Hz，2H)，1.48(dt，J＝19.51，9.76Hz，1H)，1.12-0.98(m，2H)。
峰II
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δppm 8.48(d，J＝5.26Hz，1H)，7.76(s，1H)，7.68(dd，J＝5.26，1.32Hz，1H)，7.40-7.54(m，2H)，4.44(br s，1H)，3.36-3.69(m，3H)，2.99-3.18(m，4H)，2.89(dd，J＝11.62，3.29Hz，1H)，2.03-2.33(m，4H)，1.81-1.52(m，2H)，1.01(br s，2H)。
实施例218
合成(4S)-N-(5-甲基吡啶-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在30℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(423mg，1.427mmol)，并搅拌1h。然后在30℃加入Et3N(1.657mL，11.89mmol)和5-甲基吡啶-3-胺(771mg，7.13mmol)，并将反应混合物在65℃加热16h。将反应混合物倒入冷水(50ml)中，并用DCM(2x 50ml)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用硫酸钠干燥，并将溶剂在减压下蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：0-15％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(5-甲基吡啶-3-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.777mmol，45％产率)，其为黄色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：387.36[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.00(s，1H)，8.66(d，J＝5.04Hz，1H)，8.47(s，1H)，8.16(s，1H)，7.99(s，1H)，7.71-7.57(m，2H)，7.50(d，J＝5.26Hz，1H)，7.38(d，J＝7.89Hz，1H)，5.70(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.37-3.10(m，3H)，3.03(dd，J＝12.06，3.07Hz，1H)，2.68(s，3H)，2.45-2.25(m，4H)，2.22-1.98(m，1H)。
实施例219
合成(4S)-N-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入三光气(353mg，1.189mmol)，并在27℃搅拌2h，然后在27℃加入苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-胺(391mg，2.85mmol)和N-乙基-N-异丙基丙-2-胺(307mg，2.378mmol)，加热至50℃保持16h。将反应物冷却至室温，并将反应混合物倒入饱和NaHCO3溶液中，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用2％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-N-(苯并[d][1，3]二氧杂环戊烯-5-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(270mg，26.2％产率)(TLC：洗脱剂，5％甲醇的DCM溶液；Rf＝0.4)，LCMS(m/z)：416.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.81(s，1H)，8.63(d，J＝5.26Hz，1H)，7.64-7.59(m，2H)，7.49(dd，J＝5.15，1.43Hz，1H)，7.37-7.31(m，2H)，6.85(dd，J＝8.33，2.19Hz，1H)，6.75(d，J＝8.33Hz，1H)，5.97-5.92(m，2H)，5.73-5.66(m，1H)，3.33-3.10(m，3H)，3.01(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.65(s，3H)，2.32(dddd，J＝14.11，9.84，5.86，4.17Hz，1H)，2.09(dt，J＝14.03，6.80Hz，1H)。
实施例220
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐.
在0℃，将2.0M氯化氢的乙醚溶液(2mL，4.00mmol)加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.749mmol)中。将反应混合物在28℃搅拌4h和浓缩，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物用乙醚(3x5mL)洗涤，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(2-(吡啶-2-基)乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨盐酸盐(296mg，0.675mmol，90％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)401.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ9.88(t，J＝5.9Hz，1H)，8.89(d，J＝6.1Hz，1H)，8.66(dd，J＝5.6，1.7Hz，1H)，8.40-8.35(m，1H)，8.31-8.29(m，1H)，8.14(dd，J＝6.2，1.9Hz，1H)，8.08(d，J＝7.8Hz，1H)，7.95(dd，J＝7.9，4.9Hz，2H)，7.74(t，J＝6.7Hz，1H)，5.40(dd，J＝5.6，2.9Hz，1H)，3.97-3.78(m，2H)，3.58-3.26(m，6H)，2.84(s，3H)，2.32-2.25(m，1H)，2.19-2.03(m，1H)。
实施例221
合成(4S)-7-(哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(359mg，0.770mmol)在THF(5mL)中的溶液中加入2M HCl的乙醚溶液(1.924mL，3.85mmol)，并将反应混合物在35℃搅拌4h，并将反应混合物冷却至0℃，用NaHCO3水溶液中和，并用CH2Cl2(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(277mg，0.741mmol，96％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf：0.3；5％MeOH的DCM溶液)，LCMS(m/z)：367.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.41(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，8.24(d，J＝2.5Hz，1H)，8.17(dd，J＝2.5，1.5Hz，1H)，7.38(d，J＝8.6Hz，1H)，6.30(d，J＝8.6Hz，1H)，5.62-5.55(m，1H)，3.63(t，J＝5.2Hz，4H)，3.26-3.17(m，1H)，3.17-3.06(m，6H)，2.92(dd，J＝11.9，3.3Hz，1H)，2.27(dddd，J＝13.7，9.9，6.2，3.8Hz，1H)，2.07-1.96(m，2H)。
实施例222
合成(4S)-7-(4-甲基哌啶-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、4-甲基哌啶(376mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的脱气的溶液中加入Cs2CO3(1852mg，5.68mmol)、x-phos(361mg，0.758mmol)和Pd(OAc)2(106mg，0.474mmol)。将反应混合物在110℃搅拌16h，并倒入冷水(20mL)中，用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：4％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(4-甲基哌啶-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.775mmol，40.9％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf：0.4；纯EtOAc)，LCMS(m/z)：380.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.51(s，1H)，9.52(d，J＝1.5Hz，1H)，8.23(dd，J＝2.5，0.4Hz，1H)，8.20(dd，J＝2.5，1.5Hz，1H)，7.33(d，J＝8.6Hz，1H)，6.30(d，J＝8.7Hz，1H)，5.61(dd，J＝6.1，3.2Hz，1H)，4.20(ddd，J＝11.4，3.6，2.1Hz，2H)，3.22(dddd，J＝12.3，8.6，3.7，2.2Hz，1H)，3.15-3.05(m，2H)，3.00-2.86(m，3H)，2.26(dddd，J＝13.8，9.9，6.2，3.8Hz，1H)，2.04-1.94(m，1H)，1.84-1.72(m，2H)，1.68-1.60(m，1H)，1.33-1.18(m，2H)，0.99(d，J＝6.5Hz，3H)。
实施例223
合成(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将K3PO4(535mg，2.53mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.263mmol)和(2，6-二甲基吡啶-3-基)硼酸(248mg，1.642mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(1mL)中的搅拌的溶液中，然后脱气15min，并加入X-phos(60.2mg，0.126mmol)和Pd2(dba)3(57.8mg，0.063mmol)，然后将反应物在90℃加热2h 45min，然后冷却至室温，经硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(10mLx2)洗涤，在减压下从滤液中除去有机溶剂。将水层用乙酸乙酯(20mLx2)萃取，用水(20mLx2)、饱和食盐水(20mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机溶剂在真空下除去，得到粗品化合物。将上述化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用80％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(330mg，0.848mmol，67.2％产率)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf：0.3，UV活性)，LCMS(m/z)：388.28[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.5(s，1H)，9.45(s，1H)，8.22-8.25(m，1H)，8.18-8.20(m，1H)，7.77(d，1H，J＝7.6Hz)，7.6(d，1H，J＝8Hz)，7.08-7.14(m，2H)，5.68-5.72(m，1H)，3.18-3.34(m，3H)，3.01-3.06(m，1H)，2.65(s，3H)，2.5(s，3H)，2.31-2.39(m，1H)，2.08-2.15(m，1H)。
实施例224
合成(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将K3PO4(537mg，2.53mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.267mmol)和(2，6-二甲基吡啶-3-基)硼酸(249mg，1.647mmol)在1，4-二噁烷(15mL)和水(1mL)中的搅拌的溶液中，然后脱气15min，并加入二环己基(2′，4′，6′-三异丙基-[1，1′-联苯]-2-基)膦(60.4mg，0.127mmol)和Pd2(dba)3(58.0mg，0.063mmol)，并在100℃加热2h 45min。将反应混合物冷却至室温，经硅藻土垫过滤，用乙酸乙酯(10mLx2)洗涤，在减压下除去滤液的溶剂。将有机化合物用乙酸乙酯(20mLx2)萃取。将合并的有机层用水(20mLx2)、饱和食盐水(20mL)洗涤，并用Na2SO4干燥。将有机溶剂在真空下除去，得到粗品化合物。将上述粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，将化合物用90％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱)纯化，得到(4S)-7-(2，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(304mg，0.777mmol，61.3％产率)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf：0.4，UV活性)，LCMS(m/z)：387.31[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.13(s，1H)，8.33-8.35(m，1H)，8.24-8.26(m，1H)，8.10-8.14(m，1H)，7.6(d，1H，J＝7.6Hz)，7.59(d，1H，J＝8Hz)，7.19-7.24(m，1H)，7.15(d，1H，J＝8Hz)，7.05(d，1H，J＝7.6Hz)，5.67-5.71(m，1H)，3.35-3.4(m，1H)，3.19-3.25(m，2H)，3.1-3.36(m，1H)，2.6(s，6H)，2.29-2.38(m，1H)，2.17-2.26(m，1H)。
实施例225
合成(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
将叠氮磷酸二苯酯(1.996g，7.25mmol)加入至吡嗪-2-甲酸(来自中间体SFC分离的峰II，0.600g，4.83mmol)和DIPEA(4.22mL，24.17mmol)在四氢呋喃(THF)(60mL)中的搅拌的溶液中，通氩气在室温搅拌。将反应混合物在室温搅拌2小时，并加入(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(1.105g，3.38mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，在减压下浓缩。将残余物在水(30mL)和EtOAc(100mL)之间分配。分离有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.367g，0.815mmol，16.86％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：448.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.79(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，8.25(d，J＝2.5Hz，1H)，8.20(d，J＝1.6Hz，1H)，7.32(d，J＝8.6Hz，1H)，6.42(d，J＝8.6Hz，1H)，4.90(s，1H)，4.28(s，2H)，3.32(dd，J＝13.5，1.9Hz，1H)，3.21(dd，J＝12.5，3.3Hz，2H)，3.10-2.86(m，3H)，2.44(dt，J＝7.6，3.6Hz，1H)，2.28-2.18(m，1H)，2.11(d，J＝3.6Hz，1H)，1.99-1.80(m，2H)，1.78-1.65(m，1H)，1.65-1.60(m，1H)，1.49(s，1H)，1.35(s，1H)。
实施例226
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(6-甲基噻唑并[3，2-b][1，2，4]三唑-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.189mmol)、三乙胺(0.829mL，5.94mmol)和三光气(212mg，0.713mmol)在四氢呋喃(10mL)中的溶液在室温搅拌30min，经1min滴加6-甲基噻唑并[3，2-b][1，2，4]三唑-2-胺(367mg，2.378mmol)在THF(2mL)中的溶液。将反应混合物在65℃搅拌16h，并冷却至室温。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取(3X 10mL)。然后将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物通过反相柱纯化，用90％(0.1％HCOOH的水溶液)/MeOH洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(6-甲基噻唑并[3，2-b][1，2，4]三唑-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(390mg，0.892mmol，75％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：433.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.88(s，1H)，8.63(d，J＝5.2Hz，1H)，7.91(d，J＝1.9Hz，1H)，7.69-7.52(m，2H)，7.46(d，J＝8.0Hz，1H)，6.48(d，J＝1.6Hz，1H)，5.75(dd，J＝5.9，3.1Hz，1H)，3.35-3.10(m，3H)，3.02(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.72(s，3H)，2.57(d，J＝1.4Hz，3H)，2.40-2.25(m，1H)，2.19-2.05(m，1H)。
实施例227
合成(4S)-7-((S)-3-(羟基甲基)吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将Cs2CO3(5778mg，17.74mmol)和(S)-吗啉-3-基甲醇(390mg，3.33mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.217mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的搅拌的溶液中，并充入氩气25min，然后加入乙酸钯(II)(49.8mg，0.222mmol)和X-phos(211mg，0.443mmol)。将反应物在100℃搅拌8h，然后将反应混合物冷却至室温。将有机溶剂通过旋转蒸发仪除去，用水(60mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，用Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗品残余物。将粗品残余物通过柱色谱(硅胶：100-200目，2％甲醇的二氯甲烷溶液为洗脱剂)纯化，得到(4S)-7-((S)-3-(羟基甲基)吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(275mg，0.691mmol，31.2％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：397.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.38(s，1H)，8.51(d，J＝2.6Hz，1H)，8.36-8.24(m，1H)，8.16(ddd，J＝8.4，2.7，1.5Hz，1H)，7.44-7.16(m，2H)，6.25(d，J＝8.6Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.2，3.2Hz，1H)，4.06(d，J＝7.4Hz，2H)，3.81(t，J＝2.7Hz，2H)，3.69-3.48(m，2H)，3.38-3.03(m，4H)，2.90(dd，J＝11.8，3.3Hz，1H)，2.26(dd，J＝10.1，3.9Hz，1H)，2.11-1.87(m，1H)，1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。
实施例228
合成(4S)-7-((R)-3-甲基吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将(R)-3-甲基吗啉(320mg，3.17mmol)和碳酸铯(516mg，1.583mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.583mmol)在1，4-二噁烷(8mL)中的搅拌的溶液中，并脱气30min。然后在室温将Pd(OAc)2(71.1mg，0.317mmol)和X-phos(755mg，1.583mmol)加入反应混合物中，并再次脱气15min。将反应混合物在110℃搅拌6h，然后冷却至室温，用水(30mL)稀释，用乙酸乙酯(2X50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(20mL)洗涤，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-((R)-3-甲基吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(100mg，0.258mmol，16.27％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf0.4，10％MeOH的DCM溶液)，LCMS(m/z)：381.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.38(s，1H)，8.51(d，J＝2.6Hz，1H)，8.36-8.24(m，1H)，8.16(ddd，J＝8.4，2.7，1.5Hz，1H)，7.44-7.16(m，2H)，6.25(d，J＝8.6Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.2，3.2Hz，1H)，4.06(d，J＝7.4Hz，2H)，3.81(t，J＝2.7Hz，2H)，3.69-3.48(m，2H)，3.38-3.03(m，4H)，2.90(dd，J＝11.8，3.3Hz，1H)，2.26(dd，J＝10.1，3.9Hz，1H)，2.11-1.87(m，1H)，1.26(d，J＝6.6Hz，3H)。
实施例229
合成(4S)-N-(6-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-N-(6-(((R)-2，2-二甲基-1，3-二氧杂环戊烷-4-基)甲氧基)吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.4g，0.794mmol)在二氯甲烷(10mL)中的溶液中加入4M HCl的二噁烷溶液(0.198g，1.589mmol)。然后将反应混合物在35℃搅拌6h。将反应混合物用NaHCO3溶液中和，并用DCM(2x 30ml)萃取。将合并的有机层用水(20ml)、饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，并在减压下蒸发，得到粗产物。将粗品化合物用乙醚(40ml)和戊烷(20ml)研磨，得到纯的产物(4S)-N-(6-((S)-2，3-二羟基丙氧基)吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.21g，0.453mmol，65％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的乙酸乙酯溶液，Rf：0.2)，LCMS(m/z)：464.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.99(s，1H)，9.33(d，J＝2.19Hz，1H)，9.13(s，1H)，8.00(d，J＝7.78Hz，2H)，7.97(s，1H)，7.64(d，J＝8.11Hz，1H)，7.19-7.37(m，2H)，5.87(brs，1H)，5.73(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，4.74(dd，J＝10.96，5.70Hz，1H)，4.40(dd，J＝10.96，7.45Hz，1H)，4.08-4.30(m，1H)，3.65-3.90(m，2H)，3.10-3.34(m，4H)，3.02(dd，J＝12.28，3.29Hz，1H)，2.62(s，3H)，2.36(dddd，J＝14.14，9.87，5.81，4.17Hz，1H)，2.00-2.22(m，1H)。
实施例230
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡啶并[3，4-b]吡嗪-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(800mg，2.53mmol)和1-甲基哌嗪(379mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(15mL)中的脱气的溶液中加入碳酸铯(2469mg，7.58mmol)、x-phos(241mg，0.505mmol)和乙酸钯(II)(56.7mg，0.253mmol)。将反应混合物在100℃加热16h，倒入冷水(45mL)中，用乙酸乙酯(2x100mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用2％MeOH的DCM溶液洗脱)纯化，得到(4S)-7-(4-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(268mg，0.693mmol，27.5％产率)，其为黄色固体(TLC：100％乙酸乙酯，Rf＝0.23)，LCMS(m/z)：381.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.46(s，2H)，9.53(s，1H)，8.29-8.12(m，2H)，7.36(d，J＝8.55Hz，1H)，6.30(d，J＝8.55Hz，2H)，5.61(dd，J＝5.92，3.29Hz，2H)，3.65-3.63(m，4H)，3.27-3.03(m，3H)，2.91(dd，J＝11.73，3.40Hz，1H)，2.42-2.39(m，1H)，2.39(s，3H)，2.33-2.14-(m，1H)，2.13-1.93(m，1H)。
实施例231
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向5-(三氟甲基)吡嗪-2-胺(1164mg，7.13mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入三乙胺(1.989mL，14.27mmol)和三光气(706mg，2.378mmol)，并搅拌1h。然后加入(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)，并在密封管中在100℃加热15h。将反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水(20mLx2)、饱和食盐水(10mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，减压浓缩得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(5-(三氟甲基)吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(125mg，0.283mmol，32％产率)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂：5％甲醇的DCM溶液，Rf：0.3)，LCMS(m/z)：442.24[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：14.1(s，1H)，9.7(s，1H)，8.66-8.62(m，2H)，8.0(s，1H)，7.69-7.64(m，2H)，7.5(d，J＝8Hz，1H)，5.74-5.69(m，1H)，3.34-3.16(m，3H)，3.08-3.02(m，1H)，2.75(s，3H)，2.32-2.42(m，1H)，2.14-2.06(m，1H)。
实施例232
合成(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)吡啶(776mg，2.84mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3mL)中的溶液用氩气在室温脱气15分钟。加入X-phos(90mg，0.189mmol)和Pd2(dba)3(87mg，0.095mmol)至反应混合物中。将反应混合物进一步脱气15min，并在90℃搅拌16h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，将滤液蒸发，得到粗品残余物。将粗品残余物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 80mL)萃取。将合并的有机层用水(20mL)然后用饱和食盐水溶液(10mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到棕色固体(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用45-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(360mg，0.824mmol，43.5％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：428.17[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.60(s，1H)，9.52(d，J＝1.1Hz，1H)，9.28(d，J＝2.2Hz，1H)，8.71(dd，J＝8.1，1.97Hz，1H)，8.25-8.33(m，2H)，7.84(d，J＝8.3Hz，1H)，7.67(d，J＝7.9Hz，1H)，7.5(d，J＝8Hz，1H)，5.70(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，3.11-3.36(m，3H)，2.96-3.11(m，1H)，2.22-2.43(m，1H)，1.97-2.21(m，1H)。
实施例233
合成(4S)-N-(异喹啉-5-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.750g，2.97mmol)在四氢呋喃(THF)(40mL)中的溶液中加入三乙胺(2.486mL，17.83mmol)和三光气(0.882g，2.97mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后加入异喹啉-5-胺(1.286g，8.92mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时，然后将反应混合物冷却至室温和在减压下浓缩。将残余物在水(30mL)和二氯甲烷(100mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用100％二氯甲烷洗脱，得到纯的(4S)-N-(异喹啉-5-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.315g，0.743mmol，25.00％产率)，其为off-白色固体，LCMS(m/z)：423.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.21(s，1H)，9.20(s，1H)，8.88(d，J＝2.19Hz，1H)，8.37(d，J＝7.23Hz，1H)，7.94(d，J＝6.14Hz，1H)，7.88(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.75(d，J＝8.11Hz，1H)，7.61-7.69(m，2H)，7.47(d，J＝5.92Hz，1H)，7.31(d，J＝7.89Hz，1H)，7.08(d，J＝7.89Hz，1H)，5.77(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.21-3.36(m，3H)，3.06(dd，J＝12.06，3.07Hz，1H)，2.59(s，3H)，2.32-2.43(m，1H)，2.17(dt，J＝14.03，7.02Hz，1H)。
实施例234
合成(4S)-7-(2，2-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-.二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向吡嗪-2-甲酸(350mg，2.82mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入叠氮磷酸二苯酯(1164mg，4.23mmol)和DIPEA(2.463mL，14.10mmol)。在氮气下将反应混合物在30℃搅拌2h。加入2，2-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(542mg，1.974mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16h。将溶剂在减压下除去。将粗品用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 30mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)、饱和食盐水溶液洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用10％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱。在减压下浓缩收集的级分，得到(4S)-7-(2，2-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(120mg，0.303mmol，10.74％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：396.3[M+H]+。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.40(s，1H)，9.56(d，J＝1.2Hz，1H)，8.26(d，J＝2.41Hz，1H)，8.06-8.22(m，1H)，7.38(d，J＝8.8Hz，1H)，6.28(d，J＝8.5Hz，1H)，5.63(dd，J＝5.7，3.3Hz，1H)，3.90(t，J＝5Hz，2H)，3.47(s，2H)，3.41(t，J＝5Hz，2H)，3.04-3.31(m，3H)，2.92(dd，J＝11.9，3.18Hz，1H)，2.14-2.35(m，1H)，1.89-2.12(m，1H)，1.36(s，6H)。
实施例235
合成(4S)-7-(6-甲基哒嗪-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.263mmol)、3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)哒嗪(306mg，1.389mmol)和K3PO4(536mg，2.53mmol)在1，4-二噁烷(15mL)和水(2mL)中的脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(14.18mg，0.063mmol)和X-phos(60.2mg，0.126mmol)。然后将反应混合物在100℃搅拌8小时，然后将反应混合物冷却至室温，并在真空下蒸发二噁烷。然后将其用水稀释，并用DCM(3x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，将溶剂在减压下除去，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2-3％MeOH的EtOAc溶液)纯化，得到(4S)-7-(6-甲基哒嗪-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(260mg，0.689mmol，54.6％产率)，其为近白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：375.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.69(s，1H)，9.62-9.53(s，2H)，8.38-8.29(m，3H)，7.71(d，J＝8.11Hz，1H)，7.59(d，J＝8.11Hz，1H)，5.72(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.35-3.15(m，2H)，3.12-3.00(m，2H)，2.90(s，3H)，2.48-2.25(m，1H)，2.11(dt，J＝14.03，6.80Hz，1H)。
实施例236
合成(9S)-N-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向在65℃搅拌的(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰II，0.700g，2.145mmol)在四氢呋喃(THF)(70mL)中的溶液中加入DMAP(0.786g，6.43mmol)和吡啶-3-基氨基甲酸苯酯(1.378g，6.43mmol)，搅拌36小时，然后将反应物冷却至室温和在减压下浓缩。将残余物在水(20mL)和EtOAc(75mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：80％EtOAc的己烷溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用50％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(9S)-N-(吡啶-3-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(0.355g，0.794mmol，37.0％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：447.3[M+H]+。
1H-NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.92(s，1H)，8.62(d，J＝2.63Hz，1H)，8.32(dd，J＝4.71，1.43Hz，1H)，8.08-8.21(m，1H)，7.33(d，J＝8.55Hz，1H)，7.20-7.29(m，1H)，6.40(d，J＝8.55Hz，1H)，4.90(br s，1H)，4.00-4.21(m，2H)，3.31(dd，J＝13.48，1.86Hz，1H)，3.17-3.26(m，2H)，2.88-3.03(m，3H)，2.36-2.49(m，1H)，2.19-2.25(m，1H)，2.10-2.16(m，1H)，1.92-1.99(m，1H)，1.86(tdd，J＝13.84，13.84，5.10，2.96Hz，1H)，1.65-1.76(m，1H)，1.46-1.58(m，2H)，1.29-1.38(m，1H)。
实施例237
合成(4S)-N-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在室温搅拌的(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.750g，2.97mmol)在四氢呋喃(THF)(40mL)中的溶液中加入三乙胺(2.486mL，17.83mmol)和三光气(0.882g，2.97mmol)。将反应混合物在室温搅拌30分钟，然后在室温加入6-氟苯并[d]噻唑-2-胺(1.500g，8.92mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16小时，然后冷却至室温，并将溶剂在减压下除去。将所得残余物在水(30mL)和EtOAc(100mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用100％二氯甲烷洗脱，得到纯的(4S)-N-(6-氟苯并[d]噻唑-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.313g，0.700mmol，23.53％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：447.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 14.74(s，1H)，9.06(d，J＝2.19Hz，1H)，8.43(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.75(dd，J＝8.88，4.71Hz，1H)，7.66(d，J＝8.11Hz，1H)，7.41-7.52(m，3H)，7.14(td，J＝8.99，2.63Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.17-3.33(m，3H)，3.04(dd，J＝12.17，3.18Hz，1H)，2.68(s，3H)，2.32-2.43(m，1H)，2.12(dt，J＝14.20，7.04Hz，1H)。
实施例238
合成(4S)-7-(2-甲基噻唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将氟化铯(767mg，5.05mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(800mg，2.53mmol)、2-甲基-5-(三丁基锡基)噻唑(1177mg，3.03mmol)和三叔丁基膦(511mg，2.53mmol)在1，4-二噁烷(40mL)中的搅拌的溶液中，脱气15min，加入乙酸钯(II)(11.34mg，0.051mmol)和碘化亚铜(I)(19.24mg，0.101mmol)。将反应混合物进一步脱气10min，并在100℃搅拌15小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和EtOAc(125mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤。将滤液蒸发，得到粗品。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，用5％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲基噻唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(230mg，0.600mmol，23.77％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：380.18[M+H]+。
1H-NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.30(s，1H)，9.53(d，J＝1.6Hz，1H)，8.43(s，1H)，8.36-8.35(dd，J＝2.4，1.6Hz，1H)，8.30(d，J＝2.8Hz 1H)，7.53(d，J＝8.0Hz，1H)，7.18(d，J＝8.0Hz，1H)，5.68(dd，J＝6，3.2Hz，1H)，3.28-3.22(m，2H)，3.20-3.13(m，1H)，3.02-2.98(dd，J＝12.4，3.6Hz，1H)，2.78(s，3H)，2.35-2.32(m，1H)，2.10-2.04(m，1H)。
实施例239
合成(9S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自SFC分离的峰I，450mg，1.379mmol)在四氢呋喃(30mL)中的溶液中加入DMAP(505mg，4.14mmol)和(5-氟吡啶-2-基)氨基甲酸苯酯(961mg，4.14mmol)。将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x75mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤和浓缩，得到粗品，其为近白色固体(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯；Rf值：0.4；UV活性)。将粗产物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用25％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(9S)-N-(5-氟吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(140mg，0.296mmol，21.46％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：465.21[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 1.15-1.43(m，1H)1.43-1.68(m，2H)1.68-1.89(m，3H)2.04-2.28(m，2H)2.42(dtd，J＝11.67，7.92，7.92，4.06Hz，1H)2.86-3.09(m，3H)3.10-3.36(m，3H)4.23-4.47(m，2H)4.87(br s，1H)6.39(d，J＝8.55Hz，1H)7.3(d，J＝8.8Hz，1H)7.34-7.59(m，1H)8.09(d，J＝2.8Hz，1H)8.20(dd，J＝9.21，4.17Hz，1H)13.65(s，1H)。
实施例240
合成4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸甲酯
将磷酸三钾(2.68g，12.63mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(2g，6.31mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲酸甲酯(1.994g，7.58mmol)在1，4-二噁烷(60mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min。加入Pd2(dba)3(0.289g，0.316mmol)和X-phos(0.301g，0.631mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌18小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(50mL)和EtOAc(200mL)之间分配。分离有机层，并在真空中浓缩，得到粗品(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，用10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸甲酯(780mg，1.806mmol，28.6％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：418.23[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.63(s，1H)，9.54(d，J＝1.2Hz，1H)，8.91-8.89(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，8.68-8.68(dd，J＝2，0.4Hz，1H)，8.34-8.29(m，3H)，7.69(d，J＝8.0Hz，1H)，7.59(d，J＝8.0Hz，1H)，4.05(s，3H)，3.34-3.16(m，3H)，3.07-3.03(dd，J＝12.4，3.2Hz，1H)，2.41-2.33(m，1H)，2.15-2.07(m，1H)。
实施例241
合成(4S)-7-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(670mg，3.16mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(500mg，1.579mmol)、(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)硼酸(328mg，1.894mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(1.667mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(145mg，0.158mmol)和X-phos(75mg，0.158mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在微波下在100℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用5-10％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(2-(二氟甲基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(112mg，0.273mmol，17.27％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：410.17[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.63(s，1H)，9.54(s，1H)，8.79(d，J＝5.2Hz，1H)，8.40(s，1H)，8.32(d，J＝3.2Hz，2H)，8.06(dd，J＝5.2，0.8Hz，1H)，7.68(d，J＝7.6Hz，1H)，7.54(d，J＝8Hz，1H)，6.90-6.62(t，J＝55.2Hz，1H)，5.73-5.71(dd，J＝5.6，2.8Hz，1H)，3.33-3.16(m，3H)，3.06-3.03(dd，J＝12.0，3.2Hz，1H)，2.41-2.33(m，1H)，2.14-2.07(m，1H)。
实施例242
合成(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨
向吡嗪-2-甲酸(0.6g，4.83mmol)在四氢呋喃(50mL)中的悬浮液中加入叠氮磷酸二苯酯(1.996g，7.25mmol)和DIPEA(4.22mL，24.17mmol)。将反应混合物在28℃搅拌2小时，加入(9S)-2-(3-(三氟甲基)哌啶-1-基)-7，8，9，10-四氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯(来自中间体SFC分离的峰I，1.105g，3.38mmol)至反应混合物中。将反应混合物在65℃搅拌16小时。将反应混合物用水(50mL)稀释，并用乙酸乙酯(2X 75mL)萃取。将合并的有机层用水和饱和食盐水溶液洗涤，并用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗品，其为近白色固体(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯；Rf值：0.3；UV活性)。将粗产物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(9S)-N-(吡嗪-2-基)-2-(3-(三氟甲基)-哌啶-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰胺(0.330g，0.728mmol，15.05％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：448.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 1.31-1.34(m，1H)1.45-1.67(m，2H)1.68-1.79(m，1H)1.82-1.99(m，2H)2.05-2.18(m，2H)2.42(dddt，J＝15.65，11.78，8.03，3.97，3.97Hz，1H)2.86-3.09(m，3H)3.11-3.35(m，3H)4.21-4.39(m，2H)4.89(br s，1H)6.42(d，J＝8.55Hz，1H)7.32(d，J＝8.4Hz，1H)8.14-8.20(m，1H)8.24(d，J＝2.8Hz，1H)9.53(d，J＝1.53Hz，1H)13.81(s，1H)。
实施例243
合成(4S)-7-(5-氟-2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(600mg，1.894mmol)、5-氟-2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(674mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3.33mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，加入Pd2(dba)3(173mg，0.189mmol)和X-phos(90mg，0.189mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在微波中在100℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf＝0.3；UV活性)。将粗产物用甲醇和乙醚洗涤，得到(4S)-7-(5-氟-2-甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(317mg，0.788mmol，41.6％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：392.20[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.54(s，1H)，9.57(d，J＝1.6Hz，1H)，8.45(d，J＝3.2Hz，1H)，8.31(d，J＝2.8Hz，1H)，8.27-8.26(t，J＝1.6Hz，1H)，8.09(d，J＝6.8Hz，1H)，7.66-7.62(t，J＝8Hz，2H)，5.73-5.71(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，3.34-3.17(m，3H)，3.06-3.02(dd，J＝12.0，3.2Hz，1H)，2.71(s，3H)，2.40-2.33(m，1H)，2.13-2.06(m，1H)。
实施例244
合成4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸甲酯：
在0℃，将NaBH4(136mg，3.59mmol)加入至4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吡啶-2-甲酸甲酯(600mg，1.437mmol)在THF(100mL)中的溶液中。将反应混合物在28℃搅拌8h。将溶剂通过旋转蒸发仪除去，并将残余物在乙酸乙酯(40mL)和水(20mL)之间分配。分离有机层，用无水Na2SO4干燥，并过滤；将滤液在真空中蒸除，得到粗品。将粗品通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-7-(2-(羟基甲基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(135mg，0.345mmol，24.00％)，其为米色固体，LCMS(m/z)：390.22[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.66(s，1H)，9.60(s，1H)，8.68(d，J＝5.2Hz，1H)，8.33(s，2H)，8.19(s，1H)7.74-7.72(dd，J＝5.2，1.6Hz，1H)，7.67(d，J＝8.0Hz，1H)，7.52(d，J＝8.0Hz，1H)，5.73-5.70(dd，J＝6.0，3.6Hz，1H)，4.93(s，2H)，3.31-3.16(m，3H)，3.06-3.02(dd，J＝12.4，3.2Hz，1H)，2.38-2.35(m，1H)，2.12-2.08(t，J＝7.6Hz，1H)。
实施例245
合成(4S)-7-(6-氰基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(523mg，2.273mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-Phos(90mg，0.189mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，并再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌16h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X 15mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30％EtOAc/石油醚洗脱，得到纯的(4S)-7-(6-氰基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(220mg，0.568mmol，30.0％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：385.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.54(s，1H)9.54(d，J＝1.32Hz，1H)9.34(dd，J＝2.30，0.77Hz，1H)8.66(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)8.35-8.30(m，2H)7.86(dd，J＝8.11，0.88Hz，1H)7.70(d，J＝7.89Hz，1H)7.50(d，J＝8.11Hz，1H)5.71(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)3.35-3.14(m，3H)3.09-3.02(m，1H)2.43-2.32(m，1H)2.16-2.05(m，1H)。
实施例246
合成(4S)-N-(5-乙基吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)、三光气(706mg，2.378mmol)和三乙胺(1.989mL，14.27mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的溶液在室温搅拌30min，加入5-乙基吡嗪-2-胺(879mg，7.13mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16h，并冷却至室温，然后将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取(3X 15mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30％EtOAc/石油醚洗脱，得到纯的(4S)-N-(5-乙基吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(383mg，0.953mmol，40.1％产率)，LCMS(m/z)：402.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.65(s，1H)9.41(d，J＝1.53Hz，1H)9.11(d，J＝2.19Hz，1H)8.41(dd，J＝8.22，2.52Hz，1H)8.22(d，J＝1.32Hz，1H)7.61(d，J＝7.89Hz，1H)7.40(d，J＝8.11Hz，1H)7.32(d，J＝8.11Hz，1H)5.70(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)3.34-3.13(m，3H)3.02(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)2.83(q，J＝7.53Hz，2H)2.64(s，3H)2.40-2.34(m，1H)2.15-2.03(m，1H)1.33(t，J＝7.56Hz，3H)。
实施例247
合成(4S)-N-(6-异丙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将三乙胺(1.326mL，9.51mmol)和三光气(470mg，1.585mmol)先后加入至(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在四氢呋喃(THF)(8mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌30min，然后加入6-异丙氧基吡嗪-2-胺(486mg，3.17mmol)至反应混合物中，并在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(2x40mL)萃取，用饱和食盐水(30mL)洗涤。分离有机层，用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将残余物通过快速色谱法纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的DCM溶液，得到(4S)-N-(6-异丙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(60mg，0.132mmol，8.33％产率)，其为米色固体(TLC，Rf：0.4，5％甲醇的DCM溶液)，LCMS(m/z)：432.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 1.24(dd，J＝13.15，6.14Hz，6H)2.09(dt，J＝14.14，6.96Hz，1H)2.22-2.45(m，1H)2.65(s，3H)3.03(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)3.13-3.38(m，3H)5.10(dt，J＝12.44，6.17Hz，1H)5.71(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)7.27-7.46(m，1H)7.51-7.68(m，2H)7.73(dd，J＝5.15，1.43Hz，1H)7.88(s，1H)8.58(d，J＝5.26Hz，1H)9.03(s，1H)13.04(s，1H)。
实施例248
合成(4S)-7-(6-氰基-5-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.579mmol)、3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(501mg，2.052mmol)和K3PO4(1.005g，4.74mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3mL)中的脱气的溶液中加入X-phos(75mg，0.158mmol)和Pd(OAc)2(17.72mg，0.079mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在90℃搅拌16h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，将滤液蒸发得到残余物。将残余物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 70mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)然后用饱和食盐水溶液(10mL)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并将产物用55-60％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(6-氰基-5-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(350mg，0.835mmol，52.9％产率)，其为淡黄色固体，LCMS(m/z)：399.22[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.61(s，1H)，9.58(d，J＝1.5Hz，1H)，9.07(d，J＝2.2Hz，1H)，8.63-8.69(m，1H)，8.33(d，J＝2.8Hz，1H)，8.28(dd，J＝1.4，2.6Hz，1H)，7.69(d，J＝8.1Hz，1H)，7.52(m，J＝8.1Hz，1H)，5.72(dd，J＝5.9，3.07Hz，1H)，3.13-3.36(m，3H)，3.05(dd，J＝12.28，3.3Hz，1H)，2.73(S，3H)，2.25-2.44(m，1H)，2.04-2.24(m，1H)。
实施例249
合成(4S)-7-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.263mmol)、2-甲基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-6-(三氟甲基)吡啶(471mg，1.642mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3mL)中的脱气的溶液中加入X-phos(60.2mg，0.126mmol)和Pd2(dba)3(57.8mg，0.063mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在90℃搅拌16h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，将滤液蒸发得到残余物。将残余物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 70mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)然后用饱和食盐水溶液(10mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf＝0.4；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，并将产物用45-50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(2-甲基-6-(三氟甲基)吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(318mg，0.719mmol，56.9％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：442.24[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.63(s，1H)，9.57(d，J＝1.3Hz，1H)，8.22-8.40(m，2H)，8.14(s，1H)，8.11(s，1H)，7.69(d，J＝8.1Hz，1H)，7.53(d，J＝7.9Hz，1H)，5.73(dd，J＝5.9，3.0Hz，1H)，3.12-3.37(m，3H)，2.95-3.12(m，1H)，2.79(S，3H)，2.25-2.46(m，1H)，2.00-2.21(m，1H)。
实施例250
合成(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.583mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)吡啶(562mg，2.059mmol)和K3PO4(1008mg，4.75mmol)在1，4-二噁烷(20mL)和水(3mL)中的脱气的溶液中加入X-phos(75mg，0.158mmol)和Pd2(dba)3(72.5mg，0.079mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并将反应混合物在90℃搅拌16h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，并将滤液蒸发，得到粗品残余物。将粗品残余物用水(20mL)稀释，并用乙酸乙酯(2x 70mL)萃取。将合并的有机层用水(10mL)然后用饱和食盐水溶液(10mL)洗涤。将有机层用硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到棕色固体(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯，Rf-0.4；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并将产物用35-40％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-N-(吡啶-3-基)-7-(6-(三氟甲基)吡啶-3-基)-3，4-氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，0.924mmol，58.3％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：427.20[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.79(s，1H)，9.16(d，J＝1.9Hz，1H)，8.54(d，J＝2.4Hz，1H)，8.32(dd，J＝1.2，4.8Hz，1H)，8.29(dd，J＝2，8.4Hz，1H)，7.99-8.19(m，1H)，7.87(d，J＝8.3Hz，1H)，7.69(d，J＝7.6Hz，1H)，7.38(d，J＝7.9Hz，1H)，7.28-7.30(m，1H)，5.71(dd，J＝5.8，3.2Hz，1H)，3.12-3.36(m，3H)，2.94-3.12(m，1H)，2.25-2.43(m，1H)，2.00-2.23(m，1H)。
实施例251
合成(4S)-7-(2，5-二甲基吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
将Pd2(dba)3(0.087g，0.095mmol)和X-phos(0.018g，0.047mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)、1-乙基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.316g，1.421mmol)和磷酸二氢钾(0.258g，1.894mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的脱气的(氩气)溶液中。将反应混合物进一步脱气10min，并在90℃搅拌15h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤。将滤液用水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释。分离有机层，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液；Rf-0.35UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-乙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.26g，0.688mmol，72.6％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：377.30[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ14.15(s，1H)，9.60(d，J＝1.53Hz，1H)，8.56(s，1H)，8.22-8.30(m，2H)，8.07(s，1H)，7.50(d，J＝7.89Hz，1H)，7.14(d，J＝7.89Hz，1H)，5.66(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.28(q，J＝7.38Hz，2H)，3.11-3.38(m，3H)，2.97-3.07(m，1H)，2.32(dddd，J＝14.03，9.98，6.03，3.95Hz，1H)，1.97-2.13(m，1H)，1.60(d，J＝7.20Hz，3H)。
实施例252
合成(4S)-7-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将Pd2(dba)3(0.087g，0.095mmol)和X-phos(0.018g，0.047mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)3，4二氢1，4亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)、2-(二氟甲氧基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(0.385g，1.421mmol)和磷酸二氢钾(0.258g，1.894mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的脱气的溶液中。将反应混合物进一步脱气10min，并在90℃搅拌15h。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤。将滤液用水(50mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释。分离有机层，并用水和饱和食盐水洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤，并将滤液蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf-0.4UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(6-(二氟甲氧基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.210g，0.493mmol，52.1％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：426.22[M+H]+。
1H NMR(CDCl3，400MHz)：δ13.70(s，1H)，9.54(d，J＝1.53Hz，1H)，8.81(dd，J＝2.63，0.66Hz，1H)，8.57(dd，J＝8.55，2.63Hz，1H)，8.27-8.32(m，2H)，7.74(s，1H)，7.63(d，J＝8.11Hz，1H)，7.37-7.75(m，1H)，7.06(dd，J＝8.55，0.66Hz，1H)，5.70(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.13-3.33(m，3H)，3.03(dd，J＝12.17，3.18Hz，1H)，2.29-2.41(m，1H)，2.07-2.13(m，1H)。
实施例253
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(2-(((S)-四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(S)-2-((四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-胺(862mg，4.76mmol)、三光气(423mg，1.427mmol)在THF(15mL)中的溶液中加入DIPEA(2.077mL，11.89mmol)和(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)。将反应混合物在80℃搅拌16h，然后将THF在减压下蒸除，并将残余物用水稀释，用DCM(2x25mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并在减压下蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过使用制备型HPLC纯化，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(2-(((S)-四氢呋喃-3-基)氧基)嘧啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(195mg，0.421mmol，17.72％产率)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：460.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.67(s，1H)，9.16(d，J＝2.19Hz，1H)，8.38(d，J＝5.70Hz，1H)，8.34-8.07(m，1H)，7.80(d，J＝5.70Hz，1H)，7.63(d，J＝7.89Hz，1H)，7.39(d，J＝8.11Hz，1H)，7.33-7.23(m，1H)，5.76-5.58(m，1H)，4.03-3.83(m，4H)，3.35-3.10(m，3H)，2.49-2.24(m，1H)，2.23-2.00(m，3H)。
实施例254
合成(4S)-7-(2-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向3-甲基-4-((4S)-5-(吡嗪-2-基氨基甲酰基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)哌嗪-1-甲酸叔丁酯(397mg，0.826mmol)在THF(5mL)中的搅拌的溶液中加入2M HCl的乙醚溶液(2.065mL，4.13mmol)，并将反应混合物在35℃搅拌4h。将反应混合物用NaHCO3水溶液中和，并用CH2Cl2(3x50mL)萃取。将合并的有机层用水、饱和食盐水洗涤，用Na2SO4干燥和在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-7-(2-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(270mg，0.710mmol，85％产率)，其为近白色固体(TLC：5％MeOH的DCM溶液，Rf：0.3)，LCMS(m/z)：381[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.36-13.49(m，1H)，9.39(m，1H)，8.41-8.22(m，2H)，7.44-7.29(m，1H)，6.41(dd，J＝8.77，2.63Hz，1H)，5.44(dd，J＝5.26，2.63Hz，1H)，4.42-4.25(m，1H)，3.93-3.68(m，1H)，3.16-2.98(m，4H)，2.90-2.73(m，3H)，2.69-2.53(m，1H)，2.37-2.27(m，2H)，2.26-2.10(m，1H)，1.99-1.79(m，1H)，1.12(dd，J＝6.58，3.95Hz，3H)。
实施例255
合成(4S)-7-(3-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氢气氛(气球压力)下，在室温向(4S)-7-(4-苄基-3-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(450mg，0.956mmol)在甲醇(10mL)中的搅拌的溶液中加入乙酸(0.027mL，0.478mmol)和10％氢氧化钯/碳(67.1mg，0.096mmol)，并将反应混合物在35℃搅拌4h。反应完成后，将反应混合物经硅藻土垫过滤，将滤液在真空中蒸除，得到粗产物。将粗品混合物通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-7-(3-甲基哌嗪-1-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(280mg，0.736mmol，76％产率)，其为淡棕色固体(TLC，Rf：20％MeOH的DCM溶液，0.4)，LCMS(m/z)：381.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.43(s，1H)，9.55(d，J＝1.53Hz，1H)，8.24(d，J＝2.63Hz，1H)，8.09-8.20(m，2H)，7.36(d，J＝8.55Hz，1H)，6.30(d，J＝8.55Hz，1H)，5.62(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，4.20(d，J＝12.06Hz，1H)，3.95(d，J＝11.84Hz，1H)，3.08-2.87(m，4H)3.25-3.08(m，4H)，2.57(ddd，J＝12.33，10.25，2.19Hz，1H)，2.27(dddd，J＝13.92，9.98，6.14，3.73Hz，1H)，2.00(dt，J＝14.41，7.37Hz，1H)，1.21(d，J＝6.14Hz，3H)。
实施例256
合成(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐
在0℃，将2.0M氯化氢的乙醚溶液(2mL，4.00mmol)加入至(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨(180mg，0.416mmol)中。将反应混合物在28℃搅拌4h，浓缩得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物用乙醚(2x5mL)洗涤，得到纯的(9S)-N-(吡啶-2-基)-2-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-8，9-二氢-6H-5，9-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环辛四烯-10(7H)-甲酰氨盐酸盐(83mg，0.177mmol，42.78％产率)，其为淡棕色固体，LCMS(m/z)：433.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ15.02(br s，1H)，13.34(br s，1H)，8.25(br d，J＝3.73Hz，1H)，8.13(br d，J＝8.33Hz，1H)，8.06(d，J＝8.77Hz，1H)，7.75-7.68(m，1H)，7.04-6.98(m，1H)，6.15(s，1H)，5.30-5.24(b，s，1H)，4.12-3.94(m，2H)，3.73-3.59(m，4H)，3.49-3.37(m，2H)，3.18-3.04(m，1H)，2.45-2.25(m，3H)，1.86(d，J＝12.50Hz，2H)。
实施例257和258
(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-((+)-2-(三氟甲基)吗啉代)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(2g，6.31mmol)和2-(三氟甲基)吗啉(1.469g，9.47mmol)在1，4-二噁烷(30mL)中的脱气的溶液中加入碳酸铯(6.17g，18.94mmol)、x-phos(1.204g，2.53mmol)和乙酸钯(II)(0.284g，1.263mmol)。将反应混合物在密封管中在100℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(80mL)中，并用乙酸乙酯(3x100mL)萃取。将合并的有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的CH2Cl2溶液)纯化，得到(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-((+)-2-(三氟甲基)吗啉代)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨的对映异构混合物。将混合物通过手性制备型SFC分离(条件：(纤维素-2(250X 30)mm，55.0％(100％MeOH)，90.0g/min，100.0巴，42nm，8.5min))为峰I(最快洗脱：320mg，0.736mmol，42％产率)和峰II(最慢洗脱：305mg，0.701mmol，40.5％产率)，其为近白色固体(TLC：纯EtOAc，Rf：-0.21)，LCMS(m/z)：436.25[M+H]+。
最快洗脱峰：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.19(s，1H)，9.52(s，1H)，8.25(d，J＝2.41Hz，1H)，8.21-8.09(m，1H)，7.43(d，J＝8.33Hz，1H)，6.35(d，J＝8.55Hz，1H)，5.64(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.21(dd，J＝11.84，1.97Hz，1H)，4.15-4.00(m，1H)，4.00-3.77(m，3H)，3.26-3.04(m，5H)，3.04-2.82(m，1H)，2.28(dddd，J＝13.95，10.00，6.19，3.84Hz，1H)，2.07-1.92(m，1H)。
最慢洗脱峰：1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.20(s，1H)，9.52(d，J＝1.53Hz，1H)，8.26(d，J＝2.41Hz，1H)，8.16(dd，J＝2.41，1.53Hz，1H)，7.43(d，J＝8.55Hz，1H)，6.35(d，J＝8.55Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.21(d，J＝12.06Hz，1H)，4.08(ddd，J＝10.69，6.19，2.85Hz，1H)，4.00-3.92(m，2H)，3.84(td，J＝11.56，2.96Hz，1H)，3.26-3.07(m，5H)，3.07-2.82(m，1H)，2.43-2.24(m，1H)，2.21-1.95(m，1H)。
实施例259
合成((R)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮盐酸盐
在0℃，将1.0M氯化氢的二噁烷溶液(1.6mL)加入至(R)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮(0.21g，0.544mmol)在甲醇(5mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物用乙醚(3x5mL)研磨，得到纯的((R)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4二氢-1，4亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮盐酸盐(105mg，0.253mmol，45％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：380.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.86(br d，J＝5.92Hz，1H)，8.41(br s，1H)，8.28(brs，1H)，7.82-8.07(m，2H)，4.64(br s，1H)，3.23-4.11(m，9H)，2.99-3.14(m，1H)，2.53-2.87(m，4H)，2.19-2.43(m，2H)，0.89-1.15(m，3H)
实施例260
合成(4S)-7-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.267mmol)、磷酸钾(537mg，2.53mmol)和(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)硼酸(291mg，1.900mmol)在1，4-二噁烷(9mL)和水(1mL)的混合物中的脱气的溶液中加入X-Phos(60.4mg，0.127mmol)和Pd(OAc)2(14.22mg，0.063mmol)，并在100℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，将有机溶剂通过旋转蒸发仪除去，并用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(50mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：03％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(150mg，0.383mmol，30.2％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf 0.4，10％MeOH/DCM)，LCMS(m/z)：389.22[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppml2.92(s，1H)，8.57(d，J＝2.63Hz，1H)，，8.06-8.32(m，2H)，7.62(d，J＝7.89Hz，1H)，7.48(d，J＝7.02Hz，1H)，7.25-7.32(m，2H)，6.95(d，J＝1.75Hz，1H)，6.63(dd，J＝7.02，1.97Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.62(s，3H)，3.19-3.39(m，2H)，3.15(d，J＝12.06Hz，1H)，2.84-3.09(m，1H)，2.19-2.39(m，1H)，2.05-2.19(m，1H)。
实施例261
合成((S)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮盐酸盐
在0℃，将1.0M氯化氢的二噁烷溶液(1.74mL)加入至(S)-2-甲基吗啉代)(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮(0.22g，0.580mmol)在甲醇(5mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物在28℃搅拌4h。将反应混合物蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物用乙醚(3x5mL)研磨，得到纯的((S)-2-甲基吗啉代)((4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-基)甲酮盐酸盐(110mg，0.265mmol，45％产率)，其为黄色固体，LCMS(m/z)：380.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δ8.86(d，J＝6.36Hz，1H)，8.38-8.45(m，1H)，8.24-8.34(m，1H)，7.86-7.99(m，2H)，4.57-4.64(m，1H)，4.07(brd，J＝10.30Hz，1H)，3.35-3.85(m，10H)，3.07(br t，J＝12.06Hz，1H)，2.81(s，4H)，2.39(s，2H)，0.96-1.17(m，3H)。
实施例262
e-LNB号：N33406-70-A2，GSK3397559A
合成(4S)-N-7-双(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.8g，3.17mmol)在THF(15mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(0.565g，1.902mmol)，并搅拌30min。然后在室温加入2-甲基吡啶-4-胺(0.686g，6.34mmol)和DIPEA(1.661mL，9.51mmol)。将反应混合物在80℃加热15h。将THF在减压下蒸除，并用水(15ml)稀释，用DCM(2x20ml)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，并在减压下蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱纯化，得到(4S)-N-7-双(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(120mg，0.31mmol，22％)，其为白色固体(TLC：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：387.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.15(s，1H)，8.68(d，J＝5.26Hz，1H)，8.36(d，J＝5.48Hz，1H)，7.70-7.56(m，1H)，7.56-7.47(m，1H)，7.34-7.42(m，2H)，7.31-7.25(m，2H)，5.68(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.20-3.11(m，3H)，3.03(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.63(s，3H)，2.52(s，3H)，2.43-2.25(m，1H)，2.15-2.03(m，1H)。
实施例263
合成(4S)-7-(4，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.267mmol)、2，4-二甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(591mg，2.53mmol)和Cs2CO3(1238mg，3.80mmol)在1，4-二噁烷(9mL)和水(1mL)的混合物中的脱气的溶液中加入Pd(OAc)2(14.22mg，0.063mmol)和X-Phos(60.4mg，0.127mmol)，并在100℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，将有机溶剂通过旋转蒸发仪除去，并用水(50mL)稀释，用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(50mL)稀释，用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗产物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(4，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(115mg，0.295mmol，23.30％产率)，其为近白色固体(TLC：Rf：0.4，10％MeOH的DCM溶液)，LCMS(m/z)：387.25[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.07(br s，1H)，8.51(s，1H)，8.24(brd，J＝4.17Hz，1H)，8.18-7.97(m，1H)，7.61(br d，J＝7.67Hz，1H)，7.34-7.16(m，2H)，7.13(m，1H)，5.68(br d，J＝2.19Hz，1H)，3.38-3.11(m，3H)，3.11-2.89(m，1H)，2.60(s，3H)，2.36(s，4H)2.30-2.03(m，1H)，1.36-1.12-(m，1H)。
实施例264
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-新戊基-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基苯并[b][1，4]二氮杂环庚三烯(250mg，0.991mmol)在THF(10mL)中的搅拌的溶液中加入三光气(176mg，0.594mmol)，并搅拌30min。然后加入DIPEA(0.519mL，2.97mmol)和2，2-二甲基丙-1-胺(130mg，1.486mmol)至上述反应混合物中，并在80℃搅拌16h。使反应混合物降至至室温，用水(60mL)稀释，并用乙酸乙酯(3x50mL)萃取。将合并的有机层用饱和食盐水(60mL)洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩，得到粗产物。将粗品通过快速柱色谱(硅胶100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-新戊基-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(163mg，0.441mmol，44.5％产率)，其为淡黄色固体(TLC：Rf：0.4，10％MeOH的DCM溶液)，LCMS(m/z)：366.29[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.45(br s，1H)，8.88(s，1H)，7.93(br d，J＝7.89Hz，1H)，7.54(d，J＝7.89Hz，1H)，7.34-7.11(m，2H)，5.77-5.51(m，1H)，3.33-3.14(m，5H)，2.95(brdd，J＝11.84，3.07Hz，1H)，2.61(s，3H)，2.35-2.18(m，1H)，2.18-1.89(m，1H)，0.90(s，9H)。
实施例265
合成(4S)-N-(6-甲基吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下将(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.378mmol)、三光气(706mg，2.378mmol)和三乙胺(1.989mL，14.27mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液室温搅拌30min，加入6-甲基吡嗪-2-胺(778mg，7.13mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16h，冷却至室温。将反应混合物倒入水中并用EtOAc萃取(3X15mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.1；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30％EtOAc/石油醚洗脱，得到纯的(4S)-N-(6-甲基吡嗪-2-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(151mg，0.389mmol，16.38％产率)，其为近白色固体。LCMS(m/z)：388.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.79(s，1H)9.33(s，1H)9.10(d，J＝2.41Hz，1H)8.55(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)8.19(s，1H)7.62(d，J＝7.89Hz，1H)7.43(d，J＝7.89Hz，1H)7.31(d，J＝8.11Hz，1H)5.70(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)3.36-3.14(m，3H)3.02(dd，J＝11.95，3.40Hz，1H)2.65(s，3H)2.56(s，3H)2.42-2.32(m，1H)2.18-2.01(m，1H)。
实施例266
合成(4S)-7-(6-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.894mmol)、2-环丙基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-(三氟甲基)吡啶(mg，mmol)和K3PO4(804mg，3.79mmol)在1，4-二噁烷(20mL)、水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-Phos(90mg，0.189mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，并用氩气再次脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌16h，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X15mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30％EtOAc/石油醚洗脱，得到纯的(4S)-7-(6-环丙基-5-(三氟甲基)吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(380mg，0.813mmol，42.85％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：468.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.66(s，1H)9.51(d，J＝1.53Hz，1H)9.08(d，J＝1.97Hz，1H)8.58(d，J＝2.19Hz，1H)8.31-8.24(m，2H)7.64(d，J＝7.89Hz，1H)7.38(d，J＝7.89Hz，1H)5.71(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)3.34-3.14(m，3H)3.03(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)2.47-2.30(m，2H)2.15-2.04(m，1H)1.33-1.28(m，2H)1.16-1.10(m，2H)。
实施例267
合成(4S)-7-(2-环丙基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气下，在0℃，向吡嗪-2-甲酸(550mg，4.43mmol)在THF(10mL)中的溶液中加入叠氮磷酸二苯酯(2439mg，8.86mmol)和TEA(3.09mL，22.16mmol)，并在室温搅拌2h。向该反应混合物中加入2-环丙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(888mg，3.10mmol)，并在100℃搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并用乙酸乙酯(2x25ml)洗脱。将合并的有机层用饱和食盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱(100-200硅胶，用2％MeOH的CH2Cl2溶液洗脱)纯化，得到化合物(4S)-7-(2-环丙基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(90mg，0.219mmol，4.95％产率)，其为淡棕色固体(TLC系统：5％甲醇的DCM溶液。Rf值：0.3)，LCMS(m/z)：408.33[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.32(s，1H)，9.37(d，J＝1.32Hz，1H)，8.43-8.13(m，2H)，7.41(d，J＝8.55Hz，1H)，6.56(d，J＝8.77Hz，1H)，5.56-5.28(m，1H)，4.13-3.73(m，3H)，3.55(td，J＝11.56，2.52Hz，1H)，3.16-2.63(m，7H)，2.31-1.99(m，1H)，1.85(dt，J＝13.92，6.85Hz，1H)，1.08-0.76(m，1H)，0.59-0.12(m，4H)。
实施例268
合成(4S)-7-(4，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将Cs2CO3(1237mg，3.797mmol)和2，4-二甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(590mg，2.531mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.265mmol)在1，4-二噁烷(9mL)和水(1mL)的混合物中的溶液中。将反应混合物充入氩气30min。加入PdOAc2(28.3mg，0.126mmol)和X-Phos(120.6mg，0.253mmol)至上述反应混合物中，在100℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，并将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-7-(4，6-二甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(135mg，0.332mmol，52.5％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：388.28[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.37(s，1H)，9.45(d，J＝1.32Hz，1H)，8.54(s，1H)，8.22(d，J＝2.63Hz，1H)，8.16-8.20(m，1H)，7.62(d，J＝7.67Hz，1H)，7.12(s，1H)，7.07(d，J＝7.89Hz，1H)，5.71(dd，J＝5.81，2.96Hz，1H)，3.15-3.36(m，3H)，3.03(dd，J＝12.17，3.40Hz，1H)，2.59(s，3H)，2.46(s，3H)，2.28-2.38(m，1H)，2.04-2.17(m，1H)。
实施例269
合成(4S)-N-(3，3-二氟环丁基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将三光气(212mg，0.714mmol)分批缓慢加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.190mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的搅拌的溶液中。将该反应混合物搅拌30min。加入DIPEA(0.623mL，3.57mmol)和3，3-二氟环丁胺(191mg，1.785mmol)至上述反应混合物中，在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，并将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-N-(3，3-二氟环丁基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(113mg，0.283mmol，28.5％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：386.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.93(br d，J＝5.92Hz，1H)，8.88(d，J＝2.19Hz，1H)，7.94(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.56(d，J＝7.67Hz，1H)，7.31-7.22(m，2H)，5.59(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，4.29(br s，1H)，3.00-3.29(m，5H)，2.95(dd，J＝11.95，3.40Hz，1H)，2.66-2.50(m，5H)，2.31-2.21(m，1H)，2.06-1.98(m，1H)。
实施例270
合成(4S)-7-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(804mg，3.79mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(500mg，1.579mmol)和1-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(445mg，1.894mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(2.000mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气10min，然后加入Pd2(dba)3(72.3mg，0.079mmol)和X-phos(75mg，0.158mmol)。将反应混合物进＝步脱气15min。将反应混合物在微波中在100℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和乙酸乙酯(2x15mL)之间分配。将乙酸乙酯层分离，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用(100-200目)硅胶，并用2％MeOH的EtOAc溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(330mg，0.840mmol，53.2％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：390.26[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.78(s，1H)，9.61(d，J＝1.53Hz，1H)，8.57(d，J＝2.63Hz，1H)，8.33(d，J＝2.63Hz，1H)，8.22(dd，J＝2.52，1.64Hz，1H)，7.88(dd，J＝9.54，2.74Hz，1H)，7.57(d，J＝7.89Hz，1H)，7.18(d，J＝8.11Hz，1H)，6.69(d，J＝9.43Hz，1H)，5.69(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.78(s，3H)，3.12-3.30(m，3H)，3.01(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.28-2.41(m，1H)，2.00-2.13(m，1H)。
实施例271
合成(4S)-7-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(672mg，3.17mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰胺(500mg，1.583mmol)和1-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2(1H)-酮(447mg，1.900mmol)在1，4-二噁烷(10mL)和水(2.000mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气10min，然后加入Pd2(dba)3(72.5mg，0.079mmol)和X-phos(75mg，0.158mmol)。将反应混合物进一步脱气15min。将反应混合物在微波中在100℃搅拌1小时。将反应混合物冷却至28℃，并在水(10mL)和EtOAc(25mL)之间分配。将EtOAc层分离，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，并将产物用2％MeOH的乙酸乙酯溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-甲基-6-氧代-1，6-二氢吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(272mg，0.679mmol，42.9％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：389.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.93(s，1H)，8.61(d，J＝2.41Hz，1H)，8.33(dd，J＝4.71，1.43Hz，1H)，8.05-8.20(m，1H)，7.74-7.87(m，2H)，7.57(d，J＝7.89Hz，1H)，7.22-7.33(m，1H)，7.09(d，J＝7.89Hz，1H)，6.65-6.82(m，1H)，5.67(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.64(s，3H)，3.08-3.28(m，3H)，3.00(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.33(qd，J＝9.98，4.49Hz，1H)，2.00-2.12(m，1H)。
实施例272
合成(4S)-N-(1-甲基-1H-1，2，3-三唑-4-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将Pd2(dba)3(0.043g，0.047mmol)和X-phos(0.036g，0.095mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)、3-氟-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(0.352g，1.421mmol)和磷酸二氢钾(0.258g，1.894mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的脱气的溶液中，并加热至90℃保持15小时。冷却至室温，并经硅藻土垫过滤。将滤液用水(25mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的乙酸乙酯溶液；UV活性；Rf：0.25)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(6-氰基-5-氟吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，-4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.105g，0.251mmol，26.5％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：403.18[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.57(s，1H)，9.53(d，J＝1.53Hz，1H)，9.11(t，J＝1.43Hz，1H)，8.69(dd，J＝9.87，1.75Hz，1H)，8.27-8.40(m，2H)，7.71(d，J＝8.11Hz，1H)，7.54(d，J＝8.11Hz，1H)，5.71(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.01-3.37(m，4H)，2.32-2.45(m，1H)，2.01-2.21(m，1H)。
实施例273
合成(4S)-7-(6-氰基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基-吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(600mg，1.900mmol)、5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-甲腈(525mg，2.280mmol)和K3PO4(807mg，3.80mmol)在1，4-二噁烷(20mL)、水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-phos(91mg，0.190mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(87mg，0.095mmol)，再次用氩气脱气10min。将反应混合物在100℃搅拌16小时，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3x20mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30-40％EtOAc/己烷洗脱，得到纯的(4S)-7-(6-氰基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(399mg，1.033mmol，54.4％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：384.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.71(s，1H)，9.17(dd，J＝2.2，0.7Hz，1H)，8.54(d，J＝2.4Hz，1H)，8.33(dd，J＝4.7，1.4Hz，1H)，8.23(dd，J＝8.0，2.3Hz，1H)，8.07-8.12(m，1H)，7.87(d，J＝8.1Hz，1H)，7.69(d，J＝8.1Hz，1H)，7.38(d，J＝7.9Hz，1H)，7.26-7.31(m，1H)，5.71(dd，J＝5.9，2.8Hz，1H)，3.12-3.34(m，3H)，3.01-3.09(m，1H)，2.36(m，1H)，2.1(m，1H)。
实施例274
e-LNB号：N33789-17-A2，GSK3400265A
合成(4S)-7-((S)-3-甲基吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在密封管中，将Cs2CO3(3.10g，9.50mmol)、(S)-3-甲基吗啉(0.641g，6.33mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(1.0g，3.17mmol)在1，4-二噁烷(10mL)中的溶液中，同时充入氩气25min。随后，加入PdOAc2(0.142g，0.633mmol)和X-phos(0.604g，1.267mmol)至反应混合物中，并在100℃搅拌4h。将反应物冷却至室温，将溶剂在减压下除去，将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将其通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-7-((S)-3-甲基吗啉代)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(140mg，0.366mmol，11.56％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：381.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.42(s，1H)，8.50(d，J＝2.41Hz，1H)，8.31(d，J＝4.60Hz，1H)，8.16(br d，J＝8.55Hz，1H)，7.39(d，J＝8.55Hz，1H)，7.31-7.26(m，1H)，6.24(d，J＝8.55Hz，1H)，5.60(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，4.06(brdd，J＝11.18，3.51Hz，2H)，3.85-3.79(m，2H)，3.69-3.51(m，2H)，3.37-3.04(m，4H)，2.91(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.31-2.18(m，1H)，2.07-1.97(m，1H)，1.27(d，J＝6.80Hz，3H)。
实施例275
合成(4S)-N-(4-甲基吡啶-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在THF(15mL，在密封管中)中的搅拌的溶液中加入三光气(282mg，0.951mmol)，并搅拌30min，然后加入三乙胺(1.105mL，7.93mmol)和4-甲基吡啶-2-胺(257mg，2.378mmol)，并在65℃加热15h。将反应混合物冷却至室温。将THF蒸除，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％甲醇的DCM溶液)纯化，得到600mg，60％LCMS纯度。将粗品化合物通过制备型HPLC(条件：MP-A：10mM碳酸氢铵(Aq)，MP-B：乙腈，柱：X-Bridge(250x30)mm 10μ，方法：0/30，10/50，10.1/30，15/30，流速：30ml/min，溶解：THF+ACN+MeOH)纯化，得到(4S)-N-(4-甲基吡啶-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(210mg，0.541mmol，34.1％产率)，其为米色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：387.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：13.48(s，1H)，8.61(d，J＝5.26Hz，1H)，8.25-8.17(m，2H)，8.07(s，1H)，7.71(d，J＝3.95Hz，1H)，7.61(d，J＝7.89Hz，1H)，7.48(d，J＝8.11Hz，1H)，6.85(d，J＝4.82Hz，1H)，5.70(dd，J＝5.70，3.51Hz，1H)，3.33-3.14(m，3H)，3.14-2.89(m，1H)，2.74(s，3H)，2.41-2.32(m，4H)，2.13-2.00(m，1H)。
实施例276
合成(4S)-N-(6-异丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向6-异丙基吡嗪-2-胺(141mg，1.030mmol)在THF(5mL)中的搅拌的溶液中加入三乙胺(0.663mL，4.76mmol)和三光气(235mg，0.793mmol)，并搅拌30min。然后加入(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(200mg，0.793mmol)，并在80℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％甲醇的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(6-异丙基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(60mg，0.144mmol，18.15％产率)，其为近白色固体(TLC：洗脱剂：5％甲醇的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：416.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.34(s，1H)，9.37(s，1H)，8.70(d，J＝5.26Hz，1H)，8.21(s，1H)，8.00(br d，J＝3.73Hz，1H)，7.60-7.69(m，2H)，7.47(d，J＝8.11Hz，1H)，5.73(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.14-3.37(m，3H)，2.98-3.09(m，2H)，2.66(s，3H)，2.27-2.46(m，1H)，2.09(dt，J＝14.03，7.23Hz，1H)，1.33(dd，J＝7.02，1.10Hz，6H)。
实施例277
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(来自中间体SFC分离的峰1)(440mg，1.475mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入NaH(295mg，7.37mmol)。30min后，加入3-(吡啶-2-基)-2H-吡啶并[1，2-a][1，3，5]三嗪-2，4(3H)-二酮(531mg，2.212mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：90％Hex/EtOAc)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(266.8mg，0.631mmol，42.8％产率)，其为近白色固体(TLC系统：Rf：04，：EtOAc)，LCMS(m/z)：419.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.33(s，1H)，8.19(d，J＝3.73Hz，1H)，8.15(d，J＝8.33Hz，1H)，7.66-7.60(m，1H)，7.32(d，J＝8.55Hz，1H)，6.91(dd，J＝6.58，5.04Hz，1H)，5.96(d，J＝8.33Hz，1H)，5.58(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.01-3.95(m，1H)，3.86(dd，J＝11.29，7.34Hz，1H)，3.66(td，J＝8.99，4.60Hz，1H)，3.60-3.53(m，1H)，3.23-3.05(m，4H)，2.89(dd，J＝11.84，3.51Hz，1H)，2.37-2.18(m，3H)，1.98(dt，J＝13.81，6.91Hz，1H)。
实施例278
合成(4S)-7-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.400g，1.263mmol)、1-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-3-(三氟甲基)-1H-吡唑(0.697g，2.53mmol)和磷酸三钾(0.803g，3.79mmol)在1，4-二噁烷(25mL)和水(4mL)中的悬浮液用氩气在室温脱气15分钟，然后加入X-phos(0.0601g，0.126mmol)和Pd(dba)2(0.046g，0.051mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌16小时。反应完成后(如TLC指示)，将反应混合物冷却至28℃，并用水(15mL)稀释，并用EtOAc萃取(2X 25mL)。将有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯的己烷溶液，Rf值：0.3，UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并将产物用40％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-甲基-3-(三氟甲基)-1H-吡唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.208g，0.482mmol，38.2％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：431.23[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.08(s，1H)，9.51(d，J＝1.5Hz，1H)，8.29(d，J＝2.6Hz，1H)，8.25-8.22(m，1H)，7.65(d，J＝7.9Hz，1H)，7.21(d，J＝7.9Hz，1H)，7.05(s，1H)，5.71(dd，J＝5.8，3.2Hz，1H)，4.24(s，3H)，3.33-3.15(m，3H)，3.04(dd，J＝12.2，3.2Hz，1H)，2.42-2.30(m，1H)，2.10(dt，J＝14.1，6.9Hz，1H)。
实施例279
合成(4S)-7-氰基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将X-phos(0.018g，0.047mmol)和(1，3-双(2，6-二-异丙基苯基)-4，5-二氢咪唑-2-亚基)氯)(3-苯基烯丙基)钯(2)(0.031g，0.047mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)和亚铁氰化钾(0.174g，0.474mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的脱气的溶液中，并加热至100℃保持15h。冷却至室温，并经硅藻土床过滤。将滤液用水(25mL)和乙酸乙酯(100mL)稀释。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品化合物(TLC洗脱剂：100％乙酸乙酯；UV活性；Rf～0.3)。将粗品混合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用50％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-氰基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.13g，0.415mmol，43.8％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：308.19[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 12.48(br s，1H)，9.45(s，1H)，8.32(s，2H)，7.62(d，J＝7.89Hz，1H)，7.37(d，J＝7.89Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.24(t，J＝7.56Hz，2H)，2.99-3.14(m，2H)，2.36(td，J＝14.09，6.03Hz，1H)，2.01-2.16(m，1H)。
实施例280
合成(4S)-7-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(500mg，1.579mmol)、1-异丙基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(447mg，1.894mmol)和K3PO4(670mg，3.16mmol)在1，4-二噁烷(15mL)、水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入X-phos(75mg，0.158mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(72.3mg，0.079mmol)，并再次用氩气脱气5min。将反应混合物在100℃搅拌16小时，并冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释并用EtOAc萃取(3X20mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.2；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30-40％EtOAc/己烷洗脱，得到纯的(4S)-7-(1-异丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(418mg，1.070mmol，67.8％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：391.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.14(s，1H)，9.62(d，J＝1.5Hz，1H)，8.64(s，1H)，8.26-8.32(m，2H)，8.02(s，1H)，7.50(d，J＝7.9Hz，1H)，7.16(d，J＝8.1Hz，1H)，5.67(dd，J＝5.8，3.2Hz，1H)，4.61(m，1H)，3.12-3.31(m，3H)，2.99(dd，J＝11.9，3.2Hz，1H)，2.32(m，1H)，2.06(m，1H)，1.63(d，J＝6.8Hz，6H)。
实施例281
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢呋喃-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.189mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(176mg，0.594mmol)。30min后，加入DIPEA(1.038mL，5.94mmol)、四氢呋喃-3-胺(155mg，1.783mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌16h。使反应物降至室温，然后倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(2x30mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗产物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢呋喃-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(137.1mg，0.371mmol，31.2％产率)，其为近白色固体(TLC系统：Rf：0.2，5％MeOH-DCM)，LCMS(m/z)：366.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.76(br t，J＝6.80Hz，1H)，8.89(s，1H)，7.99(dd，J＝8.22，2.08Hz，1H)，7.54(d，J＝7.89Hz，1H)，7.30-7.21(m，2H)，5.62(dd，J＝5.81，2.96Hz，1H)，4.56(br dd，J＝4.82，1.97Hz，1H)，4.01-3.75(m，4H)，3.30-3.06(m，3H)，2.99-2.91(m，1H)，2.62(s，3H)，2.39-2.21(m，2H)，2.07-1.85(m，2H)。
实施例282
合成(4S)-7-(5-氟-6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，将磷酸三钾(323mg，1.520mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(240.0mg，0.760mmol)和3-氟-2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(234mg，0.988mmol)在1，4-二噁烷(5.0mL)和水(1.0mL)中的溶液中。将反应混合物脱气10min。加入X-Phos(36.2mg，0.076mmol)和Pd2(dba)3(34.8mg，0.038mmol)至反应混合物中，并进一步脱气10min。将反应物在微波中在100℃搅拌1小时。将反应混合物经硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。将滤液用水和饱和食盐水溶液洗涤。将分离的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液；UV活性；Rf～0.3)。将粗产物在grace柱上纯化，用3-5％MeOH的DCM溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(5-氟-6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(122.0mg，0.312mmol，41.0％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：391.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ12.91(s，1H)，8.77(t，J＝1.42Hz，1H)，8.62(d，J＝2.41Hz，1H)，8.32(dd，J＝4.71，1.43Hz，1H)，8.12(ddd，J＝8.33，2.63，1.53Hz，1H)，7.73(dd，J＝9.87，1.75Hz，1H)，7.64(d，J＝7.89Hz，1H)，7.27-7.32(m，2H)，5.70(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.14-3.34(m，3H)，3.03(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.62(d，J＝3.07Hz，3H)，2.28-2.38(m，1H)，2.05-2.14(m，1H)。
实施例283
合成(4S)-7-(5-氟-6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨：
在25℃，将磷酸三钾(402mg，1.894mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300.0mg，0.947mmol)、3-氟-2-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶(292mg，1.231mmol)在1，4-二噁烷(5.0mL)和水(1.0mL)中的溶液中。将反应混合物脱气10min。将X-Phos(45.2mg，0.095mmol)和Pd2(dba)3(43.4mg，0.047mmol)加入至反应混合物中，并进一步脱气10min。将反应物在微波中在100℃搅拌1小时。将反应混合物经硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯洗涤。将滤液用水和饱和食盐水溶液洗涤。将分离的有机相用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液；UV活性；Rf～0.3)。将粗产物在grace柱上纯化，用3-5％MeOH的二氯甲烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(5-氟-6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(150.0mg，0.365mmol，38.5％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：392.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.79(s，1H)，9.53(d，J＝1.5Hz，1H)，8.88(t，J＝1.5Hz，1H)，8.38(dd，J＝10.7，1.97Hz，1H)，8.30-8.34(m，2H)，7.64(d，J＝7.9Hz，1H)，7.44(d，J＝8.1Hz，1H)，5.70(dd，J＝6.03，3.2Hz，1H)，3.1-3.3(m，3H)，3.03(dd，J＝12.1，3.3Hz，1H)，2.62(s，3H)，2.36(dddd，J＝14.1，9.9，5.9，4.1Hz，1H)，2.04-2.15(m，1H)。
实施例284
合成(4S)-7-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将Pd2(dba)3(0.087g，0.095mmol)和X-phos(0.018g，0.047mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)、1-环丙基-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.333g，1.421mmol)和磷酸二氢钾(0.258g，1.894mmol)在1，4-二噁烷(5mL)和水(1mL)中的脱气的溶液中，并加热至90℃保持15小时。冷却至室温，并经硅藻土垫过滤。将滤液用水(25mL)和乙酸乙酯(50mL)稀释。将分离的有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的乙酸乙酯溶液；UV活性；Rf～0.30)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用75％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-环丙基-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.13g，0.332mmol，35.0％产率)米色固体，LCMS(m/z)：389.32[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 14.14(s，1H)，9.60(d，J＝1.10Hz，1H)，8.61(s，1H)，8.29-8.33(m，2H)，8.03(s，1H)，7.47-7.58(m，1H)，7.13(d，J＝8.11Hz，1H)，5.66(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，3.73(tt，J＝7.43，3.75Hz，1H)，3.08-3.34(m，3H)，2.99(dd，J＝11.95，3.18Hz，1H)，2.32(dddd，J＝14.11，10.00，6.03，4.06Hz，1H)，2.02-2.11(m，1H)，1.22-1.32(m，2H)，1.07-1.18(m，2H)。
实施例285
合成(4S)-7-((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将二异丙基乙基胺(3.34mL，19.14mmol)加入至吡嗪-2-甲酸(0.475g，3.83mmol)在四氢呋喃(30mL)中的搅拌的溶液中，在氩气中室温搅拌。加入叠氮磷酸二苯酯(1.053g，3.83mmol)至反应混合物中。将反应混合物在室温搅拌2小时，然后将(2S，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.735g，2.68mmol)加入至反应混合物中，并在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，并在水(20mL)和EtOAc(70mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。将粗品残余物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用15％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-((2S，6R)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.132g，0.329mmol，8.58％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：396.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.39(s，1H)，9.56(d，J＝1.10Hz，1H)，8.26(s，1H)，8.25(s，1H)，7.39(s，1H)，6.30(s，1H)，5.63(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，4.01(br d，J＝12.50Hz，2H)，3.68-3.89(m，2H)，3.16-3.28(m，1H)，3.05-3.15(m，2H)，2.92(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.61(t，J＝11.62Hz，2H)，2.27(dddd，J＝13.89，9.95，6.08，3.62Hz，1H)，1.93-2.06(m，1H)，1.33(d，J＝6.14Hz，6H)。
实施例286
合成(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.947mmol)、4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-2-(三氟甲基)嘧啶(260mg，0.947mmol)和K3PO4(603mg，2.84mmol)在1，4-二噁烷(20mL)中的溶液中加入水(3mL)。将反应混合物用氩气在室温脱气15min。然后向其中加入X-Phos(45.2mg，0.095mmol)和Pd2(dba)3(43.4mg，0.047mmol)。将反应混合物在90℃搅拌16小时。通过TLC监测反应进程。将反应物经硅藻土过滤和在减压下浓缩。将残余物用水稀释，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用硫酸钠干燥，过滤和浓缩。将粗品化合物通过柱色谱(中性氧化铝)纯化，将产物用30％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱。在减压下蒸发收集的级分，并在高真空下干燥，得到(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(2-(三氟甲基)嘧啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(230mg，0.534mmol，56.4％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：429.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.60(s，1H)，9.59(d，J＝1.32Hz，1H)，9.08(d，J＝5.26Hz，1H)，8.83(d，J＝5.26Hz，1H)，8.22-8.47(m，3H)，7.75(d，J＝7.89Hz，1H)，5.72(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.15-3.37(m，3H)，3.00-3.10(m，1H)，2.28-2.46(m，1H)，2.03-2.18(m，1H)。
实施例287
合成(4S)-7-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.350g，1.105mmol)、1-甲基-3-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(0.690g，3.31mmol)和磷酸三钾(0.703g，3.31mmol)在1，4-二噁烷(25mL)和水(4mL)中的悬浮液用氩气在室温脱气15分钟。然后，向上述混合物中加入X-phos(53mg，0.110mmol)和Pd(dba)2(0.032g，0.055mmol)，进一步脱气15分钟。将反应混合物在100℃搅拌16小时。反应完成后(如通过TLC指示)，冷却至28℃，并用水(15mL)稀释，用EtOAc萃取(2x25mL)。将有机层用水然后用饱和食盐水溶液洗涤，并用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品残余物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf值：0.3，UV活性)。将粗品残余物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并将产物用50％乙酸乙酯的石油醚溶液洗脱，得到(4S)-7-(1-甲基-1H-吡唑-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.192g，0.527mmol，47.7％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：363.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.98(s，1H)，9.56(d，J＝1.32Hz，1H)，8.33-8.27(m，2H)，7.66(d，J＝8.11Hz，1H)，7.56-7.52(m，1H)，7.46(d，J＝2.19Hz，1H)，7.42(d，J＝2.41Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.99(s，3H)，3.33-3.12(m，3H)，2.99(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.36-2.26(m，1H)，2.11-1.98(m，1H)。
实施例288
合成(4S)-N-(5-乙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(100mg，0.396mmol)在THF(10mL，在密封管中)中的搅拌的溶液中加入DMAP(145mg，1.189mmol)和(5-乙氧基吡嗪-2-基)氨基甲酸苯酯(308mg，1.189mmol)，并在90℃加热16h。将反应混合物冷却至室温，在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品残余物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％甲醇的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(5-乙氧基吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(38mg，0.090mmol，22.79％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：5％甲醇的DCM溶液Rf：0.4)，LCMS(m/z)：418.36[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.50(s，1H)，9.01(d，J＝1.32Hz，1H)，8.61(d，J＝5.26Hz，1H)，8.06(s，1H)，7.98(m，1H)，7.63(m，2H)，7.47(d，J＝7.89Hz，1H)，5.71(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，4.40(q，J＝7.02Hz，2H)，3.34-3.10(m，3H)，3.01(dd，J＝5.94，2.96Hz，1H)，2.67(s，3H)，2.36-2.10(m，2H)，1.42(t，J＝7.13Hz，3H)。
实施例289
合成(4S)-7-((2S，6S)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将二异丙基乙基胺(3.52mL，20.15mmol)加入至吡嗪-2-甲酸(0.500g，4.03mmol)在四氢呋喃(30mL)中的搅拌的溶液中，并在室温在氩气中搅拌。将叠氮磷酸二苯酯(1.109g，4.03mmol)加入至反应混合物中，并在室温搅拌2小时。接下来，将(2S，6S)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.774g，2.82mmol)加入至反应中，并在65℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至室温，并在水(20mL)和EtOAc(70mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品残余物，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用20％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-((2S，6S)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.321g，0.799mmol，19.82％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：396.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.41(s，1H)，9.56(d，J＝1.53Hz，1H)，8.25(d，J＝2.41Hz，1H)，8.16(dd，J＝2.41，1.53Hz，1H)，7.37(d，J＝8.55Hz，1H)，6.25(d，J＝8.55Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.11-4.31(m，2H)，3.67(dd，J＝12.50，3.29Hz，2H)，3.19-3.34(m，3H)，3.06-3.18(m，2H)，2.92(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.27(dddd，J＝13.95，9.95，6.03，3.84Hz，1H)，1.92-2.07(m，1H)，1.34(d，J＝6.36Hz，6H)。
实施例290
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-氯-N-(哒嗪-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.3g，0.947mmol)在1，4-二噁烷(10ml)/水(2ml)中的脱气的溶液中加入(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(0.195g，1.421mmol)和K3PO4(0.402g，1.894mmol)，在室温加入三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(0.087g，0.095mmol)和X-phos(0.090g，0.189mmol)，并在100℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将合并的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％甲醇的EtOAc溶液)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(哒嗪-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(125mg，0.333mmol，35.1％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：10％甲醇的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：374.21[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：13.50(s，1H)，9.10(d，J＝1.97Hz，1H)，8.93-9.05(m，1H)，8.72(d，J＝5.04Hz，1H)，8.00(dd，J＝5.92，2.85Hz，1H)，7.69(d，J＝8.11Hz，1H)，7.61-7.53(m，1H)，7.48(dd，J＝5.26，1.32Hz，1H)，7.41(d，J＝7.58Hz，1H)，5.67(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.35-3.13(m，3H)，3.05(dd，J＝12.17，3.18Hz，1H)，2.37(dddd，J＝14.17，9.84，5.81，4.17Hz，3H)，2.39(m，1H)，2.15(m，1H)。
实施例291
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(4-甲基嘧啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(400mg，1.585mmol)在THF(15mL，密封管)中的搅拌的溶液中加入三光气(282mg，0.951mmol)，并搅拌30min。然后加入TEA(1.105mL，7.93mmol)和4-甲基嘧啶-2-胺(260mg，2.378mmol)，并在65℃加热15h。将反应混合物冷却至室温；将THF蒸除，并在水(25mL)和DCM(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％甲醇的DCM溶液)纯化，得到500mg，60％LCMS纯度，其通过制备型HPLC(MP-A：10mM乙酸铵(水溶液)，MP-B：乙腈，柱：x bridge C18(100x19)mm 5μ，方法-T/％B：0/25/30，10/55，流速：19ml/min，溶解：THF+ACN)纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(4-甲基嘧啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(226mg，0.582mmol，36.7％产率)，其为米色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的EtOAc溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：388.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm：13.74(s，1H)，8.63(d，J＝5.26Hz，1H)，8.52(d，J＝5.04Hz，1H)，7.90-7.83(m，2H)，7.63(m，J＝8.11Hz，1H)，7.47(d，J＝8.11Hz，1H)，6.87(d，J＝5.04Hz，1H)，5.78(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.32-3.10(m，3H)，3.10-2.88(m，1H)，2.68(s，3H)，2.54(s，3H)，2.51-2.23(m，1H)，2.23-1.99(m，1H)。
实施例292
合成(4S)-7-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将磷酸钾(939mg，4.43mmol)和(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)硼酸(462mg，3.322mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(700mg，2.215mmol)在1，4-二噁烷∶水(10mL，8∶2)中的混合物中。将该混合物充入氩气30min。将PdOAc2(49.62mg，0.221mmol)和X-Phos(211.2mg，0.443mmol)加入至反应混合物中，然后在100℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，3％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-7-(1-甲基-2-氧代-1，2-二氢吡啶-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(110mg，0.270mmol，28.5％产率)，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：390.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.53(s，1H)，9.53(s，1H)，8.34-8.28(m，2H)，7.63(d，J＝8.11Hz，1H)，7.43(t，J＝7.78Hz，2H)，7.20(d，J＝1.75Hz，1H)，7.04(dd，J＝7.23，1.97Hz，1H)，5.70(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.62(s，3H)，3.33-3.14(m，3H)，3.03(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.40-2.30(m，1H)，2.09(dt，J＝13.92，6.85Hz，1H)。
实施例293
合成(4S)-7-(5-氰基-6-乙氧基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(400mg，1.263mmol)、2-乙氧基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-3-甲腈(519mg，1.894mmol)和K3PO4(536mg，2.53mmol)在1，4-二噁烷(15mL)、水(3mL)中的溶液用氩气脱气20min，加入x-phos(60.2mg，0.126mmol)、三(二亚苄基丙酮)二钯(0)(57.8mg，0.063mmol)，并再次用氩气脱气5min。将反应混合物在100℃搅拌16小时，冷却至室温。将反应混合物经硅藻土过滤，然后将滤液用水稀释，并用EtOAc萃取(3x20mL)。将合并的有机层用水、饱和食盐水溶液洗涤，用硫酸钠干燥，蒸发得到粗品化合物(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf-0.3；UV活性)。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用30-40％EtOAc/己烷洗脱，得到纯的(4S)-7-(5-氰基-6-乙氧基吡啶-3-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(173mg，0.398mmol，31.5％产率)，其为近白色固体，LCMS(m/z)：429.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.83(s，1H)，9.51(d，J＝1.5Hz，1H)，9.16(d，J＝2.4Hz，1H)，8.82(d，J＝2.6Hz，1H)，8.55(dd，J＝2.6，1.5Hz，1H)，8.31(d，J＝2.4Hz，1H)，7.62(d，J＝7.9Hz，1H)，7.38(d，J＝7.9Hz，1H)，5.67(dd，J＝6.0，3.2Hz，1H)，4.57(q，J＝7.1Hz，2H)，3.12-3.32(m，3H)，3.01(dd，J＝12.0，3.3Hz，1H)，2.34(m，1H)，2.07(m，1H)，1.48(t，J＝7.1Hz，3H)。
实施例294
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将三光气(212mg，0.714mmol)分批缓慢加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.190mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌30min。将DIPEA(0.622mL，3.57mmol)和四氢-2H-吡喃-4-胺(180mg，1.785mmol)加入至上述反应混合物中，在70℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，并将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢-2H-吡喃-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(110mg，0.290mmol，29.2％产率)，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：380.36[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.52(br d，J＝7.23Hz，1H)，8.88(d，J＝1.97Hz，1H)，7.92(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.54(d，J＝7.89Hz，1H)，7.28(s，1H)，7.22(d，J＝7.89Hz，1H)，5.62(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，4.04-3.94(m，3H)，3.51(tt，J＝11.59，2.33Hz，2H)，3.27-3.15(m，2H)，3.13-3.06(m，1H)，2.95(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)2.63(s，3H)，2.26(dddd，J＝14.00，9.95，5.97，4.06Hz，1H)，2.08-1.98(m，3H)，1.62-1.55(m，2H)。
实施例295
合成(4S)-N-(环丙基甲基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(200mg，0.793mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入TEA(0.331mL，2.378mmol)和三光气(141mg，0.476mmol)，并在室温搅拌30分钟。然后加入环丙基甲胺(85mg，1.189mmol)。将反应混合物在60℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂蒸发，用CH2Cl2(25mL)稀释。将溶液用水和饱和食盐水洗涤，用无水Na2SO4干燥，过滤和浓缩。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，用5％MeOH/CH2Cl2洗脱)纯化，得到(4S)-N-(环丙基甲基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(140mg，0.381mmol，48.0％产率)，其为淡黄色固体(TLC：Rf＝0.3，纯EtOAc)，LCMS(m/z)：350.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.52(br s，1H)，8.96(d，J＝1.97Hz，1H)，8.02(dd，J＝8.00，2.30Hz，1H)，7.53(d，J＝7.89Hz，1H)，7.26-7.20(m，2H)，5.64(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.32-3.05(m，5H)，2.95(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.62(s，3H)，2.26(dddd，J＝14.00，9.95，5.97，4.06Hz，1H)，2.10-1.98(m，1H)，1.08(dddt，J＝12.78，7.66，5.04，2.38，2.38Hz，1H)，0.65-0.52(m，2H)，0.26(q，J＝4.97Hz，2H)。
实施例296
合成(4S)-N-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在25℃，将(4S)-N-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-7-氯-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(250mg，0.699mmol)和(2-甲基吡啶-4-基)硼酸(124mg，0.908mmol)在1，4-二噁烷(9mL)和水(1mL)中的溶液脱气15min。向该反应混合物中加入Cs2CO3(455mg，1.398mmol)，并再次脱气15min。最终加入PdCl2(dppf)(51.1mg，0.070mmol)，并将反应混合物在100℃搅拌2h。将反应混合物用水(10ml)稀释，并用乙酸乙酯(2X10ml)萃取。将合并的有机层用水(10ml)、饱和食盐水(10ml)洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱纯化(2次)(100-200目硅胶，用3％CH2Cl2/MeOH洗脱)，得到化合物。将其通过制备型HPLC再次纯化，用3％甲醇的二氯甲烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-N-(3H-[1，2，3]三唑并[4，5-d]嘧啶-7-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(15mg，0.036mmol，5.15％产率)，其为近白色固体(TLC系统：5％甲醇的DCM溶液。Rf值：0.3)，LCMS(m/z)：414.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 13.23(br s，1H)，8.47(br d，J＝19.95Hz，2H)，8.08(br s，1H)，7.92-8.04(m，1H)，7.67-7.81(m，2H)，5.48-5.64(m，1H)，3.20-3.26(m，1H)，3.15(br d，J＝11.40Hz，2H)，2.90-3.05(m，1H)，2.46(br s，3H)，2.20-2.38(m，1H)，1.92-2.09(m，1H)。
实施例297
合成(4S)-N-(3-氟吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(10mL，密封管)中的搅拌的溶液中加入三乙胺(1.657mL，11.89mmol)和三光气(588mg，1.982mmol)，并搅拌30min，然后加入3-氟吡嗪-2-胺(336mg，2.97mmol)，并在80℃加热15h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％甲醇的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(3-氟吡嗪-2-基)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(27mg，0.068mmol，3.44％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：5％甲醇的DCM溶液，Rf：0.4)，LCMS(m/z)：392.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.43(s，1H)，8.59(d，J＝5.26Hz，1H)，8.32(d，J＝2.63Hz，1H)，7.90(d，J＝2.41Hz，1H)，7.72-7.55(m，3H)，7.37(br d，J＝4.38Hz，1H)，5.73(br dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)，3.36-3.02(m，4H)，2.61(m，3H)，2.33(br dd，J＝9.87，4.17Hz，1H)，2.12(br dd，J＝9.72，3.86Hz，1H)。
实施例298
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨)
在0℃，向(4S)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(来自中间体SFC分离的峰2)(350mg，1.173mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(209mg，0.704mmol)。30min后，加入DIPEA(1.025mL，5.87mmol)和吡啶-2-胺(221mg，2.347mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(2x50mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(3-(三氟甲基)吡咯烷-1-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(50.8mg，0.115mmol，9.83％产率)，其为淡黄色固体(TLC系统：Rf：02，：EtOAc)，LCMS(m/z)：419.2[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.34(s，1H)，8.25-8.11(m，2H)，7.69-7.61(m，1H)，7.34(d，J＝8.33Hz，1H)，6.98-6.90(m，1H)，5.98(d，J＝8.55Hz，1H)，5.61(dd，J＝6.14，3.29Hz，1H)，4.02(dd，J＝11.18，8.55Hz，1H)，3.82(dd，J＝11.29，7.34Hz，1H)，3.70(td，J＝8.93，4.28Hz，1H)，3.63-3.51(m，1H)，3.29-3.06(m，4H)，2.90(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.39-2.19(m，3H)，2.05-1.91(m，1H)。
实施例299
合成(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(9H-嘌呤-6-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
向(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(1g，3.96mmol)在四氢呋喃(THF)(20mL)中的溶液中加入三光气(0.588g，1.982mmol)，并搅拌1h。加入三乙胺(2.76mL，19.82mmol)，然后加入9H-嘌呤-6-胺(0.696g，5.15mmol)。将反应混合物在70℃搅拌16h。将反应混合物用水稀释，并用2x25ml乙酸乙酯萃取。将合并的有机层用饱和食盐水溶液洗涤，用无水硫酸钠干燥，并在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱(100-200硅胶，用3％CH2Cl2/MeOH洗脱)纯化，得到所需化合物，将其通过制备型HPLC纯化，得到(4S)-7-(2-甲基吡啶-4-基)-N-(9H-嘌呤-6-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(25mg，0.057mmol，1.449％产率)，其为白色固体(TLC系统：5％甲醇的DCM溶液，Rf值：0.3)，LCMS(m/z)：411.9[M+H]+。
1H NMR(400MHz，DMSO-d6)：δppm 14.08(br s，1H)，12.32(br s，1H)，8.72(s，1H)，8.63(d，J＝5.04Hz，1H)，8.45(s，1H)，8.20(br s，1H)，7.99(dd，J＝5.48，1.53Hz，1H)，7.90-7.81(m，1H)，7.81-7.74(m，1H)，5.57(dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)，3.27-3.07(m，3H)，3.02(br dd，J＝11.95，3.18Hz，1H)，2.65(s，3H)，2.37-2.18(m，1H)，2.08(br d，J＝6.58Hz，1H)。
实施例300
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将三光气(212mg，0.74mmol)分批缓慢加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.190mmol)在四氢呋喃(THF)(15mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌30min。将DIPEA(0.622mL，3.571mmol)和2，2，2-三氟乙胺盐酸盐(242mg，1.785mmol)加入至上述反应混合物中，在70℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，并将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(2，2，2-三氟乙基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(235mg，0.615mmol，103％产率)，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液Rf：0.5；UV活性)，LCMS(m/z)378.31[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 11.12(br t，J＝6.03Hz，1H)，8.88(d，J＝1.97Hz，1H)，7.94(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.57(d，J＝7.89Hz，1H)，7.31-7.22(m，2H)，5.62(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.16-4.02(m，2H)，3.32-3.08(m，3H)，2.96(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.62(s，3H)，2.28(dddd，J＝14.06，10.00，6.08，4.06Hz，1H)，2.09-1.97(m，1H)。
实施例301
合成(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢-2H-吡喃-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，向(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(300mg，1.189mmol)在四氢呋喃(THF)(10mL)中的溶液中加入三光气(176mg，0.594mmol)。30min后，加入DIPEA(1.038mL，5.94mmol)、四氢-2H-吡喃-3-胺(180mg，1.783mmol)，并将反应混合物在70℃搅拌16h。将反应混合物倒入冷水(50mL)中，并用乙酸乙酯(150mL)萃取。将有机层用无水硫酸钠干燥，在减压下浓缩，得到粗品化合物。将粗产物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：3％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(四氢-2H-吡喃-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(114.5mg，0.299mmol，25.1％产率)，其为近白色固体(TLC系统：Rf：0.2，5％MeOH-DCM)，LCMS(m/z)：380.0[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.59(t，J＝7.78Hz，1H)，8.92(s，1H)，8.07(dt，J＝8.11，2.96Hz，1H)，7.52(d，J＝7.89Hz，1H)，7.27-7.17(m，2H)，5.66-5.59(m，1H)，4.10-4.00(m，1H)，3.86(dt，J＝11.24，3.70Hz，1H)，3.71-3.62(m，2H)，3.53(dd，J＝11.18，5.70Hz，1H)，3.28-3.06(m，3H)，2.97-2.89(m，1H)，2.60(s，3H)，2.24(dddd，J＝16.66，9.98，6.25，3.51Hz，1H)，2.07-1.91(m，2H)，1.74-1.66(m，2H)，1.56-1.50(m，1H)。
实施例302
合成(4S)-7-((R)-2-乙基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将二异丙基乙基胺(2.81mL，16.12mmol)加入至吡嗪-2-甲酸(400mg，3.22mmol)在四氢呋喃(15mL)中的搅拌的溶液中，在氩气中，在30℃搅拌。加入叠氮磷酸二苯酯(887mg，3.22mmol)至反应混合物中，并在30℃搅拌2h。然后加入(2R)-2-乙基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(619mg，2.256mmol)至反应混合物中，并在65℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(20mL)和乙酸乙酯(2x30mL)之间分配。分离有机层，并用无水硫酸钠干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：90％乙酸乙酯的己烷溶液，Rf＝0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并将产物用10-15％乙酸乙酯的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-((R)-2-乙基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(35mg，0.088mmol，2.75％产率)，其为米色固体，LCMS(m/z)：396.31[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.37(s，1H)，9.55(d，J＝1.53Hz，1H)，8.25(d，J＝2.63Hz，1H)，8.09-8.18(m，1H)，7.38(d，J＝8.55Hz，1H)，6.30(d，J＝8.55Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.00-4.13(m，2H)，3.86(br d，J＝12.93Hz，1H)，3.75(td，J＝11.62，2.85Hz，1H)，3.45-3.56(m，1H)，3.13-3.30(m，1H)，3.00-3.17(m，3H)，2.92(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.69-2.81(m，1H)，2.27(dddd，J＝13.89，9.95，6.08，3.62Hz，1H)，2.00(dt，J＝14.09，6.88Hz，1H)，1.59-1.78(m，2H)，1.05(t，J＝7.45Hz，3H)。
实施例303
合成(4S)-9-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氮气气氛下，在室温，将N，N-二甲基氨基吡啶(0.482g，3.94mmol)加入至(4S)-9-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(0.350g，1.314mmol)和吡啶-3-基氨基甲酸苯酯(0.845g，3.94mmol)在四氢呋喃(20mL)中的搅拌的溶液中。将反应物在65℃搅拌48小时。将反应物冷却至室温，并将溶剂在减压下除去，并在水(20mL)和EtOAc(70mL)之间分配。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。加入乙酸乙酯至反应物质中，并搅拌10分钟。过滤反应物质，并用EtOAc洗涤。将滤液浓缩，得到棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.2；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用60％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-9-甲基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.115g，0.296mmol，22.56％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)387.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 13.29(s，1H)，8.92(d，J＝1.97Hz，1H)，8.53(d，J＝2.19Hz，1H)，8.28(br d，J＝3.51Hz，1H)，8.19(br d，J＝8.33Hz，1H)，7.99(dd，J＝8.00，2.30Hz，1H)，7.32(d，J＝7.89Hz，1H)，7.22-7.29(m，1H)，7.19(s，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.17(t，J＝7.34Hz，2H)，3.07-3.13(m，1H)，2.97-3.05(m，1H)，2.64(s，3H)，2.50(s，3H)，2.32(td，J＝13.76，6.47Hz，1H)，1.99-2.14(m，1H)。
实施例304
合成(4S)-7-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在28℃，将磷酸三钾(469mg，2.210mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(350.0mg，1.105mmol)、3-甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(276mg，1.326mmol)在1，4-二噁烷(10.0ml)和水(2.0ml)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气15min，向其中加入X-phos(52.7mg，0.110mmol)和Pd2(dba)3(50.6mg，0.055mmol)。将反应混合物进一步脱气15min，并在100℃搅拌16小时。然后将混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(40ml)洗涤。将滤液用水(10ml)洗涤。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液；Rf-0.3；UV活性)。将该粗品通过grace柱纯化，并用2-5％MeOH的二氯甲烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(3-甲基-1H-吡唑-5-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(181.5mg，0.492mmol，44.5％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：363.27[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ13.80(s，1H)，9.55(d，J＝1.10Hz，1H)，8.52(s，1H)，8.20-8.35(m，2H)，7.55(d，J＝8.11Hz，1H)，7.12(d，J＝7.89Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.11-3.34(m，3H)，2.89-3.11(m，1H)，2.60(s，3H)，2.33(dddd，J＝14.06，9.95，5.92，4.06Hz，1H)，1.97-2.17(m，1H)。
实施例305
合成(4S)-N-异丙基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在0℃，将DIPEA(1.038mL，5.94mmol)和三光气(353mg，1.189mmol)先后加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在THF(15mL，在密封管中)中的搅拌的溶液中，然后在室温搅拌30min。然后加入丙-2-胺(176mg，2.97mmol)，并加热至75℃保持16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(60mL)之间分配。分离有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-异丙基-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(130mg，0.384mmol，19.39％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf：0.3)，LCMS(m/z)：338.32[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.38(d，J＝6.4Hz，1H)，8.91(d，J＝2Hz，1H)，7.94(dd，J＝2.4，8Hz，1H)，7.52(d，J＝5.6Hz，1H)，7.25-7.20(m，2H)，5.66-5.62(m，1H)，4.14-4.06(m，1H)，3.26-3.06(m，3H)，2.97-2.92(m，1H)，2.62(s，3H)，2.30-2.21(m，1H)，2.26-1.98(m，1H)，1.27(d，J＝6.8Hz，6H)。
实施例306
合成(4S)-N-(1-甲基哌啶-4-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将三光气(423.8mg，1.428mmol)分批缓慢加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(600mg，2.380mmol)在四氢呋喃(THF)(25mL)中的搅拌的溶液中，并搅拌30min。将DIPEA(1.24mL，7.14mmol)和1-甲基哌啶-4-胺(408mg，3.571mmol)加入至反应混合物中，在70℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，在真空中浓缩，并将残余物在水(40mL)和EtOAc(80mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱纯化，使用硅胶(100-200目)，2％甲醇的二氯甲烷溶液作为洗脱剂，得到(4S)-N-(1-甲基哌啶-4-基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(100mg，0.252mmol，21.21％产率)，其为近白色固体，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液Rf：0.4；UV活性)，LCMS(m/z)：393.33[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δppm 10.46(br d，J＝7.45Hz，1H)，8.88(d，J＝2.19Hz，1H)，7.92(dd，J＝8.11，2.41Hz，1H)，7.53(d，J＝7.89Hz，1H)，7.29-7.24(m，1H)，7.20(d，J＝7.89Hz，1H)，5.62(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.82-3.73(m，1H)，3.12-3.26(m，2H)，3.12-3.06(m，1H)，2.94(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.85-2.78(m，1H)，2.86-2.77(m，1H)，2.62(s，3H)，2.30-2.22(m，4H)，2.15-1.98(m，5H)，1.65-1.53(m，2H)。
实施例307
合成(4S)-7-((2R，6R)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在氩气氛中，在室温，将叠氮磷酸二苯酯(0.432g，1.571mmol)加入至吡嗪-2-甲酸(0.195g，1.571mmol)和DIPEA(1.372mL，7.86mmol)在四氢呋喃(30mL)中的搅拌的溶液中。将反应混合物在室温搅拌2h，随后加入(2R，6R)-2，6-二甲基-4-((4S)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-7-基)吗啉(0.302g，1.100mmol)，并将反应混合物在65℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并将溶剂在减压下完全蒸除，在水(20mL)和EtOAc(60mL)之间分配。分离有机层，用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc，Rf-0.3；UV活性)。将粗品通过柱色谱纯化，使用中性氧化铝，并用20％EtOAc的己烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-((2R，6R)-2，6-二甲基吗啉代)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.081g，0.203mmol，12.93％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：396.38[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)δppm 13.42(s，1H)，9.56(d，J＝1.32Hz，1H)，8.25(d，J＝2.63Hz，1H)，8.09-8.19(m，1H)，7.37(d，J＝8.55Hz，1H)，6.24(d，J＝8.55Hz，1H)，5.63(dd，J＝6.03，3.18Hz，1H)，4.28-4.15(m，2H)，3.67(dd，J＝12.39，3.40Hz，2H)，3.32-3.19(m，3H)，3.17-3.06(m，2H)，2.92(dd，J＝11.84，3.29Hz，1H)，2.27(dddd，J＝13.95，10.00，6.19，3.84Hz，1H)，2.00(dt，J＝14.09，7.10Hz，1H)，1.34(d，J＝6.36Hz，6H)。
实施例308
合成(4S)-7-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将磷酸三钾(469mg，2.210mmol)加入至(4S)-7-氯-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(350mg，1.105mmol)、1-(二氟甲基)-4-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)-1H-吡唑(324mg，1.326mmol)在1，4-二噁烷(10.0ml)和水(2.0ml)中的搅拌的溶液中。将反应混合物脱气10min。将Pd2(dba)3(50.6mg，0.055mmol)和X-phos(52.7mg，0.110mmol)加入至反应混合物中，并再次脱气15min。将反应混合物在100℃搅拌16小时。将反应混合物冷却至28℃，并经硅藻土垫过滤，并用乙酸乙酯(40ml)洗脱。将滤液用水(10ml)洗涤。分离有机层并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品，其为棕色固体(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液，Rf-0.4；UV活性)。将粗品通过grace柱纯化，并用1-2％MeOH的二氯甲烷溶液洗脱，得到纯的(4S)-7-(1-(二氟甲基)-1H-吡唑-4-基)-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(280.0mg，0.702mmol，63.6％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：399.30[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)：δ14.18(s，1H)，9.55(d，J＝1.3Hz，1H)，9.17(s，1H)，8.36-8.27(m，2H)，8.22(s，1H)，7.56(d，J＝7.9Hz，1H)，7.26-7.06(m，2H)，5.66(dd，J＝5.9，3.3Hz，1H)，3.35-3.11(m，3H)，3.01(dd，J＝12.3，3.3Hz，1H)，2.34(dddd，J＝14.1，9.8，6.0，4.06Hz，1H)，1.93-2.17(m，1H)。
实施例309
合成(4S)-7-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将N，N，4-三甲基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(274mg，1.045mmol)和K3PO4(605mg，2.85mmol)先后加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.950mmol)在1-丁醇(10mL)中的搅拌的溶液中，并脱气20min。然后将Pd2(dba)3(43.5mg，0.048mmol)和X-phos(45.3mg，0.095mmol)加入至反应混合物中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，将化合物在70％EtOAc的石油醚溶液中收集，得到(4S)-7-(6-(二甲基氨基)-4-甲基吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(100mg，0.236mmol，24.80％产率)，其为米色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc的石油醚溶液，Rf：0.4，UV活性)，LCMS(m/z)：416.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 13.31(s，1H)，8.36-8.17(m，3H)，8.17-7.96(m，1H)，7.86-7.57(m，1H)，6.99(d，J＝7.89Hz，1H)，6.95-6.68(m，1H)，6.43(s，1H)，5.69(brdd，J＝5.59，3.18Hz，1H)，3.31(br d，J＝8.77Hz，1H)，3.24-3.10(m，8H)，3.10-2.87(m，1H)，2.47(s，3H)，2.40-2.20(m，1H)，2.19-1.92(m，1H)。
实施例310
合成(4S)-7-(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)硼酸(215mg，1.045mmol)和K3PO4(605mg，2.85mmol)先后加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.950mmol)在1-丁醇(10mL)中的搅拌的溶液中，并脱气20min。然后将Pd2(dba)3(43.5mg，0.048mmol)和X-phos(45.3mg，0.095mmol)加入至反应混合物中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，将化合物在70％EtOAc的石油醚溶液中收集，得到(4S)-7-(6-(哌啶-1-基)吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(150mg，0.336mmol，35.3％产率)，其为淡黄色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc的石油醚溶液，Rf：0.4，UV活性)。LCMS(m/z)：442.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 13.71(s，1H)，8.80(d，J＝2.63Hz，1H)，8.54(dd，J＝8.99，2.63Hz，1H)，8.37(dt，J＝4.93，0.82Hz，1H)，8.18(d，J＝8.33Hz，1H)，7.78-7.59(m，1H)，7.51(d，J＝8.11Hz，1H)，7.30-7.25(m，1H)，6.97(ddd，J＝7.23，4.82，0.88Hz，1H)，6.79(d，J＝8.99Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.29Hz，1H)，3.70-3.59(m，4H)，3.09-3.32(m，3H)，3.09-2.84(m，1H)，2.31(d，J＝1.97Hz，1H)，2.17-1.95(m，1H)，1.68(br s，6H)。
实施例311
合成(4S)-N-(叔丁基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将DIPEA(1.038mL，5.94mmol)和三光气(353mg，1.189mmol)先后加入至(4S)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-2，3，4，5-四氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯(500mg，1.982mmol)在四氢呋喃(15mL)中的溶液中，并将其搅拌30min。然后加入2-甲基丙-2-胺(217mg，2.97mmol)，并加热至75℃保持16h。将反应混合物冷却至28℃，并在水(25mL)和EtOAc(60mL)之间分配。将分离的有机层用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品混合物通过快速柱色谱(硅胶：100-200目，洗脱剂：2％MeOH的DCM溶液)纯化，得到(4S)-N-(叔丁基)-7-(6-甲基吡啶-3-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(185mg，0.525mmol，26.5％产率)，其为近白色固体(TLC洗脱剂：5％MeOH的DCM溶液，Rf：0.3；UV活性)，LCMS(m/z)：352.34[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)：δppm 10.4(s，1H)，8.90(d，J＝2Hz，1H)，7.95(dd，J＝2.4Hz，8Hz，1H)，7.51(d，J＝7.6Hz，1H)，7.22(d，J＝8Hz，1H)，7.17(d，J＝8Hz，1H)，5.64-5.61(m，1H)，3.28-3.12(m，2H)，3.10-3.05(m，1H)，2.96-2.91(m，1H)，2.61(s，3H)，2.30-2.21(m，1H)，2.06-1.97(m，1H，)，1.43(s，9H)。
实施例312
合成(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将2-(吡咯烷-1-基)-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)嘧啶(288mg，1.045mmol)和K3PO4(605mg，2.85mmol)先后加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.950mmol)在1-丁醇(10mL)中的搅拌的溶液中，并脱气20min。然后将Pd2(dba)3(43.5mg，0.048mmol)和X-phos(45.3mg，0.095mmol)加入至反应混合物中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，将化合物在70％EtOAc的石油醚溶液中收集，得到(4S)-N-(吡啶-2-基)-7-(2-(吡咯烷-1-基)嘧啶-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(170mg，0.377mmol，39.7％产率)，其为黄色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc的石油醚溶液，Rf：0.4，UV活性)，LCMS(m/z)：429.6[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 13.57(s，1H)，9.09(s，2H)，8.51-8.26(m，1H)，8.14(d，J＝8.33Hz，1H)，7.67(td，J＝7.84，1.86Hz，1H)，7.54(m，J＝8.11Hz，1H)，7.26(s，1H)，6.97(ddd，J＝7.29，4.88，0.99Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.81，3.18Hz，1H)，3.75-3.60(m，4H)，3.35-3.09(m，3H)，2.99(dd，J＝12.06，3.29Hz，1H)，2.32(m，1H)，1.98-2.13(m，5H)。
实施例313
合成(4S)-7-(6-(二乙基氨基)吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将N，N-二乙基-5-(4，4，5，5-四甲基-1，3，2-二氧杂硼杂环戊烷-2-基)吡啶-2-胺(289mg，1.045mmol)和K3PO4(605mg，2.85mmol)先后加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.950mmol)在1-丁醇(10mL)中的搅拌的溶液中，并脱气20min。然后将Pd2(dba)3(43.5mg，0.048mmol)和X-phos(45.3mg，0.095mmol)加入至反应混合物中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，将化合物在70％EtOAc的石油醚溶液中收集，得到(4S)-7-(6-(二乙基氨基)吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(120mg，0.271mmol，28.5％产率)，其为米色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc的石油醚溶液，Rf：0.4，UV活性)，LCMS(m/z)：430.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3)δppm 13.77(s，1H)，8.78(d，J＝2.41Hz，1H)，8.64-8.43(m，1H)，8.43-8.28(m，1H)，8.18(d，J＝8.55Hz，1H)，7.75-7.59(m，1H)，7.51(d，J＝8.11Hz，1H)，7.39-7.15(m，1H)，6.97(ddd，J＝7.34，4.93，0.88Hz，1H)，6.62(d，J＝8.99Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.69-3.50(m，4H)，3.34-3.08(m，3H)，3.08-2.89(m，1H)，2.39-2.19(m，1H)，2.08(dt，J＝13.87，6.77Hz，1H)，1.24(t，J＝7.02Hz，6H)。
实施例314
合成(4S)-7-(6-吗啉代吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
在室温，将(6-吗啉代吡啶-3-基)硼酸(296mg，1.425mmol)和K3PO4(605mg，2.85mmol)先后加入至(4S)-7-氯-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(300mg，0.950mmol)在1-丁醇(10mL)中的搅拌的溶液中，并脱气20min。然后将Pd2(dba)3(43.5mg，0.048mmol)和X-phos(45.3mg，0.095mmol)加入至反应混合物中，并将反应混合物在80℃搅拌16h。将反应混合物冷却至室温，并在水(25mL)和EtOAc(40mL)之间分配。分离有机层，并用无水Na2SO4干燥，过滤和将滤液蒸发，得到粗品化合物。将粗品化合物通过柱色谱(硅胶：100-200目)纯化，将化合物在70％EtOAc的石油醚溶液中收集，得到(4S)-7-(6-吗啉代吡啶-3-基)-N-(吡啶-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(110mg，0.245mmol，25.8％产率)，其为米色固体(TLC洗脱剂：100％EtOAc的石油醚溶液，Rf：0.4，UV活性)，LCMS(m/z)：444.3[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)δppm 13.68(s，1H)，8.85(s，1H)，8.56-8.64(m，1H)，8.36(d，J＝3.73Hz，1H)，8.19(d，J＝8.33Hz，1H)，7.68(t，J＝7.13Hz，1H)，7.54(d，J＝8.11Hz，1H)，7.32(s，1H)，7.02-6.95(m，1H)，6.78(d，J＝8.99Hz，1H)，5.68(dd，J＝5.70，3.07Hz，1H)，3.91-3.83(m，4H)，3.70-3.60(m，4H)，3.34-3.14(m，3H)，2.99(dd，J＝11.95，3.18Hz，1H)，2.42-2.26(m，1H)，2.08(dt，J＝13.87，7.21Hz，1H)。
实施例315
合成(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(2H-四唑-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨
将叠氮基三丁基锡烷(1.297g，3.90mmol)加入至(4S)-7-氰基-N-(吡嗪-2-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.4g，1.302mmol)在四氢呋喃(25mL)中的搅拌的溶液中，并在密封管中加热至80-90℃保持48h。将反应混合物冷却至室温。将四氢呋喃在减压下浓缩，得到残余物。将残余物用二氯甲烷(100mL)稀释。将有机层用50mL 0.5M HCl、水(50mL)和饱和食盐水(50mL)洗涤。将有机层用无水硫酸钠干燥，过滤和蒸发，得到粗品(TLC洗脱剂：10％MeOH的DCM溶液；UV活性；Rf～0.3)。将粗品化合物用乙醚研磨，并过滤，得到(4S)-N-(吡嗪-2-基)-7-(2H-四唑-5-基)-3，4-二氢-1，4-亚甲基吡啶并[2，3-b][1，4]二氮杂环庚三烯-5(2H)-甲酰氨(0.13g，0.369mmol，28.4％产率)，其为白色固体，LCMS(m/z)：351.24[M+H]+。
1H NMR(400MHz，CDCl3-d)δppm 14.75(br s，1H)，9.47(d，J＝1.32Hz，1H)，8.48-8.40(m，2H)，8.02(d，J＝7.89Hz，1H)，7.77(d，J＝7.89Hz，1H)，5.57(dd，J＝5.92，3.07Hz，1H)，3.37-3.27(m，2H)，3.22-3.17(m，1H)，3.24-3.04(m，1H)，2.39(ddt，J＝14.36，8.88，5.48，5.48Hz，1H)，2.18-2.05(m，1H)。
实施例316
本发明涉及沉默调节蛋白调节剂，其在科学文献中已知可用于增加细胞寿命，和用于治疗和/或预防多种疾病和障碍，所述疾病和障碍包括，但不限于，例如，与老化或应激相关的疾病或障碍、糖尿病、肥胖症、神经变性疾病、心血管疾病、凝血障碍、炎症、癌症、和/或潮红以及将得益于增加线粒体活性的疾病或障碍。
除了治疗潜力，SIRT1活性的结构和生物物理研究以及经小分子沉默调节蛋白调节剂的活化将用于推进对沉默调节蛋白的生物学功能、沉默调节蛋白活化的作用机理的了解以及帮助研发用于鉴定新的沉默调节蛋白调节剂的试验。
基于前文，分别引用以下文献参考资料(将它们整体引入本文作为参考)，以证明本发明化合物作为沉默调节蛋白调节剂的用途及其与各种疾病的关联性，如以下参考文献中所例示的：
1.Marcia C.Haigis and David A.Sinclair，Mammalian Sirtuins：BiologicalInsights and Disease Relevance，Annu Rev Pathol.2010；5：253-29，将它们整体引入本文作为参考。
Haigis和Sinclair教导了：
“老化伴随着多器官系统健康功能的衰退，导致疾病如II型糖尿病、神经变性疾病、癌症和心血管疾病的发病率和死亡率增加。历史上，研究人员专注于研究孤立器官中的个别途径，作为确定疾病根源的策略，希望设计出更好的药物。酵母中的老化研究认识了一种被称为沉默调节蛋白的保守酶的家族，其影响增加有机体寿命和整体健康的多种途径。自从10年前发现第一种已知的哺乳动物沉默调节蛋白(SIRT1)以来，我们对沉默调节蛋白的酶学及其调控以及广泛改善哺乳动物生理和健康寿命的能力有了重大进展。本综述总结并讨论了过去十年的发现进展以及未来几年将面临的挑战(见其中的“摘要”及其参考文献)。”
2.Gizem Donmez1等人，SIRT1 and SIRT2：emerging targets inneurodegeneration，EMBO Mol Med(2013)5，344-352，将它们整体引入本文作为参考。
Gizem Donmez1等人，教导了：
“沉默调节蛋白是已知对年龄相关疾病如癌症、糖尿病、心血管疾病和神经变性疾病具有保护作用的NAD依赖性蛋白脱乙酰基酶。在哺乳动物中，有七种沉默调节蛋白(SIRT1-7)，其显示亚细胞定位和功能的多样性。SIRT1由于其与寿命延长的初步联系和卡路里限制的参与而得到广泛研究，其他沉默调节蛋白的重要生物和治疗作用最近才得到认可。在这里，我们综述了SIRT1和SIRT2在神经变性疾病中的潜在作用和效果。我们讨论了SIRT1和SIRT2在多种神经变性疾病(包括阿尔茨海默病(AD)、帕金森病(PD)和亨廷顿病(HD))中的不同功能和目标。我们还介绍了SIRT1在神经元分化中的作用，这是由于其可能参与神经变性疾病，并以SIRT1和SIRT2在这些疾病中潜在治疗价值的前景作出总结(参见，其中的“摘要”及其参考文献。”
3.Bracke等人，Targeted silencing of DEFB4 in a bioengineered skin-humanized mouse model for psoriasis：development of siRNA SECosome-based noveltherapies；Exp Dermatol.2014Mar；23(3)：199-201.doi：10.1111/exd.12321，将它们整体引入本文作为参考。
具体地，Bracke等人教导了
“银屑病是一种复杂的炎症性皮肤病，呈现多种临床表现。人β防御素-2(hBD-2)在银屑病病变中高度上调，并被定义为疾病活性的生物标志物。我们通过在银屑病的生物工程化皮肤-人源化小鼠模型中局部应用含DEFB4-siRNA的SECosomes探讨了靶向hBD-2的潜在益处。通过组织学检查观察到银屑病表型的显著改善，皮肤结构正常化和皮肤隔室中血管数量和大小的减少。治疗导致转谷氨酰胺酶活性、丝聚蛋白表达和角质层外观恢复到与正常再生人皮肤中发现相似的水平。结合使用SECosome技术，可用于银屑病的可靠的皮肤-人源化小鼠模型可能为鉴定潜在的该疾病治疗靶点提供了有价值的临床前工具。”
4.Karline Guilloteau等人，Skin Inflammation Induced by the SynergisticAction of IL-17A，IL-22 Recapitulates Some Features of Psoriasis Oncostatin M，IL-1a，and TNF-a，J Immunol 2010；184：5263-5270，将它们整体引入本文作为参考。
Guilloteau等人教导了：
“角质形成细胞在调节皮肤炎症、响应环境和免疫细胞刺激方面发挥关键作用。它们产生的可溶性因子可以以自分泌或旁分泌的方式在免疫细胞上起作用或直接作用于侵袭者。筛选36种细胞因子对角质形成细胞基因表达的活性，鉴定出IL-17A、IL-22、制瘤素M、TNF-α和IL-1a作为诱导皮肤炎症的有效细胞因子。这五种促炎细胞因子协同增加CXCL8和b-防御素2(BD2)的产生。此外，对于人类皮肤外植体的离体研究表明响应于细胞因子的相同组合的BD2、S100A7和CXCL8表达的上调。体内皮内注射这5种细胞因子在小鼠中增加CXCL1、CXCL2、CXCL3、S100A9和BD3表达，与嗜中性粒细胞浸润有关。我们使用定量实时PCR分析证实并扩展了这种协同效应，并观察到9种趋化因子和12种抗微生物肽的表达增加。在这种细胞因子组合存在下刺激的角质形成细胞产生CXCL、CXCL5和CXCL8与增加的嗜中性粒细胞趋化活性相关。类似地，BD2、BD3和S100A7的高产量与增加的抗微生物活性相关。最后，在炎症角质形成细胞的这种体外模型中观察到的转录概况与损伤性银屑病皮肤相关。我们的研究结果表明IL-17A、IL-22、制瘤素M、TNF-α和IL-1a对角质形成细胞的重要增强活性。这在银屑病的情形中特别有意义，其中这些细胞因子过表达并且可以协同作用以在趋化因子上调和抗微生物肽生产中发挥重要作用。The Journal of Immunology，2010，184：5263-5270(参见，其中的“摘要”及其参考文献)”。
实施例317
银屑病分析
当在PBMC TNFα分析中测试时，来自表-1的实施例222显示出IC50＜5uM。此外，在β-防御素2(bD2)分析中测试了来自表-1的实施例222，显示在10uM时＞90％的降低。在银屑病IL-17分析中测试了来自表-1的实施例222，当在人皮肤中以10uM测试时，得到mRNA水平中IL-17a＞75％的抑制，IL-17f＞75％的抑制和IL-22＞50％的抑制。
表1实施例222
测试的描述：
PBMC测试
沉默调节蛋白1(Sirt1)是沉默信息调节剂2(Sir2)的同源物，且是NAD依赖性III类组蛋白脱乙酰基酶的成员。Sirt1将组蛋白、转录因子和非组蛋白上的赖氨酸残基脱乙酰化。Sirt1已被证明参与老化、细胞周期调节、凋亡、代谢调节和炎症。Sirt1的活化导致核因子kB(NF-kB)转录因子的RelA/p65亚基的赖氨酸310脱乙酰化，其抑制NF-kB转录并下调TNFα的水平。TNFα是一种多效细胞因子，主要由巨噬细胞和单核细胞产生。TNFα密切参与免疫防御和慢性炎症，包括银屑病。已知银屑病皮肤中1型细胞因子如TNFα的表达增加，并且其在银屑病的病因中起重要作用(Uyemura K等人，1993，J.Invest Dermatol，101，p701)。重要的是，抗TNF剂已被临床用于银屑病。因此，诱导炎症细胞中TNFα表达降低的Sirt1活化剂在中重度银屑病患者中具有治疗作用。
开发了基于PBMC/TNFα细胞的测定法，以鉴定能够抑制响应于脂多糖(LPS)刺激外周血单核细胞(PBMC)的TNFα释放的Sirt1活化剂。简单地说，通过LPS刺激PBMC，导致TNFα分泌的产生增加。通过TNFαHTRF(均相时间分辨荧光)试剂盒(CisBio，Inc)测量TNFα蛋白水平。根据制造商的说明进行细胞裂解和TNFα检测。在LPS存在下测试Sirt1活化剂以评估其对TNFα释放的抑制作用，并且在剂量-响应实验中测定IC50。
β-防御素2(bD2)测试
沉默调节蛋白是NAD依赖性脱乙酰基酶的家族，其具有广泛的生理功能，并且已经涉及许多自身免疫和代谢疾病，包括类风湿性关节炎和I型糖尿病。SIRT1的底物是多种多样的，并且包括在天然和适应性免疫应答中具有确定的作用的炎症组分，例如NFκB、AP-1、FOXO和p53。
银屑病是由遗传，自身免疫和环境因素引起的慢性炎性皮肤病。病变的特征在于表皮中角质形成细胞的过度增殖和炎性细胞的浸润，导致银屑覆盖的慢性红斑斑块。以前的研究表明，SIRT1可以通过直接抑制STAT3乙酰化来阻止IL-22(一种在银屑病中的关键细胞因子)(Sestito等，2011)。此外，SIRT1过表达和白藜芦醇治疗(SIRT1活化)都可以诱导角质形成细胞分化(Blander等，2009)。
β-防御素2(bD2)是可从上皮细胞分泌的抗微生物肽，其作为记忆T细胞、未成熟树突状细胞和嗜中性粒细胞的化学引诱物。因此，bD2是皮肤炎症反应的主要部分。与在正常皮肤中相比，银屑病患者的损伤性表皮细胞中不仅诱导bD2，而且也是银屑病患者中疾病严重程度的血清生物标记(Jansen等，2009；Kamsteeg等，2009)。此外，bD2可能与银屑病遗传相关，因为最近的研究揭示了增加的β-防御素基因拷贝数与银屑病风险之间的显著关联(Hollox等人，2008)。值得注意的是，bD2 siRNA的局部递送导致在用于银屑病的生物工程化皮肤-人源化小鼠模型中正常皮肤结构和蛋白质表达的恢复(Bracke等，2014)。
之前描述了模拟银屑病发炎的体外角质形成细胞测定(Guilloteau等，2010；Teng等，2014)。在这些研究中，发现IL-1α、IL-17A、IL-22、OSM和TNFα(称为“M5”)的细胞因子混合物在体外在原代人角质形成细胞中协同作用以产生“银屑病样”转录谱。在这些研究中，bD2是诱导角化细胞炎症的最强应答者之一。
因此，为了评估SIRT1活化剂化合物对局部银屑病的疗效，进一步开发了该测定法。具体地，使用M5细胞因子组合体外处理永生化人角质形成细胞系(HaCaT)来优化条件，以诱导银屑病炎症(如上文参考文献)。在48小时的时间范围内，通过bD2ELISA测定(AlphaDiagnostics)测量的bD2分泌比未刺激的角质形成细胞显著增加。可以通过已知抑制银屑病炎症的化合物或重要的是用SIRT1活化剂的子集处理来抑制该bD2诱导。平行地，通过CellTiter-Glo发光细胞活力测定(Promega)确定在48小时测定的长度上的细胞毒性，以确定毒性是否可能在bD2反应中起作用。
参考文献：
Blander G，Bhimavarapu A，Mammone T，Maes D，Elliston K，Reich C，MatsuiMS，Guarente L，Loureiro JJ.SIRT 1promotes differentiation of normal humankeratinocytes.J Invest Dermatol.2009Jan；129(1)：41-9.
Bracke S，Carretero M，Guerrero-Aspizua S，Desmet E，Illera N，Navarro M，Lambert J，Del Rio M.Targeted silencing of DEFB4 in a bioengineered skin-humanized mouse model for psoriasis：development of siRNA SECosome-based noveltherapies.Exp Dermatol.2014 Mar；23(3)：199-201.
Guilloteau K，Paris I，Pedretti N，Boniface K，Juchaux F，Huguier V，Guillet G，Bernard FX，Lecron JC，Morel F.Skin Inflammation Induced by theSynergistic Action of IL-17A，IL-22，Oncostatin M，IL-l alpha，and TNFalphaRecapitulates Some Features of Psoriasis.J Immunol.2010Mar 24.
Jansen PA，Rodijk-Olthuis D，Hollox EJ，Kamsteeg M，Tjabringa GS，de JonghGJ，van Vlijmen-Willems IM，Bergboer JG，van Rossum MM，de Jong EM，den Heijer M，Evers AW，Bergers M，Armour JA，Zeeuwen PL，Schalkwijk J.Beta-defensin-2 proteinis a serum biomarker for disease activity in psoriasis and reachesbiologically relevant concentrations in lesional skin.PLoS One.2009；4(3)：e4725.
Kamsteeg M，Jansen PA，van Vlijmen-Willems IM，van Erp PE，Rodijk-OlthuisD，van der Valk PG，Feuth T，Zeeuwen PL，Schalkwijk J.Molecular diagnostics ofpsoriasis，atopic dermatitis，allergic contact dermatitis and irritant contactdermatitis.Br J Dermatol.2010 Mar；162(3)：568-78.
Sestito R，Madonna S，Scarponi C，Cianfarani F，Failla CM，Cavani A，Girolomoni G，Albanesi C.STAT3-dependent effects of IL-22 in humankeratinocytes are counterregulated by sirtuin 1 through a direct inhibitionof STAT3 acetylation.FASEB J.2011Mar；25(3)：916-27.
Teng X，Hu Z，Wei X，Wang Z，Guan T，Liu N，Liu X，Ye N，Deng G，Luo C，HuangN，Sun C，Xu M，Zhou X，Deng H，Edwards CK 3rd，Chen X，Wang X，Cui K，Wei Y，Li J.IL-37 ameliorates the inflammatory process in psoriasis by suppressingproinflammatory cytokine production.J Immunol.2014 Feb 15；192(4)：1815-23.
银屑病和IL-17
银屑病是具有由遗传、环境和免疫病理因素影响的多因素发病机制的慢性、复发性炎症性自身免疫性皮肤病(Griffiths CE等人，Lancet 2007；370：263-71)。银屑病的特征是，升高的、良好分界的红斑卵形斑块伴随粘附银色鳞片的复发性发作。组织学上，银屑病的特征是存在增厚的成核角质形成细胞层，具有夸张的表皮突，由于角质形成细胞的过度增生和活化的T细胞、嗜中性粒细胞和树突状细胞的皮肤浸润引起(Schon MPN.Engl.J.Med.352：1899-1912)。
积累的身体证据表明，银屑病作为Th17介导的疾病，由其特征性细胞因子IL-17A、IL-17F和IL-22驱动。IL-22诱导角质形成细胞的增殖，而IL-17A刺激角质形成细胞分泌趋化因子和其他促炎症介质，其招募额外的炎症细胞，包括嗜中性粒细胞、树突状细胞和先天性淋巴样细胞(Martin DA等人，J Invest Dermatol 2013；133：17-26)。
IL-17途径在介导银屑病中的临床验证，通过使用靶向IL-17的单克隆抗体治疗显著改善疾病的成功3期研究得以证明(Langley等人，NEJM 2014)。此外，IL-17抑制后银屑病损伤的全局转录谱分析将源自角质形成细胞和白细胞亚群的多个炎性因子抑制至与非损伤皮肤中观察到的相似水平(Russell等，J Immunol 2014，192：3828-3836)。总之，这些发现支持IL-17在介导银屑病发病机制中的作用。
方法(离体皮肤测试)
使用Th17细胞因子混合物刺激离体人皮肤外植体中的皮肤常驻免疫细胞，导致Th17相关细胞因子(IL-17A、IL-17F和IL-22)的显著上调，其将该系统建立为基于人组织的银屑病模型。使用Th17细胞因子混合物刺激后的离体皮肤培养法评估测试化合物调节IL-17A、IL-17F和IL-22表达的能力。
简单地说，处理从腹部成形术手术获得的离体人体皮肤以除去脂肪，并将组织皮肤切成约750微米。然后在包含抗生素/抗真菌溶液的室温PBS中，以5-10分钟的两次连续冲洗清洁切成的皮肤。将皮肤切片用一次性活检穿孔器切至10mm直径的圆形切片，然后将其放入用Cornification培养基制备的含有30μl 64％牛胶原溶液(Organogenesis，#200-055)的0.4μm的PCF膜跨室(transwell)(Millicell#PIHP01250)的上室中。将皮肤样品在37℃在加湿室中在胶原溶液上放置30分钟。将跨室上的皮肤样品转移到6孔板(每孔1个样品)中，并且将下室填充1ml完全培养基(Cornification培养基)。
在腹部手术后的第一天，将皮肤外植体在Cornification培养基中培养，并在37℃孵育过夜。具体地，用Th17混合物(CD3，1μg/ml，CD28，2μg/ml，IL-1b，10ng/ml，IL-6，5ng/ml，TGFb，1ng/ml，IL-21，10ng/ml，抗IL-4，1μg/ml和抗INFg，1μg/ml)刺激人皮肤外植体(每个条件N＝3)。与Th17混合物同时加入1、3和10uM的测试化合物。在Th17活化后24小时收获组织，分离RNA用于使用qPCR的转录物定量(IL-17A、IL-17F、IL-22)。
使用Qiagen的Mini RNA分离试剂盒(Cat#74106)从约40mg的组织中分离总RNA。简言之，在Precellys-24机器中，使用300μl补充有1％2-β-疏基-乙醇的RLT缓冲液，在6300rpm下将组织切碎并匀化30秒，持续10个循环，其中具有2分钟的冰中断。向匀浆中加入490μl含有10μl蛋白酶K的水，并在55℃消化15分钟。将消化的组织在10,000G下离心3分钟以沉淀细胞碎片，并使用Qiagen的RNeasy微型柱根据制造商的方案将上清液用于RNA分离。使用Nanodrop 2000定量总RNA，并在安捷伦生物分析仪上进行分析(附加文件)。使用Invitrogen SuperScript VILO cDNA合成试剂盒(#11754-050)，在20μl PCR体积中使用1.4μg RNA作为模板以产生cDNA模板。然后cDNA对随后的qPCR稀释1∶25，对每个需定量的基因用特定的TaqMan探针。使用Delta Delta CT公式计算感兴趣基因的相对表达的RNA水平。
等同方案
本发明提供了调节沉默调节蛋白的化合物及其使用方法等。尽管已经讨论了主题发明的具体实施方案，但上述说明书是例示性的，不是限制性的。在审阅该说明书后，本发明的许多变化对本领域技术人员来说是显而易见的。本发明的全部范围应该参考权利要求书，以及其等同方案的整个范围，和说明书以及此类变化来确定。
引入作为参考
本文提及的所有出版物和专利，包括以下列出的那些，通过引用整体并入本文，如同每个单独的出版物或专利被具体地和单独地指出通过引用并入本文。在发生冲突的情况下，将以本申请(包括本文中的任何定义)为准。
还通过引用将其全部内容并入本文的是提及与公众数据库中的条目相关的登记号的任何多核苷酸和多肽序列，所述公众数据库例如由基因组研究所(TIGR)(www.tigr.org)和/或国家生物技术信息中心(NCBI)(www.ncbi.nlm.nih.gov)维护的那些。
序列表
<110> 葛兰素史克有限责任公司
<120> 作为沉默调节蛋白调节剂的取代的桥环脲类似物
<130> SIRT063-1
<140> 未知
<141> 2015-11-19
<150> 14/547,861
<151> 2014-11-19
<160> 2
<170> 用于Windows Version 4.0的FastSEQ
<210> 1
<211> 27
<212> PRT
<213> 人
<400> 1
Ala Glu Glu Lys Gly Gln Ser Thr Ser Ser His Ser Lys Ala Asn Ser
1 5 10 15
Thr Glu Gly Lys Thr Met Arg Glu Glu Asn His
20 25
<210> 2
<211> 9
<212> PRT
<213> 人
<400> 2
Ala Arg His Lys Lys Ala Trp Asn His
1 5

Claims (17)

1.化合物，其为：
或其药学上可接受的盐。
2.药物组合物，其包含根据权利要求1的化合物和至少一种药学上可接受的载体。
3.根据权利要求2的药物组合物，其还包含其它活性剂。
4.在受试者中治疗胰岛素抵抗、代谢综合症、糖尿病或其并发症，或增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药根据权利要求1的化合物。
5.在受试者中治疗胰岛素抵抗、代谢综合症、糖尿病或其并发症，或增加胰岛素敏感性的方法，包括向需要的受试者给药根据权利要求2的药物组合物。
6.在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与根据权利要求1的化合物接触的步骤。
7.在细胞中增加沉默调节蛋白-1活性的方法，包括将细胞与根据权利要求2的药物组合物接触的步骤。
8.治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者给药根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
9.治疗代谢功能障碍的方法，包括向需要的受试者给药根据权利要求2的药物组合物。
10.治疗由SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症的方法，其包括向需要的受试者给药根据权利要求1的化合物或其药学上可接受的盐。
11.根据权利要求10的方法，其中所述由SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症选自但不限于老化或应激、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病。
12.根据权利要求11的方法，其中与老化或应激有关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自银屑病、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症。
13.治疗由SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症的方法，其包括向需要的受试者给药权利要求2的药物组合物。
14.根据权利要求13的方法，其中所述由SIRT1表达或活性降低导致的疾病或病症选自但不限于老化或应激、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病。
15.根据权利要求14的方法，其中与老化或应激有关的疾病、糖尿病、代谢功能障碍、神经变性疾病、心血管疾病、癌症或炎性疾病选自银屑病、特应性皮炎、痤疮、酒渣鼻、炎性肠病、骨质疏松症、脓毒症、关节炎、COPD、系统性红斑狼疮和眼部炎症。
16.治疗银屑病的方法，其包括向需要的受试者给药根据权利要求1的化合物。
17.治疗银屑病的方法，其包括向需要的受试者给药根据权利要求2的药物组合物。
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