KR20170084274A - 시르투인 조정제로서의 치환된 가교된 우레아 유사체 - Google Patents
시르투인 조정제로서의 치환된 가교된 우레아 유사체 Download PDFInfo
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Abstract
본 발명은 신규 치환된 연결된 우레아 화합물, 상응하는 관련 유사체, 제약 조성물 및 그의 사용 방법에 관한 것이다. 본 발명의 시르투인-조정 화합물은 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 뿐만 아니라 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 시르투인-조정 화합물을 또 다른 치료제와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다.
Description
관련 출원에 대한 상호 참조
본 출원은 2013년 5월 13일에 출원된 미국 가출원 번호 61/822,758의 이익을 청구하는 2014년 5월 13일에 출원된 국제 출원 번호 PCT/US2014/037767의 부분계속출원이며, 이들은 본원에 참조로 포함된다.
일반적으로, 본 발명은 화학식 I의 신규 치환된 가교된 우레아 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 상응하는 제약 조성물, 제조 방법, 및 시르투인 조정에서의 이러한 화합물의 용도, 및 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 뿐만 아니라 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 시르투인-조정 화합물을 또 다른 치료제와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다.
유전자의 침묵 정보 조절인자 (SIR) 패밀리는 아르카에박테리아로부터 진핵생물까지 이르는 유기체의 게놈에 존재하는 고도로 보존된 유전자 군을 나타낸다. 코딩된 SIR 단백질은 유전자 침묵화의 조절로부터 DNA 복구까지의 다양한 과정에 수반된다. 이러한 패밀리에서 잘 특징화된 유전자는 에스. 세레비지아에(S. cerevisiae) SIR2이며, 이는 효모 교배 유형, 텔로미어 위치 효과 및 세포 노화를 명시하는 정보를 함유하는 HM 유전자좌를 침묵화시키는데 수반된다. 효모 Sir2 단백질은 히스톤 데아세틸라제의 패밀리에 속한다. SIR 유전자 패밀리의 구성원에 의해 코딩되는 단백질은 250개 아미노산 코어 도메인에서 고도의 서열 보존을 나타낸다. 살모넬라 티피뮤리움(Salmonella typhimurium)에서의 Sir2 상동체, CobB는 NAD (니코틴아미드 아데닌 디뉴클레오티드)-의존성 ADP-리보실 트랜스퍼라제로서 기능한다.
Sir2 단백질은 NAD를 공동기질로서 사용하는 클래스 III 데아세틸라제이다. 다수가 유전자 침묵화에 수반되는 다른 데아세틸라제와는 달리, Sir2는 클래스 I 및 II 히스톤 데아세틸라제 억제제 예컨대 트리코스타틴 A (TSA)에 대해 비감수성이다.
Sir2에 의한 아세틸-리신의 탈아세틸화는 NAD-가수분해에 밀접하게 커플링되어 있으며, 니코틴아미드 및 신규 아세틸-ADP 리보스 화합물을 생산한다. Sir2의 NAD-의존성 데아세틸라제 활성은 그의 기능에 필수적이며, 그의 생물학적 역할을 효모에서의 세포 대사와 연결시킬 수 있다. 포유동물 Sir2 상동체는 NAD-의존성 히스톤 데아세틸라제 활성을 갖는다.
생화학적 연구는 Sir2가 히스톤 H3 및 H4의 아미노-말단 꼬리를 용이하게 탈아세틸화시켜 2'/3'-O-아세틸-ADP-리보스 (OAADPR) 및 니코틴아미드를 형성할 수 있다는 것을 제시한 바 있다. SIR2의 추가 카피를 갖는 균주는 증가된 rDNA 침묵화 및 30% 더 긴 수명을 나타낸다. 또한, 씨. 엘레간스(C. elegans) SIR2 상동체, sir-2.1 및 디. 멜라노가스터(D. melanogaster) dSir2 유전자의 추가 카피는 이들 유기체에서 수명을 연장시키는 것으로 제시된 바 있다. 이는 노화에 대한 SIR2-의존성 조절 경로가 진화에서의 초기에 발생하였으며 잘 보존되어 왔다는 것을 암시한다. 오늘날, Sir2 유전자는 유기체의 건강 및 스트레스 저항성을 증진시켜 그의 역경 극복 기회를 증가시키기 위해 진화되어 온 것으로 여겨진다.
인간에는, Sir2의 보존된 촉매 도메인을 공유하는 7종의 Sir2-유사 유전자 (SIRT1-SIRT7)가 존재한다. SIRT1은 Sir2와 가장 높은 정도의 서열 유사성을 갖는 핵 단백질이다. SIRT1은 종양 억제자 p53, 세포 신호전달 인자 NF-κB 및 FOXO 전사 인자를 포함한 탈아세틸화에 의한 다중 세포 표적을 조절한다.
SIRT3은 원핵생물 및 진핵생물에서 보존되는 SIRT1의 상동체이다. SIRT3 단백질은 N-말단에 위치하는 독특한 도메인에 의해 미토콘드리아 크리스타에 대해 표적화된다. SIRT3은 NAD+-의존성 단백질 데아세틸라제 활성을 가지며, 특히 대사적 활성 조직에서 편재적으로 발현된다. 미토콘드리아로의 전달 시에, SIRT3은 미토콘드리아 매트릭스 프로세싱 펩티다제 (MPP)에 의해 더 작은 활성 형태로 절단되는 것으로 여겨진다.
칼로리 제한은 70년이 넘게 포유동물의 건강을 개선시키고 수명을 연장시키는 것으로 공지되어 왔다. 효모 수명은, 후생동물의 수명과 마찬가지로, 또한 칼로리 제한과 유사한 개입, 예컨대 낮은 글루코스에 의해 연장된다. SIR2 유전자가 결여된 효모 및 파리가 둘 다 칼로리 제한 시에 더 오래 살지는 않는다는 발견은 SIR2 유전자가 제한된 칼로리 식이의 유익한 건강 효과를 매개한다는 증거를 제공한다. 더욱이, 효모 글루코스-반응성 cAMP (아데노신 3',5'-모노포스페이트)-의존성 (PKA) 경로의 활성을 감소시키는 돌연변이는 야생형 세포에서는 수명을 연장시키지만, 돌연변이 sir2 균주에서는 그렇지 않으며, 이는 SIR2가 칼로리 제한 경로의 주요 하류 성분일 가능성이 있다는 것을 증명한다.
치료 잠재력 이외에도, SIRT1 활성 및 소분자 시르투인 조정제에 의한 활성화의 구조적 및 생물물리학적 연구는 시르투인의 생물학적 기능의 이해, 추가로 시르투인 활성화의 작용 메카니즘의 이해를 발전시키고, 신규 시르투인 조정제를 확인하는 검정의 개발을 보조하기에 유용할 것이다.
일반적으로, 본 발명은 화학식 I의 신규 치환된 가교된 우레아 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 상응하는 제약 조성물, 제조 방법, 및 시르투인 조정에서 이러한 화합물의 용도, 및 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 뿐만 아니라 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다. 본 발명은 또한 시르투인-조정 화합물을 또 다른 치료제와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다.
신규 시르투인-조정 화합물 및 그의 사용 방법이 본원에 제공된다.
한 측면에서, 본 발명은 하기에 상세하게 기재된 바와 같은 구조 화학식 I, IIa, IIb, IIIa, IIIb 및 IV의 시르투인-조정 화합물을 제공한다.
다른 측면에서, 본 발명의 대표적인 화합물은 표 1 및/또는 표 10에 예시 또는 제시된 바와 같은 화합물 구조 (즉, 추가의 대표적인 화합물 예) 각각, 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 그의 상응하는 그의 제약상 허용되는 염이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 시르투인-조정 화합물, 또는 시르투인-조정 화합물을 포함하는 조성물을 사용하는 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환 화학요법-유발 신경병증, 허혈성 사건과 연관된 신경병증, 안구 질환 및/또는 장애, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증 및/또는 홍조 등을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 것을 포함한 다양한 치료 용도에 사용될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 대상체에서 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 치료하거나, 근육 수행능을 증진시키거나, 근육 ATP 수준을 증가시키거나, 또는 저산소증 또는 허혈과 연관된 근육 조직 손상을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 감소시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 스트레스에 대한 세포 감수성의 증가, 아폽토시스의 증가, 암의 치료, 식욕의 자극 및/또는 체중 증가의 자극 등을 포함한 다양한 치료 용도에 사용될 수 있다. 하기에 추가로 기재된 바와 같이, 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 제약 유효량의 시르투인-조정 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
상기에 기초하여, 본 발명은 노화 또는 스트레스와 관련된 다른 질환 또는 장애, 당뇨병 및 다른 대사 기능장애, 및 지방간, 간 지방간염 및 비만을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 상태의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암, 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 장미증, 염증성 장 질환, 골다공증, 패혈증, 관절염, COPD, 전신 홍반성 루푸스 및 안부 염증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 염증성 질환 뿐만 아니라 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 다른 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다.
특정 측면에서, 시르투인-조정 화합물은 단독으로 투여되거나 또는 다른 시르투인-조정 화합물을 포함한 다른 화합물, 또는 다른 치료제와 조합되어 투여될 수 있다.
도면의 간단한 설명
도 1은 화합물 1의 1H NMR 스펙트럼을 제시한다.
도 2는 화합물 1의 13C-NMR 및 APT NMR 스펙트럼을 제시한다.
도 3은 (A) 전장 SIRT1의 HDX-MS, (B) SIRT1cc 활성에 대한 CBS의 효과의 효소적 특징화, (C) 미니-hSIRT1(ΔN) vs. 미니-hSIRT1의 STAC 활성화 피봇 플롯, (D) 미니-hSIRT1(ΔCBS) vs. 미니-hSIRT1의 STAC 활성화 피봇 플롯 및 (E) 미니-hSIRT1(E230K) vs. 미니-hSIRT1의 STAC 활성화 피봇 플롯을 도시한다.
도 4는 합성 SIRT1 활성화제 (1, 4-9), 억제제 (2), 및 형광 편광 검정 프로브 (3)의 화학 구조를 제시한다.
도 5는 STAC의 부재 또는 존재 하의 미니-hSIRT1의 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)를 도시한다.
도 6은 (A) CBS 펩티드에 결합 시의 SIRT1cc의 HDX-MS 프로파일의 시차 교란, (B) 미니-hSIRT1/1 복합체 및 ySIR2의 구조 비교, (C) 미니-hSIRT1/1 복합체, 미니-hSIRT1/1/2 복합체 및 미니-hSIRT1/1/Ac-p53-7량체/CarbaNAD 4원 복합체의 N-말단 SBD의 구조 비교를 도시한다.
도 7은 Ac-p53(W5) 기질을 사용한 OAcADPr 검정을 사용하는 야생형 및 (A) I223A 또는 (B) E230K SIRT1을 비교하는 활성화 용량-반응 곡선을 도시한다.
도 8은 야생형 대비 돌연변이체 전장 hSIRT1의 활성화 비교를 도시한다.
도 9는 (A) 미니-hSIRT1/Ac-p53 상호작용의 인터페이스, (B) 미니-hSIRT1/carbaNAD 상호작용의 인터페이스, (C) 미니-hSIRT1/2 상호작용의 인터페이스를 도시한다.
도 10은 (A) SIRT1에 대한 FP 프로브 3의 결합, (B) SIRT1/3 복합체에 대한 4의 경쟁을 도시한다.
도 11은 전장 I223R hSIRT1에 의해 손상된 STAC 결합을 도시한다.
도 12는 미니-hSIRT1(R446A) vs. 미니-hSIRT1의 STAC 활성화 피봇 플롯을 도시한다.
본 발명은 화학식 I의 신규 치환된 가교된 우레아 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 상응하는 제약 조성물, 제조 방법, 및 시르투인 조정에서 이러한 화합물의 용도, 및 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 뿐만 아니라 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 방법에 관한 것이다.
본 발명은 또한 시르투인-조정 화합물을 또 다른 치료제와 조합하여 포함하는 조성물에 관한 것이다.
1. 정의
본원에 사용된 하기 용어 및 어구는 하기 제시된 의미를 가질 것이다. 달리 정의되지 않는 한, 본원에 사용된 모든 기술 과학 용어는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 흔히 이해되는 바와 동일한 의미를 갖는다.
용어 "작용제"는 본원에서 화학적 화합물, 화학적 화합물의 혼합물, 생물학적 거대분자 (예컨대 핵산, 항체, 단백질 또는 그의 부분, 예를 들어 펩티드), 또는 생물학적 물질 예컨대 박테리아, 식물, 진균 또는 동물 (특히 포유동물) 세포 또는 조직으로부터 제조된 추출물을 나타내는데 사용된다.
화합물에 대해 언급되는 경우에 용어 "생체이용가능한"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 투여되는 화합물의 양의 전부 또는 일부가, 투여되는 대상체 또는 환자에 의해 흡수되거나, 그에 혼입되거나, 또는 달리 생리학상 이용가능하도록 하는 화합물의 형태를 지칭한다.
"시르투인의 생물학적 활성 부분"은 생물학적 활성, 예컨대 탈아세틸화 능력 ("촉매 활성")을 갖는 시르투인 단백질의 부분을 지칭한다. 시르투인의 촉매 활성 부분은 시르투인의 코어 도메인을 포함할 수 있다. NAD+ 결합 도메인 및 기질 결합 도메인을 포괄하는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370을 갖는 SIRT1의 촉매 활성 부분은, 예를 들어 비제한적으로 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 폴리뉴클레오티드에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 아미노산 240-664 또는 240-505를 포함할 수 있다. 따라서, 이러한 영역은 때때로 코어 도메인으로 지칭된다. 때때로 코어 도메인으로도 지칭되는 SIRT1의 다른 촉매 활성 부분은 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 834 내지 1394에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 261 내지 447; 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 777 내지 1532에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 242 내지 493; 또는 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 813 내지 1538에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 254 내지 495를 포함한다. SIRT1의 또 다른 "생물학적 활성" 부분은 화합물 결합 부위에 중요한 코어 도메인에 대한 도메인 N-말단을 포함하는 진뱅크 등록 번호 NP_036370의 아미노산 62-293 또는 183-225이다.
용어 "반려 동물"은 고양이 및 개를 지칭한다. 본원에 사용된 용어 "개(들)"는 다수의 상이한 품종이 존재하는 카니스 파밀리아리스(Canis familiaris) 종의 임의의 구성원을 나타낸다. 용어 "고양이(들)"는 집고양이 및 펠리다에(Felidae) 과, 펠리스(Felis) 속의 다른 구성원을 포함한 고양이과 동물을 지칭한다.
"당뇨병"은 고혈당 또는 케톤산증, 뿐만 아니라 장기간 고혈당 상태 또는 글루코스 내성의 감소로부터 발생하는 만성 전신 대사 이상을 지칭한다. "당뇨병"은 질환의 제I형 및 제II형 (비 인슐린 의존성 당뇨병 또는 NIDDM) 둘 다의 형태를 포괄한다. 당뇨병에 대한 위험 인자는 하기 인자를 포함한다: 남성의 경우에 40 인치 초과 또는 여성의 경우에 35 인치 초과의 허리둘레, 130/85 mmHg 이상의 혈압, 150 mg/dl 초과의 트리글리세리드, 100 mg/dl 초과의 공복 혈액 글루코스, 또는 남성에서는 40 mg/dl 미만 또는 여성에서는 50 mg/dl 미만의 고밀도 지단백질.
용어 "ED50"은 관련 기술분야에 인식된 유효 용량의 척도를 지칭한다. 특정 실시양태에서, ED50은 그의 최대 반응 또는 효과의 50%를 생성하는 약물의 용량, 또는 대안적으로 시험 대상체 또는 제제, 예컨대 단리된 조직 또는 세포의 50%에서 미리 결정된 반응을 생성하는 용량을 의미한다. 용어 "LD50"은 관련 기술분야에 인식된 치사 용량의 척도를 지칭한다. 특정 실시양태에서, LD50은 시험 대상체의 50%에서 치사성인 약물의 용량을 의미한다. 용어 "치료 지수"는 LD50/ED50으로서 정의되는, 약물의 치료 지수를 지칭하는 관련 기술분야에 인식된 용어이다.
용어 "고인슐린혈증"은 혈액 중 인슐린의 수준이 정상보다 더 높은 개체에서의 상태를 지칭한다.
용어 "인슐린 저항성"은 정상적인 양의 인슐린이 인슐린 저항성을 갖지 않는 대상체에서의 생물학적 반응에 비해 정상 미만의 생물학적 반응을 생성하는 상태를 지칭한다.
본원에 논의된 바와 같은 "인슐린 저항성 장애"는 인슐린 저항성에 의해 유발되거나 또는 그에 기인하는 임의의 질환 또는 상태를 지칭한다. 예는 하기를 포함한다: 당뇨병, 비만, 대사 증후군, 인슐린-저항성 증후군, 증후군 X, 인슐린 저항성, 높은 혈압, 고혈압, 높은 혈액 콜레스테롤, 이상지혈증, 고지혈증, 아테롬성동맥경화성 질환 예컨대 졸중, 관상 동맥 질환 또는 심근경색, 고혈당증, 고인슐린혈증 및/또는 고프로인슐린혈증, 글루코스 내성 장애, 지연형 인슐린 방출, 당뇨병성 합병증, 예컨대 관상동맥 심장 질환, 협심증, 울혈성 심부전, 졸중, 치매에서의 인지 기능, 망막병증, 말초 신경병증, 신병증, 사구체신염, 사구체경화증, 신증후군, 고혈압성 신경화증, 일부 유형의 암 (예컨대 자궁내막암, 유방암, 전립선암, 및 결장암), 임신 합병증, 불량한 여성 생식 건강 (예컨대 월경 불순, 불임, 불규칙 배란, 다낭성 난소 증후군 (PCOS)), 지방이영양증, 콜레스테롤-관련 장애, 예컨대 담석, 담낭염 및 담석증, 통풍, 폐쇄성 수면 무호흡 및 호흡기 문제, 골관절염, 및 골 손실, 예를 들어 특히 골다공증.
용어 "가축 동물"은 가축화된 네발동물을 지칭하며, 이는 고기 및 다양한 부산물을 위해 길러지는 것들, 예를 들어 소 및 보스(Bos) 속의 다른 구성원을 포함한 소과 동물, 집돼지 및 수스(Sus) 속의 다른 구성원을 포함한 돼지과 동물, 양 및 오비스(Ovis) 속의 다른 구성원을 포함한 양과 동물, 집염소 및 카프라(Capra) 속의 다른 구성원; 특수 과제 예컨대 짐 운반용 짐승으로서의 용도를 위해 길러지는 가축화된 네발동물, 예를 들어 집말 및 에퀴다에(Equidae) 과, 에쿠스(Equus) 속의 다른 구성원을 포함한 말과 동물을 포함한다.
용어 "포유동물"은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예시적인 포유동물은 인간, 영장류, 가축 동물 (소, 돼지 등 포함), 반려 동물 (예를 들어, 개, 고양이 등) 및 설치류 (예를 들어, 마우스 및 래트)를 포함한다.
"비만" 개체 또는 비만을 앓고 있는 개체는 일반적으로 적어도 25 이상의 체질량 지수 (BMI)를 갖는 개체이다. 비만은 인슐린 저항성과 연관되거나 또는 연관되지 않을 수 있다.
용어 "비경구 투여" 및 "비경구로 투여된"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 통상적으로 주사에 의한 경장 및 국소 투여 이외의 투여 방식을 지칭하고, 비제한적으로 정맥내, 근육내, 동맥내, 척수강내, 피막내, 안와내, 심장내, 피내, 복강내, 경기관, 피하, 표피하, 관절내, 피막하, 지주막하, 척수내 및 흉골내 주사 및 주입을 포함한다.
"환자", "대상체", "개체" 또는 "숙주"는 인간 또는 비-인간 동물을 지칭한다.
용어 "제약상 허용되는 담체"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 임의의 대상 조성물 또는 그의 성분의 운반 또는 수송에 수반되는 제약상 허용되는 물질, 조성물 또는 비히클, 예컨대 액체 또는 고체 충전제, 희석제, 부형제, 용매 또는 캡슐화 물질을 지칭한다. 각각의 담체는 대상 조성물 및 그의 성분과 상용성이고 환자에게 유해하지 않다는 관점에서 "허용"되어야 한다. 제약상 허용되는 담체로서 기능할 수 있는 물질의 일부 예는 하기를 포함한다: (1) 당, 예컨대 락토스, 글루코스 및 수크로스; (2) 전분, 예컨대 옥수수 전분 및 감자 전분; (3) 셀룰로스, 및 그의 유도체, 예컨대 소듐 카르복시메틸 셀룰로스, 에틸 셀룰로스 및 셀룰로스 아세테이트; (4) 분말화 트라가칸트; (5) 맥아; (6) 젤라틴; (7) 활석; (8) 부형제, 예컨대 코코아 버터 및 좌제 왁스; (9) 오일, 예컨대 땅콩 오일, 목화씨 오일, 홍화 오일, 참깨 오일, 올리브 오일, 옥수수 오일 및 대두 오일; (10) 글리콜, 예컨대 프로필렌 글리콜; (11) 폴리올, 예컨대 글리세린, 소르비톨, 만니톨 및 폴리에틸렌 글리콜; (12) 에스테르, 예컨대 에틸 올레에이트 및 에틸 라우레이트; (13) 한천; (14) 완충제, 예컨대 수산화마그네슘 및 수산화알루미늄; (15) 알긴산; (16) 발열원-무함유 물; (17) 등장성 염수; (18) 링거액; (19) 에틸 알콜; (20) 포스페이트 완충제 용액; 및 (21) 제약 제제에 사용되는 다른 비-독성 상용성 물질.
용어 "예방하는"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 상태, 예컨대 국부 재발 (예를 들어, 통증), 질환 예컨대 암, 증후군 복합증 예컨대 심부전 또는 임의의 다른 의학적 상태와 관련하여 사용되는 경우에, 관련 기술분야에서 널리 이해되어 있으며, 조성물을 투여받지 않은 대상체에 비해 대상체에서의 의학적 상태의 증상의 빈도를 감소시키거나 또는 그의 발병을 지연시키는 조성물의 투여를 포함한다. 따라서, 암의 예방은, 예를 들어 통계적으로 및/또는 임상적으로 유의한 양만큼, 예를 들어 비치료 대조군 집단에 비해 예방적 치료를 받은 환자의 집단에서의 검출가능한 암성 성장의 수를 감소시키고/거나, 비치료 대조군 집단에 대비하여 치료 집단에서의 검출가능한 암성 성장의 출현을 지연시키는 것을 포함한다. 감염의 예방은, 예를 들어 비치료 대조군 집단에 대비하여 치료 집단에서의 감염의 진단 수를 감소시키고/거나, 비치료 대조군 집단에 대비하여 치료 집단에서의 감염의 증상의 발병을 지연시키는 것을 포함한다. 통증의 예방은, 예를 들어 비치료 대조군 집단에 대비하여 치료 집단에서 대상체가 경험하는 통각의 크기를 감소시키거나, 또는 대안적으로 통각을 지연시키는 것을 포함한다.
용어 "예방적" 또는 "치유적" 치료는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 숙주에 대한 약물의 투여를 지칭한다. 원치 않는 상태 (예를 들어, 숙주 동물의 질환 또는 다른 원치 않는 상태)의 임상적 징후 전에 투여되는 경우에, 치료는 예방적이며, 즉 이는 원치 않는 상태가 발생하는 것에 대해 숙주를 보호하는 반면에, 원치 않는 상태의 징후 후에 투여되는 경우에, 치료는 치유적이다 (즉, 존재하는 원치 않는 상태 또는 그로부터의 부작용을 감소, 호전 또는 유지하도록 의도됨).
조성물과 관련된 용어 "발열원-무함유"는 조성물이 투여된 대상체에서 부작용 (예를 들어, 자극, 열, 염증, 설사, 호흡 곤란, 내독소성 쇼크 등)으로 이어질 양으로 발열원을 함유하지 않는 조성물을 지칭한다. 예를 들어, 상기 용어는 내독소, 예컨대 예를 들어 리포폴리사카라이드 (LPS)를 함유하지 않거나 또는 실질적으로 함유하지 않는 조성물을 포괄하도록 의도된다.
세포의 "복제 수명"은 개별 "모세포"에 의해 생산되는 딸세포의 수를 지칭한다. 다른 한편으로, "생활 연령" 또는 "생활 수명"은 영양소 결핍 시에 비-분할 세포 집단이 생존한 채로 남아있는 시간의 길이를 지칭한다. 세포 또는 유기체에 적용 시에 "세포의 수명을 증가시키는" 또는 "세포의 수명을 연장시키는"은 1개의 세포에 의해 생산되는 딸세포의 수를 증가시키는 것; 스트레스에 대처하고, 예를 들어 DNA, 단백질에 대한 손상을 방지하는 것에 대한 세포 또는 유기체의 능력을 증가시키는 것; 및/또는 특정한 조건, 예를 들어 스트레스 (예를 들어, 열 쇼크, 삼투 스트레스, 고에너지 방사선, 화학-유발 스트레스, DNA 손상, 불충분한 염 수준, 불충분한 질소 수준, 또는 불충분한 영양소 수준) 하에 더 장기간 동안 생존하고 살아있는 상태로 존재하는 것에 대한 세포 또는 유기체의 능력을 증가시키는 것을 지칭한다. 수명은 본원에 기재된 방법을 사용하여 적어도 약 10%, 20%, 30%, 40%, 50%, 60%, 또는 20% 내지 70%, 30% 내지 60%, 40% 내지 60% 또는 그 초과만큼 증가될 수 있다.
"시르투인-조정 화합물"은 시르투인 단백질의 수준을 증가시키고/거나 시르투인 단백질의 적어도 1종의 활성을 증가시키는 화합물을 지칭한다. 예시적 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 시르투인 단백질의 적어도 1종의 생물학적 활성을 적어도 약 10%, 25%, 50%, 75%, 100%, 또는 그 초과만큼 증가시킬 수 있다. 시르투인 단백질의 예시적인 생물학적 활성은, 예를 들어 히스톤 및 p53의 탈아세틸화; 수명을 연장시키는 것; 게놈 안정성을 증가시키는 것; 전사를 침묵화시키는 것; 및 모세포와 딸세포 사이의 산화된 단백질의 분리를 제어하는 것을 포함한다.
단백질은, 예를 들어 아세틸화 펩티드 기질의 탈아세틸화를 포함한다.
"시르투인 단백질"은 시르투인 데아세틸라제 단백질 패밀리의 구성원, 또는 바람직하게는 sir2 패밀리를 지칭하며, 이는 효모 Sir2 (진뱅크 수탁 번호 P53685), 씨. 엘레간스 Sir-2.1 (진뱅크 수탁 번호 NP_501912), 및 인간 SIRT1 (진뱅크 수탁 번호 NM_012238 및 NP_036370 (또는 AF083106)) 및 SIRT2 (진뱅크 수탁 번호 NM_012237, NM_030593, NP_036369, NP_085096, 및 AF083107) 단백질을 포함한다. 다른 패밀리 구성원은 "HST 유전자" (Sir2의 상동체)로 칭하는 4종의 추가의 효모 Sir2-유사 유전자인 HST1, HST2, HST3 및 HST4, 및 5종의 다른 인간 상동체인 hSIRT3, hSIRT4, hSIRT5, hSIRT6 및 hSIRT7을 포함한다 (Brachmann et al. (1995) Genes Dev. 9:2888 및 Frye et al. (1999) BBRC 260:273).
"SIRT1 단백질"은 시르투인 데아세틸라제의 sir2 패밀리의 구성원을 지칭한다. 특정 실시양태에서, SIRT1 단백질은 효모 Sir2 (진뱅크 수탁 번호 P53685), 씨. 엘레간스 Sir-2.1 (진뱅크 수탁 번호 NP_501912), 인간 SIRT1 (진뱅크 수탁 번호 NM_012238 또는 NP_036370 (또는 AF083106)), 마우스 SIRT1 (진뱅크 수탁 번호 NM_019812 또는 NP_062786), 및 그의 등가물 및 단편을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, SIRT1 단백질은 진뱅크 수탁 번호 NP_036370, NP_501912, NP_085096, NP_036369, 또는 P53685에 제시된 아미노산 서열로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. SIRT1 단백질은 진뱅크 수탁 번호 NP_036370, NP_501912, NP_085096, NP_036369, 또는 P53685에 제시된 아미노산 서열의 전부 또는 일부; 진뱅크 수탁 번호 NP_036370, NP_501912, NP_085096, NP_036369, 또는 P53685에 제시된, 1 내지 약 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75개 또는 그 초과의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열; 진뱅크 수탁 번호 NP_036370, NP_501912, NP_085096, NP_036369, 또는 P53685와 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 및 그의 기능적 단편을 포함한다. 본 발명의 폴리펩티드는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370, NP_501912, NP_085096, NP_036369, 또는 P53685의 상동체 (예를 들어, 오르토로그 및 파라로그), 변이체, 또는 단편을 또한 포함한다.
본원에 사용된 "SIRT2 단백질", "SIRT3 단백질", "SIRT4 단백질", "SIRT5 단백질", "SIRT6 단백질", 및 "SIRT7 단백질"은 특히 대략 275개 아미노산 보존된 촉매 도메인에서, SIRT1 단백질과 상동성인 다른 포유동물, 예를 들어 인간 시르투인 데아세틸라제 단백질을 지칭한다. 예를 들어, "SIRT3 단백질"은 SIRT1 단백질과 상동성인 시르투인 데아세틸라제 단백질 패밀리의 구성원을 지칭한다. 특정 실시양태에서, SIRT3 단백질은 인간 SIRT3 (진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, 또는 NP_001017524) 및 마우스 SIRT3 (진뱅크 수탁 번호 NP_071878) 단백질, 및 그의 등가물 및 단편을 포함한다. 특정 실시양태에서, SIRT4 단백질은 인간 SIRT4 (진뱅크 수탁 번호 NM_012240 또는 NP_036372)를 포함한다. 특정 실시양태에서, SIRT5 단백질은 인간 SIRT5 (진뱅크 수탁 번호 NM_012241 또는 NP_036373)를 포함한다. 특정 실시양태에서, SIRT6 단백질은 인간 SIRT6 (진뱅크 수탁 번호 NM_016539 또는 NP_057623)을 포함한다. 또 다른 실시양태에서, SIRT3 단백질은 진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, NP_001017524, 또는 NP_071878에 제시된 아미노산 서열로 이루어지거나 또는 그로 본질적으로 이루어진 서열을 포함하는 폴리펩티드를 포함한다. SIRT3 단백질은 진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, NP_001017524, 또는 NP_071878에 제시된 아미노산 서열의 전부 또는 일부; 진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, NP_001017524, 또는 NP_071878에 제시된, 1 내지 약 2, 3, 5, 7, 10, 15, 20, 30, 50, 75개 또는 그 초과의 보존적 아미노산 치환을 갖는 아미노산 서열; 진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, NP_001017524, 또는 NP_071878과 적어도 60%, 70%, 80%, 90%, 95%, 96%, 97%, 98%, 또는 99% 동일한 아미노산 서열을 포함하는 폴리펩티드, 및 그의 기능적 단편을 포함한다. 본 발명의 폴리펩티드는 진뱅크 수탁 번호 AAH01042, NP_036371, NP_001017524, 또는 NP_071878의 상동체 (예를 들어, 오르토로그 및 파라로그), 변이체, 또는 단편을 또한 포함한다. 특정 실시양태에서, SIRT3 단백질은 미토콘드리아 매트릭스 프로세싱 펩티다제 (MPP) 및/또는 미토콘드리아 중간 펩티다제 (MIP)로의 절단에 의해 생산되는 SIRT3 단백질의 단편을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "입체이성질체"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 동일한 분자 구조를 갖고 단지 그의 원자 공간군의 3차원 배열에 있어서 상이한 2종 이상의 이성질체 중 임의의 것을 지칭한다. 본원에서 화합물 또는 화합물 군을 기재하는데 사용되는 경우에, 입체이성질체는 화합물의 임의의 부분 또는 화합물 전체를 포함한다. 예를 들어, 부분입체이성질체 및 거울상이성질체는 입체이성질체이다.
용어 "전신 투여" 및 "전신 투여된"은 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 대상 조성물, 치료 또는 다른 물질을 경장으로 또는 비경구로 투여하는 것을 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "호변이성질체"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 구조가 특히 산소에 결합된 수소의 위치에 대해 2종 이상의 구조적 배열로 존재할 수 있는 것인 구조 이성질현상의 형태를 지칭하는 호변이성질현상의 결과로서 존재할 수 있는, 가능한 대안적 구조 중 임의의 1종을 지칭한다. 본원에서 화합물 또는 화합물 군을 기재하는데 사용되는 경우에, "호변이성질체"는 용이하게 상호전환가능하고 평형으로 존재하는 것으로 추가로 이해된다. 예를 들어, 케토 및 엔올 호변이성질체는 임의의 주어진 조건 또는 조건의 세트 동안 평형 위치에 의해 결정되는 비율로 존재한다.
용어 "치료제"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 대상체에서 국부 또는 전신 작용하는 임의의 생물학적, 생리학적, 또는 약물학적 활성 물질을 지칭한다. 상기 용어는 또한 동물 또는 인간에서 질환의 진단, 치유, 완화, 치료 또는 예방, 또는 바람직한 신체 또는 정신 발달 및/또는 상태의 증진에 사용하기 위해 의도된 임의의 물질을 의미한다.
용어 "치료 효과"는 관련 기술분야에 인식되어 있으며, 약리학적 활성 물질에 의해 유발된 동물, 특히 포유동물, 보다 특히 인간에서의 유익한 국부 또는 전신 효과를 지칭한다. 어구 "치료 유효량"은 일부 원하는 국부 또는 전신 효과를 임의의 치료에 적용가능한 합리적 이익/위험 비로 생성하는 물질의 양을 의미한다. 이러한 물질의 치료 유효량은 치료되는 대상체 및 질환 상태, 대상체의 체중 및 연령, 질환 상태의 중증도, 투여 방식 등에 따라 달라질 것이며, 이는 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 용이하게 결정될 수 있다. 예를 들어, 본원에 기재된 특정 조성물은 원하는 효과를 이러한 치료에 적용가능한 합리적 이익/위험 비로 생성하기에 충분한 양으로 투여될 수 있다.
상태 또는 질환을 "치료하는"은 상태 또는 질환의 적어도 1종의 증상을 치유 뿐만 아니라 호전시키는 것을 지칭한다.
용어 "시각 장애"는 치료 (예를 들어, 수술) 시에 종종 단지 부분 가역적 또는 비가역적인 저하된 시각을 지칭한다. 특히 중증 시각 장애는 "실명" 또는 "시각 상실"로 칭하며, 이는 시각의 완전 상실, 교정 렌즈에 의해 개선될 수 없는 20/200보다 더 나쁜 시력, 또는 20도 직경 (10도 반경) 미만의 시야를 지칭한다.
2. 화합물
본 발명은 화학식 I의 신규 치환된 가교된 우레아 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염 및 상응하는 제약 조성물에 관한 것이다.
한 측면에서, 본 발명은, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 안구 질환 및 장애, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 등을 포함한 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하기 위한 신규 화합물을 제공한다. 대상 화합물, 예컨대 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 대상체에서 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 치료하거나, 근육 수행능을 증진시키거나, 근육 ATP 수준을 증가시키거나, 또는 저산소증 또는 허혈과 연관된 근육 조직 손상을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 본원에 개시된 화합물은 본원에 개시된 제약 조성물 및/또는 1종 이상의 방법에 사용하기에 적합할 수 있다.
특정 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 구조 화학식 I에 의해 나타내어진다.
본 발명은 구조 화학식 I, IIa, IIb, IIIa, IIIb 및 IV의 화합물 또는 상기에 달리 제시된 바와 같은 화합물 중 임의의 것의 제약 조성물을 포함한다. 구조 화학식 I, IIa, IIb, IIIa, IIIb 및 IV의 화합물의 제약 조성물은 1종 이상의 제약상 허용되는 담체 또는 희석제를 포함할 수 있다.
한 실시양태에서, 본 발명의 시르투인-조정 화합물은 구조 화학식 I 또는 그의 염에 의해 나타내어진다.
<화학식 I>
여기서
m은 1 또는 2이고;
n은 2 또는 3이고;
p는 0 내지 4이고;
R1은 카르보사이클 및 헤테로사이클로부터 선택되고, 여기서 R1은 할로, C1-C4 알킬, 플루오로-치환된 C1-C4 알킬, -C≡N, -Y, -X-C(=O)-Y, -X-O-Y, -X-OR4, -X-C(=O)-NR3R3, -X-NH-C(=O)-Y-NR3R3, -X-NH-C(=O)-O-Y, -X-NR3R3, =O, -NH-S(=O)2-R3, -S(=O)2-R3, -S-R3, -(C3-C7) 시클로알킬, -C(=N)-NR3R3, -C(=N)-NH-X -NR3R3, -X-NH-C(=O)-Y, -C(=O)-NH-X, -NH-X, 페닐, -O-페닐, 3- 내지 6-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클 및 -O-(5- 내지 6-원 포화 헤테로사이클)로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 R1의 임의의 페닐, 3- 내지 6-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 -O-5- 내지 6-원 포화 헤테로사이클 치환기는 임의의 치환가능한 탄소 원자에서 할로, -OR4, -X-O-Y, -CF3, -Y, -X-R3R3, -X-NH-C(=O)-Y-NR3R3, -X-NH-C(=O)-O-Y-(5- 내지 6-원 포화 헤테로사이클 또는 카르보사이클), -X-C(=N)-NR3R3 및 -S-Y로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 임의의 치환가능한 질소 원자에서 -Y, -C(=O)-Y, -C(=O)-O-Y, -C(=O)-OR4, -Y-C(=O)-Y-NR3R3, -Y-NH-C(=O)-O-Y, -Y-NH-C(=O)-OR4, -Y-NH2, -C(=O)-NH-Y 또는 -C(=O)-3- 내지 5-원 포화 카르보사이클로 임의로 치환되고;
R2는 카르보사이클 및 헤테로사이클로부터 선택되고, 여기서 R2는 할로, C1-C4 알킬, 플루오로-치환된 C1-C4 알킬, -C≡N, -Y, -X-OR4, -X-O-Y, -SO2-R3, -X-NR3R3, -NH-S(=O)2R3, -C(=O)-NR3R3, -C(=O)-Y, -C(=O)-O-Y, -SO2-Ry, -SO2-NH-Ry, -SO2-NR3R3, 3- 내지 6-원 포화 카르보사이클 또는 헤테로사이클 및 페닐로부터 독립적으로 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 여기서 R2의 임의의 3- 내지 6-원 포화 헤테로사이클 치환기는 임의의 탄소 원자에서 할로, -CF3, -Y, -X-O-Y, -NH-Y 및 -N(Y)2로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되고, 임의의 질소 원자에서 -C(=O)-O-Y, -Y 및 -C(=O)-Y로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 임의로 치환되고, R2가 N-연결된 5- 내지 7-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클인 경우에, 이는 임의의 질소 원자에서 -C(=O)-O-Y, -Y 및 -C(=O)-Y로부터 선택된 1개 이상의 치환기로 추가로 치환되고;
각각의 R3은 독립적으로 수소, -C(=N)-NH2, -C(=O)-Y, -Y, -Y-NH-C(=O)-O-Y, -Y-NH-C(=O)-OH, -Y-NH-C(=O)-CF3, -C(=O)-Y-3- 내지 5-원 포화 헤테로사이클, -C(=O)-O-Y-(3- 내지 5-원 포화 헤테로사이클), -C(=O)-CF3, -C(=O)-O-Y, -C(=O)-OH, -C(=O)-O-CF3, -S(=O)2-Y, -S(=O)2-OH로부터 선택되고;
2개의 R3은 이들이 결합되어 있는 질소 또는 탄소 원자와 함께 N, S, S(=O), S(=O)2, 및 O로부터 독립적으로 선택된 1개의 추가의 헤테로원자를 임의로 포함하는 4- 내지 8-원 포화 헤테로사이클을 형성하고, 여기서 2개의 R3에 의해 형성된 헤테로사이클은 임의의 탄소 원자에서 OH, 할로, Y, NH2, NH-Y, N(Y)2, O-Y 중 1개 이상으로 임의로 치환되고, 임의의 치환가능한 질소 원자에서 C(=O)-O-Y, Y 또는 C(=O)-Y로 임의로 치환되고;
각각의 R4는 독립적으로 수소, Y, -CF3, -C(=O)-Y, -C(=O)-O-Y, -Y-C(=O)-Y 또는 -Y-C(=O)-O-Y로부터 선택되고;
R5 및 R6은 독립적으로 수소, -OH, -OCF3, -O-Y, -O-C(=O)-Y, -O-C(=O)-O-Y, -O-C(=O)-NH-Y, -O-C(=O)-N(Y)2, -O-C(=O)-5- 내지 6-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 카르보사이클로부터 선택되고, 여기서 R5 및 R6 중 단지 1개는 O-C(=O)-5- 내지 6-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 카르보사이클이고, R5 또는 R6이 O-C(=O)-5- 내지 6-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클 또는 카르보사이클인 경우에, 이는 추가로 할로, -OH, Y, -O-Y, -OCF3 또는 -O-C(=O)-Y로 치환되거나; 또는
R5 및 R6은 이들이 결합되어 있는 탄소 원자에 대해 함께 =O를 형성할 수 있고;
R7 및 R8은 독립적으로 수소, 할로, -OH, -O-Y 및 Y로부터 선택되고;
R9는 수소, 할로, -OH, -OCF3, -O-Y, Y, -O-C(=O)-Y, -NH-Y 및 -N(Y)2로부터 선택되고;
각각의 X는 C0-C5 직쇄 또는 분지형 알킬, 알케닐 또는 알키닐이고;
각각의 Y는 C1-C5 직쇄 또는 분지형 알킬, 알케닐 또는 알키닐이고;
여기서 임의의 Y 또는 X는 -OH, -C1-C4 직쇄 또는 분지형 알킬, -C1-C4 알켄, -C1-C4 알키닐, -O-(C1-C4 알킬), -O-(C1-C4 알켄), -O-(C1-C4 알키닐), -C(=O)-C1-C4 직쇄 또는 분지형 알킬, -C(=O)-C1-C4 알켄, -C(=O)-C1-C4 알키닐, -C(=O)-O-C1-C4 직쇄 또는 분지형 알킬, -C(=O)-O-C1-C4 알켄, -C(=O)-O-C1-C4 알키닐, 할로, -NH2, -NH(C1-C4 알킬), -N(C1-C4 알킬)2, -(C1-C3 직쇄 또는 분지형 알킬)-NH-(=NH)-NH2, -NH(알콕시-치환된 C1-C4 알킬), -NH(히드록시-치환된 C1-C4 알킬), -N(알콕시-치환된 C1-C4 알킬)(히드록시-치환된 C1-C4 알킬), -N(히드록시-치환된 C1-C4 알킬)2 또는 -N(알콕시-치환된 C1-C4 알킬)2 중 1개 이상으로 임의로 치환된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 구조 화학식 IIa에 의해 나타내어진 구조를 특징으로 한다.
<화학식 IIa>
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 구조 화학식 IIIa에 의해 나타내어진 구조를 특징으로 한다.
<화학식 IIIa>
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 구조 화학식 IIb 또는 IIIb에 의해 나타내어진 구조를 특징으로 한다.
<화학식 IIb>
<화학식 IIIb>
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 구조 화학식 IV에 의해 나타내어진 구조를 특징으로 한다.
<화학식 IV>
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 p = 0인 것 (즉, C(O)-NH와 R1 사이에 메틸렌이 없음)을 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 p = 1-4인 것 (즉, C(O)-NH와 R1 사이에 1-4개의 메틸렌)을 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기로부터 선택된 -(CH2)p-R1 기를 갖는 것을 특징으로 힌다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 페닐, 포화 또는 불포화 5- 내지 6-원 헤테로사이클, 또는 융합된 비시클릭 8- 내지 11-원 포화 또는 불포화 카르보사이클 또는 헤테로사이클인 R1 기를 특징으로 한다.
특정한 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 융합된 비시클릭 8- 내지 11-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클인 R1을 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1개로부터 선택된 R1 기를 특징으로 한다.
특정한 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1개로부터 선택된 R1 기를 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 5- 내지 7-원 포화 카르보사이클 또는 헤테로사이클, N-연결된 헤테로사이클, 및 8- 내지 11-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클로부터 선택된 R2 기를 특징으로 한다.
특정한 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 N-연결된 5- 내지 7-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클인 R2 기를 특징으로 한다.
상기의 특정 실시양태에서, 화합물은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 융합된 비시클릭 8- 내지 11-원 포화 또는 불포화 헤테로사이클인 R2 기를 특징으로 한다.
상기의 특정 실시양태에서, 화합물은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1개로부터 선택된 R2 기를 특징으로 한다.
특정한 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1개로부터 선택된 R2 기를 특징으로 한다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 I의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 IIa의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 IIIa의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 IIb의 화합물 또는 염은 하기로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 IIIb의 화합물 또는 염은 하기로부터 선택된다.
특정 실시양태에서, 구조 화학식 IV의 화합물 또는 염은 하기 중 임의의 1종으로부터 선택된다.
다른 실시양태에서, 본 발명의 대표적인 화합물은 표 1 및/또는 표 10에 예시 또는 제시된 바와 같은 화합물 구조 (즉, 추가의 대표적인 화합물 예) 각각, 또는 본 명세서에 정의된 바와 같은 그의 상응하는 그의 제약상 허용되는 염이다.
본 발명의 신규 화합물을 포함한 본 발명의 화합물은 또한 본원에 기재된 제약 조성물 및 방법에 사용될 수 있다.
임의의 상기 실시양태에서, C1-C4 알콕시-치환된 기는, 예를 들어 1개 이상의 알콕시 치환기 예컨대 1, 2 또는 3개의 메톡시 기, 또는 메톡시 기 및 에톡시 기를 포함할 수 있다. 예시적인 C1-C4 알콕시 치환기는 메톡시, 에톡시, 이소프로폭시, 및 tert-부톡시를 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, 히드록시-치환된 기는 1개 이상의 히드록시 치환기, 예컨대 2 또는 3개의 히드록시 기를 포함할 수 있다.
임의의 상기 실시양태에서, "할로-치환된" 기는 1개의 할로 치환기로부터 퍼할로 치환까지 포함한다. 예시적인 할로-치환된 C1-C4 알킬은 CFH2, CClH2 , CBrH2 , CF2H, CCl2H, CBr2H, CF3, CCl3 , CBr3 , CH2CH2F, CH2CH2Cl, CH2CH2Br, CH2CHF2, CHFCH3, CHClCH3, CHBrCH3 , CF2CHF2, CF2CHCl2 , CF2CHBr2, CH(CF3)2, 및 C(CF3)3을 포함한다. 퍼할로-치환된 C1-C4 알킬은, 예를 들어 CF3, CCl3 , CBr3, CF2CF3, CCl2CF3 및 CBr2CF3을 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, "카르보사이클" 기는 모노시클릭 카르보사이클 실시양태 및/또는 폴리시클릭 카르보사이클 실시양태, 예컨대 융합된, 가교된 또는 비시클릭 카르보사이클 실시양태를 지칭할 수 있다. 본 발명의 "카르보사이클" 기는 추가로 방향족 카르보사이클 실시양태 및/또는 비-방향족 카르보사이클 실시양태, 또는 폴리시클릭 실시양태의 경우에는, 1개 이상의 방향족 고리 및/또는 1개 이상의 비-방향족 고리 둘 다를 갖는 카르보사이클을 지칭할 수 있다. 폴리시클릭 카르보사이클 실시양태는 비시클릭 고리, 융합된 고리 또는 가교된 비사이클일 수 있다. 비제한적 예시적인 카르보사이클은 페닐, 시클로헥산, 시클로펜탄 또는 시클로헥센, 아만타딘, 시클로펜탄, 시클로헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 1,5-시클로옥타디엔, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌, 아다만탄, 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 노르보르난, 데칼린, 스피로펜탄, 메만틴, 비페리덴, 리만타딘, 캄포르, 콜레스테롤, 4-페닐시클로헥산올, 비시클로[4.2.0]옥탄, 메만틴 및 4,5,6,7-테트라히드로-1H-인덴 및 비시클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다.
임의의 상기 실시양태에서, "헤테로사이클" 기는 모노시클릭 헤테로사이클 실시양태 및/또는 폴리시클릭 헤테로시클릭 실시양태, 예컨대 융합된, 가교된 또는 비시클릭 헤테로사이클 실시양태를 지칭할 수 있다. 본 발명의 "헤테로사이클" 기는 추가로 방향족 헤테로사이클 실시양태 및/또는 비-방향족 헤테로사이클 실시양태, 또는 폴리시클릭 실시양태의 경우에는, 1개 이상의 방향족 고리 및/또는 1개 이상의 비-방향족 고리 둘 다를 갖는 헤테로사이클을 지칭할 수 있다. 폴리시클릭 헤테로사이클 실시양태는 비시클릭 고리, 융합된 고리 또는 가교된 비사이클일 수 있다. 비제한적 예시적인 헤테로사이클은 피리딜, 피롤리딘, 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모르폴린, 피리미딘, 벤조푸란, 인돌, 퀴놀린, 락톤, 락탐, 벤조디아제핀, 인돌, 퀴놀린, 퓨린, 아데닌, 구아닌, 4,5,6,7-테트라히드로벤조[d]티아졸, 헥사민 및 메텐아민을 포함한다.
본 발명의 특정 화합물은 특정한 기하 또는 입체이성질체 형태로 존재할 수 있다. 본 발명은 시스- 및 트랜스-이성질체, (R)- 및 (S)-거울상이성질체, 부분입체이성질체, (D)-이성질체, (L)-이성질체, 그의 라세미 혼합물, 및 그의 다른 혼합물을 포함한 모든 이러한 화합물을 본 발명의 범주 내에 해당하는 것으로서 고려한다. 추가의 비대칭 탄소 원자는 치환기 예컨대 알킬 기 내에 존재할 수 있다. 모든 이러한 이성질체 뿐만 아니라 그의 혼합물은 본 발명에 포함되도록 의도된다.
본원에 기재된 화합물 및 그의 염은 또한 상응하는 수화물 (예를 들어, 반수화물, 1수화물, 2수화물, 3수화물, 4수화물) 및 용매화물로서 존재할 수 있다. 용매화물 및 수화물의 제조에 적합한 용매는 일반적으로 통상의 기술자에 의해 선택될 수 있다.
화합물 및 그의 염은 무정형 또는 결정질 (공-결정질 및 다형체 포함) 형태로 존재할 수 있다.
본 발명의 시르투인-조정 화합물은 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성, 특히 시르투인 단백질의 데아세틸라제 활성을 유리하게 조정한다.
상기 특성에 대해 개별적으로 또는 추가로, 본 발명의 특정 시르투인-조정 화합물은 시르투인 단백질 (예를 들어, 예컨대 SIRT1 및/또는 SIRT3 단백질)의 탈아세틸화 활성을 조정하기에 효과적인 화합물의 농도에서, 하기 활성 중 1종 이상을 실질적으로 갖지 않는다: PI3-키나제의 억제, 알도리덕타제의 억제, 티로신 키나제의 억제, EGFR 티로신 키나제의 전사활성화, 관상동맥 확장 또는 연축완화 활성.
"알킬" 기 또는 "알칸"은 완전 포화인 직쇄형 또는 분지형 비-방향족 탄화수소이다. 전형적으로, 직쇄형 또는 분지형 알킬 기는 달리 정의되지 않는 한, 1 내지 약 20개의 탄소 원자, 바람직하게는 1 내지 약 10개를 갖는다. 직쇄형 및 분지형 알킬 기의 예는 메틸, 에틸, n-프로필, 이소-프로필, n-부틸, sec-부틸, tert-부틸, 펜틸, 헥실, 펜틸 및 옥틸을 포함한다. C1-C4 직쇄형 또는 분지형 알킬 기는 또한 "저급 알킬" 기로 지칭된다.
용어 "알케닐" ("알켄") 및 "알키닐" ("알킨")은 길이 및 가능한 치환에 있어서 상기 기재된 알킬 기와 유사하지만, 각각 적어도 1개의 이중 또는 삼중 결합을 함유하는 불포화 지방족 기를 지칭한다.
용어 "방향족 카르보사이클"은 적어도 1개의 방향족 고리를 함유하는 방향족 탄화수소 고리계를 지칭한다. 고리는 다른 방향족 카르보시클릭 고리 또는 비-방향족 카르보시클릭 고리에 융합 또는 달리 부착될 수 있다. 방향족 카르보사이클 기의 예는 카르보시클릭 방향족 기 예컨대 페닐, 나프틸, 및 안트라실을 포함한다.
"아자비시클로"는 고리 골격 내에 질소 원자를 함유하는 비시클릭 분자를 지칭한다. 비사이클의 2개의 고리는 2개의 서로 결합된 원자에서 융합되며, 예를 들어 인돌일 수 있거나, 원자의 순서를 가로질러 융합되며, 예를 들어 아자비시클로[2.2.1]헵탄)일 수 있거나, 또는 단일 원자에서 연결되며, 예를 들어 스피로사이클일 수 있다.
"비사이클" 또는 "비시클릭"은 1, 2 또는 3개 또는 그 초과의 원자가 2개의 고리 사이에 공유된 것인 2-고리계를 지칭한다. 비사이클은 2개의 인접한 원자가 각각의 2개의 고리에 의해 공유된 것인 융합된 비사이클, 예를 들어 데칼린, 인돌을 포함한다. 비사이클은 2개의 고리가 단일 원자를 공유하는 것인 스피로 비사이클, 예를 들어 스피로[2.2]펜탄, 1-옥사-6-아자스피로[3.4]옥탄을 또한 포함한다. 비사이클은 적어도 3개의 원자가 2개의 고리 사이에 공유된 것인 가교된 비사이클, 예를 들어 노르보르난을 추가로 포함한다.
"가교된 비사이클" 화합물은 적어도 3개의 원자가 계의 둘 다의 고리에 의해 공유된 것인 비시클릭 고리계이며, 즉 이들은 2개의 브리지헤드 원자를 연결시키는 1개 이상의 원자의 적어도 1개의 브리지를 포함한다. 가교된 아자비시클로는 고리 중 적어도 1개 내에 질소 원자를 함유하는 가교된 비시클릭 분자를 지칭한다.
용어 "Boc"는 tert-부틸옥시카르보닐 기 (통상의 아민 보호기)를 지칭한다.
본원에 사용된 용어 "카르보사이클" 및 "카르보시클릭"은 고리의 각각의 원자가 탄소인 포화 또는 불포화 고리를 지칭한다. 용어 카르보사이클은 방향족 카르보사이클 및 비-방향족 카르보사이클 둘 다를 포함한다. 비-방향족 카르보사이클은 모든 탄소 원자가 포화인 시클로알칸 고리, 및 적어도 1개의 이중 결합을 함유하는 시클로알켄 고리 둘 다를 포함한다. "카르보사이클"은 5-7원 모노시클릭 및 8-12원 비시클릭 고리를 포함한다. 비시클릭 카르보사이클의 각각의 고리는 비-방향족 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 카르보사이클은 1, 2 또는 3개 또는 그 초과의 원자가 2개의 고리 사이에 공유된 것인 비시클릭 분자를 포함한다. 용어 "융합된 카르보사이클"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 것인 비시클릭 카르보사이클을 지칭한다. 융합된 카르보사이클의 각각의 고리는 비-방향족 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예시적 실시양태에서, 방향족 고리, 예를 들어 페닐은 비-방향족 또는 방향족 고리, 예를 들어 시클로헥산, 시클로펜탄 또는 시클로헥센에 융합될 수 있다. 원자가가 허용하는 한, 비-방향족 및 방향족 비시클릭 고리의 임의의 조합이 카르보시클릭의 정의에 포함된다. 예시적인 "카르보사이클"은 시클로펜탄, 시클로헥산, 비시클로[2.2.1]헵탄, 1,5-시클로옥타디엔, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥트-3-엔, 나프탈렌 및 아다만탄을 포함한다. 예시적인 융합된 카르보사이클은 데칼린, 나프탈렌, 1,2,3,4-테트라히드로나프탈렌, 비시클로[4.2.0]옥탄, 4,5,6,7-테트라히드로-1H-인덴 및 비시클로[4.1.0]헵트-3-엔을 포함한다. "카르보사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 1개 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
"시클로알킬" 기는 완전 포화 (비-방향족)인 시클릭 탄화수소이다. 전형적으로, 시클로알킬 기는 달리 정의되지 않는 한, 3 내지 약 10개의 탄소 원자, 보다 전형적으로 3 내지 8개의 탄소 원자를 갖는다. "시클로알케닐" 기는 1개 이상의 이중 결합을 함유하는 시클릭 탄화수소이다.
"할로겐"은 F, Cl, Br 또는 I를 나타낸다.
"할로겐-치환" 또는 "할로" 치환은 1개 이상의 수소의 F, Cl, Br 또는 I로의 대체를 나타낸다.
용어 "헤테로아릴" 또는 "방향족 헤테로사이클"은 고리 구조가 적어도 1개의 헤테로원자, 바람직하게는 1 내지 4개의 헤테로원자, 보다 바람직하게는 1 또는 2개의 헤테로원자를 포함하는 것인 치환 또는 비치환된 방향족 단일 고리 구조, 바람직하게는 5- 내지 7-원 고리, 보다 바람직하게는 5- 내지 6-원 고리를 포함한다. 용어 "헤테로아릴"은 고리 중 적어도 1개는 헤테로방향족이고, 예를 들어 다른 시클릭 고리는 시클로알킬, 시클로알케닐, 시클로알키닐, 방향족 카르보사이클, 헤테로아릴 및/또는 헤테로시클릴일 수 있는 것인 1 또는 2개의 고리를 갖는 고리계를 또한 포함한다. 헤테로아릴 기는, 예를 들어 피롤, 푸란, 티오펜, 이미다졸, 옥사졸, 티아졸, 피라졸, 피리딘, 피라진, 피리다진, 및 피리미딘을 포함한다.
본원에 사용된 용어 "헤테로사이클" 및 "헤테로시클릭"은 N, O, B 및 S 원자, 바람직하게는 N, O, 또는 S로부터 선택된 1개 이상의 헤테로원자를 포함하는 비-방향족 또는 방향족 고리를 지칭한다. 용어 "헤테로사이클"은 "방향족 헤테로사이클" 및 "비-방향족 헤테로사이클" 둘 다를 포함한다. 헤테로사이클은 4-7원 모노시클릭 및 8-12원 비시클릭 고리를 포함한다. 헤테로사이클은 1, 2 또는 3개 또는 그 초과의 원자가 2개의 고리 사이에 공유된 것인 비시클릭 분자를 포함한다. 비시클릭 헤테로사이클의 각각의 고리는 비-방향족 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 용어 "융합된 헤테로사이클"은 각각의 고리가 다른 고리와 2개의 인접한 원자를 공유하는 것인 비시클릭 헤테로사이클을 지칭한다. 융합된 헤테로사이클의 각각의 고리는 비-방향족 및 방향족 고리로부터 선택될 수 있다. 예시적 실시양태에서, 방향족 고리, 예를 들어 피리딜은 비-방향족 또는 방향족 고리, 예를 들어 시클로헥산, 시클로펜탄, 피롤리딘, 2,3-디히드로푸란 또는 시클로헥센에 융합될 수 있다. "헤테로사이클" 기는, 예를 들어 피페리딘, 피페라진, 피롤리딘, 모르폴린, 피리미딘, 벤조푸란, 인돌, 퀴놀린, 락톤, 및 락탐을 포함한다. 예시적인 "융합된 헤테로사이클"은 벤조디아제핀, 인돌, 퀴놀린, 퓨린, 및 4,5,6,7-테트라히드로벤조[d]티아졸을 포함한다. "헤테로사이클"은 수소 원자를 보유할 수 있는 임의의 1개 이상의 위치에서 치환될 수 있다.
"모노시클릭 고리"는 5-7원 방향족 카르보사이클 또는 헤테로아릴, 3-7원 시클로알킬 또는 시클로알케닐, 및 5-7원 비-방향족 헤테로시클릴을 포함한다. 예시적인 모노시클릭 기는 치환 또는 비치환된 헤테로사이클 또는 카르보사이클 예컨대 티아졸릴, 옥사졸릴, 옥사지닐, 티아지닐, 디티아닐, 디옥사닐, 이속사졸릴, 이소티아졸릴, 트리아졸릴, 푸라닐, 테트라히드로푸라닐, 디히드로푸라닐, 피라닐, 테트라졸릴, 피라졸릴, 피라지닐, 피리다지닐, 이미다졸릴, 피리디닐, 피롤릴, 디히드로피롤릴, 피롤리디닐, 피페리디닐, 피페라지닐, 피리미디닐, 모르폴리닐, 테트라히드로티오페닐, 티오페닐, 시클로헥실, 시클로펜틸, 시클로프로필, 시클로부틸, 시클로헵타닐, 아제티디닐, 옥세타닐, 티이라닐, 옥시라닐, 아지리디닐, 및 티오모르폴리닐을 포함한다.
본원에 사용된 "치환된"은 구조 내의 수소 원자를 수소 이외의 원자 또는 분자로 치환하는 것을 의미한다. 치환가능한 원자 예컨대 "치환가능한 질소"는 수소 원자를 적어도 1종의 공명 형태로 보유하는 원자이다. 수소 원자는 또 다른 원자 또는 CH3 또는 OH 기와 같은 기로 치환될 수 있다. 예를 들어, 피페리딘 분자 내의 질소가 수소 원자에 결합된 경우에, 상기 질소는 치환가능하다. 예를 들어 피페리딘의 질소가 수소 이외의 원자에 결합된 경우에, 상기 질소는 치환가능하지 않다. 수소 원자를 임의의 공명 형태로 보유할 수 없는 원자는 치환가능하지 않다.
본 발명에 의해 고려되는 치환기 및 가변기의 조합은 단지 안정한 화합물의 형성을 일으키는 것들이다. 본원에 사용된 용어 "안정한"은 제조를 가능하게 하기에 충분한 안정성을 보유하며, 본원에 상세화된 목적에 유용하도록 충분한 기간 동안 화합물의 완전성을 유지하는 화합물을 지칭한다.
본원에 개시된 화합물은 부분 및 완전 중수소화 변이체를 또한 포함한다. 특정 실시양태에서, 중수소화 변이체는 동역학적 연구에 사용될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자는 이러한 중수소 원자가 존재하는 부위를 선택할 수 있다.
본원에 기재된 화합물의 염, 특히 제약상 허용되는 염이 본 발명에 또한 포함된다. 충분히 산성, 충분히 염기성, 또는 이들 둘 다인 관능기를 보유하는 본 발명의 화합물은 다수의 무기 염기, 및 무기 및 유기 산 중 임의의 것과 반응하여 염을 형성할 수 있다. 대안적으로, 본래 하전되어 있는 화합물, 예컨대 4급 질소를 갖는 것들은 적절한 반대이온 (예를 들어, 할라이드 예컨대 브로마이드, 클로라이드 또는 플루오라이드, 특히 브로마이드)과 함께 염을 형성할 수 있다.
산 부가염을 형성하는데 흔히 사용되는 산은 무기 산 예컨대 염산, 브로민화수소산, 아이오딘화수소산, 황산, 인산 등, 및 유기 산 예컨대 p-톨루엔술폰산, 메탄술폰산, 옥살산, p-브로모페닐-술폰산, 탄산, 숙신산, 시트르산, 벤조산, 아세트산 등이다. 이러한 염의 예는 술페이트, 피로술페이트, 비술페이트, 술파이트, 비술파이트, 포스페이트, 모노히드로겐포스페이트, 디히드로겐포스페이트, 메타포스페이트, 피로포스페이트, 클로라이드, 브로마이드, 아이오다이드, 아세테이트, 프로피오네이트, 데카노에이트, 카프릴레이트, 아크릴레이트, 포르메이트, 이소부티레이트, 카프로에이트, 헵타노에이트, 프로피올레이트, 옥살레이트, 말로네이트, 숙시네이트, 수베레이트, 세바케이트, 푸마레이트, 말레에이트, 부틴-1,4-디오에이트, 헥신-1,6-디오에이트, 벤조에이트, 클로로벤조에이트, 메틸벤조에이트, 디니트로벤조에이트, 히드록시벤조에이트, 메톡시벤조에이트, 프탈레이트, 술포네이트, 크실렌술포네이트, 페닐아세테이트, 페닐프로피오네이트, 페닐부티레이트, 시트레이트, 락테이트, 감마-히드록시부티레이트, 글리콜레이트, 타르트레이트, 메탄술포네이트, 프로판술포네이트, 나프탈렌-1-술포네이트, 나프탈렌-2-술포네이트, 만델레이트 등을 포함한다.
염기 부가염은 무기 염기, 예컨대 암모늄 또는 알칼리 금속 또는 알칼리 토금속 히드록시드, 카르보네이트, 비카르보네이트 등으로부터 유도된 것들을 포함한다. 따라서, 본 발명의 염을 제조하기에 유용한 이러한 염기는 수산화나트륨, 수산화칼륨, 수산화암모늄, 탄산칼륨 등을 포함한다.
또 다른 실시양태에 따르면, 본 발명은 상기 정의된 화합물의 제조 방법을 제공한다. 화합물은 통상적인 기술을 사용하여 합성될 수 있다. 유리하게, 이들 화합물은 용이하게 입수가능한 출발 물질로부터 편리하게 합성된다.
본원에 기재된 화합물을 합성하기에 유용한 합성 화학 변형 및 방법론은 관련 기술분야에 공지되어 있으며, 예를 들어 문헌 [R. Larock, Comprehensive Organic Transformations (1989); T. W. Greene and P. G. M. Wuts, Protective Groups in Organic Synthesis, 2d. Ed. (1991); L. Fieser and M. Fieser, Fieser and Fieser's Reagents for Organic Synthesis (1994); 및 L. Paquette, ed., Encyclopedia of Reagents for Organic Synthesis (1995)]에 기재된 것들을 포함한다.
예시적 실시양태에서, 치료 화합물은 세포의 세포질 막을 가로지를 수 있다. 예를 들어, 화합물은 적어도 약 20%, 50%, 75%, 80%, 90% 또는 95%의 세포-투과성을 가질 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 또한 하기 특징 중 1종 이상을 가질 수 있다: 화합물은 세포 또는 대상체에 대해 본질적으로 비-독성일 수 있고; 화합물은 2000 amu 이하, 1000 amu 이하의 유기 분자 또는 소분자일 수 있고; 화합물은 적어도 약 30일, 60일, 120일, 6개월 또는 1년의 정상 대기 조건 하의 반감기를 가질 수 있고; 화합물은 적어도 약 30일, 60일, 120일, 6개월 또는 1년의 용액 중에서의 반감기를 가질 수 있고; 화합물은 용액 중에서 레스베라트롤보다 적어도 약 50%, 2배, 5배, 10배, 30배, 50배 또는 100배의 배수만큼 더 안정할 수 있고; 화합물은 DNA 복구 인자 Ku70의 탈아세틸화를 촉진할 수 있고; 화합물은 RelA/p65의 탈아세틸화를 촉진할 수 있고; 화합물은 일반적인 전환율을 증가시키고, TNF-유발 아폽토시스에 대한 세포의 감수성을 증진시킬 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 시르투인의 데아세틸라제 활성을 조정하기에 효과적인 농도 (예를 들어, 생체내)에서, 히스톤 데아세틸라제 (HDAC) 클래스 I 및 /또는 HDAC 클래스 II를 억제하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다. 예를 들어, 바람직한 실시양태에서, 상기 시르투인-조정 화합물은 시르투인-조정 화합물이며, HDAC I 및/또는 HDAC II의 억제에 대한 EC50보다 적어도 5배 더 적은, 보다 더 바람직하게는 적어도 10배, 100배 또는 심지어 1000배 더 적은, 시르투인 데아세틸라제 활성의 활성화에 대한 EC50을 갖도록 선택된다. HDAC I 및/또는 HDAC II 활성을 검정하는 방법은 관련 기술분야에 널리 공지되어 있으며, 이러한 검정을 수행하기 위한 키트는 상업적으로 구입할 수 있다. 예를 들어, 바이오비전, 인크.(BioVision, Inc.) (캘리포니아주 마운틴 뷰; biovision.com의 월드 와이드 웹) 및 토마스 사이언티픽(Thomas Scientific) (뉴저지주 스웨데스보로; tomassci.com의 월드 와이드 웹)을 참조한다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 시르투인 상동체를 조정하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다. 특정 실시양태에서, 인간 시르투인 단백질의 활성화제는 인간 시르투인의 데아세틸라제 활성을 활성화시키기에 효과적인 농도 (예를 들어, 생체내)에서, 하등 진핵생물, 특히 효모 또는 인간 병원체로부터 시르투인 단백질을 활성화시키는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않을 수 있다. 예를 들어, 시르투인-조정 화합물은 효모 시르투인, 예컨대 Sir2 (예컨대 칸디다(Candida), 에스. 세레비지아에 등)의 활성화에 대한 EC50보다 적어도 5배 더 적은, 보다 더 바람직하게는 적어도 10배, 100배 또는 심지어 1000배 더 적은, 인간 시르투인, 예컨대 SIRT1 및/또는 SIRT3 데아세틸라제 활성의 활성화에 대한 EC50을 갖도록 선택될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 하등 진핵생물, 특히 효모 또는 인간 병원체로부터의 시르투인 단백질의 억제제는 하등 진핵생물로부터의 시르투인 단백질의 데아세틸라제 활성을 억제하기에 효과적인 농도 (예를 들어, 생체내)에서, 인간으로부터의 시르투인 단백질을 억제하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다. 예를 들어, 시르투인-억제 화합물은 효모 시르투인, 예컨대 Sir2 (예컨대 칸디다, 에스. 세레비지아에 등)의 억제에 대한 IC50보다 적어도 5배 더 적은, 보다 더 바람직하게는 적어도 10배, 100배 또는 심지어 1000배 더 적은, 인간 시르투인, 예컨대 SIRT1 및/또는 SIRT3 데아세틸라제 활성의 억제에 대한 IC50을 갖도록 선택될 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 1종 이상의 시르투인 단백질 상동체, 예컨대 예를 들어 인간 SIRT1, SIRT2, SIRT3, SIRT4, SIRT5, SIRT6 또는 SIRT7 중 1종 이상을 조정하는 능력을 가질 수 있다. 일부 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 SIRT1 및 SIRT3 단백질 둘 다를 조정하는 능력을 갖는다.
다른 실시양태에서, SIRT1 조정제는 인간 SIRT1의 데아세틸라제 활성을 조정하기에 효과적인 농도 (예를 들어, 생체내)에서, 다른 시르투인 단백질 상동체, 예컨대 예를 들어 인간 SIRT2, SIRT3, SIRT4, SIRT5, SIRT6 또는 SIRT7 중 1종 이상을 조정하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다. 예를 들어, 시르투인-조정 화합물은 인간 SIRT2, SIRT3, SIRT4, SIRT5, SIRT6 또는 SIRT7 중 1종 이상의 조정에 대한 ED50보다 적어도 5배 더 적은, 보다 더 바람직하게는 적어도 10배, 100배 또는 심지어 1000배 더 적은, 인간 SIRT1 데아세틸라제 활성의 조정에 대한 ED50을 갖도록 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, SIRT1 조정제는 SIRT3 단백질을 조정하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다.
다른 실시양태에서, SIRT3 조정제는 인간 SIRT3의 데아세틸라제 활성을 조정하기에 효과적인 농도 (예를 들어, 생체내)에서, 다른 시르투인 단백질 상동체, 예컨대 예를 들어 인간 SIRT1, SIRT2, SIRT4, SIRT5, SIRT6 또는 SIRT7 중 1종 이상을 조정하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다. 예를 들어, 시르투인-조정 화합물은 인간 SIRT1, SIRT2, SIRT4, SIRT5, SIRT6 또는 SIRT7 중 1종 이상의 조정에 대한 ED50보다 적어도 5배 더 적은, 보다 더 바람직하게는 적어도 10배, 100배 또는 심지어 1000배 더 적은, 인간 SIRT3 데아세틸라제 활성의 조정에 대한 ED50을 갖도록 선택될 수 있다. 일부 실시양태에서, SIRT3 조정제는 SIRT1 단백질을 조정하는 것에 대해 어떠한 실질적인 능력도 갖지 않는다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 약 10-9M, 10-10M, 10-11M, 10-12M 또는 그 미만의 시르투인 단백질에 대한 결합 친화도를 가질 수 있다. 시르투인-조정 화합물은 그의 기질 또는 NAD+ (또는 다른 보조인자)에 대한 시르투인 단백질의 겉보기 Km을 적어도 약 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 50 또는 100의 배수만큼 감소 (활성화제) 또는 증가 (억제제)시킬 수 있다. 특정 실시양태에서, Km 값은 본원에 기재된 질량 분광측정법 검정을 사용하여 결정된다. 바람직한 활성화 화합물은 그의 기질 또는 보조인자에 대한 시르투인의 Km을 유사한 농도의 레스베라트롤에 의해 유발된 것보다 더 큰 정도로 감소시키거나, 또는 그의 기질 또는 보조인자에 대한 시르투인의 Km을 더 낮은 농도의 레스베라트롤에 의해 유발된 것과 유사하게 감소시킨다. 시르투인-조정 화합물은 시르투인 단백질의 Vmax를 적어도 약 2, 3, 4, 5, 10, 20, 30, 50 또는 100의 배수만큼 증가시킬 수 있다. 시르투인-조정 화합물은 약 1 nM 미만, 약 10 nM 미만, 약 100 nM 미만, 약 1 μM 미만, 약 10 μM 미만, 약 100 μM 미만, 또는 약 1-10 nM, 약 10-100 nM, 약 0.1-1 μM, 약 1-10 μM 또는 약 10-100 μM의 SIRT1 및/또는 SIRT3 단백질의 데아세틸라제 활성의 조정에 대한 ED50을 가질 수 있다. 시르투인-조정 화합물은 세포 검정 또는 세포 기반 검정으로 측정 시에, SIRT1 및/또는 SIRT3 단백질의 데아세틸라제 활성을 적어도 약 5, 10, 20, 30, 50 또는 100의 배수만큼 조정할 수 있다. 시르투인-조정 화합물은 동일한 농도의 레스베라트롤에 비해 적어도 약 10%, 30%, 50%, 80%, 2배, 5배, 10배, 50배 또는 100배 더 큰 시르투인 단백질의 데아세틸라제 활성의 유도를 유발할 수 있다. 시르투인-조정 화합물은 SIRT1 및/또는 SIRT3의 조정에 대한 것보다 적어도 약 10배, 20배, 30배, 50배 더 큰, SIRT5의 조정에 대한 ED50을 가질 수 있다.
3. 예시적인 용도
특정 측면에서, 본 발명은 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 조정하는 방법 및 그의 사용 방법을 제공한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 시르투인-조정 화합물이 시르투인 단백질을 활성화시키며, 예를 들어 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 것인 시르투인-조정 화합물을 사용하는 방법을 제공한다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 등을 포함한 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하는 것을 포함한 다양한 치료 용도에 유용할 수 있다. 방법은 그를 필요로 하는 대상체에게 제약 유효량의 시르투인-조정 화합물, 예를 들어 시르투인-조정 화합물을 투여하는 것을 포함한다.
상기에 기초하여, 본 발명은 노화 또는 스트레스와 관련된 다른 질환 또는 장애, 당뇨병 및 다른 대사 기능장애, 및 지방간, 간 지방간염 및 비만을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 상태의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암, 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 장미증, 염증성 장 질환, 골다공증, 패혈증, 관절염, COPD, 전신 홍반성 루푸스 및 안부 염증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 염증성 질환 뿐만 아니라 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 다른 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다.
이론에 얽매이는 것을 원하지는 않지만, 본 발명의 활성화제는 시르투인 단백질 내의 동일한 위치 (예를 들어, 활성 부위, 또는 활성 부위의 Km 또는 Vmax에 영향을 미치는 부위)에서 시르투인과 상호작용할 수 있는 것으로 여겨진다. 이러한 이유로 인해 특정 클래스의 시르투인 활성화제 및 억제제가 실질적인 구조적 유사성을 가질 수 있는 것으로 여겨진다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 시르투인-조정 화합물은 단독으로 또는 다른 화합물과 조합되어 취해질 수 있다. 특정 실시양태에서, 2종 이상의 시르투인-조정 화합물의 혼합물이 그를 필요로 하는 대상체에게 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 하기 화합물 중 1종 이상과 함께 투여될 수 있다: 레스베라트롤, 부테인, 피세틴, 피세아타놀, 또는 퀘르세틴. 예시적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 니코틴산 또는 니코틴아미드 리보시드와 조합되어 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 감소시키는 시르투인-조정 화합물은 하기 화합물 중 1종 이상과 함께 투여될 수 있다: 니코틴아미드 (NAM), 수라민; NF023 (G-단백질 길항제); NF279 (퓨린성 수용체 길항제); 트롤록스 (6-히드록시-2,5,7,8,테트라메틸크로만-2-카르복실산); (-)-에피갈로카테킨 (부위 3,5,7,3',4', 5' 상의 히드록시); (-)-에피갈로카테킨 갈레이트 (부위 5,7,3',4',5' 상의 히드록시 및 부위 3 상의 갈레이트 에스테르); 시아니딘 클로라이드 (3,5,7,3',4'-펜타히드록시플라빌리움 클로라이드); 델피니딘 클로라이드 (3,5,7,3',4',5'-헥사히드록시플라빌리움 클로라이드); 미리세틴 (칸나비스세틴; 3,5,7,3',4',5'-헥사히드록시플라본); 3,7,3',4',5'-펜타히드록시플라본; 고시페틴 (3,5,7,8,3',4'-헥사히드록시플라본), 시르티놀; 및 스플리토미신. 또 다른 실시양태에서, 1종 이상의 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 암, 당뇨병, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고, 염증, 홍조, 비만, 노화, 스트레스 등을 포함한 다양한 질환의 치료 또는 예방을 위한 1종 이상의 치료제와 함께 투여될 수 있다. 다양한 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물을 포함하는 조합 요법은 (1) 1종 이상의 시르투인-조정 화합물을 1종 이상의 치료제 (예를 들어, 본원에 기재된 1종 이상의 치료제)와 조합하여 포함하는 제약 조성물; 및 (2) 1종 이상의 시르투인-조정 화합물과 1종 이상의 치료제의 공-투여로서, 여기서 시르투인-조정 화합물 및 치료제는 동일한 조성물로 제제화된 것은 아닌 것 (그러나 동일한 키트 또는 패키지, 예컨대 블리스터 팩 또는 다른 다중-챔버 패키지; 사용자에 의해 분리될 수 있는 연결된 개별 밀봉 용기 (예를 들어, 호일 파우치); 또는 화합물(들) 및 다른 치료제(들)가 개별 용기에 존재하는 키트 내에 존재할 수 있음)을 지칭할 수 있다. 개별 제제를 사용하는 경우에, 시르투인-조정 화합물은 또 다른 치료제의 투여와 동시에, 간헐적으로, 시차를 두고, 그 전에, 그 후에, 또는 그의 조합으로 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물을 사용하여 질환 또는 장애를 감소, 예방 또는 치료하는 방법은 시르투인, 예컨대 인간 SIRT1, SIRT2 및/또는 SIRT3, 또는 그의 상동체의 단백질 수준을 증가시키는 것을 또한 포함할 수 있다. 단백질 수준을 증가시키는 것은 시르투인을 코딩하는 핵산의 1개 이상의 카피를 세포에 도입함으로써 달성될 수 있다. 예를 들어, 시르투인의 수준은 시르투인을 코딩하는 핵산을 포유동물 세포에 도입함으로써 포유동물 세포에서 증가될 수 있으며, 예를 들어 진뱅크 수탁 번호 NP_036370에 제시된 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 도입함으로써 SIRT1의 수준을 증가시킬 수 있고/거나 진뱅크 수탁 번호 AAH01042에 제시된 아미노산 서열을 코딩하는 핵산을 도입함으로써 SIRT3의 수준을 증가시킬 수 있다.
시르투인의 단백질 수준을 증가시키기 위해 세포에 도입되는 핵산은 시르투인, 예를 들어 SIRT1 및/또는 SIRT3 단백질의 서열과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일한 단백질을 코딩할 수 있다. 예를 들어, 단백질을 코딩하는 핵산은 SIRT1 (예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 NM_012238) 및/또는 SIRT3 (예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 BC001042) 단백질을 코딩하는 핵산과 적어도 약 80%, 85%, 90%, 95%, 98%, 또는 99% 동일할 수 있다. 핵산은 또한, 바람직하게는 엄격한 혼성화 조건 하에 야생형 시르투인, 예를 들어 SIRT1 및/또는 SIRT3 단백질을 코딩하는 핵산에 혼성화되는 핵산일 수 있다. 엄격한 혼성화 조건은 65℃에서 0.2 x SSC 중에서의 혼성화 및 세척을 포함할 수 있다. 야생형 시르투인 단백질, 예컨대 야생형 시르투인의 단편인 단백질과 상이한 단백질을 코딩하는 핵산을 사용하는 경우에, 상기 단백질은 바람직하게는 생물학적으로 활성이며, 예를 들어 탈아세틸화될 수 있다. 단지, 생물학적으로 활성인 시르투인의 부분을 세포에서 발현시키는 것이 필요하다. 예를 들어, 진뱅크 수탁 번호 NP_036370을 갖는 야생형 SIRT1과 상이한 단백질은 바람직하게는 그의 코어 구조를 함유한다. 상기 코어 구조는 때때로 NAD 결합 뿐만 아니라 기질 결합 도메인을 포괄하는 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 237 내지 932에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 아미노산 62-293을 지칭한다. SIRT1의 코어 도메인은 또한 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 834 내지 1394에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 261 내지 447; 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 777 내지 1532에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 242 내지 493; 또는 진뱅크 수탁 번호 NM_012238의 뉴클레오티드 813 내지 1538에 의해 코딩되는 진뱅크 수탁 번호 NP_036370의 대략 아미노산 254 내지 495를 지칭할 수 있다. 단백질이 생물학적 기능, 예컨대 탈아세틸화 능력을 유지하는지의 여부는 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라 결정될 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물을 사용하여 질환 또는 장애를 감소, 예방 또는 치료하는 방법은 시르투인, 예컨대 인간 SIRT1, SIRT2 및/또는 SIRT3, 또는 그의 상동체의 단백질 수준을 감소시키는 것을 또한 포함할 수 있다. 시르투인 단백질 수준을 감소시키는 것은 관련 기술분야에 공지된 방법에 따라 달성될 수 있다. 예를 들어, 시르투인에 대해 표적화된 siRNA, 안티센스 핵산 또는 리보자임을 세포에서 발현시킬 수 있다. 우성 음성 시르투인 돌연변이체, 예를 들어 탈아세틸화될 수 없는 돌연변이체가 또한 사용될 수 있다. 예를 들어, 문헌 [Luo et al. (2001) Cell 107:137]에 기재된 SIRT1의 돌연변이체 H363Y가 사용될 수 있다. 대안적으로, 전사를 억제하는 작용제가 사용될 수 있다.
시르투인 단백질 수준을 조정하는 방법은 시르투인을 코딩하는 유전자의 전사를 조정하는 방법, 상응하는 mRNA를 안정화/탈안정화시키는 방법, 및 관련 기술분야에 공지된 다른 방법을 또한 포함한다.
노화/스트레스
한 측면에서, 본 발명은 세포를 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 본 발명의 시르투인-조정 화합물과 접촉시킴으로써, 세포의 수명을 연장시키거나, 세포의 증식 능력을 연장시키거나, 세포의 노화를 저속화시키거나, 세포의 생존을 촉진하거나, 세포에서 세포성 노쇠를 지연시키거나, 칼로리 제한의 효과를 모방하거나, 스트레스에 대한 세포의 저항성을 증가시키거나, 또는 세포의 아폽토시스를 방지하는 방법을 제공한다. 예시적 실시양태에서, 방법은 세포를 시르투인-조정 화합물과 접촉시키는 것을 포함한다.
본원에 기재된 방법은 세포, 특히 1차 세포 (즉, 유기체, 예를 들어 인간으로부터 수득된 세포)가 세포 배양 시에 생존하도록 유지될 수 있는 시간의 양을 증가시키는데 사용될 수 있다. 배아 줄기 (ES) 세포 및 만능 세포, 및 그로부터 분화된 세포를 또한 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 처리하여 배양 시에 세포 또는 그의 자손을 더 장기간 동안 유지할 수 있다. 이러한 세포는 또한, 예를 들어 생체외 변형 후, 대상체로의 이식에 사용될 수 있다.
한 측면에서, 장기간 동안 보존되도록 의도된 세포는 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 처리될 수 있다. 세포는 현탁액 (예를 들어, 혈액 세포, 혈청, 생물학적 성장 배지 등), 또는 조직 또는 기관에 존재할 수 있다. 예를 들어, 수혈의 목적을 위해 개체로부터 수집된 혈액을 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 처리하여 혈액 세포를 더 장기간 동안 보존할 수 있다. 추가로, 법의학적 목적에 사용될 혈액을 또한 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 사용하여 보존할 수 있다. 수명을 연장시키거나 또는 아폽토시스에 대해 보호하도록 처리될 수 있는 다른 세포는 소비를 위한 세포, 예를 들어 비-인간 포유동물로부터의 세포 (예컨대 고기) 또는 식물 세포 (예컨대 채소)를 포함한다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한, 예를 들어 발생 및/또는 성장 과정을 변경, 지연 또는 촉진하기 위해 포유동물, 식물, 곤충 또는 미생물에서의 발생기 및 성장기 동안 적용될 수 있다.
또 다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 고형 조직 이식편, 기관 이식물, 세포 현탁액, 줄기 세포, 골수 세포 등을 포함한 이식 또는 세포 요법에 유용한 세포를 처리하는데 사용될 수 있다. 세포 또는 조직은 자가이식편, 동종이식편, 동계이식편 또는 이종이식편일 수 있다. 세포 또는 조직은 대상체로의 투여/이식 전에, 투여/이식과 공동으로, 및/또는 투여/이식 후에 시르투인-조정 화합물로 처리될 수 있다. 세포 또는 조직은 공여자 개체로부터의 세포의 제거 전에, 공여자 개체로부터의 세포 또는 조직의 제거 후에 생체외에서, 또는 수용자로의 이식 후에 처리될 수 있다. 예를 들어, 공여자 또는 수용자 개체는 시르투인-조정 화합물로 전신으로 처리될 수 있거나, 또는 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 사용하여 국부로 처리된 세포/조직의 하위세트를 가질 수 있다. 특정 실시양태에서, 세포 또는 조직 (또는 공여자/수용자 개체)은 이식편 생존을 연장시키기에 유용한 또 다른 치료제, 예컨대 예를 들어 면역억제제, 시토카인, 혈관형성 인자 등으로 추가로 처리될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 세포를 생체내 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 처리하여, 예를 들어 그의 수명을 증가시키거나 또는 아폽토시스를 방지할 수 있다. 예를 들어, 피부 또는 상피 세포를 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 처리함으로써 피부를 노화 (예를 들어, 주름 발생, 탄력 손실 등)로부터 보호할 수 있다. 예시적 실시양태에서, 피부를 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 포함하는 제약 또는 화장품 조성물과 접촉시킨다. 본원에 기재된 방법에 따라 치료될 수 있는 예시적인 피부 고통 또는 피부 상태는 염증, 일광 손상 또는 자연 노화와 연관되거나 또는 그에 의해 유발된 장애 또는 질환을 포함한다. 예를 들어, 상기 조성물은 접촉성 피부염 (자극성 접촉성 피부염 및 알레르기성 접촉성 피부염 포함), 아토피성 피부염 (알레르기성 습진으로도 공지됨), 광선 각화증, 각질화 장애 (습진 포함), 수포성 표피박리 질환 (천포창 포함), 박탈성 피부염, 지루성 피부염, 홍반 (다형성 홍반 및 결절성 홍반 포함), 일광 또는 다른 광원에 의해 유발된 손상, 원판상 홍반성 루푸스, 피부근염, 건선, 피부암 및 자연 노화 영향의 예방 또는 치료에 유용하다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 1도, 2도 또는 3도 화상 및/또는 열, 화학 또는 전기 화상을 포함한 상처 및/또는 화상을 치료하여 치유를 촉진하는데 사용될 수 있다. 제제는 피부 또는 점막 조직에 국소로 투여될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 1종 이상의 시르투인-조정 화합물을 포함하는 국소 제제는 또한 예방적, 예를 들어 화학예방적 조성물로서 사용될 수 있다. 화학예방적 방법에 사용되는 경우에, 감수성 피부는 특정한 개체에서의 임의의 가시적 상태 전에 처리된다.
시르투인-조정 화합물은 대상체에게 국부로 또는 전신으로 전달될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 주사, 국소 제제 등에 의해 대상체의 조직 또는 기관에 국부로 전달된다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 대상체에서 세포성 노쇠에 의해 유발 또는 악화되는 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하기 위해; 예를 들어 노쇠의 발병 후, 대상체의 노쇠 속도를 감소시키는 방법; 대상체의 수명을 연장시키는 방법; 수명과 관련된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법; 세포의 증식성 능력과 관련된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법; 및 세포 손상 또는 사멸로부터 유발된 질환 또는 상태를 치료 또는 예방하는 방법에 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 대상체의 수명을 단축시키는 질환의 발생률을 감소시킴으로써 작용하지는 않는다. 특정 실시양태에서, 방법은 질환, 예컨대 암에 의해 유발된 치사율을 감소시킴으로써 작용하지는 않는다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 일반적으로 대상체의 세포의 수명을 증가시키고, 대상체의 세포를 스트레스 및/또는 아폽토시스에 대해 보호하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 대상체를 본원에 기재된 화합물로 치료하는 것은 대상체를 호르메시스, 즉 유기체에 유익하며 그의 수명을 연장시킬 수 있는 가벼운 스트레스에 적용하는 것과 유사한 것으로 여겨진다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 노화 및 노화-관련 예후 또는 질환, 예컨대 졸중, 심장 질환, 심부전, 관절염, 고혈압 및 알츠하이머병을 예방하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 치료될 수 있는 다른 상태는, 예를 들어 눈의 노화와 연관된 안구 장애, 예컨대 백내장, 녹내장 및 황반 변성을 포함한다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 세포 사멸과 연관된 질환, 예를 들어 만성 질환을 치료하여 세포를 세포 사멸로부터 보호하기 위해 대상체에게 투여될 수 있다. 예시적인 질환은 신경 세포 사멸, 뉴런 기능장애, 또는 근육 세포 사멸 또는 기능장애와 연관된 것들, 예컨대 파킨슨병, 알츠하이머병, 다발성 경화증, 근위축성 측삭 경화증, 및 근육 이영양증; AIDS; 전격성 간염; 뇌의 변성에 연관된 질환, 예컨대 크로이츠펠트-야콥병, 색소성 망막염 및 소뇌 변성; 골수이형성증 예컨대 재생불량성 빈혈; 허혈성 질환 예컨대 심근경색 및 졸중; 간 질환 예컨대 알콜성 간염, B형 간염 및 C형 간염; 관절-질환 예컨대 골관절염; 아테롬성동맥경화증; 탈모증; UV 광으로 인한 피부에 대한 손상; 편평 태선; 피부의 위축; 백내장; 및 이식편 거부를 포함한다. 세포 사멸은 또한 수술, 약물 요법, 화학물질 노출 또는 방사선 노출에 의해 유발될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 급성 질환, 예컨대 기관 또는 조직 손상을 앓고 있는 대상체, 예를 들어 졸중 또는 심근경색을 앓고 있는 대상체 또는 척수 손상을 앓고 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 알콜성 간을 복구하는데 사용될 수 있다.
심혈관 질환
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 심혈관 질환의 치료 및/또는 예방을 필요로 하는 대상체에게 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 투여함으로써, 심혈관 질환을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 사용하여 치료 또는 예방될 수 있는 심혈관 질환은 심근병증 또는 심근염; 예컨대 특발성 심근병증, 대사 심근병증, 알콜성 심근병증, 약물-유발 심근병증, 허혈성 심근병증, 및 고혈압 심근병증을 포함한다. 본원에 기재된 화합물 및 방법을 사용하여 또한 치료가능 또는 예방가능한 것은 주요 혈관, 예컨대 대동맥, 관상 동맥, 경동맥, 뇌혈관 동맥, 신동맥, 장골 동맥, 대퇴 동맥 및 슬와 동맥의 아테롬성 장애 (대혈관 질환)이다. 치료 또는 예방될 수 있는 다른 혈관 질환은 혈소판 응집, 망막 세동맥, 사구체 세동맥, 신경벽 혈관, 심장 세동맥, 및 눈, 신장, 심장, 및 중추 및 말초 신경계의 연합 모세혈관상과 관련된 것들을 포함한다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 개체의 혈장 중 HDL 수준을 증가시키는데 사용될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 치료될 수 있는 또 다른 장애는, 예를 들어 관상동맥 개입 후, 재협착, 및 고밀도 및 저밀도 콜레스테롤의 비정상적 수준과 관련된 장애를 포함한다.
특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또 다른 심혈관제와의 조합 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 항부정맥제와의 조합 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또 다른 심혈관제와의 조합 요법의 일부로서 투여될 수 있다.
세포 사멸/암
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 소정 용량의 방사선 또는 독소를 최근에 수용하였거나 또는 수용할 가능성이 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 상기 용량의 방사선 또는 독소는 직업-관련 또는 의료 절차의 일부로서 수용되며, 예를 들어 예방적 조치로서 투여된다. 또 다른 실시양태에서, 방사선 또는 독소 노출은 의도치 않게 수용된다. 이러한 경우에, 화합물은 바람직하게는 아폽토시스 및 급성 방사선 증후군의 후속 발생을 억제하기 위해 노출 후 가능한 한 빨리 투여된다.
시르투인-조정 화합물은 또한 암을 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 암을 치료 및/또는 예방하는데 사용될 수 있다. 칼로리 제한은 암을 포함한 연령-관련 장애의 발생의 감소와 연관된 바 있다. 따라서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성에서의 증가는 연령-관련 장애, 예컨대 예를 들어 암의 발생을 치료 및/또는 예방하기에 유용할 수 있다. 시르투인-조정 화합물을 사용하여 치료될 수 있는 예시적인 암은 뇌 및 신장의 암; 유방암, 전립선암, 고환암 및 난소암을 포함한 호르몬-의존성 암; 림프종, 및 백혈병이다. 고형 종양과 연관된 암에서, 조정 화합물은 종양에 직접 투여될 수 있다. 혈액 세포의 암, 예를 들어 백혈병은 조정 화합물을 혈류 또는 골수에 투여함으로써 치료될 수 있다. 양성 세포 성장, 예를 들어 사마귀가 또한 치료될 수 있다. 치료될 수 있는 다른 질환은 자가면역 세포가 제거되어야 하는 자가면역 질환, 예를 들어 전신 홍반성 루푸스, 경피증 및 관절염을 포함한다. 바이러스 감염 예컨대 포진, HIV, 아데노바이러스 및 HTLV-1 연관 악성 및 양성 장애는 또한 시르투인-조정 화합물의 투여에 의해 치료될 수 있다. 대안적으로, 세포를 대상체로부터 수득하고, 생체외 처리하여 특정의 바람직하지 않은 세포, 예를 들어 암 세포를 제거하고, 동일하거나 상이한 대상체에게 다시 투여할 수 있다.
화학요법제는 항암 활성을 갖는 것으로서 본원에 기재된 조정 화합물, 예를 들어 아폽토시스를 유발하는 화합물, 수명을 감소시키는 화합물, 또는 세포를 스트레스에 대해 감수성으로 만드는 화합물과 공-투여될 수 있다. 화학요법제는 그 자체로 세포 사멸을 유발하거나, 수명을 감소시키거나, 또는 스트레스에 대한 감수성을 증가시키는 것으로 본원에 기재된 시르투인-조정 화합물과 함께 및/또는 다른 화학요법제와 조합되어 사용될 수 있다. 통상적인 화학요법제 이외에도, 본원에 기재된 시르투인-조정 화합물은 또한 원치 않는 세포 증식에 기여하는 세포 성분의 발현을 억제하기 위해 안티센스 RNA, RNAi 또는 다른 폴리뉴클레오티드와 함께 사용될 수 있다.
시르투인-조정 화합물 및 통상적인 화학요법제를 포함하는 조합 요법은 관련 기술분야에 공지된 조합 요법에 비해 유리할 수 있으며, 이는 조합이 통상적인 화학요법제가 더 낮은 투여량에서 더 큰 효과를 발휘하는 것을 가능하게 하기 때문이다. 바람직한 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물과 조합되어 사용되는 경우에, 화학요법제 또는 통상적인 화학요법제의 조합에 대한 유효 용량 (ED50)은 화학요법제 단독에 대한 ED50보다 적어도 2배 더 적으며, 보다 더 바람직하게는 5배, 10배 또는 심지어 25배 더 적다. 반대로, 본원에 기재된 시르투인-조정 화합물과 조합되어 사용되는 경우에, 이러한 화학요법제 또는 이러한 화학요법제의 조합의 치료 지수 (TI)는 통상적인 화학치료 요법 단독에 대한 TI보다 적어도 2배 더 크며, 보다 더 바람직하게는 5배, 10배 또는 심지어 25배 더 클 수 있다.
뉴런 질환/장애
특정 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 신경변성 질환, 및 중추 신경계 (CNS), 척수 또는 말초 신경계 (PNS)에 대한 외상성 또는 기계적 손상을 앓고 있는 환자를 치료하는데 사용될 수 있다. 신경변성 질환은 전형적으로 뇌 세포의 위축 및/또는 사멸로 인한 것일 수 있는 인간 뇌의 질량 및 부피의 감소를 수반하며, 이는 노화에 기인하는 건강한 사람에서의 것들보다 훨씬 더 심하다. 신경변성 질환은 특정한 뇌 영역의 진행성 퇴행 (예를 들어, 신경 세포 기능장애 및 사멸)으로 인해 장기간의 정상적인 뇌 기능 후에 점진적으로 발생할 수 있다. 대안적으로, 외상 또는 독소와 연관된 것들과 같은 신경변성 질환은 급속한 발병을 가질 수 있다. 뇌 변성의 실제 발병은 임상적 발현보다 수년만큼 선행할 수 있다. 신경변성 질환의 예는 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병 (PD), 헌팅톤병 (HD), 근위축성 측삭 경화증 (ALS; 루게릭병), 미만성 루이 소체 질환, 무도병-유극적혈구증가증, 원발성 측삭 경화증, 안구 질환 (안구 신경염), 화학요법-유발 신경병증 (예컨대 빈크리스틴, 파클리탁셀, 보르테조밉으로부터), 당뇨병-유발 신경병증 및 프리드라이히 운동실조를 포함하나, 이에 제한되지는 않는다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 이들 장애 및 하기 기재된 바와 같은 다른 것을 치료하는데 사용될 수 있다.
AD는 기억 상실, 비통상적 행동, 인격 변화, 및 지적 능력의 저하를 일으키는 CNS 장애이다. 이들 손실은 특정한 유형의 뇌 세포의 사멸, 및 이들 사이의 연결 및 그의 지지 네트워크 (예를 들어, 신경교 세포)의 파괴와 관련되어 있다. 가장 초기 증상은 최근 기억의 상실, 판단 오류, 및 인격 변화를 포함한다. PD는 비제어된 신체 운동, 경직, 진전 및 이상운동증을 일으키는 CNS 장애이며, 도파민을 생산하는 뇌 영역에서의 뇌 세포의 사멸과 연관되어 있다. ALS (운동 뉴런 질환)는 뇌를 골격근과 연결시키는 CNS의 성분인 운동 뉴런을 공격하는 CNS 장애이다.
HD는 비제어된 운동, 지적 능력의 상실, 및 정서 장애를 유발하는 또 다른 신경변성 질환이다. 테이-작스병 및 샌드호프병은 GM2 강글리오시드 및 β-헥소사미니다제에 대한 관련 당지질 기질이 신경계에 축적되고 급성 신경변성을 촉발하는 당지질 축적 질환이다.
아폽토시스는 면역계에서 AIDS 발병기전에서 역할을 하는 것으로 널리 공지되어 있다. 그러나, HIV-1은 또한 신경계 질환을 유발하며, 이는 본 발명의 시르투인-조정 화합물로 치료될 수 있다.
뉴런 손실은 프리온 질환, 예컨대 인간에서의 크로이츠펠트-야콥병, 소에서의 BSE (광우병), 양 및 염소에서의 스크래피 질환, 및 고양이에서의 고양이 해면상 뇌병증 (FSE)의 두드러진 특색이다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 이들 이전 질환으로 인한 뉴런 손실을 치료 또는 예방하기에 유용할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 축삭병증을 수반하는 임의의 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 원위 축삭병증은 말초 신경계 (PNS) 뉴런의 일부 대사 또는 독성 장애로부터 유발된 유형의 말초 신경병증이다. 이는 대사 또는 독성 장애에 대한 신경의 가장 흔한 반응이며, 이와 같이 대사 질환 예컨대 당뇨병, 신부전, 결핍 증후군, 예컨대 영양실조 및 알콜중독, 또는 독소 또는 약물의 영향에 의해 유발될 수 있다. 원위 축삭병증을 갖는 것들은 통상적으로 대칭적 글로브-스타킹 감각-운동 장애를 제시한다. 심부건 반사 및 자율 신경계 (ANS) 기능은 또한 이환 부위에서 상실 또는 감소된다.
당뇨병성 신경병증은 당뇨병과 연관된 신경병증성 장애이다. 당뇨병성 신경병증과 연관될 수 있는 비교적 흔한 상태는 제3 신경 마비; 단일신경병증; 다발성 단일신경염; 당뇨병성 근위축; 통증성 다발신경병증; 자율 신경병증; 및 흉복부 신경병증을 포함한다.
말초 신경병증은 신경의 질환에 의해 또는 전신 질병의 부작용으로부터 유발될 수 있는 말초 신경계의 신경 손상에 대한 의학 용어이다. 당뇨병이 가능성이 가장 큰 원인이지만, 말초 신경병증의 주요 원인은 발작, 영양 결핍, 및 HIV를 포함한다.
예시적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 재발성 MS 및 단일증상 MS를 포함한 다발성 경화증 (MS), 및 다른 탈수초성 상태, 예컨대 예를 들어 만성 염증성 탈수초성 다발신경병증 (CIDP), 또는 그와 연관된 증상을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 질환으로 인한 외상, 상해 (외과적 개입 포함), 또는 환경적 외상 (예를 들어, 신경독소, 알콜중독 등)을 포함한 신경에 대한 외상을 치료하는데 사용될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 다양한 PNS 장애의 증상을 예방, 치료 및 완화하기에 유용할 수 있다. 용어 "말초 신경병증"은 뇌 및 척수 외부의 신경-말초 신경-이 손상된 광범위한 장애를 포괄한다. 말초 신경병증은 또한 말초 신경염으로도 지칭될 수 있거나, 또는 많은 신경이 수반되는 경우에는, 용어 다발신경병증 또는 다발신경염이 사용될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물로 치료가능한 PNS 질환은 하기를 포함한다: 당뇨병, 나병, 샤르코-마리-투스병, 길랑-바레 증후군 및 상완 신경총 신경병증 (상완 신경총의 경부 및 제1 흉부 신경근, 신경 줄기, 신경삭 및 말초 신경 성분의 질환).
또 다른 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 폴리글루타민 질환을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 예시적인 폴리글루타민 질환은 척수연수성 근육 위축 (케네디병), 헌팅톤병 (HD), 치상핵적핵-담창구시상하핵 위축 (하우 리버 증후군), 척수소뇌성 운동실조 제1형, 척수소뇌성 운동실조 제2형, 척수소뇌성 운동실조 제3형 (마차도-요셉병), 척수소뇌성 운동실조 제6형, 척수소뇌성 운동실조 제7형, 및 척수소뇌성 운동실조 제17형을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 세포로의 혈류의 감소에 반응하는 손상을 예방하기 위해 중추 신경계 세포를 치료하는 방법을 제공한다. 전형적으로, 예방될 수 있는 손상의 중증도는 주로 세포로의 혈류의 감소 정도 및 감소 지속기간에 따라 달라질 것이다. 특정 실시양태에서, 아폽토시스성 또는 괴사성 세포 사멸이 예방될 수 있다. 추가 실시양태에서, 허혈-매개 손상, 예컨대 세포독성 부종 또는 중추 신경계 조직 무산소혈증이 예방될 수 있다. 각 실시양태에서, 중추 신경계 세포는 척수 세포 또는 뇌 세포일 수 있다.
또 다른 측면은 중추 신경계 허혈성 상태를 치료하기 위해 대상체에게 시르투인-조정 화합물을 투여하는 것을 포괄한다. 다수의 중추 신경계 허혈성 상태는 본원에 기재된 시르투인-조정 화합물에 의해 치료될 수 있다. 특정 실시양태에서, 허혈성 상태는 임의의 유형의 허혈성 중추 신경계 손상, 예컨대 아폽토시스성 또는 괴사성 세포 사멸, 세포독성 부종 또는 중추 신경계 조직 무산소증을 일으키는 졸중이다. 졸중은 뇌의 임의의 영역에 충격을 주거나, 또는 졸중의 발생을 일으키는 것으로 통상적으로 공지된 임의의 병인에 의해 유발될 수 있다. 이러한 실시양태의 한 대안에서, 졸중은 뇌간 졸중이다. 이러한 실시양태의 또 다른 대안에서, 졸중은 소뇌 졸중이다. 또 다른 실시양태에서, 졸중은 색전성 졸중이다. 또 다른 대안에서, 졸중은 출혈성 졸중일 수 있다. 추가 실시양태에서, 졸중은 혈전성 졸중이다.
또 다른 측면에서, 시르투인-조정 화합물은 중추 신경계 허혈성 상태 후 허혈성 코어의 경색 크기를 감소시키기 위해 투여될 수 있다. 더욱이, 시르투인-조정 화합물은 또한 유익하게는 중추 신경계 허혈성 상태 후 허혈성 반음영 또는 전이 구역의 크기를 감소시키기 위해 투여될 수 있다.
특정 실시양태에서, 조합 약물 요법은 신경변성 장애 또는 이들 상태와 연관된 속발성 상태의 치료 또는 예방을 위한 약물 또는 화합물을 포함할 수 있다. 따라서, 조합 약물 요법은 1종 이상의 시르투인 활성화제 및 1종 이상의 항신경변성제를 포함할 수 있다.
혈액 응고 장애
다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 혈액 응고 장애 (또는 지혈 장애)를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 교환가능하게 본원에 사용된 용어 "지혈", "혈액 응고" 및 "혈병 형성"은 혈관수축 및 응고의 생리적 특성을 포함한 출혈의 제어를 지칭한다. 혈액 응고는 손상, 염증, 질환, 선천성 결함, 기능장애 또는 다른 파괴 후 포유동물 순환의 완전성을 유지하는 것을 돕는다. 추가로, 혈병의 형성은 상해의 경우에 출혈을 제한할 뿐만 아니라 (지혈), 중요 동맥 또는 정맥의 폐쇄에 의해 아테롬성동맥경화성 질환의 맥락에서 심각한 기관 손상 및 사망으로 이어질 수 있다. 따라서, 혈전증은 잘못된 시간 및 장소에서의 혈병 형성이다.
따라서, 본 발명은 혈액 응고 장애, 예컨대 심근경색, 졸중, 말초 동맥 질환에 의한 사지의 손실 또는 폐 색전증을 예방 또는 치료하기 위해 혈병의 형성을 억제하는 것을 목표로 하는 항응고 및 항혈전 치료를 제공한다.
상호교환가능하게 본원에 사용된 "지혈을 조정하는 또는 그의 조정" 및 "지혈을 조절하는 또는 그의 조절"은 지혈의 유도 (예를 들어, 자극 또는 증가), 뿐만 아니라 지혈의 억제 (예를 들어, 감소 또는 저하)를 포함한다.
한 측면에서, 본 발명은 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 투여함으로써, 대상체에서 지혈을 감소 또는 억제하는 방법을 제공한다. 본원에 개시된 조성물 및 방법은 혈전성 장애의 치료 또는 예방에 유용하다. 본원에 사용된 용어 "혈전성 장애"는 과도하거나 또는 원치 않는 응고 또는 지혈 활성을 특징으로 하는 임의의 장애 또는 상태, 또는 응고항진 상태를 포함한다. 혈전성 장애는 혈소판 부착 및 혈전 형성을 수반하는 질환 또는 장애를 포함하며, 혈전의 형성에 대한 증가된 성향, 예를 들어 증가된 수의 혈전, 이른 연령에서의 혈전증, 혈전증에 대한 가족성 경향, 및 비통상적 부위에서의 혈전증으로서 나타날 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 조합 약물 요법은 혈액 응고 장애 또는 이들 상태와 연관된 속발성 상태의 치료 또는 예방을 위한 약물 또는 화합물을 포함할 수 있다. 따라서, 조합 약물 요법은 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 1종 이상의 시르투인-조정 화합물 및 1종 이상의 항응고제 또는 항혈전제를 포함할 수 있다.
체중 제어
또 다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 대상체에서 체중 증가 또는 비만을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은, 예를 들어 유전성 비만, 식이성 비만, 호르몬 관련 비만, 의약의 투여와 관련된 비만을 치료 또는 예방하거나, 대상체의 체중을 감소시키거나, 또는 대상체에서의 체중 증가를 감소 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 이러한 치료를 필요로 하는 대상체는 비만이거나, 비만이 될 가능성이 있거나, 과체중이거나, 또는 과체중이 될 가능성이 있는 대상체일 수 있다. 비만 또는 과체중이 될 가능성이 있는 대상체는, 예를 들어 가족력, 유전, 식이, 활동 수준, 의약 섭취, 또는 그의 다양한 조합을 기준으로 하여 확인될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 대상체에서 체중 감소를 촉진함으로써 치료 또는 예방될 수 있는 다양한 다른 질환 및 상태를 앓고 있는 대상체에게 투여될 수 있다. 이러한 질환은, 예를 들어 높은 혈압, 고혈압, 높은 혈액 콜레스테롤, 이상지혈증, 제2형 당뇨병, 인슐린 저항성, 글루코스 불내성, 고인슐린혈증, 관상동맥 심장 질환, 협심증, 울혈성 심부전, 졸중, 담석, 담낭염 및 담석증, 통풍, 골관절염, 폐쇄성 수면 무호흡 및 호흡기 문제, 일부 유형의 암 (예컨대 자궁내막암, 유방암, 전립선암 및 결장암), 임신 합병증, 불량한 여성 생식 건강 (예컨대 월경 불순, 불임, 불규칙 배란), 방광 제어 문제 (예컨대 복압성 요실금); 요산 신석증; 심리 장애 (예컨대 우울증, 섭식 장애, 왜곡된 신체상 및 낮은 자존감)를 포함한다. 최종적으로, AIDS를 갖는 환자에서는 AIDS에 대한 조합 요법에 반응하여 지방이영양증 또는 인슐린 저항성이 발생할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 시험관내이든지 또는 생체내이든지 간에 지방생성 또는 지방 세포 분화를 억제하는데 사용될 수 있다. 이러한 방법은 비만을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다.
다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 식욕을 감소시키고/거나 포만감을 증가시켜 체중 감소 또는 체중 증가의 회피를 유발하는데 사용될 수 있다. 이러한 치료를 필요로 하는 대상체는 과체중 또는 비만인 대상체, 또는 과체중 또는 비만이 될 가능성이 있는 대상체일 수 있다. 방법은 대상체에게 용량을, 예를 들어 환제 형태로 매일, 또는 격일, 또는 1주 1회 투여하는 것을 포함할 수 있다. 용량은 "식욕 감소 용량"일 수 있다.
예시적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 체중 증가 또는 비만을 치료 또는 예방하기 위한 조합 요법으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 1종 이상의 시르투인-조정 화합물은 1종 이상의 항비만제와 조합되어 투여될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 약물-유발 체중 증가를 감소시키기 위해 투여될 수 있다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 식욕을 자극하거나, 또는 체중 증가, 특히 수분 저류 이외의 요인으로 인한 체중 증가를 유발할 수 있는 의약과의 조합 요법으로서 투여될 수 있다.
대사 장애/당뇨병
또 다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 대사 장애, 예컨대 인슐린-저항성, 당뇨병전기 상태, 제II형 당뇨병, 및/또는 그의 합병증을 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물의 투여는 대상체에서 인슐린 감수성을 증가시키고/거나 인슐린 수준을 감소시킬 수 있다. 이러한 치료를 필요로 하는 대상체는 인슐린 저항성 또는 제II형 당뇨병의 다른 전구 증상을 갖거나, 제II형 당뇨병을 갖거나, 또는 이들 상태 중 임의의 것이 발생할 가능성이 있는 대상체일 수 있다. 예를 들어, 대상체는 인슐린 저항성을 가지며, 예를 들어 높은 순환 수준의 인슐린 및/또는 연관 상태, 예컨대 고지혈증, 이상지방형성증, 고콜레스테롤혈증, 글루코스 내성 장애, 높은 혈액 글루코스 당 수준, 증후군 X의 다른 징후, 고혈압, 아테롬성동맥경화증 및 지방이영양증을 갖는 대상체일 수 있다.
예시적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 대사 장애를 치료 또는 예방하기 위한 조합 요법으로서 투여될 수 있다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 1종 이상의 시르투인-조정 화합물은 1종 이상의 항당뇨병제와 조합되어 투여될 수 있다.
염증성 질환
다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 염증과 연관된 질환 또는 장애를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 염증의 발병 전에, 염증의 개시 시에, 또는 그 후에 투여될 수 있다. 예방적으로 사용되는 경우에, 화합물은 바람직하게는 임의의 염증 반응 또는 증상에 선행하도록 제공된다. 화합물의 투여는 염증 반응 또는 증상을 예방 또는 감쇠시킬 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 천식, 기관지염, 폐 섬유증, 알레르기성 비염, 산소 독성, 기종, 만성 기관지염, 급성 호흡 곤란 증후군, 및 임의의 만성 폐쇄성 폐 질환 (COPD)을 포함한 알레르기 및 호흡기 상태를 치료 또는 예방하는데 사용될 수 있다. 화합물은 B형 간염 및 C형 간염을 포함한 만성 간염 감염을 치료하는데 사용될 수 있다.
추가로, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 자가면역 질환, 및/또는 자가면역 질환과 연관된 염증, 예컨대 류마티스 관절염, 건선성 관절염 및 강직성 척추염을 포함한 관절염, 뿐만 아니라 기관-조직 자가면역 질환 (예를 들어, 레이노 증후군), 궤양성 결장염, 크론병, 구강 점막염, 경피증, 중증 근무력증, 이식 거부, 내독소 쇼크, 패혈증, 건선, 습진, 피부염, 다발성 경화증, 자가면역 갑상선염, 포도막염, 전신 홍반성 루푸스, 애디슨병, 자가면역 다선성 질환 (자가면역 다선성 증후군으로도 공지됨), 및 그레이브스병을 치료하는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 1종 이상의 시르투인-조정 화합물은 단독으로 또는 염증을 치료 또는 예방하기에 유용한 다른 화합물과 조합되어 취해질 수 있다.
홍조
또 다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 장애의 증상인 홍조 및/또는 안면 홍조의 발생률 또는 중증도를 감소시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 본 발명의 방법은 암 환자에서 홍조 및/또는 안면 홍조의 발생률 또는 중증도를 감소시키기 위해, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물을 단독으로 또는 다른 작용제와 조합하여 사용하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 방법은 폐경기 및 폐경후 여성에서 홍조 및/또는 안면 홍조의 발생률 또는 중증도를 감소시키기 위한, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물의 용도를 제공한다.
또 다른 측면에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또 다른 약물 요법의 부작용인 홍조 및/또는 안면 홍조, 예를 들어 약물-유발 홍조의 발생률 또는 중증도를 감소시키기 위한 요법으로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 약물-유발 홍조를 치료 및/또는 예방하는 방법은 그를 필요로 하는 환자에게 적어도 1종의 홍조 유발 화합물, 및 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 적어도 1종의 시르투인-조정 화합물을 포함하는 제제를 투여하는 것을 포함한다. 다른 실시양태에서, 약물 유발 홍조를 치료하는 방법은 홍조를 유발하는 1종 이상의 화합물 및 1종 이상의 시르투인-조정 화합물을 개별적으로 투여하는 것을 포함하며, 예를 들어 여기서 시르투인-조정 화합물 및 홍조 유발제는 동일한 조성물로 제제화된 것은 아니다. 개별 제제를 사용하는 경우에, 시르투인-조정 화합물은 (1) 홍조 유발제의 투여와 동시에, (2) 홍조 유발제와 간헐적으로, (3) 홍조 유발제의 투여에 대해 시차를 두고, (4) 홍조 유발제의 투여 전에, (5) 홍조 유발제의 투여 후에, 및 (6) 그의 다양한 조합으로 투여될 수 있다. 예시적인 홍조 유발제는, 예를 들어 니아신, 랄록시펜, 항우울제, 항정신병제, 화학요법제, 칼슘 채널 차단제, 및 항생제를 포함한다.
특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 혈관확장제 또는 항고지혈증제 (항콜레스테롤혈증제 및 친지방제 포함)의 홍조 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다. 예시적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 니아신의 투여와 연관된 홍조를 감소시키는데 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 감소된 홍조 부작용을 갖는 고지혈증을 치료 및/또는 예방하는 방법을 제공한다. 또 다른 대표적 실시양태에서, 방법은 랄록시펜의 홍조 부작용을 감소시키기 위한, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물의 용도를 수반한다. 또 다른 대표적 실시양태에서, 방법은 항우울제 또는 항정신병제의 홍조 부작용을 감소시키기 위한, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물의 용도를 수반한다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 세로토닌 재흡수 억제제 또는 5HT2 수용체 길항제와 함께 사용 (개별적으로 또는 함께 투여)될 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 홍조를 감소시키기 위해 세로토닌 재흡수 억제제 (SRI)로의 치료의 일부로서 사용될 수 있다. 또 다른 대표적 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 화학요법제, 예컨대 시클로포스파미드 및 타목시펜의 홍조 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 칼슘 채널 차단제, 예컨대 암로디핀의 홍조 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 항생제의 홍조 부작용을 감소시키는데 사용될 수 있다. 예를 들어, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 레보플록사신과 조합되어 사용될 수 있다.
안구 장애
본 발명의 한 측면은 환자에게 치료 투여량의 본원에 개시된 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 전구약물 또는 대사 유도체로부터 선택된 시르투인 조정제를 투여함으로써, 시각 장애를 억제, 감소 또는 달리 치료하는 방법이다.
본 발명의 특정 측면에서, 시각 장애는 시신경 또는 중추 신경계에 대한 손상에 의해 유발된다. 특정한 실시양태에서, 시신경 손상은 높은 안내압, 예컨대 녹내장에 의해 생성된 것에 의해 유발된다. 다른 특정한 실시양태에서, 시신경 손상은 시신경염에서와 같이 종종 감염 또는 면역 (예를 들어, 자가면역) 반응과 연관된 신경의 팽윤에 의해 유발된다.
본 발명의 특정 측면에서, 시각 장애는 망막 손상에 의해 유발된다. 특정한 실시양태에서, 망막 손상은 눈으로의 혈류에서의 장애 (예를 들어, 동맥경화증, 혈관염)에 의해 유발된다. 특정한 실시양태에서, 망막 손상은 황반의 파괴 (예를 들어, 삼출성 또는 비-삼출성 황반 변성)에 의해 유발된다.
예시적인 망막 질환은 삼출성 연령 관련 황반 변성, 비삼출성 연령 관련 황반 변성, 망막 전자 인공삽입물 및 RPE 이식 연령 관련 황반 변성, 급성 다초점성 판상 색소 상피병증, 급성 망막 괴사, 베스트병, 분지 망막 동맥 폐쇄, 분지 망막 정맥 폐쇄, 암 연관 및 관련 자가면역 망막병증, 중심 망막 동맥 폐쇄, 중심 망막 정맥 폐쇄, 중심 장액성 맥락망막병증, 일스병, 황반전막, 격자 변성, 대혈관류, 당뇨병성 황반 부종, 어바인-가스 황반 부종, 황반 원공, 망막하 신생혈관막, 미만성 단안 아급성 시신경망막염, 비인공수정체성 낭포양 황반 부종, 추정 안구 히스토플라스마 증후군, 삼출성 망막 박리, 수술후 망막 박리, 증식성 망막 박리, 열공성 망막 박리, 견인성 망막 박리, 색소성 망막염, CMV 망막염, 망막모세포종, 미숙아 망막병증, 산탄 망막병증, 배경 당뇨병성 망막병증, 증식성 당뇨병성 망막병증, 혈색소병증성 망막병증, 푸르처 망막병증, 발살바 망막병증, 소아 망막층간분리, 노인성 망막층간분리, 터슨 증후군 및 백반 증후군을 포함한다.
다른 예시적인 질환은 안구 박테리아 감염 (예를 들어, 결막염, 각막염, 결핵, 매독, 임질), 바이러스 감염 (예를 들어, 안구 단순 포진 바이러스, 수두 대상포진 바이러스, 시토메갈로바이러스 망막염, 인간 면역결핍 바이러스 (HIV)) 뿐만 아니라 HIV 또는 다른 HIV-연관 및 다른 면역결핍-연관 안구 질환에 대해 속발성인 진행성 외부 망막 괴사를 포함한다. 추가로, 안구 질환은 진균 감염 (예를 들어, 칸디다 맥락막염, 히스토플라스마증), 원충 감염 (예를 들어, 톡소플라스마증) 및 다른 것 예컨대 안구 톡소카라증 및 사르코이드증을 포함한다.
본 발명의 한 측면은 시각 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 투여량의 본원에 개시된 시르투인 조정제를 투여함으로써, 화학요법 약물 (예를 들어, 신경독성 약물, 또는 안내압을 상승시키는 약물, 예컨대 스테로이드)로의 치료를 겪는 대상체에서 시각 장애를 억제, 감소 또는 치료하는 방법이다.
본 발명의 또 다른 측면은 시각 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 투여량의 본원에 개시된 시르투인 조정제를 투여함으로써, 안구 수술 또는 복와위에서 수행되는 다른 수술, 예컨대 척수 수술을 포함한 수술을 겪는 대상체에서 시각 장애를 억제, 감소 또는 치료하는 방법이다. 안구 수술은 백내장, 홍채절개 및 수정체 대체를 포함한다.
본 발명의 또 다른 측면은 백내장, 안구 건조, 연령-관련 황반 변성 (AMD), 망막 손상 등을 포함한 연령 관련 안구 질환의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 투여량의 본원에 개시된 시르투인 조정제를 투여하는 것에 의한 상기 질환의 억제 및 예방적 치료를 포함한 치료이다.
본 발명의 또 다른 측면은 스트레스, 화학적 손상 또는 방사선에 의해 유발된 눈에 대한 손상의 치료를 필요로 하는 대상체에게 치료 투여량의 본원에 개시된 시르투인 조정제를 투여함으로써, 상기 손상의 예방 또는 치료이다. 눈에 대한 방사선 또는 전자기 손상은 CRT, 또는 태양광 또는 UV에 대한 노출에 의해 유발된 것을 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 조합 약물 요법은 안구 장애 또는 이들 상태와 연관된 속발성 상태의 치료 또는 예방을 위한 약물 또는 화합물을 포함할 수 있다. 따라서, 조합 약물 요법은 1종 이상의 시르투인 활성화제, 및 안구 장애의 치료를 위한 1종 이상의 치료제를 포함할 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인 조정제는 안내압을 감소시키기 위한 요법과 함께 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 조정제는 녹내장을 치료 및/또는 예방하기 위한 요법과 함께 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 조정제는 시신경염을 치료 및/또는 예방하기 위한 요법과 함께 투여될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시르투인 조정제는 CMV 망막병증을 치료 및/또는 예방하기 위한 요법과 함께 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 조정제는 다발성 경화증을 치료 및/또는 예방하기 위한 요법과 함께 투여될 수 있다.
미토콘드리아-연관 질환 및 장애
특정 실시양태에서, 본 발명은 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 방법은 치료 유효량의 시르투인-조정 화합물을 그를 필요로 하는 대상체에게 투여하는 것을 수반한다. 증가된 미토콘드리아 활성은 미토콘드리아의 전체 수 (예를 들어, 미토콘드리아 질량)를 유지하면서 미토콘드리아 활성을 증가시키는 것, 미토콘드리아의 수를 증가시켜 미토콘드리아 활성을 증가시키는 것 (예를 들어, 미토콘드리아 생물발생을 자극함으로써), 또는 그의 조합을 지칭한다. 특정 실시양태에서, 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 및 장애는 미토콘드리아 기능장애와 연관된 질환 또는 장애를 포함한다.
특정 실시양태에서, 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 치료하는 방법은 미토콘드리아 기능장애를 앓고 있는 대상체를 확인하는 것을 포함할 수 있다. 미토콘드리아 기능장애를 진단하는 방법은 분자 유전학적, 병리학적 및/또는 생화학적 분석을 수반할 수 있다. 미토콘드리아 기능장애와 연관된 질환 및 장애는 미토콘드리아 호흡 사슬 활성의 결핍이 포유동물에서의 이러한 질환 또는 장애의 병리생리상태의 발생에 기여하는 질환 및 장애를 포함한다. 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애는 일반적으로, 예를 들어 자유 라디칼 매개 산화성 상해가 조직 변성으로 이어지는 질환, 세포가 부적절하게 아폽토시스를 겪는 질환, 및 세포가 아폽토시스를 겪는데 실패하는 질환을 포함한다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 1종 이상의 시르투인-조정 화합물을 또 다른 치료제, 예컨대 예를 들어 미토콘드리아 기능장애를 치료하기에 유용한 작용제 또는 미토콘드리아 기능장애를 수반하는 질환 또는 장애와 연관된 증상을 감소시키기에 유용한 작용제와 조합하여 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다.
예시적 실시양태에서, 본 발명은 대상체에게 치료 유효량의 시르투인-조정 화합물을 투여함으로써, 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 치료하는 방법을 제공한다. 예시적인 질환 또는 장애는, 예를 들어 신경근육 장애 (예를 들어, 프리드라이히 운동실조, 근육 이영양증, 다발성 경화증 등), 뉴런 불안정성 장애 (예를 들어, 발작 장애, 편두통 등), 발달 지체, 신경변성 장애 (예를 들어, 알츠하이머병, 파킨슨병, 근위축성 측삭 경화증 등), 허혈, 신세관성 산증, 연령-관련 신경변성 및 인지 저하, 화학요법 피로, 연령-관련 또는 화학요법-유발 폐경기, 또는 월경 주기 또는 배란의 불순, 미토콘드리아 근병증, 미토콘드리아 손상 (예를 들어, 칼슘 축적, 흥분독성, 산화질소 노출, 저산소증 등), 및 미토콘드리아 탈조절을 포함한다.
근육 이영양증은 종종 골격근의 위축 및 심근 기능장애, 예컨대 뒤시엔느 근육 이영양증을 일으키는, 신경근육 구조 및 기능의 열화를 수반하는 질환의 패밀리를 지칭한다. 특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 근육 이영양증을 갖는 환자에서 근육 기능 능력의 저하 속도를 감소시키고, 근육 기능 상태를 개선시키는데 사용될 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 미토콘드리아 근병증 치료에 유용할 수 있다. 미토콘드리아 근병증은 경증의 천천히 진행되는 외안근의 약화로부터 중증의 치명적 영아 근병증 및 다계통 뇌근병증까지 이른다. 일부 증후군이 정의된 바 있으며, 일부는 그들 사이에서 중복되어 있다. 근육에 이환되는 확립된 증후군은 진행성 외안근마비, 컨스-세이어 증후군 (안근마비, 색소성 망막병증, 심장 전도 결손, 소뇌 운동실조, 및 감각신경성 난청 동반), MELAS 증후군 (미토콘드리아 뇌근병증, 락트산 산증, 및 졸중-유사 에피소드), MERFF 증후군 (근대간성 간질 및 불균일 적색 근섬유), 지대 분포 약화, 및 영아 근병증 (양성 또는 중증 및 치명적)을 포함한다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 미토콘드리아에 대한 독성 손상, 예컨대 칼슘 축적, 흥분독성, 산화질소 노출, 약물 유발 독성 손상 또는 저산소증으로 인한 독성 손상을 앓고 있는 환자를 치료하기에 유용할 수 있다.
특정 실시양태에서, 시르투인-조정 화합물은 미토콘드리아 탈조절과 연관된 질환 또는 장애를 치료하기에 유용할 수 있다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 노화 또는 스트레스와 관련된 다른 질환 또는 장애, 당뇨병 및 다른 대사 기능장애, 및 지방간, 간 지방간염 및 비만을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 관련 상태의 치료에 사용될 수 있다. 본 발명은 또한 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암, 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 장미증, 염증성 장 질환, 골다공증, 패혈증, 관절염, COPD, 전신 홍반성 루푸스 및 안부 염증을 포함하나, 이에 제한되지는 않는 염증성 질환 뿐만 아니라 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 다른 질환 또는 장애의 치료에 사용될 수 있다.
근육 수행능
다른 실시양태에서, 본 발명은 치료 유효량의 시르투인-조정 화합물을 투여함으로써, 근육 수행능을 증진시키는 방법을 제공한다. 예를 들어, 시르투인-조정 화합물은 신체 지구력 (예를 들어, 신체적 과제, 예컨대 운동, 육체 노동, 스포츠 활동 등을 수행하는 능력)을 개선시키고/거나, 신체적 피로를 억제 또는 지연시키고/거나, 혈액 산소 수준을 증진시키고/거나, 건강한 개체에서 에너지를 증진시키고/거나, 작업 용량 및 지구력을 증진시키고/거나, 근육 피로를 감소시키고/거나, 스트레스를 감소시키고/거나, 심장 및 심혈관 기능을 증진시키고/거나, 성적 능력을 개선시키고/거나, 근육 ATP 수준을 증가시키고/거나, 혈액 중 락트산을 감소시키기에 유용할 수 있다. 특정 실시양태에서, 방법은 미토콘드리아 활성을 증가시키고/거나, 미토콘드리아 생물발생을 증가시키고/거나, 미토콘드리아 질량을 증가시키는 양의 시르투인-조정 화합물을 투여하는 것을 수반한다.
스포츠 수행능은 스포츠 활동에 참여하는 경우에 운동선수의 근육이 수행하는 능력을 지칭한다. 증진된 스포츠 수행능, 강도, 속도 및 지구력은 근육 수축 강도의 증가, 근육 수축 폭의 증가, 자극과 수축 사이의 근육 반응 시간의 단축에 의해 측정된다. 운동선수는 임의의 수준의 스포츠에 참여하며 그의 수행능에 있어서 개선된 수준의 강도, 속도 및 지구력을 달성하는 것을 추구하는 개체, 예컨대 예를 들어 보디 빌더, 사이클선수, 장거리 달리기 선수, 단거리 달리기 선수 등을 지칭한다. 증진된 스포츠 수행능은 근육 피로를 극복하는 능력, 더 장기간 동안 활동을 유지하는 능력, 및 더 효과적인 활동을 하는 것에 의해 나타난다.
운동선수 근육 수행능의 장에서, 장기간 동안 더 높은 수준의 저항성으로 경쟁 또는 훈련을 허용하는 상태를 생성하는 것이 바람직하다.
본 발명의 방법은 급성 근육감소증, 예를 들어 화상, 침상 안정, 사지 고정화, 또는 주요 흉부, 복부 및/또는 정형외과 수술과 연관된 근육 위축 및/또는 악액질을 포함한 근육 관련 병리학적 상태의 치료에 또한 효과적일 것으로 고려된다.
특정 실시양태에서, 본 발명은 시르투인 조정제를 포함하는 신규 식이성 조성물, 그의 제조 방법, 및 스포츠 수행능의 개선을 위한 상기 조성물의 사용 방법을 제공한다. 따라서, 지구력을 필요로 하는 스포츠 및 반복적인 근육 운동을 필요로 하는 노동을 포함한 광범위하게 정의된 활동에 관련된 이들 사람들을 위해, 신체 지구력을 개선시키고/거나 신체 피로를 억제하는 작용을 갖는 치료 조성물, 식품 및 음료가 제공된다. 이러한 식이성 조성물은 전해질, 카페인, 비타민, 탄수화물 등을 추가로 포함할 수 있다.
다른 용도
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 바이러스 감염 (예컨대 인플루엔자, 포진 또는 유두종 바이러스에 의한 감염)을 치료 또는 예방하는데 사용되거나 또는 항진균제로서 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 바이러스성 질환의 치료를 위한 또 다른 치료제와의 조합 약물 요법의 일부로서 투여될 수 있다. 또 다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또 다른 항진균제와의 조합 약물 요법의 일부로서 투여될 수 있다.
본원에 기재된 바와 같이 치료될 수 있는 대상체는 진핵생물, 예컨대 포유동물, 예를 들어 인간, 양, 소, 말, 돼지, 개, 고양이, 비-인간 영장류, 마우스 및 래트를 포함한다. 치료될 수 있는 세포는, 예를 들어 상기 기재된 대상체로부터의 진핵 세포, 또는 식물 세포, 효모 세포, 및 원핵 세포, 예를 들어 박테리아 세포를 포함한다. 예를 들어, 조정 화합물은 사육 조건을 더 장기간 견디는 능력을 개선시키기 위해 사육 동물에게 투여될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 또한 식물에서 수명, 스트레스 저항성 및 아폽토시스에 대한 저항성을 증가시키는데 사용될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화합물은, 예를 들어 주기적 방식으로 식물에, 또는 진균에 적용된다. 또 다른 실시양태에서, 식물은 화합물을 생산하도록 유전자 변형된다. 또 다른 실시양태에서, 식물 및 과일은 선박운송 동안의 손상에 대한 저항성을 증가시키기 위해 수확 및 선박운송 전에 화합물로 처리된다. 식물 종자는 또한, 예를 들어 이들을 보존하기 위해 본원에 기재된 화합물과 접촉될 수 있다.
다른 실시양태에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 효모 세포에서 수명을 조정하는데 사용될 수 있다. 효모 세포의 수명을 연장시키는 것이 바람직할 수 있는 상황은, 효모가 사용되는 임의의 과정, 예들 들어 맥주, 요구르트, 및 제빵 물품, 예를 들어 빵의 제조를 포함한다. 연장된 수명을 갖는 효모의 사용은 더 적은 효모를 사용하는 것 또는 효모가 더 장기간 동안 활성을 갖도록 하는 것을 유발할 수 있다. 효모 또는 단백질을 재조합 생산하는데 사용되는 다른 포유동물 세포는 또한 본원에 기재된 바와 같이 처리될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 곤충에서 수명, 스트레스 저항성 및 아폽토시스에 대한 저항성을 증가시키는데 사용될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 화합물은 유용한 곤충, 예를 들어 벌 및 식물의 수분에 수반되는 다른 곤충에 적용될 것이다. 구체적 실시양태에서, 화합물은 꿀의 생산에 수반되는 벌에 적용될 것이다. 일반적으로, 본원에 기재된 방법은 상업적 중요성을 가질 수 있는 모든 유기체, 예를 들어 진핵생물에 적용될 수 있다. 예를 들어, 이들은 어류 (수산양식) 및 조류 (예를 들어, 닭 및 가금류)에 적용될 수 있다.
시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물의 더 높은 용량이 또한 발생 동안 침묵화된 유전자의 조절 및 아폽토시스의 조절을 방해함으로써 살충제로서 사용될 수 있다. 이러한 실시양태에서, 화합물은, 화합물이 곤충 유충에 대해서는 생체-이용가능하고 식물에 대해서는 그렇지 않은 것을 보장하는 관련 기술분야에 공지된 방법을 사용하여 식물에 적용될 수 있다.
적어도 생식과 장수명 사이의 연관성의 관점에서, 시르투인 단백질의 수준 및/또는 활성을 증가시키는 시르투인-조정 화합물은 유기체, 예컨대 곤충, 동물 및 미생물의 생식에 영향을 미치기 위해 적용될 수 있다.
4. 검정
본원에서 고려되는 또 다른 방법은 시르투인을 조정하는 화합물 또는 작용제를 확인하기 위한 스크리닝 방법을 포함한다. 작용제는 핵산, 예컨대 압타머일 수 있다. 검정은 세포 기반 또는 무세포 포맷으로 수행될 수 있다. 예를 들어, 검정은 시르투인을 조정하는 것으로 공지된 작용제에 의해 시르투인이 조정될 수 있는 조건 하에 시르투인을 시험 작용제와 함께 인큐베이션 (또는 접촉)하고, 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 시르투인의 조정 수준을 모니터링 또는 결정하는 것을 포함할 수 있다. 시르투인의 조정 수준은 기질을 탈아세틸화시키는 것에 대한 그의 능력을 결정함으로써 결정될 수 있다. 예시적인 기질은 바이오몰 (펜실베니아주 플리머스 미팅)에서 입수될 수 있는 아세틸화 펩티드이다. 바람직한 기질은 p53의 펩티드, 예컨대 아세틸화 K382를 포함하는 것들을 포함한다. 특히 바람직한 기질은 플루오르 드 Lys-SIRT1 (바이오몰), 즉 아세틸화 펩티드 Arg-His-Lys-Lys이다. 다른 기질은 인간 히스톤 H3 및 H4로부터의 펩티드 또는 아세틸화 아미노산이다. 기질은 형광원성일 수 있다. 시르투인은 SIRT1, Sir2, SIRT3, 또는 그의 부분일 수 있다. 예를 들어, 재조합 SIRT1은 바이오몰로부터 입수될 수 있다. 반응은 약 30분 동안 수행되고, 예를 들어 니코틴아미드를 사용하여 중지될 수 있다. HDAC 형광 활성 검정/약물 발견 키트 (AK-500, 바이오몰 리서치 래보러토리즈)가 아세틸화의 수준을 결정하는데 사용될 수 있다. 유사한 검정은 문헌 [Bitterman et al. (2002) J. Biol. Chem. 277:45099]에 기재되어 있다. 검정에서의 시르투인의 조정 수준은 양성 또는 음성 대조군으로서 기능할 수 있는 본원에 기재된 1종 이상의 (개별적으로 또는 동시에) 화합물의 존재 하의 시르투인의 조정 수준과 비교될 수 있다. 검정에 사용하기 위한 시르투인은 전장 시르투인 단백질 또는 그의 부분일 수 있다. 활성화 화합물이 SIRT1의 N-말단과 상호작용하는 것으로 보인다는 것은 본원에 제시된 바 있기 때문에, 검정에 사용하기 위한 단백질은 시르투인의 N-말단 부분, 예를 들어 SIRT1의 대략 아미노산 1-176 또는 1-255; Sir2의 대략 아미노산 1-174 또는 1-252를 포함한다.
특정 실시양태에서, 스크리닝 검정은 (i) 시험 작용제의 부재 하에 시르투인이 기질을 탈아세틸화시키기에 적절한 조건 하에 시르투인을 시험 작용제 및 아세틸화된 기질과 접촉시키고; (ii) 기질의 아세틸화 수준을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 더 낮은 수준의 기질의 아세틸화는 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 자극한다는 것을 나타내는 반면에, 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 더 높은 수준의 기질의 아세틸화는 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 억제한다는 것을 나타낸다.
또 다른 실시양태에서, 스크리닝 검정은 시르투인-매개 NAD-의존성 탈아세틸화의 2'/3'-O-아세틸-ADP-리보스 산물의 형성을 검출할 수 있다. 이러한 O-아세틸-ADP-리보스 산물은 시르투인 탈아세틸화 반응의 탈아세틸화 펩티드 산물과 등몰량으로 형성된다. 따라서, 스크리닝 검정은 (i) 시험 작용제의 부재 하에 시르투인이 기질을 탈아세틸화시키기에 적절한 조건 하에 시르투인을 시험 작용제 및 아세틸화된 기질과 접촉시키고; (ii) O-아세틸-ADP-리보스 형성의 양을 결정하는 것을 포함하며, 여기서 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 O-아세틸-ADP-리보스 형성에서의 증가는 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 자극한다는 것을 나타내는 반면에, 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 O-아세틸-ADP-리보스 형성에서의 감소는 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 억제한다는 것을 나타낸다.
생체내 시르투인을 조정, 예를 들어 자극하는 작용제를 확인하는 방법은 (i) 시험 작용제의 부재 하에 시르투인이 기질을 탈아세틸화시키기에 적절한 조건 하에 클래스 I 및 클래스 II HDAC 억제제의 존재 하에 세포를 시험 작용제 및 세포에 진입할 수 있는 기질과 접촉시키고; (ii) 기질의 아세틸화 수준을 결정하는 것을 포함할 수 있으며, 여기서 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 기질의 아세틸화의 더 낮은 수준은 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 자극한다는 것을 나타내는 반면에, 시험 작용제의 부재에 비해 시험 작용제의 존재 하의 기질의 아세틸화의 더 높은 수준은 시험 작용제가 시르투인에 의한 탈아세틸화를 억제한다는 것을 나타낸다. 바람직한 기질은 아세틸화 펩티드이며, 이는 또한 바람직하게는 본원에 추가로 기재된 바와 같이 형광원성이다. 방법은 세포를 용해시켜 기질의 아세틸화 수준을 결정하는 것을 추가로 포함할 수 있다. 기질은 약 1μM 내지 약 10mM 범위, 바람직하게는 약 10μM 내지 1mM, 보다 더 바람직하게는 약 100μM 내지 1mM, 예컨대 약 200μM의 농도로 세포에 첨가될 수 있다. 바람직한 기질은 아세틸화 리신, 예를 들어 ε-아세틸 리신 (플루오르 드 Lys, FdL) 또는 플루오르 드 Lys-SIRT1이다. 클래스 I 및 클래스 II HDAC의 바람직한 억제제는 트리코스타틴 A (TSA)이며, 이는 약 0.01 내지 100μM 범위, 바람직하게는 약 0.1 내지 10μM, 예컨대 1μM의 농도로 사용될 수 있다. 세포와 시험 화합물 및 기질과의 인큐베이션은 약 10분 내지 5시간, 바람직하게는 약 1-3시간 동안 수행될 수 있다. TSA는 모든 클래스 I 및 클래스 II HDAC를 억제하고, 그 특정 기질, 예를 들어 플루오르 드 Lys는 SIRT2에 대해 불량한 기질이고 SIRT3-7에 대해서는 보다 더 불량한 기질이기 때문에, 이러한 검정은 생체내 SIRT1의 조정제를 확인하는데 사용될 수 있다.
5. 제약 조성물
본원에 기재된 화합물은 1종 이상의 생리학상 또는 제약상 허용되는 담체 또는 부형제를 사용하여 통상적인 방식으로 제제화될 수 있다. 예를 들어, 화합물 및 그의 제약상 허용되는 염 및 용매화물은, 예를 들어 주사 (예를 들어, SubQ, IM, IP), 흡입 또는 취입 (구강 또는 코를 통함)에 의한 투여, 또는 경구, 협측, 설하, 경피, 비강, 비경구 또는 직장 투여를 위해 제제화될 수 있다. 특정 실시양태에서, 화합물은 표적 세포가 존재하는 부위, 즉 특정한 조직, 기관 또는 체액 (예를 들어, 혈액, 뇌척수액 등)에 국부로 투여될 수 있다.
화합물은 전신 및 국소 또는 국부 투여를 포함한 다양한 투여 방식을 위해 제제화될 수 있다. 기술 및 제제는 일반적으로 문헌 [Remington's Pharmaceutical Sciences, Meade Publishing Co., Easton, PA]에서 찾아볼 수 있다. 비경구 투여를 위해, 근육내, 정맥내, 복강내 및 피하를 포함한 주사가 바람직하다. 주사를 위해, 화합물은 바람직하게는 생리학상 상용성인 완충제 예컨대 행크 용액 또는 링거액 중 액체 용액으로 제제화될 수 있다. 추가로, 화합물은 고체 형태로 제제화되고, 사용 직전에 재용해 또는 현탁될 수 있다. 동결건조 형태가 또한 포함된다.
경구 투여를 위해, 제약 조성물은, 예를 들어 제약상 허용되는 부형제 예컨대 결합제 (예를 들어, 예비젤라틴화 옥수수 전분, 폴리비닐피롤리돈 또는 히드록시프로필 메틸셀룰로스); 충전제 (예를 들어, 락토스, 미세결정질 셀룰로스 또는 인산수소칼슘); 윤활제 (예를 들어, 스테아르산마그네슘, 활석 또는 실리카); 붕해제 (예를 들어, 감자 전분 또는 소듐 스타치 글리콜레이트); 또는 습윤제 (예를 들어, 소듐 라우릴 술페이트)를 사용하여 통상적인 수단에 의해 제조된 정제, 로젠지 또는 캡슐의 형태를 취할 수 있다. 정제는 관련 기술분야에 널리 공지된 방법에 의해 코팅될 수 있다. 경구 투여를 위한 액체 제제는, 예를 들어 용액, 시럽 또는 현탁액의 형태를 취할 수 있거나, 또는 이들은 사용 전에 물 또는 다른 적합한 비히클로 구성하기 위한 건조 생성물로서 제시될 수 있다. 이러한 액체 제제는 제약상 허용되는 첨가제 예컨대 현탁화제 (예를 들어, 소르비톨 시럽, 셀룰로스 유도체 또는 수소화 식용 지방); 유화제 (예를 들어, 레시틴 또는 아카시아); 비-수성 비히클 (예를 들어, 아몬드 오일, 유성 에스테르, 에틸 알콜 또는 분별 식물성 오일); 및 보존제 (예를 들어, 메틸 또는 프로필-p-히드록시벤조에이트 또는 소르브산)를 사용하여 통상적인 수단에 의해 제조될 수 있다. 제제는 적절한 경우에 완충 염, 향미제, 착색제 및 감미제를 또한 함유할 수 있다. 경구 투여를 위한 제제는 활성 화합물의 제어 방출을 제공하도록 적합하게 제제화될 수 있다.
흡입 (예를 들어, 폐 전달)에 의한 투여를 위해, 화합물은 적합한 추진제, 예를 들어 디클로로디플루오로메탄, 트리클로로플루오로메탄, 디클로로테트라플루오로에탄, 이산화탄소 또는 다른 적합한 기체의 사용과 함께, 가압 팩 또는 네뷸라이저로부터의 에어로졸 스프레이 제공물의 형태로 편리하게 전달될 수 있다. 가압 에어로졸의 경우에, 투여 단위는 계량된 양을 전달하기 위해 밸브를 제공함으로써 결정될 수 있다. 흡입기 또는 취입기에 사용하기 위한, 예를 들어 젤라틴의 캡슐 및 카트리지는 화합물의 분말 믹스 및 적합한 분말 베이스 예컨대 락토스 또는 전분을 함유하도록 제제화될 수 있다.
화합물은 주사, 예를 들어 볼루스 주사 또는 연속 주입에 의한 비경구 투여를 위해 제제화될 수 있다. 주사를 위한 제제는, 예를 들어 첨가된 보존제와 함께, 앰플 또는 다중-용량 용기 내에 단위 투여 형태로 제시될 수 있다. 조성물은 유성 또는 수성 비히클 중 현탁액, 용액 또는 에멀젼과 같은 형태를 취할 수 있으며, 제제화제 예컨대 현탁화제, 안정화제 및/또는 분산제를 함유할 수 있다. 대안적으로, 활성 성분은 사용 전에 적합한 비히클, 예를 들어 멸균 발열원-무함유 물로 구성하기 위한 분말 형태일 수 있다.
화합물은 또한, 예를 들어 통상적인 좌제 베이스 예컨대 코코아 버터 또는 다른 글리세리드를 함유하는 직장 조성물 예컨대 좌제 또는 정체 관장제로 제제화될 수 있다.
상기 기재된 제제 이외에도, 화합물은 또한 데포 제제로서 제제화될 수 있다. 이러한 장기 작용 제제는 이식에 의해 (예를 들어, 피하로 또는 근육내로), 또는 근육내 주사에 의해 투여될 수 있다. 따라서, 예를 들어 화합물은 적합한 중합체 또는 소수성 물질 (예를 들어, 허용되는 오일 중 에멀젼으로서) 또는 이온 교환 수지를 사용하여, 또는 난용성 유도체, 예를 들어 난용성 염으로서 제제화될 수 있다. 제어 방출 제제는 패치를 또한 포함한다.
특정 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 중추 신경계 (CNS)로의 전달을 위해 제제화될 수 있다 (문헌 [Begley, Pharmacology & Therapeutics 104: 29-45 (2004)]에서 검토됨). CNS로의 약물 전달을 위한 통상적인 접근법은 하기를 포함한다: 신경외과적 전략 (예를 들어, 뇌내 주사 또는 뇌실내 주입); BBB의 내인성 수송 경로 중 1개를 이용하기 위한 시도에서의 작용제의 분자 조작 (예를 들어, 내피 세포 표면 분자에 대한 친화도를 갖는 수송 펩티드를, 그 자체로는 BBB를 횡단할 수 없는 작용제와 조합하여 포함하는 키메라 융합 단백질의 생산); 작용제의 지질 용해도를 증가시키도록 설계된 약리학적 전략 (예를 들어, 지질 또는 콜레스테롤 담체에 대한 수용성 작용제의 접합); 및 고삼투압 파괴에 의한 BBB의 완전성의 일시적 파괴 (경동맥으로의 만니톨 용액의 주입, 또는 생물학적 활성제 예컨대 안지오텐신 펩티드의 사용으로부터 유발됨).
리포솜은 용이하게 주사가능한 추가의 약물 전달 시스템이다. 따라서, 본 발명의 방법에서, 활성 화합물은 또한 리포솜 전달 시스템의 형태로 투여될 수 있다. 리포솜은 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 널리 공지되어 있다. 리포솜은 다양한 인지질, 예컨대 콜레스테롤, 포스파티딜콜린의 스테아릴아민으로부터 형성될 수 있다. 본 발명의 방법에 사용가능한 리포솜은 소형 단층 소포, 대형 단층 소포 및 다층 소포를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 모든 유형의 리포솜을 포괄한다.
본원에 기재된 화합물의 제제, 특히 용액을 제조하기 위한 또 다른 방식은 시클로덱스트린의 사용을 통한 것이다. 시클로덱스트린은 α-, β-, 또는 γ-시클로덱스트린을 의미한다. 시클로덱스트린은 본원에 참조로 포함되는 피타 등의 미국 특허 번호 4,727,064에 상세하게 기재되어 있다. 시클로덱스트린은 글루코스의 시클릭 올리고머이며; 이들 화합물은 분자가 시클로덱스트린 분자의 친지성기-추구 캐비티 내로 피팅될 수 있는 임의의 약물과의 포접 복합체를 형성한다.
급속 붕해 또는 용해 투여 형태는 제약 활성제의 급속 흡수, 특히 협측 및 설하 흡수에 유용하다. 신속 용융 투여 형태는 전형적인 고체 투여 형태, 예컨대 캐플릿 및 정제를 삼키기에 어려움이 있는 환자, 예컨대 노령 및 소아과 환자에게 유익하다. 추가로, 신속 용융 투여 형태는 예를 들어 저작성 투여 형태와 연관된 결점을 회피하며, 여기서 활성제가 환자의 구강에 남아있는 시간의 길이는 미각 차폐의 양, 및 환자가 활성제의 인후 껄끄러움을 거부할 수 있는 정도를 결정함에 있어서 중요한 역할을 한다.
제약 조성물 (화장품 제제 포함)은 중량 기준으로 약 0.00001 내지 100% 예컨대 0.001 내지 10% 또는 0.1% 내지 5%의 본원에 기재된 1종 이상의 화합물을 포함할 수 있다. 다른 실시양태에서, 제약 조성물은 하기를 포함한다: (i) 0.05 내지 1000 mg의 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염, 및 (ii) 0.1 내지 2 그램의 1종 이상의 제약상 허용되는 부형제.
일부 실시양태에서, 본원에 기재된 화합물은 국소 약물 투여에 일반적으로 적합한 국소 담체를 함유하고 관련 기술분야에 공지된 임의의 이러한 물질을 포함하는 국소 제제에 혼입된다. 국소 담체는 조성물을 원하는 형태로, 예를 들어 연고, 로션, 크림, 마이크로에멀젼, 겔, 오일, 용액 등으로서 제공하도록 선택될 수 있으며, 자연 발생 또는 합성 기원의 물질로 구성될 수 있다. 선택된 담체는 활성제 또는 국소 제제의 다른 성분에 부정적인 영향을 미치지 않는 것이 바람직하다. 본원에 사용하기에 적합한 국소 담체의 예는 물, 알콜 및 다른 비독성 유기 용매, 글리세린, 미네랄 오일, 실리콘, 석유 젤리, 라놀린, 지방산, 식물성 오일, 파라벤, 왁스 등을 포함한다.
제제는 무색, 무취 연고, 로션, 크림, 마이크로에멀젼 및 겔일 수 있다.
화합물은, 전형적으로 페트롤라툼 또는 다른 석유 유도체를 기재로 하는 일반적으로 반고체 제제인 연고에 혼입될 수 있다. 관련 기술분야의 통상의 기술자에 의해 인지될 바와 같이, 사용되는 특정한 연고 베이스는 최적의 약물 전달을 제공할 것이고, 바람직하게는 다른 바람직한 특징, 예를 들어 연화성 등을 또한 제공할 것들이다. 다른 담체 또는 비히클과 같이, 연고 베이스는 불활성이고 안정하고 비자극성 및 비감작성이어야 한다.
화합물은, 일반적으로 마찰 없이 피부 표면에 적용되는 제제이며 전형적으로 활성제를 포함한 고체 입자가 물 또는 알콜 베이스 중에 존재하는 액체 또는 반액체 제제인 로션에 혼입될 수 있다. 로션은 통상적으로 고체의 현탁액이며, 수중유 형태의 액체 유성 에멀젼을 포함할 수 있다.
화합물은, 일반적으로 수중유 또는 유중수의 점성 액체 또는 반고체 에멀젼인 크림에 혼입될 수 있다. 크림 베이스는 물-세척가능하며, 오일 상, 유화제 및 수성 상을 함유한다. 오일 상은 일반적으로 페트롤라툼 및 지방 알콜 예컨대 세틸 또는 스테아릴 알콜로 구성되고; 수성 상은 반드시는 아니지만 통상적으로 부피에 있어서 오일 상을 초과하고, 일반적으로 함습제를 함유한다. 크림 제제 중 유화제는 상기 문헌 [Remington's]에 설명된 바와 같이, 일반적으로 비이온성, 음이온성, 양이온성 또는 양쪽성 계면활성제이다.
화합물은, 일반적으로 계면활성제 분자의 경계면 필름에 의해 안정화된 2종의 불혼화성 액체, 예컨대 오일 및 물의 열역학적으로 안정하고 등방성으로 투명한 분산액인 마이크로에멀젼에 혼입될 수 있다 (Encyclopedia of Pharmaceutical Technology (New York: Marcel Dekker, 1992), volume 9).
화합물은, 일반적으로 소형 무기 입자로 구성된 현탁액 (2-상 시스템) 또는 담체 액체 전반에 걸쳐 실질적으로 균일하게 분포된 대형 유기 분자 (단일 상 겔)로 이루어진 반고체 시스템인 겔 제제에 혼입될 수 있다. 겔은 통상적으로 수성의 담체 액체를 사용하지만, 알콜 및 오일이 또한 담체 액체로서 사용될 수 있다.
다른 활성제, 예를 들어 다른 항염증제, 진통제, 항미생물제, 항진균제, 항생제, 비타민, 항산화제, 및 안트라닐레이트, 벤조페논 (특히 벤조페논-3), 캄포르 유도체, 신나메이트 (예를 들어, 옥틸 메톡시신나메이트), 디벤조일 메탄 (예를 들어, 부틸 메톡시디벤조일 메탄), p-아미노벤조산 (PABA) 및 그의 유도체, 및 살리실레이트 (예를 들어, 옥틸 살리실레이트)를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 선스크린 제제에서 흔히 발견되는 선블록제가 또한 제제에 포함될 수 있다.
특정 국소 제제에서, 활성제는 제제의 대략 0.25 wt.% 내지 75 wt.% 범위, 바람직하게는 제제의 대략 0.25 wt.% 내지 30 wt.% 범위, 보다 바람직하게는 제제의 대략 0.5 wt.% 내지 15 wt.% 범위, 가장 바람직하게는 제제의 대략 1.0 wt.% 내지 10 wt.% 범위의 양으로 존재한다.
눈의 상태는, 예를 들어 화합물의 전신, 국소, 안내 주사에 의해, 또는 화합물을 방출하는 지속 방출 디바이스의 삽입에 의해 치료 또는 예방될 수 있다. 화합물이 예를 들어 전방, 후방, 유리체, 방수, 유리체액, 각막, 홍채/섬모체, 수정체, 맥락막/망막 및 공막과 같은 눈의 각막 및 내부 영역을 관통하는 것을 가능하게 하기에 충분한 시간 동안 화합물이 눈 표면과 접촉하여 유지되도록, 화합물은 제약상 허용되는 안과용 비히클 중에 전달될 수 있다. 제약상 허용되는 안과용 비히클은, 예를 들어 연고, 식물성 오일 또는 캡슐화 물질일 수 있다. 대안적으로, 본 발명의 화합물은 유리체액 및 방수에 직접 주사될 수 있다. 추가의 대안에서, 화합물은 눈의 치료를 위해 전신으로, 예컨대 정맥내 주입 또는 주사에 의해 투여될 수 있다.
본원에 기재된 화합물은 무산소 환경 하에 저장될 수 있다. 예를 들어, 조성물은 경구 투여를 위한 기밀 캡슐, 예컨대 화이자, 인크.(Pfizer, Inc.)로부터의 캡슈겔 내에 제조될 수 있다.
예를 들어 본원에 기재된 바와 같은 화합물로 생체외 처리된 세포는 대상체에게 이식편을 투여하는 방법에 따라 투여될 수 있으며, 이에는 예를 들어 면역억제 약물, 예를 들어 시클로스포린 A의 투여가 동반될 수 있다. 의약 제제에서의 일반적인 원리에 대해서는, 문헌 [Cell Therapy: Stem Cell Transplantation, Gene Therapy, and Cellular Immunotherapy, by G. Morstyn ＆ W. Sheridan eds, Cambridge University Press, 1996; 및 Hematopoietic Stem Cell Therapy, E. D. Ball, J. Lister ＆ P. Law, Churchill Livingstone, 2000]을 참조한다.
화합물의 독성 및 치료 효능은 세포 배양 또는 실험 동물에서의 표준 제약 절차에 의해 결정될 수 있다. LD50은 집단의 50%에 대해 치명적인 용량이다. ED50은 집단의 50%에서 치료상 유효한 용량이다. 독성과 치료 효과 사이의 용량 비 (LD50/ED50)는 치료 지수이다. 큰 치료 지수를 나타내는 화합물이 바람직하다. 독성 부작용을 나타내는 화합물이 사용될 수 있지만, 비감염된 세포에 대한 잠재적 손상을 최소화시키고, 그에 의해 부작용을 감소시키기 위해, 이러한 화합물을 이환 조직의 부위에 표적화하는 전달 시스템을 설계하는 것에 주의를 기울여야 한다.
세포 배양 검정 및 동물 연구로부터 수득되는 데이터는 인간에 사용하기 위한 투여량 범위를 제제화하는데 사용될 수 있다. 이러한 화합물의 투여량은 독성이 거의 또는 전혀 없으면서 ED50을 포함하는 순환 농도 범위 내일 수 있다. 투여량은 사용되는 투여 형태 및 이용되는 투여 경로에 따라 이러한 범위 내에서 달라질 수 있다. 임의의 화합물에 대해, 치료 유효 용량은 초기에 세포 배양 검정으로부터 추정될 수 있다. 용량은 세포 배양으로 결정 시에 IC50 (즉, 증상의 반수-최대 억제를 달성하는 시험 화합물의 농도)을 포함하는 순환 혈장 농도 범위를 달성하도록 동물 모델에서 제제화될 수 있다. 이러한 정보는 인간에서의 유용한 용량을 더 정확하게 결정하는데 사용될 수 있다. 혈장 중 수준은, 예를 들어 고성능 액체 크로마토그래피에 의해 측정될 수 있다.
6. 키트
키트, 예를 들어 치료 목적을 위한 키트, 또는 세포의 수명을 조정하거나 또는 아폽토시스를 조정하기 위한 키트가 또한 본원에 제공된다. 키트는 본원에 기재된 바와 같은 1종 이상의 화합물을, 예를 들어 사전측정된 용량으로 포함할 수 있다. 키트는 세포를 화합물과 접촉시키기 위한 디바이스 및 사용 지침서를 임의로 포함할 수 있다. 디바이스는 화합물을 대상체 (예를 들어, 대상체의 혈관)에 도입하거나 또는 대상체의 피부에 적용하기 위한 시린지, 스텐트 및 다른 디바이스를 포함한다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 개별 투여 형태이지만 서로 연관된 본 발명의 화합물 및 또 다른 치료제 (조합 요법 및 조합 조성물에 사용되는 동일한 것들)를 포함하는 물질의 조성물을 제공한다. 본원에 사용된 용어 "서로 연관된"은 개별 투여 형태를 동일한 요법의 일부로서 판매 및 투여되도록 의도한 것이 용이하게 명백하도록, 개별 투여 형태가 함께 포장되거나 또는 달리 서로 부착되어 있는 것을 의미한다. 화합물 및 다른 작용제는 바람직하게는 블리스터 팩 또는 다른 다중-챔버 패키지 내에, 또는 사용자에 의해 (예를 들어, 2개의 용기 사이의 절개선 위를 찢음으로써) 분리될 수 있는 연결된 개별 밀봉 용기 (예컨대 호일 파우치 등)로서 함께 포장된다.
또 다른 실시양태에서, 본 발명은 개별 용기 내에 a) 본 발명의 화합물; 및 b) 또 다른 치료제 예컨대 본 명세서의 다른 곳에 기재된 것들을 포함하는 키트를 제공한다.
본 발명의 방법의 실시는 달리 나타내지 않는 한, 관련 기술분야의 기술 내인 세포 생물학, 세포 배양, 분자 생물학, 트랜스제닉 생물학, 미생물학, 재조합 DNA 및 면역학의 통상적인 기술을 사용할 것이다. 이러한 기술은 문헌에 완전히 설명되어 있다. 예를 들어, 문헌 [Molecular Cloning A Laboratory Manual, 2nd Ed., ed. by Sambrook, Fritsch and Maniatis (Cold Spring Harbor Laboratory Press: 1989); DNA Cloning, Volumes I and II (D. N. Glover ed., 1985); Oligonucleotide Synthesis (M. J. Gait ed., 1984); Mullis et al. U.S. Patent No: 4,683,195; Nucleic Acid Hybridization (B. D Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Transcription And Translation (B. D. Hames & S. J. Higgins eds. 1984); Culture Of Animal Cells (R. I. Freshney, Alan R. Liss, Inc., 1987); Immobilized Cells And Enzymes (IRL Press, 1986); B. Perbal, A Practical Guide To Molecular Cloning (1984); the treatise, Methods In Enzymology (Academic Press, Inc., N.Y.); Gene Transfer Vectors For Mammalian Cells (J. H. Miller and M. P. Calos eds., 1987, Cold Spring Harbor Laboratory); Methods In Enzymology, Vols. 154 and 155 (Wu et al. eds.), Immunochemical Methods In Cell And Molecular Biology (Mayer and Walker, eds., Academic Press, London, 1987); Handbook Of Experimental Immunology, Volumes I-IV (D. M. Weir and C. C. Blackwell, eds., 1986); Manipulating the Mouse Embryo, (Cold Spring Harbor Laboratory Press, Cold Spring Harbor, N.Y., 1986)]을 참조한다.
실시예
이하, 본 발명은 일반적으로 기재되어 있으며, 단지 본 발명의 특정 측면 및 실시양태의 예시의 목적을 위해 포함되고 어떠한 방식으로든 본 발명을 제한하도록 의도된 것은 아닌 하기 실시예를 참조하여 더 용이하게 이해될 것이다.
사용된 기기
LCMS와 PDA:
워터스 얼라이언스2695-2996/쿼트로마이크로
애질런트-1200/SQD
정제용 LC와 UV 검출기 (정제용 HPLC):
워터스-2545/2998 PDA 및 2487 UV
시마즈 -LC-20AP/20AV-UV
길슨-333,334/115-UV
키랄 HPLC:
워터스 얼라이언스-2695/2998 &2996
SFC 정제 시스템:
타르 - SFC-80
워터스 SFC - 200
NMR (400 MHz):
배리안-400 MHz
1H NMR 도표화는 2014 ACD 랩스 소프트웨어로 작성하였다.
사용된 LCMS 방법
획득 방법 조건: RND-ABC-6-분
칼럼: 엑스브리지 BEH C18 (50mmx4.6mm, 2.5μm)
이동상: A: 물 중 5mM 중탄산암모늄 (PH-10, 암모니아 함유): ACN
시간 (분) /%ACN: 0/5, 0.5/5, 1/15, 3.3/98, 5.2/98, 5.5/5, 6.0/5
칼럼 온도: 35℃, 유량: 1.3 ml/분
MS 파라미터:
질량 범위: 100-1000
스캔 시간: 0.5초
스캔간 지연: 0.1초
실행 시간: 6.0분
획득 방법 조건: RND-FA-4.5-분
칼럼: 액퀴티 BEH C18 (50mmx2.1mm, 1.7um)
이동상: A: 물 중 0.1% FA; B: ACN 중 0.1% FA
시간 (분) /%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
칼럼 온도: 35℃, 유량: 0.6mL/분
MS 파라미터:
질량 범위: 100-1000
스캔 시간: 0.5초
스캔간 지연: 0.1초
실행 시간: 4.5분
획득 방법 조건: RND-FA-4.5-분
칼럼: 액퀴티 BEH C18 (50mmx2.1mm, 1.7um)
이동상: A: 물 중 0.1% FA; B: ACN 중 0.1% FA
시간 (분) /%B: 0/3, 0.4/3, 3.2/98, 3.8/98, 4.2/3, 4.5/3
칼럼 온도: 35℃, 유량: 0.6mL/분
MS 파라미터:
질량 범위: 100-1000
프래그멘터: 100
스텝 크기: 0.1
실행 시간: 4.5분
획득 방법 조건: RND-ABC-6.5-분
칼럼: 엑스브리지 BEH C18 (50mmx4.6mm, 2.5μm)
물 중 이동상: A: 5mM 중탄산암모늄 (PH-10, 암모니아 함유): ACN
시간 (분) /%ACN: 0/5, 0.5/5, 1/15, 3.3/98, 6.0/98, 6.1/5, 6.5/5
칼럼 온도: 35℃, 유량: 1.3 ml/분
MS 파라미터:
질량 범위: 100-1000
프래그멘터: 100
스텝 크기: 0.1
실행 시간: 6.5분
획득 방법 조건: RND-ABC-10-분
칼럼: 엑스브리지 BEH C18 (50mmx4.6mm, 2.5μm)
물 중 이동상: A: 5mM 중탄산암모늄 (PH-10, 암모니아 포함): ACN
시간 (분) /%ACN: 0/5, 0.5/5, 1.5/15, 7/98, 9.0/98, 9.5/5, 10/5
칼럼 온도: 35℃, 유량: 1.3 ml/분
MS 파라미터:
질량 범위: 100-1000
프래그멘터: 100
스텝 크기: 0.1
실행 시간: 10.0분
화학적 중간체에 대한 실험 절차
비시클릭 피리딘 코어의 합성
(S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트의 합성
온도계, 환류 응축기, 및 기계식 교반기가 구비된 2 L 플라스크에 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (100 g, 0.52 mol), (S)-아스파르트산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드 (205 g, 1.04 mol), NaHCO3 (174 g, 2.07 mol) 및 테트라히드로푸란 (1 L)을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 16시간 동안 교반하고, 2,6-디클로로피리딘의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 농축 건조시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 1 L에 녹였다. 용액을 주위 온도에서 2시간 동안 목탄 (200 g)과 함께 교반하고, 목탄을 여과하고, 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켜 조 물질 (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (180 g, >100%)를 황색 오일로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
LRMS (m/z): 318.0 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C11H13N3O6Cl, 계산치: 318.0493; 실측치, 318.0492; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 9.00 (d, J = 7.9 Hz, 1H, -NH), 8.50 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.92 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.23 (m, J = 5.7, 7.9 Hz, 1H, -CHNH), 3.67 (s, 3H), 3.63 (s, 3H), 3.06 (m, J = 5.8 Hz, 2H, -CHCH2); 13C-NMR (APT) (75 MHz, DMSO-d6): δ 170.93 (C), 170.65 (C), 154.65 (C), 150.59 (C), 138.82 (CH), 127.28 (C), 112.81 (CH), 52.23 (CH3), 51.74 (CH3), 50.20 (CH), 35.31 (CH2).
(S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트의 합성
온도계, 환류 응축기, 및 기계식 교반기가 구비된 5 L 3구 플라스크에 조 물질 (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (180 g, 0.52 mol), 철 분말 (146 g, 2.59 mol), 2-프로판올 (2 L) 및 물 (700 mL)을 채웠다. 혼합물을 40℃에서 교반한 다음, 아세트산 (15.5 g, 0.259 mmol)을 70℃ 미만의 내부 온도를 유지하기에 충분한 속도로 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 30분 동안 교반하고, HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 혼합물을 40℃로 냉각시킨 다음, Na2CO3 (165 g, 1.55 mol)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 고체를 테트라히드로푸란 (3 x 500 mL)으로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 잔류물을 에탄올 (1 L) 중에서 12시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 차가운 에탄올로 세척하고, 진공 하에 건조시켜 (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트를 회백색 고체로서 수득하였다 (91 g, 68%).
LRMS (m/z): 256.0 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C10H11N3O3Cl, 계산치: 256.0489; 실측치, 256.0487; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 10.55 (br s, 1H, -NHCO), 7.35 (br s, 1H, -NHCH), 6.92 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 6.57 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 4.43 (m, J = 1.4, 5.1 Hz, 1H, -NHCH), 3.57 (s, 3H, -CO2Me), 2.79 (m, J = 5.1, 16.4 Hz, 2H, -CHCH2); 13C-NMR (APT) (75 MHz, DMSO-d6): δ 170.32 (C), 164.96 (C), 146.13 (C), 140.32 (C), 122.41 (CH), 119.47 (C), 111.31 (CH), 51.81 (CH), 51.39 (CH3), 37.01 (CH2).
(S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올의 합성
기계식 교반기, 환류 응축기, 및 질소 유입구가 구비된 5 L 3구 플라스크에 LiAlH4 (60 g, 1.58 mol)를 채웠다. 플라스크를 빙조를 사용하여 냉각시키고, 테트라히드로푸란 (500 mL)을 첨가하였다. 교반 혼합물을 0℃로 냉각시킨 다음, 테트라히드로푸란 (2 L) 중 (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트 (81 g, 0.32 mol)의 용액을 첨가하면서, 5℃ 미만의 내부 온도를 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 16시간 동안 환류 하에 가열하면서, 생성물의 출현에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 에스테르 환원은 급속하게 발생하는 한편, 락탐 환원은 완전한 환원을 위해 더 오래 필요하였다. 반응물을 5℃로 냉각시킨 다음, 물 (60 mL)을 10℃ 미만의 내부 온도를 유지하면서 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반한 다음, 15% (w/w) NaOH(수성) (60 mL)를 5℃ 미만의 내부 온도를 유지하면서 첨가하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반한 다음, 물 (180 mL)을 첨가하고, 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 테트라히드로푸란 (3 x 150 mL)으로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 (S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올을 갈색 고체로서 수득하였다 (55 g, 81%).
LRMS (m/z): 214.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C9H13N3OCl, 계산치: 214.0747; 실측치, 214.0743; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 6.60 (br s, 1H, -NHCH(CH2)2OH), 6.58 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 5.69 (m, 1H, -NHCH2), 4.57 (t, J = 5.0 Hz, 1H, -OH), 3.56 (m, J = 5.8 Hz, 2H, -CH2OH), 3.47 (m, 1H, -NHCH(CH2)2OH), 3.22 (m, J = 2.7, 11.1 Hz, 1H, -NHCHH'), 2.84 (m, J = 1.6, 6.7, 11.1 Hz,1H, -NHCHH'), 1.65 (m, J = 6.7 Hz, 1H, -CHH'CH2OH), 1.54 (m, J = 6.3 Hz, 1H, -CHH'CH2OH); 13C-NMR (APT) (75 MHz, DMSO-d6): δ 146.75 (C), 134.44 (C), 128.20 (C), 118.97 (CH), 110.59 (CH), 57.97 (CH2), 47.47 (CH), 43.99 (CH2), 36.60 (CH2).
(4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
CH2Cl2 (500 mL) 중 (S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올 (5; 50 g, 0.234 mol)의 용액에 트리에틸아민 (95 g, 0.936 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 이것이 균질할 때까지 주위 온도에서 교반한 다음, 0℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물에 POCl3 (54 g, 0.351 mol)을 적가하면서, 0 - 5℃ 사이의 온도를 유지하였다. 냉각을 제거하고, 반응물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반하면서, 출발 알콜의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 1.2M NaHCO3(수성) (200 mL)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2 층을 1M HCl(수성) (4 x 300 mL)로 추출하고, 합한 HCl 층을 고체 NaHCO3을 사용하여 pH 8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (4 x 300 mL)로 추출하고, CH2Cl2 층의 이 세트를 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 목탄 (50 g)으로 처리하였다. 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하고, 여과하고, 목탄을 CH2Cl2 (200 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척액을 농축 건조시키고, 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 회백색 결정질 고체로서 수득하였다 (30 g, 66%).
LRMS (m/z): 196.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C9H11N3Cl, 계산치: 196.0642; 실측치, 196.0637; 1H NMR (300 MHz, DMSO-d6): δ 7.47 (br d, J = 4.5 Hz, 1H, -NH), 7.09 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.89 (m, J = 5.0 Hz, 1H, CHNH), 2.95-3.13 (m, 2H, -NCH2CH2CHNH), 2.77 (m, 2H, -NCHH'CHNH), 1.98 (m, J = 5.0 Hz, 1H, -NHCHCHH'CH2N), 1.86 (m, J = 6.9 Hz, 1H, -NHCHCHH'CH2N); 13C-NMR (APT) (75 MHz, DMSO-d6): δ 153.45 (C), 144.50 (C), 134.32 (CH), 133.19 (C), 109.73 (CH), 59.88 (CH2), 53.07 (CH2), 50.08 (CH), 38.38 (CH2).
(R)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (130 mL) 중 (R)-디메틸 2-아미노숙시네이트 히드로클로라이드 (25 g, 127 mmol)의 현탁액에 질소 하에 중탄산나트륨 (21.25 g, 253 mmol) 및 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (12.21 g, 63.3 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 여과하고, EtOAc (3 X 25mL)로 세척하고, 여과물을 농축시켜 조 생성물을 수득한 다음, 이를 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, (9:1) Hex/EtOAc로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (16 g, 49.4 mmol, 39.0%), LCMS (m/z) 318.1 [M+H]+.
(R)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트의 합성
이소프로판올 (200 mL) 및 물 (60 mL) 중 (R)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (16 g, 50.4 mmol)의 용액에 철 (14.06 g, 252 mmol)을 첨가하고, 40℃로 가열하였다. 상기 반응 혼합물에 아세트산 (1.442 mL, 25.2 mmol)을 첨가하고, 70℃로 1시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc (3 X 20mL)로 세척하고, 여과물을 농축시키고, 건조시켰다. 반응 조 물질을 에탄올로부터 재결정화하여 목적 생성물을 수득하였다 (11.5 g, 43.4 mmol, 86%), LCMS (m/z) 256.1 [M+H]+.
(R)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (12 mL) 중 수소화알루미늄리튬 (8.54 g, 225 mmol)의 현탁액에 질소 분위기 하에 0℃에서 테트라히드로푸란 (THF) (60 mL) 중 (R)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트 (11.5 g, 45.0 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응 혼합물을 70℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 물 (8 mL)로 켄칭하고, 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 다음에, 15%(W/W) NaOH(수성) 10mL를 첨가하고, 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 후처리를 완결하기 위해, 물 12mL를 첨가한 다음, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, THF(3x20mL)로 세척하였다. 여과물로 세척하고, 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, (3:7) Hex/EtOAc로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (6 g, 27.0 mmol, 60.1%), LCMS (m/z) 214.1 [M+H]+.
(4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
디클로로메탄 (DCM) (70 mL) 중 (R)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올 (7 g, 32.8 mmol)의 용액에 질소 하에 트리에틸아민 (18.27 mL, 131 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 이것이 균질할 때까지 실온에서 교반하였다. 이어서, 이를 0℃로 냉각시켰다. 다음에, POCl3 (4.58 mL, 49.1 mmol)을 적가하면서 온도를 0℃ 내지 5℃로 유지하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 100mL 1.2M NaHCO3(수성)을 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (2x200mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 농축 건조시켰다. 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켰다. 조 생성물 8g을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 70% EtOAc/석유 에테르로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (5.2 g, 26.5 mmol, 81% 수율), LCMS (m/z) 195.9 [M+H]+.
(S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트의 합성
2,6-디클로로-3-니트로피리딘 40.0 g (207 mmol), L-글루탐산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드 87.7 g (414 mmol), 및 NaHCO3 69.6 g (829 mmol)의 혼합물에 테트라히드로푸란 600 mL를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 교반하면서, 2,6-디클로로-3-니트로피리딘의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해, 10/1 (v/v) 헥산/에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물을 황색 고체로서 수득하였다 (60 g, 87%), LCMS (m/z) 332.1 [M+H]+.
(S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트의 합성
(S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트 20 g (60.2 mmol) 및 철 분말 16.8 g (301 mmol)의 혼합물에 2-프로판올 375 mL에 이어서 물 125 mL를 첨가하였다. 교반 혼합물에 아세트산 5.5 g (90.3 mmol)을 첨가한 다음, 반응물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 출발 물질의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 2-프로판올 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 농축 건조시킨 다음, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 생성물 15 g (81%)을 암황색 고체로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다, LCMS (m/z) 270.1 [M+H]+.
(S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올의 합성
N2 하에 테트라히드로푸란 (THF) 260 mL 중 AlCl3 17.78 g (133.3 mmol)에 THF 중 2M LiAlH4의 용액 200 mL를 기체 발생을 제어하는 속도로 적가하였다. 이와 같이 하여 THF 중 알란 (AlH3)의 용액을 수득하였다. 분리형 플라스크에서, THF 460 mL 중 (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트 26.0 g (96.4 mmol)의 용액을 N2 하에 제조한 다음, 드라이 아이스/아세톤 조로 냉각시켰다. 이에 교반 하에 알란 용액을 2시간에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완결되었을 때, 냉각 조를 제거하고, 반응물을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 1.5시간 후, LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었다. 다음에, 물 65 mL 중 17.6 g NaOH의 용액을 H2의 발생이 제어되도록 천천히 첨가하였다. 현탁액을 18시간 동안 교반되도록 한 다음, 고체를 여과하였다. 침전물을 에틸 아세테이트로 세척한 다음, 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 CH2Cl2에 이어서 CH2Cl2 중 0에서 10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 황색빛 오렌지색 고체 15.21 g (69%)을 수득하였다, LCMS (m/z) 228.1 [M+H]+.
(9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
(S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올 12 g (52.7 mmol)에 48% (w/w) 수성 HBr 160 mL를 첨가한 다음, 반응물을 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 출발 알콜의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 이를 주위 온도로 냉각시킨 다음, 1.2 M 수성 NaHCO3을 pH = 8까지 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출한 다음, 합한 유기 상을 염수 (1 x 100 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 2/1 (v/v) 헥산/에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 6.0 g (55%)을 담황색 고체로서 수득하였다, LCMS (m/z) 210.1 [M+H]+.
4 치환된 비시클릭 피리딘 코어의 합성
2,6-디클로로-4-메틸-3-니트로피리딘의 합성
질산 (1.5 mL, 33.6 mmol)을 황산 (2.5 mL, 46.9 mmol)의 용액에 첨가하고, 질소 하에 0℃에서 교반하였다. 이어서, 2,6-디클로로-4-메틸피리딘 (0.500 g, 3.09 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 완결된 후, 반응 혼합물을 분쇄 얼음으로 켄칭하고, NH4OH 용액으로 중화시키고, 고체를 여과하고, 진공 하에 건조시켜 목적 생성물을 연황색 고체로서 수득하였다 (0.300 g, 1.443 mmol, 46.8% 수율), LCMS (m/z) 206.8 [M+H]+.
(S)-디메틸 2-((6-클로로-4-메틸-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (20 mL)) 중 2,6-디클로로-4-메틸-3-니트로피리딘 (300 mg, 1.449 mmol) 및 중탄산나트륨 (243 mg, 2.90 mmol)의 현탁액에 (S)-디메틸 2-아미노숙시네이트 히드로클로라이드 (430 mg, 2.174 mmol)를 0℃에서 질소 하에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응물을 여과하고, EtOAc (2 x 30 mL)로 세척하였다. 여과물을 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 생성물을 중성 알루미나 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (9:1)로 용리시켰다. 수집된 분획을 황색 점착성 액체로서 감압 하에 농축시켜 목적 생성물을 수득하였다 (250 mg, 0.742 mmol, 51.2% 수율), LCMS (m/z) 339.1 (M+H)+.
(S)-메틸 2-(6-클로로-8-메틸-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트의 합성
40℃에서 교반하는 이소프로판올 (80 mL) 및 물 (20 mL) 중 (S)-디메틸 2-((6-클로로-4-메틸-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (6.0 g, 18.09 mmol) 및 철 (5.05 g, 90 mmol)의 현탁액에 아세트산 (1.553 mL, 27.1 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (4.0 g, 14.32 mmol, 79% 수율), LCMS (m/z) 269.9 [M+H]+.
(S)-2-(6-클로로-8-메틸-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올의 합성
질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (2.5 mL) 중 염화알루미늄 (0.173 g, 1.298 mmol)의 용액에 기체 발생을 제어하는 속도로 THF 중 수소화알루미늄리튬의 2M 용액 (2.220 mL, 4.44 mmol)을 적가하였다. 이와 같이 하여 THF 중 알란 (AlH3)의 용액을 수득하였다. 분리형 플라스크에서, 테트라히드로푸란 (THF) (5 mL) 중 (S)-메틸 2-(6-클로로-8-메틸-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트 (0.250 g, 0.927 mmol)의 용액을 질소 하에 제조하였으며, 이에 알란 용액을 -78℃에서 15분에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완결되었을 때, 냉각 조를 제거하고, 반응물을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 10% NaOH 용액으로 켄칭하고, 1시간 동안 교반하고, EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 목적 생성물을 연황색 고체로서 수득하였다 (150 mg, 0.407 mmol, 43.9% 수율), LCMS (m/z) 228.2 [M+H]+.
(4S)-7-클로로-9-메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
(S)-2-(6-클로로-8-메틸-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올 (1.8 g, 7.91 mmol)에 HBr (4 mL, 35.4 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 완결 후, 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하고, EtOAc로 추출하였다. EtOAc 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 중성 알루미나에 첨가하고, 20% EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 연황색 고체로서 수득하였다 (0.900 g, 4.27 mmol, 54.0% 수율), LCMS (m/z) 210.2 [M+H]+.
클로라이드 커플링 반응
(4S)-메틸 2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-카르복실레이트의 합성
무수 MeOH (250 ml) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (5 g, 25.55 mmol)의 탈기된 용액에 TEA (17.77 mL, 127.77 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (934 mg, 1.2755 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 300 psi의 일산화탄소 분위기 하에 110℃에서 20시간 동안 교반하였다. 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (100-200 실리카-겔, DCM 중 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-카르복실레이트를 연갈색 고체로서 수득하였다 (3 g, 13.68 mmol, 53.5% 수율), (TLC 시스템: DCM 중 5% 메탄올, Rf 값: 0.2), LCMS (m/z) 220.3 [M+H]+.
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
1-부탄올 (300 mL) 및 물 (50.0 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (30 g, 153 mmol), (2-메틸피리딘-4-일)보론산 (25.2 g, 184 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (65.1 g, 307 mmol)의 탈기된 용액에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (7.02 g, 7.67 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (7.31 g, 15.33 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. n-부탄올 용매를 감압 하에 증발시켰다. 생성된 잔류물을 물 (200 ml)로 희석하고, DCM (2x 400 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 디에틸 에테르 및 n-펜탄 (1:1)으로 3회 (3X250 mL) 연화처리하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 회백색 고체로서 수득하였다 (25 g, 99.2 mmol, 62%), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH Rf: 0.2), LCMS (m/z) 252.9 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.45 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 7.73 (dt, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 7.67 - 7.60 (m, 1H), 7.24 - 7.16 (m, 2H), 7.10 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 3.93 (td, J = 5.0, 2.5 Hz, 1H), 3.19 - 2.98 (m, 2H), 2.92 - 2.71 (m, 2H), 2.50 (s, 3H), 2.11 - 1.96 (m, 1H), 1.94 - 1.81 (m, 1H).
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성.
1,4-디옥산 (100 mL) 및 물 (20.0 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (10 g, 51.1 mmol), (6-메틸피리딘-3-일)보론산 (10.50 g, 77 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (21.70 g, 102 mmol)의 탈기된 용액에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (4.68 g, 5.11 mmol) 및 x-phos (4.87 g, 10.22 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고; 수득된 잔류물을 물 (200 ml)로 희석하고, DCM (2x 100 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 디에틸 에테르 및 n-펜탄 (1:1)으로 3회 (3X100 mL) 연화처리하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 회백색 고체로서 수득하였다 (11.2 g, 44.4 mmol, 65%), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH Rf: 0.3). LCMS (m/z): 253.1 [M+H], Rt =2.86분.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 8.97 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 8.06 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.28 - 7.11 (m, 1 H), 6.94 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 6.74 (d, J=7.67 Hz, 1 H), 5.21 (s, 1 H), 4.08 - 3.98 (m, 1 H), 3.36 - 3.12 (m, 3 H), 2.99 - 2.89 (m, 1 H), 2.56 (s, 3 H), 2.17 - 2.10 (m, 2 H).
(4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
1,4-디옥산 (100 mL) 및 물 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (20 g, 102 mmol), (3-(트리플루오로메틸)페닐)보론산 (29.1 g, 153 mmol) 및 Cs2CO3 (100 g, 307 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 다음에, 아세트산팔라듐(II) (0.574 g, 2.56 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (2.437 g, 5.11 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 포화 NaHCO3에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (1:1)로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 백색 고체로서 수득하였다 (18 g, 58.3 mmol, 57.0% 수율), LCMS (m/z) 306.1 (M+H)+.
2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
실온에서 1,4-디옥산 (60 ml) 및 물(6 ml) 중 2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (3 g, 14.31 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (3.91 g, 14.31 mmol) 및 탄산세슘 (4.66 g, 14.31 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응물을 아르곤으로 20분 동안 탈기하였다. 다음에, 반응 혼합물에 고체 아세트산팔라듐(II) (3.21 g, 14.31 mmol) 및 x-phos (6.82 g, 14.31 mmol)를 1회 충전량으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 105℃에서 3-4시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 층을 통해 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 에틸 아세테이트에 녹이고, 용해시키고, 중탄산나트륨 용액 및 물로 세척하였다. 유기 상을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 농축시켜 수득하였다. 잔류물을 n-펜탄(3x 50 mL)으로 연화처리하였다. 생성된 고체를 부흐너 깔때기를 통해 여과하고, n-펜탄으로 헹구고, 목적 생성물 (4 g, 86%)로서 수집하였다, LCMS (m/z) 321.3 (M+H)+.
(9S)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
질소 하에 25℃에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (60 ml), 물(4ml) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (3 g, 14.31 mmol), (5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)보론산 (5.46 g, 28.6 mmol) 및 Cs2CO3 (13.99 g, 42.9 mmol)의 용액에 20분 동안 아르곤 기체로 퍼징하였다. 이어서, 아세트산팔라듐(II) (0.080 g, 0.358 mmol) 및 X-Phos (227mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM (100 mL)에 녹였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (1:1)로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 회백색 고체로서 수득하였다 (3.6g, 11.1mmol 76%), LCMS (m/z) 321.2 [M+H]+.
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
25℃에서 질소 하에 교반하고, 20분 동안 아르곤 기체로 퍼징된 1-부탄올 (300 ml), 물(100ml) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (10 g, 47.7 mmol), (2-메틸피리딘-4-일)보론산 (8.49 g, 62.0 mmol) 및 인산칼륨 (30.4 g, 143 mmol)의 용액에 X-Phos (2.274 g, 4.77 mmol), Pd2(dba)3 (2.184 g, 2.385 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 120℃에서 16시간 동안 교반하였다. 농축시키기 전에 잔류물을 DCM (700 mL)에 녹였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 갈색 반고체 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 헥산으로 세척함으로써 정제하여 회백색 고체 생성물을 수득하였다 (9 g, 32.4 mmol, 67.9% 수율), LCMS (m/z): 267.3 (M+H)+.
(4S)-9-메틸-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
1,4-디옥산 (14.4 mL) & 물 (3.6 mL) 중 (4S)-7-클로로-9-메틸-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.900 g, 4.29 mmol), (6-메틸피리딘-3-일)보론산 (0.882 g, 6.44 mmol) 및 인산삼칼륨 (2.73 g, 12.88 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (0.393 g, 0.429 mmol) 및 X-Phos (0.409 g, 0.858 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC (50% EtOAc/헥산)에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시키고, EtOAc로 용해시켰다. EtOAc 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 (4S)-9-메틸-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.700g, 2.60 mmol, 60.7% 수율), LCMS (m/z) 267.0 [M+H]+.
(2R)-2-에틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린의 합성
질소 하에 교반하고 실온에서 15분 동안 탈기된 1,2-디메톡시에탄 (DME) (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (900 mg, 4.60 mmol), (R)-2-에틸모르폴린 (1060 mg, 9.20 mmol) 및 KOtBu (1032 mg, 9.20 mmol)의 현탁액에 (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (120 mg, 0.184 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (2 x 20 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 유기 층을 감압 하에 농축시켰다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하고, 생성물을 헥산 중 20% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 수집된 분획을 감압 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 (2R)-2-에틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 연황색 고체로서 수득하였다 (750 mg, 2.73 mmol, 59.4% 수율), LCMS (m/z) 275.3 [M+H]+.
(2S,6S)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린의 합성
1,2-디메톡시에탄 (DME) (30 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.800 g, 4.09 mmol), (2S,6S)-2,6-디메틸모르폴린 (0.942 g, 8.18 mmol) 및 KOtBu (0.918 g, 8.18 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(II) (0.106 g, 0.164 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 완결된 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 감압 하에 농축시켰다. 생성된 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조 생성물을 중성 알루미나에 첨가하고, (1:2) EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 (2S,6S)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.780 g, 2.79 mmol, 68% 수율), LCMS (m/z) 275.3 [M+H]+.
(2R,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린의 합성
1,2-디메톡시에탄 (DME) (30 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.800 g, 4.09 mmol), (2R,6R)-2,6-디메틸모르폴린 (0.942 g, 8.18 mmol) 및 KOtBu (0.918 g, 8.18 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.106 g, 0.164 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC (TLC: 100% EtOAc Rf 값: 0.2)에 의해 모니터링하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 완전히 증류시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조 생성물을 중성 알루미나에 첨가하고, (1:1) EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 (2R,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.800 g, 2.75 mmol, 67.3% 수율), LCMS (m/z) 275.0 [M+H]+.
(2S,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린의 합성
1,2-디메톡시에탄 (DME) (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.00 g, 5.11 mmol), (2S,6R)-2,6-디메틸모르폴린 (1.177 g, 10.22 mmol) 및 KOtBu (1.147 g, 10.22 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(II) (0.133 g, 0.204 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 증발시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질 (2S,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 수득하였다 (0.820 g, 2.86 mmol, 56.0% 수율). 조 생성물을 중성 알루미나에 첨가하고, 20% EtOAc/헥산으로 용리시켜 (2S,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.820 g, 2.86 mmol, 56.0% 수율), LCMS (m/z) 275.2 [M+H]+.
2-시클로프로필-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-7-모르폴린의 합성
0℃에서 교반 하에 1,2-디메톡시에탄 (DME) (15 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1 g, 5.11 mmol)의 용액에 2-시클로프로필모르폴린 (0.650 g, 5.11 mmol) 및 포타슘 tert-부톡시드 (0.574 g, 5.11 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 용액을 15분 동안 탈기하고, 신나밀 클로로[1,3-비스(디이소프로필페닐)-2-이미다졸리디닐린]Pd(II) (3.32 g, 5.11 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 15 ml로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 100-200 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 2% DCM/MeOH로 용리시켜 생성물 2-시클로프로필-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 회백색 고체로서 수득하였다 (1 g, 3.49 mmol, 68.3% 수율), LCMS (m/z) 287.2 [M+H]+.
2,2-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린의 합성
1,2-디메톡시에탄 (DME) (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.0 g, 5.11 mmol), 2,2-디메틸모르폴린 (1.177 g, 10.22 mmol) 및 KOtBu (1.147 g, 10.22 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.133 g, 0.204 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 증발시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하였다. 용액을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 중성 알루미나 칼럼에 첨가하고, DCM으로 용리시켜 2,2-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린을 백색 고체로서 수득하였다 (0.800 g, 2.67 mmol, 52.3% 수율), LCMS (m/z) 275.0 [M+H]+.
(9S)-2-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
실온에서 질소 분위기 하에 1,2-디메톡시에탄 (DME) (10 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5 g, 2.385 mmol), (R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (0.663 g, 4.77 mmol) 및 KOtBu (0.535 g, 4.77 mmol)의 현탁액에 고체 [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로][3-페닐알릴]팔라듐(II) (1.549 g, 2.385 mmol)을 첨가하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 EtOAc (100 mL)로 희석하고, 물 (50mL x2)에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 1:1 Hex/EtOAc로 용리시킴)에 의해 정제하여 (9S)-2-((2R)-2-(트리플루오로메틸)시클로펜틸)-6,7,8,9,10,10a-헥사히드로-4aH-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 담녹색 고체로서 수득하였다 (500mg, 1.596 mmol, 64.6% 수율), (TLC: Rf 0.3, 용리액: 헥산 중 80% EtOAc), LCMS (m/z) 313.2 [M+H]+.
(9S)-2-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
1,2-디메톡시에탄 (DME) (10 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5 g, 2.385 mmol), (S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (0.663 g, 4.77 mmol) 및 KOtBu (0.535 g, 4.77 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 다음에, [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로][3-페닐알릴]팔라듐(II) (1.549 g, 2.385 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 완결된 후, 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 EtOAc로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (1:1)로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 (9S)-2-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.6 g, 1.868 mmol, 78% 수율), LCMS (m/z) 313.3 [M+H]+.
(9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
KOtBu (0.321 g, 2.86 mmol)를 1,2-디메톡시에탄 (DME) (10 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.3 g, 1.431 mmol), 및 3-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (0.398 g, 2.86 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기한 다음, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.037 g, 0.057 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에 증발시켰다. 반응 혼합물을 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 80% EtOAc: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% EtOAc로 용리시켜 (85: 15) 혼합물을 수득하고, 추가로 SFC에 의해 정제하여 순수한 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.151 g, 0.473 mmol, 33.1% 수율).
분석용 SFC 조건: 피크-II 칼럼/치수:
키랄팩 AD-H (250 X 4.6)mm,5u
% CO2: 70.0%
% 공용매: 30.0% (MeOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 3.0g/분
배압: 100 bar
온도: 26.8℃
UV: 212nm
정제용 SFC 조건
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 30)mm
% CO2: 75%
% 공용매: 25.0% (MeOH)
총 유량: 100.0g/분
배압: 100bar
UV: 212nm
스택 시간: 1.8분
로드/주입: 5.5mg
LCMS (m/z) 313.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.87 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 6.49 (d, J = 4.9 Hz,1H), 5.58 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 3.60 (dd, J = 10.8, 8.4 Hz, 1H), 3.47 (s, 1H), 3.39 (dd, J = 10.6, 5.8 Hz, 2H), 3.30 (s, 2H), 3.14 - 2.98 (m, 2H), 2.90 (d, J = 4.5 Hz, 1H), 2.50 (qd, J = 3.2, 2.2, 1.6 Hz,1H), 2.31 - 2.13 (m, 1H), 2.05 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 1.72 (dt, J = 7.0, 3.0 Hz, 2H), 1.44 (s, 1H), 1.16 (d, J = 14.4 Hz, 1H).
(9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
(1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴) 팔라듐 (0.062 g, 0.095 mmol)을 실온에서 1,2-디메톡시에탄 (20 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5 g, 2.385 mmol), 3-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (0.663 g, 4.77 mmol) 및 KOtBu (0.535 g, 4.77 mmol)의 탈기된 현탁액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 10분 동안 탈기하고, 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 증발시켜 갈색 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 물 (15 mL)과 EtOAc (2X 25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 80% EtOAc/헥산, Rf 값: 0.4, UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)에 의해 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 생성물을 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 거울상이성질체의 (30:70) 혼합물을 수득하였으며, 이를 추가로 SFC 정제하여 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 갈색 고체로서 수득하였다 (0.125 g, 0.393 mmol, 16.46% 수율).
분석용 SFC 조건: 피크 I (주요)
키랄팩 AD-H (250 X 4.6)mm,5u
% CO2: 70.0%
% 공용매: 30.0% (MeOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 3.0g/분
배압: 100 bar
온도: 26.8℃
UV: 212nm
정제용 SFC 조건
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 30)mm
% CO2: 75%
% 공용매: 25.0% (MeOH)
총 유량: 100.0g/분
배압: 100bar
UV: 212nm
스택 시간: 1.8분
로드/주입: 5.5mg
LCMS (m/z) 313.31[M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 7.03 (dd, J = 8.2, 0.6 Hz, 1H), 5.67 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 4.91 (s, 1H), 3.71 (dd, J = 10.8, 8.5 Hz, 1H), 3.62 (s, 1H), 3.52 (dd, J = 10.8, 7.2 Hz, 2H), 3.43 (dt, J = 9.6, 7.5 Hz, 1H), 3.24 - 3.08 (m, 3H), 2.99 (d, J = 8.2 Hz, 1H), 2.83 (d, J = 12.0 Hz, 1H), 2.27 - 2.08 (m, 2H), 1.91 - 1.75 (m, 2H), 1.65 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 1.26 (t, J = 6.6 Hz, 1H).
(9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성.
1,2-디메톡시에탄 (DME) (30 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.750g, 3.58 mmol), 3-(트리플루오로메틸)피페리딘 (1.096 g, 7.15 mmol) 및 KOtBu (1.204 g, 10.73 mmol)의 현탁액을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기한 다음, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.093 g, 0.143 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에 완전히 증발시켰다. 반응 혼합물을 EtOAc (50 ml)로 희석하고, 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (1:1)로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시키고, 생성된 잔류물을 키랄 SFC 분리에 의해 정제하여 순수한 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 회백색 고체로서 수득하였다 (0.450 g, 1.371 mmol, 38.3% 수율), (TLC: Rf 값: 0.4, 80% EtOAc/헥산).
분석용 SFC 조건: 피크-I
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 4.6)mm,5u
% CO2: 60.0%
% 공용매: 40.0% (MeOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 4.0g/분
배압: 100 bar
온도: 26.8℃
UV: 215nm
정제용 SFC 조건
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 30)mm
% CO2: 65.0%
% 공용매: 35.0% (100% MeOH)
총 유량: 100.0g/분
배압: 100bar
UV: 215nm
스택 시간: 2.2분
로드/주입: 50.0mg
LCMS (m/z) 327.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 6.89 (dd, J = 8.2, 0.7 Hz, 1H), 6.56 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 5.89 (d, J = 8.3 Hz, 1H), 4.58 - 4.33 (m, 1H), 3.97 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.48 (s, 1H), 3.17 - 2.98 (m, 2H), 2.92 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 2.76 - 2.57 (m, 2H), 2.50 (p, J = 1.9 Hz, 2H), 1.96 (d, J = 10.6 Hz, 1H), 1.74 (dd, J = 9.4, 3.3 Hz, 3H), 1.61 - 1.32 (m, 3H), 1.25 - 1.08 (m, 1H).
(9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
KOtBu (0.803 g, 7.15 mmol)를 1,2-디메톡시에탄 (DME) (20 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.750 g, 3.58 mmol),및 3-(트리플루오로메틸)피페리딘 (1.096 g, 7.15 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응물을 교반하고, 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기한 다음, (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.093 g, 0.143 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하고, 완전히 증발시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 80% EtOAc: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% EtOAc로 용리시켜 (69: 31) 혼합물을 수득하고, 추가로 SFC에 의해 정제하여 순수한 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 연황색 고체로서 수득하였다 (450 mg, 1.310 mmol, 36.6% 수율).
분석용 SFC 조건: 피크-II
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 4.6)mm,5u
% CO2: 60.0%
% 공용매: 40.0% (MeOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 4.0g/분
배압: 100 bar
온도: 26.8℃
UV: 215nm
정제용 SFC 조건
칼럼/치수: 키랄팩 AD-H (250 X 30)mm
% CO2: 65.0%
% 공용매: 35.0% (100% MeOH)
총 유량: 100.0g/분
배압: 100bar
UV: 215nm
스택 시간: 2.2분
로드/주입: 50.0mg
LCMS (m/z) 327.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 6.89 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 6.55 (br d, J=3.95 Hz, 1 H), 5.89 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 4.49 (dt, J=12.44, 1.78 Hz, 1 H), 3.96 (d, J=13.15 Hz, 1 H), 3.48 (br s, 1 H), 3.15 - 2.96 (m, 2 H), 2.94 - 2.80 (m, 1 H), 2.74 - 2.56 (m, 2 H), 2.55 - 2.41 (m, 2 H), 2.12 - 1.84 (m, 1 H), 1.82 - 1.64 (m, 3 H), 1.58 - 1.32 (m, 3 H), 1.32 - 1.08 (m, 1 H).
(4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
1,2-디메톡시 에탄 (15 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 2.56 mmol), 3-(트리플루오로메틸)피페리딘 (783 mg, 5.11 mmol (비동등 거울상이성질체 혼합물을 갖는 S-이성질체))의 탈기된 용액에 30℃에서 포타슘 tert-부톡시드 (574 mg, 5.11 mmol) 및 유미코어촉매 (33.2 mg, 0.051 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 17시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: 에틸 아세테이트 중 1에서 3% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 400mg을 수득하였다. 키랄 HPLC는 53:44 거울상이성질체 혼합물을 나타내었으며, 이 거울상이성질체의 비동등 혼합물을 키랄 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2개의 분리된 피크를 수득하였다: (키랄 정제용 조건: 4g-40%-100bar 10 메탄올 중 0.5% DEA, 키랄팩, AD-H (4.6mm*250mm)) 가장 빠른 용리액 피크: 210 mg (피크-I, 0.673 mmol, 15% 수율) 백색 고체로서 (TLC: EtOAc 중 10% MeOH Rf: 0.4) 및 가장 느린 용리액 피크: 310 mg (피크-II, 310 mg, 0.993 mmol, 22%) 백색 고체로서 (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z) 313.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 6.92 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 6.56 (d, J=4.38 Hz, 1 H), 5.83 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 4.43 (d, J=12.28 Hz, 1 H), 3.93 (d, J=12.28 Hz, 1 H), 3.87 - 3.72 (m, 1 H), 3.10 - 2.83 (m, 2 H), 2.82 - 2.71 (m, 1 H), 2.70 - 2.55 (m, 3 H), 2.46 - 2.18 (m, 1 H), 2.11 - 1.86 (m, 2 H), 1.86 - 1.65 (m, 2 H), 1.55 - 1.32 (m, 2 H).
(4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성
1,2-디메톡시 에탄 (15 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 2.56 mmol), (비동등 거울상이성질체 혼합물을 갖는 R-이성질체) 3-(트리플루오로메틸)피페리딘 (783 mg, 5.11 mmol)의 탈기된 용액에 30℃에서 포타슘 tert-부톡시드 (574 mg, 5.11 mmol) 및 유미코어촉매 (33.2 mg, 0.051 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 17시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: 에틸 아세테이트 중 1에서 3% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다. 칼럼 크로마토그래피 후, 화합물 500 mg을 단리시키고, 키랄 HPLC는 36:63 거울상이성질체 혼합물을 나타내었으며, 이 거울상이성질체의 비동등 혼합물을 키랄 정제용 HPLC에 의해 정제하여 2개의 분리된 피크를 수득하였다: (키랄 정제용 조건: 4g-40%-100bar 10 메탄올 중 0.5% DEA, 키랄팩, AD-H (4.6*250) mm5u) 가장 빠른 용리액 피크:140 mg (피크-I) 및 가장 느린 용리액 피크: 310 mg (피크-II, 310 mg, 0.993 mmol, 22%) 백색 고체로서 (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z) 313.2[M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 6.92 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 6.56 (d, J=4.60 Hz, 1 H), 5.83 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 4.41 (dt, J=12.50, 1.86 Hz, 1 H), 3.93 (d, J=12.50 Hz, 1 H), 3.81 (td, J=4.88, 2.74 Hz, 1 H), 3.07 - 2.88 (m, 2 H), 2.80 - 2.55 (m, 4 H), 2.48 - 2.27 (m, 1 H), 2.01 - 1.88 (m, 2 H), 1.85 - 1.65 (m, 2 H), 1.52 - 1.38 (m, 1 H), 1.36 - 1.20 (m, 1 H).
염기성 우레아 중간체
(4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 0℃에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (50 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.2g, 6.13 mmol)의 용액에 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (1.768 g, 7.36 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 냉수 (100 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 연속적으로 물 (70 mL) 및 염수 (70 mL)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 감압 하에 건조시켰다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬), 용리액으로서 30%에서 70%의 구배 혼합물을 사용하여 정제하여 표제 화합물 1.3g (66%)을 회백색 물질로서 수득하였다, LCMS (m/z) 316.2 (M+H)+.
(4R)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (800 mg, 6.45 mmol), DPPA (3548 mg, 12.89 mmol) 및 트리에틸아민 (4.49 mL, 32.2 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 교반하고, 실온으로 2시간 동안 가온하였다. 다음에, (4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1009 mg, 5.16 mmol). 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (200 mL X2)로 추출하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 반 순수한 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc로 용리시켰다. 분획을 수집하여 목적 생성물을 수득하였다 (1.4 g, 3.71 mmol, 58%), LCMS (m/z) 317.2 (M+H)+.
(4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
DIPEA (31.9 mL, 183 mmol)에 이어서 DPPA (15.09 g, 54.8 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (60 mL) 중 니코틴산 (4.5 g, 36.6 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 2시간 동안 교반하였다. 이어서, (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (5.01 g, 25.6 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (60 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2X50 mL)로 추출하고, 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬), DCM 중 1% 메탄올을 사용하여 정제하여 목적 생성물을 수득하였다 (4 g, 12.03 mmol, 32.9% 수율), LCMS: (m/z) 316.2 (M+H)+.
(4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 테트라히드로푸란 (THF) (100 ml) 중 피라진-2-카르복실산 (4.08 g, 32.9 mmol)의 교반 용액에 디페닐 포스포르아지데이트 (14.19 ml, 65.8 mmol)에 이어서 TEA (22.94 ml, 165 mmol)를 첨가하였다. 용액을 실온으로 가온하고, 교반을 3시간 동안 계속하였다. 다음에, 고체 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (5.6 g, 28.6 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 가열하였다. 반응물을 2시간 동안 환류 하에 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 교반을 밤새 계속하였다. 다음 날, 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (3회)로 추출하였다. 합한 EtOAc 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 암색 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피: 330g 칼럼, 100ml/분, 0-25% EtOAc/MeOH에 의해 30분에 걸쳐 정제하였다. 생성물을 함유하는 분획을 합하여 목적 생성물을 황색 오일로서 수득하였다. 이 오일에 Et2O (50ml)를 첨가하고, 이를 감압 하에 농축시켰다. 이와 같이 하여 생성물을 담황색 고체로 결정화하였다 (6.9g, 76% 수율).
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ=12.61 (s, 1H), 9.47 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.68 - 7.99 (m, 2H), 7.50 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.96 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.65 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.30 - 3.15 (m, 1H), 3.11 (dt, J = 12.1, 2.1 Hz, 1H), 3.00 (dd, J = 12.1, 3.2 Hz, 1H), 2.39 - 2.22 (m, 1H), 2.11 - 1.97 (m, 2H); LCMS (m/z) 316.9 (M+H)+.
(4S)-7-클로로-N-(피리다진-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 피리다진-4-카르복실산 (0.5 g, 4.03 mmol)에 디페닐 포스포르아지데이트 (1.308 mL, 6.04 mmol) 및 DIPEA (2.111 mL, 12.09 mmol)의 용액을 첨가하고, 이를 질소 하에 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 2시간 동안 교반하고, (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.473 g, 2.417 mmol)을 30℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 6시간 동안 교반하였다. THF를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 물로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켰다. 조 화합물을 연화처리에 의해 디에틸 에테르 및 n-펜탄(1:1)을 사용하여 정제하여 생성물을 회백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 0.91 mmol, 23% 수율). LCMS (m/z) 316.9 [M+H]+.
(4S)-N-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-일)-7-클로로-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 2.56 mmol)의 용액에 트리포스겐 (758 mg, 2.56 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에 교반한 다음, 트리에틸아민 (0.356 mL, 2.56 mmol) 및 3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-아민 (417 mg, 3.07 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC(DCM 중 10% 메탄올)에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 물 25 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 25 ml로 추출하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 100-200 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 3% DCM/MeOH로 용리시켜 순수한 화합물 (4S)-N-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-일)-7-클로로-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (200 mg, 0.527 mmol, 20.63% 수율), LCMS (m/z) 357.9 [M+H]+.
진행된 중간체의 합성
3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 톨루엔 (25 mL) 중 피콜린산 (1 g, 8.12 mmol)의 용액에 디페닐 포스포르아지데이트 (2.235 g, 8.12 mmol) 및 TEA (1.132 mL, 8.12 mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 그 후, 반응 혼합물을 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 여과하고, 고체를 톨루엔으로 세척하여 화합물 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온을 수득하였다 (600 mg, 2.352 mmol, 29.0% 수율), LCMS (m/z) 241.2 [M+H]+.
(R)-4-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-아민의 합성
밀봉된 튜브 중에서 (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (3.000 g, 22.70 mmol), 4-클로로피리딘-2-아민 (1.459 g, 11.35 mmol) 및 나트륨 (0.522 g, 22.70 mmol)의 현탁액에. 반응 혼합물을 140℃에서 16시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, MeOH 중에 용해시키고, 빙수에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 2-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 화합물을 수득하였다 (1.1g, 21%), LCMS (m/z) 225.2 [M+H]+.
(S)-4-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-아민의 합성
밀봉된 튜브 중에서 (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (3.000 g, 22.70 mmol), 4-클로로피리딘-2-아민 (1.459 g, 11.35 mmol) 및 나트륨 (0.522 g, 22.70 mmol)의 현탁액에. 반응 혼합물을 140℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, MeOH 중에 용해시키고, 빙수에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 상을 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켰다. 조 물질을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, 2-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 목적 생성물을 수득하였다 (1.2g, 22%), LCMS (m/z) 225.2 [M+H]+.
(R)-2-(테트라히드로푸란-3-일옥시)피리미딘-4-아민의 합성
THF (30 mL) 중 (R)-테트라히드로푸란-3-올 (2.72 g, 30.9 mmol)의 교반 용액에 NaH (0.926 g, 23.16 mmol)를 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이에 2-클로로피리미딘-4-아민 (2.0 g, 15.44 mmol)을 여러 부분으로 약 15분 동안 첨가하고, 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 후속적으로 0℃로 냉각시키고, 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3x50 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하여 (R)-2-(테트라히드로푸란-3-일옥시)피리미딘-4-아민을 회백색 고체로서 수득하였다 (1.6 g, 8.839 mmol, 51.5% 수율).
(R)-6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민의 합성
0℃에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (50 mL) 중 6-클로로피라진-2-아민 (5 g, 38.6 mmol), 수소화나트륨 (2.316 g, 57.9 mmol) 및 (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (5.61 g, 42.5 mmol)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, DCM/MeOH로 용리시켰다. 생성물을 포함하는 분획을 합하고, 감압 하에 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (2.8g, 11.9 mmol, 31%), LCMS (m/z) 225.9 [M+H]+.
(S)-6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민의 합성
6-클로로피라진-2-아민 (0.980 g, 7.57 mmol), (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (2 g, 15.13 mmol) 및 나트륨 (0.348 g, 15.13 mmol)을 밀봉 튜브 중에서 녹이고, 130℃에서 16시간 동안 가열한 다음, 반응 혼합물을 메탄올 및 빙냉수 (100 mL)로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (5 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 포화 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물을 수득하였다 (1 g, 4.26 mmol, 28.2% 수율), LCMS (m/z) 265.1 [M+H]+.
(S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-아민의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (50 mL) 중 (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (10.20 g, 77 mmol), 및 NaH (4.63 g, 116 mmol)의 현탁액에 2-클로로피리미딘-4-아민 (5 g, 38.6 mmol)을 15분에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 다음에, 반응 혼합물을 수성 NaHCO3의 용액으로 켄칭한 다음, EtOAc로 추출하고, Na2SO4로 건조시키고, 증발시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 50% Hex/EtOAc로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 회백색 고체로서 수득하였다 (3 g, 11.84 mmol, 30.7% 수율), LCMS (m/z) 226.2 [M+H]+.
(R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-아민의 합성
실온에서 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 수소화나트륨 (0.817 g, 34.1 mmol)의 용액에 1분에 걸쳐 THF (5 mL) 중 (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (3 g, 22.70 mmol)의 용액을 첨가하고, 실온에서 15분 동안 교반한 다음, 실온에서 2-클로로피리미딘-4-아민 (2.059 g, 15.89 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물 4.0 g을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 2-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 화합물을 수득하였다 (2.5g, 10.42 mmol, 46%), LCMS (m/z) 226.2 [M+H]+.
(S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-아민의 합성
2-클로로피리딘-4-아민 (1.459 g, 11.35 mmol), (S)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (3.0 g, 22.70 mmol)의 현탁액에 나트륨 (0.522 g, 22.70 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 140℃에서 16시간 동안 교반하고, 반응의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 MeOH 중에 용해시키고, 빙수에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물 4.0 g을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 2-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 (S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-아민을 수득하였다 (2.5 g, 10.73 mmol, 47.3% 수율), LCMS (m/z) 225.3 [M+H]+.
(R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-아민의 합성
밀봉된 튜브 중에서 실온에서 2-클로로피리딘-4-아민 (4 g, 31.1 mmol), (R)-(2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메탄올 (2.056 g, 15.56 mmol) 및 나트륨 (0.715 g, 31.1 mmol)의 용액에. 반응 혼합물을 140℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, MeOH에 이어서 물로 켄칭하였다. 이어서, 반응물을 EtOAc로 추출하였다. 이어서, 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 완전히 증류시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, Hex/EtOAc (1:1)로 용리시키고, 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (2.250 g, 9.93 mmol, 31.9% 수율), LCMS (m/z) 225.0 [M+H]+.
(S)-2-((테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-아민의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 2-클로로피리미딘-4-아민 (2 g, 15.44 mmol)의 교반 용액에 NaH (0.741 g, 30.9 mmol)를 조금씩 실온에서 5분의 기간에 걸쳐 첨가하였다. 이어서, 반응물을 30℃에서 약 10분 동안 교반하였다. 상기 반응물에 (S)-테트라히드로푸란-3-올 (1.088 g, 12.35 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 80℃에서 8시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 물로 완전히 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 용매를 감압 하에 증발시켜 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 석유 에테르로 연화처리하였다, LCMS (m/z) 182.2 [M+H]+.
페닐 (1-메틸-1H-피라졸-4-일)카르바메이트의 합성
페닐 카르보노클로리데이트 (2.90 g, 18.53 mmol)를 디클로로메탄 (DCM) (50 mL) 중 피리딘 (3.12 mL, 38.6 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가하고, 15분 동안 교반한 다음, 1-메틸-1H-피라졸-4-아민 (1.5g, 15.45 mmol)을 동일한 온도에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 출발 물질의 소모 후 (TLC에 의해 모니터링함), 빙냉수를 첨가하고, 분리된 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨을 통해 여과하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 60-120(실리카 겔)을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 목적 생성물을 담갈색 고체로서 수득하였다 (1.6g, 6.41 mmol, 42% 수율), LCMS (m/z) 218.1 (M+H)+.
페닐 피리딘-3-일카르바메이트의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (DCM) (30 mL) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (2.163 g, 13.81 mmol), 및 피리딘 (1.375 mL, 17.00 mmol)의 용액에 피리딘-3-아민 (1.0 g, 10.63 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (50 ml)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 물로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 고진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 20% EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 백색 고체로서 수득하였다 (1.3 g, 6.01 mmol, 57%), LCMS (m/z) 215.1 (M+H)+.
페닐 피리미딘-2-일카르바메이트의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (DCM) (10 mL) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (2.140 g, 13.67 mmol), 및 피리딘 (1.361 mL, 16.82 mmol)의 용액에 피리미딘-2-아민 (1.0 g, 10.51 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (50 ml)으로 추출하였다. 합한 DCM 층을 물로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 고진공 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 이를 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 20% EtOAc/헥산으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (1.6 g, 6.49 mmol, 61.7%), LCMS (m/z) 216.3 (M+H)+.
페닐 (5-플루오로피리딘-2-일)카르바메이트의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (DCM) (40 mL) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.397 g, 8.92 mmol), 및 피리딘 (0.721 mL, 8.92 mmol)의 용액에 5-플루오로피리딘-2-아민 (1.0 g, 8.92 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 목적 생성물을 수득하였다 (1.4 g, 5.94 mmol, 67%), LCMS (m/z) 233.2 (M+H)+.
페닐 (2-메틸-2H-인다졸-5-일)카르바메이트의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (DCM) (40 mL) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.064 g, 6.79 mmol), 및 피리딘 (0.550 mL, 6.79 mmol)의 용액에 2-메틸-2H-인다졸-5-아민 (1 g, 6.79 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 중탄산나트륨 용액으로 켄칭하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 DCM (20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 페닐 (2-메틸-2H-인다졸-5-일)카르바메이트를 수득하였다 (1.3 g, 4.82 mmol, 70.9% 수율), LCMS (m/z) 268.1 (M+H)+.
페닐 (5-에틸피라진-2-일)카르바메이트의 합성
피리딘 (1.051 mL, 12.99 mmol)을 디클로로메탄 (DCM) (20 ml) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.324 mL, 10.56 mmol)의 교반 용액에 실온에서 적가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 디클로로메탄 (DCM) (10 ml) 중에 용해시킨 5-에틸피라진-2-아민 (1 g, 8.12 mmol)을 실온에서 적가하고, 50℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, DCM (3X50 mL)으로 희석하고, 물 (2X30 mL) 및 염수 (30 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬)을 사용하여 용리액으로서 석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트에 의해 정제하여 목적 생성물을 회백색 솜털모양 고체로서 수득하였다 (1.6 g, 6.58 mmol, 81%), LCMS (m/z) 244.2 (M+H)+.
페닐 (5-시클로프로필피라진-2-일)카르바메이트의 합성
피리딘 (0.598 mL, 7.40 mmol)을 디클로로메탄 (DCM) (15 ml) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (0.928 mL, 7.40 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 적가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 디클로로메탄 (DCM) (5 ml) 중에 용해시킨 5-시클로프로필피라진-2-아민 (1 g, 7.40 mmol)을 0℃에서 적가하고, 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 DCM (3X50 mL)으로 희석하고, 물 (2X20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬)을 사용하여 용리액으로서 석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트에 의해 정제하여 목적 생성물을 회백색 솜털모양 고체로서 수득하였다 (1.4 g, 5.31 mmol, 72%), LCMS (m/z) 256.2 (M+H)+.
페닐 (6-에톡시피라진-2-일)카르바메이트의 합성
피리딘 (0.930 mL, 11.50 mmol)을 DCM (15 mL) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.463 g, 9.34 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 교반한 다음, DCM (15 mL) 중 6-에톡시피라진-2-아민 (1.0 g, 7.19 mmol)을 첨가하고, 추가로 40분 동안 계속하였다. 반응 혼합물을 DCM (2X20 mL)으로 희석하고, 물 (20 mLx2) 및 염수 (10 mL)로 세척하였다. 유기 추출물을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하여 목적 생성물을 황색 고체로서 수득하였다 (1.65 g, 5.22 mmol, 72.6% 수율), LCMS (m/z) 260.2 (M+H)+.
페닐 피리다진-3-일카르바메이트의 합성
25℃에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (10 ml) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.070 g, 6.83 mmol), 피리딘 (0.665 g, 8.41 mmol)의 용액에 디클로로메탄 (5ml) 중 피리다진-3-아민 (0.5 g, 5.26 mmol)의 현탁액을 5분 동안 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 다음에, 유기 상을 물 3 mL, 포화 염수 3 mL로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 백색 고체로서 수득하였다. 화합물을 헥산으로 세척하고, 감압 하에 건조시켰다, LCMS (m/z) 216.2 (M+H)+.
페닐 피리미딘-4-일카르바메이트의 합성
25℃에서 질소 하에 교반하는 DCM (15 ml) 중 페닐 카르보노클로리데이트 (1.070 g, 6.83 mmol), 피리딘 (0.665 g, 8.41 mmol)의 용액에 DCM (5 ml) 중 피리미딘-4-아민 (0.5 g, 5.26 mmol)의 현탁액을 5분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 1시간 동안 교반하였다. 유기 상을 물 3 mL, 염수 3 mL로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 조 생성물을 회백색 고체로서 수득하였다. 조 화합물을 헥산으로 세척한 다음, 감압 하에 건조시켜 목적 생성물을 수득하였다 (500 mg, 1.95 mmol, 37%), LCMS (m/z) 215.9 (M+H)+.
진행된 비시클릭 중간체의 합성
(4S)-N-(4-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (499.5 mg, 1.636 mmol)의 용액에 TEA (1.368 mL, 9.82 mmol), 트리포스겐 (486 mg, 1.636 mmol)을 첨가하였다. 이를 실온에서 15분 동안 교반한 다음, THF (5 mL) 중 (R)-4-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-아민 (1101 mg, 4.91 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 화합물을 역상 크로마토그래피 (0.1%HCOOH&물)/MeOH에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다 (450 mg, 49%), LCMS (m/z) 555.9 (M+H)+.
(4S)-N-(6-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
30℃에서 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (R)-6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민 (803 mg, 3.57 mmol)의 용액에 트리포스겐 (423 mg, 1.427 mmol)을 첨가하고, 동일한 온도에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, TEA (1.657 mL, 11.89 mmol)에 이어서 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC 및 조 LCMS에 의해 모니터링하였다. THF를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 물로 희석하고, DCM으로 추출하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 고정상으로서의 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 2-3%의 MeOH/EtOAc를 사용하여 정제하였다. 순수한 분획을 수집하고, 감압 하에 농축시켜 순수한 생성물 0.4g을 회백색 고체로서 수득하였다 (450 mg, 0.71 mmol, 30%), LCMS (m/z) 504.3 (M+H)+.
(4S)-N-(4-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (545 mg, 1.785 mmol)의 용액에 TEA (1.493 mL, 10.71 mmol), 트리포스겐 (530 mg, 1.785 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 15분 동안 교반한 후, THF (5 mL) 중 (S)-4-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-아민 (1201 mg, 5.36 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 물에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 이를 역상 칼럼 크로마토그래피 (0.1%HCOOH&물)/MeOH에 의해 정제하여 목적 생성물을 수득하였다 (500mg, 49%), LCMS (m/z) 556.3 (M+H)+.
(4S)-N-(6-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (밀봉된 튜브) 40 mL 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (850 mg, 2.78 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (324 mg, 1.093 mmol)을 25℃에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이 반응 혼합물에 (R)-6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민 (938 mg, 4.16 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 혼합물을 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔; 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (900 mg, 1.618 mmol 57% 수율), (TLC: 용리액: DCM 중 10% MeOH, Rf =0.3), LCMS (m/z) 557.3 (M+H)+.
(4S)-N-(6-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (25 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (723 mg, 2.368 mmol)의 용액에 트리포스겐 (351 mg, 1.184 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, TEA (1.650 mL, 11.84 mmol) 및 (S)-6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민 (800 mg, 3.55 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 후에 실온으로 냉각시키고, 물에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였으며, 이를 역상 칼럼에 의해 정제하고, (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 순수한 화합물을 수득하였다 (300 mg, 0.534 mmol 83%, 23%), LCMS (m/z) 557.4 (M+H)+.
(4S)-N-(2-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 1.965 mmol)의 용액에 트리포스겐 (583 mg, 1.965 mmol), TEA (1.644 mL, 11.79 mmol)를 첨가하고, 실온에서 15분 동안 교반하고, THF (5 mL) 중 (S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-아민 (1328 mg, 5.90 mmol)의 용액을 1분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 물에 붓고, EtOAc (3 X 50mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 600 mg을 수득하였다. 조 화합물을 역상 칼럼에 의해 정제하고, 90% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 목적 화합물을 수득하였다 (450 mg, 0.76 mmol, 39%), LCMS (m/z) 557.2 (M+H)+.
(4S)-N-(2-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 1.965 mmol)의 용액에 TEA (1.644 mL, 11.79 mmol), 트리포스겐 (583 mg, 1.965 mmol)을 첨가하고, 15분 동안 교반하고, (S)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-아민 (1322 mg, 5.90 mmol)을 조금씩 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하고, 반응의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 화합물을 역상 칼럼에 의해 정제하고, 93% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 목적 생성물을 수득하였다 (450 mg, 0.807 mmol, 41.1% 수율), LCMS (m/z) 556.4 (M+H)+.
(4S)-N-(2-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.310 mmol)의 용액에 TEA (1.096 mL, 7.86 mmol), 트리포스겐 (389 mg, 1.310 mmol)를 첨가하고, 실온에서 15분 동안 교반하고, THF(2.0 mL) 중 (R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-아민 (885 mg, 3.93 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 조 화합물을 역상 칼럼에 의해 정제하고, 90% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 순수한 화합물을 수득하였다 (350 mg, 0.602 mmol, 46%), LCMS (m/z) 557.0 (M+H)+.
(4S)-N-(2-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1 g, 3.28 mmol)의 용액에 TEA (2.74 mL)의 용액 및 트리포스겐을 첨가하고, 실온에서 질소 하에 30분 동안 교반하였다. 이에 테트라히드로푸란 (THF) (8 mL) 중 (R)-2-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-아민 (2.204 g, 9.83 mmol) (2.204 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 DCM (100 mL)에 녹였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, EtOAc/석유 에테르 (60:20)로 용리시키고, 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 회백색 반고체로서 수득하였다 (600 mg, 0.92 mmol, 28%), LCMS (m/z) 556.3 (M+H)+.
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-3-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol), 트리에틸아민 (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 트리포스겐 (282 mg, 0.951 mmol)의 용액에 THF (5 mL) 중 2-(피리딘-3-일)에탄아민 (387 mg, 3.17 mmol)의 용액을 5분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하고, 반응의 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, EtOAc (3 X 100mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 역상 칼럼에 의해 정제하고, 25-30% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 최종 생성물을 수득하였다 (250 mg, 0.599 mmol, 37.8% 수율), LCMS (m/z) 401.1 (M+H)+.
tert-부틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피페라진-1-카르복실레이트의 합성
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol) 및 tert-부틸 피페라진-1-카르복실레이트 (706 mg, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 후속적으로 20℃에서 Cs2CO3 (1852 mg, 5.68 mmol), xphos (361 mg, 0.758 mmol) 및 PdOAc2 (85 mg, 0.379 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 3% DCM/MeOH로 용리시켜 tert-부틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였다 (359 mg, 0.616 mmol, 32.5% 수율), LCMS (m/z) 467.3 (M+H)+.
tert-부틸 3-메틸-4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피페라진-1-카르복실레이트의 합성
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (800 mg, 2.53 mmol), tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1012 mg, 5.05 mmol)의 탈기된 용액에 후속적으로 20℃에서 Cs2CO3 (2469 mg, 7.58 mmol) 및 xphos (482 mg, 1.010 mmol), PdOAc2 (113 mg, 0.505 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 냉수 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 2% DCM/MeOH로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 목적 생성물을 수득하였다 (397.5 mg, 0.670 mmol, 26.5% 수율), LCMS (m/z) 481.1 (M+H)+.
(4S)-7-(4-벤질-3-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), 1-벤질-2-메틸피페라진 (601 mg, 3.16 mmol)의 탈기된 용액에 후속적으로 20℃에서 Cs2CO3 (1543 mg, 4.74 mmol) 및 신나밀 클로로[1,3-비스(디이소프로필페닐)-2-이미다졸리디닐린]Pd(II) (51.3 mg, 0.079 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 3% DCM/MeOH로 용리시켜 (4S)-7-(4-벤질-3-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (501.5 mg, 0.885 mmol, 56.0% 수율), LCMS (m/z) 471.3 (M+H)+.
4-브로모-2-(디플루오로메틸)피리딘의 합성
DAST (0.620 mL, 4.69 mmol)를 클로로포름 (21 mL) 중 4-브로모피콜린알데히드 (700 mg, 3.76 mmol)의 용액에 0℃에서 적가하였다. 반응 혼합물을 20℃에서 12시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (20 mL)에 붓고, DCM (2X 20 mL)으로 추출하였다. DCM 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 4-브로모-2-(디플루오로메틸)피리딘을 담황색 고체로서 수득하였다 (400 mg, 1.870 mmol, 49.7% 수율), LCMS (m/z) 208.0 [M+H]+.
(2-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)보론산의 합성
아세트산칼륨 (472 mg, 4.81 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL) 중 4-브로모-2-(디플루오로메틸)피리딘 (400 mg, 1.923 mmol), 및 비스(피나콜레이토)디보론 (610 mg, 2.404 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, PdCl2(dppf) (4.22 mg, 5.77 μmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 80℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 증발시키고, 조 물질을 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 (2-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)보론산을 갈색 고체로서 수득하였다 (330 mg, 1.107 mmol, 57.6% 수율), LCMS (m/z) 174.1 [M+H]+.
tert-부틸 4-벤질-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트의 합성
N,N-디메틸포름아미드 (DMF) (100 mL) 중 tert-부틸 3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1 g, 4.99 mmol)의 용액에 0℃에서 K2CO3 (2.070 g, 14.98 mmol)을 첨가하였다. 0℃에서 10분 동안 교반한 후, 벤질 브로마이드 (0.891 mL, 7.49 mmol)를 적가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 16시간 동안 교반하고, 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (200 mL)로 추출하고, 물에 이어서 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 10%Hex/EtOAc로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 tert-부틸 4-벤질-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였다 (1 g, 3.17 mmol, 63.4% 수율), LCMS (m/z) 174.1 [M+H]+.
1-벤질-2-메틸피페라진의 합성
디클로로메탄 (DCM) (25 mL) 중 tert-부틸 4-벤질-3-메틸피페라진-1-카르복실레이트 (1.4 g, 4.82 mmol)의 용액에 0℃에서 TFA (1.857 mL, 24.10 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응물을 TLC에 의해 모니터링하였다. 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 잔류물을 디에틸 에테르 (2 x 50 mL)로 연화처리하였다. 생성된 고체를 여과하고, 디에틸 에테르로 세척하였다. 이를 감압 하에 건조시켜 1-벤질-2-메틸피페라진 트리플루오로아세트산 염을 수득하였다 (800 mg, 2.63 mmol, 54.5% 수율).
((R)-2-메틸모르폴리노)(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논의 합성:
트리포스겐 (0.529 g, 1.783 mmol)을 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 트리에틸아민 (1.243 mL, 8.92 mmol) 및 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀 (0.45 g, 1.783 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 1시간 동안 교반한 다음, (R)-2-메틸모르폴린 히드로클로라이드 (0.368 g, 2.68 mmol)를 첨가하고, 15시간 동안 70℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: 에틸 아세테이트 중 10% MeOH; UV 활성; Rf~0.4). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피를 통해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (R)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논을 점착성 화합물로서 수득하였다 (0.2g, 0.514 mmol, 32.4% 수율), LCMS (m/z) 380.3 (M+H)+.
((S)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논의 합성
트리포스겐 (0.470 g, 1.585 mmol)을 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 트리에틸아민 (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀 (0.4g, 1.585 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 1시간 동안 교반한 다음, (S)-2-메틸모르폴린 히드로클로라이드 (0.327 g, 2.378 mmol)를 첨가하고, 15시간 동안 70℃로 가열하였다. 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (100 mL) 및 물 (100 mL)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: 에틸 아세테이트 중 10% MeOH; UV 활성; Rf~0.4). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피를 통해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (S)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논을 점착성 화합물로서 수득하였다 (0.2g, 0.514 mmol, 32.4% 수율), LCMS (m/z) 480.3 (M+H)+.
실시예 1. (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트의 합성:
온도계, 환류 응축기, 및 기계식 교반기가 구비된 2 L 플라스크에 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (100 g, 0.52 mol), (S)-아스파르트산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드 (205 g, 1.04 mol), NaHCO3 (174 g, 2.07 mol) 및 테트라히드로푸란 1 L를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 16시간 동안 교반하고, 2,6-디클로로피리딘의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 농축 건조시키고, 잔류물을 에틸 아세테이트 1 L에 녹였다. 용액을 목탄 200 g과 함께 주위 온도에서 2시간 동안 교반하고, 목탄을 여과하고, 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 200 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켜 조 생성물 (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (180 g)를 황색 오일로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
MS (ESI) C11H12ClN3O6, 계산치: 317.0; 실측치: 318.0 (M+H)+.
유사한 절차를 사용하여 (R)-아스파르트산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드로 출발하여 (R)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트를 제조할 수 있었다.
단계 2. (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트의 합성:
온도계, 환류 응축기, 및 기계식 교반기가 구비된 5L 3구 플라스크에 조 물질 (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (180 g, 0.52 mol), 철 분말 (146 g, 2.59 mol), 2-프로판올 2 L, 및 물 700 mL를 채웠다. 혼합물을 40℃에서 교반하고, 아세트산 (15.5 g, 0.259 mmol)을 70℃ 미만의 내부 온도를 유지하기에 충분한 속도로 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 30분 동안 교반하고, HPLC는 반응이 완결되었음을 나타내었다. 혼합물을 40℃로 냉각시킨 다음, Na2CO3 (165 g, 1.55 mol)을 첨가하고, 혼합물을 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과한 다음, 고체를 테트라히드로푸란 (3 x 500 mL)으로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 잔류물을 에탄올 1 L 중에서 12시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 차가운 에탄올로 세척하였다. 이를 진공 하에 건조시켜 (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트를 회백색 고체로서 수득하였다 (91 g, 68%).
MS (ESI) C10H10ClN3O3, 계산치: 255.0; 실측치: 256.0 (M+H)+.
유사한 절차를 사용하여 (R)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트로 출발하여 (R)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트를 제조할 수 있었다.
단계 3. (S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올의 합성:
기계식 교반기, 환류 응축기, 및 질소 유입구가 구비된 5L 3구 플라스크에 LiAlH4 (60 g, 1.58 mol)를 채웠다. 플라스크를 빙조로 냉각시킨 다음, 테트라히드로푸란 500 mL를 첨가하였다. 교반 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 테트라히드로푸란 2 L 중 (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트 (81 g, 0.32 mol)의 용액을 첨가하면서, 5℃ 미만의 내부 온도를 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 환류 하에 16시간 동안 가열하고, HPLC에 의해 생성물의 출현을 모니터링하였다. 에스테르 환원은 급속하게 발생하는 한편, 락탐 환원은 완전한 환원을 위해 더 오래 필요하였다. 반응물을 5℃로 냉각시킨 다음, 물 60 mL를 첨가하면서, 10℃ 미만의 내부 온도를 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 다음에, 15% (w/w) NaOH(수성) 60 mL를 첨가하고, 내부 온도를 5℃ 미만으로 유지하였다. 첨가가 완결된 후, 반응물을 15분 동안 교반하였다. 후처리를 완결하기 위해, 물 180 mL를 첨가한 다음, 혼합물을 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 테트라히드로푸란 (3 x 150 mL)으로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 (S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올을 갈색 고체로서 수득하였다 (55 g, 81%).
MS (ESI) C9H12ClN3O, 계산치: 213.1; 실측치: 214.1 (M+H)+.
유사한 절차를 사용하여 (R)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트로 출발하여 (R)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올을 제조할 수 있었다.
단계 4. (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
CH2Cl2 500 mL 중 (S)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올 (50 g, 0.234 mol)의 용액에 트리에틸아민 (95 g, 0.936 mol)을 첨가하였다. 혼합물을 주위 온도에서 균질할 때까지 교반한 다음, 이를 0℃로 냉각시켰다. 다음에, POCl3 (54 g, 0.351 mol)을 적가하면서 온도를 0℃에서 유지하였다. 냉각을 제거하고, 반응물을 2시간 동안 주위 온도에서 교반하고, 출발 알콜의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터핑하였다. 반응이 완결된 후, 1.2M NaHCO3(수성) 200 mL를 첨가하였다. 층을 분리하고, 수성 층을 CH2Cl2로 추출하였다. 합한 CH2Cl2 층을 1M HCl(수성) (4 x 300 mL)로 추출하고, 합한 HCl 층을 NaHCO3(포화)을 사용하여 pH = 8로 조정하였다. 생성된 혼합물을 CH2Cl2 (4 x 300 mL)로 추출하고, 합한 CH2Cl2 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 목탄 50 g으로 처리하였다. 혼합물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반하고, 목탄을 통해 여과하고, 목탄을 추가의 CH2Cl2 200 mL로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척액을 농축 건조시켰다. 고체 잔류물을 진공 하에 건조시켜 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 회백색 결정질 고체로서 수득하였다 (30 g, 66%).
MS (ESI) C9H10ClN3, 계산치: 195.1; 실측치: 196.1 (M+H)+.
유사한 절차를 사용하여 (R)-2-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올로 출발하여 (4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다.
단계 5. (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
(4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.88 g, 9.6 mmol), (3-트리플루오로메틸페닐)보론산 (2.4 g, 12.6 mmol), Pd(OAc)2 (0.228 g, 1.02 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (0.972 g, 2.04 mmol), 및 Cs2CO3 (6.6 g, 20.4 mmol)의 혼합물을 디옥산/H2O (50 mL, v/v = 9:1) 중에 용해시켰다. 반응 혼합물을 90℃로 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 이를 EtOAc (120 mL)로 희석하고, 물로 세척하였다. 수성 층을 EtOAc로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 0에서 100% EtOAc 구배)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 담황색 고체로서 수득하였다 (2.26 g, 77%).
MS (ESI) C16H14F3N3, 계산치: 305.1; 실측치: 306 [M+H].
Pd(OAc)2를 사용하는 유사한 커플링 절차를 사용하여 적절한 3-치환된 페닐보론산 또는 에스테르를 사용함으로써 (4S)-7-(3-치환된 페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다. 유사한 거울상이성질체를 (4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 출발하여 제조할 수 있었다.
단계 6. (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
THF (4 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.100 g, 0.328 mmol) 및 Et3N (160 μL, 1.15 mmol)의 용액에 트리포스겐 (0.050 g, 0.164 mmol)을 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, 2-피리딜아민 (0.092 g, 0.983 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃로 밤새 가열하고, 반응 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 CH2Cl2 (30 mL)에 녹였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 0에서 100% EtOAc 구배)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.086 g, 62%).
MS (ESI) C22H18F3N5O, 계산치: 425.2; 실측치: 426.2 [M+H].
유사한 절차를 사용하여 2-피리딜아민을 적절한 아민 모이어티로 치환함으로써 다양한 (4S)-7-(3-트리플루오로메틸페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다. 유사한 거울상이성질체를 (4R)-7-(3-트리플루오로메틸페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드로 출발하여 제조할 수 있었다. 유사하게, (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-N-(아릴)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 및 적절한 아민 모이어티로부터 이 일반적 절차에 의해 제조할 수 있었다.
실시예 2. (4S)-N-페네틸-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
CH2Cl2 (10 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.100 g, 0.326 mmol)의 용액에 0℃에서 피리딘 (0.0775 g, 0.980 mmol) 및 페닐 클로로포르메이트 (0.06117 g, 0.392 mmol)를 첨가하였다. 2시간 후, 혼합물을 포화 수성 Na2CO3으로 켄칭하고, CH2Cl2 (3 x 75 mL)로 추출하고, 염수로 세척하고, Na2SO3으로 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트를 수득하였다 (0.120 g, 수율 84%).
MeCN (3 mL) 중 (4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트, 2-페닐에탄아민 (0.057 g, 0.470 mmol), 및 DMAP (0.035 g, 0.282 mmol)를 80℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 정제용-TLC에 의해 CH2Cl2:MeOH (10:1)로 용리시키면서 정제하여 (4S)-N-페네틸-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.020 g, 수율 18%).
MS (ESI) C25H23F3N4O, 계산치: 452.18; 실측치: 453 [M+H].
실시예 3. (4S)-N-(3-(3-아미노프로프-1-인-1-일)-5-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
디옥산 (10 mL) 중 4N HCl 중 (4S)-N-(3-(3-아미노프로프-1-인-1-일)-5-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (A, 0.050 g, 0.08 mmol)의 현탁액을 실온에서 16시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시키고, CH3CN으로 연화처리하였다. 잔류물을 CH3CN:H2O 중에 용해시키고, 동결건조시켜 (4S)-N-(3-(3-아미노프로프-1-인-1-일)-5-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.030 g, 수율 70%).
MS (ESI) C29H23F3N6O2, 계산치: 544.18; 실측치: 545 [M+H].
실시예 4. (4S)-N-메틸-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.267 g, 0.63 mmol)를 디메틸아세트아미드 중에 용해시키고, 1 당량의 NaH (0.025 g, 오일 중 60%)를 첨가하였다. 용액을 5분 동안 교반한 후, MeI (39 μL)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 에틸 아세테이트로 희석하고, 염수 (2x), 물 (2x), 및 염수로 후속적으로 세척하였다. 용액을 건조시키고 (Na2SO4), 감압 하에 농축시키고, 실리카 겔 카트리지 (에틸 아세테이트: 펜탄 용리액) 상에 로딩하였다. 순수한 분획을 농축시켜 순수한 (4S)-N-메틸-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다.
MS (ESI) C23H20F3N5O, 계산치: 439.16; 실측치: 440.1 [M+H].
실시예 5. (4S)-N-(3-플루오로피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
페닐 클로로포르메이트 (1.46 g, 9.37 mmol)를 THF (10 mL) 중 3-플루오로피리딘-4-아민 (1 g, 8.92 mmol) 및 피리딘 (0.95 mL, 11.16 mmol)의 냉각된 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 정제용-TLC에 의해 정제하여 페닐 (3-플루오로피리딘-4-일)카르바메이트를 황색 고체로서 수득하였다.
아세토니트릴 3 mL 중 페닐 (3-플루오로피리딘-4-일)카르바메이트 (72 mg, 0.31 mmol), (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (50 mg, 0.16 mmol) 및 DMAP (24 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 정제용-TLC 상에 직접 로딩하고, 용리액으로서 에틸 아세테이트/석유 에테르 = 1:3~1:8을 사용하여 정제하여 (4S)-N-(3-플루오로피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (18 mg, 25%).
MS (ESI) C22H17F4N5O, 계산치: 443.1; 실측치: 444.1 [M+H].
페닐 카르바메이트를 사용하는 이 일반적 우레아 형성 절차를 사용하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 적절한 (4S)-7-(아릴)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 치환하고 3-플루오로피리딘-4-아민을 적절한 아민 모이어티로 치환하여 다양한 (4S)-7-(아릴)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다. 거울상이성질체 시리즈를 (4R)-7-(아릴)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 출발하여 제조할 수 있었다.
실시예 6. (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
디옥산/H2O (10 mL/1 mL)에 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 2.56 mmol), (3-클로로페닐)보론산 (807 mg, 5.11 mmol), Pd(dppf)Cl2 (212 mg, 0.26 mmol), 및 Cs2CO3 (2.08 g, 6.4 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (에틸 아세테이트/ 석유 에테르 = 1/4)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (506 mg, 81%).
MS (ESI) C15H14ClN3, 계산치: 271.1, 실측치: 272.1 [M+H].
유사한 절차를 사용하여 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용하여 (4S)-7-(3-플루오로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 또는 (4S)-7-(3-메톡시페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다. 거울상이성질체 시리즈를 적절한 (4R)-7-(3-치환된 페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 출발하여 제조할 수 있었다. 또한 이 방법을 통해 적절한 출발 클로라이드를 사용하여 제조할 수 있었다: (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, (9R)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, 3-((9R)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)벤조니트릴, 3-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)벤조니트릴, (9S)-2-(5-(메틸술포닐)피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, (9S)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, N,N-디메틸-3-((9R)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)아닐린, N,N-디메틸-3-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)아닐린, (9S)-2-(6-메틸피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, (9S)-2-(피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신, (9S)-2-(3-클로로페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신.
단계 2. (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
페닐 클로로포르메이트 (6.99 mL, 55.79 mmol)를 THF (50 mL) 중 2-피리딜아민 (5 g, 53.10 mmol) 및 피리딘 (5.65 mL, 66.41 mmol)의 냉각된 용액에 적가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 염수를 천천히 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 포화 중탄산나트륨 및 염수로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 석유 에테르로 세척하여 페닐 피리딘-2-일카르바메이트를 수득하였다 (2.1 g, 18%).
아세토니트릴 3 mL 중 페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (66 mg,0.30 mmol), (4S)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (40 mg, 0.15 mmol) 및 DMAP (23 mg, 0.18 mmol)의 혼합물을 65℃에서 밤새 교반하였다. 반응 진행을 TLC 및 LC-MS에 의해 모니터링하였다. 혼합물을 정제용-TLC 상에 직접 로딩하고, 용리액으로서 에틸 아세테이트/석유 에테르 = 1:3~1:8을 사용하여 (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (28 mg, 48%).
MS (ESI) C21H18ClN5O, 계산치: 391.1; 실측치: 392.1 [M+H].
페닐 카르바메이트를 사용하는 이 일반적 우레아 형성 절차를 사용하여 (4S)-7-(3-클로로, -플루오로 또는 -메톡시페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 및 적절한 아민 모이어티를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(3-클로로, -플루오로, 또는 -메톡시페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다. 거울상이성질체 시리즈를 적절한 (4R)-7-(3-치환된 페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 출발하여 제조할 수 있었다. 유사하게, (9S)-2-(5-플루오로- 또는 클로로피리딘-3-일)-N-(아릴)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 이 우레아 형성 절차를 통해 제조할 수 있었다; 출발 (9S)-2-(5-플루오로- 또는 클로로피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신에 대해 하기 실시예 참조.
(4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (상기 단계 1 및 2)를 제조하는데 사용되는 유사한 절차를 사용하여 상업적으로 입수가능한 보론산 에스테르로 출발하여 하기 화합물을 제조할 수 있다:
실시예 7. (9S)-2-(5-클로로피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 제조:
단계 1. (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)글루타레이트의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 40.0 g (207 mmol), L-글루탐산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드 87.7 g (414 mmol), 및 NaHCO3 69.6 g (829 mmol)의 혼합물에 테트라히드로푸란 600 mL를 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 교반하면서, 2,6-디클로로-3-니트로피리딘의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 10/1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 60 g (87%)을 황색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C12H14ClN3O6, 계산치: 331.0; 실측치: 332.1 (M+H)+.
단계 2. (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트 20 g (60.2 mmol) 및 철 분말 16.8 g (301 mmol)의 혼합물에 2-프로판올 375 mL에 이어서 물 125 mL를 첨가하였다. 교반 혼합물에 아세트산 5.5 g (90.3 mmol)을 첨가한 다음, 반응물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 출발 물질의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 2-프로판올 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 농축 건조시킨 다음, 잔류물을 진공 하에 건조시켜 생성물 15 g (81%)을 암황색 고체로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
MS (ESI) C11H12ClN3O3, 계산치: 269.0; 실측치: 270.1.
단계 3. (S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. N2 하에 테트라히드로푸란 (THF) 260 mL 중 AlCl3 17.78 g (133.3 mmol)에 THF 중 2M LiAlH4의 용액 200 mL를 기체 발생을 제어하는 속도로 적가하였다. 이와 같이 하여 THF 중 알란 (AlH3)의 용액을 수득하였다. 분리형 플라스크에서, THF 460 mL 중 (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트 26.0 g (96.4 mmol)의 용액을 N2 하에 제조한 다음, 드라이 아이스/아세톤 조로 냉각시켰다. 이에 교반 하에 알란 용액을 2시간에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완결되었을 때, 냉각 조를 제거하고, 반응물을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 1.5시간 후, LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었다. 다음에, 물 65 mL 중 17.6 g NaOH의 용액을 H2의 발생이 제어되도록 천천히 첨가하였다. 현탁액을 18시간 동안 교반되도록 한 다음, 고체를 여과하였다. 침전물을 에틸 아세테이트로 세척한 다음, 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (330 g 사전 패킹된 칼럼)에 의해 CH2Cl2에 이어서 CH2Cl2 중 0에서 10% 메탄올의 구배로 용리시키면서 정제하여 황색빛 오렌지색 고체 15.21 g (69%)을 수득하였다.
MS (ESI) C10H14ClN3O, 계산치: 227.1; 실측치: 228.1.
단계 4. (5R,9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성:
(S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올 12 g (52.7 mmol)에 48% (w/w) HBr(수성) 160 mL를 첨가한 다음, 반응물을 90℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응물을 출발 알콜의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 이를 주위 온도로 냉각시킨 다음, 1.2 M NaHCO3(수성)을 pH = 8까지 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출한 다음, 유기 상을 염수 (1 x 100 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 2/1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 6.0 g (55%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C10H12ClN3, 계산치: 209.1; 실측치: 210.1.
단계 5. (9S)-tert-부틸 2-클로로-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트의 합성:
5 mL THF 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (1.3g, 6.19 mmol, 주: 5R 입체화학이 암시됨), Boc2O (2.02g, 9.28 mmol, 1.5 당량) 및 DMAP (1.51g, 12.38 mmol, 2.0 당량)를 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 진행을 TLS 및 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (9S)-tert-부틸 2-클로로-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트를 백색 고체로서 수득하였다 (1.3g, 92%).
MS (ESI) C15H20ClN3O2, 계산치: 309.1.
단계 6. (9S)-tert-부틸 2-(5-클로로피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트의 합성:
디옥산/물 (10 mL/1 mL)의 탈기된 혼합물에 (9S)-tert-부틸 2-클로로-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트 (650 mg, 2.096 mmol), (5-클로로피리딘-3-일)보론산 (658 mg, 4.19 mmol), Pd(dppf)Cl2 (171 mg, 0.209 mmol), 및 Cs2CO3 (2.04 g, 6.29 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 3/1)에 의해 정제하여 (9S)-tert-부틸 2-(5-클로로피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트를 수득하였다 (600 mg, 63%).
MS (ESI) C20H23ClN4O2, 계산치: 386.2.
(9S)-tert-부틸 2-(5-플루오로피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트를 동일한 방법을 통해 (5-플루오로피리딘-3-일)보론산으로 출발하여 제조하였다.
단계 7. (9S)-2-(5-클로로피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. (9S)-tert-부틸 2-(5-클로로피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복실레이트 (600 mg, 1.55 mmol)를 HCl/MeOH (1M, 20 mL) 중에 용해시키고, 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 물 (20 mL) 및 K2CO3 (3 g)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, DCM (3x15 mL)으로 추출하여 (9S)-2-(5-클로로피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 수득하였다 (450 mg, 정량적).
MS (ESI) C15H15ClN4, 계산치: 286.1.
(9S)-2-(5-플루오로피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 동일한 방법을 통해 제조하였다.
이들 모이어티를 사용하여 이전 실시예에 기재된 일반적 우레아 커플링 절차를 통해 우레아 화합물을 제조하였다.
실시예 8. (9S)-2-(5-메틸피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 제조:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 탈기된 1,4-디옥산/H2O (20ml, v/v=10/1)에 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (600mg, 2.87mmol), 5-메틸피리딘-3-일보론산 (1.18g, 3.0 당량), PCy3 (644mg, 0.8 당량) 및 Pd2(dba)3 (330mg, 0.2 당량)을 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 110℃로 가열하였다. 110℃에서 12시간 동안 교반한 후, 흑색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 농축물을 EtOAc (300ml) 중에 현탁시키고, 물 (4x80ml), 염수 (80ml)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 농축물을 칼럼 (DCM/MeOH=10/1)에 의해 정제하여 생성물을 담갈색 고체로서 수득하였다 (756mg, 99%).
MS (ESI) C16H18N4, 계산치: 266.1; 실측치: 267.2 [M+H].
이들 조건을 또한 사용하여 적절한 보론산으로 출발하여 (9S)-2-(4-메틸피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 및 4-(3-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)페닐)모르폴린을 제조하였다.
생성된 모이어티를 사용하여 상기 기재된 바와 같은 일반적 우레아 커플링 절차를 통해 우레아 화합물을 제조하였다.
실시예 9. (9S)-N-(피리다진-3-일)-2-(피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 제조:
이 모이어티를 페닐 카르바메이트 대신에 p-클로로페닐 카르바메이트를 사용하여 (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드에 대해 기재된 유사한 카르바메이트 프로토콜을 통해 제조하였다.
MS (ESI) C20H19N7O, 계산치: 373.2; 실측치: 374.3 [M+H].
실시예 10. (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(6-(2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
THF 3 mL 중 6-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-아민 (83 mg, 0.37 mmol) 및 피리딘 (29 mg, 1.37 mmol)의 혼합물에 트리포스겐 (43 mg, 0.14 mmol)을 첨가하였다. 상기 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, (4S)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (50 mg, 0.18 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 60℃에서 밤새 교반하였다. 조 생성물을 정제용-TLC에 의해 정제하여 우레아 중간체를 황색 고체로서 수득하였다. THF (3 mL) 중 이 물질의 용액에 진한 HCl을 첨가하고, 반응물을 실온에서 15분 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3을 첨가하여 pH를 7-8로 조정하였다. 반응 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 유기 층을 염수로 세척하였다. 정제용-TLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-클로로페닐)-N-(6-(2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (8.9 mg, 40%).
MS (ESI) C23H23ClN6O4, 계산치: 482.2; 실측치: 483.1 [M+H].
트리포스겐을 사용하는 이 일반적 우레아 형성 절차를 사용하여 또한 (4S)-7-(3-플루오로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 및 적절한 아민 모이어티를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(3-클로로 또는 -플루오로페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 11. (9S)-2-(3-시아노페닐)-N-(피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 제조:
DIPEA (97 μL, 0.54 mmol)를 실온에서 THF (12 mL) 중 3-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)벤조니트릴 (50 mg, 0.18 mmol) 및 트리포스겐 (27 mg, 0.10 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 30분 동안 가열하였다. 3-아미노피리딘 (102 mg, 1.09 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류 하에 32시간 동안 가열하였다. CH3OH를 실온으로 냉각시킨 후 첨가하였다. 혼합물을 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. TFA 염을 CH3CN 중에 현탁시키고, 1N HCl을 첨가하고, 혼합물을 동결건조시켜 (9S)-2-(3-시아노페닐)-N-(피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 히드로클로라이드 염으로서 수득하였다 (48 mg, 61%).
MS (ESI) C23H20N6O, 계산치: 396.2; 실측치: 397.1 [M+H].
실시예 12. (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 제조:
DMF (3 mL) 중 4-클로로페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (325 mg, 1.31 mmol), (9S)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (70 mg, 0.22 mmol) 및 DMAP (160 mg, 1.31 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 100℃에서 24시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, EtOAc/H2O (60 mL/ 30 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, H2O, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시켰다. 조 생성물을 정제용-TLC (CH2Cl2/EtOAc/CH3OH, 120:40:2로 용리시킴)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 황갈색 고체로서 수득하였다 (80 mg, 83%).
MS (ESI) C22H19F3N6O, 계산치: 440.2; 실측치: 441.2 [M+H].
실시예 13. (4S)-N-(2-메틸-2H-인다졸-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
탈기된 디옥산/H2O (14 mL, v/v=10/1) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]- 디아제핀 (500 mg, 2.55 mmol)의 용액에 2-메틸피리딘-4-보론산 (1.048 g, 7.65 mmol), PCy3 (286 mg, 1.02 mmol), K3PO4·3H2O (1.698 g, 6.375 mmol) 및 Pd2(dba)3 (234 mg, 0.255 mmol)을 첨가하였다. 생성된 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시킨 다음, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc와 물 (각각 50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2/THF = 3/2)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 담황색 고체로서 수득하였다 (418 mg, 82%).
MS (ESI) C15H16N4, 계산치: 252.1; 실측치: 253.2 [M+H].
하기 중간체를 상기 프로토콜을 사용하여 적절한 보론산 및 2-클로로피리딘으로 치환하여 제조하였다. 2-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)벤조니트릴, 5-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)니코티노니트릴
단계 2. (4S)-N-(2-메틸-2H-인다졸-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
CH2Cl2 (18 mL) 중 페닐 클로로포르메이트 (0.2 mL, 1.6 mmol) 및 피리딘 (0.16 mL, 1.95 mmol)의 용액에 2-메틸-2H-인다졸-5-아민 (180 mg, 1.22 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 NaHCO3 용액 (10 mL)으로 켄칭하였다. 수성 상을 CH2Cl2 (10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 헥산 (5 mL x 3)으로 세척하여 페닐 (2-메틸-2H-인다졸-5-일)카르바메이트 (304 mg, 93%)를 수득하였다.
THF (3 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (90 mg, 0.36 mmol), 페닐 (2-메틸-2H-인다졸-5-일)카르바메이트 (285 mg, 1.07 mmol) 및 DMAP (130 mg, 1.07 mmol)의 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 80℃로 가열하였다. 80℃에서 36시간 동안 가열한 후, 이어서 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc (60 mL) 중에 현탁시키고, 여과하였다. 여과물을 물 (20 mL x 3)에 이어서 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 농축물을 정제용-TLC (CH2Cl2/EtOAc/MeOH = 23/1/방울)에 의해 정제하여 (4S)-N-(2-메틸-2H-인다졸-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 갈색 고체로서 수득하였다 (60 mg, 40%).
MS (ESI) C24H23N7O, 계산치: 425.2; 실측치: 426.3 [M+H].
페닐 카르바메이트를 사용하는 이 일반적 우레아 형성 절차를 사용하여 적절한 아민 모이어티를 사용함으로써 다양한 (4S)-N-(아릴)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 14
(4S)-N-(2,6-디에틸페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
질소 분위기 하에 건조 THF (3 mL) 중 2,6-디에틸아닐린 (39.1 mg, 0.262 mmol, 2.0 당량) 및 피리딘 (0.5 ml, 과량)의 혼합물에 트리포스겐 (54.4 mg, 0.183 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하고, (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (40 mg, 0.131 mmol, 1.0 당량)을 반응 혼합물에 첨가하고, 추가로 18시간 동안 교반하였다. 포화 중탄산나트륨 용액 (5 ml) 및 디클로로메탄 (10 ml)을 반응 혼합물에 첨가하고; 유기 층을 연속적으로 물 (10 mL) 및 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용-TLC에 의해 용리액으로서 CH2Cl2 중 15:1 에틸 아세테이트를 사용하여 정제하여 (4S)-N-(2,6-디에틸페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (5.1 mg, 8% 수율).
MS (ESI) C27H27F3N4O, 계산치: 480.21; 실측치: 481 [M+H].
트리포스겐을 사용하는 이 일반적 우레아 형성 절차를 사용하여 적절한 아민 모이어티로 치환하여 다양한 2,6-디에틸아닐린에 대한 (4S)-7-(3-트리플루오로메틸페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 15. (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
DMF (8 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 2.04 mmol), 페닐 피라진-2-일카르바메이트 (1.32 g, 6.13 mmol) 및 DMAP (249 mg, 2.04 mmol)의 혼합물을 밀봉된 플라스크에서 82℃로 가열하였다. 22시간 동안 가열한 후, 이어서 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 혼합물을 물 (8 mL x 9)에 이어서 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (CH2Cl2/ MeOH = 50/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (600 mg, 93%).
MS (ESI) C14H13ClN6O, 계산치: 316.1.
이 일반적 절차를 사용하여 적절한 카르바메이트 모이어티로 치환하여 다양한 페닐 피라진-2-일카르바메이트에 대한 (4S)-7-클로로-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
단계 2. (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
톨루엔/EtOH/H2O (1.9 mL, v/v/v = 10/6/3) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (40 mg, 0.126 mmol), 2-메틸피리딘-4-보론산 (44 mg), 및 NaHCO3 (32 mg)의 혼합물에 질소 분위기 하에 PdCl2(PPh3)2 (9 mg)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 6시간 동안 가열하였다. 2-메틸피리딘-4-보론산 (44 mg), NaHCO3 (32 mg), 및 PdCl2(PPh3)2 (8 mg)의 또 다른 부분을 첨가하고, 혼합물을 탈기하였다. 환류 하에 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 농축물을 EtOAc (30 mL) 및 물 (5 mL) 중에 현탁시켰다. 수현탁액을 EtOAc (8 mL)로 추출하였다. 합한 EtOAc 상을 염수 (10 mL)로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용-TLC (CH2Cl2/MeOH = 50/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (18 mg, 38%).
MS (ESI) C20H19N7O, 계산치: 373.2; 실측치: 374.3 [M+H].
PdCl2(PPh3)2를 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 적절한 (4S)-7-클로로-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 16. (4S)-7-(3-((R)-3-플루오로피롤리딘-1-일)페닐)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
디옥산/H2O (1.5 mL, v/v = 9/1) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (40 mg, 0.126 mmol), (R)-3-플루오로-1-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)피롤리딘 (74 mg, 0.252 mmol), Pd(OAc)2 (2 mg, 0.0126 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (12 mg, 0.0252 mmol), 및 Cs2CO3 (82 mg, 0.252 mmol)의 혼합물을 밀봉된 플라스크 중에서 110℃에서 가열하였다. 밤새 가열한 후, 혼합물을 냉각시키고, 여과하여 불용성 물질을 제거하였다. 여과물을 EtOAc (30 mL)로 희석하고, H2O (5 mL x 2)로 세척하고, 염수 (5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용-TLC (CH2Cl2/EtOAc = 3/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-((R)-3-플루오로피롤리딘-1-일)페닐)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (18 mg, 32%).
MS (ESI) C24H24FN7O, 계산치: 445.2; 실측치: 446.3 [M+H].
Pd(OAc)2를 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 적절한 (4S)-7-클로로-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(3- 및 2-치환된 페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 (4S)-7-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 17. (4S)-7-(3-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
DMF (6 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.53 mmol), 페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (986 mg, 4.59 mmol) 및 DMAP (188 mg, 1.53 mmol)의 혼합물을 밀봉된 플라스크 중에서 탈기하고, 80℃로 가열하였다. 80℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc/H2O (150 mL/50 mL)로 분배하였다. 유기 상을 물 (20 mL x 6), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켰다. 이어서, 농축물을 칼럼 (CH2Cl2/EtOAc = 1/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (409 mg, 84%).
MS (ESI) C15H14ClN5O, 계산치: 315.1; 실측치: 316.1 [M+H].
단계 2. (4S)-7-(3-히드록시페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드:
디옥산/H2O (3 mL, v/v = 9/1) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (80 mg, 0.284 mmol), (3-히드록시페닐)보론산 (78 mg, 0.568 mmol), Pd(OAc)2 (6 mg, 0.0384 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (27 mg, 0.0568 mmol) 및 Cs2CO3 (185 mg, 0.568 mmol)의 혼합물을 탈기하고, 밀봉된 튜브 중에서 밤새 110℃에서 가열한 다음, 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 농축물을 EtOAc (20 mL) 중에 현탁시키고, 물 (5 mL x 2), 염수 (5 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 (CH2Cl2/EtOAc = 1/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-히드록시페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (65 mg, 61%).
MS (ESI) C21H19N5O2, 계산치: 373.2; 실측치: 374.2 [M+H].
단계 3. (4S)-7-(3-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
DMF (3 mL) 중 (4S)-7-(3-히드록시페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (90 mg, 0.241 mmol)의 용액에 NaH (24 mg, 0.603 mmol)를 첨가하였다. 실온에서 30분 동안 교반한 후, (S)-4-(클로로메틸)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란 (217 mg, 1.45 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 밀봉된 플라스크에서 85℃로 32시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc로 희석하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 농축물을 CH2Cl2 (3 mL) 중에 용해시키고, 디옥산 중 HCl 용액 (6 mL)을 첨가하였다. 이와 같이 하여 수득한 혼합물을 실온에서 4시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 농축된을 포화 NaHCO3 (5 mL) 중에 현탁시켰다. 혼합물을 CH2Cl2 (5 mL x 3)로 추출하고, 합한 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용-TLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 분말로서 수득하였다 (24 mg, 33%).
MS (ESI) C24H25N5O4, 계산치: 447.2; 실측치: 448.3 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 적절한 (4S)-7-(3-히드록시페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(3-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)페닐)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 18. (4S)-7-(1-프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-클로로-N-(피라딜-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
메틸렌 클로라이드 (30 mL) 중에 DIEA (1.7 mL, 9.78 mmol, 3.0 당량)와 합해진 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (999 mg, 3.26 mmol, 1.0 당량)을 빙조 상에서 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 트리포스겐 (482 mg, 1.63 mmol, 0.5 당량)을 여러 작은 부분으로 교반하는 용액에 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 반응물을 실온으로 가온되도록 하였다. 이어서, 반응물을 밤새 교반하였다. 이어서, 피리딘-3-아민 (800 mg, 3.60 mmol, 1.1 당량)을 작은 부분으로 수분에 걸쳐 천천히 첨가하였다. 이어서, 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 물 (100 mL)로 처리하고, EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 상을 분리하고, 유기 상을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 15-100% (EtOAc/ 펜탄)의 구배를 사용하여 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(피라딜-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (761 mg, 수율 47%).
MS (ESI) C15H14ClN5O, 계산치, 315.1; 실측치, 315.7 [M+H].
단계 2. (4S)-7-(1-프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드:
표제 화합물을 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다: 디옥산/H2O (5 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라딜-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (100 mg, 0.32 mmol, 1.0 당량), 1-에틸-1H-피라졸-4-보론산 (151 mg, 0.64 mmol, 2.0 당량), Pd(dppf)Cl2 (26.7 mg, 0.06 mmol, 0.2 당량) 및 Cs2CO3 (208 mg, 0.64 mmol, 2.0 당량)의 혼합물을 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. 물을 첨가하고, 혼합물을 EtOAc로 추출하였다. 유기부를 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시키고, 정제용-TLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(1-프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (37.1 mg, 수율 30%).
MS (ESI) C21H23N7O 계산치, 389.2; 실측치, 390.3 [M+H].
Pd(dppf)Cl2를 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르 모이어티로 치환하여 다양한 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-보론산에 대한 (4S)-7-(피리딘-3-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 19
(4S)-7-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온의 합성:
표제 화합물을 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다: 피콜린산 (81.2 mmol 10.0 g, 1 당량)을 톨루엔 250 mL 중에 현탁시켰다. 디페닐 포스포릴 아지드 (92.6 mmol, 1.14 당량) 20.0 mL를 첨가하였다. 트리에틸아민 (95.8 mmol, 1.18 당량) 13.4 mL를 적가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 80℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하였다. 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 및 펜탄으로 세척하였다. 고체를 고진공 하에 건조시켰다. 갈색 고체 6.46 g (66% 수율)을 수득하였다.
MS (ESI) C15H14ClN5O, 계산치: 240.06; 실측치: 241.31 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 6원 방향족 고리 상의 2 위치에서 질소 헤테로원자를 보유하는 적절한 헤테로아릴 카르복실산으로 치환하여 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 및 3-(피라진-2-일)-2H-피라지노[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온을 제조할 수 있었다.
단계 2. (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
표제 화합물을 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다: (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (2.0 g, 10.2 mmol, 1.0 당량)을 2-메틸-테트라히드로푸란 (40 mL) 중에 용해시키고, 실온에서 NaH (1.7 g, 30.6 mmol, 3.0 당량)로 처리하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (2.4 g, 10.2 mmol, 1.0 당량)을 첨가한 다음, 반응물에 환류 응축기를 구비하고, 80℃로 밤새 가열하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 빙조 상에 두고, NaHCO3 (65 mL)의 느린 첨가에 의해 켄칭하였다. 이어서, 조 반응물을 3x EtOAc (각각 75 mL)로 추출하고, 유기부를 무수 MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 반응물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 10-100% EtOAc/펜탄의 구배를 사용하여 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (2.5 g, 78%).
MS (ESI) C15H14ClN5O, 계산치: 315.09; 실측치: 316.10 [M+H].
단계 3. (4S)-7-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
(4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (79 mg, 0.250 mmol, 1.0 당량)를 Pd2(dba)3 (2.3 mg, 0.006 mmol, 0.02 당량), K3PO4 (80 mg, 0.380 mmol, 2 당량), S-Phos (4.8 mg, 0.012 mmol, 0.05 당량)와 합하고, 플라스크를 N2로 퍼징하고, 밀봉하였다. 이어서, N-부탄올 (1 mL)을 시린지를 통해 첨가하고, 반응을 100℃로 3시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 여과한 다음, 역상 크로마토그래피를 통해 구배 5-95% CH3CN/H2O (0.1% TFA)를 사용하여 정제하여 (4S)-7-(2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (11 mg, 10%).
C15H14ClN5O: 437.13; 실측치: 438.17 [M+H].
Pd(dppf)Cl2를 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 2,2-디플루오로벤조[d][1,3]디옥솔-5-보론산을 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르 모이어티로 치환하여 다양한 (4S)-7-(피리딘-2-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 (4S)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 20. (4S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-7-(2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-클로로-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
DMF (7 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (280 mg, 1.43 mmol), 4-클로로페닐 (5-플루오로피리딘-2-일)카르바메이트 (1.14 g, 4.29 mmol) 및 DMAP (174 mg, 1.43 mmol)의 혼합물을 밀봉된 플라스크에서 80℃로 가열하였다. 80℃에서 밤새 교반한 후, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (100 mL)로 희석하였다. 유기 상을 물 (50 mL x 1, 10 mL x 6)에 이어서 염수 (50 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 이어서, 농축물을 칼럼 (CH2Cl2/EtOAc = 1/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (360 mg, 75%).
MS (ESI) C15H13ClFN5O, 계산치: 333.1.
단계 2. (4S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-7-(2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
탈기된 디옥산/H2O (2 mL, v/v =9/1) 중 (4S)-7-클로로-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (50 mg, 0.149 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)피리딘 (102 mg, 0.298 mmol), PCy3 (8 mg, 0.0298 mmol), Pd2(dba)3 (14 mg, 0.0149 mmol), 및 K3PO4·3H2O (79 mg, 0.373 mmol)의 혼합물을 밀봉된 플라스크에서 120℃로 가열하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, EtOAc (60 mL)로 희석하였다. 희석 용액을 H2O (20 mL x 1, 10 mL x 5) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 정제용-TLC (CH2Cl2/EtOAc/MeOH = 3/1/2 방울)에 의해 정제하여 (4S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-7-(2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (54 mg, 71%).
MS (ESI) C25H23F4N7O, 계산치: 513.2; 실측치: 514.3 [M+H].
Pd2(dba)3을 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 적절한 (4S)-7-클로로-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르를 사용함으로써 다양한 (4S)-7-(2-(3-치환된-피롤리딘-1-일) 피리딘-4-일)-N-(아릴)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 21. (4S)-7-(3-클로로페닐)-9-메톡시-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. 2,6-디클로로-4-메톡시피리딘의 합성:
MeOH 중 2,4,6-트리클로로피리딘 (30 g, 165 mmol)의 용액에 소듐 메톡시드 (10.7 g, 197 mmol)를 천천히 첨가하였다. 혼합물을 밤새 교반하고, 물 300 ml로 켄칭하였다. 현탁액을 여과하고, 물 및 석유 에테르로 세척하여 2,6-디클로로-4-메톡시피리딘을 백색 고체로서 수득하였다 (18.0 g, 61% 수율).
MS (ESI) C6H5Cl2NO, 계산치: 176.97.
단계 2. 2,6-디클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘의 합성:
황산 (110 mL) 중 2,6-디클로로-4-메톡시피리딘 (18.1 g, 102 mmol)의 용액에 질산 (15.6 mL)을 0℃에서 적가한 다음, 혼합물을 100℃로 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, 현탁액을 여과하고, 물로 세척하여 2,6-디클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘을 백색 고체로서 수득하였다 (19.9 g, 88% 수율).
MS (ESI) C6H4Cl2N2O3, 계산치: 221.96.
단계 3. (S)-디-tert-부틸 2-((6-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트의 합성:
DMF (150 mL) 중 2,6-디클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘 (14.5 g, 65 mmol) 및 (S)-1,4-디-tert-부톡시-1,4-디옥소부탄-2-염화아미늄 (22 g, 78 mmol)의 용액에 DIEA (32.3 mL)를 첨가하고, 혼합물을 80℃로 3시간 동안 가열하였다. DMF를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 중에 용해시키고, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 10% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (S)-디-tert-부틸 2-((6-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트를 황색 오일로서 수득하였다 (4.8 g, 16% 수율).
MS (ESI) C18H26ClN3O7, 계산치: 431.15.
단계 4. (S)-tert-부틸 2-(6-클로로-8-메톡시-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트의 합성:
AcOH (60 ml) 중 (S)-디-tert-부틸 2-((6-클로로-4-메톡시-3-니트로피리딘-2-일)아미노)숙시네이트 (4.7 g, 10.9 mmol)의 혼합물에 철 분말 (6.107 g, 109 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 1 N NaOH로 켄칭하고, 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기부를 염수로 세척하고, 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 40% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (S)-tert-부틸 2-(6-클로로-8-메톡시-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트를 황색 오일로서 수득하였다 (1.87 g, 52% 수율).
MS (ESI) C14H18ClN3O4, 계산치: 327.10.
단계 5. (S)-2-(6-클로로-8-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올의 합성:
THF (20 mL) 중 (S)-tert-부틸 2-(6-클로로-8-메톡시-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)아세테이트 (1.7 g, 5.2 mmol)의 용액에 BH3-Me2S (5.2 mL, Me2S 중 10 M, 52 mL)를 첨가한 다음, 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 반응물을 물의 적가로 켄칭한 다음, 1N 수성 HCl (10 mL)을 첨가하고, 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3을 첨가하고, 혼합물을 CH2Cl2로 추출하고, 오일로 농축시켰다. 오일을 CH2Cl2 (15 mL) 중 TFA (15 mL)로 2시간 동안 처리하고, DCM 및 TFA를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 MeOH (20 mL) 중에 용해시키고, Cs2CO3 (2 g)을 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (30:1 CH2Cl2/MeOH)에 의해 정제하여 (S)-2-(6-클로로-8-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올을 황색 오일로서 수득하였다 (997 mg, 79% 수율).
MS (ESI) C10H14ClN3O2, 계산치: 243.08.
단계 6. (4S)-7-클로로-9-메톡시-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
CH2Cl2 (50 mL) 중 PPh3 (1.003 g, 3.83 mmol)의 용액에 DDQ (869 mg, 3.83 mmol)를 첨가한 다음, (S)-2-(6-클로로-8-메톡시-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄올 (620 mg, 2.55 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (석유 에테르 중 33에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (4S)-7-클로로-9-메톡시-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 황색 고체로서 수득하였다 (413 mg, 72% 수율).
MS (ESI) C10H12ClN3O, 계산치: 225.07.
단계 7. (4S)-7-(3-클로로페닐)-9-메톡시-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
10:1 디옥산/물 (6 mL) 용액 중 (4S)-7-클로로-9-메톡시-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (226 mg, 1.0 mmol, (3-클로로페닐)보론산 (187 mg, 1.2 mmol), Cs2CO3 (654 mg, 2.0 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2.DCM (40 mg, 0.05 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 가열하였다 (130℃ x 1시간). 반응 혼합물을 농축 건조시키고, CH2Cl2 중에 현탁시키고, 포화 NaHCO3, 물, 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 반응 혼합물을 처음에 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2 중 0에서 10% MeOH 구배)에 의해 정제하고, 후속적으로 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 반응물을 동일한 규모로 2회 반복하고, 합한 HPLC 분획을 동결건조시켜 (4S)-9-메톡시-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (199 mg, 33% 수율).
MS (ESI) C16H16ClN3O, 계산치: 301.10; 실측치: 302 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 (3-클로로페닐)보론산을 (3-(트리플루오로메틸)페닐)보론산으로 치환하여 (4S)-9-메톡시-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다.
단계 8. (4S)-7-(3-클로로페닐)-9-메톡시-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
THF (10 mL) 중 (4S)-7-(3-클로로페닐)-9-메톡시-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (60 mg, 0.2 mmol)의 용액에 미네랄 오일 중 60% NaH 현탁액 (24 mg, 1 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 가열하고, 3-(피라진-2-일)-2H-피라지노[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (73 mg, 0.3 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 환류 하에 추가로 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축 건조시키고, 포화 NaHCO3으로 희석하고, CH2Cl2 (3x)로 추출하였다. 유기부를 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (4S)-7-(3-클로로페닐)-9-메톡시-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (54 mg, 64% 수율).
MS (ESI) C21H19ClN6O2, 계산치: 422.13; 실측치: 423 [M+H].
실시예 22. (4S)-9-메톡시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
아세토니트릴 15 ml 중 페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (191.6 mg, 0.8995 mmol), (4S)-9-메톡시-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (150 mg, 0.4477 mmol) 및 DMAP (65.55 mg, 0.5373 mmol)의 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 정제용-TLC 상에 직접 로딩하고, 정제하여 (용리액으로서 에틸 아세테이트를 사용) (4S)-9-메톡시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (150 mg, 수율: 74%).
MS (ESI) C23H20F3N5O2, 계산치: 455.2; 실측치: 456 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 페닐 피리딘-2-일카르바메이트를 적절한 카르바메이트 모이어티로 치환하여 (4S)-9-메톡시-N-(아릴)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 23. (4S)-9-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
질소 분위기 하에, 건조 CH2Cl2 3 ml 중 (4S)-9-메톡시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (50 mg, 0.1098 mmol)의 혼합물에 BBr3 (0.5 mL, 0.5494 mmol)을 0℃에서 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 50℃에서 밤새 교반하였다. 중탄산나트륨 용액 (5 mL) 및 디클로로메탄 (10 mL)을 반응 혼합물에 첨가하고, 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨으로 건조시키고, 진공 하에 농축시켰다. 조 생성물을 정제용-TLC에 의해 용리액으로서 (CH2Cl2 중 1:20 MeOH)를 사용하여 정제하여 (4S)-9-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (18 mg, 35% 수율).
MS (ESI) C22H18F3N5O2, 계산치: 441.1; 실측치: 442 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 (4S)-9-메톡시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 적절한 (4S)-9-메톡시-N-(아릴)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드로 치환하여 ((4S)-9-히드록시-N-(아릴)-7-(3 (트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 24. (4S)-N-(4-((3-(3-메틸-3H-디아지리딘-3-일)프로판아미도)메틸)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
DMF (2 mL) 중 (4S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드 (49 mg, 0.1 mmol), 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 3-(3-메틸-3H-디아지린-3-일)프로파노에이트 (23 mg, 0.1 mmol), 및 트리에틸아민 (70 μL, 0.5 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 물 (10 mL) 및 포화 NaHCO3 (5 mL)을 첨가하고, 반응 혼합물을 CH2Cl2 (3x)로 추출하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2 중 0에서 10% MeOH 구배) 상에서 정제하고, 농축시키고, 디에틸에테르 및 펜탄으로 처리하고, 진공 하에 건조시켜 (4S)-N-(4-((3-(3-메틸-3H-디아지린-3-일)프로판아미도)메틸)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 발포체로서 수득하였다 (39 mg, 68% 수율).
MS (ESI) C29H28F3N7O2, 계산치: 563.23; 실측치: 564 [M+H].
실시예 25
(4S)-N-(3-(3-(트리플루오로메틸)-3H-디아지린-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
CH2Cl2 (2 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (46 mg, 0.15 mmol) 및 트리포스겐 (36 mg, 120 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (56 μL, 0.45 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 40℃에서 2.5시간 동안 교반하고, CH2Cl2 (1 mL) 중에 용해시킨 3-(3-(트리플루오로메틸)-3H-디아지린-3-일)아닐린 (40 mg, 0.2 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (처음에 펜탄 중 0에서 100% CH2Cl2 구배에 이어서 CH2Cl2 중 0에서 10% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(3-(트리플루오로메틸)-3H-디아지린-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (40 mg, 50% 수율).
MS (ESI) C25H18F6N6O, 계산치: 532.14; 실측치: 533 [M+H].
상기 3-(3-(트리플루오로메틸)-3H-디아지린-3-일)아닐린을 문헌 [Biasotti B. et al., Bioorganic and Medicinal Chemistry, 2003, 11, 2247-2254]에 따라 제조하였다.
이 일반적 절차를 사용함으로써 (3-(3-(트리플루오로메틸)-3H-디아지린-3-일)페닐)우레아를 적절한 아민으로 치환하여 다양한 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조하였다.
실시예 26. (3R,4R)-7-클로로-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 제조:
단계 1. (S)-디메틸 2-벤즈아미도숙시네이트의 합성.
온도계, 응축기, 및 기계식 교반기가 구비된 5L 3구 플라스크에 L-아스파르트산 디메틸 에스테르 161g (1.00 mol), 디클로로메탄, 2500 mL 및 트리에틸아민 198 g (1.96 mol)을 첨가하였다. 용액을 -5℃로 냉각시킨 다음, 벤조일 클로라이드 156 g (1.11 mol)을 적가하면서 내부 온도를 - 5℃에서 유지하였다. 혼합물을 -5℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 이를 여과하였다. 침전물을 추가의 디클로로메탄로 3회 세척한 다음, 합한 여과물 및 세척물을 포화 수성 K2CO3 용액으로 추출하였다. 디클로로메탄 층을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 진공 하에 농축시켜 생성물 200 g (75%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C13H15NO5, 계산치: 265.1.
단계 2. (4S,5S)-디메틸 2-페닐-4,5-디히드로옥사졸-4,5-디카르복실레이트의 합성.
온도계, 기계식 교반기, 및 N2 유입구가 구비된 10 L 4구 플라스크에 (S)-디메틸 2-벤즈아미도숙시네이트 100 g (0.377 mol)에 이어서 건조 테트라히드로푸란 4L를 첨가하였다. 혼합물을 교반하고, 0℃로 냉각시켰다. 용액에 테트라히드로푸란 중 리튬 비스(트리메틸실릴)아미드의 1.0 M 용액 770 mL (0.77 mol)를 첨가하면서 내부 온도를 첨가 동안 0℃에서 유지하였다. 반응물을 0℃에서 30분 동안 교반한 다음, 이를 -78℃로 냉각시켰다. 여기에 -78℃에서 테트라히드로푸란 2L 중 아이오딘 195 g (0.77 mol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 -78℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 이를 포화 NH4Cl(수성) 2L 및 Na2S2O3 400 g (2.53 mol)의 첨가에 의해 켄칭하였다. 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반한 다음, 에틸 아세테이트 2 L를 첨가하고, 층을 분리하였다. 수성 상을 추가의 에틸 아세테이트 (3 x 2L)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 20:1 (v/v) 헵탄: 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 30 g (30%)을 백색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C13H13NO5, 계산치: 263.1.
단계 3. (2S,3S)-2-아미노-3-히드록시숙신산의 합성.
환류 응축기가 구비된 500 mL 플라스크에 (4S,5S)-디메틸 2-페닐-4,5-디히드로옥사졸-4,5-디카르복실레이트 13 g (50 mmol), 및 12M HCl(수성) 200 mL (2.4 mol)를 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 물 1000 mL에 녹이고, 벤조산이 수성 층 중에 HPLC에 의해 존재하지 않을 때까지 에틸 아세테이트로 추출하였다. 유기 층을 버리고, 수성 층을 진공 하에 농축시켜 (2S,3S)-2-아미노-3-히드록시숙신산 히드로클로라이드 8.6 g (94%)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C4H7NO5, 계산치: 149.0.
단계 4. (2S,3S)-디메틸 2-아미노-3-히드록시숙시네이트의 합성.
환류 응축기가 구비된 500 mL 3구 플라스크에 메탄올 170 mL를 첨가하였다. 메탄올을 -5℃로 냉각시킨 다음, SOCl2 23.6 g (198 mmol)을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, (2S,3S)-2-아미노-3-히드록시숙신산 HCl 염 8.6 g (46 mmol)을 첨가하고, 용액을 주위 온도에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하여 조 물질 (2S,3S)-디메틸 2-아미노-3-히드록시숙시네이트 HCl 염을 황색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
MS (ESI) C6H11NO5, 계산치: 177.1.
단계 5. (2S,3S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트의 합성.
환류 응축기가 구비된 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 (2S,3S)-디메틸 2-아미노-3-히드록시숙시네이트 HCl 18 g (84.3 mmol), 2,6-디클로로-3-니트로피리딘, 42.5 g NaHCO3 (506 mmol), 29 g (150 mmol) 및 THF 350 mL를 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 36시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 추가의 THF (30 mL x 3)로 세척하였다. 여과물 및 세척물을 합하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 5:1 (v/v)에서 1:1 (v/v) 헵탄: 에틸 아세테이트의 구배로 용리시키면서 정제하여 (2S,3S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트 22 g (63%)을 황색 결정질 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C11H12ClN3O7, 계산치: 333.0.
이 절차를 사용하여 (2S,3S)-디메틸 2-아미노-3-히드록시숙시네이트 히드로클로라이드를 디메틸 2-아미노-3-히드록시숙시네이트 히드로클로라이드로 치환하여 디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트를 제조할 수 있었다.
단계 6. (S)-메틸 2-((S)-6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)-2-히드록시아세테이트의 합성.
H2O 중 10 g 라니 Ni의 슬러리를 경사분리하여 물을 제거하고, 2-프로판올로 희석하고, 다시 경사분리하여 10 g 중량의 습윤 혼합물을 수득하였다. 500 mL 플라스크에 (2S,3S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트 10 g (30 mmol), 2-프로판올 200 mL에 이어서 라니 Ni 10 g을 첨가하였다. 반응물을 진공 하에 두고, 수소로 3회 역충전한 다음, 이를 H2 1 atm 하에 3시간 동안 또는 출발 니트로 화합물이 HPLC에 의해 잔류되지 않을 때까지 교반하였다. 라니 Ni를 여과한 다음, 여과물을 500 mL 둥근 바닥 플라스크에 두고, 빙초산 5 mL (87 mmol)를 첨가하였다. 플라스크에 환류 응축기를 장착한 다음, 반응물을 80℃에서 16시간 동안 중간체 디아미노피리딘이 HPLC에 의해 존재하지 않을 때까지 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 5/1 (v/v) 헵탄/에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 6 g (72%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C10H10ClN3O4, 계산치: 271.0.
이 절차를 사용하여 (2S,3S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트를 디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)-3-히드록시숙시네이트로 치환하여 메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)-2-히드록시아세테이트를 제조할 수 있었다.
단계 7. (S)-1-((R)-6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄-1,2-디올의 합성.
환류 응축기 및 온도계가 구비된 100 mL 3구 둥근 바닥 플라스크에 테트라히드로푸란 20 mL에 이어서 LiAlH4 1.19 g (30 mmol)을 첨가하였다. 교반 혼합물을 -5℃로 냉각시킨 다음, 테트라히드로푸란 20 mL 중 (S)-메틸 2-((S)-6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)-2-히드록시아세테이트 0.5 g (2 mmol)의 용액을 적가하였다. 반응물을 70℃에서 16시간 동안 또는 반응이 HPLC에 의해 완결될 때까지 교반하였다. (락탐 환원은 에스테르 환원보다 느렸음.) 반응물을 -10℃로 냉각시킨 다음, 물 1.2 mL를 적가하고, 반응물을 10분 동안 교반하였다. 다음에, 15% (w/v) NaOH(수성) 1.2 mL를 적가하고, 반응물을 20분 동안 교반하였다. 과량의 LiAlH4의 켄칭을 완결하기 위해, 추가의 물 3.6 mL를 적가한 다음, 반응물을 20분 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, 침전물을 테트라히드로푸란 (3 x 20 mL)으로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켜 고체 약 1.5 g을 수득하였다. 이를 에틸 아세테이트 16 mL로 희석하고, 여과하였다. 여과물을 진공 하에 농축시켜 생성물 310 mg (80%)을 갈색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C9H12ClN3O2, 계산치: 229.1.
이 절차를 사용하여 (S)-메틸 2-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)-2-히드록시아세테이트를 메틸 2-((S)-6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)-2-히드록시아세테이트로 치환하여 1-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄-1,2-디올을 제조할 수 있었다.
단계 8. (1S,4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올의 합성.
환류 응축기가 구비된 10 mL 둥근 바닥 플라스크에 (S)-1-((R)-6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄-1,2-디올 250 mg (1.1 mmol)에 이어서 48% HBr(수성) 5 mL를 첨가하였다. 반응물을 105℃에서 16시간 동안 또는 HPLC가 모든 출발 물질이 소모되었음을 나타낼 때까지 교반하였다. 반응물을 냉각시킨 다음, K2CO3(S)을 pH = 8까지 천천히 첨가하였다. 용매를 진공 하에 제거한 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 20/1 (v/v) 디클로로메탄/ 메탄올로 용리시키면서 정제하여 생성물 110 mg (47%)을 백색 결정질 고체를 수득하였다.
MS (ESI) C9H10ClN3O, 계산치: 211.1.
이 절차를 사용하여 (S)-1-((R)-1-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄-1,2-디올을 6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)에탄-1,2-디올로 치환하여 7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올을 제조할 수 있었다.
단계 9. (1S,4R)-7-클로로-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성.
10 mL 둥근 바닥 플라스크에 (1S,4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올 1.68 g (7.9 mmol), N,N-디메틸포름아미드 5 mL 및 2,6-디메틸피리딘 2.8 mL (24 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 균질할 때까지 교반한 다음, 클로로트리메틸실란 1.5 mL (12 mmol)를 주위 온도에서 적가하였다. 반응물을 주위 온도에서 3시간 동안 교반한 다음, 이를 디클로로메탄 100 mL로 희석하고, 포화 NaHCO3(수성) (1 x 50 mL)에 이어서 염수 (3 x 50 mL)로 추출하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 2.04 g (91%)을 백색 결정질 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C12H18ClN3OSi, 계산치: 283.1.
이 절차를 사용하여 (1S,4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올을 7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올로 치환하여 7-클로로-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다.
실시예 27. (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 제조:
10:1 디옥산:물 (8.8 mL) 중 (3R,4R)-7-클로로-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (283 mg, 1.0 mmol), (3-(트리플루오로메틸)페닐)보론산 (285 mg, 1.5 mmol), XPhos (24 mg, 0.05 mmol), Pd(OAc)2 (5.6 mg, 0.025 mmol), Cs2CO3 (977 mg, 3.0 mmol)의 혼합물을 탈기하고, 100℃에서 25분 동안 마이크로웨이브 가열하였다. 디옥산 층을 농축시키고, 플래쉬 크로마토그래피 (CH2Cl2 중 0에서 7% MeOH 구배)에 의해 정제하여 (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다. 분획을 농축시키고, EtOAc 중에 용해시키고, 포화 NaHCO3, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시켜 (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (338 mg, 85% 수율).
MS (ESI) C19H22F3N3OSi, 계산치: 393.15; 실측치: 394 [M+H].
수소화나트륨을 사용하는 이 일반적 커플링 절차를 사용하여 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온을 적절한 아릴 이소시아네이트 또는 아릴 이소시아네이트 이량체로 치환하여 (3R,4R)-3-히드록시-N-아릴-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다. 비-입체특이적 시리즈를 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀으로 출발하여 제조할 수 있었다.
실시예 28. (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
THF (30 mL) 중 (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (215 mg, 0.55 mmol) 및 미네랄 오일 중 60% NaH (66 mg, 1.65 mmol)의 용액을 환류 하에 20분 동안 가열하였다. 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (197 mg, 0.82 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉각시키고, 농축 건조시키고, CH2Cl2로 희석하였다. 유기 층을 포화 NaHCO3, 물, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 분획을 농축 건조시키고, 디에틸 에테르 및 펜탄의 혼합물로 연화처리하여 (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트를 백색 고체로서 수득하였다 (132 mg, 44% 수율).
MS (ESI) C22H18F3N5O2: 441.14; 실측치에 대한 계산치: 442 [M+H].
실시예 29. (4R)-3-옥소-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
CH2Cl2 (20 mL) 중 (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (92 mg, 0.166 mmol)의 용액에 데스-마르틴 퍼아이오단 (105 mg, 0.25 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 데스-마르틴-퍼아이오단 (105 mg, 0.25 mmol)의 제2 분취물을 충전하고, 반응 혼합물을 실온에서 0.5시간 동안 교반하였다. 포화 NaHCO3의 용액 (수성)을 첨가하고, 반응 혼합물을 CH2Cl2로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 백색 발포체로 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 0에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제한 다음, 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (4R)-3-옥소-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트를 수득하였다 (62 mg, 67% 수율).
MS (ESI) C22H16F3N5O2, 계산치: 439.13; 실측치: 440 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 (3R,4R)-3-히드록시-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드로 치환하여 (4R)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-3-옥소-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조하였다.
실시예 30. (3S,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
질소 분위기 하에 -78℃에서 THF (10 mL) 중 (4R)-3-옥소-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 2,2,2-트리플루오로아세테이트 (50 mg, 0.09 mmol)의 용액에 THF 중 1 M 슈퍼히드라이드의 용액 (0.45 mL, 0.45 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 -78℃에서 30분 동안 교반하고, EtOAc (5 mL)의 첨가에 의해 켄칭하고, 실온으로 가온하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (CH2-Cl2 중 0에서 10% MeOH 구배)에 의해 정제하여 (3S,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (22 mg, 55% 수율).
MS (ESI) C22H18F3N5O2, 계산치: 441.14; 실측치: 442 [M+H].
실시예 31. (3S,4R)-5-(피리딘-2-일카르바모일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-일 아세테이트의 제조:
CH2Cl2 중 (3S,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (15 mg, 0.034 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (10 μL, 0.07 mmol)에 이어서 DMAP (1 mg) 및 아세트산 무수물 (10 μL, 0.011 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 농축 건조시키고, 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 분획을 동결건조시켜 (3S,4R)-5-(피리딘-2-일카르바모일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-일 아세테이트 2,2,2-트리플루오로아세테이트를 수득하였다 (5.9 mg, 29% 수율).
MS (ESI) C24H20F3N5O3, 계산치: 483.15; 실측치: 484 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 (3S,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드로 치환하여 (3R,4R)-5-(피리딘-2-일카르바모일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-일 아세테이트를 제조하였다.
이 일반적 절차를 사용하여 (3S,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 (3R,4R)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드로 치환하고 아세트산 무수물 및 벤조산 무수물을 치환하여 (3R,4R)-5-(피리딘-2-일카르바모일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-일 벤조에이트를 제조하였다.
실시예 32. (3R,4R)-3-히드록시-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
CH3CN (20 mL) 중 (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (284 mg, 0.722 mmol), 페닐 (3-(옥사졸-5-일)페닐)카르바메이트 (404 mg, 1.44 mmol) 및 DMAP (44 mg, 0.36 mmol)의 용액을 60℃에서 (밤새)에 이어서 80℃ (2시간)에서 가열하였다. 이어서, 반응 혼합물에 페닐 (3-(옥사졸-5-일)페닐)카르바메이트 (202 mg, 0.72 mmol) 및 DMAP (88 mg, 0.72 mmol)의 추가의 양을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 밤새 가열하고, 농축 건조시켰다. 반응 혼합물을 처음에 칼럼 크로마토그래피 (펜탄 중 0에서 100% 에틸 아세테이트 구배)에 의해 정제한 다음, 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (3R,4R)-3-히드록시-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 트리플루오로아세트산 염으로서 수득하였다 (161 mg, 36%).
MS (ESI) C26H20F3N5O3, 계산치: 507.15; 실측치: 508 [M+H].
실시예 33. (3R,4R)-7-(3-클로로페닐)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
TBSOTf (111 mg, 0.42 mmol)를 CH2Cl2 2 mL 중 (3R,4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올 (90 mg, 0.28 mmol)의 용액에 N2 하에 -20℃에서 천천히 첨가하였다. 혼합물을 1시간 동안 교반한 다음, 1N HCl 및 물로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (DCM/EA=20:1)에 의해 정제하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 황색 고체로서 수득하였다 (90 mg, 73% 수율).
MS (ESI) C15H24ClN3OSi, 계산치: 325.14;
단계 2. (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성.
디옥산/H2O (11 mL, 10:1) 중 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.08 g, 3.32 mmol), (3-클로로페닐)보론산 (570 mg, 3.65 mmol), Cs2CO3 (2.48 g, 7.63 mmol), Pd(dppf)Cl2 (300 mg, 0.33 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 반응기 내에서 130℃에서 2.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 희석하였다. 유기 상을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 담황색 고체로서 수득하였다 (850 mg, 63% 수율).
MS (ESI) C21H28ClN3OSi, 계산치: 401.17;
이 일반적 절차를 사용하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조하였다.
단계 3. (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
MeCN 5 ml 중 페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (86 mg, 0.20 mmol), (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (80 mg, 0.20 mmol) 및 DMAP (24 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 65℃에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 정제용 TLC에 의해 DCM:EA=20:1로 용리시키면서 정제하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (110 mg).
MS (ESI) C27H32ClN3O2Si, 계산치: 521.2;
단계 4. (3R,4R)-7-(3-클로로페닐)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
THF 10 mL 및 진한 HCl (1 mL) 중 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (110 mg, 0.21 mmol)의 용액을 실온에서 48시간 동안 교반하였다. 혼합물을 감압 하에 농축시켰다. pH를 포화 수성 NaHCO3을 사용하여 8로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc로 추출하고, 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc로 연화처리하여 (3R,4R)-7-(3-클로로페닐)-3-히드록시-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (34 mg, 39% 수율).
MS (ESI) C21H18ClN5O2, 계산치: 407.1; 실측치: 408 [M+H].
실시예 34. (3R,4R)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-3-히드록시-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올의 합성:
디옥산/H2O (30 mL, 10:1) 중 (3R,4R)-7-클로로-3-((트리메틸실릴)옥시)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1 g, 3.53 mmol), ((3-트리플루오로메틸)페닐)보론산 (1.34 g, 7.06 mmol), Cs2CO3 (3.44 g, 10.6 mmol), Pd(dppf)Cl2 (300 mg, 0.35 mmol)의 혼합물을 마이크로웨이브 하에 130℃에서 2.5시간 동안 반응시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc로 추출하고, 물에 이어서 염수로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시켰다다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (PE/EA=4:1)에 의해 정제하여 (3R,4R)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올을 수득하였다 (600 mg, 39% 수율).
MS (ESI) C16H14F3N3O, 계산치: 321.1;
단계 2. (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
TBSCl (338 mg, 2.24 mmol), (3R,4R)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-3-올 (600 mg, 1.87 mmol), 트리에틸 아민 (415 mg, 4.11 mmol) 및 DMAP (22 mg, 0.20 mmol)의 혼합물을 48시간 동안 교반하였다. 추가의 TBSCl 및 TEA는 출발 물질을 소비하는데 필요하였다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (90 mg, 73% 수율).
MS (ESI) C22H28F3N3OSi, 계산치: 435.20;
단계 3. (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
MeCN 5 ml 중 페닐 (4,5-디메틸티아졸-2-일)카르바메이트 (25 mg, 0.10 mmol), (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (30 mg, 0.05 mmol) 및 DMAP (6 mg, 0.05 mmol)의 혼합물을 65℃에서 밤새 교반하였다. 조 반응 혼합물을 정제용 TLC에 의해 정제하여 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (30 mg, 정량적).
MS (ESI) C28H34F3N5O2SSi, 계산치: 589.22;
단계 4. (3R,4R)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-3-히드록시-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
THF (2 mL) 중 (3R,4R)-3-((tert-부틸디메틸실릴)옥시)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (30 mg, 0.051 mmol)의 용액에 TBAF/THF (0.1 mL, 0.1 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 물에 붓고, EtOAc로 추출하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발 건조시켰다. 잔류물을 정제용 TLC (EtOAc)에 의해 정제하여 (3R,4R)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-3-히드록시-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (12 mg, 50% 수율).
MS (ESI) C22H20F3N5O2S, 계산치: 475.13; 실측치: 476 [M+H].
실시예 35
(4S)-N-(4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
0℃로 냉각시킨 피리딘 (780 μL, 9.65 mmol) 및 디클로로메탄 (10 mL) 중 4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-아민 (500 mg, 3.10 mmol)의 용액에 페닐 클로로포르메이트 (466 μL, 3.72 mmol)를 1.5시간에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 0℃에서 2시간 동안 교반하였다. 물 (15 mL)을 천천히 첨가하고, 추가의 디클로로메탄을 첨가하였다. 유기 층을 분리하고, 포화 탄산나트륨 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 30분 동안 5:1 석유 에테르:에틸 아세테이트 중에 현탁시킨 다음, 현탁액을 여과하여 페닐 (4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-일)카르바메이트를 수득하였다 (547 mg, 1.94 mmol, 63% 수율).
아세토니트릴 (5 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (110 mg, 0.361 mmol), 페닐 (4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-일)카르바메이트 (203 mg, 0.722 mmol) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (53.0 mg, 0.434 mmol)의 용액을 60℃에서 밤새 교반하였다. 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (24.3 mg, 0.0493 mmol, 14% 수율).
MS (ESI) C25H19F3N6O2, 계산치: 492.2; 실측치: 493.2 [M+H].
실시예 36
(4S)-N-(3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
단계 1. 페닐 (3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)카르바메이트의 합성:
디클로로메탄 (15 mL) 중 3,5-비스(옥사졸-5-일)아닐린 (100 mg, 0.44 mmol), 페닐 클로로포르메이트 (76 mg, 0.48 mmol) 및 피리딘 (0.20 mL)의 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 정제용 TLC (1:1 석유 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 페닐 (3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)카르바메이트를 수득하였다 (140 mg, 0.40 mmol, 92% 수율).
MS (ESI) C19H13N3O4, 계산치: 347.1.
단계 2. (4S)-N-(3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (2 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (70 mg, 0.23 mmol), 페닐 (3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)카르바메이트 (140 mg, 0.40 mmol) 및 DMAP (56 mg, 0.46 mmol)의 혼합물을 밤새 환류하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 정제용 TLC (10:1 디클로로메탄:메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3,5-비스(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (13.7 mg, 0.0245 mmol, 11% 수율).
MS (ESI) C29H21F3N6O3, 계산치: 558.2; 실측치: 559.0.
실시예 37. tert-부틸 ((1-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트의 제조:
아세토니트릴 (5 mL) 중 트리포스겐 (214 mg, 0.721 mmol)의 용액에 아세토니트릴 (5 mL) 및 트리에틸아민 (2 mL) 중 tert-부틸 ((1-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트 (417 mg, 1.44 mmol)의 용액을 첨가하였다. 생성된 현탁액을 실온에서 10분 동안 교반한 다음, (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (화합물 #; 302 mg, 0.989 mmol) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (122 mg, 1.00 mmol)을 고체로서 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 15분 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 메탄올 (2 mL)을 첨가하고, 반응물을 포화 중탄산나트륨 (50 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 8% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트를 수득하였다 (579 mg, 0.933 mmol, 94% 수율).
MS (ESI) C31H31F3N8O3, 계산치: 620.3; 실측치: 621.0 [M+H].
실시예 38. (4S)-N-(3-(4-(아미노메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
tert-부틸 ((1-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트 (160 mg, 0.258 mmol)를 트리플루오로아세트산 (1.6 mL) 중에 용해시켰다. 반응물을 50℃에서 10분 동안 교반한 다음, 모든 용매를 진공 하에 제거하여 (4S)-N-(3-(4-(아미노메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염을 수득하였다 (164 mg, 0.258 mmol, 100% 수율).
MS (ESI) C26H23F3N8O, 계산치: 520.2; 실측치: 521.0 [M+H].
실시예 39
(4S)-N-(6-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
단계 1
(4S)-N-(6-브로모피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
아세토니트릴 (25 mL) 중 트리포스겐 (1.81 g, 6.10 mmol)의 용액에 아세토니트릴 (25 mL) 중 6-브로모피리딘-2-아민 (2.26 g, 13.1 mmol)의 용액을 첨가하였다. 트리에틸아민 (8.00 mL, 57.4 mmol)을 첨가하고, 반응물을 80℃에서 30분 동안 교반하였다. (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.04 g, 3.41 mmol) 및 4-(디메틸아미노)피리딘 (410 mg, 3.36 mmol)을 고체로서 첨가하고, 반응을 80℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)에 붓고, 디클로로메탄 (2 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 30%에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-브로모피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (1.12 g, 2.22 mmol, 65% 수율).
MS (ESI) C22H17BrF3N5O, 계산치: 503.1; 실측치: 503.8 [M+H].
단계 2
(4S)-N-(6-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
마이크로웨이브 바이알에 (4S)-N-(6-브로모피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (46.0 mg, 0.0912 mmol), 테트라키스(트리페닐포스핀)팔라듐 (4.8 mg, 0.0042 mmol), 플루오린화세슘 (180 mg, 1.18 mmol), 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (60.0 mg, 0.288 mmol), DME (1.5 mL), 및 물 (150 μL)을 채웠다. 마이크로웨이브 바이알을 밀봉하고, 마이크로웨이브 중에서 100℃에서 3시간 동안 가열하였다. 유기 층을 분리하고, 수성 층을 10:1 에틸 아세테이트:메탄올 (2 x 2 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 DMSO (4 mL) 중에 용해시키고, 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-(1-메틸-1H-피라졸-5-일)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염을 수득하였다 (28.4 mg, 0.0460 mmol, 50% 수율).
MS (ESI) C26H22F3N7O, 계산치: 505.2; 실측치: 506.0 [M+H].
실시예 40
(4S)-N-(3-(피페라진-1-일메틸)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
바이알에 트리포스겐 (75.0 mg, 0.253 mmol)을 채우고, 이를 아세토니트릴 (2.5 mL) 중에 용해시켰다. 아세토니트릴 (2.5 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (150 mg, 0.491 mmol)의 용액을 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 (0.50 mL, 3.59 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, tert-부틸 4-(3-아미노벤질)피페라진-1-카르복실레이트 (480 mg, 1.65 mmol)에 이어서 DMAP (360 mg, 2.95 mmol)를 고체로서 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 16시간 동안 교반하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 물질을 트리플루오로아세트산 (5.0 mL) 중에 용해시키고, 용액을 50℃에서 20분 동안 교반하였다. 과량의 트리플루오로아세트산을 진공 하에 제거하고, 나머지 물질을 DMSO 중에 용해시키고, 생성된 용액을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(피페라진-1-일메틸)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 트리플루오로아세테이트를 수득하였다 (89.1 mg, 0.140 mmol, 29% 수율).
MS (ESI) C28H29F3N6O, 계산치: 522.2.
실시예 41
(4S)-N-(4-(피페라진-1-일)피리미딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
단계 1. tert-부틸 4-(2-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트의 합성:
0℃에서 THF (20 mL) 중 tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (200 mg, 0.716 mmol)의 용액에 소듐 비스(트리메틸실릴)아미드 용액 (THF 중 1.0 M, 1.50 mL, 1.50 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온으로 가온하고, 30분 동안 교반하고, THF (5 mL) 중 (4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (327 mg, 1.07 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 정제용 TLC (3:1 석유 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(2-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였다 (160 mg, 0.262 mmol, 37% 수율).
MS (ESI) C30H33F3N8O3, 계산치: 610.3.
단계 2. (4S)-N-(4-(피페라진-1-일)피리미딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
tert-부틸 4-(2-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트 (160 mg, 0.262 mmol)를 에틸 아세테이트 중 염산 (2 M, 10 mL) 중에 용해시키고, 30분 동안 교반하였다. 모든 용매를 진공 하에 제거하여 (4S)-N-(4-(피페라진-1-일)피리미딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (47 mg, 0.092 mmol, 35% 수율).
MS (ESI) C25H25F3N8O, 계산치: 510.2; 실측치: 511.0 [M+H].
실시예 42
tert-부틸 (2-(4-(3-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)카르바메이트의 합성:
바이알에 트리포스겐 (180 mg, 0.607 mmol)을 채우고, 이를 디클로로메탄 (3 mL) 중에 용해시켰다. (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (320 mg, 1.00 mmol)의 용액을 첨가하고, N,N-디이소프로필에틸아민 (1.00 mL, 5.74 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 25분 동안 교반한 다음, 디클로로메탄 (5 mL) 중 tert-부틸 (2-(4-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)카르바메이트 (415 mg, 1.37 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 40℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 마이크로웨이브 중에서 120℃에서 1시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 8% 메탄올)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2-(4-(3-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)카르바메이트를 수득하였다 (99.0 mg, 0.153 mmol, 15% 수율).
MS (ESI) C33H35F3N8O3, 계산치: 648.3.
실시예 43
(4S)-N-(3-(2-(구아니디노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
DMF (1 mL) 중 1H-피라졸-1-카르복스이미드아미드 히드로클로라이드 (15 mg, 0.10 mmol) 및 DIEA (17 μL, 0.10 mmol)의 용액을 실온에서 10분 동안 교반하고, (4S)-N-(3-(2-(아미노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (52 mg, 0.10 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 동결건조시켜 (4S)-N-(3-(2-(구아니디노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 트리플루오로아세트산 염을 수득하였다 (25.5 mg, 38% 수율).
MS (ESI) C28H25F3N8O2, 계산치: 562.21; 실측치: 563 [M+H].
이 일반적 절차를 사용하여 (4S)-N-(3-(2-(아미노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 적절한 아민으로 치환하여 다른 구아니딘을 제조하였다.
실시예 44
(4S)-N-(피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
단계 1. (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성:
20 mL 마이크로웨이브 바이알에 교반용 자석 막대, (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (629 mg, 3.00 mmol), [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로]알릴팔라듐(II) (62.1 mg, 0.120 mmol), 3-트리플루오로메틸피페리딘 (919 mg, 6.00 mmol) 및 포타슘 tert-부톡시드 (673 mg, 6.00 mmol)를 채웠다. DME (7.0 mL)를 첨가하고, 마이크로웨이브 바이알을 마개를 막고, 90℃로 2시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올 (5 mL) 및 실리카 겔 (5 g)을 첨가하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 실리카 겔 슬러리를 40 g 실리카 겔 칼럼의 상단에 로딩하고, 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 50%에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 2를 부분입체이성질체의 1:1 혼합물로서 수득하였다 (713 mg, 2.18 mmol, 73% 수율).
MS (ESI) C16H21F3N4, 계산치: 326.2.
단계 2. (4S)-N-(피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (2 mL) 및 피리딘 (1 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (40.0 mg, 0.128 mmol)의 용액에 고체로서 트리포스겐 (26.0 mg, 0.0876 mmol)을 첨가하였다. 생성된 적색 용액을 50℃에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 4-아미노피리미딘 (95.0 mg, 1.00 mmol)을 고체로서 첨가하고, 반응을 70℃에서 6시간 동안 교반하였다. 6시간 후, 대부분의 아세토니트릴을 질소 스트림 하에 제거하고, 메탄올 (1 mL) 및 DMSO (2 mL)를 반응물에 첨가하였다. 생성된 용액을 정제용 HPLC에 의해 정제하고, 단리된 물질을 아세토니트릴/수성 1N HCl로부터 동결건조시켜 (4S)-N-(피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 수득하였다 (34.9 mg, 0.0743 mmol, 58% 수율).
MS (ESI) C20H22F3N7O, 계산치: 433.2.
실시예 45
(4S)-7-((S)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
단계 1. (3S)-N,N-디메틸-1-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피롤리딘-3-아민의 합성:
20 mL 마이크로웨이브 바이알에 교반용 자석 막대, (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (978 mg, 5.00 mmol), [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로]알릴팔라듐(II) (51.7 mg, 0.100 mmol), (S)-N,N-디메틸피롤리딘-3-아민 (1.14 g, 10.00 mmol) 및 포타슘 tert-부톡시드 (1.12 mg, 10.00 mmol)를 채웠다. DME (10.0 mL)를 첨가하고, 마이크로웨이브 바이알을 마개를 막고, 100℃로 4시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올 (20 mL) 및 실리카 겔 (5 g)을 첨가하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 실리카 겔 슬러리를 40 g 실리카 겔 칼럼의 상단에 로딩하고, 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 0%에서 10% 메탄올)에 의해 (3S)-N,N-디메틸-1-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피롤리딘-3-아민을 수득하였다 (524 mg, 1.92 mmol, 38% 수율).
MS (ESI) C15H23N5, 계산치: 273.2.
단계 2. (4S)-7-((S)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (540 μL) 및 피리딘 (150 μL) 중 (3S)-N,N-디메틸-1-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피롤리딘-3-아민 (40.0 mg, 0.146 mmol)의 용액에 아세토니트릴 (310 μL) 중 트리포스겐 (28.9 mg, 0.0975 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응물을 50℃에서 30분 동안 교반한 다음, 트리에틸아민 (40 μL)을 첨가하였다. 3-아미노피리딘 (94 mg, 1.00 mmol)을 고체로서 첨가하고, 반응을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 16시간, 반응을 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올 (1 mL)을 첨가하고, 생성된 용액을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 단리된 물질을 아세토니트릴/수성 1N HCl로부터 동결건조시켜 (4S)-7-((S)-3-(디메틸아미노)피롤리딘-1-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 수득하였다 (30.6 mg, 0.0712 mmol, 49% 수율).
MS (ESI) C21H27N7O, 계산치: 393.2.
실시예 46
tert-부틸 4-((9S)-10-(피리미딘-4-일카르바모일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트의 합성:
단계 1. tert-부틸 4-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트의 합성:
20 mL 마이크로웨이브 바이알에 교반용 자석 막대, (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (500 mg, 2.38 mmol), [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로]알릴팔라듐(II) (12.4 mg, 0.0240 mmol), tert-부틸 호모피페라진-1-카르복실레이트 (953 mg, 4.76 mmol) 및 포타슘 tert-부톡시드 (534 mg, 4.76 mmol)를 채웠다. DME (5.0 mL)를 첨가하고, 바이알을 밀봉하고, 마이크로웨이브 중에서 85℃에서 4시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 메탄올 (20 mL) 및 실리카 겔 (5 g)을 첨가하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 실리카 겔 슬러리를 40 g 실리카 겔 칼럼의 상단에 로딩하였다. 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 0%에서 8% 메탄올)에 의해 tert-부틸 4-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트를 수득하였다 (550 mg, 1.48 mmol, 62% 수율).
MS (ESI) C20H31N5O2, 계산치: 373.2; 실측치: 374.2 [M+H].
단계 2. tert-부틸 4-((9S)-10-(피리미딘-4-일카르바모일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트의 합성:
아세토니트릴 (30 mL) 중 tert-부틸 4-((9S)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트 (500 mg, 1.34 mmol), 피리미딘-4-일-카르밤산 페닐 에스테르 (570 mg, 2.65 mmol), 4-디메틸아미노피리딘 (190 mg, 1.56 mmol)의 혼합물을 60℃에서 3.5시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄 중에 용해시키고, 물, 염수로 세척하고, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 모든 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피를 통해 디클로로메탄:에틸 아세테이트 (2:1)를 사용하여 정제한 다음, 정제용 박층 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 3% 메탄올을 사용하여 정제하여 tert-부틸 4-((9S)-10-(피리미딘-4-일카르바모일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트를 수득하였다 (363 mg, 0.734 mmol, 55% 수율).
MS (ESI) C25H34N8O3, 계산치: 494.3; 실측치: 495.4 [M+H].
실시예 47
(9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
tert-부틸 4-((9S)-10-(피리미딘-4-일카르바모일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-2-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트 (400 mg, 0.808 mmol)를 MeOH 중 1M HCl (20mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반하였다. 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 물 (20 mL) 및 탄산칼륨 (344mg, 2.42 mmol)을 첨가하고, 혼합물을 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 디클로로메탄 (3 x 5 mL)으로 추출하고, 용매를 진공 하에 건조시켜 (9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 수득하였다 (300mg, 0.761 mmol, 94% 수율).
MS (ESI) C20H26N8O, 계산치: 394.2.
실시예 48
(9S)-2-(4-(메틸술포닐)-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
디클로로메탄 (3 mL) 중 (9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 (60.0 mg, 0.152 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (46.1 mg, 0.457 mmol) 및 메탄술포닐 클로라이드 (18.1 mg, 0.152 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 0℃에서 1시간 동안 교반하였다. 용액을 물, 염수로 세척하고, 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 나머지 용액을 정제용 박층 크로마토그래피를 통해 디클로로메탄 중 3% 메탄올을 사용하여 정제하여 (9S)-2-(4-(메틸술포닐)-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 수득하였다 (30.0 mg, 0.0635 mmol, 42% 수율).
MS (ESI) C21H28N8O3S, 계산치: 472.2.
실시예 49
(9S)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
메탄올 (3 mL) 중 (9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 (100 mg, 0.254 mmol)의 용액에 포름알데히드 (물 중 37%, 20 μL) 및 탄소 상 10% 팔라듐 (10 mg)을 첨가하였다. 반응물을 수소 분위기 하에 1시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 3% 메탄올을 사용하여 정제하여 (9S)-2-(4-메틸-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 수득하였다 (22.2 mg, 0.0543 mmol, 21% 수율).
MS (ESI) C21H28N8O, 계산치: 408.2.
실시예 50
(9S)-2-(4-이소프로필-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
디클로로메탄 (3 mL) 중 (9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 (50.0 mg, 0.127 mmol)의 용액에 아세톤 (12.9 mg, 0.254 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 30분 동안 교반하고, 소듐 시아노보로히드라이드 (20.1 mg, 0.0759 mmol)를 고체로서 첨가하고, 반응을 실온에서 밤새 교반하였다. 모든 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피 (100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (9S)-2-(4-이소프로필-1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 수득하였다 (16.8 mg, 0.0385 mmol, 30% 수율).
MS (ESI) C23H32N8O, 계산치: 436.3.
실시예 51
(9S)-N-(피리미딘-4-일)-2-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,4-디아제판-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
DMF (3 mL) 중 (9S)-2-(1,4-디아제판-1-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 (100 mg, 0.254 mmol)의 용액에 탄산나트륨 (80.7 mg, 0.761 mmol) 및 2,2,2-트리플루오로에틸 트리플루오로메탄술포네이트 (163 mg, 0.508 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 디클로로메탄 (10 mL)로 희석하고, 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시켰다. 모든 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피에 의해 디클로로메탄 중 3% 메탄올을 사용하여 정제하여 (9S)-N-(피리미딘-4-일)-2-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,4-디아제판-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 수득하였다 (19.5 mg, 0.0409 mmol, 16% 수율).
MS (ESI) C22H27F3N8O, 계산치: 476.2.
실시예 52
(4S)-7-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
단계 1. tert-부틸 4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트의 합성:
DME (5 mL) 중 (4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 2.56 mmol), N-Boc 호모피페라진 (953 mg, 4.76 mmol), 포타슘 tert-부톡시드 (534 mg, 4.76 mmol)의 용액에 [1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴]클로로]알릴팔라듐(II) (12.4 mg, 0.0240 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 90℃로 3시간 동안 가열하였다. 냉각시킨 후, 물을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (5:1 펜탄:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트를 수득하였다 (610 mg, 1.70 mmol, 66% 수율).
MS (ESI) C19H29N5O2, 계산치: 359.2.
단계 2. (4S)-7-(1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
EtOAc (5M, 10 mL) 중 tert-부틸 4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)-1,4-디아제판-1-카르복실레이트 (610 mg, 1.70 mmol) 및 HCl의 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 용매를 제거하여 (4S)-7-(1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (418 mg, 1.61 mmol, 95% 수율).
MS (ESI) C14H21N5, 계산치: 259.2.
단계 3. (4S)-7-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
DMF (5 mL) 중 (4S)-7-(1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (418 mg, 1.61 mmol)의 용액에 2,2,2-트리플루오로에틸특리플루오로메탄술포네이트 (748 mg, 3.23 mmol) 및 탄산칼륨 (666 mg, 4.83 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3 x 10 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (6:1 펜탄:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 (4S)-7-(4-(2,2,2-트리플루오로에틸)-1,4-디아제판-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (320 mg, 0.937 mmol, 58% 수율).
MS (ESI) C16H22F3N5, 계산치: 341.2.
실시예 53
(4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-((R)-3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-((S)-3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
(4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (120 mg, 0.241 mmol)를 30x250 mm 키랄셀 OD-H 칼럼 상에 로딩하였다. 20:80 에탄올:헵탄으로 먼저 (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-((R)-3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 용리시킨 다음 (41.3 mg, 0.0828 mmol, 34% 수율), [α]D 25 = +32 (c, 0.09, MeOH), (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-((S)-3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 용리시켰다 (44.8 mg, 0.0899 mmol, 37% 수율) [α]D 25 = +18.5 (c, 0.11, MeOH).
MS (ESI) C25H25F3N6O2, 계산치: 498.2; 실측치: 499.3 [M+H].
실시예 54. (5S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-4,5-디히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신-6(3H)-카르복스아미드 1,1-디옥시드의 제조:
단계 1. (S)-tert-부틸 (1-((2,6-디클로로피리딘-3-일)술포닐)피롤리딘-3-일)카르바메이트의 합성:
디클로로메탄 (10 mL) 중 2,6-디클로로피리딘-3-술포닐 클로라이드 (Org. Process Res. Dev. 2009, 13, 875-879) (3.40 g, 13.8 mmol)의 용액에 (S)-tert-부틸 피롤리딘-3-일카르바메이트 (2.82 g, 14.5 mmol)에 이어서 트리에틸아민 (3.00 mL, 21.5 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 포화 중탄산나트륨에 붓고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하여 (S)-tert-부틸 (1-((2,6-디클로로피리딘-3-일)술포닐)피롤리딘-3-일)카르바메이트를 수득하였다 (5.47 g, 13.8 mmol, 100% 수율).
단계 2. (5S)-8-클로로-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드의 합성:
디클로로메탄 (30 mL) 중 (S)-tert-부틸 (1-((2,6-디클로로피리딘-3-일)술포닐)피롤리딘-3-일)카르바메이트 (5.47 g, 13.8 mmol)의 용액에 트리플루오로아세트산 (10 mL)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 밤새 교반하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 DMF (30 mL) 중에 용해시키고, 탄산나트륨 (10.0 g, 94.3 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 빙수에 붓고, 생성된 용액을 여과하고, 고체를 물로 세척하였다. 수집된 고체를 건조시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (5S)-8-클로로-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드를 수득하였다 (1.80 g, 6.93 mmol, 50% 수율).
단계 3. (5S)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드의 합성:
10:1 디옥산:물 (45 mL) 중 (5S)-8-클로로-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드 (800 mg, 3.08 mmol), 3-트리플루오로메틸벤젠보론산 (1.17 g, 6.16 mmol), 탄산세슘 (3.00 g, 9.21 mmol) 및 [1,1'-비스(디페닐포스피노)페로센]디클로로팔라듐(II) (370 mg, 0.453 mmol)의 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 디클로로메탄과 물 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 물, 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (5S)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드를 수득하였다 (1.00 g, 2.71 mmol, 88% 수율).
단계 4. (5S)-8-((S)-3-플루오로피롤리딘-1-일)-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드의 합성:
(S)-3-플루오로피롤리딘 히드로클로라이드 (1.10 g, 8.76 mmol)를 DMF (10 mL) 중 (5S)-8-클로로-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드 (800 mg, 3.08 mmol) 및 탄산나트륨 (1.60 g, 15.1 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 90℃에서 6시간 동안 교반한 다음, 분쇄 얼음에 붓고, 교반하고, 여과하였다. 수집된 고체를 물로 세척하고, 건조시키고, 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 (5S)-8-((S)-3-플루오로피롤리딘-1-일)-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드를 수득하였다 (680 mg, 2.18 mmol, 71% 수율).
단계 5. (5S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-4,5-디히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신-6(3H)-카르복스아미드 1,1-디옥시드의 합성:
(5S)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4,5,6-테트라히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신 1,1-디옥시드 (70.0 mg, 0.190 mmol)를 DMF (3 mL) 중에 용해시키고, 수소화나트륨 (54 mg, 오일 중 60%, 1.35 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, 페닐 (5-플루오로피리딘-3-일)카르바메이트 (176 mg, 0.768 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 실온에서 1시간 동안 교반하고, 물에 붓고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 진공 하에 농축시키고, 나머지 잔류물을 정제용 박층 크로마토그래피에 의해 정제하여 (5S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-8-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-4,5-디히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신-6(3H)-카르복스아미드 1,1-디옥시드를 수득하였다 (24.0 mg, 0.0473 mmol, 25% 수율).
MS (ESI) C22H17F4N5O3S, 계산치: 507.1; 실측치: 508.1 (M+H)+.
하기 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다: (5S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-8-((S)-3-플루오로피롤리딘-1-일)-4,5-디히드로-2,5-메타노피리도[2,3-g][1,2,6]티아디아조신-6(3H)-카르복스아미드 1,1-디옥시드.
실시예 55. (4S)-N-(3-(4-((6-아미노헥산아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
트리플루오로아세트산 (3.0 mL) 중 tert-부틸 ((1-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트 (190 mg, 0.306 mmol)의 용액을 실온에서 1시간 동안 교반한 다음, 과량의 트리플루오로아세트산을 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 DMF (5.0 mL) 및 트리에틸아민 (1.0 mL) 중에 용해시키고, 2,5-디옥소피롤리딘-1-일 6-((tert-부톡시카르보닐)아미노)헥사노에이트 (250 mg, 0.761 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 80℃에서 30분 동안 교반한 다음, 65℃로 냉각시키고, 4N HCl (4 mL)을 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하였다. 단리된 물질을 아세토니트릴/1N HCl로부터 동결건조시켜 (4S)-N-(3-(4-((6-아미노헥산아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 수득하였다 (208 mg, 0.310 mmol, 100% 수율).
MS (ESI) C32H34F3N9O2, 계산치: 633.3; 실측치: 634.3(M+H)+.
실시예 56. (4S)-N-(3-(4-((6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사히드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미도)헥산아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (1.3 mL) 및 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.933 mmol) 중 (4S)-N-(3-(4-(아미노메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (44.2 mg, 0.0850 mmol)의 용액에 비오틴아미도헥산산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (40.9 mg, 0.090 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 2시간 동안 교반한 다음, DMF (1 mL)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(4-((6-(5-((3aS,4S,6aR)-2-옥소헥사히드로-1H-티에노[3,4-d]이미다졸-4-일)펜탄아미도)헥산아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (43.6 mg, 0.0448 mmol, 53% 수율).
실시예 57. (4S)-N-(3-(4-((3-(3',6'-디히드록시-3-옥소-3H-스피로[이소벤조푸란-1,9'-크산텐]-5-일)티오우레이도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (1.3 mL) 및 트리에틸아민 (0.13 mL, 0.933 mmol) 중 (4S)-N-(3-(4-(아미노메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (44.2 mg, 0.0850 mmol)의 용액에 플루오레세인 이소티오시아네이트 이성질체 I (35.0 mg, 0.090 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 2시간 동안 교반한 다음, DMF (1 mL)를 첨가하고, 생성된 반응 혼합물을 여과하고, 여과물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(4-((3-(3',6'-디히드록시-3-옥소-3H-스피로[이소벤조푸란-1,9'-크산텐]-5-일)티오우레이도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (51.0 mg, 0.0498 mmol, 58% 수율).
실시예 58. (4S)-N-(3-(4-((3-((Z)-2-((1-(디플루오로보릴)-1H-피롤-2-일)메틸렌)-2H-피롤-5-일)프로판아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
아세토니트릴 (0.35 mL) 및 트리에틸아민 (0.035 mL, 0.251 mmol) 중 (4S)-N-(3-(4-(아미노메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (12.2 mg, 0.0234 mmol)의 용액에 4,4-디플루오로-5,7-디메틸-4-보라-3a,4a-디아자-s-인다센-3-프로피온산, 숙신이미딜 에스테르 (10 mg, 0.0257 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 30분 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(4-((3-((Z)-2-((1-(디플루오로보릴)-1H-피롤-2-일)메틸렌)-2H-피롤-5-일)프로판아미도)메틸)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (5.8 mg, 0.0064 mmol, 27% 수율).
실시예 59. (9S)-N-(4-(아세트아미도메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
피리딘 (3.0 mL) 중 (9S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드 (108 mg, 0.214 mmol)의 용액에 아세트산 무수물 (28.0 μL, 0.300 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 실온에서 4시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (9S)-N-(4-(아세트아미도메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 트리플루오로아세테이트를 수득하였다 (111 mg, 0.178 mmol, 83% 수율).
MS (ESI) C27H26F3N5O2, 계산치: 509.2; 실측치: 510.2(M+H)+.
실시예 60. (4S)-N-(3-(피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1
tert-부틸 3-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)피롤리딘-1-카르복실레이트의 합성:
(4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (A7, 0.150 g, 0.490 mmol)을 5 ml 메틸렌 클로라이드 중에 용해시키고, DIEA (193 ul, 1.08 mmol)로 처리하였다. 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, tert-부틸 3-(3-아미노페닐)피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.141 g, 0.539 mmol)를 첨가하고, 용액을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응물을 5 ml 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 탄산수소나트륨의 포화 용액 10 ml로 세척하였다. 유기부를 수집하고, 농축 건조시켰다. 펜탄 중 5-100% 에틸아세테이트를 사용한 실리카 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 3-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)피롤리딘-1-카르복실레이트를 수득하였다 (0.077 g, 26%).
MS (ESI) C32H34F3 N5O3, 계산치: 593.3, 실측치: 594 [M+H].
단계 2
(4S)-N-(3-(피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
(S)tert-부틸 3-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)피롤리딘-1-카르복실레이트 (0.077 g, 0.130 mmol)를 1,4-디옥산 중 4 N HCl 5 mL 중에 용해시키고, 질소 하에 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 이어서, 모든 용매를 감압 하에 제거하고, 생성된 고체를 진공 하에 밤새 건조시켜 (4S)-N-(3-(피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.078 g, 100%).
MS (ESI) C27H26F3N5O, 계산치: 493.21; 실측치: 494 [M+H].
실시예 61. (4S)-N-(3-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
(4S)-N-(3-(피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (B579, 0.029 g, 0.058 mmol)를 2 ml 메틸렌 클로라이드 중에 용해시킨 다음, DIEA (31 ul, 0.174 mmol)로 처리하였다. 이어서, 클로로아세트아미드 (0.006 g, 0.064 mmol)를 첨가하고, 반응물을 60℃로 밤새 가열하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 5 ml 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 탄산수소나트륨의 포화 용액 10 ml로 세척하였다. 유기부를 농축 건조시키고, 역상 크로마토그래피를 통해 C18 상에서 첨가제로서 0.1% 트리플루오로아세트산을 포함하는 물 중 5-95% 아세토니트릴의 구배를 사용하여 정제하여 (4S)-N-(3-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.008 g, 23%).
MS (ESI) C29H29F3N6O2, 계산치: 550.2; 실측치: 551 [M+H].
실시예 62
(4S)-N-(3-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
(4S)-N-(3-(피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (B579, 0.020 g, 0.038 mmol)를 1.5 ml 메틸렌 클로라이드 중에 용해시킨 다음, DIEA (13 ul, 0.076 mmol)로 처리하였다. 이어서, 아세틸클로라이드 (0.005 g, 0.042 mmol)를 첨가하고, 반응물을 실온에서 밤새 교반하였다. 이어서, 반응물을 5 ml 메틸렌 클로라이드로 희석하고, 탄산수소나트륨의 포화 용액 10 ml로 세척하였다. 유기부를 농축 건조시키고, 역상 크로마토그래피를 통해 C18 상에서 정제하여 (4S)-N-(3-(1-(2-아미노-2-옥소에틸)피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (0.023 g, 88%).
MS (ESI) C29H28F3N5O2, 계산치: 535.2; 실측치: 536 [M+H].
이 일반적 아실화 절차를 사용하여 (4S)-N-(3-(1-프로피오닐피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 및 (4S)-N-(3-(1-(시클로프로판카르보닐)피롤리딘-3-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조하였다.
실시예 63. 벤질 ((5-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)옥사졸-2-일)메틸)카르바메이트의 제조:
4 mL 메틸렌 클로라이드 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.276 g, 0.902 mmol)을 DIEA (400 uL, 2.261 mmol) 및 트리포스겐 (0.200 g, 0.676 mmol)과 합하였다. 이어서, 혼합물을 65℃로 가열하고, 이 시점에 4 mL 메틸렌 클로라이드 중 벤질 ((5-(3-아미노페닐)옥사졸-2-일)메틸)카르바메이트 (0.321 g, 0.992 mmol)를 천천히 적가하였다. 이어서, 혼합물을 65℃에서 5시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 10 mL 메틸렌 클로라이드를 첨가한 다음, 탄산수소나트륨의 포화 용액 50 mL로 세척하였다. 유기 층을 수집하고, 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을에 이어서 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 정제하여 벤질 ((5-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)옥사졸-2-일)메틸)카르바메이트를 수득하였다 (0.082 g, 14%).
MS (ESI) C35H29F3N6O4, 계산치: 654.22; 실측치: 655 [M+H].
실시예 64. (4S)-N-(3-(2-(아미노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
벤질((5-(3-((4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5-카르복스아미도)페닐)옥사졸-2-일)메틸)카르바메이트 (0.040 g, 0.06 mmol)를 10 mL 에틸아세테이트 중에 용해시키고, 진공 하에 3회 탈기하였다. 이어서, 팔라듐 (탄소 상 10% 데구사 유형) 대략 5 mg을 첨가하고, 반응 용기를 질소로 퍼징한 다음, 수소 풍선을 장착하였다. 이어서, 교반을 개시하고, 혼합물을 수소 하에 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 반응 용기를 배기시키고, 질소로 퍼징하였다. 고체를 여과에 의해 제거하고, 용매를 감압 하에 제거하여 (4S)-N-(3-(2-(아미노메틸)옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.032 g, 100%)를 수득하였으며, 이를 정제 없이 사용하였다.
MS (ESI) C27H23F3N6O2, 계산치: 520.51; 실측치: 521 [M+H].
실시예 65. (4S)-N-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조
단계 1. (4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트의 합성:
DCM (15 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.5 g, 4.92 mmol) 및 피리딘 (0.74 mL, 9.84 mmol)의 용액에 페닐 클로로포르메이트 (1.1 mL, 8.85 mmol)를 0℃에서 적가하였다. 생성된 혼합물을 그 온도에서 2시간 동안 교반한 다음, 포화 수성 NaHCO3으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 페닐 카르바메이트 (1.8 g)를 갈색 오일로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다.
단계 2. (4S)-N-(5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
건조 THF (5 mL) 중 아민 5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-아민 (30 mg, 0.18 mmol)에 0℃에서 NaH (18 mg, 0.75 mmol)의 용액을 여러 부분으로 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, (4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (157 mg, 0.37 mmol)를 첨가하고, 혼합물을 밤새 교반하였다. 생성된 혼합물을 MeOH (2 mL)로 켄칭하고, 증발기에 의해 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 정제용-TLC에 의해 정제하여 2-(3-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란을 백색 고체로서 수득하였다 (50 mg, 수율 54.9%).
(4S)-페닐 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트를 사용하는 이 일반적 절차를 사용하여 5-페닐-1,3,4-옥사디아졸-2-아민 대신에 적절한 아릴-아민을 사용함으로써 다양한 카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 66. (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르보티오아미드의 제조
단계 1. 5-(3-이소티오시아네이토페닐)옥사졸의 합성:
건조 THF (6 mL) 중 3-(옥사졸-5-일)아닐린 (160 mg, 1.0 mmol) 및 TEA (0.4 mL, 3.0 mmol)의 용액에 아르곤 분위기 하에 0℃에서 건조 THF (1.5 mL) 중 티오포스겐 (0.152 mL, 2.0 mmol)의 용액을 10분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반하고, TLC는 3-(옥사졸-5-일)아닐린이 완전히 소모되었음을 나타내었다. 용매를 증발기 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물 (10 mL) 및 에틸 아세테이트 (25 mL)로 희석하고, 유기 층을 분리하였다. 수성 상을 에틸 아세테이트 (3x30 mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 포화 수성 NaHCO3에 이어서 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 5-(3-이소티오시아네이토페닐)옥사졸을 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다.
단계 2. (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르보티오아미드의 합성:
(4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (244 mg, 0.8 mmol)을 건조 DMF (5 mL) 중에 용해시키고, NaH (128 mg, 60%, 3.2 mmol)를 여러 부분으로 0℃에서 아르곤 분위기 하에 첨가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 1시간 동안 교반하였다. DMF (3 mL) 중 상기 제조된 5-(3-이소티오시아네이토페닐)옥사졸의 용액을 적가하고, 반응 혼합물을 주위 온도에서 밤새 교반하였다. 이어서, 생성된 혼합물을 포화 수성 NH4Cl로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3x15 mL)로 추출하고, 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 물질을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 DCM:MeOH =10:1을 사용하여 정제하여 표제 화합물 (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르보티오아미드를 수득하였다 (186.1 mg, 수율 46%).
실시예 67. (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (S)-디메틸 2-((5-브로모-2-니트로페닐)아미노)숙시네이트의 합성:
DMSO (127 mL) 중 4-브로모-2-플루오로-1-니트로벤젠 (15.0 g, 68 mmol), (S)-디메틸 2-아미노숙시네이트 히드로클로라이드 (15 g, 75 mmol) 및 DIPEA (36 mL)의 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 물 (200 mL)을 첨가하고, 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 300 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 4/1)에 의해 정제하여 (S)-디메틸 2-((5-브로모-2-니트로페닐)아미노)숙시네이트를 수득하였다 (12.4 g, 수율 51%).
단계 2. (S)-메틸 2-(7-브로모-3-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)아세테이트 (선디아 E655-523-23)의 합성:
i-PrOH (250 mL) 및 물 (50 mL) 중 (S)-디메틸 2-((5-브로모-2-니트로페닐)아미노)숙시네이트 (12.4 g, 34.4 mmol), Fe (22 g, 392 mmol) 및 AcOH (1.2 mL)의 혼합물을 환류 하에 2시간 동안 교반하였다. 냉각시킨 후, 고체를 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM (300 mL) 및 물 (300 mL)로 희석하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 DCM (3 x 300 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (석유 에테르/에틸 아세테이트 = 4/1)에 의해 정제하여 (S)-메틸 2-(7-브로모-3-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)아세테이트를 수득하였다 (8.8 g, 수율 86%).
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 10.43 (s, 1H), 6.84 (s, 1H), 6.75-6.73 (m, 1H), 6.66-6.63 (m, 1H), 6.32 (s, 1H), 4.19-4.16 (m, 1H), 3.60 (s, 3H), 2.78-2.72 (m, 1H), 2.68-2.61 (m, 1H).
단계 3. (S)-2-(7-브로모-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)에탄올의 합성:
THF (30 mL) 중 (S)-메틸 2-(7-브로모-3-옥소-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)아세테이트 (4.4 g, 14.7 mmol)의 용액에 BH3Me2S (10 M, 10 mL)를 0℃에서 적가 방식으로 15분에 걸쳐 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 밤새 가열하였다. 냉각시킨 후, 혼합물을 6N HCl (10 mL)로 켄칭하고, 생성된 혼합물을 50℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, 혼합물을 2N NaOH를 사용하여 염기성화시키고, pH~8로 만들었다. 혼합물을 DCM (3x50 mL)으로 추출하고, 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 (S)-2-(7-브로모-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)에탄올을 수득하였다 (2.4 g, 수율 63%).
단계 4. (4S)-7-브로모-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀의 합성:
DDQ (2.7 g, 11.7 mmol)를 실온에서 DCM (100 mL) 중 PPh3 (3.0 g, 11.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. (S)-2-(7-브로모-1,2,3,4-테트라히드로퀴녹살린-2-일)에탄올 (2.0 g, 7.8 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 용매를 제거한 후, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 40/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-브로모-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (1.5 g, 수율 81%).
단계 5. (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀의 합성:
디옥산 (60 mL) 및 물 (6 mL) 중 (4S)-7-브로모-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.5 mmol), (3-(트리플루오로메틸)페닐)보론산 (950 mg, 5.0 mmol), Cs2CO3 (2.4 g, 7.5 mmol)의 혼합물에 N2 분위기 하에 실온에서 Pd(dppf)Cl2 (204 mg, 0.25 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시킨 후, 고체를 여과하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 DCM (30 mL) 및 물 (30 mL)로 희석하고, 유기 층을 분리하고, 수성 상을 DCM (3 x 30 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (700 mg, 수율 95%).
단계 6. (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
THF (5mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀 (50 mg, 0.16 mmol), TEA (0.1 mL) 및 트리포스겐 (40 mg, 0.13 mmol)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. 3-(옥사졸-5-일)아닐린 (38 mg, 0.24 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시킨 후, 생성된 혼합물을 농축시키고, 잔류물을 정제용-TLC (DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-(옥사졸-5-일)페닐)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (26.1 mg, 수율 33%).
실시예 68. (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
CH3CN (2.5 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀 (50 mg, 0.16 mmol), DMAP (52 mg, 0.42 mmol) 및 페닐 피리딘-2-일카르바메이트 (89 mg, 0.42 mmol)의 혼합물을 밤새 환류하였다. 냉각시킨 후, 용매를 제거하였다. 잔류물을 정제용-TLC (DCM/MeOH = 20/1)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노벤조[b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (24.4 mg, 수율 35%)를 수득하였다.
실시예 69. (4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
이 모이어티를 상기 네기시 커플링 방법을 사용하여 제조하여 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 부분입체이성질체의 11:1 혼합물로서 수득하였다 (482 mg, 36%).
MS (ESI) C16H20F3N3, 계산치: 311.16; 실측치: 312 [M+H].
단계 2. (4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
이들 화합물을 상기 트리포스겐 우레아 커플링 절차를 사용하여 제조하여 (4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 부분입체이성질체의 9:1 혼합물로서 수득하였다 (38 mg, 62%).
MS (ESI) C22H24F3N5O, 계산치: 431.19; 실측치: 432 [M+H].
실시예 70. (4S)-N-(피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
부분입체이성질체의 이 혼합물을 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 카르보닐디이미다졸 (CDI, 21 mg, 0.13 mmol)을 DCM (1.5 mL) 중에 슬러리화시킨 다음, 4-아미노피리미딘 (13 mg, 0.13 mmol)을 첨가하였다. 모든 것을 용액으로 수득하기 위해, 디옥산 (0.5 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 1시간 동안 질소 분위기 하에 교반되도록 하였다. (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (41 mg, 0.13 mmol)을 DCM (1 mL) 중에 첨가하고, 반응물을 밤새 교반되도록 한 다음, 추가의 CDI (21 mg)를 첨가하고, 반응물을 환류 하에 4시간 동안 가열하였다. 반응물을 LCMS에 의해 모니터링하였으며, 중간체 (4-아미노피리미딘의 첨가 전)가 주요 반응 성분이었다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 농축시킨 다음, 추가의 4-아미노피리미딘 (25 mg)을 1 mL DMSO에 첨가하였다 (보다 우수한 용해도를 위해). 반응물을 밤새 60℃로 가온한 다음, 두번째 밤 동안 밀봉 튜브 중에서 100℃로 가온하였다. 추가의 4-아미노피리미딘 (25 mg)을 첨가하고, 반응물을 밀봉하고, 마이크로웨이브 중에서 120℃로 1시간 동안 가열하였다. DCM (10 mL)에 이어서 1 N HCl (3 mL)을 첨가하였다. 이를 DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 합한 유기부를 염수로 세척하고, Na2SO4로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (0 - 10% MeOH/DCM)에 의해 정제한 다음, 다시 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (4 mg, 7%).
MS (ESI) C21H23F3N6O, 계산치: 432.19; 실측치: 433 [M+H].
실시예 71. (4S)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
부분입체이성질체의 이 혼합물을 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다.
카르바메이트 형성에 대한 일반적 절차:
페닐 클로로포르메이트 (2.09 g, 13.3 mmol, 1.05 당량)를 DCM (16 mL) 중 4,5-디메틸티아졸-2-아민 (1.63 g, 12.7 mmol, 1.0 당량) 및 피리딘 (3.01 g, 38.2 mmol, 3.0 당량)의 냉각된 용액에 1.5시간에 걸쳐 적가하였다. 반응물을 2시간 동안 계속 냉각시키면서 교반하였다. 물 (15 mL)을 30분에 걸쳐 천천히 첨가한 다음, 혼합물을 DCM으로 희석하였다. 층을 분리하고, 유기 층을 포화 수성 탄산나트륨 (20 mL)에 이어서 염수 (20 mL)로 세척하였다. 이어서, 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시킨 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 EA/PE (1:5) 중에 30분 동안 현탁시킨 다음, 여과하여 페닐 (4,5-디메틸티아졸-2-일)카르바메이트 (1.7 g, 54%)을 수득하였다.
카르바메이트를 통한 우레아 커플링에 대한 일반적 절차:
아세토니트릴 (4 mL) 중 페닐 (4,5-디메틸티아졸-2-일)카르바메이트 (80 mg, 0.322 mmol, 2.0 당량), (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (75 mg, 0.161 mmol, 1.0 당량) 및 DMAP (24 mg, 0.193 mmol, 1.2 당량)의 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. TLC 및 LC/MS를 반응 진행을 모니터링하는데 사용하였다. 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)시클로헥실)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (14.5 mg, 12%).
MS (ESI) C22H26F3N5OS, 계산치: 465.18; 실측치: 466 [M+H].
실시예 72. N-(피리다진-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1
디에틸 3-아미노펜트-2-엔디오에이트
250 mL 3구 플라스크에 1,3-아세톤디카르복실레이트 디에틸 에스테르 6.00 g (29.7 mmol), 중탄산암모늄, 4.70 g (59.4 mmol) 및 에탄올 80 mL를 채웠다. 반응물을 주위 온도에서 24시간 동안 교반한 다음, 이를 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 100 mL에 녹이고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 x 200 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 생성물 5 g (87%)을 무색 오일로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다.
단계 2
디에틸 3-아미노펜탄디오에이트
250 mL 3구 플라스크에 디에틸 3-아미노펜트-2-엔디오에이트 5.00 g (24.8 mmol), 에탄올 40 mL, 빙초산 10 mL 및 NaBH3CN 3.1 g (49.6 mmol)을 채웠다. 반응물을 주위 온도에서 2시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 물에 녹이고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 에틸 아세테이트 층을 염수 (1 x 200 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켜 생성물 4 g (80%)을 무색 오일로서 수득하였다. 이를 추가 정제 없이 후속 반응에 사용하였다.
단계 3
디에틸 3-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트
250 mL 3구 플라스크에 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 1.8 g (9.8 mmol), 조 디에틸 3-아미노펜탄디오에이트 4.0 g (19.7 mmol), NaHCO3 3.2 g (39.0 mmol) 및 테트라히드로푸란 60 mL를 채웠다. 반응물을 40℃에서 24시간 동안 교반한 다음, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 물 100 mL 중에 용해시킨 다음, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 상을 염수 (1 x 200 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 20/1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 2.7 g (80%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
단계 4
디에틸 3-((3-아미노-6-클로로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트
온도계 및 교반용 자석 막대가 구비된 250 mL 3구 플라스크에 디에틸 3-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트 2.7 g (7.5 mmol), 철 분말 2.1 g (37.5 mmol), 2-프로판올 60 mL, 물 20 mL, 및 아세트산 675 mg (11.0 mmol)을 채웠다. 혼합물을 100℃에서 1시간 동안 교반하고, 출발 니트로 화합물의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 2-프로판올 (3 x 50 mL)로 세척한 다음, 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 100 mL 중에 용해시키고, 디클로로메탄 (3 x 50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (1 x 50 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축 건조시켰다. 조 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 4/ 1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 1.8 g (75%)을 회색 고체로서 수득하였다.
단계 5
에틸 2-(7-클로로-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-4-일)아세테이트
온도계 및 환류 응축기가 구비된 100 mL 3구 플라스크에 디에틸 3-((3-아미노-6-클로로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트 1.8 g (5.4 mmol), 톨루엔 20 mL 및 트리플루오로아세트산 1.0 mL (13.4 mmol)를 채웠다. 혼합물을 환류 하에 5시간 동안 교반하고, 반응을 출발 물질의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 용매를 진공 하에 제거한 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 3/1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 1.1 g (70%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
단계 6
2-(7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-4-일)에탄올
질소 유입구, 환류 응축기, 및 온도계가 구비된 50 mL 3구 플라스크에 에틸 2-(7-클로로-2-옥소-2,3,4,5-테트라히드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-4-일)아세테이트 1.0 g (3.5 mmol), LiAlH4 530 mg (14.0 mmol) 및 테트라히드로푸란 10 mL를 채웠다. 반응물을 N2 하에 60℃에서 6시간 동안 교반하고, 생성물의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 에스테르는 급속하게 환원되었으나, 락탐은 완전한 환원을 위해 보다 긴 시간을 필요로 하였다. 반응이 완결되었을 때, 혼합물을 빙조로 냉각시키고, 물 530 μL를 첨가하면서 5℃ 미만의 내부 온도를 유지한 다음, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 다음에, 15% (w/w) NaOH(수성) 530 μL를 첨가하면서 5℃의 내부 온도를 유지한 다음, 혼합물을 15분 동안 교반하였다. 후처리를 완결하기 위해, 1590 μL 물을 첨가한 다음, 혼합물을 주위 온도에서 30분 동안 교반하였다. 고체를 여과한 다음, 침전물을 테트라히드로푸란 (3 x 50 mL)으로 세척하였다. 여과물을 진공 하에 농축시킨 다음, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 2/1 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 520 mg (65%)을 담황색 고체로서 수득하였다.
단계 7
7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀
50 mL 3구 플라스크에 2-(7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1H-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-4-일)에탄올 500 mg (2.2 mmol) 및 40% (w/w) HBr(수성) 10 mL를 채웠다. 혼합물을 환류 하에 18시간 동안 교반한 다음, 이를 주위 온도로 냉각시키고, 포화 NaHCO3(수성)으로 중화시켰다. 수성 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 50 mL)로 추출한 다음, 합한 유기 층을 염수 (1 x 50 mL)로 역추출하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피에 의해 3/1 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시키면서 정제하여 생성물 320 mg (70%)을 회백색 고체로서 수득하였다.
단계 8. 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
디옥산/물 혼합물 (10 mL/1 mL)을 탈기하고, 7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (250 mg, 1.196 mmol)을 첨가하고, 이어서 3-(트리플루오로메틸)페닐보론산 (454 mg, 2.392 mmol), Pd(dppf)Cl2 (97 mg, 0.19 mmol), 및 Cs2CO3 (1.16 g, 3.588 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (PE/EtOAc = 4/1)에 의해 정제하여 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (200 mg, 48%).
MS (ESI) C17H16F3N3, 계산치: 319.13.
단계 9. N-(피리다진-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
하기 일반적 우레아 커플링 절차를 사용하였다:
아세토니트릴 (5 mL) 중 피리다진-3-아민의 카르바메이트 (53.9 mg, 0.25 mmol, 2.0 당량), 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (40 mg, 0.12 mmol, 1.0 당량), 및 DMAP (18.4 mg, 0.15 mmol, 1.2 당량)를 60℃에서 밤새 교반하였다. 반응 진행을 TLC 및 LC/MS에 의해 모니터링하였다. 반응 혼합물을 정제용 TLC 상에 직접 로딩하고 용리액으로서 100% EtOAc를 사용하여 N-(피리다진-3-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (16.9 mg, 30.6%).
MS (ESI) C22H19F3N6O, 계산치: 440.16; 실측치: 440.9 [M+H].
이 일반적 우레아 커플링 절차를 사용하여 피리다진-3-아민을 적절한 아민 모이어티로 치환하여 다양한 7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-, 7-(3-클로로페닐)-, 7-(5-클로로피리딘-3-일)-, 및 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 제조할 수 있었다.
실시예 73. 7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. tert-부틸 7-클로로-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. THF (5 mL) 중 7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (3.0 g, 14.31 mmol), (Boc)2O (4.6 g, 21.05 mmol, 1.5 당량), 및 DMAP (3.49 g, 28.62 mmol, 2.0 당량)의 혼합물을 60℃에서 2시간 동안 교반하였다. TLC 및 LC/MS를 반응 진행을 모니터링하는데 사용하였다. 물 (30 mL)을 첨가하고, 혼합물을 DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 유기부를 농축시키고, 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 7-클로로-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트를 백색 고체로서 수득하였다 (4.5 g, 92%).
MS (ESI) C15H20ClN3O2, 계산치: 309.12.
단계 2. tert-부틸 7-(3-클로로페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트의 합성: (선디아 프로프. 455)
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 디옥산/물 (20 mL/1 mL)의 탈기된 혼합물에 tert-부틸 7-클로로-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (1.5 g, 4.85 mmol), (3-클로로페닐)보론산 (1.51 g, 9.70 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0.396 g, 0.485 mmol), 및 Cs2CO3 (4.74 g, 14.56 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 2/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(3-클로로페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트를 수득하였다 (1.2 g, 89%).
MS (ESI) C21H24ClN3O2, 계산치: 385.16.
이 일반적 커플링 절차를 사용하여 (3-클로로페닐)보론산을 적절한 보론산 또는 보론산 에스테르 모이어티으로 치환하여 다양한 7-(3-치환된 페닐 또는 피리딜)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 제조할 수 있었다.
단계 3. 7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성: (선디아 프로프. 455)
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. tert-부틸 7-(3-클로로페닐)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (1.2 g, 3.1 mmol)를 HCl/MeOH (1 M, 20 mL) 중에 용해시키고, 반응 혼합물을 실온에서 1.5시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 물 (20 mL) 및 K2CO3 (3 g)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 유기부를 농축시켜 7-(3-클로로페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (800 mg, 90%).
MS (ESI) C16H16ClN3, 계산치: 285.10.
단계 4. 7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
이 화합물을 일반적 우레아 커플링 절차를 사용하여 제조하여 7-(3-클로로페닐)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (20.4 mg, 24%).
MS (ESI) C22H20ClN5O, 계산치: 405.14; 실측치: 406 [M+H].
실시예 74. 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 제조:
단계 1. tert-부틸 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. 디옥산/물 (30 mL/3 mL)의 탈기된 혼합물에 tert-부틸 7-클로로-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (1.39 g, 4.5 mmol), (5-플루오로피리딘-3-일)보론산 (1.27 g, 9.0 mmol), Pd(dppf)Cl2 (0.37 g, 0.45 mmol), 및 Cs2CO3 (4.40 g, 13.5 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 110℃에서 12시간 동안 교반한 다음, 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (PE/EA = 2/1)에 의해 정제하여 tert-부틸 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트를 수득하였다 (1.5 g, 89%).
MS (ESI) C20H23FN4O2, 계산치: 370.18.
단계 2. 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀의 합성:
이 모이어티를 하기 프로토콜을 사용하여 제조하였다. TFA (20 mL)를 DCM (20 mL) 중 tert-부틸 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복실레이트 (1.50 g)의 용액에 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반한 다음, 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 포화 NaHCO3 용액으로 염기성화시키고, DCM (3x15 mL)으로 추출하였다. 유기부를 농축시켜 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀을 수득하였다 (1.2 g, 100%).
MS (ESI) C15H15FN4, 계산치: 270.13.
단계 3. 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
이 화합물을 일반적 우레아 커플링 절차를 사용하여 제조하여 7-(5-플루오로피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-에타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (12.8 mg, 15%).
MS (ESI) C21H19FN6O, 계산치: 390.16; 실측치: 391 [M+H].
실시예 75. 3-브로모-5-(옥사졸-5-일)아닐린의 제조:
단계 1. 5-(3-브로모-5-니트로페닐)옥사졸의 합성:
DME (10 mL) 중 3-브로모-5-니트로벤즈알데히드 (1 g, 4.34 mmol)의 용액에 K2CO3 (1.2 g, 8.68 mmol)에 이어서 1-((이소시아노메틸)술포닐)-4-메틸벤젠 (891 mg, 4.56 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 환류 하에 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, EtOAc를 첨가하고, 혼합물을 H2O 2회에 이어서 염수로 세척하였다. 유기 층을 MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 0%에서 100% EtOAc 구배)에 의해 정제하여 5-(3-브로모-5-니트로페닐)옥사졸 (762 mg, 65%)을 오렌지색 고체로서 수득하였다.
MS (ESI) C9H5BrN2O3, 계산치: 268.0, 270.0.
단계 2. 3-브로모-5-(옥사졸-5-일)아닐린의 합성:
THF (14 mL) 중 5-(3-브로모-5-니트로페닐)옥사졸 (762 mg, 2.83 mmol)의 용액에 아세트산 (13.6 mL)에 이어서 철 분말 (474 mg, 8.49 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 밤새 교반하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 혼합물을 포화 Na2CO3 용액 (175 mL)에 붓고, EtOAc (50 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, MgSO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 3-브로모-5-(옥사졸-5-일)아닐린 (697 mg)을 갈색 오일로서 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 사용하였다.
MS (ESI) C9H7BrN2O, 계산치: 238.0, 240.0.
옥사졸 형성에 이어서 니트로 환원의 이 일반적 2-단계 절차를 사용하여 4-브로모-5-니트로벤즈알데히드를 사용함으로써 4-브로모-5-(옥사졸-5-일)아닐린을 제조할 수 있었다.
실시예 76. 6-(옥사졸-5-일)피리딘-2-아민의 제조:
단계 1. 6-아미노-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드의 합성:
아세토니트릴 중 6-아미노피콜린산 (10.0 g, 72.5 mmol)의 슬러리 (150 mL)에 N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (8.52 g, 87.0 mmol), 1-히드록시벤조트리아졸 (11.8 g, 87.0 mmol), N-(3-디메틸아미노)-N'-에틸카르보디이미드 히드로클로라이드 (16.7 g, 87.0 mmol), 및 N,N-디이소프로필에틸아민 (37.7 mL, 217 mmol)을 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 1N NaOH와 에틸 아세테이트 사이에 분배하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 3회 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (에틸 아세테이트, 0.1% 트리에틸아민 포함)에 의해 정제하여 6-아미노-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드를 수득하였다 (4.30 g, 23.7 mmol, 33% 수율).
MS (ESI) C8H11N3O2, 계산치: 181.1.
단계 2. 6-(옥사졸-5-일)피리딘-2-아민의 합성:
수소화알루미늄리튬 (1.08 g, 28.5 mmol)을 THF (30 mL) 중 6-아미노-N-메톡시-N-메틸피콜린아미드 (4.30 g, 23.7 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 실온에서 90분 동안 교반하였다. 에틸 아세테이트 (30 mL)를 천천히 첨가하고, 반응물을 여과하고, 여과물을 취하고, 모든 용매를 진공 하에 제거하여 6-아미노피콜린알데히드를 수득하였으며, 이를 조 물질로 취하여 후속 단계에 사용하였다.
메탄올 (20 mL) 중 상기 알데히드의 용액에 p-톨루엔술포닐메틸 이소시아나이드 (13.9 g, 71.2 mmol) 및 탄산칼륨 (19.4 g, 140 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 환류 하에 2시간 동안 교반한 다음, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (디클로로메탄 중 10% 메탄올)에 의해 정제하여 6-(옥사졸-5-일)피리딘-2-아민을 수득하였다 (2.00 g, 12.4 mmol, 52% 수율, 2 단계에 걸침).
MS (ESI) C8H7N3O, 계산치: 161.1.
하기 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다: 4-(옥사졸-5-일)피리딘-2-아민; 5-(옥사졸-5-일)피리딘-3-아민.
실시예 77
3,5-비스(옥사졸-5-일)아닐린의 합성:
단계 1. N1,N3-디메톡시-N1,N3-디메틸-5-니트로이소프탈아미드의 합성:
디클로로메탄 (100 mL) 중 5-니트로이소프탈산 (5.00 g, 23.7 mmol)의 용액에 옥살릴 클로라이드 (5.00 mL, 59.1 mmol)를 첨가하고, 용액을 0℃로 냉각시켰다. DMF (1.0 mL)를 30분에 걸쳐 적가하였다. 혼합물을 실온으로 가온하고, 4시간 동안 교반하였다. 모든 용매를 진공 하에 제거하였다.
디클로로메탄 (80 mL) 중 N,O-디메틸히드록실아민 히드로클로라이드 (4.6 g, 47.1 mmol) 및 트리에틸아민 (6.60 mL, 47.4 mmol)의 혼합물에 0℃에서 디클로로메탄 (20 mL) 중 상기 산 클로라이드의 용액을 첨가하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 진공 하에 농축시켰다. 잔류물을 1N 수산화나트륨 사이에 분배하고, 에틸 아세테이트, 유기 층을 분리하고, 수성 층을 에틸 아세테이트로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (1:1 석유 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 N1,N3-디메톡시-N1,N3-디메틸-5-니트로이소프탈아미드를 수득하였다 (4.00 g, 13.5 mmol, 57% 수율).
MS (ESI) C12H15N3O6, 계산치: 297.1.
단계 2. 5-니트로이소프탈알데히드의 합성:
수소화알루미늄리튬 (2.70 g, 71.1 mmol)을 -40℃에서 THF (150 mL) 중 N1,N3-디메톡시-N1,N3-디메틸-5-니트로이소프탈아미드 (5.00 g, 16.9 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응물을 -40℃에서 4시간 동안 교반하였다. 10% 수산화나트륨 용액 (2.7 mL)을 천천히 첨가하고, 이어서 물 (2.7 mL)을 첨가하였다. 생성된 고체를 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켜 5-니트로이소프탈알데히드를 수득하였다 (1.37 g, 7.65 mmol, 45% 수율).
MS (ESI) C8H5NO4, 계산치: 179.0.
단계 3. 5,5'-(5-니트로-1,3-페닐렌)비스(옥사졸)의 합성:
1-이소시아노메탄술포닐-4-메틸-벤젠 (7.40 g, 37.8 mmol) 및 무수 탄산칼륨 (5.20 g, 37.8 mmol)을 메탄올 (100 mL) 중 5-니트로이소프탈알데히드 (1.37 g, 7.65 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응물을 질소 하에 2시간 동안 환류하였다. 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하였다. 잔류물을 에틸 아세테이트 (150 mL)와 물 (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 제거하고, 수성 층을 에틸 아세테이트 (3 x 150 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 농축시켜 조 5,5'-(5-니트로-1,3-페닐렌)비스(옥사졸)을 수득하였다 (1.70 g, 6.61 mmol, 86% 수율).
MS (ESI) C12H7N3O4, 계산치: 257.0.
단계 4. 3,5-비스(옥사졸-5-일)아닐린의 합성:
에틸 아세테이트 (50 mL) 중 5,5'-(5-니트로-1,3-페닐렌)비스(옥사졸) (1.70 g, 6.61 mmol) 및 탄소 상 팔라듐 (200 mg)의 혼합물을 수소 하에 4시간 동안 교반하였다. 고체를 여과하고, 여과물을 진공 하에 농축시켰다. 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (4:1 석유 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 3,5-비스(옥사졸-5-일)아닐린을 수득하였다 (1.30 g, 5.72 mmol, 87% 수율).
MS (ESI) C12H9N3O2, 계산치: 227.1.
실시예 78. tert-부틸 (2-(4-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)카르바메이트의 제조:
20 mL 마이크로웨이브 바이알에 tert-부틸 (2-브로모에틸)카르바메이트 (551 mg, 2.50 mmol), 아지드화나트륨 (460 mg, 7.05 mmol), 및 DMF (5 mL)를 채웠다. 바이알을 밀봉하고, 마이크로웨이브 중에서 110℃에서 12시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 물 (8 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2 x 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 황산마그네슘으로 건조시키고, 모든 용매를 진공 하에 제거하여 조 tert-부틸 (2-아지도에틸)카르바메이트를 수득하였다.
조 tert-부틸 (2-아지도에틸)카르바메이트를 THF (5 mL) 및 트리에틸아민 (1 mL) 중에 용해시켰다. 3-에티닐아닐린 (350 mg, 2.99 mmol)을 첨가하고, 이어서 아이오딘화구리(I) (15.0 mg, 0.0788 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 모든 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 50%에서 100% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 (2-(4-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-1-일)에틸)카르바메이트를 수득하였다 (415 mg, 1.37 mmol, 55% 수율, 2 단계에 걸침).
MS (ESI) C15H21N5O2, 계산치: 303.2.
실시예 79. tert-부틸 ((1-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트의 제조:
THF (9.0 mL) 및 트리에틸아민 (1.0 mL) 중 3-아지도아닐린 (Chem. Commun. 2004, 888) (1.34 g, 9.99 mmol)의 용액에 tert-부틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (1.55 g, 9.99 mmol) 및 아이오딘화구리(I) (40 mg, 0.210 mmol)을 첨가하였다. 반응물을 60℃에서 1시간 동안 교반한 다음, 모든 용매를 진공 하에 제거하였다. 나머지 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피 (펜탄 중 0%에서 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)메틸)카르바메이트를 수득하였다 (화합물 #; 1.71 g, 5.91 mmol, 59% 수율).
MS (ESI) C14H19N5O2, 계산치: 289.1; 실측치: 290.1 [M+H].
실시예 80
tert-부틸 ((1-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)메틸)카르바메이트의 제조:
3-아지도아닐린 (1.33 g, 9.92 mmol), tert-부틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (1.55 g, 9.99 mmol), 및 펜타메틸시클로펜타디에닐비스(트리페닐포스핀)루테늄(II) 클로라이드 (15.9 mg, 0.020 mmol)가 들은 바이알에 톨루엔 (10 mL)을 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 72시간 동안 교반한 다음, 반응물을 실온으로 냉각시켰다. 디클로로메탄 (5 mL)을 첨가하여 임의의 고체를 용해시키고, 나머지 용액을 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 50%에서 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 ((1-(3-아미노페닐)-1H-1,2,3-트리아졸-5-일)메틸)카르바메이트를 수득하였다 (970 mg, 3.35 mmol, 34% 수율).
MS (ESI) C14H19N5O2, 계산치: 289.2.
실시예 81
N4,N4-디메틸피리미딘-2,4-디아민의 제조:
4-클로로-2-아미노피리미딘 (495 mg, 3.82 mmol)을 밀봉된 튜브 중에서 수성 디메틸아민 (33%) 중에 용해시키고, 반응물을 100℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시킨 후, 반응물을 물로 희석하고, 디클로로메탄으로 추출하였다. 유기 층을 물 및 염수로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 용매를 진공 하에 제거하여 N4,N4-디메틸피리미딘-2,4-디아민을 수득하였다 (400 mg, 2.89 mmol, 76% 수율).
MS (ESI) C6H10N4, 계산치: 138.1.
실시예 82
tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트의 제조:
THF (20 mL)를 4-클로로-2-아미노피리미딘 (500 mg, 3.87 mmol) 및 N-Boc 피페라진 (7.21 g, 38.7 mmol)의 혼합물에 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 밤새 교반하였다. 냉각시킨 후, 용매를 진공 하에 제거하고, 나머지 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (1:1 석유 에테르:에틸 아세테이트)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-(2-아미노피리미딘-4-일)피페라진-1-카르복실레이트를 수득하였다 (650 mg, 2.33 mmol, 60% 수율).
MS (ESI) C13H21N5O2, 계산치: 279.2.
하기 화합물을 유사한 방식으로 제조하였다: 4-(4-메틸피페라진-1-일)피리미딘-2-아민
실시예 83. tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 제조:
단계 1. 2-브로모-5-니트로벤즈알데히드의 합성:
H2SO4 (100 mL) 중 2-브로모벤즈알데히드 (10.0 g, 53.7 mmol)의 용액에 KNO3 (5.43 g, 53.7 mmol)을 0℃에서 1시간에 걸쳐 조금씩 첨가하였다. 혼합물을 40분 동안 교반하고, 추가의 KNO3 (0.72 g)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 0℃에서 3시간 동안 교반한 다음, 빙수에 부었다. 생성된 침전물을 여과에 의해 수집하고, 물로 헹구고, EtOAc/펜탄으로부터 재결정화하여 2-브로모-5-니트로벤즈알데히드를 백색 고체로서 수득하였다 (11.7 g, 94% 수율).
MS (ESI) C7H4BrNO3, 계산치: 228.9.
단계 2. 5-(2-브로모-5-니트로페닐)옥사졸의 합성:
MeOH 중 2-브로모-5-니트로벤즈알데히드 (1.0 g, 4.33 mmol), K2CO3 (1.79g, 12.9mmol) 및 TosMIC (2.12g, 10.8 mmol)의 혼합물을 60℃에서 1.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 농축시켰다. 물을 첨가하고, 고체를 여과에 의해 수집하고, 물, MeOH에 이어서 석유 에테르로 헹궈 5-(2-브로모-5-니트로페닐)옥사졸을 회색 고체로서 수득하였다 (750 mg, 수율 65%).
MS (ESI) C9H5BrN2O3, 계산치: 228.9.
단계 3. tert-부틸 (3-(4-니트로-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성:
DME (20 mL) 중 5-(2-브로모-5-니트로페닐)옥사졸 (300 mg, 1.11mmol)의 용액에 tert-부틸 프로프-2-인-1-일카르바메이트 (431 mg, 2.77 mmol)를 N2 하에 첨가하였다. CuI (21 mg, 0.11 mmol) 및 Pd(dppf)Cl2 (78 mg, 0.11 mmol)를 첨가하고, 이어서 TEA (0.5 mL)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 4시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시키고, 물에 붓고, EtOAc (3 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피 (EtOAc:펜탄 = 1:5)에 의해 정제하여 tert-부틸 (3-(4-니트로-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 황색 오일로서 수득하였다 (350 mg, 수율 92%).
MS (ESI) C17H17N3O5, 계산치: 343.1.
단계 4. tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트의 합성:
포화 수성 NH4Cl/MeOH (V/V=1:3) 중 tert-부틸 (3-(4-니트로-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (3.8 g, 11.1 mmol) 및 Fe (4.96 g, 8.86 mmol)의 현탁액을 60℃에서 4.5시간 동안 가열하였다. 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드에 통과시키고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 EtOAc 중에 용해시키고, 물로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 농축시켰다. 조 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 황색 오일로서 수득하였다 (1.51 g, 수율 44%).
MS (ESI) C17H19N3O3, 계산치: 228.9.
tert-부틸 (3-(3-아미노-5-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트를 tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 3-브로모-5-니트로벤즈알데히드로부터 제조하였다.
실시예 84. tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로필)카르바메이트의 제조:
MeOH (100mL) 중 tert-부틸 (3-(4-니트로-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트 (3.0 g, 8.75 mmol) 및 10 wt% Pd/C (1.0 g)의 혼합물을 H2 분위기 (50 psi) 하에 16시간 동안 교반하였다. 혼합물 촉매를 여과에 의해 제거하고, 여과물을 농축시켰다. 잔류물을 실리카 겔 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로필)카르바메이트를 황색 오일로서 수득하였다 (940 mg, 수율 35%).
MS (ESI) C17H23N3O3, 계산치: 228.9.
tert-부틸 (3-(3-아미노-5-(옥사졸-5-일)페닐)프로필)카르바메이트를 tert-부틸 (3-(4-아미노-2-(옥사졸-5-일)페닐)프로필)카르바메이트에 대해 기재된 것과 유사한 방식으로 tert-부틸 (3-(3-니트로-5-(옥사졸-5-일)페닐)프로프-2-인-1-일)카르바메이트로부터 제조하였다.
실시예 85. 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘의 제조:
NMP (13 mL) 중 2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (1 g, 4.48 mmol), 3,3-디플루오로피롤리딘 히드로클로라이드 (1.9 g, 13.4 mmol), 및 K2CO3 (3 g, 22.4 mmol)의 혼합물을 110℃에서 밤새 교반하였다. 3,3-디플루오로피롤리딘 히드로클로라이드 (0.5 g)의 제2 부분을 첨가하고, 밤새 교반하였다. 혼합물을 여과하고, H2O로 세척하고, 2N HCl을 첨가하여 pH를 1로 조정하였다. 혼합물을 EtOAc로 세척하여 잔류 2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘을 제거하였다. 수성 층을 K2CO3 용액을 사용하여 pH 13으로 조정한 다음, EtOAc로 추출하여 2-(3,3-디플루오로피롤리딘-1-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘을 수득하였다 (220 mg, 17%).
MS (ESI) C15H21BF2N2O2, 계산치: 310.2.
이 일반적 절차를 사용하여 3-(트리플루오로메틸)피롤리딘 히드로클로라이드를 사용함으로써 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)피리딘을 제조할 수 있었다.
실시예 86. (S)-2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘의 제조:
IPA (3.5 mL) 중 2-플루오로-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (200 mg), (S)-3-플루오로피롤리딘 히드로클로라이드 (350 mg), 및 Na2CO3 (480)의 혼합물을 91℃에서 17시간 동안 교반하였다. 혼합물을 여과하고, 농축시켰다. 2N HCl을 첨가하여 pH를 1로 조정하고, EtOAc로 추출하였다. 수성 층을 Na2CO3 용액을 사용하여 pH 7로 조정하고, 물을 톨루엔을 사용하여 제거하였다. 잔류물을 EtOAc에 녹이고, 여과하고, 농축시켜 (S)-2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘을 수득하였다 (95 mg, 36%).
MS (ESI) C15H22BFN2O2, 계산치: 292.2.
이 일반적 절차를 사용하여 (R)-3-플루오로피롤리딘 히드로클로라이드를 사용함으로써 (R)-2-(3-플루오로피롤리딘-1-일)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘을 제조할 수 있었다.
실시예 87. 3,3-디플루오로-1-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)피롤리딘의 제조:
단계 1. 1-(3-브로모페닐)-3,3-디플루오로피롤리딘의 합성:
톨루엔 (20 mL) 중 1,3-디브로모벤젠 (1 g, 4.24 mmol), 3,3-디플루오로피롤리딘 히드로클로라이드 (669 mg, 4.66 mmol), Pd2(dba)3 (134 mg, 0.233 mmol), Cs2CO3 (3.32 g, 10.2 mmol), 및 BINAP (264 mg, 0.424 mmol)의 혼합물을 환류 하에 N2 분위기 하에 가열하였다. 밤새 교반한 후, 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 농축시켰다. 농축물을 EtOAc (50 mL) 중에 현탁시키고, 물 (20 mL x 3) 및 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO3 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc=100/1)에 의해 정제하여 1-(3-브로모페닐)-3,3-디플루오로피롤리딘 (645 mg, >100%)을 무색 오일로서 수득하였다.
MS (ESI) C10H10BrF2N, 계산치: 261.0.
단계 2. 3,3-디플루오로-1-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)피롤리딘의 합성:
디옥산 (18 mL) 중 1-(3-브로모페닐)-3,3-디플루오로피롤리딘 (899 mg, 3.43 mmol), 4,4,4',4',5,5,5',5'-옥타메틸-2,2'-비(1,3,2-디옥사보롤란) (957 mg, 3.77 mmol), Pd(dppf)Cl2 (75 mg, 0.103 mmol), KOAc (1 g, 10.29 mmol)의 현탁액을 N2 분위기 하에 85℃로 가열하였다. 밤새 교반한 후, 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (헥산에 이어서 헥산/EtOAc = 100/1)에 의해 정제하여 3,3-디플루오로-1-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)피롤리딘을 백색 고체로서 수득하였다 (화합물 A#; 873 mg, 82%).
MS (ESI) C16H22BF2NO2, 계산치: 309.2.
이 일반적 2-단계 절차를 사용하여 3-(트리플루오로메틸)피롤리딘 히드로클로라이드를 사용함으로써 1-(3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)페닐)-3-(트리플루오로메틸)피롤리딘을 제조할 수 있었다.
실시예 88. 2-(3-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란의 제조:
단계 1. 1-알릴-3-브로모벤젠의 합성:
3구 플라스크에서, 금속 Mg (1.78 g, 73.76 mmol)를 건조 에테르 (20 mL)에 N2 분위기 하에 담궜다. 건조 에테르 (20 mL) 중 1,3-디브로모벤젠 (15 g, 63.58 mmol)의 부피의 1/3을 혼합물에 첨가하였다. 1,2-디브로모에탄 (0.1 mL)을 첨가하여 반응을 개시하였다. 환류가 안정된 후에, 1,3-디브로모벤젠 용액의 잔류량을 환류를 유지하는 속도로 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 혼합물을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 건조 에테르 (20 mL) 중 알릴브로마이드 (7.87 g, 65.12 mmol)의 용액을 적가하였다. 첨가가 완결된 후, 현탁액을 환류 하에 1시간 동안 교반하였다. 반응물을 포화 NH4Cl (100 mL)로 켄칭하고, 혼합물을 분리하였다. 수성 상을 에테르 (20 mL x 2)로 추출하였다. 합한 유기 상을 물 (70 mL x 2) 및 염수 (30 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 1-알릴-3-브로모벤젠 (146 g)을 무색 오일로서 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 사용하였다.
MS (ESI) C9H9Br, 계산치: 196.0.
단계 2. 3-(3-브로모페닐)프로판-1,2-디올의 합성:
CH3CN/H2O (20 mL, v/v = 4/1) 중 1-알릴-3-브로모벤젠 (A#; 1 g, 5.08 mmol)의 용액에 NMO (1.3 g, 11.16 mmol) 및 K2OsO4·2H2O (187 mg, 0.508 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 2일 동안 교반하였다. CH3CN을 감압 하에 제거하고, 농축물을 EtOAc로 희석하였다. 혼합물을 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 농축시켜 3-(3-브로모페닐)프로판-1,2-디올 (화합물 A#)을 수득하였다. 이 물질을 추가 정제 없이 사용하였다.
MS (ESI) C9H11BrO2, 계산치: 230.0.
단계 3. 4-(3-브로모벤질)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란의 합성:
아세톤 (25 mL) 중 3-(3-브로모페닐)프로판-1,2-디올 (A#; 1.17 g, 5.06 mmol)의 용액에 2,2-디메톡시프로판 (1.8 mL, 15.18 mmol) 및 PTSA (96 mg, 0.506 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반하였다. 반응 혼합물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc = 20/1)에 의해 정제하여 4-(3-브로모벤질)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란을 연황색 오일로서 수득하였다 (화합물 A#; 200 mg, 15%).
MS (ESI) C12H15BrO2, 계산치: 270.0.
단계 4. 2-(3-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란의 합성:
디옥산 (15 mL) 중 4-(3-브로모-벤질)-2,2-디메틸-[1,3]디옥솔란 (A#; 800 mg, 2.95 mmol) 및 비스(피나콜레이토)디보론 (822 mg, 1.1 당량), Pd(dppf)Cl2 (216 mg, 0.1 당량) 및 KOAc (868 mg, 3.0 당량)의 혼합물을 탈기하고, N2 하에 85℃로 가열하였다. 85℃에서 밤새 교반한 후, 흑색 현탁액을 실온으로 냉각시키고, 셀라이트를 통해 여과하였다. 여과물을 농축시키고, 칼럼 크로마토그래피 (헥산/EtOAc = 40/1)에 의해 정제하여 2-(3-((2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메틸)페닐)-4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란을 무색 오일로서 수득하였다 (화합물 A#; 800mg, 85%).
MS (ESI) C18H27BO4, 계산치: 318.2.
실시예 89. (9S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드 및 2-(6-히드록시-3-옥소-3H-크산텐-9-일)-5-((6-옥소-6-((4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질) 아미노)헥실)카르바모일)벤조산의 제조:
시약 및 조건: a) NaHCO3, THF, 40℃; b) Fe, AcOH, IPA/물, 환류; c) AlH3, THF, -78℃에서 실온; d) 48% HBr; e) 3-트리플루오로페닐보론산, Pd(OAc)2, X-Phos, Cs2CO3, 디옥산/물; f) 트리포스겐, DIEA, CH2Cl2; g) 4N HCl, 디옥산; h) DIEA, 6[플루오레세인-5(6)-카르복스아미도]헥산산 N-히드록시숙신이미드 에스테르, CH3CN.
단계 1. (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)글루타레이트의 합성. 2,6-디클로로-3-니트로피리딘 (40.0 g, 207 mmol), L-글루탐산 디메틸 에스테르 히드로클로라이드 (87.7 g, 414 mmol) 및 NaHCO3 (69.6 g, 829 mmol)의 혼합물에 테트라히드로푸란 (600 mL)을 첨가하였다. 혼합물을 40℃에서 24시간 동안 교반하면서 2,6-디클로로-3-니트로피리딘의 소멸에 대해 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (10:1 (v/v) 헥산/ 에틸 아세테이트로 용리시킴)에 의해 정제하여 (S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)글루타레이트를 황색 고체로서 수득하였다 (60 g, 87%).
LRMS (m/z) 332.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C12H15N3O6Cl, 계산치, 332.0649; 실측치, 332.0651.
단계 2. (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트의 합성
(S)-디메틸 2-((6-클로로-3-니트로피리딘-2-일)아미노)펜탄디오에이트 (20 g, 60.2 mmol), 및 철 분말 (16.8 g, 301 mmol)의 혼합물에 2-프로판올 (375 mL) 및 물 (125 mL)을 첨가하였다. 교반 혼합물에 아세트산 (5.5 g, 90.3 mmol)을 첨가하고, 반응물을 환류 하에 1시간 동안 교반하면서 출발 물질의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 고체를 여과하고, 2-프로판올 (3 x 50 mL)로 세척하였다. 합한 여과물 및 세척물을 농축 건조시킨 다음, 잔류물을 진공 하에 농축시켜 (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트를 암황색 고체로서 수득하였으며, 이를 추가 정제 없이 후속 단계에 사용하였다 (15g, 81%).
LRMS (m/z) 270.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C11H13N3O3Cl, 계산치, 270.0645; 실측치, 270.0645.
단계 3. (S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올의 합성
N2 하에 테트라히드로푸란 (260 mL) 중 AlCl3 (17.78 g, 133.3 mmol)에 THF 중 2M LiAlH4의 용액 (200 mL, 400 mmol)을 기체 발생을 제어하는 속도로 적가하였다. 이와 같이 하여 THF 중 알란 (AlH3)의 용액을 수득하였다. 분리형 플라스크에서, THF (460 mL) 중 (S)-메틸 3-(6-클로로-2-옥소-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로파노에이트 (26.0 g, 96.4 mmol)의 용액을 N2 하에 제조한 다음, 드라이 아이스/아세톤 조로 냉각시켰다. 이에 교반 하에 알란 용액을 2시간에 걸쳐 적가하였다. 첨가가 완결되었을 때, 냉각 조를 제거하고, 반응물을 주위 온도로 가온되도록 하였다. 1.5시간 후, LCMS 분석은 반응이 완결되었음을 나타내었고, 물 (65 mL) 중 NaOH (17.6 g)의 용액을 H2의 발생이 제어되도록 천천히 첨가하였다. 현탁액을 18시간 동안 교반되도록 한 후, 고체를 여과에 의해 제거하였다. 침전물을 에틸 아세테이트로 세척한 다음, 여과물 및 세척물을 진공 하에 농축시켰다. 생성물을 실리카 겔 크로마토그래피 (CH2Cl2 중 0에서 10% MeOH 구배)에 의해 정제하여 (S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올을 황색빛 오렌지색 고체로서 수득하였다 (15.21 g, 69%).
LRMS (m/z) 228.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C10H15N3OCl, 계산치, 228.0904; 실측치, 228.0903.
단계 4. (5R,9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신의 합성
(S)-3-(6-클로로-1,2,3,4-테트라히드로피리도[2,3-b]피라진-3-일)프로판-1-올 (12 g, 52.7 mmol)에 48% (w/w) HBr(수성) (160 mL)을 첨가하고, 반응물을 90℃에서 18시간 동안 교반하면서 출발 알콜의 소멸을 HPLC에 의해 모니터링하였다. 반응이 완결된 후, 이를 주위 온도로 냉각시킨 다음, 1.2 M 수성 NaHCO3을 pH 8이 도달될 때까지 첨가하였다. 혼합물을 에틸 아세테이트 (3 x 100 mL)로 추출한 다음, 유기 상을 염수 (1 x 100 mL)로 세척하고, 건조시키고 (Na2SO4), 여과하고, 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (2:1 (v/v) 헥산/에틸 아세테이트로 용리시킴)에 의해 정제하여 (5R,9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 담황색 고체로서 수득하였다 (6.0 g, 55%).
LRMS (m/z) 210.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C10H13N3Cl, 계산치, 210.0798; 실측치, 210.0800.
단계 5. (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아조신의 합성
1,4-디옥산 및 물의 10 대 1 (v/v) 혼합물 (60 mL) 중 (9S)-2-클로로-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 3.0 g, 15.4 mmol), (3-(트리플루오로메틸)페닐)보론산 (4.4 g, 23.1 mmol), 아세트산팔라듐 (344 mg, 1.54 mmol), 2-디시클로헥실포스피노-2',4',6'-트리이소프로필비페닐 (X-Phos, 476 mg, 3.08 mmol), 및 탄산세슘 (15 g, 46.2 mmol)의 용액을 90℃에서 24시간 동안 가열하였다. 이어서, 반응물을 주위 온도로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (150 mL)로 희석하였다. 혼합물을 포화 수성 NaHCO3 (200 mL x 3)으로 세척한 다음, 유기 층을 건조시키고 (MgSO4), 농축 건조시켰다. 생성된 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 10-100% 에틸 아세테이트 구배)에 의해 정제하여 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신을 담황색 고체로서 수득하였다 (3.7 g, 75%).
LRMS (m/z) 320.2 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C17H17N3F3, 계산치, 320.1375; 실측치, 320.1375.
단계 6. tert-부틸 4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노-피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질카르바메이트의 합성
CH2Cl2 (30 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (999 mg, 3.23 mmol)의 용액에 N,N-디이소프로필에틸 아민 (1.7 mL, 9.78 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 빙조로 0℃로 냉각시켰다. 이어서, 트리포스겐 (482 mg, 1.63 mmol)을 4 작은 부분으로 첨가하였다. 빙조를 제거하고, 혼합물을 실온으로 가온되도록 하였다. 반응 진행을 500 uL 분취물을 제거하고 메탄올과 합함으로써 모니터링하여 중간체 클로로포르메이트의 형성을 통해 메틸 카르바메이트로의 전환에 대해 검정하였다. 임의의 출발 물질이 잔류하는 경우에, 트리포스겐 (200 mg)의 추가의 부분을 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 5시간 동안 교반하였다. 다음에, tert-부틸 4-아미노벤질카르바메이트 (800 mg, 3.60 mmol)를 2 동등 부분 (각각 400 mg)으로 상기 혼합물에 첨가하고, 생성된 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 포화 수성 NaHCO3 (30 mL)을 첨가한 다음, 유기 상을 분리하고, 감압 하에 농축 건조시켰다. 잔류물을 실리카 겔 크로마토그래피 (펜탄 중 15-100% 에틸 아세테이트 구배)에 의해 정제하여 tert-부틸 4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질-카르바메이트를 백색 고체로서 수득하였다 (761 mg, 42%).
LRMS (m/z) 568.2 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C30H33N5O3F3, 계산치, 568.2536; 실측치, 568.2538.
단계 7. (9S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드의 합성
tert-부틸 4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질카르바메이트 (759 mg, 1.34 mmol)를 4N HCl (10 mL) 및 1,4-디옥산 중에 용해시키고, 질소 하에 주위 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 생성된 고체를 진공 하에 밤새 건조시켜 (9S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 밝은 황갈색 고체로서 수득하였다 (763 mg, 100%).
LRMS (m/z) 468.1 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C25H25N5OF3, 계산치, 468.2011; 실측치, 468.2010.
단계 8. 2-(6-히드록시-3-옥소-3H-크산텐-9-일)-5-((6-옥소-6-((4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질) 아미노)헥실)카르바모일)벤조산의 합성
(9S)-N-(4-(아미노메틸)페닐)-2-(3-(트리플루오로-메틸)페닐)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드 (39 mg, 0.10 mmol)를 아세토니트릴 (2 mL) 및 메탄올 (0.2 mL) 중에 용해시켰다. 이어서, N,N-디이소프로필에틸아민 (32 μL, 0.20 mmol)을 첨가하고, 이어서 6-[플루오레세인-5(6)-카르복스아미도]헥산산 N-히드록시숙신이미드 에스테르 (50 mg, 0.085 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 실온에서 밤새 교반한 다음, 생성물을 역상 HPLC (0.1% TFA로 변형된 물 중 5-95% 아세토니트릴 구배)에 의해 단리시켜 2-(6-히드록시-3-옥소-3H-크산텐-9-일)-5-((6-옥소-6-((4-((9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-7,8,9,10-테트라-히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10-카르복스아미도)벤질)아미노)헥실)카르브- 아모일)벤조산을 갈색 고체로서 수득하였다 (26 mg, 35%).
LRMS (m/z) 939.2 [M+H]+; HRMS (m/z): [M+H]+ C52H46N6O8F3, 계산치, 939.3329; 실측치, 939.3328.
실시예 90. 미니-hSIRT1 설계 및 특징화
양성자-중양성자 교환 질량 분광측정법 (HDX-MS)을 전장 hSIRT1 단백질에 대해 수행하여 hSIRT1의 주요 기능적 영역을 확인 및 특징화하였다. H-D 교환 속도는 단백질의 동적 특성에 고도로 의존성이며, 더 빠른 교환은 용매 노출되고/거나 가요성인 영역에서 발생하고, 더 느린 교환은 더 많이 매립되고/거나 구조적으로 경질인 영역에서 발생한다 (Hamuro, Y. et al. (2003) J biomol Techniques: JBT 14, 171). hSIRT1(19-747)에 대한 이전 연구 (Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216)와 일치하게, 전장 hSIRT1은 3개의 주요 구조화 영역을 함유한다: 촉매 코어 영역, 잔기 229-516 (이하, hSIRT1cc로 지칭됨) (Jin, L. et al. (2009) J Biol Chem 284, 24394 및 Frye, R. A. (2000) Biochem Biophys Res Commun 273, 793), 촉매 코어 직전의 190-230의 N-말단 영역, 및 640-670 주위의 촉매 코어 이후의 C-말단의 원격 영역.
hSIRT1 상의 STAC 결합 부위를 프로빙하기 위해, HDX-MS를 STAC 1의 부재 또는 존재 하에 수행하였다. 1의 첨가는 hSIRT1의 N-말단 도메인에서 잔기 190-230 주위의 H-D 교환 속도를 감소시키며, 이는 이러한 영역이 STAC 결합에 수반되는 것을 시사한다. 추가로, 15N-표지된 hSIRT1(180-230)의 1H, 15N HSQC 스펙트럼은 잘 분산되어 있으며, 이는 이것이 자율적으로 폴딩되는 도메인을 형성하는 것을 시사한다. 15N-표지된 hSIRT1(180-230)에 대한 1의 첨가는 유의한 화학적 이동 교란을 유발하였으며, 추가로 1과, 이하 STAC-결합 도메인 (SBD)으로 지칭되는 이러한 영역의 직접 상호작용을 시사한다. p53-유래 펩티드 기질 (Ac-p53(W5))의 존재 하의 hSIRT1에 대한 1의 첨가 (Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695)는 SBD 주위 및 촉매 코어에서의 추정된 기질 결합 부위 (잔기 417-424) 둘 다에서의 H-D 교환 속도의 교란을 유발하였으며, 이는 N-말단 도메인에서의 STAC 결합 및 hSIRT1의 촉매 코어 내의 기질 결합이 커플링되어 있는 것을 나타낸다. 이는 STAC가 hSIRT1에 대한 기질 결합을 증진시켜 hSIRT1 촉매 효율을 증가시킨다는 이전 관찰과 일치한다 (Milne, J. C. et al. (2007) Nature 450, 712).
SBD와 대조적으로, HDX-MS에 의해 확인된 C-말단 구조적 요소 (641-665)는 약 150개 잔기에 의해 촉매 코어로부터 분리되고, 본원에서 C-말단 β-가닥/시트 (CBS)로 지칭되며 이전에 보고된 뮤린 SIRT1 활성 필수 (ESA) 펩티드 (19)와 유사한 여러 β-가닥을 함유하는 것으로 예측된다. 이전에 보고된 탈아세틸화 검정 조건을 사용하여, hSIRT1cc는 단지 전장 효소의 활성의 약 1/8을 나타낸다 (Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695). CBS 펩티드는 트랜스에서 hSIRT1cc의 촉매 활성을 EC50 = 59 nM로, 전장 hSIRT1의 것의 80%까지 복원하며, 이는 이전 관찰과 일치한다 (Kang, H. et al. (2011) Mol Cell 44, 203 및 Marmorstein, R. et al. (2012) J Biol Chem 287, 2468). 본 발명자들은 또한 모 CBS 펩티드와 유사하게 거동하는, 단지 β-가닥 영역 (642-658)을 커버하는 최소 CBS 단편을 설계하였다. 동역학적 특징화는 CBS 펩티드가 펩티드 기질 및 hSIRT1cc의 NAD+ 둘 다에 대한 KM 값을 4-5배 저하시킴으로써 활성을 복원한다는 것을 나타낸다 (표 1 참조).
표 1. CBS 펩티드의 부재 또는 존재 하의 hSIRT1 촉매 코어의 정상-상태 동역학.a
a PNC1/GDH 검정으로부터의 데이터.
b NAD+ 농도는 1 mM에서 고정되었음.
c Ac-p53(W) 농도는 500 μM에서 고정되었음.
이와 함께, 상기 데이터는 1) 기초 촉매 기구를 구성하는 중심 코어; 2) STAC 결합 및 활성화를 매개하는 N-말단 SBD, 및 3) 촉매 코어를 안정화시켜 더 효율적인 데아세틸라제 활성을 유발하는 C-말단 CBS 펩티드를 포함하는, 최소 기능 hSIRT1에 대한 3-부분 아키텍처를 시사한다. 이에 기초하여, 본 발명자들은 공유 결합된 모든 3종의 최소 구조적 요소를 포괄하는 hSIRT1 구축물을 설계하였으며, 이를 본 발명자들은 미니-hSIRT1로 칭하였다. 구축물은 183-505 또는 183-516에 걸쳐 있으며, 이는 가요성 폴리-글리신/세린 링커 (GS, (GGGS)2, 또는 (GGGS)3)를 통해 CBS 펩티드에 연결된다 (Sauer, R. T. and Robinson, C. R. (1998) Proceedings of Nat Academy of Sciences of USA 95, 5929). 비-경쟁적 hSIRT1 억제제 EX-527 또는 니코틴아미드 (NAM)에 대한 IC50 값이 미니-hSIRT1의 기능적 충실도를 확인시켜주는 바와 같이, KM 및 kcat 값은 미니-hSIRT1 구축물과 전장 효소 사이에서 비슷하였다 (표 2 참조). 추가로, 화학형의 광범위한 세트에 걸친 STAC-매개 활성화에 대해 미니-hSIRT1과 전장 효소 사이에 탁월한 상관관계가 존재한다. SBD의 제거는 미니-hSIRT1의 STAC-매개 활성화를 완전히 무효화시키며, 이는 활성화에 대한 이러한 도메인의 중대한 중요성을 확인시켜준다. 대조적으로, CBS 결여 미니-hSIRT1은 STAC 활성화의 유의한 수준을 유지하며, 이는 CBS가 STAC-매개 활성화를 증진시키지만 그에 필요한 것은 아닌 것을 증명한다. 최종적으로, E230K 돌연변이는 또한 전장 효소에서와 같이 미니-hSIRT1에서 STAC-매개 활성화를 감쇠시킨다 (Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216). 종합적으로, 이들 관찰은 분자 크기의 절반에서, 미니-hSIRT1이 전장 hSIRT1에 대한 완전 기능적 및 활성화가능 대용물인 것을 증명한다.
표 2. 미니-hSIRT1 구축물의 정상-상태 동역학.a
a PNC1/GDH 검정으로부터의 데이터.
b NAD+ 농도는 2 mM에서 고정되었음.
c Ac-p53(W) 농도는 400 μM에서 고정되었음.
d (1)로부터의 값
실시예 91. 미니-hSIRT1/STAC 복합체의 구조
hSIRT1 촉매 코어의 X선 결정학적 구조가 보고된 바 있으며 (Zhao, X. et al. (2013) J Med Chem 56, 963), 본 발명자들의 지식에 있어서 전장 효소의 구조는 존재하지 않는다. 전장 hSIRT1의 구조는 부분적으로, 연장된 N- 및 C-말단 도메인의 입체형태적 가요성으로 인해 과제가 되어 왔다. 미니-hSIRT1 구축물은 본 발명자들에게 전장 효소의 등가 기능적 대용물을 결정화시킬 기회를 제공하였다. 본 발명자들은 HDX-MS 실험에 사용된 STAC 1로 미니-hSIRT1 (183-505-(GGGS)2-CBS)을 성공적으로 결정화시켰으며, SIRT3의 상동체 모델을 기반으로 한 검색 모델을 사용하여 분자 대체에 의해 3.1 Å로 복합체 (미니-hSIRT1/1)의 구조를 결정하였다 (Jin, L. et al. (2009) J Biol chem 284, 24394). 미니-hSIRT1은 모든 시르투인에 대해 공통인 로스만-폴드 대형 로브 및 아연-결합 소형 로브로 추정되는 촉매 코어, N-말단 3-나선형 다발 SBD, 및 C-말단 β-헤어핀 CBS로 구성된다. 흥미롭게도, 결정학적 대칭에 의해 관련된 미니-hSIRT1의 STAC-매개 이량체가 결정 격자에서 관찰되었다. 크기 배제 크로마토그래피 (SEC)는 미니-hSIRT1이 STAC 1의 존재 하에 용액 중에서 이량체를 형성하는 것을 확인시켜준다. 그러나, 미니-hSIRT1 이량체의 형성은 동일한 화학형의 유사한 STAC 7에 대해서는 관찰되지 않는다. 이러한 관찰, 및 결정화에 사용된 STAC 농도가 활성화를 측정하는 생화학적 검정에 사용된 것보다 훨씬 더 높다는 사실을 고려하여, 결정 구조에서 관찰된 이량체화는 STAC에 의한 hSIRT1 활성화에 대한 요건은 아닌 것으로 보일 것이다.
CBS는 촉매 도메인의 로스만-폴드 로브의 6-가닥 β-시트로 β-증진을 매개하며, 이는 CBS 결합 시의 hSIRT1cc 교란의 HDX-MS 결과와 일치한다. CBS-매개 β-증진은 hSIRT1 촉매 코어의 활성 부위를 안정화시키는 것으로 보이며, 이는 아세틸화 펩티드 및 NAD+ 기질 둘 다에 대해 관찰된 KM 값을 복원한다. N-말단 SBD는, SBD 내의 나선-대-나선 연결구조 (H2-T-H3) 모티프에 결합하는 1과 함께, 독립적으로 폴딩되는 3-나선형 다발을 형성하며, 이는 HDX-MS, NMR 및 효소 동역학적 결과와 일치한다. 주요 미니-hSIRT1/1 결합 부위는 1의 CF3 기가 점유하는, 중심에서 벗어난 더 깊은 소수성 포켓을 갖는 비교적 얕은 소수성 표면이다. 이는 다중 STAC 화학형에 걸쳐 발생되는 관찰된 구조 활성 관계 (SAR)와 일치하며, 이는 분자내 수소 결합에 의해 유지되는 코어 스캐폴드의 전반적 평탄성의 요건을 나타낸다 (Vu, et al. (2009) J Med Chem, 52, 1275). 도메인 형상 관점에서의 현저한 유사성이 미니-hSIRT1 구조와 효모 Sir2의 것 사이에서 관찰되었으며, 이들 둘 다는 N-말단 나선형 다발 및 전형적인 로스만-폴드 대형 로브를 넘어서는 β-헤어핀에 의한 C-말단 β-증진을 갖는다 (Hsu, H. C. et al. (2013) Genes & Dev 27, 64). 그러나, 효모 Sir2는 hSIRT1에서 관찰된 150개 아미노산 삽입을 포함하지 않으며, 효모에서의 천연 "미니-SIRT1"로서 나타난다. Sir2에서의 N-말단 도메인은 또 다른 효모 단백질 Sir4에 의한 알로스테릭 활성화에 중요한 것으로 보인다 (Hsu, H. C. et al. (2013) Genes & Dev 27, 64). Sir2 N-말단 도메인의 아키텍처는 hSIRT1 SBD와 상이하지만, 이들 2종은 촉매 코어의 알로스테릭 활성화에서 기능적으로 보존된 역할을 갖는 것으로 보인다.
실시예 92. STAC 결합 포켓의 부위-지정 돌연변이유발
본 발명자들은 미니-hSIRT1 구조에 의해 확인된 SBD의 주요 잔기를 확인하기 위해 전장 hSIRT1의 부위-지정 돌연변이유발을 사용하였다. 3종의 클래스의 잔기를 프로빙하여 하기 전장 hSIRT1의 점 돌연변이체가 발생되었다: a) 활성화제와 직접 상호작용하는 것으로 보이는 잔기 (T219A, I223A, N226A, 및 I227A), b) 커플링 조정제 Glu230 (Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216) (E230K, E230A, 및 E230Q), 및 c) 활성화제 결합에 있어서 뚜렷한 역할이 없는 SBD 잔기 (Q222A 및 V224A). 돌연변이체 중 어떠한 것도 Ac-p53(W5) 기질을 사용하는 기초 촉매 활성을 유의하게 손상시키거나 또는 EX-527, TFA-p53 펩티드 (Ac-RHK-KTFA-L-Nle-F-NH2) 또는 니코틴아미드 (NAM)에 의한 억제에 영향을 미치지 않았다 (표 4 및 5 참조).
활성화에 대한 돌연변이의 일반적인 영향은 25 μM의 고정 농도에서 시험된 246종의 STAC의 구조적으로 다양한 세트를 사용하여 야생형 대비 돌연변이체 전장 SIRT1의 배수-활성화를 비교함으로써 평가하였다. 추가로, 본 발명자들은 5종의 화합물 (STAC 1, 6-9)의 패널을 각각 사용하여 그의 EC50 및 최대 활성화 값에서의 이동을 모니터링함으로써 STAC 결합 대비 활성화에 대한 돌연변이의 효과를 조사하였다. T219A, I223A 및 I227A 모두는 야생형 hSIRT1과 비교하여 EC50에서의 증가와 함께 활성화의 광범위한 손상을 나타내었으며, 이는 구조와 일치하는 손상된 활성화제 결합에 연루되어 있다 (표 6 참조). 흥미롭게도, I223A는 감쇠로부터 증진에 이르는 STAC-매개 활성화를 갖는 가장 화합물-의존성인 돌연변이체였다. 증진된 활성화를 나타내는 STAC는 오르토-CF3 치환된 페닐 고리를 함유하는 구조에 대해 풍부화된다. 결정 구조에서, Ile223은 활성화제의 바로 아래에 놓여있으며, 1의 메타-CF3이 삽입된 포켓을 라이닝한다. Ile223의 Ala로의 돌연변이에 의해 생성된 공동은 메타-치환에 대비하여 오르토 치환기를 더 잘 수용할 것으로 예상될 것이다. 이러한 관찰은 STAC 결합을 지배하는 주요 분자 상호작용을 추가로 입증하며, SBD와의 STAC 상호작용을 변경시키는 전략을 가리킨다.
표 4. 야생형 및 돌연변이체 전장 hSIRT1에 대한 정상-상태 기질의 기질 동역학.
a PNC1/GDH 검정으로부터의 데이터.
b OAcADPr 검정으로부터의 데이터.
c (1)로부터의 값
표 5. 야생형 및 돌연변이체 전장 hSIRT1의 억제.
a Ac-p53(W5) 기질을 사용하는 OAcADPr 검정으로부터의 데이터.
b TFA-p53 펩티드 서열: Ac-RHKK(TFA)L-Nle-F-NH2.
표 6. 전장 hSIRT1 활성화 또는 억제 검정에 사용된 기질 농도.
Asn226은 그의 카르복스아미드 질소와 단백질 표면 상의 1의 카르보닐 산소 사이에 수소 결합을 형성하는 것으로 보인다. 그러나, N226A의 활성화는 야생형과 비교하여 단지 최소로 손상되었다. 이러한 H-결합으로부터의 작은 기여도는 그의 높은 용매 노출로 인한 것일 가능성이 있다.
Glu230의 Lys 또는 Ala로의 돌연변이는 그의 발생 메카니즘이 명백하지는 않지만, STAC에 의한 활성화를 광범위하게 손상시키는 것으로 최근에 보고된 바 있다 (Hubbard, B. P. et al. (2013) Science 339, 1216). 본 발명자들은 E230K, E230A, 및 E230Q 전장 hSIRT1 단백질의 활성화를 시험하였다. 모든 3종의 Glu230 돌연변이체에서, 최대 활성화는 EC50을 이동시키지 않으면서 손상되었으며 (표 7 및 8 참조), 이는 hSIRT1의 활성화된 입체형태의 형성 또는 안정화에서의 Glu230에 대한 역할을 시사한다. E230Q의 활성화가 또한 광범위하게 손상되었으며, 이는 Glu230의 음전하가 hSIRT1의 활성화된 입체형태를 안정화시키는데 중요하고, Glu230이 활성화된 입체형태에서 양으로 하전된 잔기와 상호작용할 가능성이 있다는 것을 나타낸다.
표 7. 활성화제 EC50 값에 대한 hSIRT1 돌연변이의 효과.
a 배수 이동 = (돌연변이체 EC50/야생형 EC50)
EC50 값은 수학식 1을 사용하여 활성화 용량-반응 곡선으로부터 결정되었음. 활성화는 Ac-p53(W5) 기질을 사용한 OAcADPr 검정을 사용하여 측정되었음.
표 8. STAC에 의한 최대 활성화에 대한 hSIRT1 돌연변이의 효과.
a 배수 이동 = (야생형 RVmax-1)/(돌연변이체 RVmax-1)
최대 활성화 값 (RVmax)은 수학식 1을 사용하여 활성화 용량-반응 곡선으로부터 결정되었음. 활성화는 Ac-p53(W5) 기질을 사용한 OAcADPr 검정을 사용하여 측정되었음.
상기 돌연변이체와 대조적으로, Q222A 및 V224A는 정상적인 활성화를 나타내었으며, 이는 미니-hSIRT1/1 구조에서 STAC로부터 멀리 떨어진 그의 위치와 일치한다. 중요하게, 전장 hSIRT1로 수득된 모든 이들 데이터는 미니-SIRT1 결정 구조로 예상한 것과 일치하며, 이는 이들 구조의 생화학적 유의성을 추가로 입증한다.
상기 기재된 돌연변이의 광범위한 영향에도 불구하고, 이들 중 어떠한 것도 SBD의 제거로 보여진 바와 같이 hSIRT1의 활성화를 완전 무효화하지는 않았다. Ile223은 결합 STAC의 바로 아래에 놓여있으며, I223A의 활성화는 고도로 화합물-의존성이기 때문에, 본 발명자들은 I223R hSIRT1이 지금까지 가장 고도로 활성화-손상된 전장 효소를 구성할 것이라는 가설을 세웠다. Ile로부터 Arg로의 치환은 소수성 STAC 결합 부위에 벌크 및 전하를 도입하며, 이는 구조를 기반으로 하여 화합물 결합을 방해하는 것으로 예상될 것이다. I223R은 Ac-p53(W5) 또는 FOXO-3a 기질 펩티드로의 기초 촉매 활성, 또는 EX-527, TFA-p53 펩티드 또는 NAM에 의한 억제를 변경시키지 않는다 (표 4, 5 및 9 참조). 그러나, 활성화는 둘 다의 기질에 대한 모든 246종의 활성화제에 대해 완전히 상실된다.
표 9. FOXO-3a 21-량체를 갖는 전장 hSIRT1에 대한 정상-상태 동역학a.
a PNC1/GDH 검정으로부터의 데이터.
실시예 93. STAC와 기질 결합 사이의 알로스테릭 커플링
본 발명자들은 STAC에 의한 hSIRT1의 활성화의 메카니즘을 조사하였다. 이를 위해, 본 발명자들은 미니-hSIRT1, 1, p53으로부터 유도된 7개 아미노산 펩티드 기질 (Ac-p53) 및 비-가수분해성 NAD+ 유사체 carbaNAD의 4원 복합체의 2.73 Å 구조, 및 NAD+ 결합 부위 및 펩티드를 점유하는 신규 활성-부위 지정 억제제 2와 복합체화된 미니-hSIRT1/1의 2.74 Å 구조를 결정하였다. 4원 복합체 구조에서, Ac-p53 펩티드 및 carbaNAD는 대형과 소형 로브 사이의 활성 부위 간극에 결합한다. Ac-p53은 확장된 입체형태를 채택하며, 여기서 주쇄 아미드 기는 소형 로브로부터의 잔기 Gly415 및 Glu416 및 대형 로브로부터의 잔기 Lys444 및 Arg446과 수소 결합을 형성한다. 펩티드 +1 위치의 아미드와 Arg446의 것 사이의 수소 결합은 소수성 +1 잔기에 대한 측쇄들 사이의 잠재적 상호작용을 제공하며, 이는 STAC-매개 hSIRT1 활성화에서 중요할 수 있다 (Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695). 아세틸리신 측쇄는 Phe414, Leu418 및 Val445에 의해 라이닝된 소수성 공동에 삽입된다. 아세틸 기는 His363과 Phe297 사이에 샌드위치되며, 여기서 아세틸리신의 ε-N은 Val412의 카르보닐 산소와 수소 결합되고, 이는 아세틸-리신 측쇄의 배향 및 확장된 입체형태를 유지한다. carbaNAD는 또한 hSIRT1과 다중-지점 접촉을 생성하며, 이들 중 대부분은 hSIRT1 촉매 코어/NAD/EX-527 유사체의 3원 복합체에서 관찰된 것들과 유사하다 (Zhao, X. et al. (2013) J Med Chem 56, 963). 니코틴아미드 고리의 아미드 기가 C-포켓에서 Ile347 및 Asp348과 수소 결합을 형성하는 것과 같은 일부 차이가 주목되었다. 추가로, 니코틴아미드 측의 리보푸라노스의 2' 및 3' 히드록실 기는 아세틸-리신의 카르보닐 산소 원자와 수소 결합을 형성하며, 이는 NAD의 C-1' 원자가 펩티드 N-ε-아세틸 기에 의한 후속의 친핵성 공격을 위해 배향되는 것을 돕는다. 억제제 2는 미니-hSIRT1의 아세틸-리신 결합 부위 및 니코틴아미드 결합 C-포켓 둘 다를 점유하며, 이는 SIRT3/2 복합체의 최근에 보고된 구조와 유사하다. SIRT3과 유사하게, 기질 또는 활성-부위 억제제의 결합은 소형 및 대형 로브를 함께 모아서 도메인 폐쇄로 이어진다 (Szczepankiewicz, B. G. et al. (2012) J Org chem 77, 7319 및 Jin, L. et al. J Biol Chem (2009) 284, 24394). 활성 부위 점유 시에 더 우세한 입체형태적 변화는 N-말단 도메인의 상향 이동이며, Arg234 주위의 힌지로 보여지고, SBD가 활성 부위에 더 가까워지도록 하여, 협동 운동을 통한 STAC 결합 및 기질 결합 부위의 알로스테릭 커플링에 대한 잠재적 메카니즘을 제공한다. 힌지 잔기, Arg234는 다염기성 링커 (잔기 233-238) 내에 위치하며, N-말단 SBD를 그의 구아니디늄 기와 Asp475의 카르복실레이트 기 사이에 형성된 염 가교, 및 His473 및 Val459의 카르보닐 기에 대한 수소 결합을 통해 촉매 코어에 앵커링한다. 이들 3종의 구조에서의 SBD의 비교는 도메인이 비교적 경질인 것을 나타내며, 여기서 단지 제1 나선과 중첩가능한 STAC-결합 나선-대-나선 연결구조 (H2-T-H3) 모티프는 미니-hSIRT1/1/2 복합체 구조에서 약간 기울어져 있다. 본 발명자들은 SBD와 앵커링 Arg234 사이의 짧은 링커 (230-233)가 알로스테릭 커플링에 중요할 것인지를 Pro231 및 Pro232의 Gly로의 돌연변이를 통해 링커의 강성을 조정함으로써 평가하였다. 사실상, P231G/P232G는 미니-hSIRT1의 현저하게 감쇠된 STAC 활성화를 나타내며, 이는 SBD의 이동, 및 STAC 결합 및 기질 결합의 결과적 커플링을 매개하는 이러한 짧은 링커의 중요성을 지지한다.
HDX-MS 데이터는 야생형 hSIRT1과 대조적으로, E230K 돌연변이체에 대한 STAC 결합이 더 이상 E230K/1/Ac-p53(W5) 복합체에서 펩티드 결합 부위 주위에 보호를 제공하지 않는다는 것을 나타낸다. 이는 E230K 돌연변이가 STAC와 기질 결합 부위 사이의 커플링을 손상시킬 가능성이 있다는 것을 나타낸다. 이를 추가로 연구하기 위해, 형광 편광 (FP) 검정을 개발하여 hSIRT1에 대한 STAC 결합을 측정하고, 기질의 존재 하의 커플링 효과를 조사하였다. 0.3 μM의 Kd로 전장 hSIRT1에 결합하는 플루오레세인-연결된 STAC (3)를 FP 프로브로서 사용하였으며, 이는 그의 모 화합물 4와 효과적으로 경쟁하였다. 3의 결합은 I223R hSIRT1에 대해 심하게 손상되었으며, 이는 전장 효소에서의 STAC 결합에 직접 수반되는 것으로서의 미니-hSIRT1/1 구조에 제시된 이러한 잔기의 역할을 확인시켜준다. STAC를 5에 의해 예시된 Ac-p53(W5) 기질의 부재 또는 존재 하에 FP 검정으로 시험하였으며, 이는 활성화에 대한 KM-저하 메카니즘과 일치하는, Ac-p53(W5)의 존재 하의 증진된 결합 친화도 (Ki)를 나타내었다. E230K 돌연변이체는 야생형과 비교하여 대부분의 STAC에 대해 현저하게 유사한 결합 친화도를 나타내며, Ac-p53(W5)에 의한 이 결합의 증진은 부재하거나 또는 심하게 감쇠되었다. HDX-MS 및 활성화 데이터는 함께, Glu230이 STAC 결합에 직접 수반되지 않는 대신에, STAC 및 기질 결합의 커플링을 매개하여 활성화를 촉진하는 중대한 잔기인 것을 시사한다. 이는 E230K 미니-hSIRT1 단백질과 화합물 1 및 2의 구조를 결정함으로써 추가로 입증되었다. 전반적 구조는 야생형 미니-hSIRT1/1/2 3원 복합체의 것들과 유사하였으며, 이는 Glu230이 STAC 결합에 직접 참여하지 않는 대신에, 알로스테릭 커플링 동안 동적 역할을 할 수 있다는 것을 확인시켜준다. 게다가, 결정학적 이량체는 야생형 단백질 구조에 대해 보여진 것과 유사한, E230K 미니-hSIRT1/STAC 구조로 관찰되었으며, 이는 추가로 이량체화가 STAC에 의한 hSIRT1의 생화학적 활성화에 필요할 가능성이 낮다는 것을 나타낸다.
STAC-매개 SIRT1 활성화를 위한 아세틸-기질 상의 소수성 모이어티에 대한 일반적 요건을 평가하기 위해 (Dai, H. et al. (2010) J Biol Chem 285, 32695), 본 발명자들은 +1 위치에 대한 Arg446의 밀착 근접성을 기반으로 하여 잔기 Arg446을 Ala에 대해 상호작용시키는 잠재적 +1 Trp를 돌연변이시켰다. R446A hSIRT1은 예상된 바와 같이 Ac-p53(W5)에 대해 증가된 KM 값을 가졌다 (표 2 참조). 그러나, 이는 또한 E230K/A 돌연변이체에 대해 관찰된 것과 유사한, 감쇠된 활성화를 나타내었다. 이러한 관찰, Arg446의 양이온성 성질, 및 활성 부위와 STAC-결합 부위 사이의 커플링을 고려하여, 본 발명자들은 미니-hSIRT1 R446E/E230K 이중 돌연변이체를 생성시키고, E230K 및 R446E 미니-hSIRT1을 대조군으로서 사용하여 Arg446이 E230에 대한 가능한 정전기적 파트너인지를 시험하였다. E230K 또는 R446E는 미니-hSIRT1의 STAC 활성화의 유의한 감쇠를 유발하는 반면에, R446E/E230K 이중 돌연변이체는 E230K 또는 R446E와 비교하여 미니-hSIRT1의 STAC-매개 활성화를 부분적으로 복원하였다. 이들 데이터는 활성화된 입체형태에서 Glu230과 Arg446 사이의 염 가교의 존재를 지지하며, 활성화된 상태에서 촉매 코어와 상호작용하는 SBD의 제안된 이동과 일치한다.
본 발명자들이 본원에 논의한 모든 미니-hSIRT1 구축물은 전장 hSIRT1의 3종의 주요 특색을 요약한다: 1) 정상 상태 효소 동역학 및 억제, 2) 다중 화학형에 걸친 STAC 활성화 프로파일, 및 3) E230K에 의한 STAC 활성화 손상. 이어서, 본 발명자들은 미니-hSIRT1 구축물을 사용하여 결합된 STAC를 갖는 hSIRT1의 완전 기능적 형태의 처음 보고된 구조를 수득하였다. 생화학적 및 구조적 특징화는 CBS와 촉매 코어 사이의 hSIRT1분자내 상호작용을 나타내며, 이는 hSIRT1의 기초 탈아세틸화 활성에 필수적이다. 더 중요하게, 미니-hSIRT1/STAC 복합체의 구조는 STAC 결합 부위의 상세한 아키텍처를 나타내며, 이는 미래의 구조-기반 약물 설계에 중요한 정보를 제공한다. 결합된 상이한 리간드를 갖는 hSIRT1 구조의 비교는 SBD의 정확한 위치가 결정 패킹에 의해 영향받을 가능성은 있지만, N-말단 SBD가 입체형태적 반응 좌표를 따라 상향 이동을 겪는다는 것을 시사한다. 따라서, STAC 활성화에 대한 잠재적 메카니즘, 즉 SBD의 상향 이동 및 STAC 결합과 기질 결합을 커플링하는 촉매 코어의 도메인 폐쇄의 협동 운동이 추론될 수 있다. FP를 사용하는 생물물리학적 특징화 및 전장 hSIRT1을 사용하는 부위-지정 돌연변이유발은, STAC 결합 및 활성화의 이러한 모델을 지지하는 미니-hSIRT1/STAC 복합체의 구조적 관찰과 완전히 일치한다. 본 발명자들의 지식에 따르면, 본원에 보고된 미니-hSIRT1/STAC 복합체의 구조는 단지 글루코키나제 이외의 효소에 결합된 합성 알로스테릭 활성화제의 제2 예를 나타낸다 (Grimsby, J. et al. (2005) Science 301, 370). 요약하면, 본원에 제시된 결과는 펩티드 기질을 갖는 소분자에 의한 hSIRT1의 직접 알로스테릭 활성화의 명백한 시각적 및 기능적 증거를 제공하며, STAC에 의한, 및 잠재적으로 또한 hSIRT1의 내인성 조절인자에 의한 hSIRT1 활성화의 메카니즘의 추가 규명에 대한 기초를 제공한다.
실시예 94. 단백질 클로닝, 발현 및 정제
미니-hSIRT1 구축물을 변형된 pET21b 벡터 (노바젠) 내로 클로닝하였다. 단백질을 통합된 TEV 프로테아제 부위를 갖는 헥사히스티딘 친화성 태그에 대한 N-말단 융합물로서 이. 콜라이(E. coli) BL21-골드 (DE3) 세포 (스트라타진)에서 발현시켰다. 단일 콜로니를 A600이 0.3에 도달할 때까지 37℃, 250 rpm에서 100 μg/ml 암피실린 함유 LB 배지 중에서 접종하였다. 이어서, 배양물을 A600이 0.6에 도달할 때까지 16℃, 250 rpm으로 옮겼다. 이소프로필 1-티오-β-D-갈락토피라노시드 (IPTG)를 0.2 mM의 최종 농도로 첨가하고, 발현을 16℃, 250 rpm에서 밤새 계속하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 펠릿을 용해 완충제 (25 mM HEPES, pH 7.5, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 및 5 mM 2-메르캅토에탄올) 중에 재현탁시키고, 초음파처리하여 세포를 파괴하였다. 상청액을 4℃에서 40분 동안 10,000 xg에서의 원심분리에 의해 세포 파편으로부터 분리하고, 25 mM HEPES, pH 7.5, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5 mM 2-메르캅토에탄올, 및 20 mM 이미다졸 함유 완충제로 평형화된 Ni-NTA 칼럼 (퀴아젠) 상에 로딩하였다. 칼럼을 5 칼럼 부피의 25 mM HEPES, pH 7.5, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5 mM 2-메르캅토에탄올, 및 50 mM 이미다졸 함유 완충제로 세척하고, 25 mM HEPES, pH 7.5, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5 mM 2-메르캅토에탄올, 및 250 mM 이미다졸 함유 완충제로 용리시켰다. 용리된 단백질을 용해 완충제 중에서 투석하고, 밤새 4℃에서 N-말단 His 태그가 제거되도록 TEV 프로테아제 (인비트로젠)로 소화시켰다. 단백질을 용해 완충제로 평형화된 제2 Ni-NTA 칼럼 상에 로딩하였다. 태그부착되지 않은 단백질을 25 mM HEPES, pH 7.5, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5 mM 2-메르캅토에탄올, 및 5 mM 이미다졸 함유 완충제에 의해 용리시켰다. 정제된 단백질을 20 mM 트리스-HCl, pH 8.0, 250 mM NaCl, 5% 글리세롤, 및 10 mM DTT 함유 완충제에 대해 투석하고, 농축시켰다. 단백질을 S200 칼럼 (지이 헬스케어)에 의해, 쿠마시 브릴리언트 블루 R-250에 의해 염색하여 SDS-PAGE 분석에 의해 평가 시에 95% 순도로 추가로 정제하고, 투석 완충제 중 10-15 mg/ml로 농축시켰다.
인간 hsirt1 180-230을 T7-lacO 프로모터의 제어 하에 발현이 위치하는 BamHI와 XhoI 사이의 변형된 pET21b 벡터 (노바젠) 내로 클로닝하였다. 단백질을 통합된 TEV 프로테아제 부위를 갖는 헥사히스티딘 친화성 태그에 대한 N-말단 융합물로서 이. 콜라이 BL21-골드 (DE3) 세포 (스트라타진)에서 발현시켰다. 단일 콜로니를 100 ug/ml 암피실린 함유 100ml LB 배지 중에서 밤새 37℃, 250 rpm에서 접종하였다. 이어서, 20ml LB 배지를 15NH4Cl 함유 1L M9 배지에 접종한 다음, 이를 OD600이 약 0.8에 도달할 때까지 오비탈 진탕기 (200 rpm) 상에서 37℃에서 인큐베이션하였다. 이어서, 배양물을 A600이 1.0에 도달할 때까지 16℃, 250 rpm으로 옮겼다. 이소프로필 1-티오-β-D-갈락토피라노시드를 0.3 mM의 최종 농도로 첨가하고, 발현을 16℃, 200 rpm에서 밤새 계속하였다. 세포를 원심분리에 의해 수집하고, 펠릿을 용해 완충제 (50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5 mM β-ME, pH 7.5) 중에 재현탁시키고, 초음파처리하여 세포를 개방시켰다. 상청액을 4℃에서 40분 동안 10,000xg에서의 원심분리에 의해 세포 파편으로부터 분리하고, 50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5%글리세롤, 5 mM β-ME, pH 7.5 함유 완충제로 평형화된 Ni-NTA 칼럼 (퀴아젠) 상에 로딩하였다. 칼럼을 20 칼럼 부피의 50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5% 글리세롤, 5m MB-ME 및 20 mM 이미다졸, pH 7.5 함유 완충제로 세척한 다음, 50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5 % 글리세롤, 5 mM β-ME 및 250 mM 이미다졸, pH 7.5 함유 완충제로 용리시켰다. 용리된 단백질을 용해 완충제 중에서 투석하고, 밤새 4℃에서 N-말단 His 태그가 제거되도록 TEV 프로테아제 (인비트로젠)로 소화시켰다. 단백질을 용해 완충제로 평형화된 제2 Ni-NTA 칼럼 상에 로딩하였다. 태그부착되지 않은 단백질을 50 mM Hepes, 200 mM NaCl, 5 % 글리세롤, 5 mM β-ME 및 10 mM 이미다졸, pH 7.5 함유 완충제에 의해 용리시켰다. 정제된 단백질을 농축시키고, S200 칼럼 (지이 헬스케어)에 의해, 쿠마시 브릴리언트 블루 R-250에 의해 염색하여 SDS-PAGE 분석에 의해 평가 시에 95% 순도가 제공되도록 추가로 정제하고, 50 mM HEPES, 50 mM NaCl, 0.5 mM TCEP, pH 6.5 중 10 mg/ml로 농축시켰다.
실시예 95. 전장 SIRT1 생산
C-말단 His6 태그를 갖는 전장 인간 SIRT1 (hSIRT1) 단백질을 발현시키고, 에크타엑스프레스(AEKTAxpress)™ (지이 라이프사이언시스)를 사용하여 정제한 Q222A 및 I223R SIRT1을 제외하고는, 문헌 [Hubbard. et al. (2013) Science 339, 1216]에 기재된 바와 같이 정제하였다. 각각의 세포 페이스트를 얼음 상에서 EDTA-무함유 프로테아제 억제제 칵테일 정제인 컴플리트 (로슈)로 보충된 1,000 U 벤조나제 뉴클레아제 (시그마 알드리치) 함유 완충제 A (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 250 mM NaCl, 25 mM 이미다졸, 및 0.1 mM TCEP) 중에 재현탁시켰다. 40 W에서 총 12분 동안 50% 온 및 50% 오프로의 펄스 초음파처리에 의해 세포를 파괴하였다. 불용성 파편을 원심분리에 의해 제거하였다. 정화된 상청액을 1 mL His트랩 FF 크루드 칼럼 (지이 라이프사이언시스) 상에 직접 로딩하였다. 완충제 A로 세척한 후, SIRT1을 완충제 B (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 250 mM NaCl, 500 mM 이미다졸 및 0.1 mM TCEP)로 용리시켰다. 단백질을 하이-로드 슈퍼덱스 200 16/60 칼럼 (지이 라이프사이언시스)을 사용하여 완충제 C (50 mM 트리스-HCl pH 7.5, 300 mM NaCl, 0.1 mM TCEP) 로 크기 배제 크로마토그래피에 의해 추가로 정제하였다. 표준물로서 BSA를 사용하여 브래드포드 검정에 의해 효소 농도를 결정하였다. 최종 단백질 순도를 겔 밀도측정법에 의해 평가하였다. 단백질을 LC/MS에 의해 확인하였다. V224A 및 T219A (80%) 및 E230A (85%)를 제외하고는, 모든 단백질은 90% 초과의 순도였다.
실시예 96. SIRT1 탈아세틸화 반응
SIRT1 탈아세틸화 반응을 반응 완충제 (50 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 150 mM NaCl, 1 mM DTT, 및 1% DMSO) 중에서 25℃에서 수행하며, 연속 PNC1/GDH 커플링 검정을 사용하여 니코틴아미드 생산을 모니터링하거나 (Smith, B. C. et al. (2009) Anal Biochem 394, 101) 또는 질량 분광측정법에 의해 O-아세틸 ADP 리보스 (OAcADPr) 생산을 모니터링하였다 (Hubbard. et al. (2013) Science 339, 1216). 사용된 PNC1/GDH 커플링 시스템 성분의 최종 농도는 20 단위/mL 소 GDH (시그마-알드리치), 1 uM 효모 PNC1, 3.4 mM α-케토글루타레이트, 및 220 μM NADH 또는 NADPH였다. 6.22 mM-1cm-1의 흡광 계수 및 0.81 cm의 경로길이를 사용하여 340 nm에서의 흡광도를 사용된 150 uL 반응물에 대한 생성물 농도로 전환시켰다. OAcADPr 생산을 모니터링하는 검정을 0.05% BSA 함유 반응 완충제 중에서 수행하고, 탈아세틸화 반응물을 정지 용액으로 켄칭함으로써 1% 포름산 및 5 mM 니코틴아미드의 최종 농도를 제공하는 시점을 정하였다. 켄칭된 반응물을 1:1 아세토니트릴:메탄올로 5배 희석하고, 5,000 x g에서 10분 동안 회전시켜 단백질을 침전시킨 후, 전기분무 이온화 공급원이 피팅된 ABSciex API 4000 질량 분광계에 커플링된 애질런트 래피드파이어 200 고처리량 질량 분광측정법 시스템 (애질런트, 매사추세츠주 웨이크필드)으로 분석하였다. p53-기반 Ac-p53(W5) (Ac-RHKKAcW-NH2) 및 FOXO-3a 21-량체 (Ac-SADDSPSQLSKAcWPGSPTSRSS-NH2) 펩티드는 바이오펩티드, 인크.로부터 입수하였다. 탈아세틸화 검정은 달리 나타내지 않는 한, Ac-p53(W5) 기질을 사용하였다.
기질 KM 결정은 1종의 기질 농도를 제2 기질의 고정된 포화 농도에서 변동시킴으로써 수행하였다. SIRT1 활성화 및 억제 검정은 25℃에서 0.05% BSA 함유 반응 완충제 중에서 실행하고, OAcADPr 검정을 사용하여 분석하였다. 효소 및 화합물을 20분 동안 예비-인큐베이션한 후, 기질을 첨가하였다. 전장 hSIRT1의 활성화 스크린을 위해, 246종의 화합물의 구조적으로 다양한 세트를 각각 25 μM의 최종 농도에서 이중 시험하였다. KM-조정 활성화제에 대해 감수성이도록 하기 위해, 그의 KM 값의 대략 1/10의 기질 농도를 사용하였다 (표 5 참조). 5종의 화합물의 용량-의존성을 시험하고, 배수-활성화 데이터를 수학식 1에 의해 기재하였다.
<수학식 1>
여기서 vx/v0은 활성화제 (X)의 존재 (vx) 대 부재 (v0) 하의 반응 속도의 비이고, RVmax는 무한 활성화제 농도에서의 상대 속도이고, EC50은 RVmax의 1/2를 생성하는데 필요한 활성화제의 농도이고, b는 vx/v0의 최소 값이다.
표 5. 야생형 및 돌연변이체 전장 hSIRT1의 억제
a Ac-p53(W5) 기질을 사용하는 OAcADPr 검정으로부터의 데이터.
b TFA-p53 펩티드 서열: Ac-RHKK(TFA)L-Nle-F-NH2.
실시예 97. 단백질 결정화, 데이터 수집 및 구조 결정
미니-hSIRT1/1 2원 복합체의 결정을 18℃에서 현적 증기 확산 방법에 의해 수득하였다. 현적물은 단백질/화합물 혼합물 1 μl 및 0.2 M 염화마그네슘, 0.1 M 트리스 pH 8.5, 및 16 % w/v PEG 4000의 결정화 완충제 1 μl로 구성되었다. 미니-hSIRT1/1/2의 결정을 18℃에서 현적 증기 확산 방법에 의해 수득하였다. 현적물은 단백질/화합물 혼합물 1 μl 및 0.55 M 염화나트륨, 0.1 M MES pH 6.5, 및 20 % w/v PEG 4000의 결정화 완충제 1 μl로 구성되었다. 미니-hSIRT1/1/p53-7량체/carbaNAD 복합체의 결정을 18℃에서 현적 증기 확산 방법에 의해 수득하였다. 현적물은 단백질/기질 혼합물 1ul 및 5% v/v 택시메이트, pH .00.1 M HEPES pH 7.0 및 10% w/v PEG 5000 MME의 결정화 완충제의 1ul로 구성되었다. 미니-hSIRT1 (E230K)/1/2의 결정을 18℃에서 현적 증기 확산 방법에 의해 수득하였다. 현적물은 단백질/화합물 혼합물 1 μl 및 0.2 M 황산리튬, 0.1 M 비스-트리스 pH 6.5, 29% w/v PEG 3350의 결정화 완충제 1 μl로 구성되었다.
결정을 20% 글리세롤 함유 모액 중에서 동결-보호한 후, 액체 질소 중에서 급속-동결시켰다. 회절 데이터를 SSRF BL17U1, APS 21-ID-D 또는 APS 21-ID-G 빔라인에서 수집하고, 시아2 프로그램을 사용하여 처리하였다 (Winter, G. (2010) J Appl Crystallogr 43, 186). 분자 대체 소프트웨어 페이저 (McCoy, A. J. et al. (2007) J Appl Crystallogr 40, 658)를 사용하여 SIRT3의 상동체 모델 (PDB 코드 : 3GLU)을 기반으로 하여 잔기 242-494 함유 검색 모델을 갖는 구조를 해석하였다. 반복적 구조 정밀화 및 모델 구축은 CCP4 패키지 ((1994) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 50, 760)의 Refmac5 (Murshudov, A. A. et al. (1997) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 53, 240)과 [Coot et al. (2004) Acta Crystallogr D Biol Crystallogr 60, 2126] 사이에서 수행하였다. 회절 데이터, 정밀화 및 구조 통계에 대한 상세한 정보는 표 3에 열거되어 있다.
표 3. 데이터 처리 및 정밀화 통계
* 괄호 안의 값은 최고-해상도 쉘에 대한 것임
실시예 98. 핵 자기 공명 (NMR) 분광분석법
1H, 15N HSQC NMR 실험은 400 μM 1의 존재 또는 부재 하에 대략 200 μM 15N-표지된 SIRT1(180-230) 함유 샘플을 사용하여 25℃에서 크리오프로브를 갖춘 브루커 아반스 III 600MHz NMR 분광계 상에서 수행하였다. 모든 NMR 데이터는 NMR파이프 (Delaglio, F. et al. (1995) J Biomol NMR 6, 277)로 처리하고, NMR뷰 (Johnson, et al. (1994) J Biomol NMR 4, 603)로 분석하였다.
실시예 99. 크기 배제 크로마토그래피 (SEC) 검정
검정을 50 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 150 mM NaCl, 및 0.5 mM TCEP 중에 용해된, 100 μM STAC의 부재 또는 존재 하의 10 μM 미니-hSIRT1 함유 100 μL 샘플을 주입하여 슈퍼덱스 75 10/300 GL 칼럼 (지이 헬스케어)으로 수행하였다. 결합 반응물을 실온에서 1시간 동안 인큐베이션한 후, 칼럼에 주입하였다.
실시예 100. 형광 편광 (FP) 검정
FP 실험은 20μL 검정 완충제 (50 mM HEPES-NaOH, pH 7.5, 150 mM NaCl, 및 1 mM DTT) 중에서 25℃에서 수행하였다. 384-웰 플레이트를 각각 502 nm 및 533 nm의 여기 및 방출 파장으로 페라스타 FS 상에서 판독하였다. 프로브 결합에 대해, 증가하는 농도의 SIRT1을 10nM 프로브 3에 첨가하였다. 결합 등온선을 수학식 2에 의해 기재하였다. 경쟁적 결합 모드에 대해, 증가하는 농도의 경쟁자를 15μM Ac-p53(W5)의 부재 또는 존재 하에 10nM 3 및 0.3μM SIRT1 야생형 또는 E230K 돌연변이체의 혼합물에 첨가하였다. 경쟁 데이터를 수학식 3에 의해 기재하였다. IC50의 Ki로의 변환을 수학식 4에 의해 기재하였으며, 여기서 Kd는 SIRT1에 대한 3의 결합 친화도이고, F0은 프로브 결합된 B/(B+F)의 분율이고, L0은 프로브 3의 농도이다.
<수학식 2>
<수학식 3>
<수학식 4>
실시예 101. 수소-중수소 교환 질량 분광측정법 (HDX-MS)
SIRT1의 온-교환 실험.
H/D-교환 반응, 이어서 펩신 소화, 탈염, HPLC 분리 및 MS 분석을 다른 곳에 상세하게 기재된 완전 자동화 시스템을 사용하여 수행하였다 (Hamuro, Y. et al. (2003) J Biomol Techniques: JBT 14, 171). 이러한 세트의 실험에 대해 특히, 20 μL의 SIRT1 원액 (1.9% DMSO 중 0.77 mg/mL SIRT1, ± 3.88 mM Ac-p53(W5), ± 192 μM 리간드) 및 20 μL의 D2O 중 100 mM 포스페이트, pH 판독치 7.0을 혼합함으로써 온-교환 반응을 개시하였다. 50% D2O 혼합물을 0℃에서 15, 50, 150, 500, 1,500 또는 5,000초 동안 인큐베이션하였다. SIRT1 (229-516)에 대해, 4 μL의 SIRT1 원액 (1.36 mg/mL SIRT1 (229-516), ± 1.67 mM Trp-25량체) 및 36 μL의 D2O 중 200 mM 포스페이트, pH 판독치 7.0을 혼합함으로써 온-교환 반응을 개시하였다. 90% D2O 혼합물을 0℃에서 15, 50, 150, 500, 1,500 또는 5,000초 동안 인큐베이션하였다. 분석 직전에, 20 μL의 1.6 M 구아니딘 히드로클로라이드 (GuHCl), 0.8% 포름산, pH 2.3을 첨가하여 온-교환 반응을 켄칭하였다.
실시예 102. 표준 HDX 샘플에 대한 일반적 단백질 프로세스
켄칭된 용액을 제조업체의 지침에 따라 포로스 20 AL 배지 (라이프 테크놀로지스, 캘리포니아주 칼스배드) 상에 고정화된 돼지 펩신 (시그마, 미주리주 세인트 루이스)으로 충전된 펩신 칼럼 (104 μL 층 부피)을 통해 2분 동안 0.05% 수성 TFA (200 μL/분)를 사용하여 통과시켰다. 소화된 단편을 일시적으로 역상 트랩 칼럼 (4 μL 층 부피) 상에 수집하고, 탈염시켰다. 이어서, 펩티드 단편을 트랩 칼럼으로부터 용리시키고, C18 칼럼 (바이오베이식-18; 써모 사이언티픽, 캘리포니아주 산호세)에 의해 23분에 걸친 13% 용매 B에서 40% 용매 B로의 선형 구배 (용매 A, 물 중 0.05% TFA; 용매 B, 95% 아세토니트릴, 5% 완충제 A; 유량 10 μL/분)를 사용하여 분리하였다. 질량 분광측정 분석은 LTQ 오비트랩 XL 질량 분광계 (써모 피셔 사이언티픽, 캘리포니아주 산호세)와 200℃의 모세관 온도를 사용하여 수행하였다.
실시예 103. SIRT1의 소화/분리 최적화 및 비-중수소화 실험
H/D-교환 실험 전에, 소화 및 분리 조건을 최적화하여 펩신 단편에 의한 SIRT1의 높은 서열 커버리지를 비-중수소화 조건 하에 고해상도로 수득하였다. 이러한 단계에서, 20 μL의 0.77 mg/mL (9.2 μM) SIRT1 및 20 μL의 H2O의 혼합물을 20 μL의 다양한 산성 완충제의 첨가에 의해 켄칭하였다. SIRT1 (229-516)에 대해, 4 μL의 SIRT1 원액 (1.36 mg/mL SIRT1 (229-516), ± 1.67 mM Trp-25량체) 및 36 μL의 H2O의 혼합물을 20 μL의 다양한 산성 완충제의 첨가에 의해 켄칭하였다. 켄칭된 혼합물을 상기 언급된 일반적 단백질 프로세스에 적용하였다. 비-중수소화 펩신 단편을 세퀘스트에 의해 프로테옴 디스커버러 1.1 (써모 피셔 사이언티픽, 캘리포니아주 산호세)에서 확인하였다.
실시예 104. SIRT1의 완전 중수소화 실험
완전 중수소화 샘플을 45 μL의 0.77 mg/mL (9.2 μM) SIRT1과 45 μL의 D2O 중 100 mM TCEP, pH 2.5의 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 인큐베이션함으로써 제조하였다. SIRT1 (229-516)에 대해, 완전 중수소화 샘플을 9 μL의 1.36 mg/mL (41.7 μM) SIRT1 (229-516)과 81 μL의 D2O 중 100 mM TCEP, pH 2.5의 혼합물을 60℃에서 3시간 동안 인큐베이션함으로써 제조하였다. 인큐베이션 후, 샘플을 0℃에서 유지한 후, 온-교환 용액과 동일하게 켄칭하고, 일반적 단백질 프로세스에 적용하였다.
실시예 105. 온-교환 반응 후 각각의 펩티드의 중수소화 수준의 결정.
펩티드 동위원소 외피의 센트로이드를 펩티드 동위원소 외피의 중심을 시에라 애널리틱스 (캘리포니아주 모데스토)와 공동으로 개발된 사내-프로그램을 사용하여 측정하였다. 단백질 프로세싱 단계 동안 역교환에 대한 수정은 하기 표준 방정식 수학식 5를 사용하여 만들어졌다 (Zhang, Z. et al. (1993) Protein Science 2, 522).
<수학식 5>
여기서 m(P), m(N), 및 m(F)는 부분 중수소화 (온-교환) 펩티드, 비-중수소화 펩티드, 및 완전 중수소화 펩티드 각각의 센트로이드 값이다.
실시예 106. 생물학적 활성
질량 분광측정법 기반 검정은 SIRT1 활성의 조정제를 확인하는데 사용하였다. TAMRA 기반 검정은 하기와 같은 20개 아미노산 잔기를 갖는 펩티드: Ac-EE-K(비오틴)-GQSTSSHSK(Ac)NleSTEG-K(5TMR)-EE-NH2 (서열식별번호: 1)를 이용하였으며, 여기서 K(Ac)는 아세틸화 리신 잔기이고, Nle는 노르류신이다. 펩티드를 C-말단에서 형광단 5TMR (여기 540 nm/방출 580 nm)로 표지하였다. 펩티드 기질의 서열은 여러 변형을 갖는 p53을 기반으로 하였다. 추가로, 서열에 자연적으로 존재하는 메티오닌 잔기를 노르류신으로 대체하였으며, 이는 메티오닌이 합성 및 정제 동안 산화에 대해 감수성일 수 있기 때문이다. Trp 기반 검정은 하기와 같은 아미노산 잔기를 갖는 펩티드: Ac-R-H-K-K(Ac)-W-NH2 (서열식별번호: 2)를 이용하였다.
TAMRA 기반 질량 분광측정법 검정은 하기와 같이 수행하였다: 0.5 μM 펩티드 기질 및 120 μM βNAD+를 반응 완충제 (50 mM 트리스-아세테이트 pH 8, 137 mM NaCl, 2.7 mM KCl, 1 mM MgCl2, 5 mM DTT, 0.05% BSA) 중에서 25℃에서 25분 동안 10 nM SIRT1과 함께 인큐베이션하였다. SIRT1 단백질을 SirT1 유전자를 T7-프로모터 함유 벡터 내로 클로닝함으로써 수득한 다음, 이를 형질전환시키고, BL21(DE3) 박테리아 세포에서 발현시켰다. 시험 화합물을 상기 반응 혼합물에 다양한 농도로 첨가하고, 생성된 반응물을 모니터링하였다. SIRT1과 함께 25분 동안 인큐베이션한 후, 10 μL의 10% 포름산를 첨가하여 반응을 정지시켰다. 생성된 반응물을 추후 질량 스펙트럼 분석을 위해 밀봉 및 동결시켰다. 시르투인-매개 NAD-의존성 탈아세틸화 반응에 의해 형성된 탈아세틸화 기질 펩티드의 양 (또는 대안적으로 생성된 O-아세틸-ADP-리보스 (OAADPR)의 양)의 결정은 시험 화합물 결여 대조군 반응에 대비하여 다양한 농도의 시험 화합물의 존재 하의 상대적 SIRT1 활성의 정밀 측정을 가능하게 하였다.
Trp 질량 분광측정법 검정은 하기와 같이 수행하였다. 0.5 μM 펩티드 기질 및 120 μM βNAD+를 반응 완충제 (50 mM HEPES pH 7.5, 1500 mM NaCl, 1 mM DTT, 0.05% BSA) 중에서 25℃에서 25분 동안 10 nM SIRT1과 함께 인큐베이션하였다. SIRT1 단백질을 SirT1 유전자를 T7-프로모터 함유 벡터 내로 클로닝함으로써 수득한 다음, 이를 BL21(DE3) 박테리아 세포에서 발현시키고, 하기에 더욱 상세하게 기재된 바와 같이 정제하였다. 시험 화합물을 상기 반응 혼합물에 다양한 농도로 첨가하고, 생성된 반응물을 모니터링하였다. SIRT1과 함께 25분 동안 인큐베이션한 후, 10 μL의 10% 포름산을 첨가하여 반응을 정지시켰다. 생성된 반응물을 추후 질량 스펙트럼 분석을 위해 밀봉 및 동결시켰다. 이어서, 상대적 SIRT1 활성은 시험 화합물 결여 대조군 반응에 대비하여 다양한 농도의 시험 화합물의 존재 하의 NAD-의존성 시르투인 탈아세틸화 반응에 의해 형성된 O-아세틸-ADP-리보스 (OAADPR)의 양 (또는, 대안적으로, 생성된 탈아세틸화 Trp 펩티드의 양)을 측정함으로써 결정하였다. 시험 작용제가 SIRT1에 의한 탈아세틸화를 활성화시킨 정도는 EC1.5 (즉, SIRT1 활성을 시험 화합물 결여 대조군에 비해 50% 증가시키는데 필요한 화합물의 농도), 및 퍼센트 최대 활성화 (즉, 시험 화합물에 대해 수득된 대조군 (100%) 대비 최대 활성)로서 표현하였다.
시르투인 활성의 억제에 대한 대조군은 반응 개시 시에 음성 대조군으로서 1 μL의 500 mM 니코틴아미드를 첨가함 (예를 들어, 최대 시르투인 억제의 결정을 허용함)으로써 수행하였다. 시르투인 활성의 활성화에 대한 대조군은 화합물 대신에 1 μL의 DMSO 함유 10 nM 시르투인 단백질을 사용하여 수행하여, 검정의 선형 범위 내의 주어진 시점에서의 기질의 탈아세틸화의 양을 결정하였다. 상기 시점은 시험 화합물에 대해 사용된 것과 동일하였으며, 선형 범위 내에서 종점은 속도의 변화를 나타낸다.
상기 검정을 위해, SIRT1 단백질을 하기와 같이 발현 및 정제하였다. SirT1 유전자를 T7-프로모터 함유 벡터 내로 클로닝하고, BL21(DE3)로 형질전환시켰다. 단백질을 18℃에서 밤새 N-말단 His-태그 융합 단백질로서 1 mM IPTG로의 유도에 의해 발현시키고, 30,000 x g에서 수확하였다. 세포를 용해 완충제 (50 mM 트리스-HCl, 2 mM 트리스[2-카르복시에틸] 포스핀 (TCEP), 10 μM ZnCl2, 200 mM NaCl) 중에서 리소자임을 사용하여 용해시키고, 완전 용해를 위해 초음파로 10분 동안 추가로 처리하였다. 단백질을 Ni-NTA 칼럼 (아머샴) 상에서 정제하고, 순수한 단백질을 함유하는 분획을 모으고, 농축시키고, 크기결정 칼럼 (세파덱스 S200 26/60 글로벌) 상에서 구동시켰다. 가용성 단백질을 함유하는 피크를 수집하고, 이온-교환 칼럼 (모노큐) 상에서 구동시켰다. 구배 용리 (200 mM - 500 mM NaCl)시켜 순수한 단백질을 수득하였다. 상기 단백질을 농축시키고, 투석 완충제 (20 mM 트리스-HCl, 2 mM TCEP)에 대해 밤새 투석하였다. 단백질을 분취하고, 추가 사용 시까지 -80℃에서 동결시켰다.
SIRT1을 활성화시키는 화학식 I의 시르투인-조정 화합물을 상기 기재된 검정을 사용하여 확인하였으며, 본 발명의 추가의 대표적인 화합물을 열거하는 하기 표 1 및 표 10에 제시되어 있다.
EC1.5 값은 SIRT1의 150% 활성화를 유발하는 시험 화합물의 농도를 나타낸다. 화학식 I의 활성화 화합물에 대한 EC1.5 값은 A (EC1.5 <1 μM), B (EC1.5 1-25 μM), C (EC1.5 >25 μM)에 의해 나타내어진다. 퍼센트 최대 배수 활성화는 A (배수 활성화 ≥150%) 또는 B (배수 활성화 <150%)에 의해 나타내어진다. "NT"는 시험되지 않음을 의미하고; "ND"는 결정가능하지 않음을 의미한다. 표 내의 화합물 넘버링은 화합물 번호 10, 및 도 4 및 실시예 90-106에서의 STAC 넘버링 시스템에 상응하는 괄호 넘버링 (#)으로 시작한다 (즉, 화합물 번호 68은 또한 STAC 1이므로, 이는 68(1)로서 제시됨, 추가의 STAC: 546(3), 444(4), 314(5), 816(7), 76(8), 및 81(9)).
표 1. 화학식 I의 화합물.
특정 실시양태에서, 화합물은 화합물 번호 1, 3, 4, 5, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 20, 23, 25, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 36, 38, 39, 40, 41, 42, 45, 46, 47, 48, 49, 53, 54, 56, 57, 59, 61, 63, 66, 68, 75, 76, 80, 81, 83, 86, 87, 90, 93, 95, 99, 101, 102, 107, 110, 118, 119, 120, 121, 122, 128, 129, 130, 133, 135, 136, 138, 139, 140, 141, 142, 145, 150, 151, 153, 156, 159, 160, 161, 162, 163, 164, 165, 166, 168, 170, 173, 174, 175, 176, 177, 178, 179, 180, 181, 182, 184, 189, 191, 194, 197, 207, 212, 214, 216, 218, 220, 222, 223, 230, 233, 235, 239, 250, 254, 260, 261, 264, 268, 271, 273, 274, 275, 276, 277, 278, 279, 280, 281, 282, 283, 285, 286, 288, 289, 290, 292, 293, 295, 299, 314, 316, 322, 324, 325, 329, 330, 332, 333, 335, 341, 344, 347, 348, 350, 351, 352, 353, 354, 356, 359, 360, 361, 365, 366, 367, 369, 373, 375, 376, 377, 378, 379, 380, 383, 385, 387, 388, 389, 391, 392, 393, 394, 396, 401, 402, 403, 404, 405, 406, 407, 408, 409, 410, 411, 412, 415, 417, 419, 421, 422, 423, 425, 427, 428, 430, 431, 435, 452, 459, 461, 463, 470, 472, 473, 474, 475, 480, 481, 483, 485, 491, 492, 496, 497, 498, 499, 500, 502, 503, 504, 505, 506, 507, 509, 515, 517, 519, 523, 526, 527, 530, 538, 540, 541, 542, 556, 557, 559, 562, 563, 574, 575, 580, 581, 583, 588, 589, 590, 591, 592, 593, 594, 595, 596, 601, 604, 605, 606, 607, 611, 617, 623, 625, 626, 629, 630, 635, 636, 637, 638, 639, 640, 642, 643, 645, 646, 647, 648, 651, 652, 653, 654, 655, 656, 657, 658, 659, 660, 663, 665, 666, 667, 668, 670, 671, 672, 676, 683, 692, 693, 694, 698, 703, 706, 708, 709, 710, 714, 717, 718, 719, 720, 721, 722, 723, 724, 725, 727, 730, 731, 733, 736, 737, 739, 740, 741, 742, 743, 746, 747, 748, 749, 750, 751, 752, 753, 754, 756, 757, 758, 760, 763, 765, 766, 767, 770, 776, 777, 780, 788, 790, 792, 797, 798, 799, 801, 803, 804, 806 및 808 중 임의의 1종이다.
한 측면 또는 실시양태에서, 본 발명의 화합물은 표 10에 하기 제시된 바와 같은 본 발명의 화합물 중 임의의 1종 및/또는 그의 상응하는 제약상 허용되는 염이다.
표 A - 추가의 대표적인 화합물
또 다른 측면 또는 실시양태에서, 본 발명은 표 10의 화합물 (즉, 추가의 대표적인 화합물 예) 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 또한 본원에 정의된 바와 같은 본 발명의 화합물 (즉, 표 1 및 표 10의 화합물 (즉, 본원에 제시된 추가의 대표적인 화합물 예)를 또한 포함하나, 이에 제한되지는 않는 화학식 I, IIa, IIb, IIIa, IIIb 및 IV), 및 본 출원에 정의된 바와 같은 추가의 활성제로 구성된 제약 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 본 발명의 화합물 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 추가의 활성제를 추가로 포함하는 본 발명의 제약 조성물에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증의 치료 또는 인슐린 감수성의 증가를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증을 치료하거나 또는 인슐린 감수성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증의 치료 또는 인슐린 감수성의 증가를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증을 치료하거나 또는 인슐린 감수성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 본 발명의 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 시르투인-1 활성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 세포를 본 발명의 제약 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 시르투인-1 활성을 증가시키는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대사 기능장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대사 기능장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 대사 기능장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대사 기능장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 노화 또는 스트레스, 당뇨병, 대사 기능장애, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암 또는 염증성 질환으로부터 선택되나, 이에 제한되지는 않는 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 장미증, 염증성 장 질환, 골다공증, 패혈증, 관절염, COPD, 전신 홍반성 루푸스 및 안부 염증으로부터 선택된 노화 또는 스트레스와 관련된 질환, 당뇨병, 대사 기능장애, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암 또는 염증성 질환에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 건선의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 건선을 치료하는 방법에 관한 것이다.
또 다른 측면에서, 본 발명은 건선의 치료를 필요로 하는 대상체에게 본 발명의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 건선을 치료하는 방법에 관한 것이다.
실시예 107
(4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(4-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
1,4-디옥산 (20 mL) 중 ((4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol), 4-(트리플루오로메틸)피페리딘 (679 mg, 4.43 mmol)의 탈기된 용액에 20℃에서 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (423 mg, 0.887 mmol), 탄산칼륨 (919 mg, 6.65 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (100 mg, 0.443 mmol)을 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (150 mL)로 추출하였다. 유기부를 분리하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 디클로로 메탄 중 1%에서 2% 메탄올로 용리시켰다. 분획을 수집하여 500 mg을 수득하였으며, 이를 다시 그레이스 역상 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(4-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (320 mg, 0.710 mmol, 32%).
MS (ESI) C21H23F3N6O, 계산치: 433.2.
추가의 신규 실시예
실시예 108
(4S)-7-클로로-N-(2-(3,3,3-트리플루오로프로필)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(4S)-7-클로로-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (250 mg, 1.278 mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중에 용해시키고, 질소 하에 실온에서 교반하고, 트리포스겐 (190 mg, 0.639 mmol), TEA (0.534 mL, 3.83 mmol)를 후속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이에 2-(3, 3,3-트리플루오로프로필) 아닐린 (483 mg, 2.56 mmol)을 첨가하고, 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 물 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x25 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하여 (4S)-7-클로로-N-(2-(3,3,3-트리플루오로프로필)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (240 mg, 0.563 mmol, 44.1% 수율), (Rf 값: 0.35, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 411.16 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 11.49 (s, 1 H), 7.79 (dd, J=8.00, 0.99 Hz, 1 H), 7.61 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.35 - 7.31 (m, 1 H), 7.24 - 7.29 (m, 1 H), 7.17 - 7.09 (m, 2 H), 5.44 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.21 - 2.90 (m, 6 H), 2.66 - 2.53 (m, 2 H), 2.20 (dddd, J=13.67, 9.95, 6.08, 3.62 Hz, 1 H), 1.91 (dt, J=13.70, 6.96 Hz, 1 H).
실시예 109
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(4-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 ((4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol), 4-(트리플루오로메틸)피페리딘 (679 mg, 4.43 mmol)의 탈기된 용액에 25℃에서 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (423 mg, 0.887 mmol), 탄산칼륨 (919 mg, 6.65 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (100 mg, 0.443 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각되도록 하고, 혼합물을 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔; 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(4-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 32% 수율), (TLC: 용리액; 에틸 아세테이트, Rf = 0.4), LCMS (m/z): 433.22 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.15 (s, 1 H), 8.34-8.18 (m, 1 H), 8.09 (dt, J=8.39, 0.96 Hz, 1 H), 7.77 (ddd, J=8.55, 7.13, 1.86 Hz, 1 H), 7.36 (d, J=8.77 Hz, 1 H) 7.04 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.99 Hz, 1 H) 6.51 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 5.43 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H) 4.39 (d, J=12.93 Hz, 2 H), 3.17-3.04 (m, 1 H), 3.02-2.76 (m, 5 H), 2.72-2.52 (m, 1 H), 2.25-2.04 (m, 1 H), 1.96-1.76 (m, 3 H), 1.57-1.39 (m, 2 H).
실시예 110
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((R)-3-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (750 mg, 2.375 mmol) 및 (70:30-R/S)-3-(트리플루오로메틸)피페리딘 (728 mg, 4.75 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 탄산칼륨 (985 mg, 7.13 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (107 mg, 0.475 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각되도록 하고, 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1%에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((R/S)-3-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 의 (70:30, R:S) 부분입체이성질체 혼합물을 회백색 고체로서 수득하였다 (310 mg, 수율 29.6%), (TLC: 용리액, 100% 에틸 아세테이트, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 433.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.10-12.94 (m, 1 H), 8.22 (d, J=5.15 Hz, 1 H), 8.15-7.98 (m, 1 H), 7.76 (t, J=7.48 Hz, 1 H), 7.45-7.28 (m, 1 H), 7.04 (ddd, J=7.34, 4.93, 0.88 Hz, 1 H), 6.54 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.48-5.32 (m, 1 H), 4.35-4.12 (m, 2 H), -3.12-2.89 (m, 5 H), 2.88-2.78 (m, 1 H), 2.61-2.52 (m, 1 H), 2.25-2.04 (m, 1 H), 2.04-1.92 (m, 1 H), 1.90-1.74 (m, 2 H), 1.71-1.46 (m, 2 H).
실시예 111
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((S)-3-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (550 mg, 1.742 mmol) (33:66-R/S)-3-(트리플루오로메틸) 피페리딘 (534 mg, 3.48 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 탄산칼륨 (722 mg, 5.23 mmol), 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (332 mg, 0.697 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (78 mg, 0.348 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 냉수 (70 mL)에 부었다. 조 생성물을 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((S/R)-3-(트리플루오로메틸) 피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 (33:67, S:R) 부분입체이성질체 혼합물을 백색 고체로서 수득하였다 (250 mg, 33.2% 수율), (TLC: 용리액, 100% 에틸 아세테이트, Rf 0.4), LCMS (m/z): 433.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.06-12.99 (m, 1 H), 8.22 (d, J=5.01 Hz, 1 H), 8.07 (dt, J=8.33, 0.88 Hz, 1 H), 7.76 (ddd, J=8.55, 7.13, 1.86 Hz, 1 H), 7.47-7.29 (m, 1 H), 7.04 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.99 Hz, 1 H), 6.54 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.51-5.36 (m, 1 H), 4.37-4.15 (m, 2 H), 3.12-2.80 (m, 6 H), 2.60-2.52 (m, 1 H), 2.25-2.04 (m, 1 H), 2.04-1.93 (m, 1 H), 1.90-1.74 (m, 2 H), 1.72-1.48 (m, 2 H).
실시예 112
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol), (R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (617 mg, 4.43 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (423 mg, 0.887 mmol), 탄산칼륨 (919 mg, 6.65 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (100 mg, 0.443 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (220 mg, 0.52 mmol, 32% 수율), (TLC: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.4), LCMS (m/z): 419.21 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.16 (s, 1 H), 8.20 (d, J=6.33, 1 H), 8.06 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.77 (td, J=7.84, 1.86 Hz, 1 H), 7.40 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.05 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.99 Hz, 1 H), 6.36 (d, J=8.77 Hz, 1 H), 5.40 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 5.28-5.06 (m, 1 H), 3.84 (dt, J=10.14, 5.12 Hz, 1 H), 3.65-3.36 (m, 1 H), 3.17-2.91 (m, 2 H), 2.90-2.80 (m, 2 H), 2.25-2.04 (m, 5 H), 1.84 (dt, J=13.65, 7.10 Hz, 1 H).
실시예 113
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(2-(트리플루오로메틸)모르폴리노)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol), 2-(트리플루오로메틸)모르폴린 (688 mg, 4.43 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (423 mg, 0.887 mmol), 탄산칼륨 (919 mg, 6.65 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (100 mg, 0.443 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각시킨 다음에서 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 디클로로메탄 중 1에서 2% 메탄올로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(2-(트리플루오로메틸)모르폴리노)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (300 mg, 0.69 mmol, 46% 수율), (TLC: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.4), LCMS (m/z): 435.20 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.99 (d, J=4.82 Hz, 1 H), 8.20 (dt, J=4.82, 0.88 Hz, 1 H), 8.07 (dd, J=8.44, 0.77 Hz, 1 H), 7.77 (td, J=7.84, 1.86 Hz, 1 H), 7.43 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.05 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.77 Hz, 1 H), 6.62 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.44 (ddd, J=9.98, 6.25, 3.29 Hz, 1 H), 4.34 (dd, J=7.13, 3.40 Hz, 1 H), 4.25 (d, J=12.28 Hz, 1 H), 4.14 (dd, J=11.62, 1.75 Hz, 1 H), 4.10-3.94 (m, 1 H), 3.87-3.67 (m, 1 H), 3.15-2.91(m, 6 H), 2.30-2.14 (m, 1 H), 1.72-1.65 (m, 1 H).
실시예 114
(4S)-N-(4-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 디클로로메탄 (12 mL) 및 물 (1.12 mL) 중 (4S)-N-(4-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (450 mg, 0.810 mmol)의 교반 용액에 디옥산 중 4.0 M 염산 (1.68 mL, 0.810 mmol)을 0℃에서 5분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 증발시켰다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨 용액으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (3 X 50mL)로 추출한 다음, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 n-펜탄으로 세척하여 순수한 (4S)-N-(4-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로 메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (340mg, 0.635 mmol, 78.0% 수율), LCMS (m/z): 516.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.42 (s, 1 H) 8.54 - 8.44 (m, 2 H) 8.10 (d, J=5.92 Hz, 1 H) 7.85 - 7.81 (m, 1 H) 7.80 - 7.68 (m, 4 H) 6.71 (dd, J=5.70, 2.41 Hz, 1 H) 5.51 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H) 5.01 (d, J=5.26 Hz, 1 H) 4.70 (t, J=5.70 Hz, 1 H) 4.11 (dd, J=9.76, 3.84 Hz, 1 H) 3.96 (dd, J=9.87, 6.36 Hz, 1 H) 3.87 - 3.79 (m, 1 H) 3.51 - 3.42 (m, 2 H) 3.26 - 3.17 (m, 1 H) 3.15 - 3.06 (m, 2 H) 2.96 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H) 2.25 (dddd, J=13.65, 9.92, 6.14, 3.62 Hz, 1 H) 1.95 (dt, J=13.81, 6.91 Hz, 1 H).
실시예 115
(4S)-N-(4-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 질소 하에 교반하는 디클로로메탄 (12.5 mL) 및 물 중 (4S)-N-(4-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 0.900 mmol), (1.25ml)에 디옥산 중 4.0 M 염산 (2 mL, 0.900 mmol)의 용액을 1 부분으로 1분에 걸쳐 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 증발시켰다. 반응 혼합물을 중탄산나트륨 용액으로 중화시키고, 에틸 아세테이트 (3 X 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 n-펜탄으로 세척하여 순수한 (4S)-N-(4-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (340mg, 0.612 mmol 68.0% 수율), LCMS (m/z): 516.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.42 (s, 1 H) 8.58 - 8.44 (m, 2 H) 8.10 (d, J=5.70 Hz, 1 H) 7.85 - 7-68 (m, 5 H) 6.71 (dd, J=5.81, 2.30 Hz, 1 H) 5.52 (dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H) 5.01 (d, J=5.26 Hz, 1 H) 4.70 (t, J=5.59 Hz, 1 H) 4.11 (dd, J=9.76, 3.84 Hz, 1 H) 3.96 (dd, J=9.76, 6.25 Hz, 1 H) 3.87 - 3.79 (m, 1 H) 3.50 - 3.43 (m, 2 H) 3.27 - 3.17 (m, 1 H) 3.16 - 3.05 (m, 2 H) 2.96 (dd, J=12.06, 3.07 Hz, 1 H) 2.30 - 2.20 (m, 1 H) 1.95 (dt, J=13.92, 7.07 Hz, 1 H).
실시예 116
(4S)-N-(2-(((R)-테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (20 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 1.965 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (0.822 mL, 5.90 mmol) 및 트리포스겐 (292 mg, 0.983 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 동일한 온도에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, (R)-2-((테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-아민 (1068 mg, 5.90 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 반응을 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 실온으로 되도록 하고, 용매를 감압 하에 증발시키고, 수득된 잔류물을 물 (15 ml)로 희석하고, DCM (2x 20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC (물 및 아세토니트릴 중 포름산 30%)에 의해 정제하여 (4S)-N-(2-(((R)-테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (310 mg, 0.605 mmol, 30.6% 수율) (TLC: Rf = 0.25, EtOAc 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 513.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.61 (s, 1 H), 8.50 (d, J=7.49 Hz, 1 H), 8.45 (d, J=5.62 Hz, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 7.87 (d, J=7.67 Hz, 1 H), 7.81 - 7.68 (m, 4 H), 5.47 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 5.32 (ddt, J=6.49, 4.36, 2.14, 2.14 Hz, 1 H), 3.91 - 3.76 (m, 1 H), 3.76 - 3.59 (m, 3 H), 3.28 - 3.05 (m, 3 H), 2.96 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.38 - 2.15 (m, 1 H), 2.14 - 1.88 (m, 3 H).
실시예 117
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol), (S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘 (617 mg, 4.43 mmol)의 탈기된 용액에 25℃에서 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (423mg,0.887mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (100 mg, 0.443 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉수 (70 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, DCM 중 1에서 2% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (250 mg, 0.598 mmol, 35% 수율), (TLC: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.4), LCMS (m/z): 419.18 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.13 (s, 1 H), 8.30-8.18 (d, J=7.2, 1 H), 8.18-7.96 (d, J=8.40, 1 H), 7.77 (ddd, J=8.55, 7.13, 1.86 Hz, 1 H), 7.41 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.04 (ddd, J=7.23, 4.82, 1.10 Hz, 1 H), 6.38 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.48 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 5.12-5.01 (m, 1 H), 3.84 (m, 1 H), 3.49 (q, J=9.65, J=5.70 Hz, 1 H), 3.04-2.90 (m, 4 H), 2.33-2.12 (m, 5 H), 1.72-1.80 (m, 1 H).
실시예 118
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
NaH (0.254 g, 10.57 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.550 g, 1.761 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 질소 하에 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.635 g, 2.64 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 75-80% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-((S)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.275 g, 0.631 mmol, 35.8% 수율), LCMS (m/z): 433.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.60 (s, 1 H), 8.20 - 8.29 (m, 1 H), 8.09 (dt, J=8.33, 0.88 Hz, 1 H), 7.72 - 7.81 (m, 1 H), 7.37 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.05 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.99 Hz, 1 H), 6.45 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.11 - 5.19 (m, 1 H), 4.74 (br s, 1 H), 3.91 (dt, J=10.19, 5.21 Hz, 1 H), 3.50 - 3.62 (m, 1 H), 3.27 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 3.11 - 3.22 (m, 1 H), 3.01 - 3.08 (m, 1 H), 2.81 (br d, J=13.37 Hz, 1 H), 2.07 - 2.28 (m, 4 H), 1.94 - 2.02 (m, 1 H), 1.81 - 1.92 (m, 1 H), 1.21 - 1.40 (m, 2 H)
실시예 119
(9S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (500 mg, 1.561 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (0.653 mL, 4.68 mmol) 및 트리포스겐 (232 mg, 0.780 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 5-플루오로피리딘-3-아민 (525 mg, 4.68 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 반응을 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. THF를 감압 하에 증발시키고, 수득된 잔류물을 물로 희석하고, CH2Cl2 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 수득하였으며, 이를 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (200 mg, 0.4366 mmol, 35% 수율), (TLC: Rf = 0.3, EtOAc 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 459.25[M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.19 (s, 1 H), 8.93 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 8.37 (s, 1 H), 8.33 - 8.21 (m, 2 H), 8.03 (d, J=11.18 Hz, 1 H), 7.88 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.78 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 4.83 (s, 1 H), 3.43 (d, J=12.06 Hz, 1 H), 3.25 (s, 2H), 2.90 (d, J=13.81 Hz, 1 H), 2.11 - 1.84 (m, 2 H), 1.33 (s, 2 H).
실시예 120
(9S)-N-(피리미딘-5-일)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (12 mL) 중 (9S)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.6 g, 1.873 mmol), 트리에틸아민 (0.783 mL, 5.62 mmol)의 용액에 트리포스겐 (0.278 g, 0.937 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 피리미딘-5-아민을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하여 조 물질을 수득하고, 디클로로메탄으로 희석하고, 물 및 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 유기 층을 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, CH2Cl2 중 2% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리미딘-5-일)-2-(5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (459 mg, 1.016 mmol, 54.2% 수율), (TLC: 헥산 중 80% EtOAc, Rf = 0.5), LCMS (m/z): 442.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.19 (s, 1 H), 9.48 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 9.08 (s, 1H), 8.96 (s, 1 H), 8.88 (s, 1 H), 8.71 (s, 1 H), 7.85 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.77 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 4.84 (s, 1 H), 3.43 (dd, J=13.59, 1.97 Hz, 1 H), 3.33 (s, 2 H), 2.90 (d, J=13.81 Hz, 2 H), 1.95 (d, J=10.30 Hz, 2 H), 1.33 (m, 2 H).
실시예 121
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-2-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
NaH (0.297 g, 12.39 mmol)를 질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.550 g, 2.065 mmol)의 교반 용액에 첨가하하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.744 g, 3.10 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 70% EtOAc: Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50-60% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-2-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (0.292 g, 0.751 mmol, 36.4% 수율), LCMS (m/z): 387 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.99 (s, 1 H), 8.59 (d, J=5.48 Hz, 1 H), 8.41 - 8.45 (m, 1 H), 8.27 (s, 1 H), 8.18 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.97 (br d, J=3.73 Hz, 1 H), 7.82 - 7.86 (m, 2 H), 7.71 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.11 - 7.16 (m, 1 H), 4.86 (br s, 1 H), 3.40 (br d, J=13.37 Hz, 1 H), 3.29 (s, 2 H), 2.91 (br d, J=13.15 Hz, 1 H), 2.64 (s, 3 H), 1.93 - 2.05 (m, 2 H), 1.32 (br s, 2 H)
실시예 122
(4S)-N-(2,3-디히드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 트리포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 2,3-디히드로벤조[b][1,4]디옥신-6-아민 (899 mg, 5.94 mmol) 및 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol)을 후속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔:100-200 메쉬, 용리액으로서 디클로로메탄 중 1% 메탄올의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-N-(2,3-디히드로벤조[b][1,4]디옥신-6-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 갈색 고체로서 수득하였다 (315 mg, 0.734 mmol, 51% 수율), (TLC: 디클로로메탄 중 5% 메탄올, Rf =0.3), LCMS (m/z): 430.0 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.69 (s, 1 H), 8.59 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.75-7.59 (m, 4 H), 7.16 (s, 1 H), 6.96-6.75 (dd, J=5.81, 2.41, 2 H), 5.46 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 4.27-4.10 (m, 4 H), 3.24-3.02 (m, 2 H), 3.00-2.76 (m, 2 H), 2.50 (s, 3 H), 2.25-2.09 (m, 1 H), 1.91-1.71 (m, 1 H).
실시예 123
(4S)-N-(6-에틸피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (25 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 트리-포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 6-에틸피라진-2-아민 (317 mg, 2.58 mmol), 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol)을 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: 디클로로메탄 중 1% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-에틸피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.640 mmol, 32.3% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 402.23 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.47 (s, 1 H), 9.23 (s, 1 H), 8.59 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.29 (s, 1 H), 8.02 (d, J=4.82 Hz, 2 H), 7.88 (s, 1 H), 7.64 - 7.84 (d, J=7.68 Hz ,1 H), 5.52 (dd, J=6.03, 2.96 Hz, 1 H), 3.08 - 3.33 (m, 2 H), 2.89 - 3.08 (m, 2 H), 2.78 (q, J=7.60 Hz, 2 H), 2.57 (s, 3 H), 2.39 - 2.13 (m, 1 H), 2.12 - 1.88 (m, 1 H) 1.21-1.30 (m, 3H).
실시예 124
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 (9S)-2-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (500 mg, 1.601 mmol)의 교반 용액에 수소화나트륨 (419 mg, 9.61 mmol)을 조금씩 5분 동안 0℃에서 첨가하고, 질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (1154 mg, 4.80 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 빙수로 켄칭하고, 셀라이트를 통해 여과하고, 여과물을 EtOAc (2x50 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-((R)-2-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (280 mg, 0.646 mmol, 40.3% 수율), (TLC: DCM 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 433.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.66 (s, 1 H), 8.26 (dt, J=4.93, 0.93 Hz, 1 H), 8.09 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.59 - 7.84 (m, 1 H), 7.38 (d, J=8.77 Hz, 1 H), 7.05 (ddd, J=7.23, 4.82, 0.66 Hz, 1 H), 6.43 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.25 (br t, J=7.67 Hz, 1 H), 4.70 (br s, 1 H), 3.91 (dt, J=10.03, 5.18 Hz, 1 H), 3.39 - 3.57 (m, 1 H), 3.23 - 3.35 (m, 1 H), 2.96 - 3.23 (m, 3 H), 2.81 (br d, J=13.59 Hz, 1 H), 2.14 - 2.34 (m, 2 H), 2.10 (br s, 1 H), 2.00 (d, J=13.81 Hz, 1 H), 1.73 - 1.92 (m, 1 H),1.16 - 1.40 (m, 2 H).
실시예 125
(4S)-N-(6-((S)-2,3-디히드록시프로폭시) 피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸) 페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
CH2Cl2 (16 mL) 및 물 (1.6mL) 중 (4S)-N-(6-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸) 페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.078 mmol)의 용액에 디옥산 중 4N HCl의 용액 (2.24 mL, 8.96 mmol)을 0℃에서 5분의 기간에 걸쳐 적가하였다. 이어서, 반응물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 물로 희석하고, 중탄산나트륨 (15 ml)으로 중화시키고, 수성 층을 EtOAc (2x 15 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 유기 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 디 에틸 에테르로 연화처리하여 (4S)-N-(6-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b] [1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (346 mg, 64% 수율, 0.67 mmol), (TLC: CH2Cl2 중 5% MeOH, Rf =0.3), LCMS (m/z): 517.18 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.14 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.36 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.89 - 7.79 (m, 2H), 7.74 (q, J = 8.0 Hz, 2H), 5.54 (s, 1H), 4.95 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.09 (qd, J = 10.7, 5.1 Hz, 2H), 3.77 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.45 - 3.33 (m, 2H), 3.23 - 3.06 (m, 3H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.25 (ddt, J = 14.0, 9.8, 4.8 Hz, 1H), 1.97 (dt, J = 14.1, 7.3 Hz, 1H).
실시예 126
(9S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.6 g, 2.253 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.884 mL, 13.52 mmol) 및 트리포스겐 (0.669 g, 2.253 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 다음에, 5-플루오로피리딘-3-아민 (0.758 g, 6.76 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 이어서, 반응 혼합물을 감압 하에 농축시키고, 물 (20 mL)과 디클로로메탄 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 100% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(5-플루오로피리딘-3-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (0.314 g, 0.770 mmol, 34.2% 수율), LCMS (m/z): 405.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.71 (s, 1H), 8.74 - 8.55 (m, 1H), 8.44 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.18 - 7.99 (m, 1H), 7.81 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.73 (d, J = 2.8 Hz, 3H), 4.82 (s, 1H), 3.39 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 2.92 (s, 1H), 2.57 (s, 3H), 2.01 (s, 2H), 1.32 (s, 2H).
실시예 127
(9S)-N-(피리다진-3-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (8 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.4 g, 1.249 mmol), 페닐 피리다진-3-일카르바메이트 (0.806 g, 3.75 mmol)의 교반 용액에 질소 하에 25℃에서 DMAP (0.458 g, 3.75 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각되도록 하고, 용매를 진공 하에 제거하여 조 물질을 수득하고, CH2Cl2로 희석하고, 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 층을 진공 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: CH2Cl2 중 4% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리다진-3-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 0.711 mmol, 56.9% 수율), (TLC: 헥산 중 80% EtOAc Rf: 0.6), LCMS (m/z): 442.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.27 (s, 1H), 8.98 (dd, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 8.90 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.59 - 8.48 (m, 2H), 8.38 (dd, J = 9.0, 1.5 Hz, 1H), 8.01 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.71 (dd, J = 9.0, 4.7 Hz, 1H), 5.25 - 4.49 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 13.7, 1.9 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 2.94 (dt, J = 13.8, 2.5 Hz, 1H), 2.02 (m, 2H), 1.34 (q, J = 5.2, 4.4 Hz, 2H).
실시예 128
(4S)-7-((R)-2-메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.210 mmol), (R)-2-메틸모르폴린 히드로클로라이드 (335 mg, 2.431 mmol), Cs2CO3 (1440 mg, 4.42 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2', 4', 6'-트리이소프로필비페닐 (421 mg, 0.884 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 Pd(OAc)2 (99 mg, 0.442 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 2x15 ml 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x50 ml로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4S)-7-((R)-2-메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (275 mg, 0.696 mmol, 31.5% 수율), (TLC: Rf 값: 0.3, DCM 중 5% 메탄올), LCMS (m/z): 383.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.40 (s, 1H), 9.38 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.46 - 8.17 (m, 2H), 7.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 6.1, 3.1 Hz, 1H), 4.20 - 4.04 (m, 1H), 4.00 - 3.93 (m, 1H), 3.91 - 3.80 (m, 1H), 3.70 - 3.53 (m, 2H), 3.17 - 3.05 (m, 1H), 3.03 - 2.92 (m, 2H), 2.87 (ddd, J = 19.7, 11.9, 3.4 Hz, 2H), 2.58 (dd, J = 12.6, 10.4 Hz, 1H), 2.21-2.12 (m, 1H), 1.86 (dd, J = 14.3, 7.2 Hz, 1H), 1.22 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 129
(4S)-7-((S)-2-메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.210 mmol), (S)-2-메틸모르폴린 히드로클로라이드 (335 mg, 2.431 mmol), Cs2CO3 (1440 mg, 4.42 mmol) 및 2-디시클로헥실포스피노-2', 4', 6'-트리이소프로필비페닐 (421 mg, 0.884 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 Pd(OAc)2 (99 mg, 0.442 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 2x15 ml 물로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x50 ml로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4S)-7-((S)-2-메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (285 mg, 0.725 mmol, 32.8% 수율), (TLC: Rf 값: 0.3, DCM 중 5% 메탄올), LCMS (m/z): 383.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.40 (s, 1H), 9.38 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.40 - 8.14 (m, 2H), 7.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.53 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.44 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 4.12 (s, 1H), 3.96 (ddd, J = 11.5, 3.6, 1.4 Hz, 1H), 3.86 (d, J = 12.8 Hz, 1H), 3.62 (dd, J = 11.8, 2.8 Hz, 2H), 3.09 (dd, J = 11.4, 8.4 Hz, 1H), 2.96 (s, 2H), 2.93 - 2.78 (m, 2H), 2.58 (dd, J = 12.6, 10.4 Hz, 1H), 2.17 (s, 1H), 1.85 (dt, J = 14.3, 7.3 Hz, 1H), 1.23 (d, J = 6.2 Hz, 3H).
실시예 130
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (5 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.250 g, 0.780 mmol)의 용액에 수소화나트륨 (0.156 g, 3.90 mmol)을 실온에서 1 부분으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.562 g, 2.341 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각되도록 하고, 이를 빙냉수로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 포화 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: CH2Cl2 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (302 mg, 0.681 mmol, 87% 수율), (TLC: 헥산 중 70% EtOAc, Rf: 0.5), LCMS (m/z): 441.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.85 (s, 1H), 8.94 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.64 (dd, J = 1.7, 0.9 Hz, 1H), 8.55 - 8.50 (m, 1H), 8.34 (ddd, J = 4.8, 2.0, 0.9 Hz, 1H), 8.15 (dt, J = 8.3, 1.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.86 - 7.79 (m, 1H), 7.77 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.12 (ddd, J = 7.3, 4.9, 1.0 Hz, 1H), 4.87 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 13.6, 1.9 Hz, 1H), 3.30 (s, 2H), 2.92 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.09 - 1.86 (m, 2H), 1.34 (d, J = 8.5 Hz, 2H).
실시예 131
(4S)-N-(3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]디옥세핀-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 트리-포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]디옥세핀-7-아민 (426 mg, 2.58 mmol) 및 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol)을 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔; 100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 1% MeOH의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3,4-디히드로-2H-벤조[b][1,4]디옥세핀-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (394 mg, 0.889 mmol, 68% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 444.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 12.76 (s, 1 H), 8.59 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 7.79-7.58 (m, 3 H), 7.24-7.06 (m, 2 H), 6.96 (d, J=8.77 Hz, 1 H), 5.46 (dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H), 4.10 (dt, J=19.51, 5.37 Hz, 4 H), 3.15-3.02 (m, 1 H), 3.02-2.77 (m, 3 H), 2.50 (s, 3 H), 2.46-2.18 (m, 1 H), 2.17-2.01 (m, 2 H), 2.01-1.83 - (m, 2 H).
실시예 132
(4S)-N-(2-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디클로로메탄 (12 mL), 물 (1.2 mL) 중 (4S)-N-(2-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (450 mg, 0.809 mmol)의 용액에 0℃에서 1,4-디옥산 중 4.0 M 염산 (1.68 mL, 0.809 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 농축시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물, 염수 용액로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 정제하고, n-펜탄으로 세척하고, 물 (5 mL) 중에 현탁시키고, 15분 동안 교반하고, 여과하여 순수한 (4S)-N-(2-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸) 페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.480 mmol, 59.4% 수율), LCMS (m/z): 517.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.58 (s, 1H), 8.60 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.91 - 7.78 (m, 3H), 7.75 - 7.60 (m, 2H), 5.48 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 4.62 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.22 (dd, J = 10.8, 4.4 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 10.7, 5.9 Hz, 1H), 3.80 (q, J = 5.4 Hz, 1H), 3.43 (t, J = 5.7 Hz, 2H), 3.21 (s, 1H), 3.16 - 3.05 (m, 2H), 2.96 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.29 - 2.10 (m, 1H), 2.04 - 1.84 (m, 1H).
실시예 133
(4S)-N-(6-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸) 페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 1분에 걸쳐 디클로로메탄 (8.0 mL), 물 (0.8 mL) 중 (4S)-N-(6-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.539 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4.0 M 염산 (1.12 mL, 0.539 mmol)을 첨가하였다 (적가). 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 농축시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 에틸 아세테이트 (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 n-펜탄으로 세척하고, 물 (5 mL) 중에 현탁시키고, 15분 동안 교반하고, 여과하여 순수한 (4S)-N-(6-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (280 mg, 0.533 mmol, 99% 수율), LCMS (m/z): 517.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.15 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.36 (d, J = 7.7 Hz, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.99 (s, 1H), 7.86 (t, J = 7.8 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.74 (q, J = 8.0 Hz, 2H), 5.52 (dd, J = 5.8, 3.0 Hz, 1H), 4.95 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.64 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.14 (dd, J = 10.7, 4.0 Hz, 1H), 4.03 (dd, J = 10.7, 6.1 Hz, 1H), 3.77 (q, J = 5.2 Hz, 1H), 3.36 (hept, J = 5.8 Hz, 2H), 3.22 (s, 1H), 3.12 (d, J = 11.3 Hz, 2H), 2.97 (dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 2.26 (t, J = 7.0 Hz, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H).
실시예 134
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
NaH (0.277 g, 11.53 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (9S)-2-(3)피롤리딘-1-일)- 7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타-(트리플루오로메틸노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.6 g, 1.921 mmol)의 용액에 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.692 g, 2.88 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 70% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50-60% EtOAc로 용리시켜 입체이성질체의 혼합물 (9:1)을 수득하였으며, 추가로 SFC 정제하여 순수한 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서로서 수득하였다 (0.422 g, 0.973 mmol, 50.6% 수율), LCMS (m/z): 433.3 [M+H]+.
분석용 SFC 조건: 피크-I 칼럼/치수: 키랄셀 OX-H (250 X 4.6)mm,5u
% CO2: 60.0%
% 공용매: 40.0% (MeOH 중 0.5% DEA)
총 유량: 4.0g/분
배압: 100 bar
온도: 26.8℃
UV: 263nm
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.81 (s, 1H), 8.23 - 8.18 (m, 1H), 8.11 (dt, J = 8.3, 1.0 Hz, 1H), 7.76 (ddd, J = 8.5, 7.4, 1.9 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.04 (ddd, J = 7.3, 4.9, 1.0 Hz, 1H), 6.24 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 4.71 (s, 1H), 3.96 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 3.78 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 3.74 (s, 1H), 3.66 (d, J = 4.1 Hz, 2H), 3.59 - 3.38 (m, 1H), 3.26 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 3.12 (dd, J = 12.7, 3.5 Hz, 1H), 3.05 (s, 1H), 2.80 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.41 - 2.29 (m, 1H), 2.15 (dd, J = 12.7, 8.1 Hz, 1H), 1.96 (s, 1H), 1.83 (s, 2H), 1.31 (s, 2H).
실시예 135
(9S)-N-(피리미딘-4-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 교반하는 25℃에서 THF (10 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5 g, 1.561 mmol), 트리에틸아민 (0.653 mL, 4.68 mmol)에 비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (0.232 g, 0.780 mmol)를 1회 충전량으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 25℃에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 피리미딘-4-아민 (0.445 g, 4.68 mmol)을 한 부분으로 첨가하고, 반응물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 실온으로 냉각되도록 하고, 용매를 진공 하에 제거하고, 조 물질을 DCM으로 희석하고, 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 진공 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리미딘-4-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (199 mg, 0.446 mmol, 28.6% 수율), (TLC: 헥산 중 70% EtOAc, Rf: 0.6), LCMS (m/z): 442.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.18 (s, 1H), 8.97 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.85 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.60 (dd, J = 1.9, 0.8 Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 5.1, 1.7 Hz, 1H), 8.12 (dd, J = 5.8, 1.3 Hz, 1H), 8.02 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.93 - 4.73 (m, 1H), 3.42 (dd, J = 13.7, 1.9 Hz, 1H), 3.32 (d, J = 8.2 Hz, 2H), 2.93 (dt, J = 13.9, 2.5 Hz, 1H), 2.12 - 1.83 (m, 2H), 1.33 (d, J = 7.8 Hz, 2H).
실시예 136
(4S)-N-(6-에톡시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
DMAP (726 mg, 5.94 mmol) 및 페닐 (6-에톡시피라진-2-일)카르바메이트 (1541 mg, 5.94 mmol)를 실온에서 THF 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 80℃로 20시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시킨 후, 용매를 증발시키고, 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 5% MeOH)에 의해 정제하였다. 회수된 물질을 에탄올에 녹이고, 분리된 고체를 여과에 의해 단리시켜 (4S)-N-(6-에톡시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (416 mg, 0.978 mmol, 49.3% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 418.28 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400MHz): δ 13.18 (s, 1H), 8.95 (s, 1H), 8.53 (dd, J = 5.0, 1.0 Hz, 1H), 7.98 (d, J = 0.5 Hz, 1H), 7.86 - 7.79 (m, 2H), 7.73 (s, 2H), 5.51 (dd, J = 5.9, 3.1 Hz, 1H), 4.22 (qd, J = 7.1, 2.3 Hz, 2H), 3.25 - 3.17 (m, 1H), 3.11 (dt, J = 11.7, 2.4 Hz, 2H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.25 (dddd, J = 13.7, 9.9, 6.2, 3.8 Hz, 1H), 2.04 - 1.90 (m, 1H), 1.27 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 137
(9S)-N-(피리미딘-5-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5 g, 1.561 mmol), 트리에틸아민 (0.653 mL, 4.68 mmol)의 용액에 질소 분위기 하에 비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (0.232 g, 0.780 mmol)를 25℃에서 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 피리미딘-5-아민 (0.445 g, 4.68 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각되도록 하고, 용매를 회전증발기 상에서 제거하고, 조 물질을 CH2Cl2 (20ml)로 희석하고, 물 (5ml), 염수 용액 (5ml)으로 세척한 다음, 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC (포름산, ACN 25%)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피리미딘-5-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (250 mg, 0.56 mmol, 45% 수율), (TLC: 헥산 중 80% EtOAc, Rf: 0.5), LCMS (m/z): 442.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.07 (s, 1H), 9.08 - 8.72 (m, 4H), 8.38 (dd, J = 1.7, 0.9 Hz, 1H), 8.28 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.90 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.85 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 3.43 (dd, J = 13.7, 1.9 Hz, 1H), 3.33 (d, J = 10.1 Hz, 2H), 2.91 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.15 - 1.79 (m, 2H), 1.33 (s, 2H).
실시예 138
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-피라졸로[3,4-c]피리딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.189 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (176 mg, 0.594 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 30분 후, 트리에틸아민 (0.829 mL, 5.94 mmol) 및 1H-피라졸로 [3,4-c]피리딘-5-아민 (191 mg, 1.427 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 65-70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 15 ml로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-피라졸로[3,4-c]피리딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (330 mg, 0.764 mmol, 64.3% 수율), (Rf 값: 0.25, 순수한 에틸 아세테이트), LCMS (m/z): 413.24[M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.47 (s, 2H), 8.89 (t, J = 1.1 Hz, 1H), 8.71 - 8.57 (m, 1H), 8.44 (t, J = 1.0 Hz, 1H), 8.28 - 8.10 (m, 2H), 8.05 - 7.93 (m, 1H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.56 (dd, J = 5.9, 3.1 Hz, 1H), 3.22 (tt, J = 8.1, 3.0 Hz, 1H), 3.15 - 3.04 (m, 2H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.36 - 2.16 (m, 1H), 1.96 (dd, J = 14.0, 7.1 Hz, 1H).
실시예 139
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(퀴녹살린-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 트리-포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 퀴녹살린-5-아민 (374 mg, 2.58 mmol) 및 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol)을 실온에서 후속적으로 적가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 1% MeOH의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(퀴녹살린-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (300 mg, 0.709 mmol, 55% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 424.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.50 (s, 1 H), 8.91 (s, 1 H), 8.68 (dd, J=7.89, 1.10 Hz, 1 H), 8.48 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.92-7.80 (m, 2 H), 7.80-7.62 (m, 4 H), 5.58 (dd, J=5.81, 2.96 Hz, 1 H), 3.20-3.08 (m, 4 H), 3.08-2.86 (m, 1 H), 2.26 (s, 4 H), 2.00-1.95 (m, 1 H).
실시예 140
(4S)-N-(2-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디클로로메탄 (12 mL), 물 (1.2 mL) 중 (4S)-N-(2-(((S)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (450 mg, 0.810 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4.0 M 염산 (1.68 mL, 0.810 mmol)을 0℃에서 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 농축시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 화합물을 n-펜탄으로 세척하고, 화합물을 물 (5 mL) 중에 현탁시키고, 15분 동안 교반하고, 여과하여 순수한 (4S)-N-(2-((R)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (310 mg, 0.600 mmol, 74.0% 수율), LCMS (m/z): 516.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.02 (s, 1H), 8.27 - 8.15 (m, 2H), 7.94 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 7.89 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.82 (t, J = 7.7 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.11 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 6.80 (dd, J = 5.8, 1.9 Hz, 1H), 5.47 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 4.85 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 4.59 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 4.23 (dd, J = 10.9, 4.6 Hz, 1H), 4.13 (dd, J = 10.9, 6.2 Hz, 1H), 3.81 - 3.65 (m, 1H), 3.43 (t, J = 5.6, 1.3 Hz, 2H), 3.25 - 3.03 (m, 3H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.25 (m, J = 13.8, 9.7, 4.7 Hz, 1H), 1.95 (m, J = 14.3, 7.6 Hz, 1H).
실시예 141
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
THF (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하고, 이에 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol) 및 1H-피라졸로 [4,3-b] 피리딘-5-아민 (319 mg, 2.378 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 15 ml로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-피라졸로[4,3-b]피리딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (265 mg, 0.622 mmol, 26.2% 수율), (TLC: Rf 값: 0.25, 순수한 에틸 아세테이트), LCMS (m/z): 413.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.55 (s, 1H), 13.27 (s, 1H), 8.66 (dd, J = 5.4, 0.8 Hz, 1H), 8.32 (d, J = 9.2 Hz, 1H), 8.16 - 7.94 (m, 4H), 7.94 - 7.51 (m, 2H), 5.55 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.21 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 3.18 - 3.05 (m, 2H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.35 - 2.17 (m, 1H), 1.96 (dt, J = 14.2, 7.6 Hz, 1H).
실시예 142
(4S)-N-(2-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디클로로메탄 (8 mL), 물 (0.8 mL) 중 (4S)-N-(2-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (350 mg, 0.629 mmol)의 용액에 1,4-디옥산 중 4.0 M 염산 (1.12 mL, 0.629 mmol)을 0℃에서 1분에 걸쳐 적가하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 3시간 동안 교반하고, 용매를 농축시켰다. 반응 혼합물을 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 물질을 키랄 분리에 의해 정제하여 (4S)-N-(2-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리미딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (210 mg, 0.405 mmol, 64.3% 수율), LCMS (m/z): 517.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.59 (s, 1H), 8.60 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.46 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.27 (s, 1H), 7.90 - 7.78 (m, 3H), 7.76 - 7.69 (m, 2H), 5.48 (dd, J = 5.8, 3.0 Hz, 1H), 4.91 (d, J = 5.0 Hz, 1H), 4.63 (t, J = 5.5 Hz, 1H), 4.46 - 4.01 (m, 2H), 3.80 (h, J = 5.5 Hz, 1H), 3.44 (t, J = 5.5 Hz, 2H), 3.21 (s, 1H), 3.12 (dd, J = 10.1, 5.5 Hz, 2H), 2.96 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.24 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 2.03 - 1.90 (m, 1H).
실시예 143
(4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1-부탄올 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2,6-디메틸피리딘-4-일)보론산 (343 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 5-10% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (355 mg, 0.916 mmol, 48.3% 수율), LCMS (m/z): 387.44 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz,): δ 13.77 (s, 1H), 9.43 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.53 - 8.28 (m, 2H), 7.91 - 7.59 (m, 4H), 5.51 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.25 - 2.81 (m, 4H), 2.56 - 2.46 (m, 6H), 2.26 (dddd, J = 13.7, 9.9, 6.1, 3.7 Hz, 1H), 1.97 (dq, J = 14.4, 7.5, 6.8 Hz, 1H).
실시예 144
(4S)-7-(2-시클로프로필피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (670 mg, 3.16 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), (2-시클로프로필피리딘-4-일)보론산 (309 mg, 1.894 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (72.3 mg, 0.079 mmol), 및 X-phos (75 mg, 0.158 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 5-10% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2-시클로프로필피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.645 mmol, 40.8% 수율), LCMS (m/z): 400.28 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.75 (s, 1H), 9.43 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.54 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.46 - 8.28 (m, 2H), 8.19 - 8.01 (m, 1H), 7.89 - 7.62 (m, 3H), 5.52 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.30 - 2.86 (m, 4H), 2.27 (ddd, J = 13.2, 6.4, 4.1 Hz, 2H), 1.98 (dt, J = 14.5, 7.6 Hz, 1H), 1.17 - 0.88 (m, 4H).
실시예 145
(4S)-7-(2-이소프로필피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (670 mg, 3.16 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), (2-이소프로필피리딘-4-일)보론산 (313 mg, 1.894 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (72.3 mg, 0.079 mmol), 및 X-phos (75 mg, 0.158 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 EtOAc 중 5-10% MeOH로 용리시키면서 정제하여 순수한 (4S)-7-(2-이소프로필피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 0.793 mmol, 50.2% 수율). LCMS (m/z): 402.33 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.65 (s, 1H), 9.57 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.44 - 8.07 (m, 2H), 8.02 - 7.87 (m, 1H), 7.75 - 7.58 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.73 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.43 - 3.14 (m, 4H), 3.04 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.35 (dt, J = 11.7, 5.0 Hz, 1H), 2.22 - 2.00 (m, 1H), 1.41 (dd, J = 6.9, 0.9 Hz, 6H).
실시예 146
(4S)-N-(1-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (0.588 g, 1.982 mmol)을 0℃에서 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.5g, 1.982 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 (0.829 mL, 5.94 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 0℃에서 교반하였다. 1-메틸-1H-1, 2,3-트리아졸-4-아민 히드로-클로라이드 (0.4 g, 2.97 mmol)를 첨가하고, 70℃에서 48시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 에틸 아세테이트 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 황색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 100-200 실리카 겔에 의해 에틸 아세테이트 중 5% MeOH로 용리시키면서 정제하여 (4S)-N-(1-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.260g, 0.686 mmol, 34.6% 수율), LCMS (m/z): 377.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.52 (s, 1H), 8.58 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 8.07 (s, 1H), 8.00 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.85 - 7.75 (m, 2H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.46 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 4.06 (s, 3H), 3.30 (s, 1H), 3.24 - 3.05 (m, 2H), 2.96 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.23 (dd, J = 13.7, 9.8, 6.1, 3.7 Hz, 1H), 2.00 - 1.86 (m, 1H).
실시예 147
(4S)-7-(2-에틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 n-부탄올 (10 mL) 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2-에틸피리딘-4-일)보론산 (343 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf: 0.2; UV 활성). 조 화합물을 (100-200 메쉬) 실리카 겔에 의해 EtOAc 중 20% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-에틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (418 mg, 1.074 mmol, 56.7% 수율), LCMS (m/z): 388.26 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.72 (s, 1H), 9.43 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.62 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 8.53 - 8.21 (m, 2H), 8.08 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 7.97 - 7.64 (m, 3H), 5.52 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.30 (s, 1H), 3.23 - 3.08 (m, 3H), 3.03 - 2.81 (m, 2H), 2.34 - 2.16 (m, 1H), 1.99 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 1.31 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
실시예 148
(4S)-7-(2-에톡시피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 1-부탄올 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스-아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2-에톡시피리딘-4-일)보론산 (380 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (100 mL)과 EtOAc (120 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.4; UV 활성). 조 화합물을 (100-200 메쉬) 실리카 겔에 의해 에틸 아세테이트 10% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-에톡시피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (435 mg, 1.063 mmol, 56.1% 수율), LCMS (m/z): 404.28 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.73 (s, 1H), 9.39 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.50 - 8.33 (m, 1H), 8.31 - 8.21 (m, 2H), 7.79 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.77 - 7.62 (m, 2H), 7.60 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 5.50 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 4.37 (q, J = 7.0 Hz, 2H), 3.30 (s, 1H), 3.25 - 3.03 (m, 2H), 2.97 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.36 - 2.12 (m, 1H), 2.07 - 1.87 (m, 1H), 1.38 (t, J = 7.0 Hz, 3H).
실시예 149
(4S)-7-(2-메톡시피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 1,4-디옥산 (12 mL), 및 물 (2.000 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2-메톡시피리딘-4-일) 보론산 (348 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (60 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 (100-200 메쉬) 실리카 겔에 의해 에틸 아세테이트 중 20% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-메톡시피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (310 mg, 0.793 mmol, 41.8% 수율), LCMS (m/z): 390.20 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.71 (s, 1H), 9.38 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.43 (dd, J = 2.5, 1.5 Hz, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.37 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 7.75 (d, J = 22.0 Hz, 1H), 7.77 - 7.62 (m, 2H),7.60 (s, 1H), 5.50 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 3.94 (s, 3H), 3.30 (s, 1H), 3.25 - 3.03 (m, 2H), 3.03 - 2.88 (m, 1H), 2.25 (dd, J = 9.9, 3.9 Hz, 1H), 1.98 (dd, J = 14.2, 7.2 Hz, 1H).
실시예 150
(4S)-7-(2-메톡시-6-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 1,4-디옥산 (12 mL), 및 물 (2.000 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2-메톡시-6-메틸피리딘-4-일)보론산 (380 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 5시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (60 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.3; UV 활성). 조 화합물을 (100-200 메쉬) 실리카 겔에 의해 에틸 아세테이트 중 20% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-메톡시-6-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (225 mg, 0.547 mmol, 28.9% 수율), LCMS (m/z): 404.24 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.72 (s, 1H), 9.41 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.55 - 8.26 (m, 2H), 7.86 - 7.64 (m, 3H), 7.31 (dd, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 5.51 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.91 (s, 3H), 3.22 - 3.00 (m, 3H), 2.97 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.63 - 2.41 (m, 3H), 2.25 (dddd, J = 13.8, 9.8, 6.1, 3.6 Hz, 1H), 1.97 (dt, J = 14.3, 7.6 Hz, 1H).
실시예 151
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
NaH (0.110 g, 4.60 mmol)를 질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리로부터의 피크-II, 0.250 g, 0.766 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.276 g, 1.149 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 70% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 헥산 중 50-60% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.2 g, 0.439 mmol, 57.3% 수율), LCMS (m/z): 447.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.50 (s, 1H), 8.32 - 8.18 (m, 1H), 8.16 - 8.03 (m, 1H), 7.76 (ddd, J = 8.8, 7.4, 2.0 Hz, 1H), 7.35 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.05 (dd, J = 7.8, 4.5 Hz, 1H), 6.60 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 4.72 (d, J = 2.7 Hz, 1H), 4.27 (s, 2H), 3.31 - 3.24 (m, 1H), 3.22 - 2.89 (m, 4H), 2.80 (d, J = 13.3 Hz, 1H), 2.51 (s, 1H), 1.99 (t, J = 12.7 Hz, 2H), 1.85 (d, J = 11.6 Hz, 2H), 1.75 - 1.43 (m, 2H), 1.25 (s, 2H).
실시예 152
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (7 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.350 g, 1.314 mmol), DMAP (0.482 g, 3.94 mmol)의 교반 용액에 25℃에서 페닐 피리미딘-4-일카르바메이트 (0.848 g, 3.94 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 진공 하에 제거하고, 조 물질을 CH2Cl2 (20ml)로 희석하고, 물 (5 mL), 포화 염수 용액 (5 mL)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, CH2Cl2 중 3% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (207 mg, 0.529 mmol, 40.3% 수율), (TLC: DCM 중 10% MeOH, Rf: 0.7), LCMS (m/z): 388.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.32 (s, 1H), 8.95 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 8.69 (d, J = 5.8 Hz, 1H), 8.61 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.17 (d, J = 1.7 Hz, 1H), 8.15 (dd, J = 5.8, 1.3 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 5.3, 1.8 Hz, 1H), 7.86 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 7.74 (d, J = 8.1 Hz, 1H), 4.90 - 4.67 (m, 1H), 3.40 (dd, J = 13.7, 1.9 Hz, 1H), 3.28 (s, 2H), 3.00 - 2.81 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.13 - 1.71 (m, 2H), 1.41 - 1.14 (m, 2H).
실시예 153
(4S)-N-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (0.588 g, 1.982 mmol)을 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.5g, 1.982 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (0.829 mL, 5.94 mmol) 및 1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-아민 (0.486 g, 4.95 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 DCM (50 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 황색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 (100-200 메쉬) 실리카 겔에 의해 정제하고, 에틸 아세테이트 중 5% MeOH로 용리시켜 (4S)-N-(1-메틸-1H-1,2,4-트리아졸-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 담황색 고체로서 수득하였다 (0.215g, 0.563 mmol, 28.4% 수율), LCMS (m/z): 377.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.44 (s, 1H), 8.55 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.96 (s, 1H), 7.86 - 7.61 (m, 3H), 5.44 (dd, J = 5.8, 3.0 Hz, 1H), 3.83 (s, 3H), 3.27 (d, J = 30.5 Hz, 3H), 2.95 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.23 (ddt, J = 16.9, 9.7, 4.4 Hz, 1H), 1.91 (dt, J = 14.7, 7.4 Hz, 1H).
실시예 154
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-8,9-디히드로-6H-5, 9-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.700 g, 2.63 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.198 mL, 15.77 mmol) 및 트리포스겐 (0.780 g, 2.63 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 피라진-2-아민 (0.750 g, 7.88 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 농축 건조시킨 다음, 물 (20 mL)과 디클로로메탄 (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하여 순수한 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다, LCMS (m/z): 388.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.27 (s, 1H), 9.59 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 8.67 - 8.60 (m, 1H), 8.32 (d, J = 1.0 Hz, 2H), 8.10 (dt, J = 1.9, 0.7 Hz, 1H), 7.74 - 7.67 (m, 1H), 7.62 - 7.50 (m, 2H), 5.06 - 5.00 (m, 1H), 3.51 - 3.27 (m, 3H), 3.03 (d, J = 13.6 Hz, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.26 (s, 1H), 2.08 - 1.84 (m, 1H), 1.43 (d, J = 6.2 Hz, 2H).
실시예 155
(4S)-7-(2-(메틸아미노)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (15 mL) 및 물 (2 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), N-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-아민 (443 mg, 1.894 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (670 mg, 3.16 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 Pd(OAc)2 (17.72 mg, 0.079 mmol) 및 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (75 mg, 0.158 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 4시간 동안 가열하였다. n-부탄올 용매를 감압 하에 증발시키고, 수득된 잔류물을 물로 희석하고, DCM (2x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-(메틸아미노)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (325 mg, 0.820 mmol, 51.9% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.2), LCMS (m/z): 389.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.64 (s, 1 H), 9.40 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.46 - 8.31 (m, 2 H), 8.14 (d, J=5.48 Hz, 1 H), 7.71 (m, J=8.11 Hz, 1 H), 7.61 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.22 (dd, J=5.37, 1.64 Hz, 1 H), 7.03 (d, J=0.88 Hz, 1 H), 6.40 (q, J=4.75 Hz, 1 H), 5.51 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.35 - 3.04 (m, 3 H), 2.96 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.85 (d, J=5.04 Hz, 3 H), 2.25 (dddd, J=13.59, 9.87, 6.03, 3.62 Hz, 1 H), 1.97 (dt, J=13.87, 6.99 Hz, 1 H).
실시예 156
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (3 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.150 g, 0.563 mmol), 페닐 피리다진-3-일카르바메이트 (0.364 g, 1.690 mmol)의 교반 용액에 25℃에서 DMAP (0.206 g, 1.690 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 조 화합물을 DCM (10ml)으로 희석하고, 물(3ml), 포화 염수 용액(3ml)으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: CH2Cl2 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-3-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (271 mg, 0.692 mmol, 123% 수율), (TLC: CH2Cl2 중 10% MeOH, Rf: 0.6), LCMS (m/z): 388.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.66 (s, 1H), 8.94 (dd, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 8.66 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 8.50 (dd, J = 9.1, 1.5 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.74 (dd, J = 5.4, 1.8 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 4.3 Hz, 2H), 7.46 (dd, J = 9.0, 4.7 Hz, 1H), 5.00 (p, J = 2.6 Hz, 1H), 3.50 - 3.22 (m, 3H), 3.12 - 2.96 (m, 1H), 2.82 (s, 3H), 2.39 - 2.10 (m, 1H), 1.95 (tdd, J = 14.2, 5.5, 3.0 Hz, 1H), 1.58 - 1.33 (m, 2H).
실시예 157
(4S)-N-(1H-이미다조[4,5-c]피리딘-4-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
질소 하에 실온에서 교반하는 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중에 용해시키고, 트리포스겐 (412 mg, 1.387 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하고, 이에 트리에틸아민 (1.933 mL, 13.87 mmol)을 첨가하고, 1H-이미다조[4,5-c]피리딘-4-아민 (372 mg, 2.77 mmol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 15 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (100-200 메쉬)에 의해 정제하여 순수한 화합물 (4S)-N-(1H-이미다조[4,5-c]피리딘-4-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (225 mg, 0.531 mmol, 19.14% 수율). (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 413.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.03 (s, 1H), 11.93 (s, 1H), 8.65 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.35 - 7.86 (m, 3H), 7.86 - 7.37 (m, 4H), 5.72 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 3.21 (m, 3H), 3.06 (dd, J = 12.2, 3.3 Hz, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.38 (dddd, J = 14.0, 9.9, 6.2, 4.2 Hz, 1H), 2.13 (dt, J = 14.3, 7.2 Hz, 1H).
실시예 158
(4S)-7-(2-메톡시피리미딘-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산칼륨 (402 mg, 1.894 mmol) 및 (2-메톡시피리미딘-5-일)보론산 (175 mg, 1.137 mmol)을 1-부탄올 (6 mL) 및 물 (2.0 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.947 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 혼합물을 아르곤으로 25분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (43.4 mg, 0.047 mmol) 및 X-phos (45.2 mg, 0.095 mmol)를 첨가하고, 2시간 동안 120℃에서 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 물 (40 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x30 mL)로 추출하고, 염수 (30 mL)로 세척하였다. 분리된 유기 층을 농축시키고, 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 석유 에테르 중 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 회수된 물질을 에탄올 및 펜탄을 사용하여 재결정화하여 (4S)-7-(2-메톡시피리미딘-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (190 mg, 0.481 mmol, 50.8% 수율). (이동상: 100% 에틸 아세테이트, Rf: 0.1), LCMS (m/z): 391.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.64 (s, 1H), 9.52 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.24 (s, 2H), 8.40 - 8.25 (m, 2H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.70 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 4.12 (s, 3H), 3.33 - 3.13 (m, 3H), 3.02 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 2.36 (dddd, J = 13.9, 9.9, 5.9, 4.0 Hz, 1H), 2.17 - 2.04 (m, 1H).
실시예 159
(4S)-7-(6-(히드록시메틸)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산칼륨 (535 mg, 2.53 mmol) 및 (6-(히드록시메틸)피리딘-3-일)보론산 (232 mg, 1.515 mmol)을 1-부탄올 (6 mL) 및 물 (2.0 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.263 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하였다. 혼합물을 아르곤으로 10분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (57.8 mg, 0.063 mmol) 및 X-phos (60.2 mg, 0.126 mmol)를 첨가하였다. 혼합물을 120℃에서 20시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (10 mLx2)로 세척하고, 여과물 용매를 감압 하에 제거하여 조 화합물을 수득하였다. 상기 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔:100-200 메쉬, n-헥산 중 80% 에틸 아세테이트로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-7-(6-(히드록시메틸)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (225 mg, 0.558 mmol, 44.2% 수율) (TLC: 용리액: 100% 에틸 아세테이트 Rf: 0.1), LCMS (m/z): 390.35 (M+H)+.
1H NMR(400 MHz, CDCl3): δ 13.73 (s, 1H), 9.54 (d, J = 1.3 Hz, 1H), 9.19 (dd, J = 2.3, 0.9 Hz, 1H), 8.51 (dd, J = 8.2, 2.3 Hz, 1H), 8.44 - 8.20 (m, 2H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.50 - 7.39 (m, 2H), 5.71 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 4.86 (d, J = 2.4 Hz, 2H), 3.67 (s, 1H), 3.46 - 3.13 (m, 3H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.43 - 2.26 (m, 1H), 2.19 - 1.98 (m, 1H).
실시예 160
(4S)-N-(2,3-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)을 질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중에 용해시키고, 트리포스겐 (412 mg, 1.387 mmol)을 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하고, 이에 트리에틸아민 (1.933 mL, 13.87 mmol) 및 2,3-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-아민 (422 mg, 2.77 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 (800 mg)을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 화합물 (4S)-N-(2,3-디히드로-[1,4]디옥시노[2,3-b]피리딘-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (325 mg, 0.732 mmol, 26.4% 수율). Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올, LCMS (m/z): 413.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.81 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 7.78 - 7.40 (m, 5H), 5.45 (dd, J = 5.9, 3.0 Hz, 1H), 4.46 - 4.31 (m, 2H), 4.29 - 4.16 (m, 2H), 3.19 (d, J = 8.8 Hz, 1H), 3.14 - 3.03 (m, 2H), 2.96 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.23 (d, J = 7.0 Hz, 1H), 1.93 (dd, J = 14.1, 7.1 Hz, 1H).
실시예 161
(9S)-N-(2-메틸-2H-인다졸-5-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
DMAP (0.550 g, 4.51 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.4 g, 1.502 mmol) 및 페닐 (2-메틸-2H-인다졸-5-일)카르바메이트 (0.803 g, 3.00 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 70℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. EtOAc를 반응물에 첨가하고, 10분 동안 교반한 다음, 여과하고, 고체를 EtOAc로 세척하였다. 여과물을 취하고, 농축시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 80% EtOAc: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 60% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(2-메틸-2H-인다졸-5-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.18 g, 0.406 mmol, 27.1% 수율), LCMS (m/z): 440.4 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.44 (s, 1H), 8.66 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.18 (dd, J = 1.9, 0.8 Hz, 1H), 7.82 (d, J = 0.9 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 9.1 Hz, 1H), 7.60 - 7.50 (m, 2H), 7.40 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.27 - 7.19 (m, 1H), 5.05 (t, J = 2.7 Hz, 1H), 4.20 (s, 3H), 3.50 - 3.23 (m, 3H), 3.01 (d, J = 13.5 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.28 (s, 1H), 1.93 (s, 1H), 1.58 (s, 2H).
실시예 162
(4R)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메톡시피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (5.00 mL) 중 (4R)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.210 mmol), (2-메틸피리딘-4-일)보론산 (454 mg, 3.31 mmol) 및 K3PO4 (1825 mg, 6.63 mmol)의 탈기된 용액에 X-Phos (211 mg, 0.442 mmol) 및 Pd2(dba)3 (202 mg, 0.221 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 2시간 동안 가열하고, 실온으로 냉각되도록 하였다. 물 (100 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4R)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (392 mg, 49.2% 수율), (TLC: 용리액; 디클로로메탄 중 10% 메탄올, Rf= 0.3), LCMS (m/z): 374.18 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.76 (s, 1H), 9.43 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.59 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.46 (dd, J=2.63, 1.53 Hz, 1 H), 8.39 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.31 (s, 1 H), 8.16-8.06 (m, 1 H), 7.92-7.78 (m, 1H), 7.78-7.69 (m, 1 H), 5.52 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.37 (m, 1 H), 3.28-3.06 (m, 2H), 2.98 (dd, J=11.95, 3.18 Hz, 1 H), 2.61 (s, 3 H), 2.41-2.15 (m, 1 H), 2.05-1.84 (m, 1 H).
실시예 163
((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-일)(모르폴리노) 메타논
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)에 트리포스겐 (412 mg, 1.387 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이에 트리에틸아민 (1.933 mL, 13.87 mmol) 및 모르폴린 (314 mg, 3.61 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 100-200 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, DCM 중 4% 메탄올로 용리시켜 순수한 화합물 ((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(모르폴리노)메타논을 연갈색 고체로서 수득하였다 (270 mg, 0.735 mmol, 26.5% 수율), (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 366.19 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.52 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.85 - 7.75 (m, 1H), 7.70 (dd, J = 5.2, 1.7 Hz, 1H), 7.57 - 7.30 (m, 1H), 4.38 (s, 1H), 3.50 (d, J = 72.2 Hz, 8H), 3.23 - 2.95 (m, 1H), 2.89 (dd, J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 2.58 - 2.32 (m, 6H), 2.33 - 1.92 (m, 2H).
실시예 164
((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-일)(피페리딘-1-일) 메타논
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)에 트리포스겐 (412 mg, 1.387 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이에 트리에틸아민 (1.933 mL, 13.87 mmol) 및 피페리딘 (236 mg, 2.77 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 화합물 ((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(피페리딘-1-일)메타논을 갈색 고체로서 수득하였다 (220 mg, 0.583 mmol, 21.03% 수율), (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 364.21 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.50 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.79 (d, J = 1.8 Hz, 1H), 7.74 - 7.62 (m, 1H), 7.51 - 7.30 (m, 2H), 4.33 (t, J = 4.2 Hz, 1H), 3.49 (d, J = 71.1 Hz, 4H), 3.22 - 2.95 (m, 2H), 2.88 (dd, J = 11.6, 3.2 Hz, 1H), 2.61 - 2.35 (m, 6H), 2.24 - 1.94 (m, 1H), 1.55 (s, 5H).
실시예 165
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리도[3,4-b]피라진-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 용액에 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 피리도[3,4-b]피라진-5-아민 (452 mg, 3.09 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 실온에서 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (250 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔:100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 1% MeOH의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리도[3,4-b]피라진-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 갈색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.613 mmol, 38% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 425.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.84 (s, 1 H), 9.11 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 8.58 (d, J=5.70 Hz, 1 H), 8.37 - 8.51 (m, 1 H), 8.19 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 7.59 - 7.78 (m, 5 H), 5.54-5.50 (m, 1H), 3.22 - 3.33 (m, 1 H), 3.07 - 3.19 (m, 1 H), 3.00 (dd, J=11.95, 3.18 Hz, 1 H), 2.50 (dt, J=3.67, 1.78 Hz, 1 H), 2.21 - 2.33 (m, 4 H), 1.98 (dt, J=13.92, 7.07 Hz, 1 H).
실시예 166
(4S)-N-(3-메틸신놀린-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 용액에 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 3-메틸신놀린-5-아민 (492 mg, 3.09 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 실온에서 후속적으로 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔:100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 1% MeOH의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-메틸신놀린-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (280 mg, 0.647 mmol, 42% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.25), LCMS (m/z): 438.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.43 (s, 1 H), 9.11 (s, 1H), 8.49 (d, J=5.92 Hz, 1 H), 8.39 (d, J=7.45 Hz, 1 H), 8.19 (s, 1H), 7.81 (t, J=8.11 Hz, 1 H), 7.65 (d, J=7.5 Hz 1 H), 7.35-7.31 (m, 3 H), 5.77 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.41-3.15 (m, 3 H), 2.91 (m, 1 H), 2.30-2.25 (m, 3 H), 2.24 (s, 3 H), 2.10-1.92 (m, 1 H).
실시예 167
(4S)-7-(5-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (12.00 mL), 물 (4.00 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (5-메틸피리딘-3-일)보론산 (311 mg, 2.273 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액에 X-Phos (90 mg, 0.189 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 10mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 1에서 3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(5-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (356 mg, 0.938 mmol, 49.5% 수율), LCMS (m/z): 374.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.81 (s, 1H), 9.57 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.99 (dd, J = 2.1, 0.8 Hz, 1H), 8.52 (dd, J = 2.0, 0.9 Hz, 1H), 8.47 (m, J = 2.2, 1.1 Hz, 1H), 8.32 - 8.28 (m, 2H), 7.64 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.47 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 6.1, 3.2 Hz, 1H), 3.35 - 3.16 (m, 3H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.51 (s, 3H), 2.35 (dddd, J = 14.0, 9.9, 6.1, 4.0 Hz, 1H), 2.15 - 2.03 (m, 1H).
실시예 168
(4S)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (12.00 mL), 물 (4.00 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (1-메틸-1H-피라졸-4-일)보론산 (286 mg, 2.273 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액에 X-Phos (90 mg, 0.189 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 10mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 1.5-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (354 mg, 0.963 mmol, 50.9% 수율), LCMS (m/z): 363.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.09 (s, 1H), 9.39 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.51 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.47 (dd, J = 2.6, 1.6 Hz, 1H), 8.37 - 8.36 (m, 1H), 8.26 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.56 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.34 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.46 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.92 (s, 3H), 3.22 - 3.13 (m, 1H), 3.12 - 3.02 (m, 2H), 2.94 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.24 (dddd, J = 13.6, 9.8, 6.1, 3.8 Hz, 1H), 1.92 (m, J = 14.4, 7.4 Hz, 1H).
실시예 169
(4S)-7-(6-에틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (12.00 mL), 물 (3.00 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (6-에틸피리딘-3-일)보론산 (343 mg, 2.273 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액에 X-Phos (90 mg, 0.189 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 10분 동안 다시 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 10mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 1.5-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(6-에틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (354 mg, 0.883 mmol, 46.6% 수율), LCMS (m/z): 388.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.77 (s, 1H), 9.54 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.22 - 9.01 (d, 1H), 8.47 (dd, J = 2.5 Hz, 1H), 8.35 (d, J = 2.4 Hz, 1H), 8.29 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.42 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.35 - 7.32 (d, 1H), 5.70 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.39 - 3.13 (m, 3H), 3.02 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.92 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.35 (dddd, J = 13.9, 9.9, 6.1, 4.0 Hz, 1H), 2.21 - 1.98 (m, 1H), 1.38 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
실시예 170
(4S)-N-(1H-인다졸-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 용액에 트리-포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 1H-인다졸-5-아민 (412 mg, 3.09 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 실온에서 후속적으로 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 밀봉된 튜브 중에서 16시간 동안 가열하고, 포화 NaHCO3 용액 (180 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC (중탄산암모늄 및 아세토니트릴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(1H-인다졸-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연갈색 고체로서 수득하였다 (210 mg, 0.489 mmol, 20.54% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 412.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.98 (s, 1 H), 12.92 (s, 1 H), 8.65 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 8.09-7.94 (d, J=4.5 Hz, 1 H), 7.58-7.47 (m, 2 H), 7.47-7.41 (m, 2 H), 7.41-7.32 (d, J=8.4 Hz, 1 H), 7.32-7.17 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 5.74 (dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H), 3.37-3.11 (m, 3 H), 3.11-2.86 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.22 (dt, J=14.03, 7.02 Hz, 2 H), 1.99-1.81 (m, 1H).
실시예 171
(9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-5-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (12 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.6 g, 2.253 mmol), 트리에틸아민 (0.942 mL, 6.76 mmol) 및 비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (0.334 g, 1.126 mmol)를 질소 하에 실온에서 30분 동안 교반한 다음, 1 부분으로 피리미딘-5-아민 (0.643 g, 6.76 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 수득된 조 물질을 CH2Cl2 (35ml)로 희석하고, 물 (5 mL), 포화 염수 용액 (5 mL)으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: CH2Cl2 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 반 순수한 화합물을 수득하였다. 반 순수한 화합물을 다시 정제용 HPLC (30% ACN/ 물)에 의해 정제하여 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-5-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (261 mg, 0.667 mmol, 29.6% 수율), (TLC: CH2Cl2 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 388 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.81 (s, 1H), 9.03 (s, 2H), 8.94 (s, 1H), 8.69 (dd, J = 5.2, 0.9 Hz, 1H), 7.75 - 7.55 (m, 2H), 7.55 - 7.46 (m, 1H), 7.43 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.08 - 4.89 (m, 1H), 3.49 - 3.17 (m, 3H), 3.02 (d, J = 13.7 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.36 - 2.13 (m, 1H), 2.06 - 1.79 (m, 1H), 1.59 - 1.32 (m, 2H).
실시예 172
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (412 mg, 1.387 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 피리다진-3-아민 (792 mg, 8.32 mmol) 및 트리에틸아민 (1.160 mL, 8.32 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 75℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 30℃로 되도록 하고, 냉수 (30 mL)에 붓고, DCM (2x35 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용매 시스템) 및 정제용 HPLC ((10mM 중탄산암모늄 (수성) MP-B: 아세토니트릴 칼럼: 엑스브리지 C18 (150x30) mm 5μ 방법 -t%b 0/60,13.5/60,14/100,17/100,17.1/60 유량: 30 ml/분, 용해도: THF+ACN.+물)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (270mg, 0.723 mmol, 25.7%), (TLC: Rf: 0.4, EtOAc 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 374.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.16 (s, 1H), 8.94 (dd, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.48 (dd, J = 9.1, 1.5 Hz, 1H), 8.38 - 830 (m, 1H), 8.22 (s, 1H), 7.83 - 7.50 (m, 3H), 5.69 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.41 - 3.16 (m, 3H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.81 (s, 3H), 2.35 (dddd, J = 13.9, 10.0, 6.1, 4.0 Hz, 1H), 2.22 - 2.00 (m, 1H).
실시예 173
(4S)-7-(2,5-디메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 2,5-디메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (662 mg, 2.84 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 분홍색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리 시스템: EtOAc 중 10% 메탄올; Rf = 0.3). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 5-8% 메탄올로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2,5-디메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (337 mg, 0.860 mmol, 45.4% 수율), LCMS (m/z): 388.19 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.48 (s, 1H), 9.49 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.34 - 8.10 (m, 2H), 7.63 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.45 (s, 1H), 7.15 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.51 - 3.09 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.63 (s, 3H), 2.43 (s, 3H), 2.40 - 2.27 (m, 1H), 2.20 - 1.96 (m, 1H).
실시예 174
(4S)-7-모르폴리노-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (6 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol) 및 모르폴린 (0.330 mL, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 Cs2CO3 (1234 mg, 3.79 mmol), x-phos (361 mg, 0.758 mmol) 및 Pd(OAc)2 (85 mg, 0.379 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: 2% MeOH/DCM)에 의해 정제하여 (4S)-7-모르폴리노-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (268 mg, 0.707 mmol, 37.3% 수율), (TLC: Rf: 0.2, 순수한 EtOAc), LCMS (m/z): 368 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.41 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.37 - 7.90 (m, 2H), 7.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.98 - 3.72 (m, 4H), 3.62 - 3.46 (m, 4H), 3.22 (dddd, J = 12.2, 8.5, 3.7, 2.2 Hz, 1H), 3.18 - 3.05 (m, 2H), 2.93 (dd, J = 11.8, 3.3 Hz, 1H), 2.27 (dd, J = 10.1, 4.0 Hz, 1H), 2.01 (d, J = 6.9 Hz, 1H).
실시예 175
(4S)-N-(5-에틸피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
페닐 (5-에틸피라진-2-일)카르바메이트 (1446 mg, 5.94 mmol) 및 DMAP (726 mg, 5.94 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 에틸 아세테이트 (2X 30 mL)로 희석하고, 물 (40 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 용리액으로서 실리카 겔 (100-200 메쉬) DCM 중 1% 메탄올을 사용하여 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. 화합물을 에탄올 및 펜탄을 사용하여 재결정화하여 4S)-N-(5-에틸피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (245 mg, 0.602 mmol, 30.4% 수율), (TLC: DCM 중 5% 메탄올. Rf: 0.4 UV), LCMS (m/z): 402.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ 13.46 (s, 1H), 9.37 (s, 1H), 8.67 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 0.6 Hz, 1H), 7.98 (ddd, J = 5.4, 1.8, 0.7 Hz, 1H), 7.74 - 7.54 (m, 2H), 7.48 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.72 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.37 - 3.17 (m, 1H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.80 (q, J = 7.6 Hz, 2H), 2.62 (s, 3H), 2.35 (dddd, J = 14.0, 9.9, 6.1, 4.1 Hz, 1H), 2.22 - 1.92 (m, 3H), 1.32 (t, J = 7.6 Hz, 3H).
실시예 176
(4S)-7-(2-메틸옥사졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 2-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)옥사졸 (475 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.2; UV 활성). 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 목적 생성물 (4S)-7-(2-메틸옥사졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (153 mg, 0.418 mmol, 22.04% 수율), LCMS (m/z): 364.32 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.72 (s, 1H), 9.54 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.44 - 8.17 (m, 2H), 8.07 (s, 1H), 7.57 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.30 - 7.13 (m, 1H), 5.67 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.45 - 3.08 (m, 3H), 3.01 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.58 (s, 3H), 2.34 (dddd, J = 14.1, 9.9, 6.1, 4.2 Hz, 1H), 2.22 - 1.95 (m, 1H).
실시예 177
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (700 mg, 2.77 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (823 mg, 2.77 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 피리미딘-5-아민 (317 mg, 3.33 mmol) 및 TEA (0.387 mL, 2.77 mmol)를 30℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 75℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응물을 30℃로 되도록 하고, 냉수 (30 mL)에 붓고, DCM (2x50 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 에틸 아세테이트 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리미딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (275 mg, 0.737 mmol, 32%), (TLC: Rf: 0.4, EtOAc 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 374.22 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.25 (s, 1H), 9.01 (s, 2H), 8.94 (s, 1H), 8.68 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.55 (dt, J = 1.6, 0.8 Hz, 1H), 7.47 (ddd, J = 5.2, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 5.69 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 3.33 - 3.13 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 12.2, 3.2 Hz, 1H), 2.69 (s, 3H), 2.36 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 2.15 - 2.04 (m, 1H).
실시예 178
(4S)-N-(5-시클로프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
페닐 (5-시클로프로필피라진-2-일)카르바메이트 (1214 mg, 4.76 mmol) 및 DMAP (581 mg, 4.76 mmol)를 THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 에틸 아세테이트 (2X30 mL)로 희석하고, 물 (20 mL) 및 염수 (20 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 DCM 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 목적 생성물을 수득하였다. 화합물을 에탄올 및 펜탄에 의해 재결정화하여 (4S)-N-(5-시클로프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.623 mmol, 45.2%), (TLC: DCM 중 5% 메탄올 Rf: 0.4), LCMS (m/z): 414.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.59 (s, 1H), 9.35 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.62 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.07 (q, J = 0.9 Hz, 1H), 7.71 - 7.59 (m, 2H), 7.48 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.37 - 3.10 (m, 3H), 3.02 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.74 (s, 3H), 2.34 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 2.07 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 1.21 - 0.66 (m, 5H).
실시예 179
(4S)-7-(2-메틸피리미딘-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 1,4-디옥산 (12 mL) 및 물 (2.000 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (2-메틸피리미딘-5-일)보론산 (314 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, X-phos (90 mg, 0.189 mmol), 및 Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (30 mL)과 EtOAc (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: CHCl3 중 5% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 100-200 실리카 겔에 의해 정제하고, 에틸 아세테이트 중 20% MeOH로 용리시켜 (4S)-7-(2-메틸피리미딘-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (353 mg, 0.938 mmol, 49.5% 수율), LCMS (m/z): 375.19 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.57 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.33 (s, 2H), 8.38 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.66 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.40 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 3.41 - 3.11 (m, 3H), 3.04 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.84 (s, 3H), 2.36 (dddd, J = 14.0, 9.9, 6.1, 4.1 Hz, 1H), 2.11 (d, J = 7.1 Hz, 1H).
실시예 180
(4S)-N-(6-시클로프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 mL) 중 7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 0.198 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (353mg, 0.099 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 6-시클로프로필피라진-2-아민 (321 mg, 2.378 mmol) 및 Et3N (1.657mL, 0.991 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 용액에 붓고, CH2Cl2 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, CH2Cl2 중 2% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-시클로프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (208 mg, 0.479 mmol, 30.2% 수율), (TLC: CH2Cl2 중 10% MeOH, Rf: 0.5), LCMS (m/z): 414.29 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.11 (s, 1 H), 9.29 (s, 1 H), 8.80 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.57 (d, J=4.60 Hz, 1 H), 8.15 (s, 1 H), 7.97 - 7.67 (m, 1 H), 7.64 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.59 - 7.42 (m, 1 H), 5.72 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.34 - 3.10 (m, 3 H), 3.39 - 3.09 (m, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.44 - 2.18 (m, 1 H), 2.17 - 1.97 (m, 1 H), 1.13 - 0.93 (m, 4 H).
실시예 181
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
트리포스겐 (0.588 g, 1.982 mmol)을 0℃에서 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀(0.5g, 1.982 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 이어서 트리에틸아민 (0.829 mL, 5.94 mmol) 및 1H-1,2,3-트리아졸-4-아민 히드로클로라이드 (0.597 g, 4.95 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 황색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.35; UV 활성). 조 화합물을 100-200 실리카 겔에 의해 정제하고, 에틸 아세테이트 중 5% MeOH로 용리시켜 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 담황색 고체로서 수득하였다 (0.21g, 0.558 mmol, 28.2% 수율), LCMS (m/z): 363.24 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 14.58 (s, 1H), 13.55 (s, 1H), 8.58 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.94 (s, 2H), 7.84 - 7.75 (m, 2H), 7.71 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.47 (dd, J = 5.8, 3.0 Hz, 1H), 3.27 - 3.16 (m, 1H), 3.16 - 3.01 (m, 2H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.24 (dddd, J = 13.7, 9.8, 5.9, 3.7 Hz, 1H), 1.94 (dddd, J = 14.5, 8.7, 4.5 Hz, 1H).
실시예 182
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-((S)-1-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 트리포스겐 (588 mg, 1.982 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, (S)-1-(피리딘-2-일)에탄아민을 첨가하고, 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (30mL), 포화 염수 용액으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 디클로로메탄 중 10% 메탄올, Rf = 0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 55-60% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 수집된 분획을 감압 하에 증발시켜 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-((S)-1-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (277 mg, 0.684 mmol, 34.5% 수율), LCMS (m/z): 401.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 11.09 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 8.56 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 8.36 (ddd, J = 4.8, 1.8, 0.9 Hz, 1H), 7.78 (dt, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 7.63 - 7.60 (m, 2H), 7.59 (dd, J = 7.7, 1.9 Hz, 1H), 7.31 - 7.29 (m, 2H), 7.11 (ddd, J = 7.6, 4.8, 1.2 Hz, 1H), 5.64 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 5.32 - 5.23 (m, 1H), 3.27 - 3.06 (m, 3H), 2.95 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.22 (dd, J = 10.0, 4.0 Hz, 1H), 2.03 - 1.89 (m, 1H), 1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 183
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-((R)-1-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 실온에서 트리포스겐 (588 mg, 1.982 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하고, (R)-1-(피리딘-2-일) 에탄아민 (726 mg, 5.94 mmol)을 첨가하고, 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하고, 물 (15 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (30mL), 포화 염수 용액으로 세척한 다음, 무수 황산나트륨 상에서 건조시켰다. 용액을 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 디클로로메탄 중 10% 메탄올, Rf = 0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 55-60% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-((R)-1-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 검으로서 수득하였다 (240 mg, 0.595 mmol, 30.0% 수율), LCMS (m/z): 401.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 11.06 (d, J = 7.5 Hz, 1H), 8.57 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 8.43 (ddd, J = 4.8, 1.8, 0.9 Hz, 1H), 7.78 (q, J = 0.9 Hz, 1H), 7.63 (ddd, J = 5.1, 1.9, 0.7 Hz, 1H), 7.61 (dd, J = 7.8, 1.9 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.36 - 7.30 (m, 2H), 7.13 (ddd, J = 7.6, 4.8, 1.2 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 5.27 (p, J = 7.0 Hz, 1H), 3.30 - 3.21 (m, 1H), 3.18 (ddd, J = 12.2, 9.9, 6.9 Hz, 1H), 3.06 (dt, J = 12.0, 2.1 Hz, 1H), 2.92 (dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 2.60 (s, 3H), 2.27 (dddd, J = 13.9, 9.9, 6.1, 3.9 Hz, 1H), 2.07 (dt, J = 14.0, 7.5 Hz, 1H), 1.62 (d, J = 6.9 Hz, 3H).
실시예 184
(4S)-N-(2-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(4S)-N-(2-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.080 mmol)의 용액에 0℃에서 디옥산 중 4.0 M 염산의 용액 (10 mL, 1.080 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 용매를 증발시키고, 중탄산나트륨으로 중화시키고, EtOAc (3 X 50mL)로 추출하고, 합한 유기 층을 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물 350 mg을 수득하였다. 조 생성물을 실리카 겔 칼럼에 첨가하고, 2% MeOH/DCM으로 용리시켰다. 수집된 분획을 증발시켜 (4S)-N-(2-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피리딘-4-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)페닐)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (253mg, 0.487 mmol, 45.1% 수율), (TLC: Rf: 0.2, 5% MeOH/DCM), LCMS (m/z): 516.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 13.02 (s, 1 H), 8.08 - 8.33 (m, 2 H), 7.77 - 8.00 (m, 3 H), 7.76 - 7.59 (m, 2 H), 7.11 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 6.80 (dd, J=5.70, 1.75 Hz, 1 H), 5.47 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 4.85 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 4.58 (t, J=5.70 Hz, 2 H), 4.23 (dd, J=10.85, 4.49 Hz, 1 H), 4.12 (dd, J=10.74, 6.14 Hz, 1H), 3.78 (dq, J=10.69, 5.43 Hz, 1 H), 3.53 - 3.32 (m, 1 H), 3.25 - 3.05 (m, 3 H), 2.97 (dd, J=11.95, 3.18 Hz, 2 H), 2.37 - 2.18 (m, 1 H), 2.03 - 1.86 (m, 1 H).
실시예 185
(4S)-7-(5,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스-아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (5,6-디메틸피리딘-3-일)보론산 (343 mg, 2.273 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 5-10% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(5,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (420 mg, 1.078 mmol, 56.9% 수율), LCMS (m/z): 388.19 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.85 (s, 1H), 9.57 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.86 (d, J = 2.3 Hz, 1H), 8.54 - 8.34 (m, 1H), 8.34 - 8.19 (m, 2H), 7.62 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.45 - 3.08 (m, 3H), 3.02 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.59 (s, 3H), 2.47 (d, J = 0.8 Hz, 3H), 2.35 (dddd, J = 14.0, 10.0, 6.1, 4.0 Hz, 1H), 2.22 - 2.00 (m, 1H).
실시예 186
(4S)-7-(3-(디메틸아미노)페닐)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스 아미드 (600 mg, 1.894 mmol), (3-(디메틸 아미노)페닐)보론산 (469 mg, 2.84 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.5; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 0-5% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(3-(디메틸아미노)페닐)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (273 mg, 0.660 mmol, 34.8% 수율), LCMS (m/z): 402.26 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.66 (s, 1H), 9.39 (s, 1H), 8.35 (q, J = 2.7 Hz, 2H), 7.81 - 7.42 (m, 1H), 7.44 - 7.19 (m, 4H), 6.92 - 6.77 (m, 1H), 5.53 (dd, J = 5.9, 3.1 Hz, 1H), 3.29 - 3.00 (m, 3H), 2.98 (s, 7H), 2.25 (ddd, J = 13.8, 10.3, 5.4 Hz, 1H), 1.96 (dt, J = 14.9, 7.8 Hz, 1H).
실시예 187
((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(피롤리딘-1-일)메타논의 합성
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)에 트리포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 30분 후, 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol) 및 피롤리딘 (183 mg, 2.58 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 100-200 실리카 겔 칼럼에 의해 DCM 중 4% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 순수한 화합물 ((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(피롤리딘-1-일)메타논을 황색 고체로서 수득하였다 (350 mg, 0.993 mmol, 50.1% 수율), (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 350.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.49 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 7.75 (dt, J = 1.4, 0.7 Hz, 1H), 7.67 (ddd, J = 5.4, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 4.42 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 3.44-3.24 (m, 4H), 3.14 (ddt, J = 12.0, 6.1, 3.3 Hz, 1H), 3.03 (dd, J = 13.8, 5.2 Hz, 2H), 2.89 (dd, J = 11.6, 3.3 Hz, 1H), 2.55 (s, 3H), 2.23 - 2.01 (m, 2H), 1.99- 1.86 (m, 4H).
실시예 188
(4-메틸피페라진-1-일)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논의 합성
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)에 트리포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 30분 후, 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol) 및 1-메틸피페라진 (258 mg, 2.58 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 물 2x15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x20 ml로 추출하고, 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 500 mg을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 화합물 (4-메틸피페라진-1-일)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논을 황색 고체로서 수득하였다 (280 mg, 0.725 mmol, 36.6% 수율), (Rf 값: 0.25, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 379.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ 8.51 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 7.83 - 7.72 (m, 1H), 7.70 (ddd, J = 5.2, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.53 - 7.36 (m, 2H), 4.36 (d, J = 3.9 Hz, 1H), 3.60 (s, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.22 - 2.90 (m, 3H), 2.61 - 2.44 (m, 9H), 2.15 (d, J = 10.0 Hz, 5H).
실시예 189
(4S)-N-시클로펜틸-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)에 트리포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이에 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol) 및 시클로펜탄아민 (219 mg, 2.58 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 물로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물 500 mg을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 화합물 (4S)-N-시클로펜틸-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (275 mg, 0.727 mmol, 36.7% 수율), (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 364.29(M+H)+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 10.30 (d, J=6.58 Hz, 1 H), 8.56 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 7.67 - 7.52 (m, 4 H), 5.41 (dd, J=5.81, 2.96 Hz, 1 H), 4.14 - 4.06 (m, 1 H), 3.21 - 3.02 (m, 2 H), 2.99 - 2.85 (m, 2 H), 2.54 (s, 3 H), 2.17 (dd, J=9.76, 3.84 Hz, 1 H), 2.03 - 1.79 (m, 3 H), 1.64 - 1.43 (m, 6 H).
실시예 190
(9S)-N-(피라진-2-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (18 mL) 중 (9S)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.9 g, 2.81 mmol)의 교반 용액에 비스(트리클로로메틸) 카르보네이트 (0.417 g, 1.405 mmol)를 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 피라진-2-아민 및 Et3N (2.94 ml, 21.8 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 감압 및 CH2Cl2 (30 ml) 하에 제거하였다. 유기 층을 물 (5ml), 포화 염수 용액 (5ml)으로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 4% MeOH)에 의해 정제하여 (9S)-N-(피라진-2-일)-2-(2-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (476 mg, 1.059 mmol, 37.7% 수율), (TLC: 헥산 중 80% EtOAc, Rf: 0.5), LCMS (m/z): 442.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.06 (s, 1H), 9.56 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 5.1 Hz, 1H), 8.46 (dd, J = 1.8, 0.9 Hz, 1H), 8.37 - 8.23 (m, 2H), 8.14 (dd, J = 5.1, 1.7 Hz, 1H), 7.63 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.56 (s, 1H), 5.15 - 4.92 (m, 1H), 3.52 - 3.26 (m, 3H), 3.03 (d, J = 14.0 Hz, 1H), 2.26 (s, 1H), 2.05 - 1.88 (m, 1H), 1.53 - 1.29 (m, 2H).
실시예 191
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-(1H-피라졸-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메톡시피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (9 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.947 mmol), (1H-피라졸-5-일)보론산 (127 mg, 1.137 mmol) 및 K3PO4 (402 mg, 1.894 mmol)의 용액에 X-phos (45.2 mg, 0.095 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (43.4 mg, 0.047 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 4시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 10 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 100-200 실리카 겔 메쉬를 사용하여 정제하고, 2-3% MeOH/DCM으로 용리시켜 순수한 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-(1H-피라졸-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (100 mg, 0.280 mmol, 29.5% 수율), LCMS (m/z): 349.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.58 (s, 1H), 12.8 - 11.0 (br, 1H), 9.50 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.41 (dd, J = 2.6, 1.5 Hz, 1H), 8.34 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 7.69 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 7.60 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.41 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 6.97 (d, J = 17.7 Hz, 1H), 5.63 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.33 - 3.14 (m, 3H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.35 (dddd, J = 14.0, 9.9, 6.1, 4.1 Hz, 1H), 2.17 - 2.02 (m, 1H).
실시예 192
(9S)-N-(피리미딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (500 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리로부터의 피크 1 500 mg, 1.532 mmol)의 용액에 DMAP (562 mg, 4.60 mmol) 및 페닐 2-(피리미딘-2-일)아세테이트 (985 mg, 4.60 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 28시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, EtOAc (2 X 75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 염수 용액으로 포화시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 백색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH: Rf-0.4; UV 활성). 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하고, 생성물을 헥산 중 25% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(피리미딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노-피리도 [2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 0.711 mmol, 46.4% 수율). LCMS (m/z) 448.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.80 (s, 1H), 8.62 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.36 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 7.15 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.61 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.69 (s, 1H), 4.30 (d, J = 12.7 Hz, 1H), 4.20 (d, J = 13.0 Hz, 1H), 3.26 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 3.20 - 2.89 (m, 4H), 2.79 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.55 (d, J = 10.8 Hz, 1H), 1.99 (d, J = 12.6 Hz, 2H), 1.82 (h, J = 6.1 Hz, 2H), 1.72 - 1.44 (m, 2H), 1.42 - 1.15 (m, 2H).
실시예 193
4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜린산의 합성
인산삼칼륨 (6.03 g, 28.4 mmol)을 1,4-디옥산 (25 mL), 및 물 (4.17 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (3 g, 9.47 mmol), 메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3-디옥솔란-2-일)피콜리네이트 (3.02 g, 11.37 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (0.434 g, 0.474 mmol) 및 X-phos (0.452 g, 0.947 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 EtOAc (200 mL) 사이에 분배하였다. 수성 층을 포화 시트르산 용액으로 중화시키고, 침전된 고체를 여과하고, 건조시켰다. 조 고체를 메탄올 및 물로 연화처리하여 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜린산을 회백색 고체로서 수득하였다 (272 mg, 0.667 mmol, 7.04% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 20% MeOH: Rf: 0.1; UV 활성), LCMS (m/z): 404.1 [M+H]+.
1H NMR (DMSO-d6, 400 MHz): δ 13.66 (s, 1H), 9.37 (d, J = 0.8 Hz, 1H), 8.87 (d, J = 4.8 Hz, 1H), 8.62 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 8.38-8.34 (dd, J = 8.4, 2.4 Hz, 2H), 7.887 (d, J = 8 Hz, 1H), 7.762 (d, J = 8.4 Hz, 1H) 5.53-5.51 (dd, J = 5.6, 2.8 Hz, 1H), 3.31 - 3.23 (m, 1H), 3.15-3.09 (m, 2H), 3.08-2.97 (dd, J = 12, 2.8 Hz, 1H), 2.28-2.24 (m, 1H), 2.02-1.97 (m, 1H).
실시예 194
(4S)-N-(6-메틸피리딘-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (282 mg, 0.951 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, Et3N (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 6-메틸피리딘-3-아민 (257 mg, 2.378 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 ml)에 붓고, DCM (2x 50 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 0-15% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-메틸피리딘-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (320 mg, 0.829 mmol, 52% 수율), (TLC: DCM 중 4% MeOH, Rf: 0.35), LCMS (m/z): 387.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.94 (s, 1 H), 8.66 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.56 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.00 (dd, J=8.44, 2.74 Hz, 1 H), 7.63 (d, J=8.14 Hz, 1 H), 7.57 (s, 1 H), 7.50 (d, J=5.35 Hz, 1 H), 7.25 - 7.38 (m, 1 H), 7.13 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.10 - 3.35 (m, 3 H), 3.02 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.58 (s, 3 H), 2.48 (s, 3 H) 2.03 - 2.22 (m, 1 H) 2.34 (dddd, J=14.03, 9.87, 5.92, 4.17 Hz, 1 H).
실시예 195
(9S)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (600 mg, 2.253 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (0.942 mL, 6.76 mmol) 및 트리포스겐 (334 mg, 1.126 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 4,5-디메틸티아졸-2-아민 히드로클로라이드 (556 mg, 3.38 mmol)를 30℃에서 첨가하고, 반응을 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 물 (40 ml)로 희석하고, DCM (2x 40 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 및 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (9S)-N-(4,5-디메틸티아졸-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (275 mg, 0.655 mmol, 42% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.3), LCMS (m/z): 421.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 14.79 (s, 2 H), 8.64 (d, J=5.26 Hz, 2 H), 8.02 (s, 1 H), 7.64 (dd, J=5.26, 1.53 Hz, 1 H), 7.54 (q, J=8.11 Hz, 1 H), 4.99 (s, 1 H), 3.42 - 3.18 (m, 3 H), 3.12 - 2.89 (m, 1 H), 2.79 (s, 3 H), 2.28 (s, 3 H), 2.22 (s, 3 H), 2.00 - 1.75 (m, 1 H), 1.52 - 1.35 (m, 2 H).
실시예 196
(4S)-7-(2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (30 mL) 및 물 (0.3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.947 mmol) K3PO4 (603 mg, 2.84 mmol)의 탈기된 용액에 x-phos (45.2 mg, 0.095 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (10.63 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 120℃에서 12시간 동안 가열하였다. 용매를 감압 하에 증발시키고, DCM (2x 40 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-(디메틸아미노)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (210 mg, 0.496 mmol, 52.3% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.2), LCMS (m/z): 403.31 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.56 (s, 1 H), 9.54 (s, 1 H), 8.25 - 8.11 (m, 3 H), 7.62 (m, J=7.89 Hz, 1 H), 7.41 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.19 - 7.01 (m, 2 H), 5.72 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.31 - 3.14 (m, 9 H), 3.02 (dd, J=12.17, 3.18 Hz, 1 H), 2.50 - 2.23 (m, 1 H), 2.10 (d, J=7.02 Hz, 1 H).
실시예 197
(4S)-7-(6-시클로프로필피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산칼륨 (402 mg, 1.894 mmol) 및 (6-시클로프로필피리딘-3-일)보론산 (185 mg, 1.137 mmol)을 실온에서 1-부탄올 (6 mL) 및 물 (2.0 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.947 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 아르곤으로 30분 동안 퍼징한 다음, Pd2(dba)3 (43.4 mg, 0.047 mmol) 및 x-phos (45.2 mg, 0.095 mmol))를 첨가하고, 반응 혼합물을 120℃에서 3시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하고, 물 (30 mL) 및 염수 (40 mL)로 세척하였다. 유기 층을 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 석유 에테르 중 80% 에틸 아세테이트)에 의해 정제하였다. 회수된 물질을 에탄올 및 펜탄을 사용하여 재결정화하여 (4S)-7-(6-시클로프로필피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (130 mg, 0.322 mmol, 34.0% 수율), (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트, Rf: 0.2), LCMS (m/z): 400.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.79 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 9.01 (dd, J = 2.4, 0.8 Hz, 1H), 8.42 - 8.22 (m, 3H), 7.61 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.45 - 7.19 (m, 2H), 5.70 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 3.34 - 3.16 (m, 3H), 3.02 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.34 (dd, J = 10.1, 4.1 Hz, 1H), 2.19 - 2.02 (m, 2H), 1.20 - 0.96 (m, 4H).
실시예 198
(9S)-N-(6-메톡시피라진-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.6 g, 2.253 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (1.884 mL, 13.52 mmol) 및 트리포스겐 (0.669 g, 2.253 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 6-메톡시피라진-2-아민 (0.846 g, 6.76 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(6-메톡시피라진-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.220 g, 0.526 mmol, 23.34% 수율), LCMS (m/z): 418.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.64 (s, 1H), 9.45 - 8.78 (m, 1H), 8.60 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 7.96 (d, J = 0.5 Hz, 1H), 7.80 (ddd, J = 5.3, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.62 (dt, J = 1.8, 0.7 Hz, 1H), 7.59 (s, 1H, 7.57 (s, 1H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.04 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 3.84 (s, 3H), 3.57 - 3.26 (m, 3H), 3.15 - 2.91 (m, 1H), 2.64 (s, 3H), 2.28 (d, J = 14.3 Hz, 1H), 2.12 - 1.85 (m, 1H), 1.43 (s, 2H)
실시예 199
(4S)-7-(피페리딘-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성.
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol) 및 피페리딘 (0.375 mL, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 Cs2CO3 (1852 mg, 5.68 mmol), x-phos (361 mg, 0.758 mmol) 및 Pd(OAc)2 (85 mg, 0.379 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 냉수 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 5% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-7-(피페리딘-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (284 mg, 0.762 mmol, 40.2% 수율), (TLC: Rf: 0.2, 순수한 EtOAc), LCMS (m/z): 366.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.51 (s, 1H), 9.52 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.29 - 8.19 (m, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.29 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.61 (dd, J = 6.1, 3.3 Hz, 1H), 3.55 (t, J = 4.9 Hz, 4H), 3.22 (dddd, J = 12.2, 8.6, 3.7, 2.3 Hz, 1H), 3.16 - 3.07 (m, 2H), 2.90 (dd, J = 11.8, 3.3 Hz, 1H), 2.34 - 2.22 (m, 1H), 2.00 (dddd, J = 14.1, 8.7, 6.8, 2.0 Hz, 1H), 1.78 - 1.64 (m, 6H).
실시예 200
(4S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (200 mg, 0.793 mmol), Et3N (0.331 mL, 2.378 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (118 mg, 0.396 mmol)을 25℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, THF (2ml) 중 1-메틸-1H-피라졸-3-아민 (231 mg, 2.378 mmol)을 적가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 유기 용매를 진공 하에 증발시키고, 조 물질을 DCM (20ml)으로 희석하였다. 유기 층을 물 (5 mL), 포화 염수 (5 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (185 mg, 0.490 mmol, 61.8% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf: 0.5), LCMS (m/z): 376.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.37 (s, 1 H), 8.61 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.05-7.83 (m, 1 H), 7.68-7.55 (m, 2 H), 7.43 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.35-7.17 (m, 1 H), 6.63 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 5.69 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.84 (s, 3 H), 3.34-3.10 (m, 3 H), 3.00 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.75 (s, 3 H), 2.32 (dddd, J=14.03, 9.92, 5.97, 4.06 Hz, 1 H) 2.21 - 1.99 (m, 1 H).
실시예 201
(4S)-N-시클로부틸-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하는 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol), 트리에틸아민 (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 트리포스겐 (282 mg, 0.951 mmol)의 용액에 THF (5mL) 중 시클로부탄아민 (225 mg, 3.17 mmol)의 용액을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 빙수에 붓고, EtOAc (3 X 15mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 그레이스 역상 칼럼에 의해 정제하고, 30% (물 중 0.1% HCOOH)/MeOH로 용리시켜 (4S)-N-시클로부틸-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (369 mg, 1.053 mmol, 66.4% 수율), LCMS (m/z): 350.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 10.76 - 10.60 (m, 1H), 8.61 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 7.60 (dt, J = 1.6, 0.7 Hz, 1H), 7.55 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.49 (ddd, J = 5.3, 1.7, 0.7 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 4.52 - 4.36 (m, 1H), 3.28 - 3.13 (m, 2H), 3.07 (dt, J = 11.9, 2.1 Hz, 1H), 2.94 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.51 - 2.39 (m, 2H), 2.26 (dddd, J = 13.9, 10.0, 6.1, 4.1 Hz, 1H), 2.08 - 1.90 (m, 3H), 1.84 - 1.72 (m, 2H).
실시예 202
((9S)-N-(6-메틸피라진-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성:
트리포스겐 (0.279 g, 0.939 mmol)을 25℃에서 테트라히드로푸란 (50 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.25g, 0.939 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 트리에틸아민 (0.654 mL, 4.69 mmol)을 첨가하고, 이어서 6-메틸피라진-2-아민 (0.410 g, 3.75 mmol)의 첨가를 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 디클로로메탄 (50 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 유기 층을 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.4; UV 활성). 조 화합물을 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 100% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(6-메틸피라진-2-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (0.11g, 0.272 mmol, 29.0% 수율), LCMS (m/z): 402.26 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 14.02 (s, 1 H), 9.37 (s, 1 H), 8.68 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.13 - 8.26 (m, 1 H), 7.98 (dd, J=5.26, 1.75 Hz, 1 H), 7.69 - 7.80 (m, 1 H), 7.49 - 7.63 (m, 2 H), 5.03 (t, J=2.19 Hz, 1 H), 3.30 - 3.47 (m, 2 H), 3.03 (br d, J=13.81 Hz, 1 H), 2.69 (s, 2 H), 2.49 - 2.59 (m, 2 H), 2.15 - 2.30 (m, 1 H), 1.84 - 1.99 (m, 1 H), 1.24 - 1.66 (m, 3 H).
실시예 203
(4S)-N-시클로프로필-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol)을 0℃에서 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol), 및 TEA (1.657 mL, 11.89 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 시클로프로판아민 (272 mg, 4.76 mmol)을 첨가하고, 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 황색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 10% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-N-시클로프로필-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (218 mg, 0.638 mmol, 26.8% 수율), LCMS (m/z): 336.24 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 10.59 (s, 1H), 8.60 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 7.68 - 7.50 (m, 2H), 7.42 (dd, J = 5.2, 1.7 Hz, 1H), 7.38 - 7.21 (m, 1H), 5.66 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 3.36 - 3.12 (m, 2H), 3.07 (dt, J = 12.0, 2.1 Hz, 1H), 3.01 - 2.82 (m, 2H), 2.66 (s, 3H), 2.27 (dddd, J = 13.8, 9.9, 6.0, 4.0 Hz, 1H), 2.02 (dt, J = 14.6, 7.3 Hz, 1H), 0.91 - 0.79 (m, 2H), 0.69 - 0.51 (m, 2H).
실시예 204
(9S)-N-(피리미딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리로부터의 피크 II 0.600 g, 1.838 mmol)의 용액에 DMAP (0.674 g, 5.52 mmol) 및 페닐 피리미딘-2-일카르바메이트 (1.187 g, 5.52 mmol)를 첨가하고, 65℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시킨 다음, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (10 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 80% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 35-40% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피리미딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.375 g, 0.834 mmol, 45.4% 수율), LCMS (m/z): 448.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.97 (s, 1H), 8.59 (d, J = 4.8 Hz, 2H), 7.31 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.93 (t, J = 4.8 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.93 (q, J = 2.6 Hz, 1H), 4.44 - 4.07 (m, 2H), 3.31 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 3.19 (d, J = 3.4 Hz, 2H), 3.10 - 2.81 (m, 3H), 2.44 (dtt, J = 15.6, 7.7, 3.9 Hz, 1H), 2.29 (d, J = 13.4 Hz, 1H), 2.17 - 2.07 (m, 1H), 1.93 (dt, J = 13.2, 3.3 Hz, 1H), 1.85 (ddd, J = 13.8, 5.3, 3.1 Hz, 2H), 1.77 - 1.68 (m, 1H), 1.55 - 1.43 (m, 1H), 1.31 (d, J = 14.0 Hz, 1H).
실시예 205
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
NaH (0.154 g, 6.43 mmol)를 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리로부터의 피크-I, 0.350 g, 1.072 mmol)의 용액에 첨가하고, 질소 하에 0℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 30℃에서 30분 동안 교반하고, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (0.386 g, 1.609 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 24시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 메탄올 (5 mL)로 켄칭하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, EtOAc (2 X 100mL)로 추출하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 감압 하에 농축시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 60% 에틸 아세테이트로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.320 g, 0.708 mmol, 66.0% 수율), LCMS (m/z): 447.34 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.58 (s, 1H), 8.46 - 8.04 (m, 2H), 7.65 (ddd, J = 8.9, 7.3, 1.9 Hz, 1H), 7.35 - 7.10 (m, 1H), 6.94 (ddd, J = 7.3, 4.9, 1.1 Hz, 1H), 6.38 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.10 - 4.73 (m, 1H), 4.59 - 4.37 (m, 1H), 4.31 - 4.19 (m, 1H), 3.30 (dd, J = 13.4, 1.9 Hz, 1H), 3.26 - 3.13 (m, 2H), 3.06 - 2.88 (m, 3H), 2.48-2.36 (m, J = 16.3, 8.3, 4.1 Hz, 1H), 2.21 (d, J = 14.4 Hz, 1H), 2.12 (d, J = 12.1 Hz, 1H), 1.94 (s, 1H), 1.88 - 1.68 (m, 2H), 1.67 - 1.57 (m, 1H), 1.50 (s, 1H), 1.31 (d, J = 13.6 Hz, 1H).
실시예 206
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-3-일메틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol)을 0℃에서 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol), 및 TEA (1.657 mL, 11.89 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 피리딘-3-일메탄아민 (514 mg, 4.76 mmol)을 첨가하고, 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 황색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 역상 칼럼 (칼럼: C18, 40μm)에 의해 정제하고, 20% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-3-일메틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (193 mg, 0.498 mmol, 20.93% 수율), LCMS (m/z): 387.32 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 10.89 (t, J = 5.7 Hz, 1H), 8.75 - 8.60 (m, 1H), 8.56 (dd, J = 4.8, 1.7 Hz, 1H), 8.40 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 7.72 (dt, J = 7.9, 2.0 Hz, 1H), 7.57 (d, J = 7.9 Hz, 1H), 7.44 - 7.21 (m, 3H), 7.15 (dd, J = 5.3, 1.8 Hz, 1H), 5.66 (dd, J = 5.9, 3.2 Hz, 1H), 4.63 (d, J = 5.4 Hz, 2H), 3.37 - 3.15 (m, 2H), 3.11 (dt, J = 12.2, 2.1 Hz, 1H), 2.98 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.39 - 2.23 (m, 1H), 2.05 (dt, J = 14.6, 7.8 Hz, 1H).
실시예 207
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-3-일메틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol)을 0℃에서 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol), 및 TEA (1.657 mL, 11.89 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 1시간 동안 교반하고, 피리딘-2-일메탄아민 (514 mg, 4.76 mmol)을 첨가하고, 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 황색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.2; UV 활성). 조 화합물을 역상 칼럼 (칼럼: C18, 40μm)에 의해 정제하고, 20% (0.1%HCOOH&물)/MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리딘-2-일메틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (190 mg, 0.492 mmol, 20.67% 수율), LCMS (m/z): 387.22 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 11.04 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.40 (dt, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 7.64 (td, J = 7.7, 1.9 Hz, 1H), 7.60 - 7.49 (m, 2H), 7.44 (dd, J = 5.3, 1.7 Hz, 1H), 7.36 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.33 - 7.22 (m, 1H), 7.22 - 7.10 (m, 1H), 5.68 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 4.78 (d, J = 5.0 Hz, 2H), 3.34 - 3.04 (m, 3H), 2.97 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1H), 2.49 (s, 3H), 2.28 (dddd, J = 13.8, 10.0, 5.9, 4.0 Hz, 1H), 2.06 (dt, J = 14.5, 7.3 Hz, 1H).
실시예 208
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1,2,4-트리아진-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.250 g, 0.991 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.486 mL, 17.83 mmol) 및 트리포스겐 (0.294 g, 0.991 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반하였다. 1,2,4-트리아진-5-아민 (0.286 g, 2.97 mmol)을 실온에서 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 완전히 증류시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, 100% EtOAc로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(1,2,4-트리아진-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.044 g, 0.117 mmol, 11.76% 수율), LCMS (m/z): 375.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.23 (s, 1H), 10.27 (d, J = 2.0 Hz, 1H), 9.27 (d, J = 2.1 Hz, 1H), 8.65 (dd, J = 5.3, 0.8 Hz, 1H), 7.96 (dt, J = 1.9, 0.7 Hz, 1H), 7.73 - 7.61 (m, 2H), 7.54 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.69 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.31 - 3.14 (m, 3H), 3.05 (dd, J = 12.2, 3.3 Hz, 1H), 2.73 (s, 3H), 2.38 (dddd, J = 13.9, 9.9, 6.1, 4.2 Hz, 1H), 2.15 - 2.02 (m, 1H).
실시예 209
(4S)-N-시클로헥실-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)에 트리포스겐 (294 mg, 0.991 mmol)을 첨가하고, 30분 동안 실온에서 교반하였다. 이에 트리에틸아민 (1.381 mL, 9.91 mmol) 및 시클로헥산아민 (255 mg, 2.58 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x 15 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x 20 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 순수한 화합물 (4S)-N-시클로헥실-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (265 mg, 0.701 mmol, 35.4% 수율), (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 378.36 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 10.36 (d, J=7.02 Hz, 1 H), 8.59 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.56 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.54 - 7.52 (m, 1 H), 7.45 (dd, J=5.15, 1.21 Hz, 1 H), 7.29 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.64 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.87 - 3.74 (m, 1 H), 3.06 - 3.30 (m, 3 H), 2.95 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.65 (s, 3 H), 2.26 (dddd, J=14.00, 9.89, 5.92, 4.17 Hz, 1 H), 2.14 - 1.98 (m, 3 H), 1.81 - 1.61 (m, 3 H), 1.45 - 1.14 (m, 5 H)
실시예 210
(9S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (30 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리의 피크-II, 0.600 g, 1.838 mmol)의 용액에 DMAP (0.674 g, 5.52 mmol) 및 페닐 (5-플루오로피리딘-2-일)카르바메이트 (1.281 g, 5.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 36시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (10 mL)과 EtOAc (50 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 80% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 25-30% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.288 g, 0.608 mmol, 33.1% 수율), LCMS (m/z): 465.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.62 (s, 1H), 8.20 (ddd, J = 9.2, 4.1, 0.6 Hz, 1H), 8.09 (s, 1H), 7.39 (ddd, J = 9.1, 7.8, 3.0 Hz, 1H), 7.30 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 6.39 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.87 (p, J = 2.8 Hz, 1H), 4.30 (dtt, J = 12.5, 3.7, 1.8 Hz, 2H), 3.31 (dd, J = 13.4, 1.9 Hz, 1H), 3.25 - 3.13 (m, 2H), 3.07 - 2.85 (m, 3H), 2.44 (dt, J = 7.4, 3.6 Hz, 1H), 2.26 - 2.05 (m, 2H), 1.99 - 1.83 (m, 2H), 1.78 - 1.66 (m, 1H), 1.62 (dd, J = 12.4, 3.8 Hz, 1H), 1.53 - 1.44 (m, 1H), 1.37 - 1.26 (m, 1H).
실시예 211
(9S)-N-(피리딘-3-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리의 피크-I, 600 mg, 1.838 mmol)의 용액에 DMAP (674 mg, 5.52 mmol) 및 페닐 피리딘-3-일카르바메이트 (1182 mg, 5.52 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2x75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 염수 용액으로 포화시키고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 백색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 순도 에틸 아세테이트; Rf 값: 0.4; UV 활성). 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 25% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(피리딘-3-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (350 mg, 0.782 mmol, 42.5% 수율), LCMS (m/z): 447.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.94 (s, 1H), 8.62 (dd, J = 2.6, 0.7 Hz, 1H), 8.32 (dd, J = 4.7, 1.5 Hz, 1H), 8.15 (ddd, J = 8.4, 2.7, 1.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.5 Hz, 1H), 7.29 - 7.24 (m, 1H), 6.41 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.90 (t, J = 2.6 Hz, 1H), 4.22 - 4.04 (m, 2H), 3.31 (dd, J = 13.5, 1.9 Hz, 1H), 3.25 - 3.14 (m, 2H), 2.99 - 2.88 (m, 3H), 2.48-2.36 (m, 1H), 2.25 - 2.18 (m, 1H), 2.13 (dd, J = 13.2, 4.0 Hz, 1H), 1.98 - 1.92 (m, 1H), 1.85 (tdd, J = 13.9, 5.2, 2.9 Hz, 1H), 1.71 (dtd, J = 16.5, 8.3, 7.7, 4.3 Hz, 1H), 1.63 (d, J = 3.8 Hz, 1H), 1.57 - 1.44 (m, 1H), 1.33 (d, J = 14.2 Hz, 1H).
실시예 212
(4S)-N-(1H-이미다조[4, 5-b]피리딘-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2, 3-b][1, 4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (30 ml) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 용액에 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 1시간 동안 교반하였다. 이어서, 1H-이미다조[4,5-b]피리딘-5-아민 (415 mg, 3.09 mmol) 및 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol)을 후속적으로 첨가하고, 반응을 밀봉된 튜브 중에서 70℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 포화 NaHCO3 용액 (150 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 디클로로메탄 중 1% 메탄올의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-N-(1H-이미다조[4, 5-b]피리딘-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2, 3-b][1, 4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (160 mg, 0.388 mmol, 25%), (TLC: DCM 중 5% 메탄올, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 413.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 13.43 (s, 1H), 12.30-11.54(m, 1H), 8.72 (d, J = 5.4 Hz, 1H), 8.34 (s, 1H), 8.19 - 8.10 (m, 3H), 8.04 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 7.80 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.72 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.55 (dd, J = 6.0, 3.1 Hz, 1H), 3.12 (d, J = 11.5 Hz, 2H), 2.98 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 2.95 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 2.70 (s, 3H), 2.25 (m, J = 13.9, 4.7 Hz, 1H), 1.96 (dt, J = 14.3, 7.4 Hz, 1H).
실시예 213
(4S)-N-(6-플루오로피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리에틸아민 (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 트리포스겐 (235 mg, 0.793 mmol)을 25℃에서 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 30분 후, 6-플루오로피라진-2-아민 (359 mg 3.17 mmol)을 첨가하고, 70℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하였다. 잔류물을 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x60 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-플루오로피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (210 mg, 0.522 mmol, 32.9% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 392.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.82 (s, 1H), 9.48 (d, J = 4.6 Hz, 1H), 8.66 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 8.15 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 7.92 (d, J = 2.2 Hz, 1H), 7.71 - 7.40 (m, 2H), 7.26 (s, 1H), 5.75 - 5.63 (m, 1H), 3.26 (dd, J = 9.7, 6.9 Hz, 3H), 3.05 (d, J = 3.3 Hz, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.36 (dddd, J = 13.9, 9.9, 5.9, 3.9 Hz, 1H), 2.16 - 1.93 (m, 1H).
실시예 214
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-(4-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (15 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (800 mg, 2.53 mmol) 및 4-(트리플루오로메틸)피페리딘 (580 mg, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 Cs2CO3 (2469 mg, 7.58 mmol)을 첨가하고, 15분 동안 아르곤 기체로 퍼징한 다음, x-phos (241 mg, 0.505 mmol), 아세트산팔라듐(II) (56.7 mg, 0.253 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 냉수 (30 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 DCM 중 2% MeOH의 구배 혼합물 사용)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-(4-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (255 mg, 0.559 mmol, 22.13% 수율), (TLC: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.3), LCMS (m/z): 434.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.39 (s, 1H), 9.54 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.19 (dd, J = 2.6, 1.6 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.62 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 4.41 - 4.30 (m, 2H), 3.30 - 3.18 (m, 1H), 3.16 - 3.08 (m, 2H), 3.00 - 2.88 (m, 3H), 2.37 - 2.19 (m, 2H), 2.09 - 1.97 (m, 3H), 1.75 - 1.61 (m, 2H).
실시예 215
(9S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
DMAP (0.573 g, 4.69 mmol)를 테트라히드로푸란 (10 mL) 중 (9S)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (0.5g, 1.877 mmol), 및 페닐 (1-메틸-1H-피라졸-4-일)카르바메이트 (1.01g, 4.692 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 밀봉된 튜브 중에서 24시간 동안 80℃로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 및 물로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf-0.4; UV 활성). 조 화합물을 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 75% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(1-메틸-1H-피라졸-4-일)-2-(2-메틸피리딘-4-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.17g, 0.430 mmol, 22.89% 수율), LCMS (m/z): 390.28 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.27 (s, 1 H), 8.67 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.87 (s, 1 H), 7.63 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 7.53 - 7.57 (m, 2 H), 7.43 (d, J=0.66 Hz, 1 H), 7.40 (s, 1 H), 4.99 (t, J=2.30 Hz, 1 H), 3.89 (s, 3 H), 3.22 - 3.42 (m, 3 H), 2.98 (br d, J=13.59 Hz, 1 H), 2.70 (s, 3 H), 2.20 - 2.28 (m, 1 H), 1.92 (tdd, J=13.67, 13.67, 5.54, 3.07 Hz, 1 H), 1.32 - 1.50 (m, 2 H).
실시예 216
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-3-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드의 합성
디에틸 에테르 중 2.0 M 염산 (2 mL, 4.00 mmol)을 0℃에서 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-3-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (250 mg, 0.624 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 28℃에서 4시간 동안 교반하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 디에틸 에테르 (2x5 mL)로 세척하여 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-3-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다 (274 mg, 0.606 mmol, 97% 수율), LCMS (m/z): 401.1 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CD3OD): δ 8.89 (s, 2H), 8.72 (d, J = 4.7 Hz, 1H), 8.65 (d, J = 6.7 Hz, 1H), 8.44 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.17 (d, J = 7.1 Hz, 1H), 8.06 - 7.92 (m, 2H), 5.67 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 3.99-3.75 (m, 6H), 3.32-3.20 (m, 2H), 2.93 (s, 3H), 2.72-2.53 (m, 1H), 2.42-2.37 (s, 1H).
실시예 217
((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-일) (3-메틸피롤리딘-1-일) 메타논의 합성
질소 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1.5 g, 5.94 mmol)에 트리포스겐 (0.882 g, 2.97mmol)을 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 30분 후, 트리에틸아민 (4.14 mL, 29.7 mmol) 및 3-메틸피롤리딘 (0.658 g, 7.73 mmol)을 첨가한 다음, 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 2x25 ml로 켄칭하고, 에틸 아세테이트 2x50 ml로 추출하고, 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하고, SFC에 적용하고, 피크를 연갈색 고체로서 ((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(3-메틸피롤리딘-1-일)메타논 (210 mg, 0.574 mmol, 9.65% 수율)을 산출하는 단리된 피크-I로서 및 연갈색 고체로서 ((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)(3-메틸피롤리딘-1-일)메타논 (180 mg, 0.494 mmol, 6.79% 수율)을 산출하는 단리된 피크-II로서 분리하였다, (Rf 값: 0.4, DCM 중 10% 메탄올), LCMS (m/z): 364.32 [M+H]+.
피크-1
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.50 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 7.76 (d, J=0.66 Hz, 1 H), 7.68 (dd, J=5.26, 1.10 Hz, 1 H), 7.52 - 7.48 (m, 1 H), 7.47 - 7.38 (m, 1 H), 4.40 (br d, J=2.85 Hz, 1 H), 3.48 (br s, 3 H), 3.16 - 2.98 (m, 4 H), 2.89 (dd, J=11.62, 3.29 Hz, 1 H),2.53 - 2.46 (m, 3 H), 2.32 - 2.20 (m, 3 H), 2.14 (br d, J=4.60 Hz, 2 H), 1.48 (dt, J=19.51, 9.76 Hz, 1 H), 1.12 - 0.98 (m, 2 H).
피크-II
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6) δ ppm 8.48 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.76 (s, 1 H), 7.68 (dd, J=5.26, 1.32 Hz, 1 H), 7.40 - 7.54 (m, 2 H), 4.44 (br s, 1 H), 3.36 - 3.69 (m, 3 H), 2.99 - 3.18 (m, 4 H), 2.89 (dd, J=11.62, 3.29 Hz, 1 H), 2.03 - 2.33 (m, 4 H), 1.81-1.52 (m, 2 H), 1.01 (br s, 2 H).
실시예 218
(4S)-N-(5-메틸피리딘-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (423 mg, 1.427 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, Et3N (1.657 mL, 11.89 mmol) 및 5-메틸피리딘-3-아민 (771 mg, 7.13 mmol)을 30℃에서 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 ml)에 붓고, DCM (2x 50 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 0-15% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(5-메틸피리딘-3-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (300 mg, 0.777 mmol, 45% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 387.36 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.00 (s, 1 H), 8.66 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 8.47 (s, 1 H), 8.16 (s, 1 H), 7.99 (s, 1 H), 7.71 - 7.57 (m, 2 H), 7.50 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.38 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.37 - 3.10 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.06, 3.07 Hz, 1 H), 2.68 (s, 3 H), 2.45 - 2.25 (m, 4 H), 2.22 - 1.98 (m, 1 H).
실시예 219
(4S)-N-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)의 용액에 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 27℃에서 2시간 동안 교반한 다음, 벤조[d][1,3]디옥솔-5-아민 (391 mg, 2.85 mmol) 및 N-에틸-N-이소프로필프로판-2-아민 (307 mg, 2.378 mmol)을 27℃에서 첨가하고, 16시간 동안 50℃로 가열하였다. 반응물을 실온으로 되도록 하고, 반응 혼합물을 포화 NaHCO3 용액에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬에 의해 디클로로메탄 중 2% 메탄올)로 용리시키면서 정제하여 (4S)-N-(벤조[d][1,3]디옥솔-5-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (270 mg, 26.2% 수율), (TLC: 용리액, DCM 중 5% 메탄올; Rf= 0.4), LCMS (m/z): 416.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.81 (s, 1 H), 8.63 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 7.64-7.59 (m, 2 H), 7.49 (dd, J=5.15, 1.43 Hz, 1 H), 7.37-7.31(m, 2 H), 6.85 (dd, J=8.33, 2.19 Hz, 1 H), 6.75 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 5.97-5.92 (m, 2 H), 5.73-5.66 (m, 1 H), 3.33-3.10 (m, 3 H), 3.01 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.65 (s, 3 H), 2.32 (dddd, J=14.11, 9.84, 5.86, 4.17 Hz, 1 H), 2.09 (dt, J=14.03, 6.80 Hz, 1 H).
실시예 220
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드의 합성.
디에틸 에테르 중 2.0 M 염산 (2 mL, 4.00 mmol)을 0℃에서 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.749 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 28℃에서 4시간 동안 교반하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 디에틸 에테르 (3x5 mL)로 세척하여 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(2-(피리딘-2-일)에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다 (296 mg, 0.675 mmol, 90% 수율), LCMS (m/z) 401.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.88 (t, J = 5.9 Hz, 1H), 8.89 (d, J = 6.1 Hz, 1H), 8.66 (dd, J = 5.6, 1.7 Hz, 1H), 8.40 - 8.35 (m, 1H), 8.31 - 8.29 (m, 1H), 8.14 (dd, J = 6.2, 1.9 Hz, 1H), 8.08 (d, J = 7.8 Hz, 1H), 7.95 (dd, J = 7.9, 4.9 Hz, 2H), 7.74 (t, J = 6.7 Hz, 1H), 5.40 (dd, J = 5.6, 2.9 Hz, 1H), 3.97-3.78 (m, 2H), 3.58 - 3.26 (m, 6H), 2.84 (s, 3H), 2.32-2.25 (m, 1H), 2.19-2.03 (m, 1H).
실시예 221
(4S)-7-(피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (5 mL) 중 tert-부틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피페라진-1-카르복실레이트 (359 mg, 0.770 mmol)의 용액에 0℃에서 디에틸 에테르 중 HCl의 2M 용액 (1.924 mL, 3.85 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하고, 반응 혼합물을 0℃로 냉각시키고, 수성 NaHCO3 용액으로 중화시키고, CH2Cl2 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (277 mg, 0.741 mmol, 96% 수율), (TLC: Rf: 0.3; DCM 중 5% MeOH), LCMS (m/z): 367.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.41 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.24 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.17 (dd, J = 2.5, 1.5Hz,1H), 7.38 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.62 - 5.55 (m, 1H), 3.63 (t, J = 5.2 Hz, 4H), 3.26 - 3.17 (m, 1H), 3.17 - 3.06 (m, 6H), 2.92 (dd, J = 11.9, 3.3 Hz, 1H), 2.27 (dddd, J = 13.7, 9.9, 6.2, 3.8 Hz, 1H), 2.07 - 1.96 (m, 2H).
실시예 222
(4S)-7-(4-메틸피페리딘-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 4-메틸피페리딘 (376 mg, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 실온에서 Cs2CO3 (1852 mg, 5.68 mmol), x-phos (361 mg, 0.758 mmol) 및 Pd(OAc)2 (106 mg, 0.474 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 16시간 동안 교반하고, 냉수 (20 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 4% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(4-메틸피페리딘-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (300 mg, 0.775 mmol, 40.9% 수율), (TLC: Rf: 0.4; 순수한 EtOAc), LCMS (m/z): 380.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.51 (s, 1H), 9.52 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.23 (dd, J = 2.5, 0.4 Hz, 1H), 8.20 (dd, J = 2.5, 1.5 Hz, 1H), 7.33 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.30 (d, J = 8.7 Hz, 1H), 5.61 (dd, J = 6.1, 3.2 Hz, 1H), 4.20 (ddd, J = 11.4, 3.6, 2.1 Hz, 2H), 3.22 (dddd, J = 12.3, 8.6, 3.7, 2.2 Hz, 1H), 3.15 - 3.05 (m, 2H), 3.00 - 2.86 (m, 3H), 2.26 (dddd, J = 13.8, 9.9, 6.2, 3.8 Hz, 1H), 2.04 - 1.94 (m, 1H), 1.84 - 1.72 (m, 2H), 1.68 - 1.60 (m, 1H), 1.33 - 1.18 (m, 2H), 0.99 (d, J = 6.5 Hz, 3H).
실시예 223
(4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
K3PO4 (535 mg, 2.53 mmol)를 1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.263 mmol) & (2,6-디메틸피리딘-3-일)보론산 (248 mg, 1.642 mmol)의 교반 용액에 첨가한 다음, 15분 동안 탈기하고, x-phos (60.2 mg, 0.126 mmol)에 이어서 Pd2(dba)3 (57.8 mg, 0.063 mmol)을 첨가한 다음, 반응물을 90℃에서 2시간 45분 동안 가열한 후에, 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (10 mLx2)로 세척하고, 여과물로부터 유기 용매를 감압 하에 제거하였다. 수성 층을 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하고, 물 (20 mLx2), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 진공 하에 제거하여 조 화합물을 수득하였다. 상기 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 헥산 중 80% 에틸 아세테이트로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (330 mg, 0.848 mmol, 67.2% 수율), (TLC: 용리액: 100% 에틸 아세테이트 Rf: 0.3, UV 활성), LCMS (m/z): 388.28 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.5 (s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.22-8.25 (m, 1H), 8.18-8.20 (m, 1H), 7.77 (d, 1H, J = 7.6 Hz),7.6 (d, 1H,J = 8 Hz), 7.08 - 7.14 (m, 2H), 5.68 - 5.72 (m, 1H), 3.18 - 3.34 (m, 3H), 3.01 - 3.06 (m, 1H), 2.65 (s, 3H), 2.5 (s, 3H), 2.31 - 2.39 (m, 1H), 2.08 - 2.15 (m, 1H).
실시예 224
(4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
K3PO4 (537 mg, 2.53 mmol)를 1,4-디옥산 (15 mL) 및 물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.267 mmol) & (2,6-디메틸피리딘-3-일)보론산 (249 mg, 1.647 mmol)의 교반 용액에 첨가한 다음, 15분 동안 탈기하고, 디시클로헥실(2',4',6'-트리이소프로필-[1,1'-비페닐]-2-일)포스핀 (60.4 mg, 0.127 mmol)에 이어서 Pd2(dba)3 (58.0 mg, 0.063 mmol)을 첨가하고, 100℃에서 2시간 45분 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록하고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (10 mLx2)로 세척하고, 여과물 용매를 감압 하에 제거하였다. 유기 화합물을 에틸 아세테이트 (20 mLx2)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (20 mLx2), 염수 (20 mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시켰다. 유기 용매를 진공 하에 제거하여 조 화합물을 수득하였다. 상기 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 화합물을 헥산 중 90% 에틸 아세테이트로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (304 mg, 0.777 mmol, 61.3% 수율), (TLC: 용리액: 100% 에틸 아세테이트 Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 387.31 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.13 (s, 1H), 8.33 - 8.35 (m, 1H), 8.24 - 8.26 (m, 1H), 8.10 - 8.14 (m, 1H), 7.6 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 7.59 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.19 -7.24 (m, 1H), 7.15 (d, 1H, J = 8 Hz), 7.05 (d, 1H, J = 7.6 Hz), 5.67 - 5.71 (m, 1H), 3.35 - 3.4 (m, 1H), 3.19 - 3.25 (m, 2H), 3.1 - 3.36 (m, 1H), 2.6 (s, 6H), 2.29 -2.38 (m,1H), 2.17 - 2.26 (m, 1H).
실시예 225
(9S)-N-(피라진-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
디페닐 포스포르아지데이트 (1.996 g, 7.25 mmol)를 테트라히드로푸란 (THF) (60 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (중간체 SFC 분리의 피크-II, 0.600 g, 4.83 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, DIPEA (4.22 mL, 24.17 mmol)를 아르곤과 함께 실온에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반하고, (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (1.105 g, 3.38 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (30 mL)과 EtOAc (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피라진-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (0.367 g, 0.815 mmol, 16.86% 수율), LCMS (m/z): 448.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.79 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1H), 8.25 (d, J = 2.5 Hz, 1H), 8.20 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 7.32 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 6.42 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 4.90 (s, 1H), 4.28 (s, 2H), 3.32 (dd, J = 13.5, 1.9 Hz, 1H), 3.21 (dd, J = 12.5, 3.3 Hz, 2H), 3.10 - 2.86 (m, 3H), 2.44 (dt, J = 7.6, 3.6 Hz, 1H), 2.28 - 2.18 (m, 1H), 2.11 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 1.99 - 1.80 (m, 2H), 1.78 - 1.65 (m, 1H), 1.65 - 1.60 (m, 1H), 1.49 (s, 1H), 1.35 (s, 1H).
실시예 226
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(6-메틸티아졸로[3,2-b][1,2,4]트리아졸-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하는 테트라히드로푸란 (10 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.189 mmol), 트리에틸아민 (0.829 mL, 5.94 mmol) 및 트리포스겐 (212 mg, 0.713 mmol)의 용액에 THF (2mL) 중 6-메틸티아졸로[3,2-b][1,2,4]트리아졸-2-아민 (367 mg, 2.378 mmol)의 용액을 1분 동안 적가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc (3 X 10mL)로 추출하였다. 이어서, 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 역상 칼럼에 의해 정제하고, 90% (물 중 0.1%HCOOH)/MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(6-메틸티아졸로[3,2-b][1,2,4]트리아졸-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (390 mg, 0.892 mmol, 75% 수율), LCMS (m/z): 433.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.88 (s, 1H), 8.63 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 7.91 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 7.69 - 7.52 (m, 2H), 7.46 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 6.48 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 5.75 (dd, J = 5.9, 3.1 Hz, 1H), 3.35 - 3.10 (m, 3H), 3.02 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1H), 2.72 (s, 3H), 2.57 (d, J = 1.4 Hz, 3H), 2.40 - 2.25 (m, 1H), 2.19-2.05 (m, 1H).
실시예 227
(4S)-7-((S)-3-(히드록시메틸)모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Cs2CO3 (5778 mg, 17.74 mmol) 및 (S)-모르폴린-3-일메탄올 (390 mg, 3.33 mmol)을 1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.217 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 아르곤으로 25분 동안 퍼징한 다음, 아세트산팔라듐(II) (49.8 mg, 0.222 mmol) 및 X-phos (211 mg, 0.443 mmol)를 첨가하였다. 반응물을 100℃에서 8시간 동안 교반한 후에, 반응 혼합물을 실온으로 가온하였다. 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물 (60mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50mL)로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-7-((S)-3-(히드록시메틸)모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (275 mg, 0.691 mmol, 31.2% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4), LCMS (m/z): 397.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.38 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.36 - 8.24 (m, 1H), 8.16 (ddd, J = 8.4, 2.7, 1.5 Hz, 1H), 7.44 - 7.16 (m, 2H), 6.25 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.63 (dd, J = 6.2, 3.2 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 2.7 Hz, 2H), 3.69 - 3.48 (m, 2H), 3.38 - 3.03 (m, 4H), 2.90 (dd, J = 11.8, 3.3 Hz, 1H), 2.26 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 1H), 2.11 - 1.87 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 228
(4S)-7-((R)-3-메틸모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(R)-3-메틸모르폴린 (320 mg, 3.17 mmol)에 이어서 탄산세슘 (516 mg, 1.583 mmol)을 1,4-디옥산 (8 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.583 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 30분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd(OAc)2 (71.1 mg, 0.317 mmol) 및 X-phos (755 mg, 1.583 mmol)를 반응 혼합물에 실온에서 첨가하고, 다시 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 110℃에서 6시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 물 (30 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2X50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (20 mL)로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-((R)-3-메틸모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (100 mg, 0.258 mmol, 16.27% 수율), (TLC: Rf 0.4, DCM 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 381.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.38 (s, 1H), 8.51 (d, J = 2.6 Hz, 1H), 8.36 - 8.24 (m, 1H), 8.16 (ddd, J = 8.4, 2.7, 1.5 Hz, 1H), 7.44 - 7.16 (m, 2H), 6.25 (d, J = 8.6 Hz, 1H), 5.63 (dd, J = 6.2, 3.2 Hz, 1H), 4.06 (d, J = 7.4 Hz, 2H), 3.81 (t, J = 2.7 Hz, 2H), 3.69 - 3.48 (m, 2H), 3.38 - 3.03 (m, 4H), 2.90 (dd, J = 11.8, 3.3 Hz, 1H), 2.26 (dd, J = 10.1, 3.9 Hz, 1H), 2.11 - 1.87 (m, 1H), 1.26 (d, J = 6.6 Hz, 3H).
실시예 229
(4S)-N-(6-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디클로로메탄 (10 mL) 중 (4S)-N-(6-(((R)-2,2-디메틸-1,3-디옥솔란-4-일)메톡시)피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.4 g, 0.794 mmol)의 용액에 0℃에서 디옥산 중 4M HCl (0.198 g, 1.589 mmol)을 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 35℃에서 6시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 NaHCO3 용액으로 중화시키고, DCM (2x 30 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (20 ml), 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 화합물을 디에틸에테르 (40 ml) 및 펜탄 (20 ml)으로 연화처리하여 순수한 생성물 (4S)-N-(6-((S)-2,3-디히드록시프로폭시)피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.21 g, 0.453 mmol, 65% 수율), (TLC: 에틸 아세테이트 중 10% MeOH, Rf: 0.2), LCMS (m/z): 464.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.99 (s, 1 H), 9.33 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 9.13 (s, 1 H), 8.00 (d, J=7.78 Hz, 2 H), 7.97 (s, 1 H), 7.64 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.19 - 7.37 (m, 2 H), 5.87 (br s, 1 H), 5.73 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 4.74 (dd, J=10.96, 5.70 Hz, 1 H), 4.40 (dd, J=10.96, 7.45 Hz, 1 H), 4.08 - 4.30 (m, 1 H), 3.65 - 3.90 (m, 2 H), 3.10 - 3.34 (m, 4 H), 3.02 (dd, J=12.28, 3.29 Hz, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.36 (dddd, J=14.14, 9.87, 5.81, 4.17 Hz, 1 H), 2.00 - 2.22 (m, 1 H).
실시예 230
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리도[3,4-b]피라진-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (15 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (800 mg, 2.53 mmol) 및 1-메틸피페라진 (379 mg, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 탄산세슘 (2469 mg, 7.58 mmol), x-phos (241 mg, 0.505 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (56.7 mg, 0.253 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 가열하고, 냉수 (45 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, DCM 중 2% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-7-(4-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (268 mg, 0.693 mmol, 27.5% 수율), (TLC: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.23), LCMS (m/z): 381.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.46 (s, 2 H), 9.53 (s, 1 H), 8.29-8.12 (m, 2 H), 7.36 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.30 (d, J=8.55 Hz, 2 H), 5.61 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 2 H), 3.65-3.63 (m, 4H), 3.27-3.03 (m, 3 H), 2.91 (dd, J=11.73, 3.40 Hz, 1 H), 2.42-2.39 (m, 1 H), 2.39 (s, 3 H), 2.33-2.14 - (m, 1 H), 2.13-1.93 (m, 1 H).
실시예 231
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(5-(트리플루오로메틸)피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 5-(트리플루오로메틸)피라진-2-아민 (1164 mg, 7.13 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (1.989 mL, 14.27 mmol) 및 트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol)을 25℃에서 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 이어서, (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)을 첨가하고, 밀봉된 튜브 중에서 100℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (20 mLx2), 염수 (10 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 압력 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(5-(트리플루오로메틸)피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (125 mg, 0.283 mmol, 32% 수율), (TLC: 용리액: DCM 중 5% 메탄올, Rf: 0.3), LCMS (m/z): 442.24 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): 14.1 (s, 1H), 9.7 (s, 1H), 8.66-8.62 (m, 2H), 8.0 (s, 1H), 7.69-7.64 (m, 2H), 7.5 (d, J= 8 Hz, 1H), 5.74-5.69 (m, 1H), 3.34-3.16 (m, 3H), 3.08-3.02 (m, 1H), 2.75 (s, 3H), 2.32-2.42 (m, 1H), 2.14-2.06 (m, 1H).
실시예 232
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (776 mg, 2.84 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액을 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. X-phos (90 mg, 0.189 mmol), 및 Pd2(dba)3 (87 mg, 0.095 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 16시간 동안 90℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 80 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (20 mL)에 이어서 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트, Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하고, 생성물을 헥산 중 45-50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (360 mg, 0.824 mmol, 43.5% 수율), LCMS (m/z): 428.17 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.60 (s, 1 H), 9.52 (d, J=1.1 Hz, 1 H), 9.28 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 8.71 (dd, J=8.1, 1.97 Hz, 1 H), 8.25 - 8.33 (m, 2 H), 7.84 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.67 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.5 (d, J=8 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 3.11 - 3.36 (m, 3 H), 2.96 - 3.11 (m, 1 H), 2.22 - 2.43 (m, 1 H), 1.97 - 2.21 (m, 1 H).
실시예 233
(4S)-N-(이소퀴놀린-5-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (40 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.750 g, 2.97 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.486 mL, 17.83 mmol) 및 트리포스겐 (0.882 g, 2.97 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 이소퀴놀린-5-아민 (1.286 g, 8.92 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (30 mL)과 디클로로메탄 (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 100% 디클로로메탄로 용리시켜 순수한 (4S)-N-(이소퀴놀린-5-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.315 g, 0.743 mmol, 25.00% 수율), LCMS (m/z): 423.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.21 (s, 1 H), 9.20 (s, 1 H), 8.88 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 8.37 (d, J=7.23 Hz, 1 H), 7.94 (d, J=6.14 Hz, 1 H), 7.88 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.75 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.61 - 7.69 (m, 2 H), 7.47 (d, J=5.92 Hz, 1 H), 7.31 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.08 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.77 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.21 - 3.36 (m, 3 H), 3.06 (dd, J=12.06, 3.07 Hz, 1 H), 2.59 (s, 3 H), 2.32 - 2.43 (m, 1 H), 2.17 (dt, J=14.03, 7.02 Hz, 1 H
실시예 234
(4S)-7-(2,2-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (350 mg, 2.82 mmol)의 용액에 디페닐 포스포르아지데이트 (1164 mg, 4.23 mmol) 및 DIPEA (2.463 mL, 14.10 mmol)를 0℃에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 질소 하에 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 2,2-디메틸-4-((4S)-2, 3, 4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린 (542 mg, 1.974 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 용매를 감압 하에 제거하였다. 조 물질을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (10 mL), 포화 염수 용액으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 10% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 수집된 분획을 감압 하에 농축시켜 (4S)-7-(2,2-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (120 mg, 0.303 mmol, 10.74% 수율), LCMS (m/z): 396.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.40 (s, 1 H), 9.56 (d, J=1.2 Hz, 1 H), 8.26 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.06 - 8.22 (m, 1 H), 7.38 (d, J=8.8 Hz, 1 H), 6.28 (d, J=8.5 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J=5.7, 3.3 Hz, 1 H), 3.90 (t, J=5 Hz, 2 H), 3.47 (s, 2 H), 3.41 (t, J=5 Hz, 2 H), 3.04 - 3.31 (m, 3 H), 2.92 (dd, J=11.9, 3.18 Hz, 1 H), 2.14 - 2.35 (m, 1 H), 1.89 - 2.12 (m, 1 H), 1.36 (s, 6 H).
실시예 235
(4S)-7-(6-메틸피리다진-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (15 mL) 및 물 (2 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.263 mmol), 3-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리다진 (306 mg, 1.389 mmol) 및 K3PO4 (536 mg, 2.53 mmol)의 탈기된 용액에 25℃에서 Pd(OAc)2 (14.18 mg, 0.063 mmol) 및 x-phos (60.2 mg, 0.126 mmol)를 첨가하였다. 이어서, 반응 혼합물을 100℃에서 8시간 동안 교반한 다음, 반응 혼합물을 실온으로 냉각되도록 하고, 디옥산 진공 하에 증발시켰다. 이어서, 이를 물로 희석하고, DCM (3x50 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 함수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 용매를 감압 하에 제거하여 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: EtOAc 중 2-3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리다진-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (260 mg, 0.689 mmol, 54.6% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 375.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.69 (s, 1H), 9.62 - 9.53 (s, 2 H), 8.38 - 8.29 (m, 3 H), 7.71 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.59 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 5.72 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.35 - 3.15 (m, 2 H), 3.12 - 3.00 (m, 2 H), 2.90 (s, 3 H), 2.48 - 2.25 (m, 1 H), 2.11 (dt, J=14.03, 6.80 Hz, 1 H).
실시예 236
(9S)-N-(피리딘-3-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (70 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리의 피크-II, (중간체 SFC 분리로부터의 피크-II, 0.700 g, 2.145 mmol)의 용액에 DMAP (0.786 g, 6.43 mmol)를 첨가하고, 페닐 피리딘-3-일카르바메이트 (1.378 g, 6.43 mmol)를 65℃에서 36시간 동안 교반한 후, 반응물을 실온으로 냉각시키고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물 (20 mL)과 EtOAc (75 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 80% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% EtOAc로 용리시켜 순수한 (9S)-N-(피리딘-3-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.355 g, 0.794 mmol, 37.0% 수율), LCMS (m/z): 447.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.92 (s, 1 H), 8.62 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.32 (dd, J=4.71, 1.43 Hz, 1 H), 8.08 - 8.21 (m, 1 H), 7.33 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.20 - 7.29 (m, 1 H), 6.40 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 4.90 (br s, 1 H), 4.00 - 4.21 (m, 2 H), 3.31 (dd, J=13.48, 1.86 Hz, 1 H), 3.17 - 3.26 (m, 2 H), 2.88 - 3.03 (m, 3 H), 2.36 - 2.49 (m, 1 H), 2.19 - 2.25 (m, 1 H), 2.10 - 2.16 (m, 1 H), 1.92 - 1.99 (m, 1 H), 1.86 (tdd, J=13.84, 13.84, 5.10, 2.96 Hz, 1 H), 1.65 - 1.76 (m, 1 H), 1.46 - 1.58 (m, 2 H), 1.29 - 1.38 (m, 1 H)
실시예 237
(4S)-N-(6-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
실온에서 질소 하에 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (40 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.750 g, 2.97 mmol)의 용액에 트리에틸아민 (2.486 mL, 17.83 mmol) 및 트리포스겐 (0.882 g, 2.97 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 30분 동안 교반한 후, 6- 플루오로벤조[d]티아졸-2-아민 (1.500 g, 8.92 mmol)을 실온에서 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반한 다음, 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하였다. 생성된 잔류물을 물 (30 mL)과 EtOAc (100 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 100% 디클로로메탄으로 용리시켜 순수한 (4S)-N-(6-플루오로벤조[d]티아졸-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (0.313 g, 0.700 mmol, 23.53% 수율), LCMS (m/z): 447.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 14.74 (s, 1 H), 9.06 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 8.43 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.75 (dd, J=8.88, 4.71 Hz, 1 H), 7.66 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.41 - 7.52 (m, 3 H), 7.14 (td, J=8.99, 2.63 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.17 - 3.33 (m, 3 H), 3.04 (dd, J=12.17, 3.18 Hz, 1 H), 2.68 (s, 3 H), 2.32 - 2.43 (m, 1 H), 2.12 (dt, J=14.20, 7.04 Hz, 1 H)
실시예 238
(4S)-7-(2-메틸티아졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
플루오린화세슘 (767 mg, 5.05 mmol)을 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (800 mg, 2.53 mmol), 2-메틸-5-(트리부틸스탄닐)티아졸 (1177 mg, 3.03 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 1,4-디옥산 (40 mL) 중 트리-t-부틸 포스핀 (511 mg, 2.53 mmol)을 15분 동안 탈기하고, 아세트산팔라듐(II) (11.34 mg, 0.051 mmol), 및 아이오딘화구리(I) (19.24 mg, 0.101 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 추가로 탈기하고, 100℃에서 15시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 EtOAc (125 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하였다. 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 EtOAc 중 5% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-메틸티아졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (230 mg, 0.600 mmol, 23.77% 수율), LCMS (m/z): 380.18 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.30 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.43 (s, 1H), 8.36-8.35 (dd, J =2.4, 1.6 Hz, 1H), 8.30 (d, J = 2.8 Hz 1H), 7.53 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.18 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.68 (dd, J = 6, 3.2 Hz, 1H), 3.28-3.22 (m, 2H), 3.20-3.13 (m, 1H), 3.02-2.98 (dd, J = 12.4, 3.6 Hz, 1H), 2.78 (s, 3H), 2.35-2.32 (m, 1H), 2.10-2.04 (m,1H).
실시예 239
(9S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (30 mL) 중 (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (SFC 분리로부터의 피크-I, 450 mg, 1.379 mmol)의 용액에 DMAP (505 mg, 4.14 mmol) 및 페닐 (5-플루오로피리딘-2-일)카르바메이트 (961 mg, 4.14 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2x75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 염수 용액으로 포화시키고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 회백색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트; Rf 값: 0.4; UV 활성). 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 25% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(5-플루오로피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (140 mg, 0.296 mmol, 21.46% 수율), LCMS (m/z): 465.21 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 1.15 - 1.43 (m, 1 H) 1.43 - 1.68 (m, 2 H) 1.68 - 1.89 (m, 3 H) 2.04 - 2.28 (m, 2 H) 2.42 (dtd, J=11.67, 7.92, 7.92, 4.06 Hz, 1 H) 2.86 - 3.09 (m, 3 H) 3.10 - 3.36 (m, 3 H) 4.23 - 4.47 (m, 2 H) 4.87 (br s, 1 H) 6.39 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.3 (d, J=8.8 Hz, 1 H) 7.34 - 7.59 (m, 1 H) 8.09 (d, J=2.8 Hz, 1 H) 8.20 (dd, J=9.21, 4.17 Hz, 1 H) 13.65 (s, 1 H).
실시예 240
메틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜리네이트의 합성
인산삼칼륨 (2.68 g, 12.63 mmol)을 1,4-디옥산 (60 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (2 g, 6.31 mmol), 메틸 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리네이트 (1.994 g, 7.58 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하였다. Pd2(dba)3 (0.289 g, 0.316 mmol) 및 X-phos (0.301 g, 0.631 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 100℃에서 18시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (50 mL)과 EtOAc (200 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 진공 하에 농축시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 EtOAc 중 10% MeOH로 용리시켜 정제하여 메틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜리네이트를 회백색 고체로서 수득하였다 (780 mg, 1.806 mmol, 28.6% 수율), LCMS (m/z): 418.23 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.63 (s, 1H), 9.54 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.91-8.89 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 8.68-8.68 (dd, J = 2, 0.4 Hz, 1H), 8.34-8.29 (m, 3H), 7.69 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.59 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 4.05 (s, 3H), 3.34-3.16 (m, 3H), 3.07-3.03 (dd, J = 12.4, 3.2 Hz, 1H), 2.41-2.33 (m, 1H), 2.15-2.07 (m, 1H).
실시예 241
(4S)-7-(2-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (670 mg, 3.16 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (1.667 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), (2-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)보론산 (328 mg, 1.894 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (145 mg, 0.158 mmol), 및 X-phos (75 mg, 0.158 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 마이크로웨이브 하에 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 EtOAc 중 5-10% MeOH로 용리시켜 정제하여 (4S)-7-(2-(디플루오로메틸)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (112 mg, 0.273 mmol, 17.27% 수율), LCMS (m/z): 410.17 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.63 (s, 1H), 9.54 (s, 1H), 8.79 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.32 (d, J = 3.2 Hz, 2H), 8.06 (dd, J = 5.2, 0.8 Hz, 1H), 7.68 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8 Hz, 1H), 6.90-6.62 (t, J = 55.2 Hz, 1H), 5.73-5.71 (dd, J = 5.6,2.8 Hz, 1H), 3.33 - 3.16 (m, 3H), 3.06-3.03 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.41-2.33 (m, 1H), 2.14-2.07 (m, 1H).
실시예 242
(9S)-N-(피라진-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (50 mL), 디페닐포스포릴 아지드 (1.996 g, 7.25 mmol) 및 DIPEA (4.22 mL, 24.17 mmol) 중 피라진-2-카르복실산 (0.6 g, 4.83 mmol)의 현탁액을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 2시간 동안 28℃에서 교반하고, (9S)-2-(3-(트리플루오로메틸)피페리딘-1-일)-7,8,9,10-테트라히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신 (중간체 SFC 분리로부터의 피크-I 1.105 g, 3.38 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (50mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 X 75 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물로 세척하고, 염수 용액으로 포화시키고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 물질을 회백색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트; Rf 값: 0.3; UV 활성). 조 생성물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (9S)-N-(피라진-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)-피페리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.330 g, 0.728 mmol, 15.05% 수율), LCMS (m/z): 448.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 1.31 - 1.34 (m, 1H)1.45 - 1.67 (m, 2 H) 1.68 - 1.79 (m, 1 H) 1.82 - 1.99 (m, 2 H) 2.05 - 2.18 (m, 2 H) 2.42 (dddt, J=15.65, 11.78, 8.03, 3.97, 3.97 Hz, 1 H) 2.86 - 3.09 (m, 3 H) 3.11 - 3.35 (m, 3 H) 4.21 - 4.39 (m, 2 H) 4.89 (br s, 1 H) 6.42 (d, J=8.55 Hz, 1 H) 7.32 (d, J=8.4 Hz, 1 H) 8.14 - 8.20 (m, 1 H) 8.24 (d, J=2.8 Hz, 1 H) 9.53 (d, J=1.53 Hz, 1 H) 13.81 (s, 1 H)
실시예 243
(4S)-7-(5-플루오로-2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (20 mL), 및 물 (3.33 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 5-플루오로-2-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일) 피리딘 (674 mg, 2.84 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, Pd2(dba)3 (173 mg, 0.189 mmol), 및 X-phos (90 mg, 0.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 100℃에서 마이크로웨이브 중 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf = 0.3; UV 활성). 조 생성물을 메탄올 및 에테르로 세척하여 (4S)-7-(5-플루오로-2-메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (317 mg, 0.788 mmol, 41.6% 수율), LCMS (m/z): 392.20 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.54 (s, 1H), 9.57 (d, J = 1.6 Hz, 1H), 8.45 (d, J = 3.2 Hz, 1H), 8.31 (d, J = 2.8 Hz, 1H), 8.27-8.26 (t, J = 1.6 Hz, 1H), 8.09 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 7.66-7.62 (t, J = 8 Hz, 2H), 5.73-5.71 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1H), 3.34 - 3.17 (m, 3H), 3.06-3.02 (dd, J = 12.0, 3.2 Hz, 1H), 2.71 (s, 3H), 2.40-2.33 (m,1H), 2.13-2.06 (m, 1H).
실시예 244
메틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜리네이트의 합성:
NaBH4 (136 mg, 3.59 mmol)를 0℃에서 THF (100 mL) 중 메틸 4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피콜리네이트 (600 mg, 1.437 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 28℃에서 8시간 동안 교반하였다. 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 잔류물을 에틸 아세테이트 (40 mL)와 물 (20 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고; 여과물을 진공 하에 증발시켜 조 물질을 수득하였다. 조 물질을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-(히드록시메틸)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4 메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (135 mg, 0.345 mmol, 24.00%), LCMS (m/z): 390.22 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.66 (s, 1H), 9.60 (s, 1H), 8.68 (d, J = 5.2 Hz, 1H), 8.33 (s, 2H), 8.19 (s, 1H) 7.74-7.72 (dd, J = 5.2, 1.6 Hz, 1H), 7.67 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 8.0 Hz, 1H), 5.73-5.70 (dd, J = 6.0, 3.6 Hz, 1H), 4.93 (s, 2H), 3.31-3.16 (m, 3H), 3.06-3.02 (dd, J = 12.4, 3.2 Hz, 1H), 2.38-2.35 (m, 1H), 2.12-2.08 (t, J = 7.6 Hz, 1H).
실시예 245
(4S)-7-(6-시아노피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (20 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (523 mg, 2.273 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액에 X-Phos (90 mg, 0.189 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30% EtOAc/석유 에테르로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(6-시아노피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (220 mg, 0.568 mmol, 30.0% 수율), LCMS (m/z): 385.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.54 (s, 1 H) 9.54 (d, J=1.32 Hz, 1 H) 9.34 (dd, J=2.30, 0.77 Hz, 1 H) 8.66 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H) 8.35 - 8.30 (m, 2 H) 7.86 (dd, J=8.11, 0.88 Hz, 1 H) 7.70 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 7.50 (d, J=8.11 Hz, 1 H) 5.71 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H) 3.35 - 3.14 (m, 3 H) 3.09 - 3.02 (m, 1 H) 2.43 - 2.32 (m, 1 H) 2.16 - 2.05 (m, 1 H).
실시예 246
(4S)-N-(5-에틸피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하는 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol), 트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol) 및 트리에틸아민 (1.989 mL, 14.27 mmol)의 용액에 5-에틸피라진-2-아민 (879 mg, 7.13 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시킨 다음, 반응 혼합물을 물에 붓고, EtOAc (3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30% EtOAc/석유 에테르로 용리시켜 순수한 (4S)-N-(5-에틸피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 수득하였다 (383 mg, 0.953 mmol, 40.1% 수율), LCMS (m/z): 402.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.65 (s, 1 H) 9.41 (d, J=1.53 Hz, 1 H) 9.11 (d, J=2.19 Hz, 1 H) 8.41 (dd, J=8.22, 2.52 Hz, 1 H) 8.22 (d, J=1.32 Hz, 1 H) 7.61 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 7.40 (d, J=8.11 Hz, 1 H) 7.32 (d, J=8.11 Hz, 1 H) 5.70 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H) 3.34 - 3.13 (m, 3 H) 3.02 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H) 2.83 (q, J=7.53 Hz, 2 H) 2.64 (s, 3H) 2.40-2.34 (m, 1 H) 2.15 - 2.03 (m, 1 H) 1.33 (t, J=7.56 Hz, 3 H).
실시예 247
(4S)-N-(6-이소프로폭시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리에틸아민 (1.326 mL, 9.51 mmol)에 이어서 트리포스겐 (470 mg, 1.585 mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (8 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반한 후, 6-이소프로폭시피라진-2-아민 (486 mg, 3.17 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2x40 mL)로 추출하고, 염수 (30 mL)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 잔류물을 플래쉬 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬), DCM 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-N-(6-이소프로폭시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (60 mg, 0.132 mmol, 8.33% 수율), (TLC: Rf: 0.4, DCM 중 5% 메탄올), LCMS (m/z): 432.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 1.24 (dd, J=13.15, 6.14 Hz, 6 H) 2.09 (dt, J=14.14, 6.96 Hz, 1 H) 2.22 - 2.45 (m, 1 H) 2.65 (s, 3 H) 3.03 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H) 3.13 - 3.38 (m, 3 H) 5.10 (dt, J=12.44, 6.17 Hz, 1 H) 5.71 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H) 7.27 - 7.46 (m, 1 H) 7.51 - 7.68 (m, 2 H) 7.73 (dd, J=5.15, 1.43 Hz, 1 H) 7.88 (s, 1 H) 8.58 (d, J=5.26 Hz, 1 H) 9.03 (s, 1 H) 13.04 (s, 1 H).
실시예 248
(4S)-7-(6-시아노-5-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg,1.579 mmol), 3-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (501 mg, 2.052 mmol) 및 K3PO4 (1.005 g, 4.74 mmol)의 탈기된 용액에 X-phos (75 mg, 0.158 mmol) 및 Pd(OAc)2 (17.72 mg, 0.079 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 70 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (10 mL)에 이어서 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트, Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 생성물을 헥산 중 55-60% 에틸 아세테이트로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(6-시아노-5-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (350 mg, 0.835 mmol, 52.9% 수율), LCMS (m/z): 399.22 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.61 (s, 1 H), 9.58 (d, J=1.5 Hz, 1 H), 9.07 (d, J=2.2 Hz, 1 H), 8.63 - 8.69 (m, 1 H), 8.33 (d, J=2.8 Hz, 1 H), 8.28 (dd, J=1.4, 2.6 Hz, 1 H), 7.69 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.52 (m, J=8.1 Hz, 1 H), 5.72 (dd, J=5.9, 3.07 Hz, 1 H), 3.13 - 3.36 (m, 3 H), 3.05 (dd, J=12.28, 3.3 Hz, 1 H), 2.73 (S, 3 H), 2.25 - 2.44 (m, 1 H), 2.04 - 2.24 (m, 1 H).
실시예 249
(4S)-7-(2-메틸-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 및 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.263 mmol), 2-메틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-6-(트리플루오로메틸)피리딘 (471 mg, 1.642 mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 탈기된 용액에 X-phos (60.2 mg, 0.126 mmol) 및 Pd2(dba)3 (57.8 mg, 0.063 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 70 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (10 mL)에 이어서 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트, Rf = 0.4; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하고, 생성물을 헥산 중 45-50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(2-메틸-6-(트리플루오로메틸)피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (318 mg, 0.719 mmol, 56.9% 수율), LCMS (m/z): 442.24 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.63 (s, 1 H), 9.57 (d, J=1.3 Hz, 1 H), 8.22 - 8.40 (m, 2 H), 8.14 (s, 1 H), 8.11 (s, 1 H), 7.69 (d, J=8.1 Hz, 1 H), 7.53 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 5.73 (dd, J=5.9, 3.0 Hz, 1 H), 3.12 - 3.37 (m, 3 H), 2.95 - 3.12 (m, 1 H), 2.79 (S, 3 H), 2.25 - 2.46 (m, 1 H), 2.00 - 2.21 (m, 1 H).
실시예 250
(4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL), 및 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.583 mmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리플루오로메틸)피리딘 (562 mg, 2.059 mmol) 및 K3PO4 (1008 mg, 4.75 mmol)의 탈기된 용액에 X-phos (75 mg, 0.158 mmol) 및 Pd2(dba)3 (72.5 mg, 0.079 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 잔류물을 수득하였다. 조 잔류물을 물 (20 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 70 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (10 mL)에 이어서 염수 용액 (10 mL)으로 세척하였다. 유기 층을 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트, Rf-0.4; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 생성물을 헥산 중 35-40% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-N-(피리딘-3-일)-7-(6-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (400 mg, 0.924 mmol, 58.3% 수율), LCMS (m/z): 427.20 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.79 (s, 1 H), 9.16 (d, J=1.9 Hz, 1 H), 8.54 (d, J=2.4 Hz, 1 H), 8.32 (dd, J=1.2, 4.8 Hz, 1 H), 8.29 (dd, J=2, 8.4 Hz, 1 H), 7.99 - 8.19 (m, 1 H), 7.87 (d, J=8.3 Hz, 1 H), 7.69 (d, J=7.6 Hz, 1 H), 7.38 (d, J=7.9 Hz, 1 H), 7.28-7.30 (m, 1H), 5.71 (dd, J=5.8, 3.2 Hz, 1 H), 3.12 - 3.36 (m, 3 H), 2.94 - 3.12 (m, 1 H), 2.25 - 2.43 (m, 1 H), 2.00 - 2.23 (m, 1 H).
실시예 251
(4S)-7-(2,5-디메틸피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
Pd2(dba)3 (0.087 g, 0.095 mmol) 및 X-phos (0.018 g, 0.047 mmol)를 1,4-디옥산 (5 mL):물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3 g, 0.947 mmol), 1-에틸-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.316 g, 1.421 mmol) 및 인산이수소칼륨 (0.258 g, 1.894 mmol)의 탈기된 (아르곤) 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 10분 동안 탈기하고, 15시간 동안 90℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (50 mL) 및 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH; Rf-0.35 UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 75% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(1-에틸-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.26g, 0.688 mmol, 72.6% 수율), LCMS (m/z): 377.30 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 14.15 (s, 1 H), 9.60 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.56 (s, 1 H), 8.22 - 8.30 (m, 2 H), 8.07 (s, 1 H), 7.50 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.14 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.66 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.28 (q, J=7.38 Hz, 2 H), 3.11 - 3.38 (m, 3 H), 2.97 - 3.07 (m, 1 H), 2.32 (dddd, J=14.03, 9.98, 6.03, 3.95 Hz, 1 H), 1.97 - 2.13 (m, 1 H),1.60(d, J=7.20 Hz, 3 H).
실시예 252
(4S)-7-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Pd2(dba)3 (0.087 g, 0.095 mmol) 및 X-phos (0.018 g, 0.047 mmol)를 1,4-디옥산 (5 mL):물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)3,4디히드로1,4메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3 g, 0.947 mmol), 2-(디플루오로메톡시)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (0.385 g, 1.421 mmol) 및 인산이수소칼륨 (0.258 g, 1.894 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 10분 동안 탈기하고, 15시간 동안 90℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (50 mL) 및 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하였다. 유기 층을 분리하고, 물 및 염수로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH Rf-0.4 UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 75% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(6-(디플루오로메톡시)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.210g, 0.493 mmol, 52.1% 수율), LCMS (m/z): 426.22 [M+H]+.
1H NMR (CDCl3, 400 MHz): δ 13.70 (s, 1 H), 9.54 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.81 (dd, J=2.63, 0.66 Hz, 1 H), 8.57 (dd, J=8.55, 2.63 Hz, 1 H), 8.27 - 8.32 (m, 2 H), 7.74 (s, 1 H), 7.63 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.37-7.75 (m, 1 H), 7.06 (dd, J=8.55, 0.66 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.13 - 3.33 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.17, 3.18 Hz, 1 H), 2.29 - 2.41 (m, 1 H), 2.07-2.13 (m, 1 H).
실시예 253
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(2-(((S)-테트라히드로푸란-3-일)옥시) 피리미딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (S)-2-((테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-아민 (862 mg, 4.76 mmol), 트리포스겐 (423 mg, 1.427 mmol)의 용액에 실온에서 DIPEA (2.077 mL, 11.89 mmol) 및 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반한 후, THF를 감압 하에 증발시키고, 잔류물을 물로 희석하고, DCM (2x25 mL)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 정제용 HPLC를 사용하여 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(2-(((S)-테트라히드로푸란-3-일)옥시)피리미딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (195 mg, 0.421 mmol, 17.72% 수율), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 460.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.67 (s, 1 H), 9.16 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 8.38 (d, J=5.70 Hz, 1 H), 8.34 - 8.07 (m, 1 H), 7.80 (d, J=5.70 Hz, 1 H), 7.63 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.33 - 7.23 (m, 1 H), 5.76 - 5.58 (m, 1 H), 4.03 - 3.83 (m, 4 H), 3.35 - 3.10 (m, 3 H), 2.49 - 2.24 (m, 1 H), 2.23 - 2.00 (m, 3 H).
실시예 254
(4S)-7-(2-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (5 mL) 중 tert-부틸3-메틸-4-((4S)-5-(피라진-2-일카르바모일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)피페라진-1-카르복실레이트 (397mg, 0.826 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 디에틸 에테르 중 2M HCl 용액 (2.065 mL, 4.13 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 수성 NaHCO3 용액으로 중화시키고, CH2Cl2 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수로 세척하고, Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (270 mg, 0.710 mmol, 85% 수율), (TLC: DCM 중 5% MeOH, Rf: 0.3), LCMS (m/z): 381 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.36 - 13.49 (m, 1 H), 9.39 (m, 1 H), 8.41 - 8.22 (m, 2 H), 7.44 - 7.29 (m, 1 H), 6.41 (dd, J=8.77, 2.63 Hz, 1 H), 5.44 (dd, J=5.26, 2.63 Hz, 1 H), 4.42 - 4.25 (m, 1 H), 3.93 - 3.68 (m, 1 H), 3.16 - 2.98 (m, 4 H), 2.90 - 2.73 (m, 3 H), 2.69 - 2.53 (m, 1 H), 2.37 - 2.27 (m, 2 H), 2.26 - 2.10 (m, 1 H), 1.99 - 1.79 (m, 1 H), 1.12 (dd, J=6.58, 3.95 Hz, 3 H).
실시예 255
(4S)-7-(3-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
메탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-(4-벤질-3-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (450 mg, 0.956 mmol)의 교반 용액에 아세트산 (0.027 mL, 0.478 mmol) 및 탄소 상 10% 수산화팔라듐 (67.1 mg, 0.096 mmol)을 실온에서 수소 분위기 (풍선 압력) 하에 첨가하고, 반응 혼합물을 35℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 셀라이트 패드를 통해 여과하고, 여과물을 진공 하에 증발시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(3-메틸피페라진-1-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연갈색 고체로서 수득하였다 (280 mg, 0.736 mmol, 76% 수율), (TLC: Rf: DCM 중 20% MeOH, 0.4), LCMS (m/z): 381.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.43 (s, 1 H), 9.55 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.24 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.09 - 8.20 (m, 2 H), 7.36 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.30 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.62 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 4.20 (d, J=12.06 Hz, 1 H), 3.95 (d, J=11.84 Hz, 1 H), 3.08 - 2.87 (m, 4 H) 3.25 - 3.08 (m, 4 H), 2.57 (ddd, J=12.33, 10.25, 2.19 Hz, 1 H), 2.27 (dddd, J=13.92, 9.98, 6.14, 3.73 Hz, 1 H), 2.00 (dt, J=14.41, 7.37 Hz, 1 H), 1.21 (d, J=6.14 Hz, 3 H).
실시예 256
(9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드의 합성
디에틸 에테르 중 2.0 M 염산 (2 mL, 4.00 mmol)을 0℃에서 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 (180 mg, 0.416 mmol)에 첨가하였다. 반응 혼합물을 28℃에서 4시간 동안 교반하고, 농축시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 디에틸 에테르 (2x5 mL)로 세척하여 순수한 (9S)-N-(피리딘-2-일)-2-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-8,9-디히드로-6H-5,9-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아조신-10(7H)-카르복스아미드 히드로클로라이드를 연갈색 고체로서 수득하였다 (83mg, 0.177 mmol, 42.78% 수율), LCMS (m/z): 433.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 15.02 (br s, 1 H), 13.34 (br s, 1 H), 8.25 (br d, J=3.73 Hz, 1 H), 8.13 (br d, J=8.33 Hz, 1 H), 8.06 (d, J=8.77 Hz, 1 H), 7.75- 7.68 (m, 1 H), 7.04- 6.98 (m, 1 H), 6.15 (s, 1 H), 5.30 -5.24 (b, s, 1 H), 4.12 -3.94 (m, 2 H), 3.73 -3.59 (m, 4 H), 3.49 -3.37 (m, 2 H), 3.18-3.04 (m, 1 H), 2.45 - 2.25 (m, 3 H), 1.86 (d, J=12.50 Hz, 2 H).
실시예 257,258
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-((+)-2-(트리플루오로메틸)모르폴리노)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4] 디아제핀-5 (2H)-카르복스아미드
1,4-디옥산 (30 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (2 g, 6.31 mmol) 및 2-(트리플루오로메틸)모르폴린 (1.469 g, 9.47 mmol)의 탈기된 용액에 탄산세슘 (6.17 g, 18.94 mmol), x-phos (1.204 g, 2.53 mmol) 및 아세트산팔라듐(II) (0.284 g, 1.263 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 밀봉된 튜브 중에서 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (80 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (3x100 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: CH2Cl2 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-((+)-2-(트리플루오로메틸)모르폴리노)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4] 디아제핀-5 (2H)-카르복스아미드의 거울상이성질체 혼합물을 수득하였다. 혼합물을 키랄 정제용-SFC (조건: (셀룰로스-2 (250 X 30) mm, 55.0% (100% MeOH), 90.0g/분, 100.0bar, 42nm, 8.5분))에 의해 피크-I (가장 빠른 용리액: 320 mg, 0.736 mmol, 42% 수율) 및 피크-II (가장 느린 용리액: 305 mg, 0.701 mmol, 40.5% 수율)로서 회백색 고체로서 분리하였다, (TLC: 순수한 EtOAc, Rf:-0.21), LCMS (m/z): 436.25 [M+H]+.
가장 빠른 용리액 피크:
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.19 (s, 1 H), 9.52 (s, 1 H), 8.25 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.21 - 8.09 (m, 1 H), 7.43 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 6.35 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.64 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.21 (dd, J=11.84, 1.97 Hz, 1 H), 4.15 - 4.00 (m, 1 H), 4.00-3.77 (m, 3 H), 3.26 - 3.04 (m, 5 H), 3.04 - 2.82 (m, 1 H), 2.28 (dddd, J=13.95, 10.00, 6.19, 3.84 Hz, 1 H), 2.07 - 1.92 (m, 1 H).
가장 느린 용리액 피크:
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.20 (s, 1 H), 9.52 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.26 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.16 (dd, J=2.41, 1.53 Hz, 1 H), 7.43 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.35 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.21 (d, J=12.06 Hz, 1 H), 4.08 (ddd, J=10.69, 6.19, 2.85 Hz, 1 H), 4.00 - 3.92 (m, 2 H), 3.84 (td, J=11.56, 2.96 Hz, 1 H), 3.26 - 3.07 (m, 5 H), 3.07 - 2.82 (m, 1 H), 2.43 - 2.24 (m, 1 H), 2.21 - 1.95 (m, 1 H).
실시예 259
((R)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 히드로클로라이드의 합성
디옥산 중 1.0 M 염산 (1.6 mL)을 0℃에서 메탄올 (5 mL) 중 (R)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1, 4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 (0.21 g, 0.544 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 디에틸 에테르 (3x5 mL)로 연화처리하여 순수한 ((R)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4디히드로1,4메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 히드로클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다 (105 mg, 0.253 mmol, 45% 수율), LCMS (m/z): 380.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.86 (br d, J =5.92 Hz, 1 H), 8.41 (br s, 1 H), 8.28 (br s, 1 H), 7.82 - 8.07 (m, 2 H), 4.64 (br s, 1 H), 3.23 - 4.11 (m, 9 H), 2.99 - 3.14 (m, 1 H), 2.53 - 2.87 (m, 4 H), 2.19 - 2.43 (m, 2 H), 0.89 - 1.15 (m, 3 H)
실시예 260
(4S)-7-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (9 mL) 및 물 (1 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.267 mmol), 인산칼륨 (537 mg, 2.53 mmol) 및 (1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)보론산 (291 mg, 1.900 mmol)의 탈기된 용액에 X-Phos (60.4 mg, 0.127 mmol) 및 Pd(OAc)2 (14.22 mg, 0.063 mmol)를 실온에서 첨가하고, 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 03% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (150 mg, 0.383 mmol, 30.2% 수율), (TLC: Rf 0.4, 10% MeOH/DCM), LCMS (m/z): 389.22 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm12.92 (s, 1 H), 8.57 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.06 - 8.32 (m, 2 H), 7.62 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.48 (d, J=7.02 Hz, 1 H), 7.25 - 7.32 (m, 2 H), 6.95 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 6.63 (dd, J=7.02, 1.97 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.62 (s, 3H), 3.19-3.39 (m, 2 H), 3.15 (d, J=12.06 Hz, 1 H), 2.84 - 3.09 (m, 1 H), 2.19-2.39 (m, 1 H), 2.05-2.19 (m, 1 H).
실시예 261
((S)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 히드로클로라이드의 합성
디옥산 중 1.0 M 염산 (1.74 mL)을 0℃에서 메탄올(5 mL) 중 (S)-2-메틸모르폴리노)(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 (0.22 g, 0.580 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 28℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 디에틸 에테르 (3x5 mL)로 연화처리하여 순수한 (S)-2-메틸모르폴리노)((4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-일)메타논 히드로클로라이드를 황색 고체로서 수득하였다 (110 mg, 0.265 mmol, 45% 수율), LCMS (m/z): 380.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 8.86 (d, J = 6.36 Hz, 1 H), 8.38 - 8.45 (m, 1 H), 8.24 - 8.34 (m, 1 H), 7.86 - 7.99 (m, 2 H), 4.57 - 4.64 (m, 1 H), 4.07 (br d, J=10.30 Hz, 1 H), 3.35 - 3.85 (m, 10 H), 3.07 (br t, J=12.06 Hz, 1 H), 2.81 (s, 4 H), 2.39 (s, 2H), 0.96 - 1.17 (m,3 H).
실시예 262
e-LNB 번호: N33406-70-A2, GSK3397559A
(4S)-N-7-비스(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.8 g, 3.17 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (0.565 g, 1.902 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, 2-메틸피리딘-4-아민 (0.686 g, 6.34 mmol) 및 DIPEA (1.661 mL, 9.51 mmol)를 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. THF를 감압 하에 증발시키고, 물 (15 ml)로 희석하고, DCM (2x 20 ml)으로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 감압 하에 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피에 의해 정제하여 (4S)-N-7-비스(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (120 mg, 0.31 mmol, 22%), (TLC: EtOAc 중 10% MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 387.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.15 (s, 1 H), 8.68 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.36 (d, J=5.48 Hz, 1 H), 7.70 - 7.56 (m, 1 H), 7.56 - 7.47 (m, 1 H), 7.34 - 7.42 (m, 2 H), 7.31 - 7.25 (m, 2 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.20 - 3.11 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.63 (s, 3 H), 2.52 (s, 3 H), 2.43-2.25(m, 1 H), 2.15-2.03(m, 1 H).
실시예 263
(4S)-7-(4,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (9 mL) 및 물 (1 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.267 mmol), 2,4-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (591 mg, 2.53 mmol) 및 Cs2CO3 (1238 mg, 3.80 mmol)의 탈기된 용액에 Pd(OAc)2 (14.22 mg, 0.063 mmol) 및 X-Phos (60.4 mg, 0.127 mmol)를 실온에서 첨가하고, 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 유기 용매를 회전 증발에 의해 제거하고, 물 (50 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (50 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(4,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (115 mg, 0.295 mmol, 23.30% 수율), (TLC: Rf: 0.4, DCM 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 387.25 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.07 (br s, 1 H), 8.51 (s, 1 H), 8.24 (br d, J=4.17 Hz, 1 H), 8.18-7.97 (m, 1 H), 7.61 (br d, J=7.67 Hz, 1 H), 7.34-7.16 (m, 2 H), 7.13 (m, 1 H), 5.68 (br d, J=2.19 Hz, 1 H), 3.38-3.11 (m, 3 H), 3.11-2.89 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.36 (s, 4 H) 2.30-2.03 (m, 1 H), 1.36-1.12 - (m, 1 H).
실시예 264
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-네오펜틸-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노 벤조[b][1,4]디아제핀 (250 mg, 0.991 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (176 mg, 0.594 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, DIPEA (0.519 mL, 2.97 mmol) 및 2,2-디메틸프로판-1-아민 (130 mg, 1.486 mmol)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 가온하고, 물 (60 mL)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (3x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 (60 mL)로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 물질을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-네오펜틸-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (163 mg, 0.441 mmol, 44.5% 수율), (TLC: Rf: 0.4, DCM 중 10% MeOH), LCMS (m/z): 366.29 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.45 (br s, 1 H), 8.88 (s, 1 H), 7.93 (br d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.54 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.34-7.11 (m, 2 H), 5.77-5.51 (m, 1 H), 3.33-3.14 (m, 5 H), 2.95 (brdd, J=11.84, 3.07 Hz, 1 H), 2.61 (s, 3 H), 2.35-2.18 (m, 1 H), 2.18-1.89 (m, 1 H), 0.90 (s, 9 H).
실시예 265
(4S)-N-(6-메틸피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
질소 하에 실온에서 30분 동안 교반하는 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.378 mmol), 트리포스겐 (706 mg, 2.378 mmol) 및 트리에틸아민 (1.989 mL, 14.27 mmol)의 용액에 6-메틸피라진-2-아민 (778 mg, 7.13 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을에서 물에 붓고, EtOAc (3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.1; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 30% EtOAc / 석유 에테르로 용리시키면서 정제하여 순수한 (4S)-N-(6-메틸피라진-2-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (151 mg, 0.389 mmol, 16.38% 수율). LCMS (m/z): 388.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.79 (s, 1 H) 9.33 (s, 1 H) 9.10 (d, J=2.41 Hz, 1 H) 8.55 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H) 8.19 (s, 1 H) 7.62 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 7.43 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 7.31 (d, J=8.11 Hz, 1 H) 5.70 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H) 3.36 - 3.14 (m, 3 H) 3.02 (dd, J=11.95, 3.40 Hz, 1 H) 2.65 (s, 3 H) 2.56 (s, 3 H) 2.42-2.32 (m, 1 H) 2.18-2.01 (m, 1 H).
실시예 266
(4S)-7-(6-시클로프로필-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (20 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.894 mmol), 2-시클로프로필-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3-(트리플루오로메틸)피리딘 (mg, mmol) 및 K3PO4 (804 mg, 3.79 mmol)의 용액에 X-Phos (90 mg, 0.189 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 15 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30% EtOAc/석유 에테르로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(6-시클로프로필-5-(트리플루오로메틸)피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (380 mg, 0.813 mmol, 42.85% 수율), LCMS (m/z): 468.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.66 (s, 1 H) 9.51 (d, J=1.53 Hz, 1 H) 9.08 (d, J=1.97 Hz, 1 H) 8.58 (d, J=2.19 Hz, 1 H) 8.31 - 8.24 (m, 2 H) 7.64 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 7.38 (d, J=7.89 Hz, 1 H) 5.71 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H) 3.34 - 3.14 (m, 3 H) 3.03 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H) 2.47 - 2.30 (m, 2 H) 2.15 - 2.04 (m, 1 H) 1.33 - 1.28 (m, 2 H) 1.16 - 1.10 (m, 2 H).
실시예 267
(4S)-7-(2-시클로프로필모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
0℃에서 질소 하에 THF (10 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (550 mg, 4.43 mmol)의 용액에 디페닐 포스포르아지데이트 (2439 mg, 8.86 mmol) 및 TEA (3.09 mL, 22.16 mmol)를 첨가하고, 2시간 동안 실온에서 교반하였다. 이 반응 혼합물에 2-시클로프로필-4-((4S)-2, 3, 4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린 (888 mg, 3.10 mmol)을 첨가하고, 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2x25 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (100-200 실리카 겔, CH2Cl2 중 2% MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 화합물 (4S)-7-(2-시클로프로필모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연갈색 고체로서 수득하였다 (90 mg, 0.219 mmol, 4.95% 수율), (TLC 시스템: DCM 중 5% 메탄올. Rf 값: 0.3), LCMS (m/z): 408.33 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.32 (s, 1 H), 9.37 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 8.43 - 8.13 (m, 2 H), 7.41 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.56 (d, J=8.77 Hz, 1 H), 5.56 - 5.28 (m, 1 H), 4.13- 3.73 (m, 3 H), 3.55 (td, J=11.56, 2.52 Hz, 1 H), 3.16 - 2.63 (m, 7 H), 2.31 - 1.99 (m, 1 H), 1.85 (dt, J=13.92, 6.85 Hz, 1 H), 1.08- 0.76 (m, 1 H), 0.59 - 0.12 (m, 4 H)
실시예 268
(4S)-7-(4,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Cs2CO3 (1237 mg, 3.797mmol) 및 2,4-디메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (590 mg, 2.531mmol)을 1,4-디옥산 (9 mL) 및 물 (1 mL)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.265mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 퍼징하였다. PdOAc2 (28.3 mg, 0.126 mmol) 및 X-Phos (120.6 mg, 0.253 mmol)를 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-7-(4,6-디메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (135 mg, 0.332 mmol, 52.5% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 388.28 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.37 (s, 1 H), 9.45 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 8.54 (s, 1 H), 8.22 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.16 - 8.20 (m, 1 H), 7.62 (d, J=7.67 Hz, 1 H), 7.12 (s, 1 H), 7.07 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.71 (dd, J=5.81, 2.96 Hz, 1 H), 3.15 - 3.36 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.17, 3.40 Hz, 1 H), 2.59 (s, 3 H), 2.46 (s, 3 H), 2.28 - 2.38 (m, 1 H), 2.04 - 2.17 (m, 1 H).
실시예 269
(4S)-N-(3,3-디플루오로시클로부틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (212 mg, 0.714 mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.190mmol)의 교반 용액에 실온에서 여러 부분으로 천천히 첨가하였다. 이 반응 혼합물을 30분 동안 교반하였다. DIPEA (0.623 mL, 3.57 mmol) 및 3,3-디플루오로시클로부탄아민 (191 mg, 1.785mmol)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 16시간 동안 80℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-N-(3,3-디플루오로시클로부틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (113 mg, 0.283 mmol, 28.5% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 386.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.93 (br d, J=5.92 Hz, 1 H), 8.88 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 7.94 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.56 (d, J=7.67 Hz, 1 H), 7.31-7.22 (m, 2 H), 5.59 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 4.29 (br s, 1 H), 3.00 - 3.29 (m, 5 H), 2.95 (dd, J=11.95, 3.40 Hz, 1 H), 2.66-2.50 (m, 5 H), 2.31-2.21 (m, 1 H), 2.06 -1.98(m, 1 H)
실시예 270
(4S)-7-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (804 mg, 3.79 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (2.000 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500mg, 1.579 mmol), 및 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 (445 mg, 1.894 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (72.3 mg, 0.079 mmol), 및 X-phos (75 mg, 0.158 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 마이크로웨이브 중에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 에틸 아세테이트 (2 x 15 mL) 사이에 분배하였다. 에틸 아세테이트 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 갈색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 (100-200 메쉬) 실리카 겔을 사용하여 정제하고, EtOAc 중 2% MeOH로 용리시켜 (4S)-7-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (330 mg, 0.840 mmol, 53.2% 수율), LCMS (m/z): 390.26 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.78 (s, 1 H), 9.61 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.57 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.33 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.22 (dd, J=2.52, 1.64 Hz, 1 H), 7.88 (dd, J=9.54, 2.74 Hz, 1 H), 7.57 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.18 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 6.69 (d, J=9.43 Hz, 1 H), 5.69 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.78 (s, 3 H), 3.12 - 3.30 (m, 3 H), 3.01 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.28 - 2.41 (m, 1 H), 2.00 - 2.13 (m, 1 H)
실시예 271
(4S)-7-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (672 mg, 3.17 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10 mL), 및 물 (2.000 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.583 mmol), 및 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2(1H)-온 (447 mg, 1.900 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 탈기한 다음, Pd2(dba)3 (72.5 mg, 0.079 mmol), 및 X-phos (75 mg, 0.158 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 마이크로웨이브 중에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (10 mL)과 EtOAc (25 mL) 사이에 분배하였다. EtOAc 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: EtOAc 중 10% MeOH Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬)을 사용하여 정제하고, 생성물을 에틸 아세테이트 중 2% MeOH로 용리시켜 (4S)-7-(1-메틸-6-옥소-1,6-디히드로피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (272 mg, 0.679 mmol, 42.9% 수율), LCMS (m/z): 389.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.93 (s, 1 H), 8.61 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.33 (dd, J = 4.71, 1.43 Hz, 1 H), 8.05 - 8.20 (m, 1 H), 7.74 - 7.87 (m, 2 H), 7.57 (d, J = 7.89 Hz, 1 H), 7.22 - 7.33 (m, 1 H), 7.09 (d, J = 7.89 Hz, 1 H), 6.65 - 6.82 (m, 1 H), 5.67 (dd, J = 5.81, 3.18 Hz, 1H), 3.64 (s, 3 H), 3.08 - 3.28 (m, 3 H), 3.00 (dd, J = 12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.33 (qd, J = 9.98, 4.49 Hz, 1 H), 2.00 - 2.12 (m, 1 H).
실시예 272
(4S)-N-(1-메틸-1H-1,2,3-트리아졸-4-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Pd2(dba)3 (0.043 g, 0.047 mmol) 및 X-phos (0.036 g, 0.095 mmol)를 1,4-디옥산 (5 mL): 물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3g, 0.947 mmol), 3-플루오로-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (0.352 g, 1.421 mmol) 및 인산이수소칼륨 (0.258 g, 1.894 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하고, 90℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (25 mL) 및 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 에틸 아세테이트 중 10% MeOH; UV 활성; Rf: 0.25). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 75% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(6-시아노-5-플루오로피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,-4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.105g, 0.251 mmol, 26.5% 수율), LCMS (m/z): 403.18 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.57 (s, 1H), 9.53 (d, J = 1.53 Hz, 1H), 9.11 (t, J =1.43 Hz, 1H), 8.69 (dd, J = 9.87, 1.75 Hz, 1H), 8.27 - 8.40 (m, 2H), 7.71(d, J = 8.11 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 8.11 Hz, 1H), 5.71 (dd, J = 5.81, 3.18 Hz, 1H), 3.01 - 3.37 (m, 4H), 2.32 - 2.45 (m, 1H), 2.01 - 2.21 (m, 1H).
실시예 273
(4S)-7-(6-시아노피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노-피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (20 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (600 mg, 1.900 mmol), 5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피콜리노니트릴 (525 mg, 2.280 mmol) 및 K3PO4 (807 mg, 3.80 mmol)의 용액에 X-phos (91 mg, 0.190 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (87 mg, 0.095 mmol)을 첨가하고, 다시 10분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 x 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30-40% EtOAc/헥산으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(6-시아노피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (399 mg, 1.033 mmol, 54.4% 수율), LCMS (m/z): 384.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.71 (s, 1 H), 9.17 (dd, J = 2.2, 0.7 Hz, 1 H), 8.54 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 8.33 (dd, J = 4.7, 1.4 Hz, 1 H), 8.23 (dd, J = 8.0, 2.3 Hz, 1 H), 8.07 - 8.12 (m, 1 H), 7.87 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.69 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 7.38 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.26 - 7.31 (m, 1 H), 5.71 (dd, J = 5.9, 2.8 Hz, 1 H), 3.12 - 3.34 (m, 3 H), 3.01 - 3.09 (m, 1 H), 2.36 (m, 1 H), 2.1 (m, 1 H).
실시예 274
e-LNB 번호: N33789-17-A2, GSK3400265A
(4S)-7-((S)-3-메틸모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Cs2CO3 (3.10 g, 9.50 mmol), (S)-3-메틸모르폴린 (0.641 g, 6.33 mmol)을 1,4-디옥산 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (1.0 g, 3.17 mmol)의 용액에 밀봉된 튜브 중에서 첨가하면서 25분 동안 아르곤으로 퍼징하였다. 후속적으로 PdOAc2 (0.142 g, 0.633 mmol) 및 X-phos (0.604 g, 1.267 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 100℃에서 4시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 이를 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-7-((S)-3-메틸모르폴리노)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (140 mg, 0.366 mmol, 11.56% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH, Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 381.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.42 (s, 1 H), 8.50 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.31 (d, J=4.60 Hz, 1 H), 8.16 (br d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.39 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.31-7.26 (m, 1 H), 6.24 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.60 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 4.06 (brdd, J=11.18, 3.51 Hz, 2 H), 3.85-3.79 (m, 2 H), 3.69-3.51 (m, 2 H), 3.37-3.04 (m, 4 H), 2.91 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.31-2.18 (m, 1 H), 2.07-1.97 (m, 1 H), 1.27 (d, J=6.80 Hz, 3 H)
실시예 275
(4S)-N-(4-메틸피리딘-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL, 밀봉된 튜브 중) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (282 mg, 0.951 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반한 다음, 트리에틸아민 (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 4-메틸피리딘-2-아민 (257 mg, 2.378 mmol)을 첨가하고, 65℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. THF를 증류시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 600 mg을 60% LCMS 순도로 수득하였다. 조 화합물을 정제용 HPLC (조건: MP-A:10mM 중탄산암모늄 (수성) MP-B: 아세토니트릴 칼럼: 엑스-브리지 (250x30)mm 10μ 방법: 0/30,10/50,10.1/30,15/30 유량: 30 ml/분 용해도: THF+ACN+MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(4-메틸피리딘-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (210 mg, 0.541 mmol, 34.1% 수율), (TLC 용리액: EtOAc 중 10%MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 387.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm: 13.48 (s, 1 H), 8.61 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.25-8.17 (m, 2 H), 8.07 (s, 1 H), 7.71 (d, J=3.95 Hz, 1 H), 7.61 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.48 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 6.85 (d, J=4.82 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=5.70, 3.51 Hz, 1 H), 3.33-3.14 (m, 3 H), 3.14-2.89 (m, 1 H), 2.74 (s, 3 H), 2.41-2.32 (m, 4 H), 2.13-2.00 (m, 1 H).
실시예 276
(4S)-N-(6-이소프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (5 mL) 중 6-이소프로필피라진-2-아민 (141 mg, 1.030 mmol)의 교반 용액에, 트리에틸아민 (0.663 mL, 4.76 mmol) 및 트리포스겐 (235 mg, 0.793 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (200 mg, 0.793 mmol)을 첨가하고, 80℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-N-(6-이소프로필피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (60 mg, 0.144 mmol, 18.15% 수율), (TLC: 용리액: DCM 중 5% 메탄올, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 416.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.34 (s, 1 H), 9.37 (s, 1 H), 8.70 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.21 (s, 1 H), 8.00 (br d, J=3.73 Hz, 1 H), 7.60 - 7.69 (m, 2 H), 7.47 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 5.73 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.14 - 3.37 (m, 3 H), 2.98 - 3.09 (m, 2 H), 2.66 (s, 3 H), 2.27 - 2.46 (m, 1 H), 2.09 (dt, J=14.03, 7.23 Hz, 1 H), 1.33 (dd, J=7.02, 1.10 Hz, 6 H).
실시예 277
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (중간체 SFC 분리로부터의 피크 1)(440 mg, 1.475 mmol)의 용액에 0℃에서 NaH (295 mg, 7.37 mmol)를 첨가하였다. 30분 후, 3-(피리딘-2-일)-2H-피리도[1,2-a][1,3,5]트리아진-2,4(3H)-디온 (531 mg, 2.212 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: 90%Hex/EtOAc)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (266.8 mg, 0.631 mmol, 42.8% 수율), (TLC 시스템: Rf : 0.4 :EtOAc), LCMS (m/z): 419.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.33 (s, 1 H), 8.19 (d, J=3.73 Hz, 1 H), 8.15 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.66 - 7.60 (m, 1 H), 7.32 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.91 (dd, J=6.58, 5.04 Hz, 1 H), 5.96 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 5.58 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.01 - 3.95 (m, 1 H), 3.86 (dd, J=11.29, 7.34 Hz, 1 H), 3.66 (td, J=8.99, 4.60 Hz, 1 H), 3.60 - 3.53 (m, 1 H), 3.23 - 3.05 (m, 4 H), 2.89 (dd, J=11.84, 3.51 Hz, 1 H), 2.37 - 2.18 (m, 3 H), 1.98 (dt, J=13.81, 6.91 Hz, 1 H).
실시예 278
(4S)-7-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (25 mL) 및 물 (4 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.400 g, 1.263 mmol), 1-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸 (0.697 g, 2.53 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (0.803 g, 3.79 mmol)의 현탁액을 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기한 다음, X-phos (0.0601 g,0.126 mmol) 및 Pd(dba)2 (0.046 g, 0.051 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. TLC에 의해 나타난 바와 같이 반응이 완결된 후, 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (15 mL)로 희석하고, EtOAc (2X 25 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 100% 에틸 아세테이트, Rf 값: 0.3, UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 생성물을 석유 에테르 중 40% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(1-메틸-3-(트리플루오로메틸)-1H-피라졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.208 g, 0.482 mmol, 38.2% 수율), LCMS (m/z): 431.23 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.08 (s, 1 H), 9.51 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 8.29 (d, J = 2.6 Hz, 1 H), 8.25 - 8.22 (m, 1 H), 7.65 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.21 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.05 (s, 1 H), 5.71 (dd, J = 5.8, 3.2 Hz, 1 H), 4.24 (s, 3 H), 3.33 - 3.15 (m, 3 H), 3.04 (dd, J = 12.2, 3.2 Hz, 1 H), 2.42 - 2.30 (m, 1 H), 2.10 (dt, J = 14.1, 6.9 Hz, 1 H).
실시예 279
(4S)-7-시아노-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
X-phos (0.018 g, 0.047 mmol) 및 (1,3-비스(2,6-디-이소프로필페닐)-4,5-디히드로이미다졸-2-일리덴)클로로) (3-페닐알릴)팔라듐(2) (0.031 g, 0.047 mmol)을 1,4-디옥산 (5 mL): 물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3 b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3 g, 0.947 mmol) 및 페로시안화칼륨 (0.174 g, 0.474 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하고, 100℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시키고, 셀라이트 층을 통해 여과하였다. 여과물을 물 (25 mL) 및 에틸 아세테이트 (100 mL)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: 100% 에틸 아세테이트; UV 활성; Rf~0.3). 조 혼합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-시아노-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.13 g, 0.415 mmol, 43.8% 수율), LCMS (m/z): 308.19 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 12.48 (br s, 1H), 9.45 (s, 1H), 8.32 (s, 2H), 7.62 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 7.37 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 5.68 (dd, J = 5.81, 3.18 Hz, 1H), 3.24 (t, J = 7.56 Hz, 2H), 2.99 - 3.14 (m, 2H), 2.36 (td, J = 14.09, 6.03 Hz, 1 H), 2.01 - 2.16 (m, 1H).
실시예 280
(4S)-7-(1-이소프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (15 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (500 mg, 1.579 mmol), 1-이소프로필-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (447 mg, 1.894 mmol) 및 K3PO4 (670 mg, 3.16 mmol)의 용액에 X-phos (75 mg, 0.158 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (72.3 mg, 0.079 mmol)를 첨가하고, 다시 5분 동안 아르곤으로 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3 X 20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.2; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30-40% EtOAc/헥산으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(1-이소프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5 (2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (418 mg, 1.070 mmol, 67.8% 수율), LCMS (m/z): 391.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.14 (s, 1 H), 9.62 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 8.64 (s, 1 H), 8.26 - 8.32 (m, 2 H), 8.02 (s, 1 H), 7.50 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.16 (d, J = 8.1 Hz, 1 H), 5.67 (dd, J = 5.8, 3.2 Hz, 1 H), 4.61 (m, 1 H), 3.12 - 3.31 (m, 3 H), 2.99 (dd, J = 11.9, 3.2 Hz, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 2.06 (m, 1 H), 1.63 (d, J = 6.8 Hz, 6 H).
실시예 281
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로푸란-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.189 mmol)의 용액에, 트리포스겐 (176 mg, 0.594 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 30분 후, DIPEA (1.038 mL, 5.94 mmol), 테트라히드로푸란-3-아민 (155 mg, 1.783 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온에 이르도록 한 다음, 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x 30 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 생성물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로푸란-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (137.1 mg, 0.371 mmol, 31.2% 수율), (TLC 시스템: Rf: 0.2, 5%MeOH-DCM), LCMS (m/z): 366.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.76 (br t, J=6.80 Hz, 1 H), 8.89 (s, 1 H), 7.99 (dd, J=8.22, 2.08 Hz, 1 H), 7.54 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.30 - 7.21 (m, 2 H), 5.62 (dd, J=5.81, 2.96 Hz, 1 H), 4.56 (br dd, J=4.82, 1.97 Hz, 1 H), 4.01 - 3.75 (m, 4 H), 3.30 - 3.06 (m, 3 H), 2.99 - 2.91 (m, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.39 - 2.21 (m, 2 H), 2.07 - 1.85 (m, 2 H).
실시예 282
(4S)-7-(5-플루오로-6-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (323 mg, 1.520 mmol)을 25℃에서 1,4-디옥산 (5.0 mL) 및 물 (1.0 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (240.0 mg, 0.760 mmol) 및 3-플루오로-2-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (234 mg, 0.988 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 탈기하였다. X-Phos (36.2 mg, 0.076 mmol) 및 Pd2(dba)3 (34.8 mg, 0.038 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 추가의 10분 동안 탈기하였다. 반응물을 마이크로웨이브 중에서 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 물 및 염수 용액으로 세척하였다. 분리된 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH; UV 활성; Rf~0.3). 조 생성물을 그레이스 칼럼 상에서 DCM 중 3-5% MeOH로 용리시키면서 정제하여 순수한 (4S)-7-(5-플루오로-6-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (122.0 mg, 0.312 mmol, 41.0% 수율), LCMS (m/z): 391.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 12.91 (s, 1 H), 8.77 (t, J=1.42 Hz, 1 H), 8.62 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.32 (dd, J=4.71, 1.43 Hz, 1 H), 8.12 (ddd, J=8.33, 2.63, 1.53 Hz, 1 H), 7.73 (dd, J=9.87, 1.75 Hz, 1 H), 7.64 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.27 - 7.32 (m, 2 H), 5.70 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.14 - 3.34 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.62 (d, J=3.07 Hz, 3 H), 2.28 - 2.38 (m, 1 H), 2.05 - 2.14 (m, 1 H)
실시예 283
(4S)-7-(5-플루오로-6-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성:
인산삼칼륨 (402 mg, 1.894 mmol)을 25℃에서 1,4-디옥산 (5.0 mL) 및 물 (1.0 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300.0 mg, 0.947 mmol), 3-플루오로-2-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘 (292 mg, 1.231 mmol)의 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 탈기하였다. X-Phos (45.2 mg, 0.095 mmol) 및 Pd2(dba)3 (43.4 mg, 0.047 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 추가의 10분 동안 탈기하였다. 반응물을 마이크로웨이브 중에서 100℃에서 1시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트로 세척하였다. 여과물을 물 및 염수 용액으로 세척하였다. 분리된 유기 상을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH; UV 활성; Rf~0.3). 조 생성물을 그레이스 칼럼 상에서 클로로메탄 중 3-5% MeOH로 용리시키면서 정제하여 순수한 (4S)-7-(5-플루오로-6-메틸피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (150.0 mg, 0.365 mmol, 38.5% 수율), LCMS (m/z): 392.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.79 (s, 1 H), 9.53 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 8.88 (t, J = 1.5 Hz, 1 H), 8.38 (dd, J = 10.7, 1.97 Hz, 1 H), 8.30 - 8.34 (m, 2 H), 7.64 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.44 (d, J = 8.1Hz, 1 H), 5.70 (dd, J = 6.03, 3.2 Hz, 1 H), 3.1 - 3.3 (m, 3 H), 3.03 (dd, J = 12.1, 3.3 Hz, 1 H), 2.62 (s, 3H), 2.36 (dddd, J = 14.1, 9.9, 5.9, 4.1 Hz, 1 H), 2.04 - 2.15 (m, 1 H)
실시예 284
(4S)-7-(1-시클로프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
Pd2(dba)3 (0.087 g, 0.095 mmol) 및 X-phos (0.018 g, 0.047 mmol)를 1,4-디옥산 (5 mL):물 (1 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3 g, 0.947 mmol),1-시클로프로필-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.333 g, 1.421 mmol) 및 인산이수소칼륨 (0.258 g, 1.894 mmol)의 탈기된 용액에 첨가하고, 90℃로 15시간 동안 가열하였다. 실온으로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하였다. 여과물을 물 (25 mL) 및 에틸 아세테이트 (50 mL)로 희석하였다. 분리된 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 에틸 아세테이트 중 10% MeOH; UV 활성; Rf~0.30). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 75% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(1-시클로프로필-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도 [2,3b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.13 g, 0.332 mmol, 35.0% 수율), LCMS (m/z): 389.32 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 14.14 (s, 1H), 9.60 (d, J = 1.10 Hz, 1H), 8.61 (s, 1H), 8.29 - 8.33 (m, 2H), 8.03 (s, 1H), 7.47 - 7.58 (m, 1H), 7.13 (d, J = 8.11 Hz, 1H), 5.66 (dd, J = 6.03, 3.18 Hz, 1H), 3.73 (tt, J = 7.43, 3.75 Hz, 1H), 3.08 - 3.34 (m, 3H), 2.99 (dd, J = 11.95, 3.18 Hz, 1H), 2.32 (dddd, J =14.11, 10.00, 6.03, 4.06 Hz, 1H), 2.02 - 2.11 (m, 1H), 1.22 - 1.32 (m, 2H), 1.07 - 1.18 (m, 2H).
실시예 285
(4S)-7-((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디이소프로필에틸아민 (3.34 mL, 19.14 mmol)을 아르곤 하에 실온에서 교반하는 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (0.475g, 3.83 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 디페닐 포스포르아지데이트 (1.053 g, 3.83 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, (2S,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린 (0.735 g, 2.68 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 15% EtOAc로 용리시켜 순수한 (4S)-7-((2S,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.132 g, 0.329 mmol, 8.58% 수율), LCMS (m/z): 396.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.39 (s, 1 H), 9.56 (d, J = 1.10 Hz, 1 H), 8.26 (s, 1 H), 8.25 (s, 1 H), 7.39 (s, 1 H), 6.30 (s, 1 H), 5.63 (dd, J = 5.92, 3.29 Hz, 1 H), 4.01 (br d, J = 12.50 Hz, 2H), 3.68 - 3.89 (m, 2H), 3.16 - 3.28 (m, 1H), 3.05 - 3.15 (m, 2 H), 2.92 (dd, J = 11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.61 (t, J =11.62 Hz, 2 H), 2.27 (dddd, J = 13.89, 9.95, 6.08, 3.62 Hz, 1 H), 1.93 - 2.06 (m, 1 H), 1.33 (d, J = 6.14 Hz, 6 H)
실시예 286
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-(2-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (20 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.947 mmol), 4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-2-(트리플루오로메틸)피리미딘 (260 mg, 0.947 mmol) 및 K3PO4 (603 mg, 2.84 mmol)의 용액에 물 (3 mL)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, 이에 X-Phos (45.2 mg, 0.095 mmol) 및 Pd2(dba)3 (43.4 mg, 0.047 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 90℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 진행을 TLC에 의해 모니터링하였다. 반응물을 셀라이트를 통해 여과하고, 감압 하에 농축시켰다. 잔류물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2 x 50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨으로 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (중성 알루미나)에 의해 정제하여 생성물을 헥산 중 30% 에틸 아세테이트로 용리시켰다. 수집된 분획을 감압 하에 증발시키고, 고진공 하에 건조시켜 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-(2-(트리플루오로메틸)피리미딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (230 mg, 0.534 mmol, 56.4% 수율), LCMS (m/z): 429.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.60 (s, 1 H), 9.59 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 9.08 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.83 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.22 - 8.47 (m, 3 H), 7.75 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.72 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.15 - 3.37 (m, 3 H), 3.00 - 3.10 (m, 1 H), 2.28 - 2.46 (m, 1 H), 2.03 - 2.18 (m, 1 H)
실시예 287
(4S)-7-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (25 mL) 및 물 (4 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.350 g, 1.105 mmol), 1-메틸-3-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (0.690 g, 3.31 mmol) 및 삼염기성 인산칼륨 (0.703 g, 3.31 mmol)의 현탁액을 아르곤으로 실온에서 15분 동안 탈기하였다. 이어서, 상기 혼합물에 X-phos (53mg, 0.110 mmol) 및 Pd(dba)2 (0.032 g, 0.055 mmol)을 첨가하고, 추가의 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. TLC에 의해 나타난 바와 같이 반응이 완결된 후, 28℃로 냉각시키고, 물 (15 mL)로 희석하고, EtOAc (2x 25 mL)로 추출하였다. 유기 층을 물에 이어서 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 잔류물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5%MeOH, Rf 값: 0.3, UV 활성). 조 잔류물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 생성물을 석유 에테르 중 50% 에틸 아세테이트로 용리시켜 (4S)-7-(1-메틸-1H-피라졸-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (0.192 g, 0.527 mmol, 47.7% 수율), LCMS (m/z): 363.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.98 (s, 1 H), 9.56 (d, J = 1.32 Hz, 1 H), 8.33 - 8.27 (m, 2 H), 7.66 (d, J = 8.11 Hz, 1 H), 7.56 - 7.52 (m, 1 H), 7.46 (d, J = 2.19 Hz, 1 H), 7.42 (d, J = 2.41 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J = 5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.99 (s, 3 H),3.33 - 3.12 (m, 3 H), 2.99 (dd, J = 12.06, 3.29 Hz, 1 H),2.36 - 2.26 (m, 1 H),2.11 - 1.98 (m, 1 H)
실시예 288
(4S)-N-(5-에톡시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL, 밀봉된 튜브 중) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (100 mg, 0.396 mmol)의 교반 용액에 DMAP (145 mg, 1.189 mmol) 및 페닐 (5-에톡시피라진-2-일)카르바메이트 (308 mg, 1.189 mmol)를 실온에서 첨가하고, 90℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 잔류물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-N-(5-에톡시피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (38 mg, 0.090 mmol, 22.79% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 5% 메탄올 Rf: 0.4), LCMS (m/z): 418.36 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.50 (s, 1 H), 9.01 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 8.61 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.06 (s, 1 H), 7.98 (m, 1 H), 7.63 (m, 2 H), 7.47 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.71 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 4.40 (q, J=7.02 Hz, 2 H), 3.34-3.10 (m, 3 H), 3.01 (dd, J= 5.94, 2.96 Hz, 1H), 2.67 (s, 3H), 2.36-2.10 (m, 2 H), 1.42 (t, J=7.13 Hz, 3 H).
실시예 289
(4S)-7-((2S,6S)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디이소프로필에틸아민 (3.52 mL, 20.15 mmol)을 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (0.500g, 4.03 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 아르곤 하에 실온에서 교반하였다. 디페닐 포스포르아지데이트 (1.109 g, 4.03 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 실온에서 2시간 동안 교반하였다. 다음에, (2S, 6S)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일) 모르폴린 (0.774g, 2.82 mmol)을 반응물에 첨가하고, 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 잔류물을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 20% EtOAc로 용리시켜 순수한 (4S)-7-((2S,6S)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.321 g, 0.799 mmol, 19.82% 수율), LCMS (m/z): 396.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.41 (s, 1 H), 9.56 (d, J = 1.53 Hz, 1 H), 8.25 (d, J = 2.41 Hz, 1 H), 8.16 (dd, J = 2.41, 1.53 Hz, 1 H), 7.37 (d, J = 8.55 Hz, 1 H), 6.25 (d, J = 8.55 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J = 6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.11 - 4.31 (m, 2 H), 3.67 (dd, J = 12.50, 3.29 Hz, 2 H), 3.19 - 3.34 (m, 3 H), 3.06 - 3.18 (m, 2 H), 2.92 (dd, J = 11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.27 (dddd, J = 13.95, 9.95, 6.03, 3.84 Hz, 1 H), 1.92 - 2.07 (m, 1 H), 1.34 (d, J = 6.36 Hz, 6 H)
실시예 290
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
1,4-디옥산 (10 ml)/ 물 (2 ml), (2-메틸피리딘-4-일)보론산 (0.195 g, 1.421 mmol) 및 K3PO4 (0.402 g, 1.894 mmol) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리다진-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.3 g, 0.947 mmol)의 탈기된 용액에 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (0.087 g, 0.095 mmol) 및 x-phos (0.090 g, 0.189 mmol)를 실온에서 첨가하고, 100℃에서 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: EtOAc 중 3% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(피리다진-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (125 mg, 0.333 mmol, 35.1% 수율), (TLC 용리액: EtOAc 중 10% 메탄올, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 374.21 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm: 13.50 (s, 1 H), 9.10 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 8.93 - 9.05 (m, 1 H), 8.72 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 8.00 (dd, J=5.92, 2.85 Hz, 1 H), 7.69 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.61-7.53 (m, 1 H), 7.48 (dd, J=5.26, 1.32 Hz, 1 H), 7.41 (d, J=7.58 Hz, 1 H), 5.67 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.35-3.13 (m, 3 H), 3.05 (dd, J=12.17, 3.18 Hz, 1 H), 2.37 (dddd, J=14.17, 9.84, 5.81, 4.17 Hz, 3 H), 2.39 (m, 1 H), 2.15 (m, 1 H).
실시예 291
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(4-메틸피리미딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (15 mL, 밀봉된 튜브) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (400 mg, 1.585 mmol)의 교반 용액에 트리포스겐 (282 mg, 0.951 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. 이어서, TEA (1.105 mL, 7.93 mmol) 및 4-메틸피리미딘-2-아민 (260 mg, 2.378 mmol)을 첨가하고, 65℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고; THF를 증류시키고, 물 (25 mL)과 DCM (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 500 mg을 60% LCMS 순도로 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC (MP-A: 10mM 아세트산암모늄 (수성) MP-B: 아세토니트릴 칼럼: 엑스 브리지 C18 (100x19)mm 5μ 방법 - T/%B: 0/25/30,10/55,유량: 19ml/분 용해도: THF+ACN)에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(4-메틸피리미딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (226 mg, 0.582 mmol, 36.7% 수율), (TLC 용리액: EtOAc 중 10%MeOH, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 388.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm: 13.74 (s, 1 H), 8.63 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.52 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 7.90-7.83 (m, 2 H), 7.63 (m, J=8.11 Hz, 1 H), 7.47 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 6.87 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 5.78 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.32-3.10 (m, 3 H), 3.10-2.88 (m, 1 H), 2.68 (s, 3 H), 2.54 (s, 3 H), 2.51-2.23 (m, 1 H), 2.23-1.99 (m, 1 H).
실시예 292
(4S)-7-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산칼륨 (939 mg, 4.43 mmol) 및 (1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)보론산 (462 mg, 3.322 mmol)을 실온에서 1,4-디옥산:물(10 mL, 8:2)의 혼합물 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (700 mg, 2.215mmol)의 용액에 첨가하였다. 이 혼합물을 아르곤으로 30분 동안 퍼징하였다. PdOAc2 (49.62 mg, 0.221 mmol) 및 X-Phos (211.2 mg, 0.443mmol)를 반응 혼합물에 첨가한 다음, 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 3% 메탄올을 사용하여 정제하여 4S)-7-(1-메틸-2-옥소-1,2-디히드로피리딘-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 110 mg, 0.270 mmol, 28.5% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 390.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.53 (s, 1 H), 9.53 (s, 1 H), 8.34-8.28 (m, 2 H), 7.63 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.43 (t, J=7.78 Hz, 2 H), 7.20 (d, J=1.75 Hz, 1 H), 7.04 (dd, J=7.23, 1.97 Hz, 1 H), 5.70 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.62 (s, 3 H),3.33-3.14 (m, 3 H), 3.03 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.40-2.30 (m, 1 H), 2.09 (dt, J=13.92, 6.85 Hz, 1 H)
실시예 293
(4S)-7-(5-시아노-6-에톡시피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
20분 동안 아르곤으로 탈기된 1,4-디옥산 (15 mL), 물 (3 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (400 mg, 1.263 mmol), 2-에톡시-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)니코티노니트릴 (519 mg, 1.894 mmol) 및 K3PO4 (536 mg, 2.53 mmol)의 용액에 x-phos (60.2 mg, 0.126 mmol), 트리스(디벤질리덴아세톤)디팔라듐(0) (57.8 mg, 0.063 mmol)을 첨가하고, 다시 아르곤으로 5분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하고, 실온으로 냉각시켰다. 반응 혼합물을 셀라이트를 통해 여과한 다음, 여과물을 물로 희석하고, EtOAc (3x20 mL)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물, 염수 용액으로 세척하고, 황산나트륨 상에서 건조시키고, 증발시켜 조 화합물을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH: Rf-0.3; UV 활성). 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 30-40% EtOAc/헥산으로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(5-시아노-6-에톡시피리딘-3-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5 (2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (173 mg, 0.398 mmol, 31.5% 수율), LCMS (m/z): 429.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.83 (s, 1 H), 9.51 (d, J = 1.5 Hz, 1 H), 9.16 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 8.82 (d, J = 2.6 Hz, 1 H), 8.55 (dd, J = 2.6, 1.5 Hz, 1 H), 8.31 (d, J = 2.4 Hz, 1 H), 7.62 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.38 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 5.67 (dd, J = 6.0, 3.2 Hz, 1 H), 4.57 (q, J = 7.1 Hz, 2 H), 3.12 - 3.32 (m, 3 H), 3.01 (dd, J = 12.0, 3.3 Hz, 1 H), 2.34 (m, 1 H), 2.07 (m, 1 H), 1.48 (t, J = 7.1 Hz, 3 H).
실시예 294
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (212 mg, 0.714 mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.190mmol)의 교반 용액에 실온에서 여러 부분으로 천천히 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. DIPEA (0.622 mL, 3.57 mmol) 및 테트라히드로-2H-피란-4-아민 (180 mg, 1.785mmol)을 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로-2H-피란-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (110 mg, 0.290 mmol, 29.2% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 380.36 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.52 (br d, J=7.23 Hz, 1 H), 8.88 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 7.92 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.54 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.28 (s, 1 H), 7.22 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.62 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 4.04-3.94 (m, 3 H), 3.51 (tt, J=11.59, 2.33 Hz, 2 H), 3.27-3.15 (m, 2 H), 3.13-3.06 (m, 1 H), 2.95 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H) 2.63 (s, 3 H), 2.26 (dddd, J=14.00, 9.95, 5.97, 4.06 Hz, 1 H), 2.08-1.98 (m, 3 H),1.62-1.55 (m, 2 H)
실시예 295
(4S)-N-(시클로프로필메틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (200 mg, 0.793 mmol)의 용액에 TEA (0.331 mL, 2.378 mmol) 및 트리포스겐 (141 mg, 0.476 mmol)을 0℃에서 첨가하고, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 시클로프로필메탄아미드 (85 mg, 1.189 mmol)를 첨가하였다. 반응 혼합물을 60℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 되도록 하고, 용매를 증발시키고, CH2Cl2 (25 mL)로 희석하였다. 용액을 물 및 염수로 세척하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 농축시켰다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 5% MeOH/CH2Cl2로 용리시킴)에 의해 정제하여 (4S)-N-(시클로프로필메틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체 수득하였다 (140 mg, 0.381 mmol, 48.0% 수율), (TLC: Rf = 0.3, 순수한 EtOAc), LCMS (m/z): 350.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.52 (br s, 1 H), 8.96 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 8.02 (dd, J=8.00, 2.30 Hz, 1 H), 7.53 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.26 - 7.20 (m, 2 H), 5.64 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.32 - 3.05 (m, 5 H), 2.95 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.26 (dddd, J=14.00, 9.95, 5.97, 4.06 Hz, 1H), 2.10 - 1.98 (m, 1H), 1.08 (dddt, J=12.78, 7.66, 5.04, 2.38, 2.38 Hz, 1H), 0.65 - 0.52 (m, 2 H), 0.26 (q, J=4.97 Hz, 2 H).
실시예 296
(4S)-N-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
25℃에서 1,4-디옥산 (9 mL) 및 물 (1 mL) 중 (4S)-N-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-일)-7-클로로-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (250 mg, 0.699 mmol) 및 (2-메틸피리딘-4-일) 보론산 (124 mg, 0.908 mmol)의 용액을 15분 동안 탈기하였다. 이 반응 혼합물에 Cs2CO3 (455 mg, 1.398 mmol)을 첨가하고, 다시 15분 동안 탈기하였다. 최종적으로, PdCl2(dppf) (51.1 mg, 0.070 mmol)를 첨가하고, 반응 혼합물을 100℃에서 2시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물 (10 ml)로 희석하고, 에틸 아세테이트 (2X10 ml)로 추출하였다. 합한 유기 층을 물 (10 ml), 염수 (10 ml)로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (2회) ((100-200 실리카 겔, 3% CH2Cl2/MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 화합물을 수득하였다. 이를 다시 정제용 HPLC에 의해 디클로로메탄 중 3% 메탄올로 용리시키면서 정제하여 순수한 (4S)-N-(3H-[1,2,3]트리아졸로[4,5-d]피리미딘-7-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (15 mg, 0.036 mmol, 5.15% 수율), (TLC 시스템: DCM 중 5% 메탄올. Rf 값: 0.3), LCMS (m/z): 414.9 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 13.23 (br s, 1 H), 8.47 (br d, J=19.95 Hz, 2 H), 8.08 (br s, 1 H), 7.92 - 8.04 (m, 1 H), 7.67 - 7.81 (m, 2 H), 5.48 - 5.64 (m, 1 H), 3.20 - 3.26 (m, 1 H), 3.15 (br d, J=11.40 Hz, 2 H), 2.90 - 3.05 (m, 1 H), 2.46 (br s, 3 H), 2.20 - 2.38 (m, 1 H), 1.92 - 2.09 (m, 1 H).
실시예 297
(4S)-N-(3-플루오로피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
THF (10 mL, 밀봉된 튜브) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 교반 용액에 트리에틸아민 (1.657 mL, 11.89 mmol) 및 트리포스겐 (588 mg, 1.982 mmol)을 실온에서 첨가하고, 30분 동안 교반한 다음, 3-플루오로피라진-2-아민 (336 mg, 2.97 mmol)을 첨가하고, 80℃에서 15시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% 메탄올)에 의해 정제하여 (4S)-N-(3-플루오로피라진-2-일)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (27 mg, 0.068 mmol, 3.44% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 5% 메탄올, Rf: 0.4), LCMS (m/z): 392.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.43 (s, 1 H), 8.59 (d, J=5.26 Hz, 1 H), 8.32 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 7.90 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 7.72-7.55 (m, 3 H), 7.37 (br d, J=4.38 Hz, 1 H), 5.73 (br dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H), 3.36-3.02 (m, 4 H), 2.61 (m, 3 H), 2.33 (br dd, J=9.87, 4.17 Hz, 1 H), 2.12 (br dd, J=9.72, 3.86 Hz, 1H).
실시예 298
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드)의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (중간체 SFC 분리로부터의 피크 2) (350 mg, 1.173 mmol)의 용액에 트리포스겐 (209 mg, 0.704 mmol)을 0℃에서 첨가하였다. 30분 후, DIPEA (1.025 mL, 5.87 mmol) 및 피리딘-2-아민 (221 mg, 2.347 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (2x50 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(3-(트리플루오로메틸)피롤리딘-1-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (50.8 mg, 0.115 mmol, 9.83% 수율), (TLC 시스템: Rf: 0.2 :EtOAc), LCMS (m/z): 419.2 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.34 (s, 1 H), 8.25 - 8.11 (m, 2 H), 7.69 - 7.61 (m, 1 H), 7.34 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 6.98 - 6.90 (m, 1 H), 5.98 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.61 (dd, J=6.14, 3.29 Hz, 1 H), 4.02 (dd, J=11.18, 8.55 Hz, 1 H), 3.82 (dd, J=11.29, 7.34 Hz, 1 H), 3.70 (td, J=8.93, 4.28 Hz, 1 H), 3.63 - 3.51 (m, 1 H), 3.29 - 3.06 (m, 4 H), 2.90 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.39 - 2.19 (m, 3 H), 2.05 - 1.91 (m, 1 H).
실시예 299
(4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(9H-퓨린-6-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b] [1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (20 mL) 중 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (1 g, 3.96 mmol)의 용액에, 트리포스겐 (0.588 g, 1.982 mmol)을 첨가하고, 1시간 동안 교반하였다. 트리에틸아민 (2.76 mL, 19.82 mmol)을 첨가하고, 이어서 9H-퓨린-6-아민 (0.696 g, 5.15 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 물로 희석하고, 에틸 아세테이트 2x 25 ml로 추출하였다. 합한 유기 층을 염수 용액으로 세척하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (100-200 실리카 겔, 3% CH2Cl2/MeOH로 용리시킴)에 의해 정제하여 목적 화합물을 수득하였으며, 이를 정제용 HPLC에 의해 정제하여 (4S)-7-(2-메틸피리딘-4-일)-N-(9H-퓨린-6-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (25 mg, 0.057 mmol, 1.449% 수율), (TLC 시스템: DCM 중 5% 메탄올. Rf 값: 0.3), LCMS (m/z): 411.9 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ ppm 14.08 (br s, 1 H), 12.32 (br s, 1 H), 8.72 (s, 1 H), 8.63 (d, J=5.04 Hz, 1 H), 8.45 (s, 1 H), 8.20 (br s, 1 H), 7.99 (dd, J=5.48, 1.53 Hz, 1 H), 7.90 - 7.81 (m, 1 H), 7.81 - 7.74 (m, 1 H), 5.57 (dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H), 3.27 - 3.07 (m, 3 H), 3.02 (br dd, J=11.95, 3.18 Hz, 1 H), 2.65 (s, 3 H), 2.37 - 2.18 (m,1H), 2.08 (br d, J=6.58 Hz, 1 H).
실시예 300
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (212 mg, 0.74mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.190mmol)의 교반 용액에 실온에서 여러 부분으로 천천히 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. DIPEA (0.622 mL, 3.571mmol) 및 2,2,2-트리플루오로에탄아민 히드로클로라이드 (242 mg, 1.785mmol)를 상기 반응 혼합물에 첨가하고, 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(2,2,2-트리플루오로에틸)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (235 mg, 0.615 mmol, 103% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.5; UV 활성), LCMS (m/z) 378.31 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 11.12 (br t, J=6.03 Hz, 1 H), 8.88 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 7.94 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.57 (d, J=7.89 Hz, 1 H),7.31-7.22 (m, 2 H), 5.62 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.16-4.02 (m, 2 H), 3.32-3.08 (m, 3 H), 2.96 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.28 (dddd, J=14.06, 10.00, 6.08, 4.06 Hz, 1 H), 2.09-1.97 (m, 1 H)
실시예 301
(4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로-2H-피란-3-일)-3,4-디히드로1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
테트라히드로푸란 (THF) (10 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (300 mg, 1.189 mmol)의 용액에 0℃에서 트리포스겐 (176 mg, 0.594 mmol)을 첨가하였다. 30분 후, DIPEA (1.038 mL, 5.94 mmol), 테트라히드로-2H-피란-3-아민 (180 mg, 1.783 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 70℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 냉수 (50 mL)에 붓고, 에틸 아세테이트 (150 mL)로 추출하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 감압 하에 농축시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 생성물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 3% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(테트라히드로-2H-피란-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (114.5 mg, 0.299 mmol, 25.1% 수율), (TLC 시스템: Rf: 0.2, 5% MeOH-DCM), LCMS (m/z): 380.0 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.59 (t, J=7.78 Hz, 1 H), 8.92 (s, 1 H), 8.07 (dt, J=8.11, 2.96 Hz, 1 H), 7.52 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.27 - 7.17 (m, 2 H), 5.66 - 5.59 (m, 1 H), 4.10 - 4.00 (m, 1 H), 3.86 (dt, J=11.24, 3.70 Hz, 1 H), 3.71 - 3.62 (m, 2 H), 3.53 (dd, J=11.18, 5.70 Hz, 1 H), 3.28 - 3.06 (m, 3 H), 2.97 - 2.89 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.24 (dddd, J=16.66, 9.98, 6.25, 3.51 Hz, 1 H), 2.07 - 1.91 (m, 2 H), 1.74 - 1.66 (m, 2 H), 1.56 - 1.50 (m, 1 H).
실시예 302
(4S)-7-((R)-2-에틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디이소프로필에틸아민 (2.81 mL, 16.12 mmol)을 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (400 mg, 3.22 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 아르곤 하에 30℃에서 교반하였다. 디페닐포스포르아지데이트 (887 mg, 3.22 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 30℃에서 2시간 동안 교반하였다. 이어서, (2R)-2-에틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린 (619 mg, 2.256 mmol)을 반응 혼합물에 첨가하고, 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (20 mL)과 에틸 아세테이트 (2 x 30 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조물질을 수득하였다 (TLC 용리액: 헥산 중 90% 에틸 아세테이트, Rf = 0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 생성물을 헥산 중 10-15% 에틸 아세테이트로 용리시켜 순수한 (4S)-7-((R)-2-에틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (35 mg, 0.088 mmol, 2.75% 수율), LCMS (m/z): 396.31 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.37 (s, 1 H), 9.55 (d, J=1.53 Hz, 1 H), 8.25 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.09 - 8.18 (m, 1 H), 7.38 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.30 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.00 - 4.13 (m, 2 H), 3.86 (br d, J=12.93 Hz, 1 H), 3.75 (td, J=11.62, 2.85 Hz, 1 H), 3.45 - 3.56 (m, 1 H), 3.13 - 3.30 (m, 1 H), 3.00 - 3.17 (m, 3 H), 2.92 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.69 - 2.81 (m, 1 H), 2.27 (dddd, J=13.89, 9.95, 6.08, 3.62 Hz, 1 H), 2.00 (dt, J=14.09, 6.88 Hz, 1 H), 1.59 - 1.78 (m, 2 H), 1.05 (t, J=7.45 Hz, 3 H).
실시예 303
(4S)-9-메틸-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
N,N-디메틸아미노피리딘 (0.482 g, 3.94 mmol)을 테트라히드로푸란 (20 mL) 중 (4S)-9-메틸-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (0.350 g, 1.314 mmol) 및 페닐 피리딘-3-일카르바메이트 (0.845 g, 3.94 mmol)의 교반 용액에 질소 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 반응물을 65℃에서 48시간 동안 교반하였다. 반응물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 제거하고, 물 (20mL)과 EtOAc (70 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 에틸 아세테이트를 반응물에 첨가하고, 10분 동안 교반하였다. 반응물을 여과하고, EtOAc로 세척하였다. 여과물을 농축시켜 갈색 고체를 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.2; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 60% EtOAc로 용리시켜 순수한 (4S)-9-메틸-7-(6-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.115 g, 0.296 mmol, 22.56% 수율), LCMS (m/z) 387.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 13.29 (s, 1 H), 8.92 (d, J = 1.97 Hz, 1 H), 8.53 (d, J = 2.19 Hz, 1 H), 8.28 (br d, J = 3.51 Hz, 1 H), 8.19 (br d, J = 8.33 Hz, 1 H), 7.99 (dd, J = 8.00, 2.30 Hz, 1 H), 7.32 (d, J = 7.89 Hz, 1 H), 7.22 - 7.29 (m, 1 H), 7.19 (s, 1 H), 5.68 (dd, J = 5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.17 (t, J = 7.34 Hz, 2 H), 3.07 - 3.13 (m, 1 H), 2.97 - 3.05 (m, 1 H), 2.64 (s, 3 H), 2.50 (s, 3 H), 2.32 (td, J = 13.76, 6.47 Hz, 1 H), 1.99 - 2.14 (m, 1 H)
실시예 304
(4S)-7-(3-메틸-1H-피라졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (469 mg, 2.210 mmol)을 28℃에서 1,4-디옥산 (10.0 ml) 및 물 (2.0 ml) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (350.0 mg, 1.105 mmol), 3-메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (276 mg, 1.326 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 15분 동안 탈기하고, 이에 X-phos (52.7 mg, 0.110 mmol) 및 Pd2(dba)3 (50.6 mg, 0.055 mmol)을 첨가하였다. 반응 혼합물을 추가로 15분 동안 탈기하고, 16시간 동안 100℃에서 교반하였다. 이어서, 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (40 ml)로 세척하였다. 여과물을 물 (10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH; Rf-0.3; UV 활성). 이 조 물질을 그레이스 칼럼에 의해 정제하고, 디클로로메탄 중 2-5% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(3-메틸-1H-피라졸-5-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (181.5 mg, 0.492 mmol, 44.5% 수율), LCMS (m/z): 363.27 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 13.80 (s, 1 H), 9.55 (d, J=1.10 Hz, 1 H), 8.52 (s, 1 H), 8.20 - 8.35 (m, 2 H), 7.55 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.12 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.11 - 3.34 (m, 3 H), 2.89 - 3.11 (m, 1 H), 2.60 (s, 3 H), 2.33 (dddd, J=14.06, 9.95, 5.92, 4.06 Hz, 1 H), 1.97 - 2.17 (m, 1 H)
실시예 305
(4S)-N-이소프로필-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
DIPEA (1.038 mL, 5.94 mmol)에 이어서 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 THF (15 mL, 밀봉된 튜브 중) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 교반 용액에 0℃에서 첨가한 다음, 실온에서 30분 동안 교반하였다. 이어서, 프로판-2-아민 (176 mg, 2.97 mmol)을 첨가하고, 75℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (60 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-이소프로필-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (130 mg, 0.384 mmol, 19.39% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH, Rf: 0.3), LCMS (m/z): 338.32 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.38 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 8.91 (d, J = 2 Hz, 1H), 7.94 (dd, J = 2.4, 8 Hz, 1H), 7.52 (d, J = 5.6 Hz, 1H), 7.25-7.20 (m, 2H), 5.66-5.62 (m, 1H), 4.14-4.06 (m, 1H), 3.26-3.06 (m, 3H), 2.97-2.92 (m, 1H), 2.62 (s, 3H), 2.30 -2.21(m, 1H), 2.26-1.98 (m, 1H), 1.27 (d, J = 6.8Hz, 6 H)
실시예 306
(4S)-N-(1-메틸피페리딘-4-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
트리포스겐 (423.8 mg, 1.428mmol)을 테트라히드로푸란 (THF) (25 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀 (600 mg, 2.380mmol)의 교반 용액에 실온에서 여러 부분으로 천천히 첨가하고, 30분 동안 교반하였다. DIPEA (1.24 mL, 7.14mmol) 및 1-메틸피페리딘-4-아민 (408 mg, 3.571mmol)을 천천히 반응 혼합물에 첨가하고, 16시간 동안 70℃에서 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 진공 하에 농축시키고, 잔류물을 물 (40 mL)과 EtOAc (80 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피에 의해 실리카 겔 (100-200 메쉬) 및 용리액으로서 디클로로메탄 중 2% 메탄올을 사용하여 정제하여 (4S)-N-(1-메틸피페리딘-4-일)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 회백색 고체로서 수득하였다 (100 mg, 0.252 mmol, 21.21% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH Rf: 0.4; UV 활성), LCMS (m/z): 393.33 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ ppm 10.46 (br d, J=7.45 Hz, 1 H), 8.88 (d, J=2.19 Hz, 1 H), 7.92 (dd, J=8.11, 2.41 Hz, 1 H), 7.53 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 7.29-7.24 (m, 1 H), 7.20 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 5.62 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.82-3.73 (m, 1 H), 3.12 - 3.26 (m, 2 H), 3.12-3.06 (m, 1 H), 2.94 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.85-2.78 (m, 1 H), 2.86-2.77 (m, 1 H), 2.62 (s, 3 H), 2.30-2.22 (m, 4 H), 2.15-1.98 (m, 5 H),1.65-1.53 (m, 2 H)
실시예 307
(4S)-7-((2R,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
디페닐 포스포르아지데이트 (0.432 g, 1.571 mmol)를 테트라히드로푸란 (30 mL) 중 피라진-2-카르복실산 (0.195 g, 1.571 mmol) 및 DIPEA (1.372 mL, 7.86 mmol)의 교반 용액에 아르곤 분위기 하에 실온에서 첨가하였다. 반응 혼합물을 실온에서 2시간 동안 교반한 다음, (2R,6R)-2,6-디메틸-4-((4S)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-7-일)모르폴린 (0.302 g, 1.100 mmol)을 첨가하고, 반응 혼합물을 65℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 용매를 감압 하에 완전히 증발시키고, 물 (20 mL)과 EtOAc (60 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: 100% EtOAc: Rf-0.3; UV 활성). 조 물질을 칼럼 크로마토그래피에 의해 중성 알루미나를 사용하여 정제하고, 헥산 중 20% EtOAc로 용리시켜 순수한 (4S)-7-((2R,6R)-2,6-디메틸모르폴리노)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.081 g, 0.203 mmol, 12.93% 수율), LCMS (m/z): 396.38 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ ppm 13.42 (s, 1 H), 9.56 (d, J=1.32 Hz, 1 H), 8.25 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.09 - 8.19 (m, 1 H), 7.37 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 6.24 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 5.63 (dd, J=6.03, 3.18 Hz, 1 H), 4.28 - 4.15 (m, 2 H), 3.67 (dd, J=12.39, 3.40 Hz, 2 H), 3.32 - 3.19 (m, 3 H), 3.17 - 3.06 (m, 2 H), 2.92 (dd, J=11.84, 3.29 Hz, 1 H), 2.27 (dddd, J=13.95, 10.00, 6.19, 3.84 Hz, 1 H), 2.00 (dt, J=14.09, 7.10 Hz, 1 H), 1.34 (d, J=6.36 Hz, 6 H)
실시예 308
(4S)-7-(1-(디플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
인산삼칼륨 (469 mg, 2.210 mmol)을 1,4-디옥산 (10.0 ml) 및 물 (2.0 ml) 중 (4S)-7-클로로-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (350 mg, 1.105 mmol), 1-(디플루오로메틸)-4-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)-1H-피라졸 (324 mg, 1.326 mmol)의 교반 용액에 첨가하였다. 반응 혼합물을 10분 동안 탈기하였다. Pd2(dba)3 (50.6 mg, 0.055 mmol) 및 X-phos (52.7 mg, 0.110 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 추가의 15분 동안 탈기하였다. 반응 혼합물을 100℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 셀라이트의 패드를 통해 여과하고, 에틸 아세테이트 (40 ml)로 세척하였다. 여과물을 물 (10 ml)로 세척하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 물질을 갈색 고체로서 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH: Rf-0.4; UV 활성). 조 물질을 그레이스 칼럼에 의해 정제하고, 디클로로메탄 중 1-2% MeOH로 용리시켜 순수한 (4S)-7-(1-(디플루오로메틸)-1H-피라졸-4-일)-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (280.0 mg, 0.702 mmol, 63.6% 수율), LCMS (m/z): 399.30 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 14.18 (s, 1 H), 9.55 (d, J = 1.3 Hz, 1 H), 9.17 (s, 1 H), 8.36 - 8.27 (m, 2 H), 8.22 (s, 1 H), 7.56 (d, J = 7.9 Hz, 1 H), 7.26 - 7.06 (m, 2 H), 5.66 (dd, J = 5.9, 3.3 Hz, 1 H), 3.35 - 3.11 (m, 3 H), 3.01 (dd, J = 12.3, 3.3 Hz, 1 H), 2.34 (dddd, J=14.1, 9.8, 6.0, 4.06 Hz, 1 H), 1.93 - 2.17 (m, 1 H).
실시예 309
(4S)-7-(6-(디메틸아미노)-4-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
N,N,4-트리메틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-아민 (274 mg, 1.045 mmol)에 이어서 K3PO4 (605 mg, 2.85 mmol)를 1-부탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.950 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (43.5 mg, 0.048 mmol) 및 X-phos (45.3 mg, 0.095 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하고, 화합물을 석유 에테르 중 70% EtOAc에서 수집하여 (4S)-7-(6-(디메틸아미노)-4-메틸피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (100 mg, 0.236 mmol, 24.80% 수율), (TLC 용리액: 석유 에테르 중 100% EtOAc Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 416.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 13.31 (s, 1 H), 8.36 - 8.17 (m, 3 H), 8.17 - 7.96 (m, 1 H), 7.86 - 7.57 (m, 1 H), 6.99 (d, J=7.89 Hz, 1 H), 6.95 - 6.68 (m, 1 H), 6.43 (s, 1 H), 5.69 (brdd, J=5.59, 3.18 Hz, 1 H), 3.31 (br d, J=8.77 Hz, 1 H), 3.24 - 3.10 (m, 8 H), 3.10 - 2.87 (m, 1 H), 2.47 (s, 3 H), 2.40 - 2.20 (m, 1 H), 2.19 - 1.92 (m, 1 H)
실시예 310
(4S)-7-(6-(피페리딘-1-일)피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(6-(피페리딘-1-일)피리딘-3-일)보론산 (215 mg, 1.045 mmol)에 이어서 K3PO4 (605 mg, 2.85 mmol)를 1-부탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.950 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (43.5 mg, 0.048 mmol) 및 X-phos (45.3 mg, 0.095 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하고, 화합물을 석유 에테르 중 70% EtOAc에서 수집하여 (4S)-7-(6-(피페리딘-1-일)피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 연황색 고체로서 수득하였다 (150 mg, 0.336 mmol, 35.3% 수율), (TLC 용리액: 석유 에테르 중 100% EtOAc, Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 442.3 [M+H]+,
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 13.71 (s, 1 H), 8.80 (d, J=2.63 Hz, 1 H), 8.54 (dd, J=8.99, 2.63 Hz, 1 H), 8.37 (dt, J=4.93, 0.82 Hz, 1 H), 8.18 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.78 - 7.59 (m, 1 H), 7.51 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.30 - 7.25 (m, 1 H), 6.97 (ddd, J=7.23, 4.82, 0.88 Hz, 1 H), 6.79 (d, J=8.99 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.29 Hz, 1 H), 3.70 - 3.59 (m, 4 H), 3.09 - 3.32 (m, 3 H), 3.09 - 2.84 (m, 1 H), 2.31 (d, J=1.97 Hz, 1 H), 2.17 - 1.95 (m, 1 H), 1.68 (br s, 6 H).
실시예 311
(4S)-N-(tert-부틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
DIPEA (1.038 mL, 5.94 mmol)에 이어서 트리포스겐 (353 mg, 1.189 mmol)을 테트라히드로푸란 (15 mL) 중 (4S)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-2,3,4,5-테트라히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4] 디아제핀 (500 mg, 1.982 mmol)의 용액에 실온에서 첨가하고, 이를 30분 동안 교반하였다. 이어서, 2-메틸프로판-2-아민 (217 mg, 2.97 mmol)을 첨가하고, 75℃로 16시간 동안 가열하였다. 반응 혼합물을 28℃로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (60 mL) 사이에 분배하였다. 분리된 유기 층을 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 혼합물을 플래쉬 칼럼 크로마토그래피 (실리카-겔: 100-200 메쉬, 용리액: DCM 중 2% MeOH)에 의해 정제하여 (4S)-N-(tert-부틸)-7-(6-메틸피리딘-3-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b] [1,4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (185 mg, 0.525 mmol, 26.5% 수율), (TLC 용리액: DCM 중 5% MeOH, Rf: 0.3; UV 활성), LCMS (m/z): 352.34 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d): δ ppm 10.4 (s, 1H), 8.90 (d, J = 2 Hz, 1H),7.95 (dd, J = 2.4 Hz, 8 Hz, 1H), 7.51 (d, J = 7.6 Hz, 1H), 7.22 (d, J = 8Hz, 1H), 7.17 (d, J = 8 Hz, 1H), 5.64 - 5.61 (m, 1H), 3.28 -3.12 (m, 2H), 3.10 -3.05 (m, 1H), 2.96 -2.91 (m, 1H), 2.61 (s, 3H), 2.30 - 2.21 (m, 1H), 2.06 - 1.97(m, 1H,), 1.43 (s, 9 H).
실시예 312
(4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
2-(피롤리딘-1-일)-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리미딘 (288 mg, 1.045 mmol)에 이어서 K3PO4 (605 mg, 2.85 mmol)를 1-부탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.950 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (43.5 mg, 0.048 mmol) 및 X-phos (45.3 mg, 0.095 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하고, 화합물을 석유 에테르 중 70% EtOAc에서 수집하여 (4S)-N-(피리딘-2-일)-7-(2-(피롤리딘-1-일)피리미딘-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 황색 고체로서 수득하였다 (170 mg, 0.377mmol, 39.7% 수율), (TLC 용리액: 석유 에테르 중 100% EtOAc, Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 429.6 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 13.57 (s, 1 H), 9.09 (s, 2 H), 8.51 - 8.26 (m, 1 H), 8.14 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.67 (td, J=7.84, 1.86 Hz, 1 H), 7.54 (m, J=8.11 Hz, 1 H), 7.26 (s, 1 H), 6.97 (ddd, J=7.29, 4.88, 0.99 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.81, 3.18 Hz, 1 H), 3.75 - 3.60 (m, 4 H), 3.35 - 3.09 (m, 3 H), 2.99 (dd, J=12.06, 3.29 Hz, 1 H), 2.32 (m, 1 H), 1.98 - 2.13 (m, 5 H)
실시예 313
(4S)-7-(6-(디에틸아미노)피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
N,N-디에틸-5-(4,4,5,5-테트라메틸-1,3,2-디옥사보롤란-2-일)피리딘-2-아민 (289 mg, 1.045 mmol)에 이어서 K3PO4 (605 mg, 2.85 mmol)를 1-부탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.950 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (43.5 mg, 0.048 mmol) 및 X-phos (45.3 mg, 0.095 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하고, 화합물을 석유 에테르 중 70% EtOAc에서 수집하여 (4S)-7-(6-(디에틸아미노)피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (120 mg, 0.271 mmol, 28.5% 수율), (TLC 용리액: 석유 에테르 중 100% EtOAc, Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 430.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3) δ ppm 13.77 (s, 1 H), 8.78 (d, J=2.41 Hz, 1 H), 8.64 - 8.43 (m, 1 H), 8.43 - 8.28 (m, 1 H), 8.18 (d, J=8.55 Hz, 1 H), 7.75 - 7.59 (m, 1 H), 7.51 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.39 - 7.15 (m, 1 H), 6.97 (ddd, J=7.34, 4.93, 0.88 Hz, 1 H), 6.62 (d, J=8.99 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.92, 3.07 Hz, 1 H), 3.69 - 3.50 (m, 4 H), 3.34 - 3.08 (m, 3 H), 3.08 - 2.89 (m, 1 H), 2.39 - 2.19 (m, 1 H), 2.08 (dt, J=13.87, 6.77 Hz, 1 H), 1.24 (t, J=7.02 Hz, 6 H)
실시예 314
(4S)-7-(6-모르폴리노피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
(6-모르폴리노피리딘-3-일)보론산 (296 mg, 1.425 mmol)에 이어서 K3PO4 (605 mg, 2.85 mmol)를 1-부탄올 (10 mL) 중 (4S)-7-클로로-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (300 mg, 0.950 mmol)의 교반 용액에 실온에서 첨가하고, 20분 동안 탈기하였다. 이어서, Pd2(dba)3 (43.5 mg, 0.048 mmol) 및 X-phos (45.3 mg, 0.095 mmol)를 반응 혼합물에 첨가하고, 반응 혼합물을 80℃에서 16시간 동안 교반하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시키고, 물 (25 mL)과 EtOAc (40 mL) 사이에 분배하였다. 유기 층을 분리하고, 무수 Na2SO4 상에서 건조시키고, 여과하고, 여과물을 증발시켜 조 화합물을 수득하였다. 조 화합물을 칼럼 크로마토그래피 (실리카 겔: 100-200 메쉬)에 의해 정제하고, 화합물을 석유 에테르 중 70% EtOAc에서 수집하여 (4S)-7-(6-모르폴리노피리딘-3-일)-N-(피리딘-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 회백색 고체로서 수득하였다 (110 mg, 0.245 mmol, 25.8% 수율), (TLC 용리액: 석유 에테르 중 100% EtOAc, Rf: 0.4, UV 활성), LCMS (m/z): 444.3 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ ppm 13.68 (s, 1 H), 8.85 (s, 1 H), 8.56 - 8.64 (m, 1 H), 8.36 (d, J=3.73 Hz, 1 H), 8.19 (d, J=8.33 Hz, 1 H), 7.68 (t, J=7.13 Hz, 1 H), 7.54 (d, J=8.11 Hz, 1 H), 7.32 (s, 1 H), 7.02- 6.95 (m, 1 H), 6.78 (d, J=8.99 Hz, 1 H), 5.68 (dd, J=5.70, 3.07 Hz, 1 H), 3.91-3.83 (m, 4 H), 3.70- 3.60 (m, 4 H), 3.34 - 3.14 (m, 3 H), 2.99 (dd, J=11.95, 3.18 Hz, 1 H), 2.42 - 2.26 (m, 1 H), 2.08 (dt, J=13.87, 7.21 Hz, 1 H).
실시예 315
(4S)-N-(피라진-2-일)-7-(2H-테트라졸-5-일)-3,4-디히드로-1, 4-메타노피리도 [2, 3-b][1, 4] 디아제핀-5(2H)-카르복스아미드의 합성
아지도트리부틸스탄난 (1.297 g, 3.90 mmol)를 테트라히드로푸란 (25 mL) 중 (4S)-7-시아노-N-(피라진-2-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드 (0.4 g, 1.302 mmol)의 교반 용액에 첨가하고, 밀봉된 튜브 중에서 48시간 동안 80-90℃로 가열하였다. 반응 혼합물을 실온으로 냉각시켰다. 테트라히드로푸란을 감압 하에 농축시켜 잔류물을 수득하였다. 잔류물을 디클로로메탄 (100 mL)으로 희석하였다. 유기 층을 0.5M HCl 50 mL, 물 (50 mL) 및 염수 (50 mL)로 세척하였다. 유기 층을 무수 황산나트륨 상에서 건조시키고, 여과하고, 증발시켜 조 물질을 수득하였다 (TLC 용리액: DCM 중 10% MeOH; UV 활성; Rf ~0.3). 조 화합물을 디에틸 에테르로 연화처리하고, 여과하여 (4S)-N-(피라진-2-일)-7-(2H-테트라졸-5-일)-3,4-디히드로-1,4-메타노피리도[2,3-b][1,4]디아제핀-5(2H)-카르복스아미드를 백색 고체로서 수득하였다 (0.13g, 0.369 mmol, 28.4% 수율), LCMS (m/z): 351.24 [M+H]+.
1H NMR (400 MHz, CDCl3-d) δ ppm 14.75 (br s, 1H), 9.47 (d, J = 1.32 Hz, 1H), 8.48 - 8.40 (m, 2H), 8.02 (d, J = 7.89 Hz, 1H), 7.77 (d, J = 7.89 Hz, 1 H), 5.57 (dd, J = 5.92, 3.07 Hz, 1H), 3.37 - 3.27 (m, 2H), 3.22 - 3.17 (m, 1H), 3.24 - 3.04 (m, 1H), 2.39 (ddt, J = 14.36, 8.88, 5.48, 5.48 Hz, 1H), 2.18 - 2.05 (m, 1H)
실시예 316
본 발명은 세포의 수명을 증가시키며, 예를 들어 노화 또는 스트레스와 관련된 질환 또는 장애, 당뇨병, 비만, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 혈액 응고 장애, 염증, 암 및/또는 홍조 뿐만 아니라 증가된 미토콘드리아 활성으로부터 이익을 얻을 질환 또는 장애를 포함하나, 이에 제한되지는 않는 매우 다양한 질환 및 장애를 치료 및/또는 예방하기에 유용한 것으로 과학 문헌에 공지된 시르투인 조정제에 관한 것이다.
치료 잠재력 이외에도, SIRT1 활성 및 소분자 시르투인 조정제에 의한 활성화의 구조적 및 생물물리학적 연구는 시르투인의 생물학적 기능, 시르투인 활성화의 작용 메카니즘의 이해를 발전시키고, 신규 시르투인 조정제를 확인하는 검정의 개발을 보조하기에 유용할 것이다.
상기에 기초하여, 하기 참고 문헌 각각이 그 전문이 본원에 참조로 포함되며, 시르투인 조정제로서의 본 발명의 화합물의 유용성 및 그와 하기 참고문헌에 예시된 바와 같은 다양한 질환의 상호연관성을 증명하기 위해 인용된다:
1. Marcia C. Haigis and David A. Sinclair, Mammalian Sirtuins: Biological Insights and Disease Relevance, Annu Rev Pathol. 2010 ; 5: 253-295 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨).
하이기스 및 싱클레어는 하기를 교시하고 있다:
"노화는 질환 예컨대 제II형 당뇨병, 신경변성 질환, 암, 및 심혈관 질환으로부터의 증가된 발생률 및 사망률로 이어지는 다발성 기관계의 건강한 기능의 저하를 동반한다. 역사적으로, 연구원은 더 우수한 약물을 설계하기를 희망하여, 질환의 근본 원인을 확인하기 위한 전략으로서 단리된 기관에서의 개별 경로를 조사하는데 집중해 왔다. 효모에서의 노화의 연구는 유기체의 수명 및 전반적 건강을 증가시키는 다중 경로에 영향을 미치는 시르투인으로서 공지된 보존된 효소의 패밀리의 발견으로 이어졌다. 10년 전에 가장 먼저 공지된 포유동물 시르투인인 SIRT1의 발견 이래로, 시르투인, 그의 조절, 및 포유동물 생리학 및 건강 수명을 광범위하게 개선시키는 것에 대한 그의 능력의 우리의 효소학적 이해에 있어서 주요한 발전이 이루어져 왔다. 본 종설논문은 지난 10년의 발견 발전사항 및 내년도에 본 분야가 직면할 과제를 요약 및 논의한다 (그의 요약 및 참고문헌 참조)."
2. Gizem Donmez1 et al., SIRT1 and SIRT2: emerging targets in neurodegeneration, EMBO Mol Med (2013) 5, 344-352 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨).
기젬 돈메츠1 등은 하기를 교시하고 있다:
"시르투인은 연령-관련 질환 예컨대 암, 당뇨병, 심혈관 및 신경변성 질환에 대해 보호 효과를 갖는 것으로 공지된 NAD-의존성 단백질 데아세틸라제이다. 포유동물에서, 7종의 시르투인 (SIRT1-7)이 존재하며, 이는 세포하 국재화 및 기능에 있어서 다양성을 나타낸다. SIRT1은 그와 수명 연장의 초기 연관성 및 칼로리 제한에서의 수반으로 인해 광범위하게 조사되어 왔으며, 다른 시르투인의 중요한 생물학적 및 치료적 역할은 단지 최근에 인식된 바 있다. 여기서, 우리는 신경변성 질환에서의 SIRT1 및 SIRT2의 잠재적 역할 및 효과를 검토한다. 우리는 알츠하이머병 (AD), 파킨슨병 (PD) 및 헌팅톤병 (HD)을 포함한 다양한 신경변성 질환에서의 SIRT1 및 SIRT2의 상이한 기능 및 표적을 논의한다. 우리는 또한 신경변성 상태에서 가능한 연관성으로 인해 뉴런 분화에서의 SIRT1의 역할을 커버하며, 이들 장애에서의 SIRT1 및 SIRT2의 잠재적 치료 가치에 대한 전망으로 결론짓는다 (그의 요약 및 참고문헌 참조)."
3. Bracke et al., Targeted silencing of DEFB4 in a bioengineered skin-humanized mouse model for psoriasis: development of siRNA SECosome-based novel therapies; Exp Dermatol. 2014 Mar;23(3):199-201. doi: 10.1111/exd.12321 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨).
특히, 브라케 등은 하기를 교시하고 있다:
"건선은 매우 다양한 임상 징후를 제시하는 복합 염증성 피부 질환이다. 인간 β 데펜신-2 (hBD-2)는 건선성 병변에서 고도로 상향조절되며, 질환 활성에 대한 바이오마커로서 정의된 바 있다. 우리는 건선에 대한 생체공학적 피부-인간화 마우스 모델에서 DEFB4-siRNA-함유 SECosome의 국소 적용에 의해 hBD-2를 표적화하는 것의 잠재적 이익을 연구하였다. 건선성 표현형에서의 유의한 개선이 조직학적 검사에 의해, 피부 아키텍처의 정상화 및 피부 구획 내 혈관의 수 및 크기에서의 감소와 함께 관찰되었다. 치료는 정상 재생 인간 피부에서 발견되는 것들과 유사한 수준으로의 트랜스글루타미나제 활성, 필라그린 발현 및 각질층 외관의 회복으로 이어진다. SECosome 기술의 사용과 함께 건선에 대한 신뢰성있는 피부-인간화 마우스 모델의 생체이용률은 이러한 질환에 대한 잠재적 치료 표적을 확인하기 위한 가치있는 전임상 도구를 제공할 수 있다."
4. Karline Guilloteau et al., Skin Inflammation Induced by the Synergistic Action of IL-17A, IL-22 Recapitulates Some Features of Psoriasis Oncostatin M, IL-1a, and TNF-a,J Immunol 2010; 184:5263-5270 (그 전문이 본원에 참조로 포함됨).
길로토 등은 하기를 교시하고 있다:
"각질세포는 환경 및 면역 세포 자극에 반응하는 피부 염증의 조절에서 결정적인 역할을 한다. 이들은 면역 세포 상에서 또는 직접 공격자 상에서 자가분비 또는 주변분비 방식으로 작용할 수 있는 가용성 인자를 생산한다. 각질세포 유전자 발현에 대한 36종의 시토카인의 활성의 스크리닝은 IL-17A, IL-22, 온코스타틴 M, TNF-a, 및 IL-1a가 피부 염증을 유발함에 있어서 강력한 시토카인인 것으로 확인시켰다. 이들 5종의 염증유발 시토카인은 CXCL8 및 b-데펜신 2 (BD2)의 생산을 상승작용적으로 증가시켰다. 추가로, 인간 피부 외식편에 대한 생체외 연구는 시토카인의 동일한 조합에 반응하는 BD2, S100A7, 및 CXCL8 발현의 상향조절을 증명하였다. 마우스에서의 이들 5종의 시토카인의 생체내 피내 주사는 호중구 침윤과 연관된 CXCL1, CXCL2, CXCL3, S100A9, 및 BD3 발현을 증가시켰다. 우리는 정량적 실시간 PCR 분석을 사용하여 이러한 상승작용적 효과를 확인 및 확장시켰으며, 9종의 케모카인 및 12종의 항미생물 펩티드의 증가된 발현을 관찰하였다. 이러한 시토카인 조합의 존재 하에 자극된 각질세포에 의한 CXCL, CXCL5, 및 CXCL8의 생산은 증가된 호중구 화학주성 활성과 연관되어 있었다. 유사하게, BD2, BD3, 및 S100A7의 높은 생산은 증가된 항미생물 활성과 연관되어 있었다. 최종적으로, 염증성 각질세포의 이러한 시험관내 모델에서 관찰된 전사 프로파일은 병변 건선성 피부 중 1종과 상관관계가 있었다. 우리의 결과는 각질세포에 대한 IL-17A, IL-22, 온코스타틴 M, TNF-a, 및 IL-1a의 중요한 강화 활성을 증명한다. 이는 이들 시토카인이 과다발현되고 상승작용하여 케모카인 및 항미생물 펩티드 생산의 상향조절에 있어서 중요한 역할을 할 수 있는 건선의 맥락에서 특히 흥미롭다. The Journal of Immunology, 2010, 184: 5263-5270 (그의 요약 및 참고문헌 참조)".
실시예 317
건선 검정
PBMC TNFα 검정에서 시험된 표-1로부터의 실시예 222는 IC50 <5uM을 나타내었다. 추가로, 표-1로부터의 실시예 222는 베타-데펜신 2 (bD2) 검정에서 시험하여 10uM에서 >90% 감소를 나타내었다. 표-1로부터의 실시예 222는 건선 IL-17 검정에서 시험하여 인간 피부에서 10uM에서 시험 시에 mRNA 수준의 IL-17a의 >75% 억제, IL-17f의 >75% 억제 및 IL-22의 > 50% 억제를 유발하였다.
표 1, 실시예 222
검정의 설명:
PBMC 검정
시르투인 1 (Sirt1)은 침묵 정보 조절인자 2 (Sir2)의 상동체 및 NAD 의존성 클래스 III 히스톤 데아세틸라제의 구성원이다. Sirt1은 히스톤, 전사 인자 및 비히스톤 단백질 상의 리신 잔기를 탈아세틸화시킨다. Sirt1은 노화, 세포 주기 조절, 아폽토시스, 대사 조정 및 염증에 수반되는 것으로 제시된 바 있다. Sirt1의 활성화는, NF-kB 전사를 억제하고 TNF알파의 수준을 하향조절하는 핵 인자 kB (NF-kB) 전사 인자의 RelA/p65 서브유닛의 리신 310에서의 탈아세틸화를 유발한다. TNF알파는 대식세포 및 단핵구에 의해 주로 생산되는 다면발현성 시토카인이다. TNF알파는 건선을 포함한 면역 방어 및 만성 염증에 밀접하게 수반된다. 제1형 시토카인 예컨대 TNFa의 발현은 건선성 피부에서 증가되는 것으로 공지되었으며, 이는 건선의 병인에 있어서 중요한 역할을 한다 (Uyemura K et al., 1993, J. Invest Dermatol, 101, p701). 중요하게, 항-TNF 작용제는 건선에 대해 임상적으로 사용되어 왔다. 따라서, 염증 세포에서 TNFa 발현의 감소를 유발하는 Sirt1 활성화제는 중등도 내지 중증 건선 환자에서 치료 효과를 가져야 한다.
PBMC/TNF알파 세포 기반 검정은 말초 혈액 단핵 세포 (PBMC)의 리포폴리사카라이드 (LPS) 자극에 반응하는 TNF알파의 방출을 억제하는 Sirt1의 활성화제를 확인하기 위해 개발되었다. 간략하게, PBMC는 LPS에 의해 자극되어, TNF알파 분비의 생산의 증가로 이어졌다. TNF알파 단백질 수준은 TNF알파 HTRF (균질 시간 분해 형광) 키트 (시스바이오, 인크.)에 의해 측정하였다. 세포 용해 및 TNF알파 검출은 제조업체의 지침에 따라 수행하였다. Sirt1 활성화제를 TNFa 방출에 대한 그의 억제 효과를 평가하기 위해 LPS의 존재 하에 시험하였으며, IC50은 용량-반응 실험에서 결정하였다.
베타-데펜신 2 (bD2) 검정
시르투인은 광범위한 생리학적 기능을 갖는 NAD-의존성 데아세틸라제의 패밀리이며, 류마티스 관절염 및 제I형 당뇨병을 포함한 다수의 자가면역 및 대사 장애에 연루된 바 있다. SIRT1의 기질은 다양하며, 선천성 및 적응성 면역 반응에 있어서 잘 확립된 역할을 갖는 염증 요인 예컨대 NFκB, AP-1, FOXO, 및 p53을 포함한다.
건선은 유전, 자가면역 및 환경 요인에 의해 유발된 만성 염증성 피부 장애이다. 병변은 표피에서의 각질세포의 과다증식 및 백색 인편에 의해 덮인 만성 홍반성 플라크를 유발하는 염증 세포의 침윤을 특징으로 한다. 이전의 연구는 SIRT1이 STAT3 아세틸화의 직접 억제를 통해, 건선에서의 주요 시토카인인 IL-22의 효과를 방해할 수 있다는 것을 제시한 바 있다 (Sestito et al., 2011). 추가로, SIRT1 과다발현 및 레스베라트롤 처리 (SIRT1 활성화) 둘 다는 각질세포 분화를 유발할 수 있다 (Blander et al., 2009).
베타-데펜신 2 (bD2)는 상피로부터 분비될 수 있는 항미생물 펩티드이며, 여기서 이는 기억 T-세포, 미성숙 수지상 세포, 및 호중구에 대한 화학유인물질로서 작용한다. 이와 같이, bD2는 피부에서 염증 반응의 주요 부분이다. bD2는 정상 피부와 비교하여 건선 환자의 병변 표피 세포에서 유도될 뿐만 아니라 건선 환자에서의 질환 중증도에 대한 혈청 바이오마커이다 (Jansen et al., 2009; Kamsteeg et al. 2009). 추가로, bD2는 최근 연구가 증가된 베타-데펜신 유전자 카피수와 건선 위험 사이의 유의한 연관성을 밝혀냄에 따라 유전학적으로 건선과 연관될 수 있다 (Hollox et al., 2008). 주요하게, bD2 siRNA의 국소 전달은 건선에 대한 생체공학적 피부-인간화 마우스 모델에서 정상 피부 아키텍처 및 단백질 발현의 회복을 유발하였다 (Bracke et al., 2014).
건선성 염증을 모방하도록 생성된 시험관내 각질세포 염증 검정은 이전에 기재되었다 (Guilloteau et al., 2010; Teng et al. 2014). 이들 연구에서, IL-1알파, IL-17A, IL-22, OSM, 및 TNF알파 ("M5"로 지칭됨)의 시토카인 칵테일은 시험관내 1차 인간 각질세포에서 "건선형" 전사 프로파일을 생성하도록 상승작용하는 것으로 밝혀졌다. 이들 연구에서, bD2는 각질세포 염증의 유발에 대한 가장 강한 반응인자 중 1종이었다.
따라서, 본 검정은 추가로 국소 건선 프로그램에 대한 SIRT1 활성화제 화합물의 효능을 평가하기 위해 개발되었다. 구체적으로, 조건은 건선성 염증을 유발하도록 M5 시토카인 조합물로 시험관내 처리된 불멸화 인간 각질세포 세포주 (HaCaT)에 대해 최적화되었다 (상기 참고문헌에서와 같음). 48시간의 시간 프레임에서, bD2 분비는 bD2 ELISA 검정 (알파 다이아그노스틱스)에 의해 측정 시에 비자극된 각질세포와 비교하여 현저하게 증가된다. 이러한 bD2 유발은 건선성 염증을 억제하는 것으로 공지된 화합물의 처리로, 또는 중요하게는 SIRT1 활성화제의 하위세트로 억제될 수 있다. 병행하여, 48시간의 검정의 길이에 걸친 세포독성을 셀타이터-글로 발광 세포 생존율 검정 (프로메가)에 의해 확인하여 독성이 bD2 반응에 있어서 역할을 할 수 있는지의 여부를 결정하였다.
참고문헌:
Blander G, Bhimavarapu A, Mammone T, Maes D, Elliston K, Reich C, Matsui MS, Guarente L, Loureiro JJ. SIRT1 promotes differentiation of normal human keratinocytes. J Invest Dermatol. 2009 Jan;129(1):41-9.
Bracke S, Carretero M, Guerrero-Aspizua S, Desmet E, Illera N, Navarro M, Lambert J, Del Rio M. Targeted silencing of DEFB4 in a bioengineered skin-humanized mouse model for psoriasis: development of siRNA SECosome-based novel therapies. Exp Dermatol. 2014 Mar;23(3):199-201.
Guilloteau K, Paris I, Pedretti N, Boniface K, Juchaux F, Huguier V, Guillet G, Bernard FX, Lecron JC, Morel F. Skin Inflammation Induced by the Synergistic Action of IL-17A, IL-22, Oncostatin M, IL-1alpha, and TNFalpha Recapitulates Some Features of Psoriasis. J Immunol. 2010 Mar 24.
Jansen PA, Rodijk-Olthuis D, Hollox EJ, Kamsteeg M, Tjabringa GS, de Jongh GJ, van Vlijmen-Willems IM, Bergboer JG, van Rossum MM, de Jong EM, den Heijer M, Evers AW, Bergers M, Armour JA, Zeeuwen PL, Schalkwijk J. Beta-defensin-2 protein is a serum biomarker for disease activity in psoriasis and reaches biologically relevant concentrations in lesional skin. PLoS One. 2009;4(3):e4725.
Kamsteeg M, Jansen PA, van Vlijmen-Willems IM, van Erp PE, Rodijk-Olthuis D, van der Valk PG, Feuth T, Zeeuwen PL, Schalkwijk J. Molecular diagnostics of psoriasis, atopic dermatitis, allergic contact dermatitis and irritant contact dermatitis. Br J Dermatol. 2010 Mar;162(3):568-78.
Sestito R, Madonna S, Scarponi C, Cianfarani F, Failla CM, Cavani A, Girolomoni G, Albanesi C. STAT3-dependent effects of IL-22 in human keratinocytes are counterregulated by sirtuin 1 through a direct inhibition of STAT3 acetylation. FASEB J. 2011 Mar;25(3):916-27.
Teng X, Hu Z, Wei X, Wang Z, Guan T, Liu N, Liu X, Ye N, Deng G, Luo C, Huang N, Sun C, Xu M, Zhou X, Deng H, Edwards CK 3rd, Chen X, Wang X, Cui K, Wei Y, Li J. IL-37 ameliorates the inflammatory process in psoriasis by suppressing proinflammatory cytokine production. J Immunol. 2014 Feb 15;192(4):1815-23.
건선 & IL-17
건선은 유전, 환경 및 면역병리학적 요인에 의해 영향을 받는 다인성 발병기전을 갖는 만성 재발성 염증성 자가면역 피부 장애이다 (Griffiths CE et al., Lancet 2007;370:263-71). 건선은 점착성 은색 인편을 갖는 상승된 잘 구획화된 홍반성 타원형 플라크의 재발 에피소드를 특징으로 한다. 조직학적으로, 건선의 특징은 활성화된 T 세포, 호중구 및 수지상 세포에 의한 각질세포의 과다증식 및 피부 침윤에 의해 유발된 망상 돌기의 과장을 갖는 비후화된 핵형성 각질세포 층의 존재이다 (Schon MP N. Engl. J. Med. 352: 1899-1912).
증거의 축적물은 그의 서명 시토카인 IL-17 A, IL-17 F 및 IL-22에 의해 유도된 Th17-매개 질환으로서의 건선을 시사한다. IL-22는 각질세포의 증식을 유발하는 반면에, IL-17A는 호중구, 수지상 세포 및 선청성 림프성 세포를 포함한 추가의 염증 세포를 동원하는 케모카인 및 다른 염증유발 매개체를 분비하도록 각질세포를 자극한다 (Martin DA et al., J Invest Dermatol 2013; 133:17-26).
건선을 매개함에 있어서의 IL-17 경로의 임상 검증은 IL-17을 표적화하는 모노클로날 항체 요법을 사용하여 질환의 유의한 개선을 나타내는 성공적 Ph3 연구에 의해 증명된다 (Langley et al., NEJM 2014). 추가로, IL-17 억제 후 건선 병변에서의 전신 전사 프로파일링은 각질세포 및 백혈구 하위세트로부터의 다중 염증성 인자를 비-병변 피부에서 관찰된 것과 유사한 수준으로 억제하였다 (Russell et al., J Immunol 2014, 192: 3828-3836). 이와 함께, 이들 발견은 건선 발병기전을 매개함에 있어서의 IL-17의 역할을 지지한다.
방법 (생체외 피부 검정)
Th17 시토카인 칵테일을 사용하는 생체외 인간 피부 외식편에서의 피부-상주 면역 세포의 자극은 Th17 관련 시토카인 (IL-17A, IL-17F 및 IL-22)의 현저한 상향조절을 유발하며, 이는 이러한 시스템을 건선에 대한 인간 조직-기반 모델로서 확립한다. IL-17A, IL-17 F 및 IL-22의 발현을 조정하는 것에 대한 시험 화합물의 능력은 Th17 시토카인 칵테일로의 자극후 생체외 피부 배양 방법을 사용하여 평가하였다.
간략하게, 복부성형술 수술로부터 수득된 생체외 인간 피부를 프로세싱하여 지방을 제거하고, 조직을 ~750 마이크로미터로 피부분절화하였다. 이어서, 피부분절 피부를 각각 항생제/항진균제 용액을 함유하는 실온 PBS 중에서 5-10분의 2회 연속 린스로 세정하였다. 이어서, 피부 절편을 일회용 단일-사용 생검 펀치를 사용하여 10 mm 직경의 원형 절편으로 절단한 다음, 이를 각질화 배지를 사용하여 제조된 30 μl의 64% 소 콜라겐 용액 (오르가노제네시스, #200-055)을 함유하는 0.4 μm PCF 막 트랜스웰 (밀리셀 #PIHP01250)의 상부 챔버에 넣었다. 피부 샘플을 가습 챔버 내에서 37℃에서 30분 동안 콜라겐 용액에 정치되도록 하였다. 트랜스웰 상의 피부 샘플을 6-웰 플레이트 (웰당 1개의 샘플)로 옮기고, 하부 챔버를 1 ml 완전 배지 (각질화 배지)로 채웠다.
복부성형술 수술 후 제1 일에, 피부 외식편을 각질화 배지 중에서 배양하고, 37℃에서 밤새 인큐베이션되도록 하였다. 구체적으로, 인간 피부 외식편 (조건당 N=3)을 Th17 칵테일 (CD3, 1 μg/ml, CD28, 2 μg/ml, IL-1b, 10 ng/ml, IL-6, 5 ng/ml, TGFb, 1 ng/ml, IL-21, 10 ng/ml, 항-IL-4, 1 μg/ml 및 항-INFg, 1 μg/ml)로 자극하였다. 1, 3 및 10uM의 시험 화합물을 Th17 칵테일로서 동시에 첨가하였다. 조직을 Th17 활성화 후 24시간에 수확하고, RNA를 qPCR을 사용하여 전사체 정량화 (IL-17A, IL-17F,IL-22)를 위해 단리하였다.
전체 RNA를 퀴아젠 미니 RNA 단리 키트 (Cat # 74106)를 사용하여 ~40 mg의 조직으로부터 단리하였다. 간략하게, 조직을 2-분 휴지기를 갖는 10회 사이클 동안 6300 rpm에서 30초 동안 1% 2-베타-메르캅토-에탄올로 보충된 300 μl의 RLT 완충제을 사용하여 프리셀리스-24 기계에서 세절 및 균질화하였다. 10 μl 프로테이나제 K를 함유하는 490 μl의 물을 상기 균질물에 첨가하고, 55℃에서 15분 동안 소화시켰다. 소화된 조직을 10,000 G에서 3분 동안 회전시켜 세포 파편으로 펠릿화시키고, 상청액을 제조업체의 프로토콜에 따라 퀴아젠 RN이지 미니 칼럼을 사용하는 RNA 단리에 사용하였다. 전체 RNA를 나노드롭 2000을 사용하여 정량화하고, 애질런트 생물분석기 상에서 분석하였다 (첨부된 파일). 1.4 μg의 RNA를 인비트로젠 슈퍼스크립트 VILO cDNA 합성 키트 (# 11754-050)를 사용하여 20 μl PCR 부피로 주형으로서 사용하여 cDNA 주형을 생성하였다. 이어서, 정량화될 각각의 유전자에 대한 특이적 택맨 프로브로의 후속 qPCR을 위해, cDNA를 1:25 희석하였다. 관심 유전자의 상대 발현의 RNA 수준을 델타 델타 CT 공식을 사용하여 계산하였다.
등가물
본 발명은 특히 시르투인-조정 화합물 및 그의 사용 방법을 제공한다. 본 발명의 구체적 실시양태가 논의되었지만, 상기 명세서는 예시적이며, 제한적인 것은 아니다. 본 발명의 많은 변형은 본 명세서의 검토 시에 관련 기술분야의 통상의 기술자에게 명백해질 것이다. 본 발명의 전체 범주는 청구범위를 그의 전체 등가물 범주와 함께 참조하고, 본 명세서를 이러한 변형과 함께 참조함으로써 결정되어야 한다.
참조로 포함
하기 열겨된 이들 항목을 포함한 본원에 언급된 모든 공개물 및 특허는 각각의 개별 공개물 또는 특허가 참조로 포함되도록 구체적으로 및 개별적으로 제시된 것처럼 그 전문이 본원에 참조로 포함된다. 상충되는 경우에, 본원의 임의의 정의를 포함한 본 출원이 우선할 것이다.
공중 데이터베이스, 예컨대 게놈 연구소 (TIGR) (www.tigr.org) 및/또는 국립 생물 정보 센터 (NCBI) (www.ncbi.nlm.nih.gov)에 의해 유지되는 것들의 등재와 상관관계가 있는 수탁 번호를 언급하고 있는 임의의 폴리뉴클레오티드 및 폴리펩티드 서열은 또한 그 전문이 참조로 포함된다.
SEQUENCE LISTING
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Claims (17)
- 하기인 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염.
- 제1항에 따른 화합물 및 적어도 1종의 제약상 허용되는 담체를 포함하는 제약 조성물.
- 제2항에 있어서, 추가의 활성제를 추가로 포함하는 제약 조성물.
- 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증의 치료 또는 인슐린 감수성의 증가를 필요로 하는 대상체에게 제1항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증을 치료하거나 또는 인슐린 감수성을 증가시키는 방법.
- 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증의 치료 또는 인슐린 감수성의 증가를 필요로 하는 대상체에게 제2항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대상체에서 인슐린 저항성, 대사 증후군, 당뇨병 또는 그의 합병증을 치료하거나 또는 인슐린 감수성을 증가시키는 방법.
- 세포를 제1항에 따른 화합물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 시르투인-1 활성을 증가시키는 방법.
- 세포를 제2항에 따른 제약 조성물과 접촉시키는 단계를 포함하는, 세포에서 시르투인-1 활성을 증가시키는 방법.
- 대사 기능장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 대사 기능장애를 치료하는 방법.
- 대사 기능장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제2항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 대사 기능장애를 치료하는 방법.
- 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항에 따른 화합물 또는 그의 제약상 허용되는 염을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
- 제10항에 있어서, 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애가 노화 또는 스트레스, 당뇨병, 대사 기능장애, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암 또는 염증성 질환으로부터 선택되나, 이에 제한되지는 않는 것인 방법.
- 제11항에 있어서, 노화 또는 스트레스와 관련된 질환, 당뇨병, 대사 기능장애, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암 또는 염증성 질환이 건선, 아토피성 피부염, 여드름, 장미증, 염증성 장 질환, 골다공증, 패혈증, 관절염, COPD, 전신 홍반성 루푸스 및 안부 염증으로부터 선택된 것인 방법.
- 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제2항의 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 상기 질환 또는 장애를 치료하는 방법.
- 제13항에 있어서, 감소된 SIRT1 발현 또는 활성으로부터 유발된 질환 또는 장애가 노화 또는 스트레스, 당뇨병, 대사 기능장애, 신경변성 질환, 심혈관 질환, 암 또는 염증성 질환으로부터 선택되나, 이에 제한되지는 않는 것인 방법.
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- 건선의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제1항에 따른 화합물을 투여하는 것을 포함하는, 건선을 치료하는 방법.
- 건선의 치료를 필요로 하는 대상체에게 제2항에 따른 제약 조성물을 투여하는 것을 포함하는, 건선을 치료하는 방법.
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