CN107206077B - 靶向g-蛋白偶联受体的抗体和使用方法 - Google Patents

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Abstract

本文公开的主题提供结合GPRC5D的抗体和使用该抗体的方法。

Description

靶向G-蛋白偶联受体的抗体和使用方法
相关申请的交叉引用
本申请要求于2014年12月5日提交的美国临时申请序列号第62/088,228号的优先权，引入其全部内容以供参考，并要求其优先权。
技术领域
本发明公开的主题涉及与G-蛋白偶联受体(例如G-蛋白偶联受体C家族5组D成员(GPRC5D))结合的人抗体以及使用该抗体的方法。
背景技术
G蛋白偶联受体，也称为七跨膜结构域受体、7TM受体、七螺旋区受体、蛇型受体和G蛋白-连接受体，其构成感知细胞外的分子并激活内部信号转导通路且最终激活细胞应答的一大类受体蛋白质家族。GPCR基于序列同源性和功能相似性可分为六类：A类(视紫红质样)、B类(分泌素受体家族)、C类(代谢型谷氨酸受体/信息素)、D类(真菌交配信息素受体)、E类(环AMP受体)以及F类(卷曲/平滑受体(Frizzled/Smoothened))。
G-蛋白偶联受体C家族5组D成员(GPRC5D)是在人体中无已知配体或功能的孤独受体。它是视黄酸诱导性G-蛋白-偶联受体家族的成员。它在多发性骨髓瘤(MM)细胞中过表达，并且在任何其他细胞类型、良性或恶性肿瘤中都不表达或以显著更低的水平表达，如图1A-1D所示。几个研究组已经通过将原发性MM细胞的基因表达分析与正常组织1或其他血液恶性肿瘤相比较而鉴定出该基因高度分化表达(Frigyesi,I.,等人,Robust isolation ofmalignant plasma cells in multiple myeloma.Blood 123,1336-1340(2014)；Cohen,Y.,Gutwein,O.,Garach-Jehoshua,O.,Bar-Haim,A.&Kornberg,A.GPRC5D is a promisingmarker for monitoring the tumor load and to target multiple myelomacells.Hematology(Amsterdam,Netherlands)18,348-351(2013)；Bam,R.,等人GPRC5D Isa Cell Surface Plasma Cell Marker Whose Expression Is High In Myeloma Cellsand Reduced Following Coculture With Osteoclasts.Blood 122,3099(2013))。已显示更高的mRNA表达与更差的总体存活相关联(Atamaniuk,J.,等人Overexpression of Gprotein-coupled receptor 5D in the bone marrow is associated with poorprognosis in patients with multiple myeloma.European journal of clinicalinvestigation 42,953-960(2012))。来自MM患者的骨髓抽吸物的表面染色显示出浆细胞特异性染色(Bam,R.,等人GPRC5D Is a Cell Surface Plasma Cell Marker WhoseExpression Is High In Myeloma Cells and Reduced Following Coculture WithOsteoclasts.Blood 122,3099(2013))。鉴于GPRC5D在多发性骨髓瘤中的显著作用，需要识别GPRC5D的抗体和使用这些试剂的方法。
发明内容
本发明公开的主题提供结合G-蛋白偶联受体(例如GPRC5D)的人抗体以及使用该抗体的方法。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含含有与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358的氨基酸序列至少大约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的重链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含含有与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359的氨基酸序列至少大约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的轻链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含：(a)包含与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358的氨基酸序列至少大约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的重链可变区；和(b)含有与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359的氨基酸序列至少大约80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的轻链可变区，其中所述抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含重链可变区和轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区选自：(i)包含具有与SEQ ID NO:1所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:2所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(ii)包含具有与SEQ ID NO:5所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:6所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(iii)包含具有与SEQ ID NO:9所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:10所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(iv)包含具有与SEQ ID NO:13所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:14所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(v)包含具有与SEQ ID NO:17所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:18所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(vi)包含具有与SEQ ID NO:21所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:22所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(vii)包含具有与SEQ ID NO:25所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:26所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(viii)包含具有与SEQ ID NO:29所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQID NO:30所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(ix)包含具有与SEQ ID NO:33所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:34所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(x)包含具有与SEQ ID NO:37所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:38所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xi)包含具有与SEQ ID NO:41所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:42所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xii)包含具有与SEQ ID NO:45所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:46所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xiii)包含具有与SEQ ID NO:49所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:50所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xiv)包含具有与SEQ ID NO:53所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:54所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xv)包含具有与SEQ IDNO:57所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:58所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xvi)包含具有与SEQ ID NO:61所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:62所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xvii)包含具有与SEQ ID NO:65所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:66所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有与SEQ ID NO:69所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:70所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xix)包含具有与SEQ ID NO:73所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQID NO:74所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有与SEQ ID NO:77所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:78所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有与SEQ ID NO:81所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ IDNO:82所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxii)包含具有与SEQ ID NO:85所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:86所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiii)包含具有与SEQ ID NO:89所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:90所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiv)包含具有与SEQ ID NO:93所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:94所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxv)包含具有与SEQ ID NO:274所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:275所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvi)包含具有与SEQ ID NO:286所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:287所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvii)包含具有与SEQ ID NO:298所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:299所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxviii)包含具有与SEQID NO:310所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:311所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxix)包含具有与SEQ ID NO:322所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:323所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxx)包含具有与SEQ ID NO:334所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:335所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；(xxxi)包含具有与SEQ ID NO:346所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:347所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区；或者(xxxii)包含具有与SEQ ID NO:358所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有与SEQ ID NO:359所示序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的序列的氨基酸的轻链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，该抗体或抗原结合片段包含：(i)包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ii)包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iii)包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iv)包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；(v)包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vi)包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vii)包含具有SEQ IDNO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；(viii)包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ix)包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；(x)包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xi)包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xii)包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiii)包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiv)包含具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xv)包含具有SEQ IDNO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvi)包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvii)包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xix)包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxii)包含具有SEQ ID NO:85所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiii)包含具有SEQID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiv)包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxv)包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:275所示的氨基酸的轻链可变区；(xxvi)包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvii)包含具有SEQ ID NO:298所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxviii)包含具有SEQ IDNO:310所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxix)包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxx)包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxxi)包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的轻链可变区；或者(xxxii)包含具有SEQ ID NO:358所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的轻链可变区。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含含有选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358及其保守性修饰的氨基酸序列的重链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含含有选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359及其保守性修饰的氨基酸序列的轻链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含：包含选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358及其保守性修饰的氨基酸序列的重链可变区；和包含选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359及其保守性修饰的氨基酸序列的轻链可变区，其中该抗体或其抗原结合片段特异性地结合人GPRC5D。
本发明公开的主题还提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含含有CDR1、CDR2和CDR3结构域的重链可变区；和含有CDR1、CDR2和CDR3结构域的轻链可变区，其中重链可变区和轻链可变区CDR3结构域选自：
(i)包含具有SEQ ID NO:126所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:129所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ii)包含具有SEQ ID NO:132所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:135所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(iii)包含具有SEQ ID NO:138所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:141所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:144所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:147所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(v)包含具有SEQ ID NO:150所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:153所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vi)包含具有SEQ ID NO:156所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:159所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vii)包含具有SEQ ID NO:162所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:165所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(viii)包含具有SEQ ID NO:168所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:171所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ix)包含具有SEQ ID NO:174所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:177所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(x)包含具有SEQ ID NO:180所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:183所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xi)包含具有SEQ ID NO:186所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:189所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xii)包含具有SEQ ID NO:192所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:195所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:198所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:201所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:204所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:207所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xv)包含具有SEQ ID NO:210所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:213所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:216所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:219所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:222所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:225所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:228所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:231所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xix)包含具有SEQ ID NO:234所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:237所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xx)包含具有SEQ ID NO:240所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:243所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:246所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:249所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:252所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:255所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:258所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:261所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:264所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:267所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxv)包含具有SEQ ID NO:270所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:273所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxvi)包含具有SEQ ID NO:282所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:285所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:294所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:297所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:305所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:308所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:318所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:321所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:330所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:333所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:342所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:345所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3；以及
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:354所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR3；和包含具有SEQ ID NO:357所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR3，
其中该抗体或其抗原结合部分特异性地结合GPRC5D。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分的重链可变区和轻链可变区CDR2结构域选自：
(i)包含具有SEQ ID NO:125所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:128所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(ii)包含具有SEQ ID NO:131所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:134所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:137所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:140所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(iv)包含具有SEQ ID NO:143所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:146所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(v)包含具有SEQ ID NO:149所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:152所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(vi)包含具有SEQ ID NO:155所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:158所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(vii)包含具有SEQ ID NO:161所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:164所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(viii)包含具有SEQ ID NO:167所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:170所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(ix)包含具有SEQ ID NO:173所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:176所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(x)包含具有SEQ ID NO:179所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:182所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xi)包含具有SEQ ID NO:185所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:188所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xii)包含具有SEQ ID NO:191所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:194所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:197所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:200所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:203所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:206所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xv)包含具有SEQ ID NO:209所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:212所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:215所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:218所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:221所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:224所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:227所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:230所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xix)包含具有SEQ ID NO:233所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:236所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xx)包含具有SEQ ID NO:239所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:242所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:245所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:248所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:251所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:254所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:257所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:260所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:263所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:266所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxv)包含具有SEQ ID NO:269所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:272所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxvi)包含具有SEQ ID NO:281所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:284所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:293所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:296所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:304所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:307所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:317所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:320所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:329所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:332所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:341所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:344所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2；以及
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:353所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:356所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR2，
其中该抗体或其抗原结合部分特异性地结合GPRC5D。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分的重链可变区和轻链可变区CDR1结构域选自：
(i)包含具有SEQ ID NO:124所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:127所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:130所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:133所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(iii)包含具有SEQ ID NO:136所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:139所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(iv)包含具有SEQ ID NO:142所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:145所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:148所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:151所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(vi)包含具有SEQ ID NO:154所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:157所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(vii)包含具有SEQ ID NO:160所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:163所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(viii)包含具有SEQ ID NO:166所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:169所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(ix)包含具有SEQ ID NO:172所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:175所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(x)包含具有SEQ ID NO:178所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:181所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xi)包含具有SEQ ID NO:184所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:187所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xii)包含具有SEQ ID NO:190所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:193所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:196所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:199所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:202所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:205所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xv)包含具有SEQ ID NO:208所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:211所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:214所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:217所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:220所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:223所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:226所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:229所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xix)包含具有SEQ ID NO:232所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:235所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xx)包含具有SEQ ID NO:238所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:241所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:244所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:247所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:250所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:253所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:256所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:259所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:262所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:265所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxv)包含具有SEQ ID NO:268所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:271所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxvi)包含具有SEQ ID NO:280所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:283所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:292所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:295所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:303所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:306所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:316所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:319所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:328所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:331所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:340所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:343所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1；和
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:352所示序列及其保守性修饰的氨基酸的重链可变区CDR1；和包含具有SEQ ID NO:355所示序列及其保守性修饰的氨基酸的轻链可变区CDR1，
其中该抗体或其抗原结合部分特异性地结合GPRC5D。
此外，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:125所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(ii)包含具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:131所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iii)包含具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(v)包含具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(vi)包含具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(vii)包含具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(viii)包含具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(ix)包含具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(x)包含具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xi)包含具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xii)包含具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:191所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:192所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:196所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:197所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:198所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:202所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:203所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:204所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xv)包含具有SEQ ID NO:208所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:209所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:222所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:226所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:227所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:228所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xix)包含具有SEQ ID NO:232所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:233所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:234所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xx)包含具有SEQ ID NO:238所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:239所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:240所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:244所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:245所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:246所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:250所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:251所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:252所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；和
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:256所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:257所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:258所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:262所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:264所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxv)包含具有SEQ ID NO:268所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:269所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:270所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxvi)包含具有SEQ ID NO:280所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:281所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:282所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:292所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:293所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:294所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:303所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:304所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:305所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:316所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:317所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:318所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:328所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:329所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:330所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:340所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:341所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:342所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；或者
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:352所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:353所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:354所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
其中该抗体或其抗原结合部分特异性地结合GPRC5D。
此外，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:129所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ii)包含具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:134所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含SEQ ID NO:135的轻链可变区CDR3；
(iii)包含具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含SEQ IDNO:146的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(v)包含具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vi)包含具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vii)包含具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(viii)包含具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ix)包含具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(x)包含具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xi)包含具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xii)包含具有SEQ ID NO:193所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:194所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:195所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:199所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:200所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:201所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:206所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:207所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xv)包含具有SEQ ID NO:211所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:212所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:223所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:229所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:230所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:231所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xix)包含具有SEQ ID NO:235所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:236所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:237所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xx)包含具有SEQ ID NO:241所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:242所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:243所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
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(xxii)包含具有SEQ ID NO:253所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:254所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:255所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:259所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:250所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:261所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；或者
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:266所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:267所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
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(xxvi)包含具有SEQ ID NO:283所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:284所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:285所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:295所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:296所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:297所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:306所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:307所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:308所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:319所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:320所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:321所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:331所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:332所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:333所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:343所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:344所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:345所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；或者
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:355所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:356所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:357所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3，
其中该抗体或其抗原结合部分特异性地结合GPRC5D。
本发明公开的主题还提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:125所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ii)包含具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:131所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(iii)包含具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(v)包含具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vi)包含具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(vii)包含具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(viii)包含具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(ix)包含具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(x)包含具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xi)包含具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xii)包含具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:191所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:192所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:193所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:194所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:195所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:196所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:197所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:198所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:199所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:200所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:201所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:202所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:203所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:204所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:206所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:207所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xv)包含具有SEQ ID NO:208所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:209所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:211所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:212所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:222所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:223所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:226所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:227所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:228所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:229所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:230所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:231所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xix)包含具有SEQ ID NO:232所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:233所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:234所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:235所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:236所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:237所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xx)包含具有SEQ ID NO:238所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQID NO:239所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:240所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:241所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:242所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:243所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:244所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:245所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:246所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:247所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:248所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:249所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:250所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:251所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:252所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:253所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:254所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:255所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:256所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:257所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:258所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:259所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:260所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:261所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxiv)包含具有SEQ ID NO:262所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:264所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:266所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:267所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxv)包含具有SEQ ID NO:268所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:269所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:270所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:271所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:272所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:273所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxvi)包含具有SEQ ID NO:280所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:281所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:282所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:283所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:284所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:285所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxvii)包含具有SEQ ID NO:292所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:293所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:294所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:295所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:296所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:297所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxviii)包含具有SEQ ID NO:303所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:304所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:305所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:306所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:307所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ IDNO:308所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxix)包含具有SEQ ID NO:316所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:317所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:318所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:319所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:320所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:321所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxx)包含具有SEQ ID NO:328所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:329所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:330所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:331所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:332所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:333所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；
(xxxi)包含具有SEQ ID NO:340所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:341所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:342所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:343所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:344所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:345所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3；或者
(xxxii)包含具有SEQ ID NO:352所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:353所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；包含具有SEQ ID NO:354所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；包含具有SEQ ID NO:355所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；包含具有SEQ ID NO:356所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和包含具有SEQ ID NO:357所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
此外，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，其与任意所公开的抗体交叉竞争结合人GPRC5D。在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，其与任意本文公开的抗体的分离抗体或其抗原结合部分结合人GPRC5D上的相同表位。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，其与参考抗体或其参考抗原结合部分交叉竞争结合人GPRC5D，该参考抗体或其参考抗原结合部分包含：(i)包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ IDNO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ii)包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iii)包含具有SEQID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iv)包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；(v)包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vi)包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vii)包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；(viii)包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ix)包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；(x)包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xi)包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xii)包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiii)包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiv)包含具有SEQ IDNO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xv)包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvi)包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvii)包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xix)包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxii)包含具有SEQID NO:85所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiii)包含具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiv)包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxv)包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvi)包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvii)包含具有SEQ IDNO:298所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的轻链可变区；或者(xxii)包含具有SEQ ID NO:358所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的轻链可变区。
此外，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，其与参考抗体或其参考抗原结合部分结合人GPRC5D上的相同表位，该参考抗体或其参考抗原结合部分包含：(i)包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ii)包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iii)包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；(iv)包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；(v)包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vi)包含具有SEQ IDNO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；(vii)包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；(viii)包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；(ix)包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；(x)包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xi)包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xii)包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiii)包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xiv)包含具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xv)包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvi)包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xvii)包含具有SEQID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xix)包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxii)包含具有SEQ ID NO:85所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiii)包含具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ IDNO:90所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxiv)包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxv)包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvi)包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxvii)包含具有SEQ ID NO:298所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xviii)包含具有SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQID NO:311所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xx)包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的轻链可变区；(xxi)包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的轻链可变区；或者(xxii)包含具有SEQ IDNO:358所示序列的氨基酸的重链可变区，和包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的轻链可变区。
在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97所示氨基酸序列的GPRC5D。在某些实施方式中，本公开的抗体以大约1×10-9M至大约1×10-8M的结合亲和力(Kd)结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，本公开的抗体结合一个、两个、三个或四个选自以下的表位区域：包含SEQ ID NO:97的氨基酸1-27的N-端区域中的表位区域、包含SEQ ID NO:97的氨基酸85-93的ECL1区域中的表位区域、包含SEQ ID NO:97的氨基酸145-167的ECL2区域中的表位区域以及包含SEQ ID NO:97的氨基酸226-239的ECL3区域中的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸16-23的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸15-23的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸16-25的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸10-17的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸5-17的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸85-95的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-164的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-167的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸230-237的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸229-237的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸230-243的表位区域。在某些实施方式中，本公开的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸227-237的表位区域。
本发明公开的主题还提供分离的抗体或其抗原结合片段，该分离的抗体或其抗原结合片段包含选自SEQ ID NO:100-123、276、288、300、312、324、336、348和360的氨基酸序列。
在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段包含人可变区框架区。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段是全人的或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合片段是嵌合抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该抗体或其抗原结合部分是人源化抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该抗体的抗原结合片段是Fab、Fab’、F(ab’)2、Fv或者单链Fv(scFv)。
本发明公开的主题还提供一种组合物，其包含本文公开的抗体或其抗原结合片段以及药学可接受的载体。
另外，本发明公开的主题提供一种免疫偶联物，其包含连接至治疗剂的本文公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该治疗剂是药物、细胞毒素或放射性同位素。本发明公开的主题还提供一种组合物，其包含这样的免疫偶联物和药学可接受的载体。
此外，本发明公开的主题提供一种双特异性分子，其包含连接至第二功能部分(moiety)的本文公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该第二功能部分具有不同于该抗体或其抗原结合片段的结合特异性。在某些实施方式中，该第二功能部分对免疫细胞具有结合特异性。在某些实施方式中，该第二功能部分对CD3具有结合特异性。
本发明公开的主题还提供一种组合物，其包含这样的双特异性分子和药学上可接受的载体。
另外，本发明公开的主题提供编码本文公开的抗体或其抗原结合片段的分离核酸，包含这样的核酸分子的表达载体以及包含这样的表达载体的宿主细胞。
此外，本发明公开的主题提供检测全细胞或组织中的GPRC5D的方法。在某些实施方式中，该方法包括：将细胞或组织与本文公开的抗体或其抗原结合片段接触，其中所述抗体或其抗原结合片段包含可检测标记；以及通过测量与所述细胞或组织相关联的可检测标记的量，确定与所述细胞或组织结合的标记的抗体或其抗原结合片段的量，其中结合的抗体或其抗原结合片段的量表明所述细胞或组织中GPRC5D的量。
此外，本发明公开的主题提供治疗受试者的肿瘤的方法。在某些实施方式中，该方法包括：向受试者施用有效量的本文公开的抗体或其抗原结合片段，从而诱发受试者中肿瘤细胞死亡。在某些实施方式中，该方法降低肿瘤细胞的数量。在某些实施方式中，该方法减小肿瘤尺寸。在某些实施方式中，该方法根除受试者的肿瘤。在某些实施方式中，受试者是人。
另外，本发明公开的主题提供本文公开的抗体或抗原结合片段用于治疗肿瘤的用途，以及本文公开的抗体或其抗原结合片段，其用于治疗受试者的肿瘤。
此外，本发明公开的主题提供用于治疗肿瘤的试剂盒，其包含本文公开的抗体或其抗原结合片段。在某些实施方式中，该试剂盒还包含使用该抗体或其抗原结合片段治疗患有肿瘤的受试者的书面说明书。
在某些实施方式中，肿瘤是多发性骨髓瘤或瓦氏巨球蛋白血症(Waldenstrom’sMacroglobulinemia)。在某些实施方式中，肿瘤是多发性骨髓瘤。
附图说明
可以结合附图理解以下以实例方式给出的具体实施方式，但并不意在将本发明局限于所描述的具体的实施方式。
图1A-1D描绘各种组织中的人GPRC5D表达。
图2示出CLIPS技术。CLIPS反应发生在CLIPS骨架的溴基团和半胱氨酸的巯基侧链之间。反应在温和条件下快速且特异性进行。使用此精妙化学，将天然蛋白质序列转化成具有一系列结构的CLIPS构建物。从左至右：两个不同的单T2环、T3双环、共轭T2+T3环、稳定的β片层和稳定的α螺旋(Timmerman等人,J.Mol.Recognit.2007；20:283-29)。
图3示出组合CLIPS文库筛选。含有不连续构象表位的靶蛋白(左)转化为矩阵文库(中间)。组合肽在专用小卡上合成并化学作用转化成空间限定的CLIPS构建物(右)。
图4描绘带T3环的CLIPSTM构建物。
图5A-5D示出热度图技术。(i)组合肽的表格，有两个表示为“环1”和“环2”的子序列。(ii)展示为矩阵的A的数据。(iii)热度图表示法的彩条指示。(iv)来自A的数据的热度图可视化。图5A按出现顺序分别公开了SEQ ID NO:393-402、382和403-407。图5B公开了按出现顺序分别为SEQ ID NO:408-411的“环1”序列，和按出现顺序分别为SEQ ID NO:412-415的“环2”序列。图5D公开了按出现顺序分别为SEQ ID NO:408-411的“环1”序列，和按出现顺序分别为SEQ ID NO:412-415的“环2”序列。
图6示出针对ET150-2记录的强度分布。在记录到单肽信号的高度上从该肽的起始残基到末尾残基划线。
图7示出在高严格条件下针对ET150-5记录的数据的热度图分析。
图8示出针对ET150-18记录的强度分布。
图9示出针对ET150-8记录的强度分布。
图10描绘包含七个跨膜螺旋(TM)和3个细胞外区域(ECL)的GPCR的示意图。用彩色箭头描绘每个抗体的结合位点。
图11描绘针对各样品记录的所有数据的散点图分析。斜线是统计学数据分布。
图12描绘抗-GPRC5D抗体的FACS分析。
图13描绘抗-GPRC5D抗体的FACS分析。
图14描绘抗-GPRC5D/CD3双特异性抗体的FACS分析。
具体实施方式
本文引用的所有出版物、专利和其他参考文献，其全部内容并入本公开以供参考。
在本发明公开主题的实践中，使用分子生物学、微生物学、细胞生物学、生物化学和免疫学中的许多常规技术，它们处于本领域技术人员的能力范围内。这些技术更详细地描述于例如Molecular Cloning:a Laboratory Manual第三版,J.F.Sambrook和D.W.Russell编著Cold Spring Harbor Laboratory Press 2001；RecombinantAntibodies for Immunotherapy,Melvyn Little编著Cambridge University Press2009；Oligonucleotide Synthesis”(M.J.Gait编著,1984)；“Animal Cell Culture”(R.I.Freshney编著,1987)；Methods in Enzymology”(Academic Press,Inc.)；“CurrentProtocols in Molecular Biology”(F.M.Ausubel等人编著,1987,及定期更新)；“PCR:ThePolymerase Chain Reaction”,(Mullis等人编著,1994)；“APractical Guide toMolecular Cloning”(Perbal Bernard V.,1988)；“Phage Display:A LaboratoryManual”(Barbas等人,2001)。本领域技术人员熟知并遵循的这些参考文献和其他包含标准方案的参考资料的内容，包括制造商的说明书，作为本公开的一部分并入本文以供参考。
定义
在以下描述中，关于术语使用将遵循某些惯例。总体上，本文使用的术语意在按照与本领域技术人员已知的那些术语的含义相一致的方式解释。
“抗原结合蛋白”是包含抗原结合区域或抗原结合部分的蛋白质或多肽，即其对与之结合的另一个分子具有强亲和力。抗原结合蛋白包括抗体、嵌合抗原受体(CAR)和融合蛋白。
“抗体”作为本领域已知的那些术语，指免疫系统的抗原结合蛋白。如本文提到的术语“抗体”包括具有抗原结合区域的完整的全长抗体以及其保留“抗原结合部分”或“抗原结合区域”的任何片段、或其单链例如单链可变片段(scFv)。天然存在的“抗体”是包含由二硫键相互连接的至少两条重(H)链和两条轻(L)链的糖蛋白。每条重链包含重链可变区(本文中缩写为VH)和重链恒定(CH)区。重链恒定区包含3个结构域，CH1、CH2和CH3。每条轻链包含轻链可变区(本文中缩写为VL)和轻链恒定CL区。轻链恒定区包含一个结构域CL。VH和VL区可以进一步再划分为超变区，命名为互补决定区(CDR)，其间插入更保守的区域，名为框架区(FR)。每个VH和VL从氨基-末端至羧基-末端由按以下顺序：FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3、FR4排列的3个CDR和4个FR组成。重链的可变区和轻链的可变区含有与抗原相互作用的结合结构域。抗体的恒定区可以介导免疫球蛋白与宿主组织或因子(包括免疫系统的各种细胞(例如，效应细胞)和经典补体系统的第一组分(C1 q))结合。
如本文使用的术语“人抗体”意在包括具有其中框架区和CDR区二者都衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区的抗体。此外，如果抗体含有恒定区，那么该恒定区也衍生自该人种系免疫球蛋白序列。本发明公开的主题的人抗体可包含并非由人种系免疫球蛋白序列编码的氨基酸残基(例如通过体外随机或定点诱变或者通过体内体细胞突变而引入的突变)。
如本文使用的术语“单克隆抗体”是指从基本上同种的抗体群体获得的抗体，即，包含在该群体中的各个抗体是相同的和/或结合相同的表位，除了可能的变体抗体之外(例如，含有天然存在的突变或在产生单克隆抗体制备物期间出现的)，这类变体通常以微小的量存在。与一般包含针对不同决定簇(表位)的不同抗体的多克隆抗体制备物相反，单克隆抗体制备物中的每个单克隆抗体针对抗原上的单一决定簇。因此，修饰语“单克隆的”指示该抗体的特征为从基本上同种的抗体群体获得，并且不解释为需要通过任何特定方法产生该抗体。例如，可以通过多种技术产生将根据本发明公开主题使用的单克隆抗体，该技术包括但不限于杂交瘤方法、重组DNA方法、噬菌体展示方法和利用含有全部或部分的人免疫球蛋白基因座的转基因动物的方法，本文中描述了用于产生单克隆抗体的这类方法和其他示例性方法。
如本文使用的术语“重组人抗体”包括通过重组方法制备、表达、构建或分离的所有人抗体，比如(a)从对于人免疫球蛋白基因为转基因或转染色体的动物(例如小鼠)或者从由此制备的杂交瘤中分离的抗体(下文进一步描述)，(b)从经转化以表达该人抗体的宿主细胞例如从转染瘤中分离的抗体，(c)从重组、组合人抗体文库中分离的抗体，以及(d)通过任何其它手段制备、表达、构建或分离的抗体，该手段包括将人免疫球蛋白基因序列剪接至其它DNA序列。这样的重组人抗体具有其中框架区和CDR区衍生自人种系免疫球蛋白序列的可变区。然而，在某些实施方式中，这样的重组人抗体可以经过体外诱变(或者当使用人Ig序列的转基因动物时，经过体内体细胞诱变)，因而该重组抗体的VH区和VL区的氨基酸序列尽管衍生自人种系的VH和VL序列并与之相关，但是可能并非天然存在于体内的人抗体种系库中的序列。
术语“人源化抗体”意指已经将其中衍生自另一哺乳动物物种(比如小鼠)种系的CDR序列移植到人框架序列上的抗体。可在人框架序列内做出其他框架区修饰。
术语“嵌合抗体”意指其中可变区序列衍生自一种物种且恒定区序列衍生自另一物种的抗体，比如其中可变区序列衍生自小鼠抗体且恒定区序列衍生自人抗体的抗体。
如本文使用的“特异性地结合人GPRC5D”的抗体意指以5×10-7M或更低、1×10-7M或更低、5×10-8M或更低、1×10-8M或更低、5×10-9M或更低、1×10-9M或更低、5×10-10M或更低、或1×10-10M或更低的KD结合人GPRC5D的抗体。
对于结合抗原例如GRPC5D而言，与参考抗体“竞争结合的抗体”或“交叉竞争结合的抗体”是指在竞争试验中以50％或更多来阻断参考抗体与抗原(例如GRPC5D)的结合的抗体，反过来，该参考抗体在竞争试验中以50％或更多来阻断该抗体与抗原(例如GRPC5D)的结合。示例性的竞争试验描述于“Antibodies”,Harlow and Lane(Cold Spring HarborPress,Cold Spring Harbor,NY)。
如本文使用的“同种型”是指由重链恒定区基因编码的抗体类别(例如IgM或IgG1)。
短语“识别抗原的抗体”和“抗原特异性抗体”在本文可与术语“特异性地结合抗原(例如GPRC5D多肽)的抗体”互换使用。
如本文使用的抗体的术语抗体的“抗原结合部分”或“抗原结合区域”是指结合抗原并且赋予抗体抗原特异性的抗体的区域或部分；抗原结合蛋白例如抗体的片段包含保留特异性地结合抗原(例如GPRC5D多肽)的能力的抗体的一个或多个片段。已显示，抗体的抗原结合功能可通过全长抗体的片段来实施。术语抗体的“抗体片段”所涵盖的抗原结合片段的实例包括由VL、VH、CL和CH1结构域组成的单价片段Fab片段；包含通过铰链区的二硫桥连接的两个Fab片段的二价片段F(ab)2片段；由VH和CH1结构域组成的Fd片段；由抗体的单臂的VL和VH结构域组成的Fv片段；由VH结构域组成的dAb片段(Ward等人，1989Nature 341:544-546)；以及分离的互补决定区(CDR)。
此外，尽管Fv片段的两个结构域VL和VH由分开的基因编码，但可使用重组方法，通过合成接头将它们联接，该接头使得它们能够作为其中VL和VH区配对以形成单价分子的单一蛋白质链制备。这些称为单链Fv(scFv)；参见例如，Bird等人，1988Science 242:423-426；和Huston等人，1988Proc.Natl.Acad.Sci.85:5879-5883。这些抗体片段使用本领域技术人员已知的常规技术来获得，并且以与针对完整抗体所使用的方式相同的方式就功用进行片段筛选。
“分离的抗体”或“分离的抗原结合蛋白”是已经被鉴定并且从其天然环境的组分中分离和/或回收的那些。“合成抗体”或“重组抗体”通常使用本领域技术人员已知的重组技术或者使用肽合成技术产生。
术语“GPRC5D”和“G-蛋白偶联受体C家族5组D成员”可互换地使用，并且包括人GPRC5D的变体、亚型、同源种类和与GPRC5D(例如人GPRC5D)具有至少一个共同表位的类似物。示例性的人GPRC5D序列可见于GenBank Protein Accession No:NP_061124.1。
如本文使用的术语“单链可变片段”或“scFv”是免疫球蛋白(例如小鼠或人)的重链(VH)和轻链(VL)的可变区共价连接形成VH::VL异二聚体的融合蛋白。重链(VH)和轻链(VL)或者直接联接或者通过编码肽的接头(例如10、15、20、25个氨基酸)联接，该接头将VH的N-末端与VL的C-末端连接，或者将VH的C-末端与VL的N-末端连接。接头通常出于柔性而富含甘氨酸，以及出于溶解性而富含丝氨酸或苏氨酸。接头可将抗体或其抗原结合片段的重链可变区与轻链可变区连接。接头的非限制性实例在Shen等人.,Anal.Chem.80(6):1910-1917(2008)和WO 2014/087010中公开，其全部内容并入本文以供参考。在某些实施方式中，接头是G4S接头(SEQ ID NO:365)。
在某些实施方式中，接头包含具有如下文所提供的SEQ ID NO:309所示序列的氨基酸：
Figure GDA0002884985310000491
在某些实施方式中，编码SEQ ID NO:309的氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:364所示，其提供如下：
Figure GDA0002884985310000492
在一个非限制性的实例中，接头包含具有如下文所提供的SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸：
Figure GDA0002884985310000493
在某些实施方式中，编码SEQ ID NO:98的氨基酸序列的核酸序列如SEQ ID NO:99所示，其提供如下：
Figure GDA0002884985310000494
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGS[SEQ ID NO:365]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列SGGSGGS[SEQ ID NO:366]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGS[SEQ ID NO:367]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGS[SEQ ID NO:368]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGSGGGGGGGS[SEQ ID NO:369]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:370]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ IDNO:371]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:372]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSGGGGS[SEQ ID NO:373]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列EPKSCDKTHTCPPCP[SEQ ID NO:374]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GGGGSGGGSEPKSCDKTHTCPPCP[SEQ IDNO:375]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列ELKTPLGDTTHTCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPEPKSCDTPPPCPRCPE PKSCDTPP PCPRCP[SEQ ID NO:376]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列GSGSGS[SEQ ID NO:377]的氨基酸。
在某些实施方式中，接头包含具有以下序列AAA[SEQ ID NO:378]的氨基酸。
尽管去除了恒定区并引入了接头，scFv蛋白保留了原始免疫球蛋白的特异性。单链Fv多肽抗体可以由包含VH和VL编码序列的核酸表达，如Huston等人所述(Proc.Nat.Acad.Sci.USA，85：5879～5883，1988)。还可参见美国专利号5,091,513、5,132,405和4,956,778；以及美国专利公开号20050196754和20050196754。具有抑制活性的拮抗性scFv已有描述(参见，例如，Zhao等人，Hyrbidoma(Larchmt)200827(6)：455～51；Peter等人，J Cachexia Sarcopenia Muscle 2012年8月12日；Shieh等人，J Imunol 2009 183(4)：2277～85；Giomarelli等人，Thromb Haemost 2007 97(6)：955～63；Fife等人，J ClinInvst 2006 116(8)：2252～61；Brocks等人，Immunotechnology 1997 3(3)：173～84；Moosmayer等人，Ther Immunol 1995 2(10：31～40)。具有刺激活性的激动性scFv已有描述(参见，例如，Peter等人，J Bioi Chern 200325278(38)：36740～7；Xie等人，Nat Biotech1997 15(8)：768～71；Ledbetter等人，Crit Rev Immunol 1997 17(5-6)：427～55；Ho等人，BioChim Biophys Acta 2003 1638(3)：257～66)。
本文使用的“F(ab)”是指结合抗原但是是单价的并且不具有Fc部分的抗体结构的片段，例如，由木瓜蛋白酶消化的抗体产生两个F(ab)片段和一个Fc片段(例如，重(H)链恒定区；不结合抗原的Fc区)。
本文使用的“F(ab’)2”是指由胃蛋白酶消化完整IgG抗体产生的抗体片段，其中该片段具有两个抗原结合(ab’)(二价)区，其中每个(ab’)区包含两条分开的氨基酸链，H链的一部分通过S-S键与轻(L)链连接用于结合抗原，其中H链的剩余部分连接在一起。“F(ab’)2”片段可以分裂成两个单独的Fab’片段。
本文使用的术语“载体”是指任何遗传元件，比如质粒、噬菌体、转座子、粘粒、染色体、病毒、病毒粒子等，其当关联有适当的控制元件时能够复制，并且其可以将基因序列转移到细胞中。因此，该术语包括克隆和表达载体，以及病毒载体和质粒载体。
“CDR”定义为抗体的互补决定区氨基酸序列，其是免疫球蛋白重链和轻链的超变区。参见，例如Kabat等人,Sequences of Proteins of Immunological Interest,4thU.S.Department of Health and Human Services,National Institutes of Health(1987)。如本文使用的术语“高变区”或“HVR”是指抗体可变结构域中在序列上高变(“互补决定区”或“CDR”)和/或形成结构上限定的环(“高变环”)和/或含有接触抗原的残基(“抗原接触”)的每个区域。通常，抗体在可变区中包含三个重链CDR或CDR区和三个轻链CDR或CDR区。CDR提供用于抗体与抗原或表位结合的接触残基中的大多数。
“分离的抗体”是指已经与其天然环境的组分分开的抗体。在某些实施方式中，将抗体纯化至大于95％或99％的纯度，如通过例如电泳(例如SDS-PAGE、等电聚焦(IEF)、毛细管电泳)或层析(例如离子交换或反相HPLC)所测定的。对于用于评估抗体纯度的方法的综述参见例如Flatman等人,J.Chromatogr.B 848:79-87(2007)。
“分离的核酸”指已经与其天然环境的组分分开的核酸分子。分离的核酸包括通常含有核酸分子的细胞中含有的核酸分子，但是核酸分子在染色体外或在与其天然染色体位置不同的染色体位置处存在。
“编码抗体的分离核酸”(包括参照特定抗体例如抗KLB抗体)是指一个或多个编码抗体重链和轻链(或其片段)的核酸分子，包括在单一载体、分开载体中的这类核酸分子，以及在宿主细胞的一个或多个位置处存在的这类核酸分子。
如本文使用的术语“载体”是指能够增殖与其连接的另一种核酸的核酸分子。该术语包括作为自身复制型核酸结构的载体以及并入已经引入该载体的宿主细胞的基因组中的载体。某些载体能够指导与其可操作连接的核酸的表达。此类载体在本文中称为“表达载体”。
“免疫偶联物”是与一个或多个异源分子缀合的抗体，该异源分子包括但不限于细胞毒性剂。
试剂例如抗-GPRC5D抗体或其抗原结合片段、包含其的药物组合物的“有效量”是指在剂量上并且对于必需的时段有效实现期望的治疗或预防结果例如治疗肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的量。
“个体”或“受试者”是哺乳动物。哺乳动物包括但不限于驯养动物(例如牛、羊、猫、狗和马)、灵长类动物(例如人和非人灵长类动物比如猴)、兔和啮齿类动物(例如小鼠和大鼠)。在某些实施方式中，个体或受试者是人。
如本文使用的“治疗/处理”(及其语法变型)指试图改变所治疗个体的天然过程的临床干预，并且可以为了预防或者在临床病理学的过程期间实施。期望的治疗效果包括但不限于预防疾病的发生或复发、减轻症状、减少疾病的任何直接或间接病理后果、预防转移、降低疾病进展速率、改善或减轻疾病状态、以及消退或改善的预后。在一些实施方式中，使用本发明公开主题的抗体来延迟疾病例如肿瘤(多发性骨髓瘤)的形成或减缓疾病的进展。
本文使用的术语“大约(about)”或“大约(approximately)”是指在由本领域普通技术人员确定的特定值的可接受误差范围内，这将部分地取决于如何测量或确定该值，即测量系统的局限性。例如，按照本领域的惯例，“大约”可以表示在3个或多于3个标准偏差内。或者，“大约”可以表示给定值的最多20％、优选最多10％、更优选最多5％、再更优选最多1％的范围。或者，特别是关于生物系统或过程，该术语可以表示在数值的数量级内、优选在5倍以内、更优选在2倍以内。
如本文所述，除非另外指明，任何浓度范围、百分比范围、比率范围或整数范围应理解为包括在列举范围内的任何整数值，并且适当时包括其分数(比如整数的十分之一和百分之一)。
抗-GPRC5D抗体
本发明公开主题的抗体特征在于抗体的特定功能特征或特性。例如，抗体特异性地结合GPRC5D(例如结合人GPRC5D并且可与来自其他物种比如小鼠的GPRC5D交叉反应)。在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体以高亲和力结合GPRC5D，例如Kd为1×10-7M或更小，例如大约1×10-8M或更小、大约1×10-9M或更小、或者大约1×10-10M或更小。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约1×10-10M至大约1×10-7M，例如大约1×10-10M至大约1×10-9M、1×10-9M至大约1×10-8M、或大约1×10- 8M至大约1×10-7M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约1×10-8M或更小。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约1×10-9M至大约1×10-8M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约1×10-9M至大约1.5×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约1.2×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约4×10-9M至大约5×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约5×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约4.8×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约8×10-9M至大约9×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约8×10-9M。在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的Kd为大约8.1×10-9M。
本发明公开主题的抗体的重链和轻链可以是全长的(例如抗体可包含至少一个(例如一个或两个)完整重链和至少一个(例如一个或两个)完整轻链)，或者可包括抗原结合部分(Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(“scFv”))。在某些实施方式中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE，特别地选自例如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更特别地为IgG1(例如人IgG1)。在另一个实施方式中，抗体轻链恒定区选自例如κ或λ，特别是κ。
1.单链可变片段(scFv)
在某些实施方式中，本发明公开的主题包括下述抗体，其具有的scFv序列与一个或多个恒定结构域融合以形成具有人免疫球蛋白的Fc区的抗体，从而产生二价蛋白质，使抗体的整体亲合力和稳定性增加。此外，Fc部分允许其他分子(包括但不限于荧光染料、细胞毒素、放射性同位素等)与抗体直接缀合，例如用于抗原定量研究中，以便固定抗体用于亲和力测量；用于治疗剂的靶向递送，以使用免疫效应细胞测试Fc介导的细胞毒性，以及许多其他应用。
本文呈现的结果突出本发明的抗体在靶向GRPC5D多肽时的特异性、灵敏性和功用。
本发明的分子基于使用噬菌体展示鉴定和选择单链可变片段(scFv)，其氨基酸序列赋予分子对于感兴趣GRPC5D多肽的特异性并且形成本公开的所有抗原结合蛋白的基础。因此，所述scFv可以用于设计一系列不同的“抗体”分子，包括例如全长抗体、其片段如Fab和F(ab’)2、微型抗体、融合蛋白(包括scFv-Fc融合物)、多价抗体(即，具有对于相同抗原或不同抗原的多于一种特异性的抗体)例如双特异性抗体、三特异性抗体(tribodies)等(见Cuesta等人，Multivalent antibodies:when design surpasses evolution.Trends inBiotechnology28:355-362 2010)。
在某些实施方式中，抗原结合蛋白是全长抗体，本发明公开主题的抗体的重链和轻链可以是全长的(例如抗体可包含至少一个并且优选两个完整的重链以及至少一个并且优选两个完整的轻链)，或者可包括抗原结合部分(Fab、F(ab’)2、Fv或单链Fv片段(“scFv”))。在某些实施方式中，抗体重链恒定区选自例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgM、IgA1、IgA2、IgD和IgE。在某些实施方式中，免疫球蛋白同种型选自IgG1、IgG2、IgG3和IgG4，更具体地为IgG1(例如人IgG1)。抗体同种型的选择可取决于所设计的抗体欲引发的免疫效应子功能。
在重组免疫球蛋白的构建中，对于各种免疫球蛋白同种型的恒定区合适的氨基酸序列和用于产生宽泛系列的抗体的方法对本领域技术人员是已知的。
在某些实施方式中，该抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有下文提供的氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或者其片段)。
Figure GDA0002884985310000551
人GPRC5D的N-末端区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸1-27。人GPRC5D的胞外环1(ECL1)区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸85-93。人GPRC5D的胞外环2(ECL2)区域具有SEQ IDNO:97的氨基酸145-167。人GPRC5D的胞外环3(ECL3)区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸226-239。
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:100的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-153 scFv(也称为“ET150-3 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表1的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的VH，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的VL，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的VH，和包含具有SEQ ID NO:2所示序列的氨基酸的VL，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:124所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:125所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:126所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:127所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:128所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:129所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:124所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:125所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:126所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:127所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:128所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:129所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表1所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:124所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸的VHCDR2，包含具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表1
Figure GDA0002884985310000571
Figure GDA0002884985310000581
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:101的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-166 scFv(也称为“ET150-16 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表2的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的VH，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的VL，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:6所示序列的氨基酸的VL，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:130所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:131所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:132所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:133所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:134所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:135所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:130所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:131所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:132所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:133所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:134所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:135所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表2所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ IDNO:130所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸的VHCDR2，包含具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表2
Figure GDA0002884985310000601
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:102的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-170 scFv(也称为“ET150-20 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表3的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的VH，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的VL，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:10所示序列的氨基酸的VL，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:136所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:137所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:138所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:139所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:140所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:141所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:136所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:137所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR2，包含具有SEQ ID NO:138所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQID NO:139所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:140所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:141所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表3所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表3
Figure GDA0002884985310000621
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:103的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-171 scFv(也称为“ET150-21 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表4的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的VH，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的VL，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:14所示序列的氨基酸的VL，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:142所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:143所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:144所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:145所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:146所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:147所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:142所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:143所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:144所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:145所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:146所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:147所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表4所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:145所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表4
Figure GDA0002884985310000641
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:104的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-175 scFv(也称为“ET150-25 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表5的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的VH，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的VL，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:18所示序列的氨基酸的VL，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:148所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:149所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:150所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:151所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:152所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:153所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:148所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:149所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:150所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:151所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:152所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:153所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表5所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:151所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表5
Figure GDA0002884985310000661
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:105的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-154 scFv(也称为“ET150-4 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表6的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:22所示序列的氨基酸的VL，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:154所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:155所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:156所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:157所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:158所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:159所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:154所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:155所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:156所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:157所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:158所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:159所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表6所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:157所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表6
Figure GDA0002884985310000681
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:106的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-156 scFv(也称为“ET150-6 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表7的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的VH，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的VL，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:26所示序列的氨基酸的VL，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:160所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:161所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:162所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:163所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:164所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:165所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:160所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:161所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:162所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:163所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:164所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:165所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表7所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:163所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表7
Figure GDA0002884985310000701
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:107的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-157 scFv(也称为“ET150-7 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表8的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的VH，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的VL，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的VL，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:166所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:167所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:168所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:169所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:170所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:171所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:166所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:167所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:168所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:169所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:170所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:171所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:169所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表8
Figure GDA0002884985310000721
Figure GDA0002884985310000731
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:108的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-159 scFv(也称为“ET150-9 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表9的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的VH，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的VL，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:34所示序列的氨基酸的VL，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:172所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:173所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:174所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:175所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:176所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR2，以及包含具有SEQ ID NO:177所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:172所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:173所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:174所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:175所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:176所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:177所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表9所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ IDNO:175所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的VL CDR2以及包含具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表9
Figure GDA0002884985310000741
Figure GDA0002884985310000751
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:109的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-160 scFv(也称为“ET150-10 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表10的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的VH，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的VL，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:37所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:38所示序列的氨基酸的VL，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:178所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:179所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:180所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:181所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:182所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:183所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:178所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:179所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:180所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:181所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:182所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:183所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表10所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表10
Figure GDA0002884985310000771
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:110的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-161 scFv(也称为“ET150-11 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表11的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的VH，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的VL，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:41所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:42所示序列的氨基酸的VL，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:184所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:185所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:186所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:187所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:188所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:189所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:184所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:185所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:186所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:187所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:188所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:189所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表11所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表11
Figure GDA0002884985310000791
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:111的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-162 scFv(也称为“ET150-12 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表12的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的VH，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的VL，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:45所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:46所示序列的氨基酸的VL，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:190所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:191所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:192所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:193所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:194所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:195所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:190所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:191所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:192所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:193所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:194所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:195所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表12所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:191所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:192所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:193所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:194所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:195所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表12
Figure GDA0002884985310000811
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:112的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-163 scFv(也称为“ET150-13 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表13的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的VH，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的VL，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:49所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的VL，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:196所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:197所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:198所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:199所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:200所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:201所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:196所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:197所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:198所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:199所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:200所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:201所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表13所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:196所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:197所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:198所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:199所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:200所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:201所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表13
Figure GDA0002884985310000831
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:113的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-151 scFv(也称为“ET150-1 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表14的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的VH，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的VL，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:53所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:54所示序列的氨基酸的VL，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:202所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:203所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:204所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:205所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:206所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:207所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:202所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:203所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:204所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:205所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:206所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:207所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表14所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:202所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:203所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:204所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:206所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:207所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表14
Figure GDA0002884985310000851
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:114的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-152 scFv(也称为“ET150-2 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表15的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的VH，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:57所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:209所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:210所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:211所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:212所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:209所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:210所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:211所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:212所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表15所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:209所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:211所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:212所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表15
Figure GDA0002884985310000871
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:115的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-155 scFv(也称为“ET150-5 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表16的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的VH，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:61所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:214所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:215所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:216所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:217所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:218所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:214所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:215所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:216所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:217所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:218所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表16所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表16
Figure GDA0002884985310000891
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:116的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-158 scFv(也称为“ET150-8 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表17的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的VH，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:65所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:221所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:222所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:223所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:224所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:221所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:222所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:223所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:224所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表17所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:222所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:223所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表17
Figure GDA0002884985310000911
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:117的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-168 scFv(也称为“ET150-18 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表18的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的VH，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的VL，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:69所示序列的氨基酸的VH，和包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的VL，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:227所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:228所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:229所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:230所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:227所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:228所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:229所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:230所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表18所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:227所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:228所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:229所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:230所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表18
Figure GDA0002884985310000931
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:118的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-164 scFv(也称为“ET150-14 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表19的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸的VH，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸的VL，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:73所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:74所示序列的氨基酸的VL，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:232所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:233所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:234所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:235所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:236所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:237所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:232所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:233所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:234所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:235所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:236所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:237所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表19所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:232所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:233所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:234所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:235所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:236所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:237所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表19
Figure GDA0002884985310000951
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:119的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-165 scFv(也称为“ET150-15 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表20的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸的VH，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸的VL，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:77所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:78所示序列的氨基酸的VL，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:238所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:239所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:240所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:241所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:242所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:243所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:238所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:239所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:240所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:241所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:242所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:243所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表20所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:238所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:239所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:240所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:241所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:242所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:243所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表20
Figure GDA0002884985310000971
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:120的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-167 scFv(也称为“ET150-17 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表21的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸的VH，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸的VL，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:81所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:82所示序列的氨基酸的VL，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:244所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:245所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:246所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:247所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:248所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:249所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:244所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:245所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:246所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:247所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:248所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:249所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表21所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:244所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:245所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:246所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:247所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:248所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:249所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表21
Figure GDA0002884985310000991
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:121的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-169 scFv(也称为“ET150-19 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:85所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表22的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:85所示序列的氨基酸的VH，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的VL，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:85所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的VL，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:250所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:251所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:252所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:253所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:254所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:255所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:250所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:251所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:252所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:253所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:254所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:255所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表22所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:250所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:251所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:252所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:253所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:254所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:255所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表22
Figure GDA0002884985310001011
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:122的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-172 scFv(也称为“ET150-22 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表23的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的VH，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的VL，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:89所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的VL，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:256所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:257所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:258所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:259所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:260所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:261所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:256所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:257所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:258所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:259所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:260所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:261所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表23所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:256所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:257所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:258所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:259所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:260所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:261所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表23
Figure GDA0002884985310001031
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:123的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-173 scFv(也称为“ET150-23 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表24的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的VH，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的VL，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:93所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:94所示序列的氨基酸的VL，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:262所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:263所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:264所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:265所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:266所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:267所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:262所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:263所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:264所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:265所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:266所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:267所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表24所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:262所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:264所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:266所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:267所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表24
Figure GDA0002884985310001051
Figure GDA0002884985310001061
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:276的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-024 scFv(也称为“ET150-174 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表25的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸的VH，如表25所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸的VL，如表25所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:274所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸的VL，如表25所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:268所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:269所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:270所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表8所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:271所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:272所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:273所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表25所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:268所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:269所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:270所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:271所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:272所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:273所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表25所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:268所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:269所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:270所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:271所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:272所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:273所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表25
Figure GDA0002884985310001071
Figure GDA0002884985310001081
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:288的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-026 scFv(也称为“ET150-176 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表26的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸的VH，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的VL，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:286所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的VL，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:280所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:281所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:282所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:283所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:284所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:285所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:280所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:281所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:282所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:283所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:284所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:285所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表26所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:280所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:281所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:282所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:283所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:284所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:285所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表26
Figure GDA0002884985310001101
Figure GDA0002884985310001111
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:300的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-028 scFv(也称为“ET150-178 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:298所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表27的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:298所示序列的氨基酸的VH，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的VL，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:298所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的VL，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:292所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:293所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:294所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:295所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:296所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:297所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:292所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:293所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:294所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:295所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:296所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:297所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表27所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:292所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:293所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:294所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:295所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:296所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:297所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表27
Figure GDA0002884985310001121
Figure GDA0002884985310001131
Figure GDA0002884985310001132
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:312的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-029 scFv(也称为“ET150-179 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表28的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸的VH，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸的VL，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:310所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸的VL，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:303所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:304所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:305所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:306所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:307所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:308所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:303所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:304所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:305所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:306所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:307所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:308所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表28所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:303所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:304所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:305所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:306所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:307所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:308所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表28
Figure GDA0002884985310001151
Figure GDA0002884985310001161
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:324的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-030 scFv(也称为“ET150-180 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表29的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸的VH，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸的VL，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:322所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:323所示序列的氨基酸的VL，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:316所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:317所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:318所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:319所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:320所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:321所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:316所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:317所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:318所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:319所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:320所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:321所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表29所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:316所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:317所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:318所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:319所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:320所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:321所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表29
Figure GDA0002884985310001181
Figure GDA0002884985310001191
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:336的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-031 scFv(也称为“ET150-181 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表30的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸的VH，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的VL，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:334所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的VL，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:328所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:329所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:330所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:331所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:332所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:333所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:328所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:329所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:330所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:331所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:332所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:333所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表30所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:328所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:329所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:330所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:331所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:332所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:333所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表30
Figure GDA0002884985310001201
Figure GDA0002884985310001211
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:348的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-032 scFv(也称为“ET150-182 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表31的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸的VH，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的VL，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:346所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的VL，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:340所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:341所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:342所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:343所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:344所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:345所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:340所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:341所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:342所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:343所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:344所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:345所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表31所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:340所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:341所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:342所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:343所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:344所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:345所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表31
Figure GDA0002884985310001231
Figure GDA0002884985310001241
在某些实施方式中，抗体或其他抗原结合蛋白是具有如下抗原结合区域的抗-GPRC5D scFv或其抗原结合片段，该抗原结合区域包含SEQ ID NO:360的氨基酸序列并且特异性地结合GPRC5D多肽(例如具有氨基酸序列SEQ ID NO:97的GPRC5D多肽或其片段)，将其命名为ET150-033 scFv(也称为“ET150-183 scFv”)。
在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体包含重链可变区和轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽，该重链可变区包含具有SEQ ID NO:358所示序列的氨基酸，该轻链可变区包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv抗体是具有选自表32的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:358所示序列的氨基酸的VH，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的VL，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQID NO:358所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的VL，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:352所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:353所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:354所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:355所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:356所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:357所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5D scFv包含：包含具有SEQ ID NO:352所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:353所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:354所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3，包含具有SEQ ID NO:355所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQID NO:356所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:357所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3，如表32所示。在某些实施方式中，抗-GPRC5DscFv包含：包含具有SEQ ID NO:352所示序列的氨基酸的VH CDR1，包含具有SEQ ID NO:353所示序列的氨基酸的VH CDR2，包含具有SEQ ID NO:354所示序列的氨基酸的VH CDR3，包含具有SEQ ID NO:355所示序列的氨基酸的VL CDR1，包含具有SEQ ID NO:356所示序列的氨基酸的VL CDR2，以及包含具有SEQ ID NO:357所示序列的氨基酸的VL CDR3。
表32
Figure GDA0002884985310001261
Figure GDA0002884985310001271
本发明公开的主题还提供如下的抗-GPRC5D scFv抗体，其包含重链可变区、轻链可变区、在重链可变区与轻链可变区之间的接头肽，以及His-标签和HA-标签。在某些实施方式中，His-标签和HA-标签的氨基酸序列包含以下提供的SEQ ID NO:379的氨基酸序列：
Figure GDA0002884985310001272
编码SEQ ID NO:379的核苷酸序列是SEQ ID NO:380，其在以下提供：
Figure GDA0002884985310001273
2.单克隆抗体
本发明公开的主题提供特异性地结合GPRC5D(例如人GPRC5D)并且如实施例2所述分离和结构表征的人抗体(例如人单克隆抗体)。人抗-GPRC5D抗体ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VH氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VL氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359。
鉴于ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体中的每一个能够结合GPRC5D，可将VH和VL序列“混合并匹配”以产生其他抗-GPRC5D结合分子。这类“混合并匹配”的抗体的GPRC5D结合可使用领域内已知的结合试验进行测试，该试验包括，例如ELISA、蛋白质印迹、RIA、Biacore分析。优选地，当将VH和VL链混合并匹配时，来自特定VH/VL配对的VH序列被结构相似的VH序列取代。同样地，来自特定VH/VL配对的VL序列被结构相似的VL序列取代。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含：(i)包含选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358的氨基酸序列的重链可变区；和(ii)包含选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359的氨基酸序列的轻链可变区；其中该抗体特异性地结合GPRC5D，例如人GPRC5D。
优选的重链和轻链组合包括：
(i)包含具有SEQ ID NO:1所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ IDNO:2所示序列的氨基酸的轻链可变区；或者
(ii)包含具有SEQ ID NO:5所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:6所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(iii)包含具有SEQ ID NO:9所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:10所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(iv)包含具有SEQ ID NO:13所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:14所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(v)包含具有SEQ ID NO:17所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:18所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(vi)包含具有SEQ ID NO:21所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:22所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(vii)包含具有SEQ ID NO:25所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:26所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(viii)包含具有SEQ ID NO:29所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:30所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(ix)包含具有SEQ ID NO:33所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:34所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(x)包含具有SEQ ID NO:37所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:38所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xi)包含具有SEQ ID NO:41所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:42所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xii)包含具有SEQ ID NO:45所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:46所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xiii)包含具有SEQ ID NO:49所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:50所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xiv)包含具有SEQ ID NO:53所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:54所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xv)包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xix)包含具有SEQ ID NO:73所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:74所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xx)包含具有SEQ ID NO:77所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:78所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:81所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:82所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:85所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:86所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:89所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:90所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(x)包含具有SEQ ID NO:93所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:94所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xvi)包含具有SEQ ID NO:274所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:275所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xvii)包含具有SEQ ID NO:286所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:287所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xviii)包含具有SEQ ID NO:298所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:299所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xix)包含具有SEQ ID NO:310所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:311所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xx)包含具有SEQ ID NO:322所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQID NO:323所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xxi)包含具有SEQ ID NO:334所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:335所示序列的氨基酸的轻链可变区；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:346所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:347所示序列的氨基酸的轻链可变区；或者
(xxiii)包含具有SEQ ID NO:358所示序列的氨基酸的重链可变区，以及包含具有SEQ ID NO:359所示序列的氨基酸的轻链可变区。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供抗体，其包含ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体的重链和轻链CDR1、CDR2和CDR3。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VH CDR1的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232、238、244、250、256、262、268、280、292、303、316、328、340和352。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体的VH CDR2的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:125、131、137、143、149、155、161、167、173、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233、239、245、251、257、263、269、281、293、304、317、329、341和353。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VH CDR3的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234、240、246、252、258、264、270、282、294、305、318、330、342和354。
1ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VL CDR1的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:127、133、139、145、151、157、163、169、175、181、187、193、199、205、211、217、223、229、235、241、247、253、259、265、271、283、295、306、319、331、343和355。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VL CDR2的氨基酸序列分别示于SEQID NO:128、134、140、146、152、158、164、170、176、182、188、194、200、206、212、218、224、230、236、242、248、254、260、266、272、284、296、307、320、332、344和356。ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的VLCDR3的氨基酸序列分别示于SEQ ID NO:129、135、141、147、153、159、165、171、177、183、189、195、201、207、213、219、225、231、237、243、249、255、261、267、273、285、297、308、321、333、345和357。CDR区使用Kabat系统(Kabat,E.A.,等人(1991)Sequences of Proteins ofImmunological Interest,第五版,U.S.Department of Health and Human Services,NIHPublication No.91-3242)进行划分。
鉴于这些抗体中的每一种能够结合GPRC5D以及抗原结合特异性主要是由CDR1、CDR2和CDR3区提供，可将VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3序列与VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3序列“混合并匹配”(即，尽管各个抗体必须含有VH CDR1、VH CDR2和VH CDR3以及VL CDR1、VL CDR2和VL CDR3，但可以将来自不同抗体的CDR混合并匹配)以产生其他抗-GPRC5D结合分子。这些“混合并匹配”的抗体的GPRC5D结合可使用如上所述的结合试验进行测试。当混合并匹配VH CDR序列时，来自特定VH序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列被结构相似的CDR序列取代。同样地，当混合并匹配VL CDR序列时，来自特定VL序列的CDR1、CDR2和/或CDR3序列优选被结构相似的CDR序列取代。对于普通技术人员显而易见的是，可通过将一个或多个VH和/或VL CDR区序列用来自本文所公开的抗体ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033的CDR序列的结构相似序列取代，产生新的VH和VL序列。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含：(ix)包含选自SEQ ID NO:124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232、238、244、250、256、262、268、280、292、303、316、328、340和352的氨基酸序列的重链可变区CDR1；(ii)包含选自SEQ IDNO:125、131、137、143、149、155、161、167、173、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233、239、245、251、257、263、269、281、293、304、317、329、341和353的氨基酸序列的重链可变区CDR2；(iii)包含选自SEQ ID NO:126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234、240、246、252、258、264、270、282、294、305、318、330、342和354的氨基酸序列的重链可变区CDR3；(iv)包含选自SEQ ID NO:127、133、139、145、151、157、163、169、175、181、187、193、199、205、211、217、223、229、235、241、247、253、259、265、271、283、295、306、319、331、343和355的氨基酸序列的轻链可变区CDR1；(v)包含选自SEQ ID NO:128、134、140、146、152、158、164、170、176、182、188、194、200、206、212、218、224、230、236、242、248、254、260、266、272、284、296、307、320、332、344和356的氨基酸序列的轻链可变区CDR2；和(f)包含选自SEQ ID NO:129、135、141、147、153、159、165、171、177、183、189、195、201、207、213、219、225、231、237、243、249、255、261、267、273、285、297、308、321、333、345和357的氨基酸序列的轻链可变区CDR3；其中该抗体特异性地结合GPRC5D，例如人GPRC5D。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:124所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:125所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:126所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:127所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:128所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:129所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:130所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:131所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:132所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:133所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:134所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:135所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:136所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:137所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:138所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:139所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:140所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:141所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:142所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:143所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:144所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:145所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:146所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:147所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:148所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:149所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:150所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:151所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:152所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:153所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:154所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:155所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:156所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:157所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:158所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:159所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:160所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:161所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:162所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:163所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:164所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:165所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3.
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:166所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:167所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:168所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:169所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:170所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:171所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:172所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:173所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:174所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:175所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:176所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:177所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:178所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:179所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:180所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:181所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:182所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:183所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:184所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:185所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:186所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:187所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:188所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:189所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:190所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:191所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:192所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:193所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(v)包含具有SEQ ID NO:194所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:195所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:196所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:197所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:198所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:199所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:200所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:201所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:202所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:203所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:204所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:205所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:206所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:207所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:208所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:209所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:211所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:212所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:222所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:223所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:226所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:227所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:228所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:229所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:230所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:231所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:232所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:233所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:234所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:235所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:236所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:237所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:238所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:239所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:240所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:241所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:242所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:243所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:244所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:245所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:246所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:247所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:248所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:249所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:250所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:251所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:252所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:253所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:254所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:255所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:256所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:257所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:258所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:259所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:260所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:261所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:262所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:263所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:264所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:265所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:266所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:267所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:268所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:269所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:270所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:271所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:272所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:273所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:280所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:281所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:282所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:283所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:284所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:285所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:292所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:293所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:294所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:295所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:296所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:297所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:303所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:304所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:305所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:306所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:307所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:308所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:316所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:317所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:318所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:319所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:320所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:321所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:328所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:329所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:330所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:331所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:332所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:333所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:340所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:341所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:342所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:343所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:344所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:345所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
在某些实施方式中，该抗体包含：
(i)包含具有SEQ ID NO:352所示序列的氨基酸的重链可变区CDR1；
(ii)包含具有SEQ ID NO:353所示序列的氨基酸的重链可变区CDR2；
(iii)包含具有SEQ ID NO:354所示序列的氨基酸的重链可变区CDR3；
(iv)包含具有SEQ ID NO:355所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR1；
(xxii)包含具有SEQ ID NO:356所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR2；和
(vi)包含具有SEQ ID NO:357所示序列的氨基酸的轻链可变区CDR3。
本文公开的抗-GPRC5D抗体的恒定区/框架区可通过例如氨基酸替换加以改变，以修饰抗体的特性(例如，以使以下中的一种或多种增加或降低：抗原结合亲和力、Fc受体结合、抗体碳水化合物(例如糖基化、岩藻糖基化等)、半胱氨酸残基的数目、效应细胞功能、效应细胞功能、补体功能或缀合位点的引入)。
在某些实施方式中，本发明公开的抗-GPRC5D抗体是全人抗体，例如ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033中的任一种。对于在人中的治疗用途优选全人mAb，因为鼠抗体在施用于人时导致免疫原性反应，称为HAMA(人抗小鼠抗体)应答(Azinovic I,等人Survival benefit associated withhuman anti-mouse antibody(HAMA)in patients with B-cell malignancies.CancerImmunol Immunother 2006；55(12):1451-8；Tjandra JJ,等人Development of humananti-murine antibody(HAMA)response in patients.Immunol Cell Biol 1990；68(6):367-76)，引起严重的副作用包括过敏反应和超敏反应。该免疫原性反应的引发是由于鼠抗体与天然的人抗体略微不同的氨基酸序列而使人免疫系统将其识别为外来物。可采用本领域已知的人源化方法(Riechmann L,等人Reshaping human antibodies fortherapy.Nature 1988；332(6162):332:323；Queen C,等人Ahumanized antibody thatbinds to the interleukin 2receptor.Proc Natl Acad Sci USA1989；86(24):10029-33)以降低鼠源抗体的免疫原性(Gerd R,等人Serological Analysis of Human Anti-Human Antibody Responses in Colon Cancer Patients Treated with Repeated Dosesof Humanized Monoclonal Antibody A33.Cancer Res 2001；61,6851–6859)。
噬菌体展示文库的使用已经使得针对非常明确的表位选择庞大数目的独特和稀有Ab的Ab谱成为可能(关于噬菌体展示的更多细节，参见McCafferty等人，Phageantibodies:filamentous phage displaying antibody variable domains.Nature,348:552-554)。快速鉴定对肿瘤抗原衍生的肽-MHC复合物分子高度特异的人Fab或单链Fv(ScFv)片段因此已经变得可能(19-22)。最近，通过将对黑素瘤Ag MART-126-35/A2或gpl00280-288/A2特异性的TCR样Fab融合至截短形式的假单胞菌(Pseudomonas)内毒素所产生的免疫毒素已经显示抑制人黑素瘤体外和体内生长(Klechevsky E,等人Antitumoractivity of immunotoxins with T-cell receptor-like specificity against humanmelanoma xenografts.Cancer Res 2008；68(15):6360-6367)。此外，通过使用Fab片段工程化设计全长mAb，可以直接产生治疗性人mAb，而绕过正常情况下开发治疗性mAb所需要的耗时多月的工作。本发明公开的主题涉及开发识别例如人GPRC5D多肽(例如具有SEQ IDNO:97所示的氨基酸序列的多肽)的全长人mAb用于癌症疗法。
3.同源抗体
在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体包含含有与本文所公开的抗体(例如ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体)的氨基酸序列同源的氨基酸序列的重链可变区和轻链可变区，并且其中该抗体保留本发明公开主题的抗-PGPRC5D抗体的期望的功能特性。
例如，本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含重链可变区和轻链可变区，其中：
(a)重链可变区包含与选自SEQ ID NO:1、5、9、13、17、21、25、29、33、37、41、45、49、53、57、61、65、69、73、77、81、85、89、93、274、286、298、310、322、334、346和358的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；且
(b)轻链可变区包含与选自SEQ ID NO:2、6、10、14、18、22、26、30、34、38、42、46、50、54、58、62、66、70、74、78、82、86、90、94、275、287、299、311、323、335、347和359的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列；并且该抗体以1×10-7M或更低的Kd结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，VH和/或VL氨基酸序列可以与上述的序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源。可通过诱变(例如定点诱变或PCR介导的诱变)、接着使用本文描述的结合试验就保留的功能(即结合亲和力)对所编码的改变的抗体进行测试，来获得具有与上述序列的VH和VL区有高(即80％或更大)同源性的VH和VL区的抗体。
如本文使用的两个氨基酸序列之间的同源性百分数等同于两个序列之间的同一性百分数。两个序列之间的同一性百分数是序列所共有的相同位置数的函数(即％同源性＝相同位置数#/位置总数#×100)，考虑空位(gap)数、以及各空位的长度，需要将其引入用于两个序列的最佳比对。如下面的非限制性实例中所述，可以使用数学算法完成序列的比较和两个序列之间同一性百分数的确定。
可使用已经并入到ALIGN程序(版本2.0)中的E.Meyers和W.Miller(Comput.Appl.Biosci.,4:11-17(1988))的算法，使用PAM120权重残基表、空位长度罚分12和空位罚分4，来确定两个氨基酸序列之间的同源性百分数。此外，可以使用已经整合到GCG软件包(可以在www.gcg.com得到)的GAP程序的Needleman和Wunsch(J.Mol.Biol.48:444-453(1970))算法，使用Blossum 62矩阵或PAM250矩阵，和空位权重(gap weight)16、14、12、10、8、6或4以及长度权重(length weight)1、2、3、4、5或6，来确定两个氨基酸序列之间的同源性百分数。
另外或替代地，本发明公开主题的蛋白质序列还可以用作“查询序列”以对公共数据库进行搜索，例如以鉴定相关的序列。可以使用Altschul,等人(1990)J.Mol.Biol.215:403-10的XBLAST(版本2.0)进行此类搜索。可以用XBLAST程序，得分＝50，字长＝3进行BLAST蛋白质搜索以得到与本发明的抗体分子同源的氨基酸序列。为了得到用于比较目的的空位比对，可以利用如Altschul等人,(1997)Nucleic Acids Res.25(17):3389-3402中描述的Gapped BLAST。当利用BLAST和Gapped BLAST程序时，可以使用各自程序((例如XBLAST和NBLAST)的默认参数(参见www.ncbi.nlm.nih.gov)。
4.具有保守性修饰的抗体
在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体包含含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区以及含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中这些CDR序列中的一个或多个包含基于本文所述的优选抗体(例如ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体)的特定氨基酸序列或者其保守性修饰，并且其中该抗体保留本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体的期望的功能特性。
本发明公开的主题提供分离的抗体或其抗原结合部分，该分离的抗体或其抗原结合部分包含含有CDR1、CDR2和CDR3序列的重链可变区以及含有CDR1、CDR2和CDR3序列的轻链可变区，其中：
(a)重链可变区CDR3序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:126、132、138、144、150、156、162、168、174、180、186、192、198、204、210、216、222、228、234、240、246、252、258、264、270、282、294、305、318、330、342和354及其保守性修饰的氨基酸序列；
(b)轻链可变区CDR3序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:129、135、141、147、153、159、165、171、177、183、189、195、201、207、213、219、225、231、237、243、249、255、261、267、273、285、297、308、321、333、345和357以及431及其保守性修饰的氨基酸序列；并且该抗体表现出以1×10-7M或更低的Kd结合人GPRC5D。
在某些实施方式中，重链可变区CDR2序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:125、131、137、143、149、155、161、167、173、179、185、191、197、203、209、215、221、227、233、239、245、251、257、263、269、281、293、304、317、329、341和353及其保守性修饰的氨基酸序列；并且轻链可变区CDR2序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:128、134、140、146、152、158、164、170、176、182、188、194、200、206、212、218、224、230、236、242、248、254、260、266、272、284、296、307、320、332、344和356及其保守性修饰的氨基酸序列。
在某些实施方式中，重链可变区CDR1序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:124、130、136、142、148、154、160、166、172、178、184、190、196、202、208、214、220、226、232、238、244、250、256、262、268、280、292、303、316、328、340和352及其保守性修饰的氨基酸序列；并且轻链可变区CDR1序列包含的氨基酸序列选自SEQ ID NO:127、133、139、145、151、157、163、169、175、181、187、193、199、205、211、217、223、229、235、241、247、253、259、265、271、283、295、306、319、331、343和355及其保守性修饰的氨基酸序列。
如本文使用的术语“保守性序列修饰”意指如下的氨基酸修饰，其不显著影响或改变含有该氨基酸序列的抗体的结合特征。此类保守性修饰包括氨基酸替换、添加和缺失。可以通过本领域已知的标准技术，如定点诱变和PCR介导的诱变向本发明的抗体中引入修饰。
保守性氨基酸替换是其中将氨基酸残基用具有相似侧链的氨基酸残基置换的替换。在本领域中已经定义了具有相似侧链的氨基酸残基家族。示例性的保守性氨基酸替换在表33中示出。可将氨基酸替换引入到感兴趣抗体中并就期望活性(例如保留/改善的抗原结合、降低的免疫原性或改善的ADCC或CDC)对产物进行筛选。在某些实施方式中，本文公开的序列例如CDR序列、VH序列或VL序列可具有至多大约一个、至多大约两个、至多大约三个、至多大约四个、至多大约五个、至多大约六个、至多大约七个、至多大约八个、至多大约九个或至多大约十个经修饰和/或替换的氨基酸残基。
表33
原始残基 示例性的保守性氨基酸替换
Ala(A) Val；Leu；lle
Arg(R) Lys；Gln；Asn
Asn(N) Gln；His；Asp，Lys；Arg
Asp(D) Glu；Asn
Cys(C) Ser：Ala
Gln(Q) Asn；Glu
Glu(E) Asp；Gln
Gly(G) Ala
His(H) Asn；Gln；Lys；Arg
Ile(I) Leu；Val；Met；Ala；Phe
Leu(xii) Ile；Val；Met；Ala；Phe
Lys(K) Arg；Gln；Asn
Met(M) Leu；Phe；Ile
Phe(F) Trp；Leu；Val；Ile；Ala；Tyr
Pro(P) Ala
Ser(S) Thr
Thr(T) Val；Ser
Trp(xxiii) Tyr；Phe
Tyr(Y) Trp；Phe；Thr；Ser
Val(V) Ile；Leu；Met；Phe；Ala
可根据共有侧链性质对氨基酸分组：
疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；
中性亲水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；
酸性：Asp、Glu；
碱性：His、Lys、Arg；
影响链取向的残基：Gly、Pro；
芳族：Trp、Tyr、Phe。
非保守性替换将牵涉这些类别之一的成员转变成另一类别。
5.与本发明的抗-GPRC5D抗体交叉竞争结合GPRC5D的抗-GPRC5D抗体
本发明公开的主题提供与所公开的抗-GPRC5D抗体的任一者交叉竞争结合GPRC5D(例如人GPRC5D)的抗体。例如，并且并非以限制的方式，交叉竞争的抗体可以与本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体中的任一者结合相同的表位区域，例如相同表位、邻近表位或重叠。在某些实施方式中，用于交叉竞争研究的参考抗体可以是本文公开的抗-GPRC5D抗体例如ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体中的任一种。
在某些实施方式中，交叉竞争的抗体结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸14-22的表位区域。在某些实施方式中，交叉竞争的抗体结合一个、两个、三个、四个、五个、六个或七个选自SEQ ID NO:97的氨基酸5-17、10-17、1-27、15-23、16-23、16-25、85-93、85-95、145-167、157-164、157-167、226-239、230-237、229-237、230-243和227-237的表位区域。
这些交叉竞争的抗体可基于它们在标准GPRC5D结合试验中与本发明公开的抗-GPRC5D抗体中的任一种交叉竞争的能力而加以鉴定。例如，可使用Biacore分析、ELISA试验或流式细胞术来证实与本发明公开主题的抗体的交叉竞争。测试抗体抑制例如本发明公开的GPRC5D抗体(例如ET150-153、ET150-166、ET150-170、ET150-171、ET150-175、ET150-154、ET150-156、ET150-157、ET150-159、ET150-160、ET150-161、ET150-162、ET150-163、ET150-151、ET150-152、ET150-155、ET150-158、ET150-168、ET150-165、ET150-167、ET150-169、ET150-172、ET150-173、ET150-024、ET150-026、ET150-028、ET150-029、ET150-030、ET150-031、ET150-032和ET150-033抗体)中的任一种与人GPRC5D结合的能力表明，该测试抗体可与本发明公开的抗-GPRC5D抗体中的任一种竞争结合人GPRC5D，并因此与本发明公开的抗-GPRC5D抗体中的任一种结合人GPRC5D上的相同表位区域。在某些实施方式中，交叉竞争的抗体与本发明公开的抗-GPRC5D抗体中的任一种结合人GPRC5D上的相同表位。
6.结合抗原的抗体的表征
可以通过例如标准ELISA对本发明公开主题的抗体测试其对GPRC5D的结合。为确定所选的抗-GPRC5D抗体是否结合独特的表位，可使用市售的试剂(Pierce,Rockford,IL)将各个抗体生物素化。可以如上所述使用GPRC5D包被的ELISA板来进行使用未标记的单克隆抗体和生物素化的单克隆抗体的竞争研究。可使用链霉素-抗生物素蛋白-碱性磷酸酶探针来检测生物素化的mAb结合。
为了确定纯化抗体的同种型，可以使用对具体同种型的抗体特异性的试剂进行同种型ELISA。可通过蛋白质印迹进一步测试抗-GPRC5D人IgG与GPRC5D抗原的反应性。
在某些实施方式中，通过放射性标记抗原结合试验(RIA)测量Kd。在某些实施方式中，用Fab形式的感兴趣抗体及其抗原进行RIA。例如，通过在存在滴定系列的未标记抗原的情况下用最小浓度的(125I)-标记的抗原平衡Fab，然后用抗-Fab抗体包被的板捕捉结合的抗原，来测量Fab对抗原的溶液结合亲和力(参见例如Chen等人,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。
在某些实施方式中，使用
Figure GDA0002884985310001551
表面等离子体共振试验来测量Kd。例如，使用
Figure GDA0002884985310001552
或
Figure GDA0002884985310001553
(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)的试验。
表位作图
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列的人GPRC5D多肽。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合N-末端区域(SEQ IDNO:97的氨基酸1-27)、ECL1区域(SEQ ID NO:97的氨基酸85-93)、ECL2区域(SEQ ID NO:97的氨基酸145-167)和ECL3区域(SEQ ID NO:97的氨基酸226-239)中的一个、两个、三个或四个。在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体或其抗原结合片段结合N-末端区域中的表位区域，包括但不限于，包含SEQ ID NO:97的氨基酸16-23的表位区域和包含SEQ ID NO:97的氨基酸10-17的表位区域。在某些实施方式中，N-末端区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸15-23。在某些实施方式中，N-末端区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸16-25。在某些实施方式中，N-末端区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸10-17。在某些实施方式中，N-末端区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸5-17。
在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体或其抗原结合片段结合ECL1区域中的表位区域，包括但不限于，包含SEQ ID NO:97的氨基酸85-95的表位区域。
在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体或其抗原结合片段结合ECL2区域中的表位区域，包括但不限于，包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-164的表位区域。在某些实施方式中，ECL2区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-164。在某些实施方式中，ECL2区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-167。
在某些实施方式中，本发明公开主题的抗体或其抗原结合片段结合ECL3区域中的表位区域，包括但不限于，包含SEQ ID NO:97的氨基酸230-237的表位区域。在某些实施方式中，ECL3区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸229-237。在某些实施方式中，ECL3区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸230-243。在某些实施方式中，ECL3区域中的表位区域包含SEQ ID NO:97的氨基酸227-237。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸16-25的表位区域、包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-164的表位区域以及包含SEQ ID NO:97的氨基酸229-237的表位区域。例如，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是scFv。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是具有选自表15的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO:57所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO:58所示氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:57所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:58所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ IDNO:209所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:210所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:211所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ IDNO:212所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ IDNO:209所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:210所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:211所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:212所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:208所示序列的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:209所示序列的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:210所示序列的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:211所示序列的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ IDNO:212所示序列的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:213所示序列的氨基酸的VLCDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是ET150-2 scFv(或ET150-152scFv)。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸5-17的表位区域、包含SEQ ID NO:97的氨基酸85-95的表位区域和包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-164的表位区域。例如，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是scFv。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是具有选自表16的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ IDNO:61所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含与SEQ ID NO:62所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:61所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:62所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQID NO:214所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:215所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:216所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQID NO:217所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:218所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQID NO:214所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:215所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:216所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:217所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR1、包含具有SEQ ID NO:218所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:214所示序列的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:215所示序列的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:216所示序列的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:217所示序列的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:218所示序列的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:219所示序列的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是ET150-155 scFv(或ET150-5 scFv)。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸15-23的表位区域，和包含SEQ ID NO:97的氨基酸230-243的表位区域。例如，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的重链可变区和包含具有SEQ IDNO:66所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是scFv。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是具有选自表17的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含含有与SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VL，如表17所示。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:65所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQ ID NO:66所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:221所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:222所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VHCDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:223所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:224所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VLCDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:221所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:222所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:223所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ IDNO:224所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:220所示序列的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:221所示序列的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:222所示序列的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQID NO:223所示序列的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:224所示序列的氨基酸的VLCDR2、以及包含具有SEQ ID NO:225所示序列的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是ET150-8 scFv(或ET150-158 scFv)。
在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO:97的氨基酸10-17的表位区域、包含SEQ ID NO:97的氨基酸157-167的表位区域、以及包含SEQ ID NO:97的氨基酸227-237的表位区域。例如，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的重链可变区和包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的轻链可变区，任选地在重链可变区和轻链可变区之间具有(iii)接头序列例如接头肽。在某些实施方式中，接头包含具有SEQ ID NO:98所示序列的氨基酸。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是scFv。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是具有选自表18的VH和VL区或CDR的scFv-Fc融合蛋白或全长人IgG。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含与SEQID NO:69所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的VH。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含与SEQ ID NO:70所示的氨基酸序列至少80％、81％、82％、83％、84％、85％、86％、87％、88％、89％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同源的氨基酸序列的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:70所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:69所示序列的氨基酸的VH和包含具有SEQID NO:70所示序列的氨基酸的VL。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:227所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:228所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:229所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:230所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:227所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:228所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:229所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:230所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列或其保守性修饰的氨基酸的VL CDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段包含：包含具有SEQ ID NO:226所示序列的氨基酸的VH CDR1、包含具有SEQ ID NO:227所示序列的氨基酸的VH CDR2、包含具有SEQ ID NO:228所示序列的氨基酸的VH CDR3、包含具有SEQ ID NO:229所示序列的氨基酸的VL CDR1、包含具有SEQ ID NO:230所示序列的氨基酸的VL CDR2、以及包含具有SEQ ID NO:231所示序列的氨基酸的VLCDR3。在某些实施方式中，抗体或其抗原结合片段是ET150-18 scFv(或ET150-168scFv)。
7.免疫偶联物
本发明公开的主题提供缀合到治疗部分的抗-GPRC5D抗体或其片段，该治疗部分如细胞毒素、药物(例如，免疫抑制剂)或放射性毒素。此类偶联物在本文中被称作“免疫偶联物”。包括一个或多个细胞毒素的免疫偶联物被称作“免疫毒素”。细胞毒素或细胞毒性剂包括对细胞有害(例如，杀死)的任何物质。实例包括紫杉醇(比如蓖麻毒蛋白、白喉、白树毒素)、细胞松弛素B、短杆菌肽D、溴化乙锭、吐根碱、丝裂霉素、依托泊苷、替尼泊苷、长春新碱、长春花碱、秋水仙素、阿霉素、柔红霉素、二羟基炭疽菌素二酮、米托蒽醌、光辉霉素、放线菌素D、1-去氢睾酮、糖皮质激素类、普鲁卡因、丁卡因、利多卡因、普萘洛尔和嘌呤霉素及其类似物或同系物。治疗剂还包括例如，刺孢霉素(calecheamicin)、aureastatin、抗代谢物(例如氨甲蝶呤、6-巯基嘌呤、6-硫鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氟尿嘧啶氨烯咪胺)、烷基化剂(例如氮芥、噻替派苯丁酸氮芥(thioepa chlorambucil)、苯丙氨酸氮芥、亚硝脲氮芥(BSNU)和环己亚硝脲(CCNU)、环磷酰胺、甲磺酸丁二醇二酯、二溴甘露醇、链脲霉素、丝裂霉素C、和顺-二氯二胺铂(II)(DDP)顺铂)、蒽环类(例如，柔红霉素(以前称道诺霉素)和阿霉素)、抗生素(例如，更生霉素(以前称放线菌素)、博来霉素、光辉霉素、和氨茴霉素(AMC))，和抗有丝分裂剂(例如，长春新碱和长春花碱)。
可与本文公开的抗-GPRC5D抗体缀合的治疗性细胞毒素的其他实例包括多卡米星(duocarmycin)类、卡奇霉素(calicheamicin)类、美登素类和auristatin类以及它们的衍生物。卡奇霉素抗体偶联物的实例是市售可得的(MylotargTM；Wyeth-Ayerst)。
可以使用本领域中可获得的接头技术，将细胞毒素缀合到本文公开的抗-GPRC5D抗体。已经用于将细胞毒素缀合到抗体的接头类型的实例包括，但不限于，腙类、硫醚、酯类、二硫化物和含有肽的接头。可以选择例如对溶酶体隔室内的低pH切割敏感或者对蛋白酶切割敏感的接头，该蛋白酶为比如优先在肿瘤组织中表达的蛋白酶，如组织蛋白酶类(例如，组织蛋白酶B、C、D)。关于细胞毒素类型、用于将治疗剂缀合到抗体的接头和方法的进一步讨论，还参见Saito,G.等人(2003)Adv.Drug Deliv.Rev.55:199-215；Trail,P.A.等人.(2003)Cancer Immunol.Immunother.52:328-337；Payne,G.(2003)Cancer Cell3:207-212；Allen,T.M.(2002)Nat.Rev.Cancer 2:750-763；Pastan,I.和Kreitman,R.J.(2002)Curr.Opin.Investig.Drugs 3:1089-1091；Senter,P.D.和Springer,C.J.(2001)Adv.DrugDeliv.Rev.53:247-264。
还可以将本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体缀合到放射性同位素以产生细胞毒性放射性药物，也称作放射免疫偶联物。可以缀合到诊断或治疗应用的抗体的放射性同位素的实例包括，但不限于，90Y、131I、225Ac、213Bi、223Ra和227Th。用于制备放射免疫偶联物的方法是本领域中已建立的。放射性免疫偶联物的实例是市售可得的，包括ZevalinTM(IDECPharmaceuticals)和BexxarTM(Corixa Pharmaceuticals)，并且可以用类似的方法使用本发明的抗体制备放射性免疫偶联物。
本发明公开主题的抗体偶联物可以用于修饰给定生物应答，并且药物部分将不被理解为局限于典型的化学治疗剂。例如，药物部分可以是具有所期望的生物活性的蛋白质或多肽。此类蛋白质可以包括，例如，酶促活性毒素或其活性片段，如相思豆毒蛋白、蓖麻毒蛋白A、假单胞菌外毒素或白喉毒素；蛋白质，如肿瘤坏死因子(TNF)或γ干扰素；或生物应答调节剂，如淋巴因子、白介素-1(“IL-1”)、白介素-2(“IL-2”)、白介素-6(“IL-6”)、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子(“GM-CSF”)、粒细胞集落刺激因子(“G-CSF”)，或其他生长因子。
用于将此类治疗部分缀合到抗体的技术是本领域公知的，参见例如Arnon等人,“Monoclonal Antibodies For Immunotargeting Of Drugs In Cancer Therapy”,Monoclonal Antibodies And Cancer Therapy,Reisfeld等人(编著),pp.243-56(AlanR.Liss,Inc.1985)；Hellstrom等人,“Antibodies For Drug Delivery”,Controlled DrugDelivery(第二版),Robinson等人(编著),pp.623-53(Marcel Dekker,Inc.1987)；Thorpe,“Antibody Carriers Of Cytotoxic Agents In Cancer Therapy:A Review”,MonoclonalAntibodies'84:Biological And Clinical Applications,Pinchera等人(编著),pp.475-506(1985)；“Analysis,Results,And Future Prospective Of The Therapeutic Use OfRadiolabeled Antibody In Cancer Therapy”,Monoclonal Antibodies For CancerDetection And Therapy,Baldwin等人(编著),pp.303-16(Academic Press 1985),和Thorpe等人,“The Preparation And Cytotoxic Properties Of Antibody-ToxinConjugates”,Immunol.Rev.,62:119-58(1982)。
8.双特异性分子
本发明公开的主题提供双特异性分子，其包含本文公开的抗-GPRC5D抗体或其片段。可以将本发明公开主题的抗体或其抗原结合部分衍生化或者连接到另一功能分子，例如，另一肽或蛋白质(例如，另一抗体或受体的配体)以产生双特异性分子，其结合至少两个不同的结合位点或靶分子。实际上可以将本发明公开主题的抗体衍生化或连接到多于一个的其它功能分子以产生结合多于两个不同结合位点和/或靶分子的多特异性分子；本文使用的术语“双特异性分子”也意在包括此类多特异性分子。为了产生双特异性分子，可以将本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体功能性地连接(例如，通过化学偶联、遗传融合、非共价结合或其他方法)到一个或多个其它结合分子，如另一抗体、抗体片段、肽或结合模拟物，从而产生双特异性分子。
本发明公开的主题提供双特异性分子，其包含至少对GRPC5D的第一结合特异性和对第二靶表位的第二结合特异性。第二靶表位可以是GPRC5D表位或者非GPRC5D表位，例如不同的抗原。在某些实施方式中，双特异性分子是多特异性的，该分子还可包括第三结合特异性。例如在双特异性抗体的第一部分结合肿瘤细胞上的抗原且双特异性抗体的第二部分识别人免疫效应细胞表面上的抗原的情况下，抗体能够通过特异性地结合人免疫效应细胞上的效应抗原而募集效应细胞的活性。在某些实施方式中，双特异性抗体由此能在效应细胞例如T细胞与肿瘤细胞之间形成连接，从而增强效应功能。在某些实施方式中，本公开的双特异性抗体包含至少对GPRC5D的第一结合和至少对免疫细胞的第二结合。例如，并且并非以限制的方式，本公开的双特异性抗体包含至少对GPRC5D的第一结合和至少对免疫细胞表面上存在的受体例如CD3的第二结合。
可以使用本领域已知的方法，通过缀合组分结合特异性，制备本发明公开主题的双特异性分子。例如，可以单独产生双特异性分子的每种结合特异性，然后将它们相互缀合。当结合特异性是蛋白质或肽时，可使用多种偶联剂或交联剂用于共价连接。交联剂的实例包括蛋白A、碳二亚胺、N-琥珀酰亚胺基-S-乙酰基-硫代乙酸酯(SATA)、5,5’-二硫代二(2-硝基苯甲酸)(DTNB)、邻苯二马来酰亚胺(oPDM)、N-琥珀酰亚胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、和硫代琥珀酰亚胺基醇4-(N-马来酰亚胺甲基)环己烷-l-羧酸酯(硫代-SMCC)(参见例如Karpovsky等人(1984)J.Exp.Med.160:1686；Liu,MA等人(1985)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 82:8648)。其他方法包括Paulus(1985)BehringIns.Mitt.No.78,118-132；Brennan等人(1985)Science 229:81-83)和Glennie等人(1987)J.Immunol.139:2367-2375)中描述的那些。优选的缀合剂是SATA和硫代-SMCC，二者均可得自Pierce Chemical Co.(Rockford,IL)。
当结合特异性是抗体时，它们可以通过两个重链的C-末端铰链区的巯基键合而缀合。在某些实施方式中，将铰链区修饰以在缀合前含有奇数个巯基，优选一个巯基。
或者，可以在相同载体中编码两种结合特异性并在相同的宿主细胞中表达和装配。当双特异性分子是mAb×mAb、mAb×Fab、Fab×F(ab’)2或配体×Fab融合蛋白时，该方法尤其有用。
双特异性分子与它们的特定靶标的结合可以通过例如酶联免疫吸附(ELISA)、放射免疫试验(RIA)、FACS分析、生物测定(例如，生长抑制)或者蛋白质印迹试验来证实。这些试验的每一种通常通过采用对感兴趣复合物特异性的标记试剂(例如，抗体)来检测具体感兴趣的蛋白质-抗体复合物的存在。或者，可以使用多种其他免疫试验的任一种来检测复合物。例如，可以将抗体进行放射性标记并用于放射免疫试验(RIA)中(参见例如Weintraub,B.,Principles of Radioimmunoassays,Seventh Training Course on RadioligandAssay Techniques,The Endocrine Society,March,1986，将其引入本文以供参考)。可以通过如使用γ计数器或者闪烁计数器的手段或者通过放射自显影来检测放射性同位素。
9.选择针对GPRC5D多肽的高亲和力ScFv
下一步是在人噬菌体展示文库中，从不结合或者以低亲和力结合的噬菌体中选出以高亲和力结合感兴趣的靶抗原的噬菌体。这通过噬菌体与结合于固相支持物(例如，珠或哺乳动物细胞)的抗原反复结合、随后除去未结合的噬菌体并洗脱特异性结合的噬菌体来实现。在某些实施方式中，首先将抗原生物素化以固定至如链霉亲和素缀合的免疫磁珠(Dynabeads)M-280。将噬菌体文库与细胞、珠或其他固相支持物孵育并通过洗涤移除未结合的噬菌体。选出结合的克隆并对其进行测试。
一旦选出，则通过流式细胞术对阳性scFv克隆测试它们与活3T3细胞表面上的GPRC5D(人GPRC5D)的结合。简而言之，将噬菌体克隆与过表达GPRC5D的3T3细胞孵育。将细胞洗涤并随后与小鼠抗-M13外壳蛋白mAb温育。将细胞再次洗涤并用FITC-山羊抗小鼠Ig标记，之后进行流式细胞术。
在其他实施方式中，抗-GPRC5D抗体可以包含一个或多个设计以改善蛋白质稳定性、抗体结合、表达水平或引入治疗剂缀合位点的框架区氨基酸替换。随后根据本领域技术人员已知的方法将这些scFv用于制备重组人单克隆Ig。
10.使用所选的ScFv片段工程化设计全长mAb
噬菌体展示技术允许快速选择和产生抗原特异性的scFv和Fab片段，该抗原特异性scFv和Fab片段本身有用或可以经进一步开发以提供完整抗体、抗原结合蛋白或其抗原结合片段。具有Fc结构域的完整mAb具有优于scFv和Fab抗体的众多优点。首先，仅全长Ab发挥出由Fc结构域介导的免疫功能如CDC和ADCC。其次，双价mAb比单体Fab Ab提供更强的抗原结合亲和力。第三，Fab和双价mAb的血浆半衰期和肾清除率是不同的。各自的具体特征和优点可以匹配于计划的效应子策略。第四，双价mAb可以以不同于scFv和Fab的速率内化，改变免疫功能或载体功能。例如，α发射体(alpha emitter)不需要内化以杀伤靶标，但是许多药物和毒素将得益于免疫复合物的内化。因此，在某些实施方式中，一旦从噬菌体展示文库获得对GPRC5D特异的scFv克隆，则使用scFv片段制备全长IgG mAb。
为了在中国仓鼠卵巢(CHO)细胞中制备重组人单克隆IgG，基于本领域技术人员已知的方法(Tomomatsu等人，Production of human monoclonal antibodies againstFceRIa by a method combining in vitro immunization with phage display.BiosciBiotechnol Biochem 73(7):1465-1469 2009)将全长IgG mAb工程化。简言之，可以将抗体可变区亚克隆至哺乳动物表达载体中，匹配λ或κ轻链恒定区序列和IgG1亚类Fc(例如)(Lidija P,等人An integrated vector system for the eukaryotic expression ofantibodies or their fragments after selection from phage displaylibraries.Gene 1997；187(1):9-18；Lisa JH,等人Crystallographic structure of anintact lgG1 monoclonal antibody.Journal of Molecular Biology 1998；275(5):861-872)。可使用动力学结合分析(Yasmina NA,等人Probing the binding mechanism andaffinity of tanezumab,a recombinant humanized anti-NGF monoclonal antibody,using a repertoire of biosensors.Protein Science 2008；17(8):1326-1335)以证实全长IgG与GPRC5D以纳摩尔范围的KD特异性的结合。
药物组合物和治疗方法
可以将本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体以足以预防、抑制或降低肿瘤进展的量对患有肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的患者施用用于治疗性治疗。进展包括例如肿瘤的生长、浸润、转移和/或复发。对于这个用途有效的量将取决于疾病的严重性和患者自身免疫系统的总体状态。给药方案将也随疾病状态和患者状态变动，并且一般范围将从单次大量(bolus)剂量或连续输注至每天多次施用(例如每4-6小时)，或通过治疗医师和患者状况所指示。
可由本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体治疗的医学病症的鉴定完全处于本领域技术人员的能力和知识范围内。例如，正患有多发性骨髓瘤或存在形成多发性骨髓瘤的风险的人类个体适合施用本发明公开的抗-GPRC5D抗体。本领域熟练的临床医生可以例如通过利用临床试验、身体检查和就医/家族史，容易地确定某个体是否为这种治疗的候选者。
在某些实施方式中，本发明公开的主题提供通过与一种或多种其他试剂组合施用本发明公开的抗-GPRC5D抗体来治疗肿瘤的方法。例如，本发明公开的主题提供通过与抗肿瘤剂组合施用本发明公开的抗-GPRC5D抗体来治疗肿瘤的方法。抗-GPRC5D抗体可以以化学方式或者生物合成方式连接至一种或多种抗肿瘤剂。
合适肿瘤的非限制性实例包括多发性骨髓瘤和瓦氏巨球蛋白血症。在某些实施方式中，肿瘤是多发性骨髓瘤。
可以使用任何合适的方法或途径施用本发明公开的抗-GPRC5D抗体，并任选地共同施用抗肿瘤剂。给药途径包括，例如，口服、静脉内、腹膜内、皮下或者肌内给药。然而，应当强调的是，本发明公开的主题不限于任何具体的给药方法或途径。
值得注意的是，本发明公开的抗-GPRC5D抗体可以作为偶联物施用，其特异性地结合受体并在配体-毒素内化之后递送毒性、致死的有效载荷(payload)。
应理解的是，本发明公开主题的抗-GPRC5D抗体可以以额外包含药学可接受的载体的组合物形式施用。合适的药学可接受的载体包括，例如，水、盐水、磷酸缓冲盐水、右旋糖、甘油、乙醇等当中的一种或多种以及它们的组合。药学可接受的载体还可包括微量辅助物质，比如延长保存期限或提高结合蛋白有效性的湿润剂或乳化剂、防腐剂或缓冲剂。还可以配制本领域众所周知的注射用组合物，以便在施用于哺乳动物后提供快速释放、持续释放或延迟释放的活性成分。
本发明公开的主题还提供抗体和编码它们的核酸用于治疗肿瘤(例如多发性骨髓瘤)、用于诊断和预防应用以及用作检测细胞和组织中GPRC5D的研究工具的用途。本发明公开的主题涵盖包含所公开的抗体和核酸的药物组合物。本发明公开的主题还考虑包含本发明公开主题的核酸的载体通过带载体的免疫疗法用于基于抗体的治疗。载体包括使抗体的表达和分泌成为可能的表达载体、以及针对抗原结合蛋白(比如嵌合抗原受体)的细胞表面表达的载体。
本发明公开的主题还涵盖包含核酸的细胞，例如已经用本发明的载体转染的细胞。
试剂盒
本发明公开的主题提供用于治疗或预防肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的试剂盒。在某些实施方式中，试剂盒包含在单位剂型中含有有效量的抗-GPRC5D抗体的治疗组合物。在某些实施方式中，试剂盒包含含有治疗性或预防性疫苗的无菌容器；这些容器可以是盒、安瓿、瓶、小瓶、管子、袋子、小袋(pouch)、泡罩包装或者本领域已知的其他合适容器形式。这些容器可以由塑料、玻璃、层压纸、金属箔或适用于保存药物的其他材料制成。
如果需要，抗-GPRC5D抗体与用于对患有或处于形成肿瘤(例如多发性骨髓瘤)风险的受试者施用细胞的说明书一起提供。说明书通常将包括关于使用组合物用于治疗或预防肿瘤(例如多发性骨髓瘤)的信息。在其他实施方式中，说明书包括以下当中的至少一种：治疗剂的描述；用于治疗或预防瘤形成(例如多发性骨髓瘤)或其症状的剂量方案和给药；注意事项；警告；适应症；禁忌症；过剂量信息；不良反应；动物药理学；临床研究；和/或参考资料。说明书可直接打印在容器(如果存在的话)上，或作为贴于容器的标签，或者作为提供于容器中或与容器在一起的单独的纸、册、卡或折叠印刷品。
方法
流式细胞术分析.对于细胞表面染色，将细胞与合适的mAb在冰上温育30分钟，洗涤，并在必要时与第二抗体试剂温育。流式细胞术数据可以在FACS Calibur(BectonDickinson)上收集并用FlowJo V8.7.1和9.4.8软件分析。
选择和表征对GPRC5D特异性的scFv.使用人scFv抗体噬菌体展示文库用于mAb克隆的选择。简而言之，首先将生物素化的抗原与人scFv噬菌体文库混合，随后抗原-scFv抗体复合物可通过磁性分离架由链霉亲和素缀合的Dynabeads M-280而拉下。然后将结合的克隆洗脱并用于感染大肠杆菌XL1-Blue。可对细菌中表达的scFv噬菌体克隆进行纯化(Yasmina NA,等人Probing the binding mechanism and affinity of tanezumab,arecombinant humanized anti-NGF monoclonal antibody,using a repertoire ofbiosensors.Protein Science 2008；17(8):1326-1335；Roberts WK,等人Vaccinationwith CD20 peptides induces a biologically active,specific immune response inmice.Blood 2002:99(10):3748-3755)。可进行3-4轮淘选以富集与GPRC5D特异性地结合的scFv噬菌体克隆。可通过针对生物素化的单链GPRC5D的流式细胞术方法确定阳性克隆。可进一步使用GPRC5D+细胞系3T3，通过流式细胞术对阳性克隆测试它们与活细胞表面上的GPRC5D的结合。可将细胞洗涤，并且在后续步骤中进行染色。
首先可用纯化的scFv噬菌体克隆对细胞染色，随后用小鼠抗-M13mAb染色，最后用与FITC缀合的山羊抗小鼠Ig染色。每个染色步骤可在冰上进行30-60分钟并在每个染色步骤之间洗涤细胞2次。
使用所选的ScFv片段工程化设计全长mAb.可以在HEK293和中国仓鼠卵巢(CHO)细胞系中产生所选的噬菌体克隆的全长人IgG，如(Caron PC,Class K,Laird W,Co MS,QueenC,Scheinberg DA.Engineered humanized dimeric forms of IgG are more effectiveantibodies.J Exp Med 176:1 191-1 195(1992))所描述。简而言之，可以将抗体可变区亚克隆至哺乳动物表达载体中，匹配人λ或κ轻链恒定区和人IgG恒定区序列。可通过电泳在还原和非还原条件下测量纯化的全长IgG抗体的分子量。
针对GPRC5D的全长人IgG表征.起初，可通过对经转导以过表达GPRC5D的3T3细胞染色，接着用与PE或FITC缀合的第二山羊抗人IgG mAb染色，来确定针对GPRC5D的全人IgGmAb的特异性。可通过流式细胞术测量荧光强度。可使用相同方法来测定mAb与新鲜肿瘤细胞和细胞系的结合。
抗体依赖的细胞毒性作用(ADCC).用于ADCC的靶细胞可以是过表达GPRC5D的3T3细胞。可将不同浓度的抗-GPRC5D抗体或其对照人IgG与靶细胞和新鲜PBMC以不同的效应物：靶标(E:T)比率孵育16小时。可收集上清，并可使用来自Promega的Cytotox 96非放射性试剂盒，遵循其说明，通过LDH释放试验来测量细胞毒性。还可通过标准的4小时51Cr释放试验来测量细胞毒性。
实施例
提出以下实施例以便为本领域普通技术人员提供如何进行和使用本发明公开主题的抗体、双特异性抗体、包含其的组合物、筛选和治疗方法的完全公开和说明，并不意在限制发明人视为本发明公开主题的内容的范围。应当理解的是，在给出以上提供的总体说明的情况下，可以实践各种其他实施方式。
实施例1.不同组织中的GPRC5D表达
通过调查比如癌细胞系百科全书和BioGPS的数据库中的基因表达谱，对人GPRC5D在不同恶性和正常组织中的表达进行评估。如图1A-1D所示，人GPRC5D在多发性骨髓瘤中高度表达，而在其他恶性组织中并不如此。正常表达似乎限于浆细胞。基于发明人对靶向CD19的CAR T细胞的患者经验，潜在的靶向GPRC5D的CAR T细胞根除这种正常细胞类型可能没有显著的不良反应。生理抗体产生的任何缺乏可通过静脉注射免疫球蛋白治疗解决。
实施例2.使用全人噬菌体展示文库选择对GPRC5D特异性的ScFv
针对GPRC5D的噬菌体展示进行4轮淘选，以富集特异性地结合GPRC5D的scFv噬菌体克隆。用12个不同的噬菌体文库对过表达GPRC5D的3T3细胞进行四次独立淘选，鉴定出80个阳性克隆。通过ELISA确定GPRC5D阳性的独特scFv噬菌体克隆，并将具有独特的DNA编码序列的克隆进行进一步表征。为测试ScFv是否结合活细胞上的GPRC5D，测试阳性噬菌体克隆对GPRC5D阳性细胞系3T3的结合。经FACS筛选，80个克隆中鉴定出72个阳性克隆；阳性克隆率为90％。测序后，从72个经测序的阳性克隆中发现32个独特的GPRC5D-3T3阳性结合克隆；独特克隆率为45％。
实施例3.抗-GPRC5D抗体的表位作图
四种抗-GPRC5D抗体：ET150-2、ET150-5、ET150-8和ET150-18mIgG1。在所有实施例中使用的“mIgG1”表示可变区是全人的且Fc部分是小鼠IgG1。参见表34。
表34
名称 来源 浓度 位置 状态
ET150-18mIgG1 小鼠Fc 1.1mg/ml +4℃/22 良好
ET150-2mIgG1 小鼠Fc 0.66mg/ml +4℃/22 良好
ET150-5mIgG1 小鼠Fc 1.9mg/ml +4℃/22 良好
ET150-8mIgG1 小鼠Fc 2.9mg/ml +4℃/22 良好
靶蛋白是具有SEQ ID NO:97所示的氨基酸序列的人GPRC5D。人GPRC5D的N-末端区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸1-27。人GPRC5D的胞外环1(ECL1)区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸85-93。人GPRC5D的胞外环2(ECL2)区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸145-167。人GPRC5D的胞外环3(ECL3)区域具有SEQ ID NO:97的氨基酸226-239。
方法
CLIPS技术的原理.CLIPS技术在结构上将肽固定为指定的三维结构。这导致甚至最复杂的结合位点的功能模拟。CLIPS技术现在常规地用于使肽文库形成单、双或三环结构以及片层和螺旋样折叠(图2)。
组合CLIPS文库筛选细节.CLIPS文库筛选从利用组合的矩阵设计将靶蛋白转变成达10,000个重叠肽构建物的文库开始。在固体载体上，合成线性肽矩阵，其随后形成空间确定的CLIPS构建物(图3)。代表正确构象的非连续表位的两部分的构建物以高亲和性结合抗体，对亲和力进行检测并定量。呈现不完整表位的构建物以较低的亲和力结合抗体，而不含有表位的构建物根本不结合抗体。亲和力信息用于反复的筛选以详细地限定表位的序列和构象。
热度图分析.热度图是数据的图形表示，其中在二维图中变量所取的值以颜色表示。对于双环CLIPS肽，这样的二维图可得自第一和第二环的独立序列。例如，图5中描绘的16个CLIPS肽的序列实际上是环1中4个独特子序列(图4中颜色为蓝色)和环2中4个独特子序列(图4中颜色为绿色)的排列。因此，观察到的ELISA数据(图5A中颜色为红色)可以以4×4矩阵作图，其中各个X坐标对应于第一环的序列，并且各个Y坐标对应于第二环的序列。例如针对CLIPS肽CLSSERERVEDLFEYECELLTSEPIFHCRQEDC(SEQ ID NO:382)(在图4A中以箭头示出)观察到的ELISA值可以见于图5B的第三行第三列(用箭头和红框示出)。为进一步便于可视化，可将ELISA值用连续梯度的颜色替代。在此情况下，极低值颜色为绿色，极高值颜色为红色，且均值颜色为黑色(参见图5C)。对于上述实施例，均值为0.71。当将此彩图应用于图5B中描绘的数据矩阵时，得到彩色热度图(参见图5D，为了更加清楚仍示出原始数据)。
肽的合成.为重建靶分子的表位，合成了肽文库。通过用专有亲水性聚合物配方进行接枝，接着使用二环己基碳二亚胺(DCC)和N-羟基苯并三唑(HOBt)，与叔丁氧羰基-六亚甲基二胺(BocHMDA)进行反应，随后使用三氟乙酸(TFA)裂解Boc-基团，得到氨基官能化的聚丙烯载体。通过定制改良的JANUS液体处理站(Perkin Elmer)使用标准Fmoc-肽合成在氨基官能化的固体载体上合成肽。使用Pepscan的专有的支架上化学连接肽(ChemicallyLinked Peptides on Scaffolds，CLIPS)技术进行结构模拟物的合成。CLIPS技术使得肽构成为单环、双环、三环、片层折叠、螺旋样折叠及它们的组合成为可能。CLIPS模板与半胱氨酸残基联接。肽中的多个半胱氨酸的侧链与一个或两个CLIPS模板联接。例如，将P2 CLIPS(2,6-双(溴甲基)吡啶)的0.5mM溶液溶于碳酸氢铵(20mM，pH 7.8)/乙腈(1:3(v/v))中。将此溶液加至肽阵列上。CLIPS模板结合到肽阵列(具有3μl孔的455孔板)的固相结合肽中存在的两个半胱氨酸的侧链。将肽阵列在被覆盖于溶液中的同时在溶液中轻柔晃动30-60分钟。最后，用过量的H2O彻底清洗肽阵列，并于70℃在含有1％SDS/0.1％β-巯基乙醇的PBS(pH7.2)的断裂缓冲液(disrupt-buffer)中超声处理30分钟，接着在H2O中再超声处理45分钟。携带肽的T3 CLIPS以类似的方式制备，但现在具有三个半胱氨酸。
ELISA筛选.在基于PEPSCAN的ELISA中测试抗体对各个合成肽的结合。将肽阵列与一抗溶液一起孵育(4℃下过夜)。洗涤后，在25℃将肽阵列与适当的抗体过氧化物酶偶联物(SBA)的1/1000稀释液一起孵育一小时。洗涤后，加入过氧化物酶底物2,2’-连氮-二-3-乙基苯并噻唑磺酸(ABTS)和2μl/ml的3％H2O2。一小时后，测量颜色显影。用电荷耦合器件(CCD)摄像机和图像处理系统对颜色显影进行定量。
数据处理.从CCD摄像机得到的数值在0-3000mAU的范围内，与标准96-孔板酶标仪(ELISA-reader)类似。对结果定量并存储到Peplab数据库中。偶尔有孔中含有气泡导致假阳性值，手动检查卡片并将气泡引起的任何值记为0。
合成质量控制.为验证合成肽的质量，并行地合成一组单独的阳性和阴性对照肽。它们用抗体57.9筛选(参考文献Posthumus等人,J.Virology,1990,64:3304-3309)。
结果
筛选.抗体结合取决于多因素的组合，包括ELISA缓冲液中的抗体浓度和竞争性蛋白质的量和性质。而且，预包被条件(在与试验样品孵育之前对肽阵列的特别处理)影响结合。这些细节汇总于表35中。对于Pepscan缓冲液和预处理(SQ)，数字表示竞争性蛋白质(马血清和卵清蛋白的组合)的相对量。
表35.筛选条件
标签 稀释 样品缓冲液 预处理
ET150-18mIgG1 1μg/ml 1％SQ 1％SQ
ET150-2mIgG1 1μg/ml 10％SQ 10％SQ
ET150-5mIgG1 1μg/ml 10％SQ 10％SQ
ET150-8mIgG1 3μg/ml 10％SQ 10％SQ
抗体ET150-2.当在适中严格条件下进行测试时，抗体ET150-2强烈地结合所有组的肽(图6)。累积数据分析显示，该抗体识别由肽段16CDAEGPWGII25(N-末端)(SEQ ID NO:383)、157MFVNMTPC164(ECL2)(SEQ ID NO:384)和229PQFQRQPQW237(ECL3)(SEQ ID NO:385)组成的非连续表位，其中单独肽段16CDAEGPWGII25(SEQ ID NO:383)和229PQFQRQPQW237(SEQ IDNO:385)足够用于结合。
抗体ET150-5.当在高严格条件下进行测试时，抗体ET150-5强烈地结合所有组的肽(图7)。累积数据分析显示，该抗体识别由肽段5CIESTGDYFLLCD17(N-末端)(SEQ ID NO:386)、85NQQTAPVRYFL95(ECL1)(SEQ ID NO:387)和157MFVNMTPC164(ECL2)(SEQ ID NO:384)组成的非连续表位，其中单独肽段5CIESTGDYFLLCD17(SEQ ID NO:386)足够用于结合。
抗体ET150-18.当在高严格条件下进行测试时，抗体ET150-18结合第4组和第7组的肽，其包含结构限制性肽。在含有线性肽的组中未记录显著的结合(图8)。累积数据分析显示，该抗体识别由肽段10GDYFLLCD17(N-末端)(SEQ ID NO:388)、157MFVNMTPCQLN167(ECL2)(SEQ ID NO:389)和227GNPQFQRQPQW237(ECL3)(SEQ ID NO:390)组成的非连续表位。肽段10GDYFLLCD17(SEQ ID NO:388)和227GNPQFQRQPQW237(SEQ ID NO:390)表示表位核心，因为两个肽段分别足以结合。
抗体ET150-8.当在高严格条件下进行测试时，抗体ET150-8结合所有组的肽，除了第2组(图9)。累积数据分析显示，该抗体识别由肽段15LCDAEGPWG23(N-末端)(SEQ ID NO:391)和230QFQRQPQWDDPVVC243(ECL3)(SEQ ID NO:392)组成的非连续表位，其中肽段15LCDAEGPWG23(SEQ ID NO:391)是表位的显性部分，因为其单独足以结合。而且，从第1组(线性)和第4组(环)获得的比较结果显示，对表位模拟物引入结构性限制使肽的结合增强，在含有序列230QFQRQPQWDDPVVC243(SEQ ID NO:392)的肽的情况下尤其如此。
结论
调查的所有抗体均识别非连续表位，使用Pepscan阵列对其作图。核心的假定表位列于表36中。所有抗体普遍识别蛋白质N-末端的重叠区域以及一个或两个ECL的区域。两种抗体ET150-18和ET150-8显示出需要结构性限制以支持抗体结合，表明这两种抗体不仅识别非连续表位，还识别构象表位。抗体ET150-2和ET150-5在肽结合方面在线性和环状肽之间未显示出显著差异。
表36.表位列表(按出现顺序分别为SEQ ID NO:383-387、384、391、392和388-390)
抗体 N-末端 ECL1 ECL2 ECL3
ET150-2 <sub>16</sub>CDAEGPWGII<sub>25</sub><sup>*)</sup> - <sub>157</sub>MFVNMTPC<sub>164</sub> <sub>229</sub>PQFQRQPQW<sub>237</sub><sup>*)</sup>
ET150-5 <sub>5</sub>CIESTGDYFLLCD<sub>17</sub><sup>*)</sup> <sub>85</sub>NQQTAPVRYFL<sub>95</sub> <sub>157</sub>MFVNMTPC<sub>164</sub> -
ET150-8 <sub>15</sub>LCDAEGPWG<sub>23</sub><sup>*)</sup> - - <sub>230</sub>QFQRQPQWDDPVVC<sub>243</sub>
ET150-18 <sub>10</sub>GDYFLLCD<sub>17</sub><sup>*)</sup> - <sub>157</sub>MFVNMTPCQLN<sub>167</sub> <sub>227</sub>GNPQFQRQPQW<sub>237</sub><sup>*)</sup>
*)显性部分
图10是关于GPCR的整体结构的研究结果的图示。因为N-末端高度柔性且未结构化，它可能与ECL瞬时相互作用形成非连续免疫显性区域。
肽结合中的差异和共性可在图11中用散点图分析图示。左上角和右下角的数据点表明结合中的差异。尽管有显著的表位重叠，但各抗体的表位的细微特异性在很大程度上不同。
实施例4.抗-GPRC5D抗体的筛选数据
FACS筛选.
图12示出GPRC5D-特异性噬菌体抗体克隆(ET150-1、ET150-2、ET150-5、ET150-8、ET150-18)的FACS分析。将噬菌体克隆与3T3-GPRC5D细胞系一起孵育，然后与抗-M13小鼠抗体一起孵育。最终再次洗涤后向反应中添加APC标记的抗小鼠IgG二抗。通过FACS测量结合并表示为平均荧光强度(MFI)。将细胞与M13 K07辅助噬菌体一起孵育，并将单独的细胞用作阴性对照。
实施例5.抗-GPRC5D抗体的结合亲和力
图13示出GPRC5D特异性噬菌体抗体克隆(ET150-2、ET150-5、ET150-8、ET150-18)的FACS分析。将各抗体(ET150-1、ET150-2、ET150-5、ET150-8、ET150-18)以10μg/mL或1μg/mL与3T3或3T3-GPRC5D细胞一起孵育，接着与抗M13小鼠抗体一起孵育。最终向反应中添加PE-标记的抗小鼠IgG二抗。通过FACS测量结合并表示为平均荧光强度(MFI)(图13)。将细胞与单独的二抗、ET901 mIgG1同种型对照一起孵育，并将单独的细胞用作阴性对照。
实施例6.对GPRC5D和CD3特异性的双特异性抗体
图14示出使用本文公开的ET150-2、ET150-5、ET150-8、ET150-18克隆产生的抗-GPRC5D/抗-CD3双特异性抗体的FACS分析。将各抗体以10μg/ml与3T3或3T3-GPRC5D细胞一起孵育，接着与FITC缀合的抗-His标签抗体一起孵育。通过FACS测量结合并表示为平均荧光强度(MFI)。将细胞与单独的二抗、ET901双特异性抗体对照一起孵育，并将单独的细胞用作阴性对照。如图14所示，使用所公开的特异性地结合表达GPRC5D的3T3细胞的scFv产生抗-GPRC5D/CD3双特异性抗体。
尽管出于理解清楚的目的以例证和实施例的方式相当详细地描述了前述的本发明公开的主题，但说明书和实施例不应被理解为限制本发明公开主题的范围。本文引用的所有专利和科技文献的公开内容明确地全部并入本文以供参考。
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Claims (38)

1.一种抗G-蛋白偶联受体C家族5组D成员（GPRC5D）抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:220所示的CDR1、氨基酸序列如SEQ ID NO:221所示的CDR2、和氨基酸序列如SEQ ID NO:222所示的CDR3；所述轻链可变区包含：氨基酸序列如SEQ ID NO:223所示的CDR1；氨基酸序列如SEQ ID NO:224所示的CDR2；和氨基酸序列如SEQ ID NO:225所示的CDR3。
2.一种抗G-蛋白偶联受体C家族5组D成员（GPRC5D）抗体或其抗原结合片段，其包含重链可变区和轻链可变区，所述重链可变区包含SEQ ID NO: 65所示的重链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3，且所述轻链可变区包含SEQ ID NO: 66所示的轻链可变区序列的CDR1、CDR2和CDR3。
3.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO: 65的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。
4.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述轻链可变区包含与SEQ ID NO: 66的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。
5.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含与SEQ ID NO: 65的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含与SEQ ID NO: 66的氨基酸序列具有至少90%序列同一性的氨基酸序列。
6.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述重链可变区包含SEQ ID NO:65所示的氨基酸序列，且所述轻链可变区包含SEQ ID NO:66所示的氨基酸序列。
7.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其包含SEQ IDNO: 116所示的氨基酸序列。
8.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段包含人可变区框架区。
9.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其是全人抗体或其抗原结合片段。
10.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其是嵌合抗体或其抗原结合片段。
11.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其是人源化抗体或其抗原结合片段。
12.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的抗原结合片段是抗原结合片段（Fab）、Fab’、F(ab’)2、可变片段（Fv）或单链可变片段（scFv）。
13.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体的抗原结合片段是单链可变片段（scFv）。
14.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中GPRC5D包含SEQ ID NO: 97所示的氨基酸序列。
15.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO: 97的氨基酸16-23的表位区域。
16.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO: 97的氨基酸15-23的表位区域。
17.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO: 97的氨基酸230-237的表位区域。
18.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，其中所述抗体或其抗原结合片段结合包含SEQ ID NO: 97的氨基酸230-243的表位区域。
19.根据权利要求1或权利要求2所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合部分，其中所述抗体或其抗原结合片段以1 × 10-9 M至1 × 10-8 M的结合亲和力（Kd）结合人GPRC5D。
20.一种组合物，其包含根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段，以及药学可接受的载体。
21.一种免疫偶联物，其包含与治疗剂连接的根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段。
22.根据权利要求21所述的免疫偶联物，其中所述治疗剂是药物。
23.根据权利要求21的免疫偶联物，其中所述治疗剂是细胞毒素。
24.根据权利要求21的免疫偶联物，其中所述治疗剂是放射性同位素。
25.一种组合物，其包含根据权利要求21-24中任一项所述的免疫偶联物以及药学可接受的载体。
26.一种双特异性分子，其包含与第二功能部分连接的根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段。
27.根据权利要求26所述的双特异性分子，其中所述第二功能部分具有与所述抗体或其抗原结合片段不同的结合特异性。
28.根据权利要求27所述的双特异性分子，其中所述第二功能部分对免疫细胞具有结合特异性。
29.根据权利要求27所述的双特异性分子，其中所述第二功能部分对CD3具有结合特异性。
30.一种组合物，其包含根据权利要求26-29中任一项所述的双特异性分子以及药学可接受的载体。
31.一种核酸分子，其编码根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段。
32.一种表达载体，其包含根据权利要求31所述的核酸分子。
33.一种宿主细胞，其包含根据权利要求32所述的表达载体。
34.根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段在制备用于检测全细胞或组织中的GPRC5D的试剂盒中的用途，其中：
所述抗体或其抗原结合片段包含可检测标记；
所述细胞或组织与所述抗体或其抗原结合片段接触；以及
通过测量与所述细胞或组织相关联的可检测标记的量，确定与所述细胞或组织结合的标记的抗体或其抗原结合片段的量，其中所结合的抗体或其抗原结合片段的量表明所述细胞或组织中GPRC5D的量。
35.根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段在制备用于治疗受试者的多发性骨髓瘤的药物中的用途。
36.根据权利要求35所述的用途，其中所述受试者是人。
37.一种用于治疗多发性骨髓瘤的试剂盒，其包含根据权利要求1-19中任一项所述的抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段。
38.根据权利要求37所述的试剂盒，还包含用于使用所述抗GPRC5D抗体或其抗原结合片段治疗患有多发性骨髓瘤的受试者的书面说明书。
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