CN107206047A

CN107206047A - 治疗烧伤和青光眼、减少皮肤皱纹和促进毛发生长的包含含rgd基序的肽或其片段的组合物

Info

Publication number: CN107206047A
Application number: CN201580072075.3A
Authority: CN
Inventors: 严基安; 金暎睦; 林钟焕
Original assignee: Department Of Burns Corp
Current assignee: Department Of Burns Corp
Priority date: 2014-12-31
Filing date: 2015-12-31
Publication date: 2017-09-26
Anticipated expiration: 2035-12-31
Also published as: EP3241557A1; JP2018502116A; JP6510054B2; US20170368153A1; JP6910391B2; CN107206047B; KR20180021764A; KR101832121B1; JP6805287B2; KR102412658B1; JP2019123743A; US20200000891A1; EP3241557B1; KR102412659B1; ES2836426T3; WO2016108669A1; KR20210034559A; JP2019123742A; US10463720B2; US10632181B2

Abstract

本发明涉及一种包含RGD基序的肽或其片段，其用于有效地治疗烧伤和青光眼，获得减少皮肤皱纹的优异效果，并且有效促进毛发修复和毛发生长以及预防脱发。因此，包含基序的肽或其片段可用于化妆品组合物和药物组合物。

Description

治疗烧伤和青光眼、减少皮肤皱纹和促进毛发生长的包含含 RGD基序的肽或其片段的组合物

技术领域

本申请要求于2014年12月31日在韩国提交的韩国专利申请号10-2014-0195008的优先权，其公开内容通过引用并入本文。

本公开涉及一种肽或其片段以及包含其的药物组合物和化妆品组合物，该肽或其片段具有减少皮肤皱纹、治疗烧伤和青光眼以及促进毛发生长的作用。

背景技术

去整合素-金属蛋白酶(以下称为“ADAM”)是一种含有去整合素结构域和金属蛋白酶结构域的多功能蛋白，并已知其在细胞-细胞和细胞-基质相互作用中具有粘附性和蛋白水解性。ADAM15是一种在其类去整合素结构域中具有Arg-Gly-Asp(RGD)基序的独特蛋白质。ADAM15在平滑肌细胞、肾小球膜细胞和内皮细胞中表达。ADAM家族涉及各种生物过程例如受精、肌肉发育、神经生长和细胞因子分泌(Blobel CP等；Nature 1992.356：248-252.；Aitken,J.Nature 1992；356：196-197.；Blobel CP等，J.Cell Biol.1990；111:69-78.；White JM.Curr.Opin.Cell.Biol.2003；15：598-606)。已知ADAM15的称为类EGF(表皮生长因子)结构域的类去整合素结构域尤其特异性结合整合素β链(整合素β3)和结合Src家族蛋白酪氨酸激酶，并且在信号传递和细胞间的粘附中起作用。已知ADAM 15蛋白与炎性疾病(例如风湿病)和各种疾病(包括乳腺癌和前列腺癌)相关，并需要进一步的研究。

另一方面，人皮肤由包括角质层和真皮的表皮和结缔组织组成，并且角质层由通过角质形成细胞分化过程形成的死细胞和表皮中的基底细胞的层组成，并且起到保护人体免受户外环境影响的作用。此外，位于皮肤中的真皮层由纤维蛋白质、胶原蛋白和弹性蛋白组成，并且对皮肤提供弹性和使皮肤保持紧致，此外真皮层具有血管和神经，并且还含有涉及过敏反应的肥大细胞和天然保湿因子例如Na-PCA或透明质酸。

皮肤皱纹产生的原因主要分为两种：一种是“内在老化”，包括年龄相关的细胞(即构成皮肤的单位)功能变化，另一种是“外在老化”或与室外环境(即紫外线(UV)、空气污染和压力)相关的老化。长时间暴露于紫外线的光老化是造成皮肤老化并导致急性和慢性皮肤损伤(包括皮肤癌和皱纹)的最重要原因。根据太阳光中的波长范围，将其分为三类：UVA(320-400nm)、UVB(290-320nm)和UVC(200-290nm)，并且UVC几乎完全被臭氧层吸收，而UVA和UVB到达地球表面并作为导致皮肤损伤的致命因素。已知UVB相比于UVA具有更短的波长和更高的强度，其穿透在真皮上的表皮并损伤角质形成细胞和胶原纤维，从而导致皱纹产生、皮肤变色或皮肤癌。此外，最近发现细胞和细胞外基质蛋白(胶原、纤维蛋白、纤连蛋白)之间的相互作用在皮肤细胞的存活和生长以及组织的重建中起重要作用。

烧伤主要是由事故引起的，根据病因，可分为热烧伤、电烧伤、化学烧伤，辐射烧伤。烧伤的严重程度根据烧伤宽度和深度、与引起灼伤的物体的温度的接触时间以及皮肤状况分为一度、二度、三度和四度烧伤。在二度以上的烧伤中，可能会留下疤痕，需要在医院进行治疗。

一度烧伤导致皮肤发红和痒痛。它们损伤表皮、皮肤层的最外层以及伴有疼痛和发红的肿胀。症状在几天内消失，但可能之后会留下浅层剥脱和色素沉着。恢复后，瘢痕(疤痕)不残留。晒伤是一度烧伤最常见的示例。

二度烧伤影响表皮和真皮，并在事故发生后24小时内引起发红、疼痛、肿胀和水疱。二度烧伤可能会影响汗腺或毛孔。出现严重的烧灼感和疼痛。水泡的破裂留下侵蚀区域并大量释放分泌物。烧伤面积约为体表面积的15％以上时，应特别注意。二度烧伤在几周内治愈，但在许多情况下，之后会留下色素沉着或色素脱色。当发生继发感染时，部分症状变得更严重，并需要更长时间才能愈合。

三度烧伤影响表皮、真皮、甚至皮下脂肪，皮肤颜色变暗或变浅，皮肤表面正下方的血管凝结。烧伤的区域可能麻木，但患者感到非常严重的疼痛，有皮肤组织和结构的死亡，需要大量的时间来治疗，之后会留下伤痕。事故发生后2周，皮肤剥离，并露出溃疡表面。分泌大量液体，可能出现出血，但是当新组织逐渐形成时三度烧伤愈合，导致表皮再生，之后残留瘢痕。当发生深层皮肤坏死时，或发生继发感染时，愈合延迟，产生不均匀的瘢痕表面，导致瘢痕疙瘩形成或变形或者运动障碍。当烧伤面积为体表面积的10％以上时，需要特别注意。

四度烧伤包括烧焦区域的碳化和黑暗组织，并延伸穿过皮肤层以损伤脂肪层、韧带、筋膜、肌肉甚至骨组织。四度烧伤主要包括高压电烧伤，有些情况下，病毒感染发生时深度皮肤2-3度烧伤可能发展为四度烧伤。烧伤面积为20％以上时，可能会发生全身反应；可能由于体液过度的损失而发生低血压、休克、急性肾功能障碍，并且之后可能发生伤口感染或肺炎、脓毒症以及多器官功能障碍综合征。

烧伤治疗专注于皮肤和皮肤附属器的再生，但目前开发的技术没有提供完美的治疗。

青光眼统指视神经(包括视网膜神经细胞)中引起的疾病，并具有视神经萎缩的形式。未经治疗的青光眼可能永久影响视力。在过去，青光眼被定义为导致视神经损伤和由于眼内压高于正常眼睛引起的视力损害的疾病，但最近据报道，青光眼的视神经损伤是由高眼内压以外的许多因素引起的，因此，青光眼被定义为导致视神经特征性变化和随之而来的视力损害的进行性视神经综合征。

根据原因或综合征，青光眼可分为开角型青光眼、闭角型青光眼、先天性青光眼、继发性青光眼、晶状体溶解性青光眼、假性剥脱性青光眼、癌性青光眼、新生血管性青光眼和类固醇性青光眼。

在青光眼患者中，如果眼内压未经药物治疗和激光治疗调整，或者尽管进行了充分的药物治疗，视力检查中发现视力障碍，以及在眼底检查中发现青光眼视神经变化恶化的迹象，或由于不利影响不允许使用药物时，考虑手术治疗。小梁切除术是常用的手术方法之一。小梁切除术可以通过滤过泡来人工引流房水以降低眼内压。通过手术形成的滤过泡中的伤口愈合过程和瘢痕形成导致房水引流通道阻塞，并逐渐降低滤过泡的功能，导致手术失败。目前，为了增加小梁切除术的长期手术成功率，使用抗代谢药、5-氟尿嘧啶(5-FU)或丝裂霉素C(MMC)作为辅助治疗，其导致小梁切除术成功率较高，但增加晚期并发症，例如低眼内压、滤过泡泄漏以及滤过泡相关感染。最近报道OculusGen^TM(OculusGen BiomedicalInc.，台北，台湾)用于以“擅自组织”的方式提供成纤维细胞生长的支架，并允许“擅自排列的成纤维细胞”产生和排列胶原蛋白在细胞周围的许多方向，使得与正常组织中发现的胶原结构相似的结构形成，而不是在瘢痕组织中发现的胶原结构，以用于小梁切除术。然而，除了小梁切除术之外，还需要替代治疗青光眼的解决方案。

一般来说，毛发生长周期具有三个阶段：生长期、退行期和休止期。生长期是毛发的主动生长阶段并占据毛发生长周期的大部分。退行期的特征在于细胞凋亡，并且在该阶段，毛发准备脱落，以及休止期是毛发开始脱落期间的毛囊的休眠或静止期，导致明显的毛发损失。

脱发或毛发损失发生在发根变弱时，毛发在重复生长-退行-休止期间变薄，最终毛发变软、变细和变短。众所周知，脱发的原因包括遗传因素、性激素睾酮过度分泌、血液流向毛囊减少、皮脂分泌过多、压力、饮食时间不规律、空气污染和过度暴露于紫外线，以及大多数情况下，许多原因组合起来发挥作用。

脱发大体分为雄激素性脱发、女性脱发、斑秃、以及其它原因引起的脱发。雄激素性脱发是由于男性激素(称为睾酮)而出现的现象，睾酮在促进男性性特征和引起肌肉生长和男性器官在青春期期间成熟发挥作用，当睾酮激素通过5α-还原酶转化为更有效的激素二氢睾酮(DHT)时，激素作用于毛囊真皮乳头细胞以诱导毛囊中的生长-到-退行的转变，导致脱发。女性脱发通常是由于绝经后低的睾酮水平。女性毛发脱落不会出现在额头皮上，主要发生在头皮中部，不同于雄激素性脱发。女性脱发比男性更少地与5α-还原酶相关。因此，抑制5α-还原酶的药物对于经历绝经后脱发的妇女不起作用。斑秃是由自身免疫性疾病、精神压力或遗传因素引起的。斑秃代表圆形或椭圆形的脱发斑块，其特征在于头癣或头皮炎。斑秃的原因与雄激素性脱发有根本的不同，使用不同的治疗方法，例如使用控制肾上腺皮质激素的药物，或将米诺地尔用于受影响的部位。

为了解决脱发问题，已经研究了具有脱发预防和治疗效果的各种活性成分以及包含它们的组合物。本研究的主要或预期效果包括保持毛发厚度或增厚毛发的效果、诱发早发或延长生长期的效果、延迟或缩短休止期释放的效果、5α-还原酶活性的抑制作用、促进毛囊的血液循环的效果、保湿效果、抗氧化效果、防止头皮屑效果、灭菌效果和细胞外基质(ECM)表达促进效果。

现在使用的批准药物是米诺地尔。米诺地尔最初是作为一种抗高血压药物生产的，它有助于平滑肌血管的扩大，但是在发现其副作用(身体各处的毛发生长)之后，作为促进毛发生长的药物被开发出来(美国专利号4,596,812和4,139,619)。虽然其详细的科学作用机制尚不清楚，但据了解，米诺地尔通过向毛囊提供更多血液流动的组合作用而促进毛发生长。基于该效果，米诺地尔被FDA批准为非处方药，但报告了不良反应例如皮肤刺激、瘙痒、发红、非期望部位的毛发生长以及脱发的恶化，并且也应连续不断施用以维持功效。

发明内容

技术问题

为了解决上述问题，本公开提供一种具有特定顺序和结构的肽，以及对皮肤皱纹、烧伤、青光眼和脱发的改善或治疗具有优异效果的药物组合物和化妆品组合物。

技术方案

为了实现该目的，本公开提供一种组合物，其包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段作为活性成分，并且具有以下效果的至少一种：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

优选地，肽片段可以是选自以下的至少一种：

1)由包含序列号1的RGD基序的5-45个氨基酸组成的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有3个以下的二硫键；

2)在序列号1的氨基酸序列中包含第30-38位氨基酸的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键；

3)在序列号1的氨基酸序列中包含第32-43位氨基酸的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键；

4)在序列号1的氨基酸序列中包含第30-44位氨基酸的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键；

5)在序列号1的氨基酸序列中包含第18-54位氨基酸的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键；和

6)在序列号1的氨基酸序列中包含第10-54位氨基酸的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键。

更优选地，肽片段可以是选自以下的至少一种：

1)由包含序列号1的RGD基序的9、12或15个氨基酸组成的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有3个以下的二硫键；

2)在序列号1的氨基酸序列中由第30-38位氨基酸组成的片段；

3)在序列号1的氨基酸序列中由第32-43位氨基酸组成的片段，在第36位半胱氨酸与第42位半胱氨酸之间含有二硫键；

4)在序列号1的氨基酸序列中由第30-44位氨基酸组成的片段，在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键；或

5)在序列号1的氨基酸序列中由第30-44位氨基酸组成的片段，在该片段中的半胱氨酸之间含有二硫键。

根据本公开的组合物可以用于药物组合物、化妆品组合物、保健功能食品组合物和准药物组合物。

此外，本公开提供一种用于由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的多肽或其片段的施用方法，以提供以下效果的至少一种(以下称为“方法”)：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

此外，本公开提供一种由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段的用途，以提供以下效果的至少一种(以下称为“用途”)：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

本文中所述的“组合物”、“方法”和“用途”是基于由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段对治疗烧伤；治疗青光眼；减少皮肤皱纹；或预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复的效果，除非另有限定，认为下述“组合物”的描述同样适用于“方法”和“用途”，并且“方法”和“用途”的描述在此省略，以避免重复描述。

以下，对本公开进行详细说明。

本发明人发现，当施用时，包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的特定序列和结构的肽促进胶原产生，并且在治疗烧伤、治疗青光眼、促进毛发生长和减少皮肤皱纹中有效。

根据本公开的组合物包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段。

由序列号1的氨基酸序列组成的肽由包含RGD氨基酸的58个氨基酸组成，任选地在相应的肽中的半胱氨酸之间含有二硫键，因此可以指在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有1个以上的二硫键。优选地，由序列号1的氨基酸序列组成的肽可以是由ADAM金属肽酶结构域15(ADAM 15)(GenBank登录号AAH14566.1)的第452-509位氨基酸组成的多肽。例如，由序列号1的氨基酸序列组成的肽可以是HU022，并且HU022在该肽中的半胱氨酸之间不含二硫键。

由序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段可以是由包含RGD基序的3个以上的氨基酸组成的片段。优选地，肽片段可以由包含RGD基序的5至45个氨基酸组成。更优选地，肽片段可以由包含RGD基序的9、12或15个氨基酸组成。RGD基序对应于序列号1的氨基酸序列中的第33、34和35个氨基酸。如果肽片段包含RGD基序即序列号1的第33、34和35个氨基酸就足够了，也就是说，本公开内容不一定限于包含RGD基序及其连续氨基酸的肽片段。由序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段可以在片段中的半胱氨酸之间具有二硫键。片段中的半胱氨酸之间的二硫键与片段内的半胱氨酸和片段外的半胱氨酸之间的二硫键不同。基于片段中半胱氨酸的数目，片段中的半胱氨酸之间的二硫键可以包含0个以上的二硫键，并且任选地可以不含二硫键或含有1个以上的二硫键，并且优选地不含二硫键或含有3个以下的二硫键。

优选地，由序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段可以是以下的一种：

这些片段包含所述2)-6)的特定氨基酸序列，并由58个以下的氨基酸组成，任选地在相应片段中的半胱氨酸之间含有二硫键。基于相应片段中的半胱氨酸数，片段可以包含0个以上的二硫键，并且优选地包含0个以上且3个以下的二硫键。

更优选地，由序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段可以是以下的一种：

2)在序列号1的氨基酸序列中由第30-38位氨基酸组成的片段；

3)在序列号1的氨基酸序列中的第32-43位氨基酸组成的片段，在第36位半胱氨酸与第42位半胱氨酸之间含有二硫键；

根据本公开的具体实施方式，2)片段可以是HU027，其对应于序列号5。

根据本公开的具体实施方式，3)片段可以是HU026，其对应于序列号4。

根据本公开的具体实施方式，4)片段可以是HU025，其对应于序列号3。

根据本公开的具体实施方式，5)片段可以是HU024，其对应于序列号2。

根据本公开的“肽或其片段”的定义包括其药学上可接受的衍生物，并且药学上可接受的衍生物将被认为具有或提供与根据本发明的肽或片段相同的生物学功能和/或活性并且可以包含根据本公开的肽或片段的药学上可接受的盐，只要不破坏本公开的目的即可。

本文中所用的术语“药学上可接受的盐”是指具有化合物的所需生物和/或生理活性的任何盐，并表现出最小的不期望的毒理作用。对于盐，由药学上可接受的游离酸形成的酸加成盐是有用的。酸加成盐通过常规方法制备，例如通过将化合物溶解在过量的酸水溶液中，并使用水混溶性有机溶剂(例如甲醇、乙醇、丙酮或乙腈)沉淀该盐。在水中可以加热化合物和相同摩尔量的酸或醇(例如乙二醇单甲基醚)，随后可将混合物蒸发并干燥，或者可通过抽吸过滤沉淀的盐。在这种情况下，游离酸包括无机酸和有机酸，无机酸包括但不限于盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸、硫酸和酒石酸，有机酸包括但不限于甲磺酸、对甲苯磺酸、乙酸、三氟乙酸、马来酸、琥珀酸、草酸、苯甲酸、酒石酸、富马酸、扁桃酸、丙酸、柠檬酸、乳酸、乙醇酸、葡萄糖酸、半乳糖醛酸、谷氨酸、戊二酸、葡萄糖醛酸、天冬氨酸、抗坏血酸、碳酸、香草酸和氢碘酸。此外，药学上可接受的金属盐可以使用碱生产。碱金属或碱土金属盐通过例如将化合物溶解在过量的碱金属氢氧化物或碱土金属氢氧化物溶液中，过滤未溶解的化合物盐，蒸发并干燥残余物而获得。在这种情况下，对于金属盐，特别地，钠、钾或钙盐适用于药物用途，但不限于此。此外，其他合适的盐是银盐，并且可以通过引起碱金属或碱土金属盐和适当的银盐(例如硝酸银)之间的反应来获得银盐。除非另有说明，否则根据本公开内容的肽或其片段包含可存在于根据本公开的肽或片段中的大部分酸或碱性质的盐。例如，药学上可接受的盐包括羟基的钠、钙和钾盐，氨基的其它药学上可接受的盐包括氢溴酸盐、硫酸盐、硫酸氢盐、磷酸盐、磷酸氢盐、磷酸二氢盐、乙酸盐、琥珀酸盐、柠檬酸盐、酒石酸盐、乳酸盐、扁桃酸盐、甲磺酸盐(mesylate)和对甲苯磺酸盐(tosylate)，并且可以通过本领域已知的盐生产方法制备。

根据本公开的肽或其片段可以通过本领域已知的多种方法生产，并且优选地可以通过蛋白质合成方法(Merrifield，R.B.，J.Am.chem.Soc.85：2149,1963)制备。

根据本公开的肽或其片段具有以下效果的至少一种：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

此外，根据本公开的肽或其片段可以以药物组合物或化妆品组合物的形式提供，并且药物组合物和化妆品组合物在下文中统称为“根据本公开的组合物”。

本文中所用的术语“促进”、“减少”或“治疗”是指通过施用根据本公开的组合物来改善症状或改变为较好状况的所有活动。此外，本文中所用的术语“预防”是指通过施用根据本公开的组合物来抑制症状或延迟疾病发作的所有活动。

用于每种效果的根据本公开的优选的肽或其片段如下：

治疗烧伤

本文中所用的术语“烧伤”是指由高温的气体、液体、固体或火焰燃烧而发生的损伤，并且根据烧伤的宽度和深度、与造成烧伤的物体温度的接触时间以及皮肤状况，烧伤可具有各种症状和并发症。根据烧伤的严重程度，可能会损伤表皮、真皮和/或皮下组织，并可能会损伤皮肤附属器例如毛囊、汗腺和皮脂腺，甚至可能会损伤皮肤层下的脂肪层、韧带、筋膜、肌肉和骨组织。此外，烧伤可能伴有焦痂、发红、疼痛、肿胀、水泡和烧灼感。

根据本公开的用于治疗烧伤的组合物包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段。最优选地，该组合物可以包含由序列号1的氨基酸序列组成的肽，其不含二硫键。

治疗青光眼

本文中所用的术语“青光眼”统指具有视神经萎缩形式并发生在包括视网膜神经细胞的视神经中的疾病。青光眼综合征包括眼内压升高、视力变化、角膜肿胀、眼花缭乱、流泪、眼睑痉挛、散瞳、头痛、恶心、红眼、视力低和眼睛疼痛严重。

根据本公开的用于治疗青光眼的组合物包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段。

优选地，根据本公开的用于治疗青光眼的组合物可以包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段。

由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽的片段优选地如下：

1)由包含序列号1的RGD基序的9、12或15个氨基酸组成的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或含有3个以下的二硫键；或

4)在序列号1的氨基酸序列中由第30-44位氨基酸组成的片段，在该片段中不含二硫键。

减少皮肤皱纹

本文中所用的术语“皮肤皱纹”是指由于皮肤变性、弹性降低等引起的老化导致的皮肤褶皱。

根据本公开的用于减少皮肤皱纹的组合物包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段。

优选地，根据本公开的用于减少皮肤皱纹的组合物可以包含由在肽中的半胱氨酸之间不含二硫键的序列号1的氨基酸序列组成的肽。

或者，优选地，根据本公开的用于减少皮肤皱纹的组合物可以包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽片段。

预防脱发、改善头皮健康、或促进毛发生长和毛发恢复

本文中所用的术语“脱发或毛发损失”是指在通常应存在毛发的区域中弱化毛发根部、毛发变稀、并最终损失毛发。众所周知，脱发是由遗传因素、性激素睾酮的过度分泌、血液流向毛囊的减少、皮脂的分泌过多、压力、饮食时间不规律、空气污染和过度暴露于紫外线引起的，并且在大多数情况下，许多原因组合起来作用。

此外，本文中所用的术语“头皮”由五层-皮肤、结缔组织、腱膜、松散结缔组织和颅骨膜组成，毛发包括在头皮的主要结构中。

根据本公开的用于预防脱发、改善头皮健康、或促进毛发生长和恢复的组合物包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段。

2)在序列号1的氨基酸序列中由第30-38位氨基酸组成的片段；

根据本公开的组合物可以以药物组合物或化妆品组合物的形式制备。药物组合物或化妆品组合物可以包含药学(或化妆品)上可接受的赋形剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、润湿剂、乳化剂或悬浮剂。根据本公开的组合物可以单独使用或与任何方便的载体和赋形剂组合使用，并且其剂型可以用于单剂量或多剂量施用。

根据本公开的组合物可以在施用时以非口服途径施用。

根据本公开的组合物可以是固体制剂、半固体制剂或液体制剂。固体制剂包括但不限于粉剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂和栓剂。固体制剂包括但不限于赋形剂、调味剂、粘合剂、防腐剂、崩解剂、润滑剂和填料。半固体制剂包括但不限于霜剂、洗剂、乳剂和搽剂，并且可以通过加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂、增稠剂和表面活性剂来制备。液体制剂包括但不限于诸如水、醇和丙二醇溶液的溶液、悬浮液和乳液，并且可以通过加入合适的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制备。例如，粉剂可以通过简单地将本公开的活性成分与药学上可接受的合适的赋形剂，例如乳糖、淀粉和微晶纤维素混合来制备。颗粒剂可以通过将本公开的活性成分与药学上可接受的合适的赋形剂；和药学上可接受的合适的结合剂(例如聚乙烯基吡咯烷酮和羟丙基纤维素)混合，使用溶剂(例如水、乙醇和异丙醇)进行湿法造粒法，或使用压缩进行干法造粒法来制备。此外，片剂可以通过将颗粒与药学上可接受的合适的润滑剂(例如硬脂酸镁)混合并使用压片机进行压片来制备。此外，例如，皮肤的外用制剂可以通过用于制备皮肤外用制剂的常规方法制备，包括均匀混合药学上可接受的合适底物，例如凡士林和硬脂醇；药学上可接受的合适的表面活性剂，例如聚山梨酯和脱水山梨醇倍半油酸酯；药学上可接受的合适的保湿剂，例如甘油；药学上可接受的合适的溶剂；和调味剂、着色剂、稳定剂和增稠剂。

在根据本公开的组合物中，以组合物总重量计，根据本公开的肽或其片段的含量优选地在0.01重量％至10重量％之间。当含量小于0.01重量％时，不能充分发挥预期效果(皮肤皱纹、烧伤、青光眼和脱发)，当含量大于10重量％时，考虑到肽合成成本时，经济竞争优势在工业可用性方面不合算，并且免疫原性导致初始活性，但由于重复施用产生的抗体，功效可能降低。

根据本公开的化妆品组合物可以制造并用于基础化妆或化妆产品的制剂中，例如爽肤水、精华液、油、霜、粉、面膜、粉底、隔离霜和笔。化妆品组合物可以以各种相例如液相、霜相、糊相和固相的形式施用，并且可以通过普通的化妆品制造方法制造。例如，本公开的组合物可以使用卡波姆、丁二醇、甘油、PEG、乙醇、聚氧乙烯氢化蓖麻油、三乙醇胺和纯化水制备为保湿爽肤水的形式，或者可以以洗剂类型制备，例如使用鲸蜡醇、硬脂酸甘油酯/PEG-100硬脂酸酯、聚山梨醇酯60、脱水山梨醇倍半油酸酯、辛酸鲸蜡酯、角鲨烷、杏仁油、丁二醇、卡波姆、黄原胶、防腐剂、纯化水和精氨酸，但本公开不限于示例性制剂。

根据本公开的药物组合物可以通过本公开所属技术领域中已知的常规方法各种配制并用作软膏剂、霜剂、凝胶剂、膜剂、片剂、胶囊剂、颗粒剂、混悬剂或糖浆剂。

根据本公开的药物组合物的药学有效量和有效剂量可以根据药物组合物的制剂方法、给药方法、给药间隔和/或给药途径而变化。此外，它可以根据许多因素而变化，包括通过施用药物组合物来实现的反应的类型和程度，目标个体的类型、年龄、体重、一般健康状况、疾病的症状或严重程度、性别、饮食、排泄，以及用于相应个体的同步或异步地一起使用的其它医疗组合物的成分以及在医疗领域中众所周知的类似因素。相关技术领域的普通技术人员可以容易地确定和规定预期治疗的有效剂量。根据本公开的药物组合物可以每天以单次或多次分剂量施用。因此，剂量在任何方面并不限制本公开的范围。根据本公开的药物组合物的期望剂量可以为每天0.01mg/kg至10mg/kg。

除了根据本公开的肽或其片段之外，优选地，根据本公开的组合物可以含有其它成分以提供主要效果的协同效应而不会对预期的主要效果造成任何损害。

例如，当本公开的组合物用于预防脱发时，为了赋予附加功能，考虑到毛发的性质，可以加入佐剂，例如去头屑剂、毛发根强化剂、毛发修复剂、头皮保护剂和清爽剂。通常添加到用于毛发生长和毛发修复的组合物中的佐剂，例如去头屑剂、毛发根强化剂、毛发修复剂、头皮保护剂和清爽剂，包括但不限于本领域中通常使用的那些。

有益效果

使用根据本公开的肽或其片段，可以有效治疗烧伤和青光眼，在减少皮肤皱纹方面获得优异的效果，并且有效促进毛发修复和毛发生长以及预防脱发，因此可用于化妆品组合物和药物组合物。

附图说明

图1示出通过MALDI-TOF质量分析方法测量的HU024的结果。

图2示出通过MALDI-TOF质量分析方法测量的HU025的结果。

图3示出通过MALDI-TOF质量分析方法测量的HU026的结果。

图4示出通过MALDI-TOF质量分析方法测量的HU027的结果。

图5示出了G1-G6的重量变化的测量结果。

(G1：正常对照，n＝5

G2：载体对照，n＝9-10

G3：试验品(3.3μg/头/天)，n＝10

G4：试验品(10μg/头/天)，n＝10

G5：试验品(30μg/头/天)，n＝10

G6：阳性对照(10μg/头/天)，n＝9-10)

图6示出了G1-G6的烧伤面积变化的测量结果。

(G2：载体对照，n＝9-10

G3：试验品(3.3μg/头/天)，n＝10

G4：试验品(10μg/头/天)，n＝10

G5：试验品(30μg/头/天)，n＝10

G6：阳性对照(10μg/头/天)，n＝9-10)

图7示出了G2-G6的烧伤面积减少率(％)。

(G1：正常对照，n＝5

G2：载体对照，n＝9-10

G3：试验品(3.3μg/头/天)，n＝10

G4：试验品(10μg/头/天)，n＝10

G5：试验品(30μg/头/天)，n＝10

G6：阳性对照(10μg/头/天)，n＝9-10)

图8示出了G1-G6的焦痂形成和炎症细胞浸润的变化。

(G1：正常对照，n＝5

G2：载体对照，n＝9-10

G3：试验品(3.3μg/头/天)，n＝10

G4：试验品(10μg/头/天)，n＝10

G5：试验品(30μg/头/天)，n＝10

G6：阳性对照(10μg/头/天)，n＝9-10)

图9示出了G1-G6的皮肤附属器再生、结缔组织生长、表皮细胞再生中的变化。

(G1：正常对照，n＝5

G2：载体对照，n＝9-10

G3：试验品(3.3μg/头/天)，n＝10

G4：试验品(10μg/头/天)，n＝10

G5：试验品(30μg/头/天)，n＝10

G6：阳性对照(10μg/头/天)，n＝9-10)

图10示出了G1-G6的焦痂形成和炎症细胞浸润的程度。

(e：表皮，d：真皮，hd：皮下组织)

(A：正常对照，

B：载体对照，

C：试验品(3.3μg/头/天)，

D：试验品(10μg/头/天)，

E：试验品(30μg/头/天)，

F：阳性对照(10μg/头/天))

图11示出了使用试验品(HU022)和对照品后的R1数值变化。

图12示出了使用试验品(HU022)和对照品后的R2数值变化。

图13示出了使用试验品(HU022)和对照品后的R3数值变化。

图14示出了使用试验品(HU022)和对照品后的R4数值变化。

图15示出了使用试验品(HU022)和对照品后的R5数值变化。

图16示出了使用试验品(HU022)和对照品后的Ra数值变化。

图17示出了使用试验品(HU022)和对照品后的Rmax数值变化。

图18示出了使用试验品(HU022)和对照品后的Rt数值变化。

图19示出了使用试验品(HU022)和对照品后的Rp数值变化。

图20示出了使用试验品(HU022)和对照品后的Rv数值变化。

图21示出了使用试验品(HU022)和对照品后的专家视觉评估分数的变化。图22示出了使用试验品(HU024)和对照品后的R1数值变化。

图23示出了使用试验品(HU024)和对照品后的R2数值变化。

图24示出了使用试验品(HU024)和对照品后的R3数值变化。

图25示出了使用试验品(HU024)和对照品后的R4数值变化。

图26示出了使用试验品(HU024)和对照品后的R5数值变化。

图27示出了使用试验品(HU024)和对照品后的Ra数值变化。

图28示出了使用试验品(HU024)和对照品后的Rmax数值变化。

图29示出了使用试验品(HU024)和对照品后的Rt数值变化。

图30示出了使用试验品(HU024)和对照品后的Rp数值变化。

图31示出了使用试验品(HU024)和对照品后的Rv数值变化。

图32示出了使用试验品(HU024)和对照品后的专家视觉评估分数的变化。

图33示出了G1-G10的重量变化的测量结果。

(G1：载体对照(注射用无菌蒸馏水)，n＝10；

G2：试验品I(HU024 20μg/头/天)，n＝10；

G3：试验品I(HU024 60μg/头/天)，n＝10；

G4：试验品II(HU025 20μg/头/天)，n＝10；

G5：试验品II(HU025 60μg/头/天)，n＝10；

G6：试验品III(HU026 20μg/头/天)，n＝10；

G7：试验品III(HU026 60μg/头/天)，n＝10；

G8：试验品IV(HU027 20μg/头/天)，n＝10；

G9：试验品IV(HU027 60μg/头/天)，n＝10；

G10：参考对照(米诺氧3％)，n＝10)

图34示出了G1-G10的毛发面积变化的测量结果。

(G1：载体对照(注射用无菌蒸馏水)，n＝10；

G2：试验品I(HU024 20μg/头/天)，n＝10；

G3：试验品I(HU024 60μg/头/天)，n＝10；

G4：试验品II(HU025 20μg/头/天)，n＝10；

G5：试验品II(HU025 60μg/头/天)，n＝10；

G6：试验品III(HU026 20μg/头/天)，n＝10；

G7：试验品III(HU026 60μg/头/天)，n＝10；

G8：试验品IV(HU027 20μg/头/天)，n＝10；

G9：试验品IV(HU027 60μg/头/天)，n＝10；

G10：参考对照(米诺氧3％)，n＝10)

图35示出了毛发重量变化的测量结果。

(G1：载体对照(注射用无菌蒸馏水)，n＝10；

G2：试验品I(HU024 20μg/头/天)，n＝10；

G3：试验品I(HU024 60μg/头/天)，n＝10；

G4：试验品II(HU025 20μg/头/天)，n＝10；

G5：试验品II(HU025 60μg/头/天)，n＝10；

G6：试验品III(HU026 20μg/头/天)，n＝10；

G7：试验品III(HU026 60μg/头/天)，n＝10；

G8：试验品IV(HU027 20μg/头/天)，n＝10；

G9：试验品IV(HU027 60μg/头/天)，n＝10；

G10：参考对照(米诺氧3％)，n＝10)

图36示出了施用样品1-5的眼内压升高动物模型中眼内压变化的测量结果。

正常：正常小鼠

微珠：眼内压升高动物模型

样品1：他氟前列素+HU024(20μg/ml)

样品2：HU024(20μg/ml)

样品3：HU025(20μg/ml)

样品4：HU026(20μg/ml)

样品5：HU027(20μg/ml)

阳性对照：他氟前列素

图37示出了施用样品1-5的眼内压升高动物模型中视神经细胞变化的测量结果。

对照：正常小鼠

微珠：眼内压升高动物模型

样品1：他氟前列素+HU024(20μg/ml)

样品2：HU024(20μg/ml)

样品3：HU025(20μg/ml)

样品4：HU026(20μg/ml)

样品5：HU027(20μg/ml)

阳性对照：他氟前列素

具体实施方式

在下文中，将通过实施例更详细地描述本公开。这些实施例旨在更详细地描述本公开，并且对于本领域普通技术人员显而易见的是，本公开的范围不限于实施例的公开范围。

实施例1、肽的合成

将由ADAM金属肽酶结构域15(ADAM 15)(GenBank登录号AAH14566.1)的第452个至第509个氨基酸组成的多肽命名为HU022(序列号1)，并且包含去整合素的部分。

此外，设计为围绕ADAM15蛋白的去整合素区域(NCBI参考序列：NM_001261464)中的RGD基序的由总共15个氨基酸组成的肽包含半胱氨酸，其在以RGD基序为中心的三维(3D)结构中起关键作用。肽设计为具有在半胱氨酸之间形成的二硫键，并且命名为HU024(序列号2)。

此外，将设计为具有与HU024相同的氨基酸序列但不含二硫键的肽命名为HU025(序列号3)。

此外，对于设计为围绕ADAM15蛋白的去整合素区域中的RGD基序的较小尺寸的肽，将由12个氨基酸组成的肽命名为HU026(序列号4)，并将由9个氨基酸组成的肽命名为HU027(序列号5)。

以下，更详细地说明肽的生产方法。

为了合成根据本公开的包含RGD基序的新肽，使用固相肽合成法(固相法)(Merrifield，R.B.，J.Am.Chem.Soc.85：2149,1963)。使用Fmoc化学在Rink酰胺MBHA树脂上合成目标肽HU024、HU025、HU026、HU027，使用的氨基酸是具有使用9-芴基甲氧基羰基保护N-末端和侧链的那些。合成中使用的氨基酸量为0.3mmol，为3当量的0.1mmol树脂。在每个步骤的偶联反应中，根据每个序列按顺序加入DIC(N,N'-二异丙基卡维地亚胺)作为活化C末端的试剂和Cl-HOBt(6-氯-1-羟基苯并三唑)作为抑制外消旋化的试剂来进行反应，并且通过在室温下用50％哌啶/DMF(50/50，v/v)溶液处理10～20分钟来除去肽的Fmoc基团。完成肽合成后，为了从固相脱除和侧链脱保护，在室温下用TFA(三氟乙酸)/水混合溶液(9.5/0.5，v/v)处理2小时。对于肽中二硫键的形成，使用高稀释空气氧化法在分子中形成S-S键。为了加速反应，使用催化量的DMSO。

使用反相C18柱通过HPLC分离合成的肽，通过HPLC确认95％以上的纯度用于分析。此外，通过MALDI-TOF(基质辅助激光解吸离子化)质量分析方法确认了各肽的分子量(图1、图2、图3和图4)。

合成多肽的氨基酸序列和特征列于表1。

[表1]

此外，对于目标肽HU022，使用商业产品(EYEGENE Inc.)。

实施例2、烧伤治疗效果

用55只雄性SD(Sprague-Dawley)大鼠进行实验，分为5组：5只大鼠用于正常组(1组，G1)，9-10只大鼠用于阴性对照(1组，G2组)，30只大鼠用于实验组(3组，每组10只，G3，G4，G5)，以及9-10只大鼠用于阳性对照(1组，G6)。除正常组外，其余组中均用烧伤的雄性SD大鼠进行实验。在将SD大鼠麻醉后，使用铝电烙铁在SD大鼠上诱导直径2cm的2度烧伤。

将试验物质HU022(G3，G4，G5)、生理盐水溶液(G2)和Fiblast(G6)每天一次反复施用于烧伤的雄性SD大鼠皮肤，每周7次，共7天。将Fiblast以10μg/剂量/头施用于对照组(G6)，将实验组分为3组，并将试验物质以3.3μg/剂量/头(G3)、10μg/剂量/头(G4)和30μg/剂量/头(G5)施用于各组。

诱导烧伤后，在试验物质施用前进行成像，并在第1、4、8、11、15日进行成像，成像后施用试验物质，施用部位用纱布覆盖并用Tegaderm包裹。此外，使用图像分析程序分析用于测量烧伤伤口面积的图像。

烧伤后第14天，将背部的烧伤部位从真皮中刮除并固定在10％中性缓冲的福尔马林溶液中，并通过H&E染色进行组织病理学试验。用光学显微镜(Olympus BX41，奥林匹斯，日本)观察皮肤组织，并分析与表皮、真皮、皮下组织和皮下肌肉的烧伤处理相关的组织学变化，用于以下六个项目中的每一个：1)焦痂，(0，无；1+，轻微；2+，中等；3+，严重；4+，非常严重)，2)炎症细胞浸润(0，无；1+，表皮浸润；2+，真皮浸润；3+，皮下浸润；4+，肌肉浸润)，3)血管生成(随机选择3个放大倍数×400的区域，并计算和平均观察到的所有血管数量)，4)皮肤附属器再生(毛囊皮脂腺)，(0，无；1+，再生程度低；2+，在几个区域观察到再生；3+，附属器再生形态正常，但数量少于正常值；4+，与正常组水平相同)，5)结缔组织生长(纤维增生)(0，正常组水平；1+，仅在真皮或皮下组织的某些区域中观察到；2+，在真皮和皮下组织中观察到；3+，在真皮和皮下组织的广泛区域观察到；4+，在整个烧伤伤口区域观察到)，6)表皮再生(0，未观察到再生；1+，在一些区域中观察到基底细胞是一层；2+，观察到基底细胞成行；3+，在受损皮肤的大多数区域中观察到基底细胞是一层或多层，并确定了棘突层或颗粒层；4+，正常组表皮结构)，经评估后，对每组进行平均值计算。

利用测量结果，参数比较通过学生t检验和单因素方差分析确定显著性，并进行相对于阴性对照的显著性检验。此外，通过烧伤组织病理学检查结果，进行了Kruskal-Wallis的H检验，当确定组之间的显著性时，通过Mann-Whitney U检验进行组间比较。统计学计算程序为SPSS 10.1K。将P<0.05确定为统计学上显著。

作为结果，应用试验物质后未观察到任何异常综合征，而在第8天(Day 8)，与正常组相比，烧伤组中观察到统计学上显著的重量减少(P<0.01)，但重量减少是烧伤的结果(表2，图5)。

[表2]

数据表示为平均值±标准偏差。用学生t检验统计学上分析结果。

##：G1与G2显著地不同，P<0.01

作为测量烧伤伤口面积的结果，在比较面积的绝对值中，与阴性对照相比，在所有实验组中没有观察到统计学上显著的变化(表3，图6)。作为测量烧伤伤口面积减少(％)的结果，与阴性对照相比，在第4天时在试验物质30μg/头/天组(G5)中观察到统计学上显著的面积减少(P<0.05)，并且在剩余的试验物质给药组中没有观察到任何差异(表4，图7)。

[表3]

[表4]

*：与G2显著地不同，P<0.05

组织病理学检验结果如下所述(表5、图8、图9和图10)：

1)焦痂

在烧伤皮肤表皮中，纤维蛋白、白细胞、凝血渗出物和死组织一起凝固以形成焦痂。使用5个等级(0-4分)评估焦痂形成的程度。正常组G1是未观察到焦痂的正常皮肤组织。在阴性对照(G2)和试验物质3.3μg/头/天给药组(G3)中，在整个烧伤区域观察到平均4.0±0.0和4.0±0.0分的焦痂并评估为非常严重。在试验物质10μg/头/天给药组(G4)中，焦痂评分为3.2±0.6分，相当于整个烧伤面积的约80％的水平，在试验物质30μg/头/天给药组(G5)和阳性对照(G6)中，焦痂评分为2.7±0.7和2.6±0.5分，表明焦痂形成减少。此外，在试验物质10μg/头/天给药组(G4)、30μg/头/天给药组(G5)和阳性对照(G6)中，观察到焦痂形成减少和焦痂厚度减少，并且统计分析结果显示与阴性对照(G2)相比有显著性(P<0.01)。

2)炎症细胞的浸润

诱导烧伤后，发生急性炎症反应，主要观察淋巴细胞和中性粒细胞浸润。使用5个等级(0-4分)评估炎症细胞浸润的程度。正常组(G1)是未观察到炎症细胞浸润的正常组织。在阴性对照(G2)、所有试验物质给药组(G3、G4、G5)和阳性对照(G6)中，在表皮、真皮和皮下组织层中观察到诸如淋巴细胞、中性粒细胞和单核细胞的炎症细胞的浸润，没有观察到每组之间的任何差异。

3)皮肤附属器再生(毛囊皮脂腺)

位于真皮层中的皮肤附属器(例如毛囊、汗腺和皮脂腺)在烧伤后再生的程度是用于确定表皮再生的皮肤再生程度的重要标准。皮肤附属器由表皮细胞组成，并且位于附属器中的未分化细胞被分化并移动到表皮，并参与表皮的再生过程。用5级(0-4分)评估皮肤附属器的再生程度。在正常组(G1)中，观察到皮肤附属器(例如毛囊和皮脂腺)为正常结构并评估为4分。在阴性对照(G2)中，根本没有观察到皮肤附属器的再生，或者观察到再生的程度非常低。在试验物质10μg/头/天给药组(G4)和试验物质30μg/头/天给药组(G5)中，发现皮肤附属器的试验物质浓度依赖性再生得到了促进，并发现皮肤附属器再生水平与阴性对照(G2)相比是统计上显著的(P<0.05或P<0.01)。在阳性对照(G6)中，也观察到皮肤附属器的再生促进，并且是统计上显著的(P<0.01)。

4)结缔组织生长(纤维增生)

诱导烧伤后，在治疗过程中观察到由其细胞产生的成纤维细胞生长和胶原蛋白增加。用5级(0-4分)评价结缔组织生长的程度。随着纤维细胞生长和真皮中胶原蛋白的高密度生成以及皮肤再生，当再生完成后，生长的纤维细胞和增加的胶原蛋白缓慢减少并达到正常水平。正常组(G1)是未观察到成纤维细胞的正常组织。在阴性对照(G2)、所有试验物质给药组(G3、G4、G5)和阳性对照(G6)中，观察到非常活跃的纤维细胞生长和真皮和皮下组织中的胶原蛋白增加，并且评估为每组之间没有差异。

5)表皮再生

表皮细胞再生是基底细胞生长和分化成皮肤表皮细胞的损伤或丧失的表皮的再生过程。对于表皮再生能力，使用5个等级(0-4分)观察和评估表皮形成和基底细胞生长的程度。在正常组(G1)中，观察到基底层、棘突层、颗粒层和角质层的正常表皮组织。在阴性对照(G2)中，在大多数动物中未观察到表皮再生。在试验物质3.3μg/头/天给药组(G3)中，在一些区域中观察到非常低水平的基底层细胞再生，在试验物质10μg/头/天给药组(G4)和30μg/头/天给药组(G5)和阳性对照(G6)中，在更广泛的区域观察到基底层的再生，并且与阴性对照相比，被评估为具有统计学显著的表皮细胞再生的促进作用(P<0.05)。

[表5]

数据表示为平均值±标准偏差。用箱形图和Kruscal-wallis法统计学分析结果。*：与G1值显著地不同，P<0.05

**：与G2值显著地不同，P<0.01

##：G1与G2显著地不同，P<0.01

实施例3、皱纹减少治疗

测试30～65岁的眼睛周围有皱纹的女性。4周内，随机给予试验产品(HU022或HU024)和对照产品(去离子水)以一天两次在面部左右各侧使用该产品，第一次访问时，受试者接收试验产品和对照产品以使用4周，同时完成使用前的评估和调查。他们在开始使用后以2周间隔进行了第二次和第三次访问，每次访问时都需要对实验中定义的各种评估和调查做出回应。

评估项目、试验方法及其结果如下：

(1)试验产品HU022的皱纹降低效果评估

使用设备测量眼睛周围的皱纹程度。测量皱纹程度的目标部位是受试者眼睛周围的区域，脸部的左侧和右侧被设置为测量部位。为了测量皱纹程度，使受试者用水洗涤测量部位，在室温20～25℃和湿度40～60％的恒温恒湿条件下，在候诊室休息30分钟以使皮肤表面温度和湿度适应测量空间的环境，在休息期间不允许喝水。为了客观测量，由一名研究人员进行测量，在使用前的第一次访问以及使用后2周和4周的第二次和第三次访问的每次都测量相同的部位。在使用前和使用后2周和4周，使用Visiometer SV600(Courage-Khazaka electronic GmbH，德国)对施用试验产品和对照产品的部位的皮肤复制品进行透明轮廓测定分析，并确定在使用后的对照组和实验组中是否存在差异，分析使用后2周和4周的R1、R2、R4、R5测定值相对于使用前的变化(％)。

皱纹程度参数如下：

[表6]

为了确定在使用试验产品(HU022)后R3数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R3数值。试验产品的R3数值在使用前为34.24±3.51，使用后2周为24.41±4.16，使用后4周为18.62±2.79，且对照产品的R3数值在使用前为22.48±2.74，使用后2周为20.70±1.76，使用后4周为18.13±0.91，并且为了清楚地确定R3数值的变化，在每个时区计算出R3的变化(％)(表7，图13)。

[表7]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品(HU022)后R1数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R1数值。试验产品的R1数值在使用前为76.23±12.15，使用后2周为54.59±10.99，使用后4周为51.06±19.28，且对照产品的R1数值在使用前为55.74±12.48，使用后2周为56.17±11.11，使用后4周为50.86±4.67(表8，图11)。

[表8]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品(HU022)后R2数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R2数值。试验产品的R2数值在使用前为54.26±5.70，使用后2周为36.87±6.02，使用后4周为29.16±2.74，且对照产品的R2数值在使用前为35.24±5.12，使用后2周为31.64±4.37，使用后4周为27.57±2.89(表9，图12)。

[表9]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品(HU022)后R4数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R4数值。试验产品的R4数值在使用前为30.41±7.01，使用后2周为23.64±5.11，使用后4周为22.94±10.03，且对照产品的R4数值在使用前为24.50±5.43，使用后2周为25.06±5.49，使用后4周为24.42±4.57(表10，图14)。

[表10]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品(HU022)后R5数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R5数值。试验产品的R5数值在使用前为13.57±3.65，使用后2周为9.44±2.44，使用后4周为10.10±5.97，且对照产品的R5数值在使用前为11.02±2.94，使用后2周为11.44±3.14，使用后4周为10.51±1.90(表11，图15)。

[表11]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

此外，通过3D成像测量皱纹程度。测量皱纹程度的目标部位是受试者眼睛周围的区域，脸部右侧被设置为测量部位。为了测量皱纹程度，使受试者用水洗涤测量部位，在室温20～25℃和湿度40～60％的恒温恒湿条件下，在候诊室休息30分钟以使皮肤表面温度和湿度适应测量空间的环境，在休息期间不允许喝水。为了客观测量，由一名研究人员进行测量，在使用前的第一次访问以及使用后2周和4周的第二次和第三次访问的每次都测量相同的部位。在使用前和使用后2周和4周，使用3D皮肤成像机(PRIMOS Premium)形成施用了试验产品(HU022)的部位的图像，并验证使用后4周的对照组和实验组中的每一个是否有差异，分析使用后2周和4周相对于使用前的存储图像中的皱纹参数Ra、Rmax、Rt、Rp、Rv值。

皱纹程度参数如下：

[表12]

为了确定在使用试验产品后Ra数值的变化，在使用前、使用后2周、使用后4周测定Ra数值。

试验产品的Ra数值在使用前为19.19±4.27，使用后2周为18.20±3.94，使用后4周为17.00±3.88，且对照产品的Ra数值在使用前为14.86±4.48，使用后2周为14.94±4.73，使用后4周为14.60±4.58(表13，图16)。

[表13]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品后Rmax数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量Rmax数值。试验产品的Rmax数值在使用前为176.29±27.79，使用后2周为168.83±29.61，使用后4周为168.80±33.21，且对照产品的Rmax数值在使用前为162.81±64.15，使用后2周为159.52±61.85，使用后4周为158.36±62.80(表14，图17)。

[表14]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品后Rt数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量Rt数值。试验产品的Rt数值在使用前为195.05±31.31，使用后2周为187.85±34.10，使用后4周为184.63±36.83，且对照产品的Rt数值在使用前为174.12±68.96，使用后2周为171.13±66.76，使用后4周为169.86±65.80(表15，图18)。

[表15]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品后Rp数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量Rp数值。试验产品的Rp数值在使用前为122.73±31.55，使用后2周为116.47±35.75，使用后4周为121.88±38.06，且对照产品的Rp数值在使用前为123.29±57.51，使用后2周为120.32±53.57，使用后4周为119.57±56.77(表16，图19)。

[表16]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定在使用试验产品后Rv数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量Rv数值。试验产品的Rv数值在使用前为72.32±17.16，使用后2周为71.38±16.44，使用后4周为62.75±11.92，且对照产品的Rv数值在使用前为50.83±16.13，使用后2周为50.81±16.29，使用后4周为50.29±11.75(表17，图20)。

[表17]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

此外，进行视觉评估。在使用前和后的每个访问时，专家通过使用全球光损伤评分(Br J Dermatol.2010；162(3):497-502)进行评分来评估皱纹程度。为了验证使用后4周的对照组和实验组是否有差异，分析了使用后2周和4周相比于使用前的视觉评估分数的变化(％)。视觉评估分数如下(表18)：

[表18]

作为结果，试验产品的专家视觉评估分数在使用前为2.17±0.75，使用后2周为2.17±0.75，使用后4周为1.67±1.03，且对照产品的专家视觉评估分数在使用前为2.33±1.03，使用后2周为2.33±1.03，使用后4周为2.33±1.03(表19，图21)。

[表19]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

此外，对受试者进行关于有效性的调查。要求受试者亲自回答关于使用试验产品后受试者感觉到的皱纹减少的程度，使用5个等级：较好(4)，稍微好一点(3)，没有变化(2)，稍微差一点(1)，较差(0)。研究人员通过计算每个回答的受试者数目的百分比来确定试验产品是否具有疗效。

作为对皱纹减少的调查评估结果，在使用后4周的第三次访问时，受试者回答了试验产品和对照产品是否减少皱纹，特别是试验产品在减少皱纹方面是否比对照产品更好。从此可以看出，参加试验的受试者发现试验产品的皱纹减少效果优异(表20)。

[表20]

此外，进行关于触感和偏好的调查评估，并要求受试者亲自回答关于使用临床试验产品后4周受试者感觉到的触感的调查材料。根据评估项目进行调查，包括湿度感、柔软感、吸收性能、一般触感和香味的程度，并以5个等级进行评估：很好、好、一般、差和很差。

作为调查的结果，发现受试者普遍对试验产品具有积极偏好。特别是在粘性感方面，受试者对试验产品比对照产品具有更高的偏好(表21)。

[表21]

此外，进行合规性评估，在第二次和第三次访问时，收集了用于试验的产品的记录，确定了试验产品的使用次数，并计算了合规性。在每次访问时，任何合规性小于80％或未连续使用6次以上的受试者被排除在试验之外。作为结果，在试验结束时，总体合规性为100％，最高合规性为100.00％，最低合规性为100.00％。在本次试验中，不存在具有80％以下的合规性的受试者，并且使用所有受试者的数据来分析结果。

此外，进行安全性评估，为了临床试验产品的安全性，在使用试验产品至少一次的所有受试者中，使用后第二周和第四周发现的异常反应和试验期间报告的异常反应全部用作产品的安全评估数据。没有关于异常反应的报道，并且在皮肤科医生的身体检查中，没有观察到任何皮肤异常症状，例如发红、皮疹和瘙痒感。因此，可以看出，试验产品是不会对皮肤产生刺激的安全产品。

(2)试验产品HU024的皱纹减少效果评估

评估项目和试验方法与用于评估试验产品HU022的评估项目和试验方法相同。

使用设备测量皱纹程度后，为了确定在使用试验产品后R3数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测量R3数值。试验产品的R3数值在使用前为29.15±5.56，使用后2周为20.80±3.97，使用后4周为17.81±4.00，且对照产品的R3数值在使用前为24.43±3.12，使用后2周为23.56±3.53，使用后4周为18.57±1.86(表22，图24)。

[表22]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的R1数值在使用前为71.33±15.8，使用后2周为57.29±3.21，使用后4周为45.23±13.77，且对照产品的R1数值在使用前为58.01±21.09，使用后2周为56.17±15.89，使用后4周为45.03±14.74(表23，图22)。

[表23]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的R2数值在使用前为46.06±11.62，使用后2周为30.71±6.57，使用后4周为28.67±7.47，且对照产品的R2数值在使用前为35.97±5.82，使用后2周为37.15±4.96，使用后4周为26.68±3.30(表24，图23)。

[表24]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的R4数值在使用前为31.44±11.04，使用后2周为26.24±2.90，使用后4周为20.64±6.07，且对照产品的R4数值在使用前为26.22±11.38，使用后2周为24.11±8.82，使用后4周为20.67±8.43(表25，图25)。

[表25]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的R5数值在使用前为13.52±5.43，使用后2周为11.58±0.89，使用后4周为8.42±3.48，且对照产品的R5数值在使用前为10.93±6.72，使用后2周为10.68±5.56，使用后4周为8.79±4.95(表26，图26)。

[表26]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

通过3D成像测定皱纹程度后，为了确定使用试验产品后Ra数值的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周测定Ra数值。

试验产品的Ra数值在使用前为18.64±3.19，使用后2周为18.33±2.12，使用后4周为17.71±2.43，且对照产品的Ra数值在使用前为15.49±2.77，使用后2周为15.23±2.51，使用后4周为15.53±2.46(表27，图27)。

[表27]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的Rmax数值在使用前为206.55±40.54，使用后2周为198.77±39.74，使用后4周为196.85±39.02，且对照产品的Rmax数值在使用前为162.86±35.17，使用后2周为158.09±40.68，使用后4周为165.26±39.77(表28，图28)。

[表28]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的Rt数值在使用前为225.94±45.00，使用后2周为216.37±41.76，使用后4周为210.60±38.61，且对照产品的Rt数值在使用前为174.55±34.66，使用后2周为167.65±41.28，使用后4周为176.14±39.43(表29，图29)。

[表29]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的Rp数值在使用前为160.85±37.51，使用后2周为155.24±43.18，使用后4周为153.78±36.12，且对照产品的Rp数值在使用前为118.80±39.02，使用后2周为112.77±44.16，使用后4周为123.39±42.81(表30，图30)。

[表30]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

试验产品的Rv数值在使用前为65.09±11.95，使用后2周为61.12±8.02，使用后4周为56.82±12.01，且对照产品的Rv数值在使用前为55.75±17.98，使用后2周为54.87±21.72，使用后4周为52.75±15.00(表31，图31)。

[表31]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

为了确定视觉评估分数的变化，在使用前、使用后2周和使用后4周评估专家视觉评估分数。

试验产品的专家视觉评估分数在使用前为2.00±0.63，使用后2周为2.00±0.63，使用后4周为1.67±0.82，且对照产品专家视觉评估分数在使用前为2.00±0.63，使用后2周为2.00±0.63，使用后4周为2.00±0.63(表32，图32)。

[表32]

*变化(％)＝{(后-前)/前}*100

作为对皱纹减少的调查评估结果，在使用后4周的第三次访问时，受试者回答了试验产品和对照产品是否减少皱纹，特别是试验产品在减少皱纹方面是否比对照产品更好。从此可以看出，参加试验的受试者发现试验产品的皱纹减少效果优异。

[表33]

作为调查受试者在试验产品的湿度感、柔软感、扩散性能、吸收性能、粘性感和香味方面的偏好的结果，发现受试者普遍对试验产品具有积极偏好。特别是在粘性感方面，对试验产品的偏好比对照产品高。

[表34]

此外，没有关于受试者使用试验产品4周时的异常反应的报道，并且在皮肤科医师的身体检查中，没有观察到任何皮肤异常症状，例如发红、皮疹和瘙痒感。因此可以看出，试验产品是不会对皮肤产生刺激的安全产品。

实施例4、毛发生长试验效果

进行该试验以评估当将4种试验物质HU024、HU025、HU026和HU027施用于皮肤14天时对C57BL/6小鼠的毛发生长的影响。

将组设计设定为阴性对照(无菌注射用水G1)，试验物质HU024 20μg/头/天(G2)，试验物质HU024 60μg/头/天(G3)，试验物质HU025 20μg/头/天(G4)，试验物质HU025 60μg/头/天(G5)，试验物质HU026 20μg/头/天(G6)，试验物质HU026 60μg/头/天(G7)，试验物质HU027 20μg/头/天(G8)，试验物质HU027 60μg/头/天(G9)和阳性对照米诺氧3％(G10)给药组。每组有10只动物。

在使用舒泰(1mL/kg,i.p)将动物置于麻醉下之后，使用脱毛器将动物的背部基本剃毛，并将Veet脱毛剂均匀地施用于背部。约5分钟后，使用用无菌注射用水润湿的纱布清洁施用部位。只有剃毛背部是猩红色的动物用于群体分离。将试验物质每天一次施用于同一部位，每周7次共14天，通过用玻璃棒摩擦约10次将试验物质均匀地施用于剃毛部位(背部上)。

试验项目为死亡动物、一般综合征、体重变化、毛发生长面积和毛发重量的测量，并进行与阴性对照的比较。

测定和确定相对于试验物质施用面积的毛发生长面积(％)，并且使用图像分析仪程序(Image Pro Plus ver.6.3，Cybermetics，USA)进行测定。在试验物质给药后第1、3、7、10和14天进行测量。成像与测量毛发面积的日期的测定一起进行。在施用结束后的第二天，用CO₂气体杀死动物，通过脱毛器除去毛发生长区域上的毛发并测量毛发重量。

[表35]

分数	毛发生长的程度
		0	无
1	在剃毛部位处有0～25％毛发生长
		2	在剃毛部位处有26～50％毛发生长
3	在剃毛部位处有51～75％毛发生长
		4	在剃毛部位处有76～100％毛发生长

使用SPSS(10.1K版本)分析测量结果，通过单因素方差分析进行重量变化的Duncan t检验，通过学生t检验比较组间的毛发重量，并通过非参数多重比较程序Whitney-Mann法比较组间的毛发生长面积。将P<0.05确定为统计学上显著。

试验结果如下：

关于重量变化，与阴性对照相比，试验物质给药组中没有观察到任何差异。相反，在给药后第7天和第11天与阴性对照相比，对照物质米诺氧3％给药组中观察到统计学显著的体重增加(P<0.05或P<0.01)。对照物质米诺氧3％给药组中增加的重量被认为是重量增加，这是米诺氧、米诺地尔的活性成分的不良效果(表36，图33)。

[表36]

数据表示为平均值±标准偏差。用学生t检验统计学分析结果。

*：与G1显著地不同，P<0.05

**：与G1显著地不同，P<0.01

作为测定毛发生长面积的结果，试验物质给药组与阴性对照相比，直到给药后第7天也没有观察到任何差异。在第10天和第14天，与阴性对照相比，在试验物质HU025 60μg/头/天施用组(G5)中观察到毛发生长面积的统计学显著的增加(P<0.05)。在第10天和第14天，与阴性对照相比时，除了试验物质HU025 20μg/头/天给药组之外，在其他的试验物质给药组中也观察到毛发生长面积增加约20％以上的趋势。与阴性对照相比，在第4、10和14天，在对照物质米诺氧3％给药组中观察到毛发生长面积的统计学显著的增加(P<0.01)(表37，图34)。

[表37]

数据表示为平均值±标准偏差。用Whittney-Mann法统计学分析结果。

*：与G1显著地不同，P<0.05

**：与G1显著地不同，P<0.01

作为测量毛发重量的结果，与阴性对照相比，在试验物质HU026 60μg/头/天给药组中观察到毛发重量的统计学显著的增加(P<0.05)。在其它试验物质给药组中，与阴性对照相比，除了HU025 20μg/头/天和HU027 20μg/头/天给药组之外，在剩余的试验物质给药组中观察到重量增加约100％以上。与阴性对照相比，在对照物质米诺氧3％给药组中观察到毛发重量的统计学显著增加(P<0.01)(表38，图35)。

[表38]

*：与G1显著地不同，P<0.05

**：与G1显著地不同，P<0.01

实施例5、青光眼试验效果

对于对照药，使用Taflotan滴眼剂(Santen Pharmaceutical Co.,Ltd.)，对于试验药物，使用Taflotan滴眼剂+HU024(样品1)、HU024(样品2)、HU025(样品3)、HU026(样品4)和HU027(样品5)，并对具有微珠诱导的眼内压升降的青光眼动物模型进行试验。在实验动物模型中，将Rompun注射液和舒泰混合并在麻醉下用于实验动物，将局部麻醉剂Alcaine施用于眼睛，使用微玻璃针将1×10⁶微珠/mL 1μL注射到前房，以诱导眼内压升高2周(IOVS2011 Vol.52 36-)。

将对照药物和5个样品提供给眼内压升高的实验动物2周，每天一次将5个样品施用于眼睛，进行功效的比较验证，并通过给药4周观察视网膜中的眼内压降低和视神经细胞。

使用接触型眼内压力计Tono实验室的眼内压计TV02模型测量眼内压。此外，为了分析青光眼动物模型的视网膜中的视神经细胞，将麻醉大鼠的头皮摘除并暴露，然后使用Bregma和Lamda作为参考点确定并标记与视神经连接的脑中的上丘的坐标，创建孔，并注入了3％的荧光金。在荧光探针注射后5～7天，在室温下将眼睛摘除并在4％多聚甲醛中固定4小时。将视网膜与固定眼睛的脉络膜分离并安装在载玻片上。在每个实验组载玻片中，使用荧光显微镜检测表达荧光的视神经细胞，以×40和×200的倍率拍摄图像，并收集数据。

作为进行眼内压试验的结果，2周时眼内压升高至21.9±8.3mmHg。在确定眼内压升高后，给药样品1～5的结果示于图36。在样品2和3中观察到眼内压降低，在剩余的样品中没有观察到显著性。据认为，整体上眼内压的轻微降低归因于微珠模型性质，与样本的眼内压降低效果无关。在阳性对照中，报道的眼内压降低，与阴性对照相比，眼内压数值(15.9±2.9，20.89％)显著降低(图36)。

作为分析视神经细胞的结果，与对照组相比，在阴性对照中观察到显著的视神经细胞死亡，并且在样品3和4给药组和阳性对照或他氟布洛芬给药组中，观察到保护视神经细胞死亡。在样品3的情况下，认为是类似于图36的眼内压降低的结果，在样品4的情况下，眼内压没有降低，但是发现视神经细胞保护作用(图37)。

总之，样本3或HU025对降低特发性青光眼的眼内压有效果。另外，在许多家族青光眼患者中，虽然眼内压不高，但由于视神经损伤而发生视力损失，并且期望HU025样品由于其具有损伤视神经的修复功能，因此可用作治疗青光眼的药物。

工业适用性

使用根据本公开的肽或其片段，可以有效治疗烧伤和青光眼，在减少皮肤皱纹方面获得优异的效果，并且有效促进毛发修复和毛发生长以及预防脱发，因此其可用于化妆品组合物和药物组合物。

<110> 汇恩斯株式会社

<120> 治疗烧伤和青光眼、减少皮肤皱纹和促进毛发生长的包含含RGD基序的肽或其片段的组合物

<130> P14-409

<160> 6

<170> KopatentIn 2.0

<210> 1

<211> 58

<212> PRT

<213> 智人

<400> 1

Thr Cys Gln Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Ala Ser Asp Gly Pro Cys

1 5 10 15

Cys Gln Asn Cys Gln Leu Arg Pro Ser Gly Trp Gln Cys Arg Pro Thr

20 25 30

Arg Gly Asp Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Pro Gly Asp Ser Ser Gln

35 40 45

Cys Pro Pro Asp Val Ser Leu Gly Asp Gly

50 55

<210> 2

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 二硫键

<222> (7)..(13)

<400> 2

Arg Pro Thr Arg Gly Asp Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Pro Gly

1 5 10 15

<210> 3

<211> 15

<212> PRT

<213> 智人

<400> 3

Arg Pro Thr Arg Gly Asp Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Pro Gly

1 5 10 15

<210> 4

<211> 12

<212> PRT

<213> 智人

<220>

<221> 二硫键

<222> (5)..(11)

<400> 4

Thr Arg Gly Asp Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Pro

1 5 10

<210> 5

<211> 9

<212> PRT

<213> 智人

<400> 5

Arg Pro Thr Arg Gly Asp Cys Asp Leu

1 5

<210> 6

<211> 814

<212> PRT

<213> 智人

<400> 6

Met Arg Leu Ala Leu Leu Trp Ala Leu Gly Leu Leu Gly Ala Gly Ser

1 5 10 15

Pro Leu Pro Ser Trp Pro Leu Pro Asn Ile Gly Gly Thr Glu Glu Gln

20 25 30

Gln Ala Glu Ser Glu Lys Ala Pro Arg Glu Pro Leu Glu Pro Gln Val

35 40 45

Leu Gln Asp Asp Leu Pro Ile Ser Leu Lys Lys Val Leu Gln Thr Ser

50 55 60

Leu Pro Glu Pro Leu Arg Ile Lys Leu Glu Leu Asp Gly Asp Ser His

65 70 75 80

Ile Leu Glu Leu Leu Gln Asn Arg Glu Leu Val Pro Gly Arg Pro Thr

85 90 95

Leu Val Trp Tyr Gln Pro Asp Gly Thr Arg Val Val Ser Glu Gly His

100 105 110

Thr Leu Glu Asn Cys Cys Tyr Gln Gly Arg Val Arg Gly Tyr Ala Gly

115 120 125

Ser Trp Val Ser Ile Cys Thr Cys Ser Gly Leu Arg Gly Leu Val Val

130 135 140

Leu Thr Pro Glu Arg Ser Tyr Thr Leu Glu Gln Gly Pro Gly Asp Leu

145 150 155 160

Gln Gly Pro Pro Ile Ile Ser Arg Ile Gln Asp Leu His Leu Pro Gly

165 170 175

His Thr Cys Ala Leu Ser Trp Arg Glu Ser Val His Thr Gln Thr Pro

180 185 190

Pro Glu His Pro Leu Gly Gln Arg His Ile Arg Arg Arg Arg Asp Val

195 200 205

Val Thr Glu Thr Lys Thr Val Glu Leu Val Ile Val Ala Asp His Ser

210 215 220

Glu Ala Gln Lys Tyr Arg Asp Phe Gln His Leu Leu Asn Arg Thr Leu

225 230 235 240

Glu Val Ala Leu Leu Leu Asp Thr Phe Phe Arg Pro Leu Asn Val Arg

245 250 255

Val Ala Leu Val Gly Leu Glu Ala Trp Thr Gln Arg Asp Leu Val Glu

260 265 270

Ile Ser Pro Asn Pro Ala Val Thr Leu Glu Asn Phe Leu His Trp Arg

275 280 285

Arg Ala His Leu Leu Pro Arg Leu Pro His Asp Ser Ala Gln Leu Val

290 295 300

Thr Gly Thr Ser Phe Ser Gly Pro Thr Val Gly Met Ala Ile Gln Asn

305 310 315 320

Ser Ile Cys Ser Pro Asp Phe Ser Gly Gly Val Asn Met Asp His Ser

325 330 335

Thr Ser Ile Leu Gly Val Ala Ser Ser Ile Ala His Glu Leu Gly His

340 345 350

Ser Leu Gly Leu Asp His Asp Leu Pro Gly Asn Ser Cys Pro Cys Pro

355 360 365

Gly Pro Ala Pro Ala Lys Thr Cys Ile Met Glu Ala Ser Thr Asp Phe

370 375 380

Leu Pro Gly Leu Asn Phe Ser Asn Cys Ser Arg Arg Ala Leu Glu Lys

385 390 395 400

Ala Leu Leu Asp Gly Met Gly Ser Cys Leu Phe Glu Arg Leu Pro Ser

405 410 415

Leu Pro Pro Met Ala Ala Phe Cys Gly Asn Met Phe Val Glu Pro Gly

420 425 430

Glu Gln Cys Asp Cys Gly Phe Leu Asp Asp Cys Val Asp Pro Cys Cys

435 440 445

Asp Ser Leu Thr Cys Gln Leu Arg Pro Gly Ala Gln Cys Ala Ser Asp

450 455 460

Gly Pro Cys Cys Gln Asn Cys Gln Leu Arg Pro Ser Gly Trp Gln Cys

465 470 475 480

Arg Pro Thr Arg Gly Asp Cys Asp Leu Pro Glu Phe Cys Pro Gly Asp

485 490 495

Ser Ser Gln Cys Pro Pro Asp Val Ser Leu Gly Asp Gly Glu Pro Cys

500 505 510

Ala Gly Gly Gln Ala Val Cys Met His Gly Arg Cys Ala Ser Tyr Ala

515 520 525

Gln Gln Cys Gln Ser Leu Trp Gly Pro Gly Ala Gln Pro Ala Ala Pro

530 535 540

Leu Cys Leu Gln Thr Ala Asn Thr Arg Gly Asn Ala Phe Gly Ser Cys

545 550 555 560

Gly Arg Asn Pro Ser Gly Ser Tyr Val Ser Cys Thr Pro Arg Asp Ala

565 570 575

Ile Cys Gly Gln Leu Gln Cys Gln Thr Gly Arg Thr Gln Pro Leu Leu

580 585 590

Gly Ser Ile Arg Asp Leu Leu Trp Glu Thr Ile Asp Val Asn Gly Thr

595 600 605

Glu Leu Asn Cys Ser Trp Val His Leu Asp Leu Gly Ser Asp Val Ala

610 615 620

Gln Pro Leu Leu Thr Leu Pro Gly Thr Ala Cys Gly Pro Gly Leu Val

625 630 635 640

Cys Ile Asp His Arg Cys Gln Arg Val Asp Leu Leu Gly Ala Gln Glu

645 650 655

Cys Arg Ser Lys Cys His Gly His Gly Val Cys Asp Ser Asn Arg His

660 665 670

Cys Tyr Cys Glu Glu Gly Trp Ala Pro Pro Asp Cys Thr Thr Gln Leu

675 680 685

Lys Ala Thr Ser Ser Leu Thr Thr Gly Leu Leu Leu Ser Leu Leu Val

690 695 700

Leu Leu Val Leu Val Met Leu Gly Ala Ser Tyr Trp Tyr Arg Ala Arg

705 710 715 720

Leu His Gln Arg Leu Cys Gln Leu Lys Gly Pro Thr Cys Gln Tyr Arg

725 730 735

Ala Ala Gln Ser Gly Pro Ser Glu Arg Pro Gly Pro Pro Gln Arg Ala

740 745 750

Leu Leu Ala Arg Gly Thr Lys Ser Gln Gly Pro Ala Lys Pro Pro Pro

755 760 765

Pro Arg Lys Pro Leu Pro Ala Asp Pro Gln Gly Arg Cys Pro Ser Gly

770 775 780

Asp Leu Pro Gly Pro Gly Ala Gly Ile Pro Pro Leu Val Val Pro Ser

785 790 795 800

Arg Pro Ala Pro Pro Pro Pro Thr Val Ser Ser Leu Tyr Leu

805 810

Claims

1.一种药物组合物，包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段作为活性成分，并且具有以下效果的至少一种：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

2.根据权利要求1所述的药物组合物，其中，所述片段是选自由下述片段组成的组中的至少一种：

3.根据权利要求2所述的药物组合物，其中，所述片段是选自由下述片段组成的组中的至少一种：

2)在序列号1的氨基酸序列中由第30-38位氨基酸组成的片段；

4.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中，所述肽或其片段具有胶原合成促进作用。

5.根据权利要求1至3中任一项所述的药物组合物，其中，所述药物组合物配制用于局部给药。

6.一种化妆品组合物，包含由包含RGD基序(Arg-Gly-Asp基序)的序列号1的氨基酸序列组成的肽或其片段作为活性成分，并且具有以下效果的至少一种：

治疗烧伤；

治疗青光眼；

减少皮肤皱纹；或

预防脱发，改善头皮健康，或促进毛发生长和毛发恢复。

7.根据权利要求6所述的化妆品组合物，其中，所述片段是选自由下述片段组成的组中的至少一种：

8.根据权利要求7所述的药物组合物，其中，所述片段是选自由下述片段组成的组中的至少一种：

1)由包含序列号1的RGD基序的9、12或15个氨基酸组成的片段，任选地在该片段中的半胱氨酸之间不含二硫键或3个以下的二硫键；

2)在序列号1的氨基酸序列中由第30-38位氨基酸组成的片段；