ES2836426T3

ES2836426T3 - Composición, que contiene péptido que contiene motivo RGD o fragmento de éste, para aliviar las arrugas de la piel

Info

Publication number: ES2836426T3
Application number: ES15875763T
Authority: ES
Inventors: Key-An Um; Yeong-Mok Kim; Jong Hwan Lim
Original assignee: Huons Co Ltd
Current assignee: Huons Co Ltd
Priority date: 2014-12-31
Filing date: 2015-12-31
Publication date: 2021-06-25
Anticipated expiration: 2035-12-31
Also published as: KR101832121B1; US10632181B2; EP3241557A4; KR20210034559A; KR102412659B1; EP3241557A1; JP2019123742A; JP2018502116A; JP6805287B2; JP6510054B2; JP6910391B2; KR102412658B1; CN107206047B; KR20160081858A; JP2019123743A; EP3241557B1; US20200000891A1; US10463720B2; KR20180021764A; WO2016108669A1

Abstract

-Uso de una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento que comprende un motivo RGD (motivo Arg- Gly-Asp) como principio activo, para la reducción de las arrugas de la piel.

Description

DESCRIPCIÓN

Composición, que contiene péptido que contiene motivo RGD o fragmento de éste, para aliviar las arrugas de la piel CAMPO TÉCNICO

[0001] La presente invención se refiere al uso de una composición que comprende un péptido o su fragmento para la reducción de las arrugas de la piel.

ANTECEDENTES DE LA TÉCNICA

[0002] Una desintegrina y metaloproteinasa (denominada en lo sucesivo "ADAM") es una proteína multifuncional que contiene dominio de desintegrina y metaloproteinasa, y es conocida por tener propiedades adhesivas y proteolíticas en las interacciones célula-célula y célula-matriz. ADAM15 es una proteína única que tiene un motivo Arg-Gly-Asp (RGD) en su dominio similar a la desintegrina. ADAM15 se expresa en células del músculo liso, células mesangiales y células endoteliales. La familia ADAM participa en diversos procedimientos biológicos como la fertilización, el desarrollo muscular, el crecimiento nervioso y la secreción de citocinas (Blobel CP, y col.; Nature 1992. 356: 248-252.; Aitken, J. Nature 1992; 356: 196-197.; Blobel CP, y col. J. Cell Biol. 1990; 111: 69-78.; White JM. Curr. Opin. Cell. Biol. 2003; 15: 598-606). Se sabe que el dominio similar a la desintegrina conocido como dominio similar al EGF (factor de crecimiento epidérmico) de ADAM15, especialmente, se une específicamente a la cadena beta de integrina (integrina beta 3) y se une a la proteína tirosina cinasa de la familia Src, y funciona en la transmisión de señales y adhesión entre células. La proteína ADAM 15 es conocida por estar asociada con enfermedades inflamatorias como el reumatismo y varias enfermedades, incluido el cáncer de mama y el cáncer de próstata, y se necesita más estudio.

[0003] Por otro lado, la piel humana está compuesta por la epidermis que incluye el estrato córneo y la dermis, y el tejido conectivo, y el estrato córneo está compuesto por capas de células muertas formadas a través de un procedimiento de diferenciación de queratinocitos, células basales en la epidermis, y juega un papel en la protección del cuerpo humano de la influencia del entorno al aire libre. Además, la capa de dermis que se encuentra en la piel está compuesta por proteínas fibrosas, colágeno y elastina, y proporciona elasticidad a la piel y sirve para mantener la piel tensa, y la capa de dermis tiene vasos sanguíneos y nervios y también contiene mastocitos que participan en reacciones alérgicas, y factores hidratantes naturales como Na-PCA o ácido hialurónico.

[0004] Las causas de la generación de arrugas en la piel se clasifican en gran medida en dos: una es el "envejecimiento intrínseco" que comprende cambios relacionados con la edad en la función de las células, a saber, el conjunto que compone la piel, y la otra es el "envejecimiento extrínseco" o envejecimiento relacionado con el medio ambiente al aire libre, es decir, rayos ultravioleta (UV), contaminación del aire y estrés. El fotoenvejecimiento, la exposición prolongada a los rayos UV, es la mayor causa del envejecimiento de la piel y causa heridas de la piel agudas y crónicas, incluyendo cáncer de piel y arrugas. Estos se clasifican en tres: UVA (320-400 nm), UVB (290-320 nm) y UVC (200-290 nm), según los intervalos de longitud de onda en la luz solar, y UVC es absorbido casi completamente por la capa de ozono, mientras que UVA y UVB llegan a la superficie de la Tierra y actúan como un factor fatal que causa daño a la piel. Se sabe que la UVB, que tiene longitudes de onda más cortas, pero de mayor intensidad que la UVA, penetra en la epidermis que descansa sobre la dermis y daña los queratinocitos y las fibras de colágeno, causando consecuentemente la generación de arrugas, la decoloración de la piel o el cáncer de piel. Además, recientemente se descubrió que las interacciones entre proteínas de matriz celular y extracelular (colágeno, fibrilina, fibronectina) juegan un papel importante en la supervivencia y el crecimiento de las células de la piel y en la reconstrucción del tejido.

[0005] Las quemaduras son causadas principalmente por accidentes, y se pueden clasificar, según la causa, en quemaduras por calor, quemaduras eléctricas, quemaduras químicas, quemaduras por radiación. La gravedad de una quemadura se divide en quemaduras de primer, segundo, tercer y cuarto grado según el ancho y la profundidad quemados, el tiempo de contacto con la temperatura de los objetos que causan las quemaduras y las condiciones de la piel. En quemaduras de segundo grado o más, puede quedar una cicatriz y se requiere tratamiento en el hospital.

[0006] Las quemaduras de primer grado causan enrojecimiento de la piel y dolor con picazón. Causan daño a la epidermis, la capa más externa de la piel, e hinchazón acompañada de dolor y enrojecimiento. Los síntomas desaparecen en unos pocos días, pero puede quedar exfoliación superficial y pigmentación. Después de la recuperación, no queda cicatriz (marca). Las quemaduras solares son el ejemplo más común de quemaduras de primer grado.

[0007] Las quemaduras de segundo grado afectan la epidermis y la dermis y causan enrojecimiento, dolor, hinchazón y ampollas en las 24 horas posteriores a los accidentes. Las quemaduras de segundo grado pueden afectar las glándulas sudoríparas o los poros. Se produce una sensación de ardor y dolor intensos. La ruptura de ampollas deja áreas erosionadas y libera la secreción en grandes cantidades. Cuando el área quemada es de aproximadamente el 15 % o más de la superficie corporal, se debe prestar especial atención. Las quemaduras de segundo grado se curan en unas pocas semanas, pero en muchos casos, la pigmentación o despigmentación permanecen. Cuando ocurren infecciones secundarias, los síntomas parciales se vuelven más severos y se tarda más en sanar.

[0008] Las quemaduras de tercer grado afectan la epidermis, la dermis e incluso la grasa subcutánea, y la piel se vuelve más oscura o de color más claro, y los vasos sanguíneos inmediatamente debajo de la superficie de la piel se coagulan. Las regiones quemadas pueden entumecerse, pero los pacientes sienten un dolor extremadamente severo y existe la muerte del tejido y la estructura de la piel, que requiere mucho tiempo para tratar, con cicatrices que permanecen. En 2 semanas después de los accidentes, las costras se desprenden y revelan la superficie ulcerada. Se secretan grandes cantidades de líquidos y es probable que se produzca hemorragia, pero las quemaduras de tercer grado se curan cuando se forman gradualmente nuevos tejidos, lo que lleva a la regeneración de la epidermis, con la cicatriz permaneciendo. Cuando se desarrolla necrosis cutánea profunda, o cuando ocurren infecciones secundarias, la cicatrización se retrasa y se crea una superficie de cicatriz desigual, lo que resulta en la formación de queloides o deformación o trastornos del movimiento. Cuando el área quemada es del 10 % o más de la superficie corporal, se requiere especial atención.

[0009] Las quemaduras de cuarto grado involucran tejidos carbonizados y oscurecidos de regiones quemadas, y se extienden a través de la capa de la piel para lesionar la capa grasa, ligamentos, fascias, músculos e incluso tejidos óseos. Las quemaduras de cuarto grado incluyen principalmente quemaduras eléctricas de alto voltaje y, en algunos casos, las quemaduras dérmicas profundas de 2-3 grados pueden desarrollarse hasta quemaduras de cuarto grado cuando se produce una infección viral. Cuando el área quemada alcanza 20 % o más, las respuestas pueden ocurrir en todo el cuerpo; hipotensión, shock, disfunción renal aguda pueden ocurrir debido a la pérdida excesiva de líquidos corporales, y la infección de la herida o neumonía, sepsis y síndrome de disfunción orgánica múltiple pueden ocurrir más tarde.

[0010] El tratamiento de quemaduras se centra en la regeneración de la piel y los apéndices de la piel, pero la tecnología desarrollada actualmente no proporciona un tratamiento perfecto.

[0011] Glaucoma significa colectivamente enfermedades que se causan en el nervio óptico, incluidas las células del plexo retiniano y tienen una forma de atrofia del nervio óptico. El glaucoma no tratado puede afectar eternamente la visión. En el pasado, el glaucoma se definió como una enfermedad que causa daño al nervio óptico y deterioro visual consecuente debido a una presión intraocular más alta de lo normal, pero recientemente, se informa que el daño al nervio óptico del glaucoma es causado por muchos factores distintos a la presión intraocular alta, y por lo tanto, el glaucoma se define como un síndrome del nervio óptico progresivo que causa cambios característicos del nervio óptico y deterioro visual consecuente.

[0012] El glaucoma se puede clasificar en glaucoma de ángulo abierto, glaucoma de ángulo cerrado, glaucoma congénito, glaucoma secundario, glaucoma facolítico, glaucoma pseudoexfoliante, glaucoma facomórfico, glaucoma neovascular y glaucoma esteroideo, según las causas o síndromes.

[0013] En pacientes con glaucoma, en el caso de que la presión intraocular no se ajuste mediante tratamiento farmacológico y tratamiento con láser, o a pesar del tratamiento farmacológico adecuado, se encuentra deterioro visual en el examen de la visión y empeoramiento del signo de cambios en el nervio óptico del glaucoma en el examen funduscópico, o cuando el uso de medicamentos no es permitido debido a efectos adversos, se considera el tratamiento quirúrgico. La trabeculectomía es uno de los procedimientos quirúrgicos más utilizados. La trabeculectomía permite el drenaje artificial del humor acuoso a través de ampollas filtrantes para reducir la presión intraocular. El procedimiento de cicatrización de la herida y la formación de cicatrices en las ampollas filtrantes formadas por la cirugía provoca el bloqueo de la vía de drenaje del humor acuoso y degrada gradualmente la función de las ampollas filtrantes, lo que resulta en un fracaso quirúrgico. Actualmente, para aumentar la tasa de éxito de la cirugía a largo plazo de trabeculectomía, antimetabolito, 5-fluorouracilo (5-FU) o mitomicina C (MMC), se utilizan como tratamiento adyuvante, y dio como resultado una mayor tasa de éxito de la trabeculectomía, pero aumentó las complicaciones tardías, por ejemplo, baja presión intraocular, fugas en ampollas filtrantes e infección relacionada con la ampolla filtrante. Más recientemente, hay un informe de que OculusGen™ (OculusGen Biomedical Inc., Taipei, Taiwán) se usa para proporcionar un andamiaje para el crecimiento de fibroblastos de manera 'discrecionalmente organizada', y permitir que 'fibroblastos dispuestos discrecionalmente' produzcan y organicen colágeno en muchas direcciones alrededor de las células para que se forme una estructura similar a la estructura del colágeno que se encuentra en el tejido normal, no una estructura del colágeno que se encuentra en el tejido cicatricial, para su uso en trabeculectomía. Sin embargo, hay una necesidad de soluciones alternativas para tratar el glaucoma que no sean la trabeculectomía.

[0014] Generalmente, el ciclo de crecimiento del cabello tiene tres etapas: anágeno, catágeno y telógeno. El anágeno es la fase de crecimiento activo del cabello y ocupa la mayor parte del ciclo de vida del crecimiento del cabello. El catageno se caracteriza por la apoptosis, y en esta fase, el cabello está listo para caerse, y el telógeno es la fase de reposo o quiescencia de los folículos pilosos durante la cual el cabello comienza a caer, causando una pérdida notable de cabello.

[0015] La alopecia o pérdida de cabello ocurre cuando las raíces del cabello se debilitan y el cabello se adelgaza en repeticiones de anageno-catageno-telógeno, y finalmente, el cabello se vuelve suave, fino y corto. Se sabe que la causa de la pérdida de cabello incluye factores hereditarios, la secreción excesiva de la hormona sexual testosterona, la reducción del flujo sanguíneo a los folículos, la secreción excesiva de sebo, el estrés, los tiempos irregulares de los alimentos, la contaminación del aire y la exposición excesiva a los rayos UV, y en la mayoría de los casos, muchas causas actúan en combinación.

[0016] La alopecia se clasifica en gran medida en alopecia androgenética, pérdida de cabello de patrón femenino, alopecia areata y pérdida de cabello causada por otras causas. La alopecia androgenética es un fenómeno que aparece debido a una hormona masculina, llamada testosterona, que desempeña un papel en la promoción de las características sexuales masculinas y hace que los músculos crezcan y los órganos masculinos maduren durante la adolescencia, y cuando la testosterona se convierte en una hormona dihidrotestosterona (DHT) más potente por la enzima 5 a-reductasa, la hormona actúa sobre las células foliculares de la papila dérmica para inducir la transición de anágeno a catágeno en los folículos, lo que resulta en la pérdida de cabello. La caída del cabello del patrón femenino generalmente se debe a los bajos niveles de testosterona después de la menopausia. La pérdida de cabello de patrón femenino no emerge en el cuero cabelludo frontal y principalmente procede sobre el cuero cabelludo medio, diferente a la alopecia androgenética. La pérdida de cabello en las mujeres está menos asociada con 5 a-reductasa que en los hombres. Por lo tanto, los medicamentos que inhiben la 5-a-reductasa no funcionan para las mujeres que experimentan pérdida de cabello después de la menopausia. La alopecia areata es causada por enfermedades autoinmunes, estrés mental o factores hereditarios. La alopecia areata representa parches redondos u ovalados de pérdida de cabello y se caracteriza por tinea capitis o tricotilomanía. La causa de la alopecia areata es fundamentalmente diferente de la alopecia androgenética, y se utilizan diferentes procedimientos de tratamiento, por ejemplo, se utilizan fármacos para controlar las hormonas de la corteza suprarrenal o se aplica minoxidilo a las partes afectadas.

[0017] Para resolver el problema de la pérdida de cabello, se han estudiado varios ingredientes activos que tienen efectos de prevención y tratamiento de la pérdida de cabello y composiciones que incluyen los mismos. El efecto principal o previsto de este estudio incluye un efecto en el mantenimiento del grosor del cabello o el engrosamiento del cabello, un efecto para el inicio temprano inducido o el anágeno prolongado, un efecto para la liberación retardada o acortada de telógeno, un efecto inhibidor de la actividad de 5a-reductasa, un efecto en la promoción de la circulación sanguínea a los folículos pilosos, un efecto hidratante, un efecto antioxidante, un efecto de prevención de la caspa, un efecto de esterilización y un efecto de promoción de la expresión de la matriz Extra Celular (ECM).

[0018] El medicamento aprobado que se está utilizando ahora es Minoxidil. El minoxidil se produjo originalmente como un fármaco antihipertensivo que ayuda a ensanchar los vasos sanguíneos del músculo liso, pero se desarrolló como un fármaco para promover el crecimiento del cabello después del descubrimiento de sus efectos adversos, el crecimiento del cabello en todas partes del cuerpo (Patentes EE. UU. N° 4.596.812 y 4.139.619). Aunque no se conoce su mecanismo de acción científico detallado, se considera que Minoxidil promueve el crecimiento del cabello a través de la acción combinada de proporcionar más flujo sanguíneo a los folículos. Con base en este efecto, Minoxidil fue aprobado como medicamento de venta libre por la FDA, pero se informaron efectos adversos como irritación de la piel, picazón, enrojecimiento, crecimiento del cabello en partes no deseadas y empeoramiento de la pérdida de cabello, y también se debe administrar continuamente para mantener la eficacia.

DESCRIPCIÓN

Problema Técnico

[0019] Para resolver los problemas mencionados anteriormente, la presente descripción se refiere a proporcionar el uso de un péptido que tiene una secuencia y estructura particular, y el uso de una composición farmacéutica y una composición cosmética que tiene un efecto excelente en la mejora o el tratamiento de las arrugas de la piel.

Solución Técnica

[0020] La presente descripción describe una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de ^sE^qID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento como un principio activo, y que tiene al menos uno de los siguientes efectos:

tratamiento de quemaduras;

tratamiento del glaucoma;

reducción de las arrugas de la piel; o

prevención de la caída del cabello, mejora de la salud del cuero cabelludo o promoción del crecimiento y la restauración del cabello.

[0021] La presente invención se refiere al uso de una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) como principio activo, para la reducción de las arrugas de la piel. También se describe una cosmética que comprende una composición descrita en esta invención.

[0022] Preferentemente, el fragmento peptídico puede ser al menos uno seleccionado de entre los siguientes:

1) un fragmento que consiste en 5 - 45 aminoácidos que comprenden el motivo RGD de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 3 o menos enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

2) un fragmento que comprende 30° - 38° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

3) un fragmento que comprende 32° - 43° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

4) un fragmento que comprende 30° - 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

5) un fragmento que comprende 18° - 54° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento; y

6) un fragmento que comprende 10° - 54° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento.

[0023] Más preferentemente, el fragmento peptídico puede ser al menos uno seleccionado de entre los siguientes:

1) un fragmento que consiste en 9, 12 o 15 aminoácidos que comprenden el motivo RGD de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 3 o menos enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

2) un fragmento que consiste en 30° - 38° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1; 3) un fragmento que consiste en 32° - 43° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, con un enlace disulfuro entre la 36a cisteína y la 42a cisteína;

4) un fragmento que consiste en 30° - 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, sin enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento; o

5) un fragmento que consiste en 30° - 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, con un enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento.

[0024] La composición descrita en esta invención se puede usar para una composición farmacéutica, una composición cosmética, una composición alimenticia funcional para la salud y una composición de cuasifármaco.

[0025] Además, la presente descripción describe un procedimiento para administrar un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento para proporcionar al menos uno de los siguientes efectos (en lo sucesivo, "procedimiento"):

tratamiento de quemaduras;

tratamiento del glaucoma;

reducción de las arrugas de la piel; o

[0026] Además, la presente descripción describe el uso de un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento para proporcionar al menos uno de los siguientes efectos (en lo sucesivo, "uso"):

tratamiento de quemaduras;

tratamiento del glaucoma;

reducción de las arrugas de la piel; o

[0027] La 'composición', 'procedimiento' y 'uso' indicados en esta invención se basa en los efectos de un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento en el tratamiento contra quemaduras; tratamiento del glaucoma; reducción de las arrugas de la piel; o prevención de pérdida de cabello, mejora de la salud del cuero cabelludo o promoción del crecimiento del cabello y la restauración del cabello, y a menos que se limite lo contrario en esta invención, se considera que la descripción de "composición" como se indica a continuación se aplica igualmente a "procedimiento" y "uso", y la descripción de "procedimiento" y "uso" se omite en esta invención para evitar la descripción superpuesta. La invención se define en las reivindicaciones. En lo sucesivo, la presente descripción se describe en detalle.

[0028] Los inventores descubrieron que, cuando se administra, un péptido de una secuencia y estructura particular que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) promueve la producción de colágeno y es eficaz en el tratamiento de quemaduras, el tratamiento de glaucoma, la promoción del crecimiento del cabello y la reducción de las arrugas de la piel.

[0029] La composición descrita en esta invención comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento.

[0030] El péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 consiste en 58 aminoácidos que comprenden un aminoácido RGD, opcionalmente con un enlace disulfuro entre cisteínas en el péptido correspondiente, y por lo tanto puede hacer referencia a un péptido sin enlace disulfuro o con 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento. Preferentemente, el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser un polipéptido que consiste en 452° - 509° aminoácidos del dominio 15 de metalopeptidasa ADAM (ADAM 15) (N° de acceso GenBank AAH14566.1). Por ejemplo, el péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 puede ser HU022, y el HU022 no tiene enlace disulfuro entre cisteínas en el péptido.

[0031] El fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 puede ser un fragmento que consiste en 3 o más aminoácidos que comprenden un motivo RGD. Preferentemente, el fragmento peptídico puede consistir en 5 a 45 aminoácidos que comprenden un motivo RGD. Más preferentemente, el fragmento peptídico puede consistir en 9, 12 o 15 aminoácidos que comprenden un motivo RGD. El motivo RGD corresponde a los aminoácidos 33, 34 y 35 en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1. Es suficiente si el fragmento peptídico comprende el motivo RGD, es decir, aminoácidos 33°, 34° y 35° de la SEQ ID NO: 1, es decir, la presente descripción no se limita necesariamente al fragmento peptídico que comprende tanto un motivo RGD como sus aminoácidos consecutivos. El fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 puede tener un enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento. El enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento se distingue de un enlace disulfuro entre una cisteína dentro del fragmento y una cisteína fuera del fragmento. El enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento puede comprender 0 o más enlaces disulfuro basados en la cantidad de cisteínas en el fragmento, y opcionalmente puede comprender ningún enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro, y preferentemente ningún enlace disulfuro o 3 o menos enlaces disulfuro.

[0032] Preferentemente, el fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser uno de los siguientes:

4) un fragmento que comprende 30° - 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

[0033] Estos fragmentos comprenden la secuencia de aminoácidos específica de dichos 2) - 6) y consisten en 58 o menos aminoácidos, opcionalmente con un enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento correspondiente. Con base en la cantidad de cisteínas en el fragmento correspondiente, los fragmentos pueden comprender 0 o más enlaces disulfuro, y preferentemente 0 o más y 3 o menos enlaces disulfuro.

[0034] Más preferentemente, el fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser uno de los siguientes:

[0035] De acuerdo con una realización específica de la presente descripción, el fragmento 2) puede ser HU027, que corresponde a la SEQ ID NO: 5.

[0036] De acuerdo con una realización específica de la presente descripción, el fragmento 3) puede ser HU026, que corresponde a la SEQ ID NO: 4.

[0037] De acuerdo con una realización específica de la presente descripción, el fragmento 4) puede ser HU025, que corresponde a la SEQ ID NO: 3.

[0038] De acuerdo con una realización específica de la presente descripción, el fragmento 5) puede ser HU024, que corresponde a la SEQ ID NO: 2.

[0039] La definición del "péptido o su fragmento" descrita en esta invención abarca sus derivados farmacéuticamente aceptables, y los derivados farmacéuticamente aceptables se reconocerán como que tienen o proporcionan la misma función y/o actividad biológica que el péptido o fragmento descrito en esta invención, y pueden comprender una sal farmacéuticamente aceptable del péptido o fragmento descrito en esta invención siempre que no se viole el objeto de la presente descripción.

[0040] El término "sal farmacéuticamente aceptable", tal como se usa en esta invención, se refiere a cualquier sal que posea una actividad biológica y/o fisiológica deseada del compuesto y que exhiba un mínimo de efectos toxicológicos no deseados. Para la sal, es útil una sal de adición de ácido formada por ácido libre farmacéuticamente aceptable. La sal de adición de ácido se produce mediante un procedimiento común, por ejemplo, disolviendo un compuesto en un exceso de solución acuosa ácida y precipitando la sal usando un solvente orgánico miscible en agua, por ejemplo, metanol, etanol, acetona o acetonitrilo. El compuesto y la misma cantidad molar de ácido o alcohol (por ejemplo, glicol monometil éter) en agua pueden calentarse, y posteriormente la mezcla puede evaporarse y secarse, o la sal precipitada puede filtrarse por succión. En este caso, el ácido libre incluye ácido inorgánico y ácido orgánico, y el ácido inorgánico incluye ácido clorhídrico, ácido bromhídrico, ácido fosfórico, ácido nítrico, ácido sulfúrico y ácido tartárico, y el ácido orgánico incluye, de modo no taxativo, ácido metanosulfónico, ácido p-toluenosulfónico, ácido acético, ácido trifluoroactivo, ácido maleico, ácido succínico, ácido oxálico, ácido benzoico, ácido tartárico, ácido fumárico, ácido mandélico, ácido propiónico, ácido cítrico, ácido láctico, ácido glicólico, ácido glucónico, ácido galacturónico, ácido glutámico, ácido glutárico, ácido glucurónico, ácido aspártico, ácido ascórbico, ácido carbónico, ácido vainílico y ácido hidriódico. Además, la sal metálica farmacéuticamente aceptable puede producirse usando base. La sal de metal alcalino o metal alcalinotérreo se obtiene, por ejemplo, disolviendo un compuesto en un exceso de hidróxido de metal alcalino o solución de hidróxido de metal alcalinotérreo, filtrando una sal de compuesto no disuelto y evaporando y secando el residuo. En este caso, para la sal metálica, particularmente, la sal de sodio, potasio o calcio es adecuada para uso farmacéutico. Además, otra sal adecuada es sal de plata y la sal de plata se puede obtener provocando una reacción entre sal de metal alcalino o metal alcalinotérreo y sal de plata adecuada (por ejemplo, nitrato de plata). A menos que se indique lo contrario, el péptido descrito en esta invención o su fragmento comprende la mayoría de las sales de propiedades ácidas o base que pueden existir en el péptido o fragmento de acuerdo con la presente descripción. Por ejemplo, la sal farmacéuticamente aceptable incluye sales de sodio, calcio y potasio del grupo hidroxilo, y otra sal farmacéuticamente aceptable del grupo amino incluye sales de hidrobromuro, sulfato, hidrógeno-sulfato, fosfato, hidrógeno-fosfato, dihidrógeno-fosfato, acetato, succinato, citrato, tartrato, lactato, mandelato, metanosulfonato (mesilato) y p-toluenosulfonato (tosilato), y se puede producir mediante procedimientos de producción de sal conocidos en la técnica.

[0041] El péptido o su fragmento descrito en esta invención puede producirse mediante una variedad de procedimientos conocidos en la técnica, y preferentemente puede producirse mediante procedimientos de síntesis de proteínas (Merrifield, R.B., J. Am.chem.Soc. 85:2149, 1963)

[0042] El péptido o su fragmento descrito en esta invención tiene al menos uno de los siguientes efectos: tratamiento de quemaduras;

tratamiento del glaucoma;

reducción de las arrugas de la piel; o

[0043] Además, el péptido o su fragmento descrito en esta invención puede proporcionarse en forma de una composición farmacéutica o una composición cosmética, y la composición farmacéutica y la composición cosmética se denominan en lo sucesivo colectivamente como la "composición según la presente descripción".

[0044] El término "promoción", "reducción" o "tratamiento", tal como se usa en esta invención, se refiere a todas las actividades para mejorar los síntomas o cambiar a una mejor condición mediante la administración de la composición descrita en esta invención. Además, el término "prevención", tal como se usa en esta invención, se refiere a todas las actividades para inhibir los síntomas o retrasar la aparición de enfermedades mediante la administración de la composición descrita en esta invención.

[0045] Los péptidos preferidos o su fragmento descrito en esta invención para cada uno de los efectos son los siguientes:

Tratamiento de quemaduras

[0046] El término "quemadura", tal como se usa en esta invención, se refiere a daños que ocurren cuando se queman por gas, líquido, sólido o llama de alta temperatura, y las quemaduras pueden tener diversos síntomas y complicaciones de acuerdo con el ancho y la profundidad quemados, el tiempo de contacto con la temperatura de los objetos que causan quemaduras y las condiciones de la piel. De acuerdo con la gravedad de las quemaduras, la epidermis, la dermis y/o la hipodermis pueden dañarse, y los apéndices de la piel tales como folículos, glándulas sudoríparas y glándulas sebáceas pueden dañarse, e incluso la capa grasa, ligamentos, fascias, músculos y tejidos óseos debajo de la capa de la piel pueden dañarse. Además, las quemaduras pueden ir acompañadas de escaras, enrojecimiento, dolor, hinchazón, ampollas y sensación de ardor.

[0047] La composición para tratar quemaduras descrita en esta invención comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de ^sE^qID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento. Más preferentemente, la composición puede comprender un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 sin enlace disulfuro.

Tratamiento del glaucoma

[0048] El término "glaucoma", tal como se usa en esta invención, significa colectivamente enfermedades que tienen una forma de atrofia del nervio óptico y ocurren en el nervio óptico que incluye células del plexo retiniano. El síndrome de glaucoma incluye aumento de la presión intraocular, cambio de visión, córnea hinchada, deslumbramiento, lagrimeo, espasmo de párpados, midriasis, dolor de cabeza, náuseas, ojos rojos, visión baja y dolor ocular grave.

[0049] La composición para tratar el glaucoma descrita en esta invención comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento.

[0050] Preferentemente, la composición para tratar el glaucoma descrita en esta invención puede comprender un fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp).

[0051] El fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) es preferentemente como sigue:

[0052] Más preferentemente, el fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser uno de los siguientes:

1) un fragmento que consiste en 9, 12 o 15 aminoácidos que comprenden el motivo RGD de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 3 o menos enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento; o

4) un fragmento que consiste en 30° - 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, sin enlace disulfuro en el fragmento.

[0053] Tal como se describe en esta invención, el fragmento 4) puede ser HU025, que corresponde a la SEQ ID NO: 3.

Reducción de las arrugas de la piel

[0054] El término "arruga de la piel", tal como se usa en esta invención, se refiere al pliegue de la piel que surge del envejecimiento debido a la degeneración de la piel, la reducción de la elasticidad y así sucesivamente.

[0055] La composición para reducir las arrugas de la piel de acuerdo con la presente descripción comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento.

[0056] Preferentemente, la composición para reducir las arrugas de la piel de acuerdo con la presente descripción puede comprender un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 sin enlace disulfuro entre cisteínas en el péptido.

[0057] Alternativamente, preferentemente, la composición para reducir las arrugas de la piel de acuerdo con la presente descripción puede comprender un fragmento peptídico que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp).

[0058] El fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) es preferentemente como sigue:

[0059] Más preferentemente, el fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser uno de los siguientes:

[0060] De acuerdo con una realización específica de la presente descripción, el fragmento 5) puede ser HU024, que corresponde a la SEQ ID NO: 2.

Prevención de la pérdida de cabello, mejora de la salud del cuero cabelludo o promoción del crecimiento y la restauración del cabello

[0061] El término "alopecia o pérdida de cabello", tal como se usa en esta invención, se refiere al debilitamiento de la raíz del cabello, adelgazamiento del cabello y, en última instancia, pérdida de cabello en áreas donde el cabello debería estar normalmente presente. Se sabe que la pérdida de cabello es causada por factores hereditarios, la secreción excesiva de la hormona sexual testosterona, la reducción del flujo sanguíneo a los folículos, la secreción excesiva de sebo, el estrés, los tiempos irregulares de los alimentos, la contaminación del aire y la exposición excesiva a los rayos UV, y en la mayoría de los casos, muchas causas actúan en combinación.

[0062] Además, el término "cuero cabelludo", tal como se usa en esta invención, se compone de cinco capas: piel, tejido conectivo, aponeurosis, tejido conectivo suelto y pericráneo, y el cabello se incluye en la estructura principal del cuero cabelludo.

[0063] La composición para la prevención de la pérdida de cabello, la mejora de la salud del cuero cabelludo o la promoción del crecimiento y restauración del cabello descrita en esta invención comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento.

[0064] Preferentemente, la composición para tratar el glaucoma descrita en esta invención puede comprender un fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp).

[0065] El fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) es preferentemente como sigue:

[0066] Más preferentemente, el fragmento del péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 puede ser uno de los siguientes:

[0067] Tal como se describe en esta invención, el fragmento 2) puede ser HU027, que corresponde a la SEQ ID NO: 5.

[0068] Tal como se describe en esta invención, el fragmento 3) puede ser HU026, que corresponde a la SEQ ID NO: 4.

[0069] Tal como se describe en esta invención, el fragmento 4) puede ser HU025, que corresponde a la SEQ ID NO: 3.

[0070] Tal como se describe en esta invención, el fragmento 5) puede ser HU024, que corresponde a la SEQ ID NO: 2.

[0071] La composición descrita en esta invención puede prepararse en forma de una composición farmacéutica o una composición cosmética. La composición farmacéutica o composición cosmética puede comprender excipientes farmacéuticamente (o cosméticamente) aceptables, agentes desintegrantes, agentes aglutinantes, agentes lubricantes, agentes humectantes, agentes emulsionantes o agentes de suspensión. La composición descrita en esta invención puede usarse sola o en combinación con cualquier vehículo y excipiente conveniente, y su forma de dosificación puede ser para administración de dosis única o múltiple.

[0072] La composición descrita en esta invención se puede administrar por una vía no oral cuando se administra.

[0073] La composición descrita en esta invención puede ser formulación sólida, formulación semisólida o formulación líquida. La formulación sólida incluye polvo, gránulos, comprimidos, cápsulas y supositorio. La formulación sólida comprende excipientes, agentes saborizantes, agentes aglutinantes, agentes conservantes, agentes desintegrantes, agentes lubricantes y rellenos. La formulación semisólida incluye crema, loción, emulsión y revestimiento, y se puede preparar con una adición de agentes colorantes, agentes saborizantes, agentes estabilizantes, agentes espesantes y tensioactivos adecuados. La formulación líquida incluye soluciones tales como agua, alcohol y solución de propilenglicol, suspensiones y emulsiones, y puede prepararse con una adición de agentes colorantes, agentes saborizantes, agentes estabilizantes y agentes espesantes adecuados. Por ejemplo, el polvo se puede preparar simplemente mezclando el principio activo de la presente descripción con un excipiente farmacéuticamente aceptable adecuado, por ejemplo, lactosa, almidón y celulosa microcristalina. El gránulo se puede preparar mezclando el principio activo de la presente descripción con un excipiente adecuado farmacéuticamente aceptable; y un agente de unión adecuado farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, polivinilpirrolidona e hidroxipropilcelulosa, usando un procedimiento de granulación húmeda usando un solvente, por ejemplo, agua, etanol e isopropanol o un procedimiento de granulación seco usando compresión. Además, el comprimido se puede preparar mezclando los gránulos con un agente lubricante adecuado farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, estearato de magnesio y prensado de comprimidos usando una máquina de comprimidos. Además, por ejemplo, una preparación externa a la piel puede prepararse mediante procedimientos comunes para preparar una preparación externa a la piel que implica la mezcla homogénea de un sustrato farmacéuticamente aceptable adecuado, por ejemplo, vaselina y estearilalcohol; un tensioactivo adecuado farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, polisorbato y sesquioleato de sorbitán; un agente hidratante adecuado farmacéuticamente aceptable, por ejemplo, glicerina; un disolvente adecuado farmacéuticamente aceptable; y un agente saborizante, un agente colorante, un agente estabilizante y un agente espesante.

[0074] En la composición descrita en esta invención, el péptido según la presente descripción o su fragmento está presente preferentemente en una cantidad de entre el 0,01 y el 10 % en peso por el peso total de la composición. Cuando el contenido es menor que 0,01 % en peso, el efecto deseado (arruga de la piel, quemadura, glaucoma y pérdida de cabello) no se puede exhibir completamente, y cuando el contenido es mayor que 10 % en peso, la ventaja competitiva económica no es rentable en términos de disponibilidad industrial cuando se consideran los costos de síntesis de péptidos, y la inmunogenicidad conduce a la actividad inicial, pero la eficacia puede reducirse debido a los anticuerpos producidos debido a la administración repetida.

[0075] La composición cosmética descrita en esta invención se puede fabricar y usar en formulaciones para maquillaje base o productos de maquillaje, por ejemplo, tónicos, esencias, aceites, cremas, polvos, paquetes, fundaciones, bases de maquillaje y barras. La composición cosmética se puede aplicar en diversas fases, por ejemplo, fase líquida, fase crema, fase pastosa y fase sólida, y se puede fabricar mediante procedimientos de fabricación cosmética comunes. Por ejemplo, la composición descrita en esta invención puede producirse como una forma de tónicos hidratantes que usan carbómero, butilenglicol, glicerina, PEG, etanol, aceite de ricino hidrogenado con polioxietileno, trietanolamina y agua purificada, o puede producirse en tipo loción, por ejemplo, usando cetearilalcohol, estearato de glicerilo/estearato de PEG-100, polisorbato 60, sesquioleato de sorbitán, octanoato de cetilo, escualano, aceite de almendra de albaricoque, butilenglicol, carbómero, goma xantana, conservante, agua purificada y arginina.

[0076] La composición farmacéutica descrita en esta invención puede formularse y usarse de diversas maneras como ungüentos, cremas, geles, películas, comprimidos, cápsulas, gránulos, suspensiones o jarabes mediante procedimientos comunes conocidos en el campo técnico al que pertenece la presente descripción.

[0077] La cantidad farmacéuticamente eficaz y la dosificación eficaz de la composición farmacéutica descrita en esta invención pueden variar en función de los procedimientos de formulación, los procedimientos de administración, los intervalos de dosificación y/o las vías de administración de la composición farmacéutica. Además, puede variar dependiendo de muchos factores que incluyen el tipo y el alcance de la reacción que se debe lograr mediante la administración de la composición farmacéutica, el tipo, la edad, el peso, las condiciones generales de salud, los síntomas o la gravedad de las enfermedades, el género, la dieta, la excreción de los individuos diana y los ingredientes de otra composición médica utilizados juntos de forma sincrónica o asincrónica para el individuo correspondiente, y factores análogos bien conocidos en el campo médico. Los expertos en el campo técnico correspondiente pueden determinar y prescribir fácilmente la dosificación eficaz para el tratamiento previsto. La composición farmacéutica descrita en esta invención se puede administrar en una dosis única o múltiple dividida por día. Por consiguiente, la dosificación no limita el alcance de la presente descripción en ningún aspecto. La dosificación deseada de la composición farmacéutica descrita en esta invención puede ser de 0,01 mg/kg a 10 mg/kg por día.

[0078] Además del péptido o su fragmento descrito en esta invención, preferentemente, la composición descrita en esta invención puede contener otros ingredientes para proporcionar un efecto sinérgico con el efecto principal sin causar ningún daño al efecto principal previsto.

[0079] Por ejemplo, cuando la composición descrita en esta invención se utiliza para prevenir la pérdida de cabello, con el fin de impartir funciones adicionales, se pueden agregar adyuvantes, por ejemplo, agentes anti caspa, agentes fortificantes de la raíz del cabello, agentes reparadores del cabello, agentes protectores del cuero cabelludo y agentes refrescantes, teniendo en cuenta las propiedades del cabello. Los adyuvantes, por ejemplo, agentes anti caspa, agentes fortificantes de la raíz del cabello, agentes reparadores del cabello, agentes protectores del cuero cabelludo y agentes refrescantes, generalmente agregados a la composición para el crecimiento del cabello y la restauración del cabello, incluyen aquellos comúnmente utilizados en la técnica.

Efectos Ventajosos

[0080] Usando el péptido o su fragmento descrito en esta invención, es posible tratar eficazmente quemaduras y glaucoma, obtener un efecto excelente en la reducción de las arrugas de la piel y es eficaz en la promoción de la restauración del cabello y el crecimiento del cabello, así como en la prevención de la pérdida de cabello, por lo que se puede utilizar para una composición cosmética y una composición farmacéutica.

BREVE DESCRIPCIÓN DE LOS DIBUJOS

[0081]

La Figura 1 muestra los resultados de HU024 medidos mediante el procedimiento de análisis de masa MALDITOF.

La Figura 2 muestra los resultados de HU025 medidos mediante el procedimiento de análisis de masa MALDI-TOF.

La Figura 3 muestra los resultados de HU026 medidos mediante el procedimiento de análisis de masa MALDI-TOF.

La Figura 4 muestra los resultados de HU027 medidos mediante el procedimiento de análisis de masa MALDI-TOF.

La Figura 5 muestra los resultados de la medición de los cambios de peso de G1-G6.

(G1: Control normal, n=5

G2: Control de vehículo, n=9-10

G3: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día), n=10

G4: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día), n=10

G5: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día), n=10

G6: Control positivo (10 pg/cabeza/día), n=9-10)

La Figura 6 muestra los resultados de la medición de los cambios en el área de la herida por quemadura de G1-G6.

(G2: Control de vehículo, n=9-10

G3: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día), n=10

G4: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día), n=10

G5: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día), n=10

G6: Control positivo (10 pg/cabeza/día), n=9-10)

La Figura 7 muestra la reducción del área de la herida quemada (%) de G2-G6.

(G1: Control normal, n=5

G2: Control de vehículo, n=9-10

G3: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día), n=10

G4: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día), n=10

G5: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día), n=10

G6: Control positivo (10 pg/cabeza/día), n=9-10)

La Figura 8 muestra cambios en la formación de escaras y la infiltración de células inflamatorias de G1-G6. (G1: Control normal, n=5

G2: Control de vehículo, n=9-10

G3: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día), n=10

G4: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día), n=10

G5: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día), n=10

G6: Control positivo (10 pg/cabeza/día), n=9-10)

La Figura 9 muestra cambios en la regeneración de apéndices de la piel, crecimiento del tejido conectivo, regeneración de células epidérmicas de G1-G6.

(G1: Control normal, n=5

G2: Control de vehículo, n=9-10

G3: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día), n=10

G4: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día), n=10

G5: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día), n=10

G6: Control positivo (10 pg/cabeza/día), n=9-10)

La Figura 10 muestra el grado de formación de escaras e infiltración de células inflamatorias de G1-G6.

(e: epidermis, d: dermis, hd: hipodermis)

(A: Control normal,

B: Control de vehículo,

C: Artículo de prueba (3,3 pg/cabeza/día),

D: Artículo de prueba (10 pg/cabeza/día),

E: Artículo de prueba (30 pg/cabeza/día),

F: Control positivo (10 pg/cabeza/día)

La Figura 11 muestra cambios en el valor numérico R1 después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 12 muestra cambios en el valor numérico R2 después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 13 muestra cambios en el valor numérico R3 después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 14 muestra cambios en el valor numérico R4 después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 15 muestra cambios en el valor numérico R5 después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 16 muestra cambios en el valor numérico Ra después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 17 muestra cambios en el valor numérico de Rmax después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 18 muestra cambios en el valor numérico de Rt después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 19 muestra cambios en el valor numérico de Rp después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 20 muestra cambios en el valor numérico de Rv después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 21 muestra cambios en las puntuaciones de evaluación visual por experto después del uso del producto de prueba (HU022) y el producto de control.

La Figura 22 muestra cambios en el valor numérico R1 después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 23 muestra cambios en el valor numérico R2 después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 24 muestra cambios en el valor numérico R3 después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 25 muestra cambios en el valor numérico R4 después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 26 muestra cambios en el valor numérico R5 después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 27 muestra cambios en el valor numérico Ra después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 28 muestra cambios en el valor numérico de Rmax después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 29 muestra cambios en el valor numérico de Rt después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 30 muestra cambios en el valor numérico de Rp después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 31 muestra cambios en el valor numérico de Rv después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 32 muestra cambios en las puntuaciones de evaluación visual por experto después del uso del producto de prueba (HU024) y el producto de control.

La Figura 33 muestra los resultados de la medición de los cambios de peso de G1-G10.

(G1: Control de vehículo (Agua destilada estéril para inyección), n=10;

G2: Artículo de prueba I (HU02420 ug/cabeza/día), n=10;

G3: Artículo de prueba I (HU02460 ug/cabeza/día), n=10;

G4: Artículo de prueba II (HU02520 ug/cabeza/día), n=10;

G5: Artículo de prueba II (HU02560 ug/cabeza/día), n=10;

G6: Artículo de prueba III (HU02620 ug/cabeza/día), n=10;

G7: Artículo de prueba III (HU02660 ug/cabeza/día), n=10;

G8: Artículo de prueba IV (HU02720 ug/cabeza/día), n=10;

G9: Artículo de prueba IV (HU02760 ug/cabeza/día), n=10;

G10: Control de referencia (Minoxyl 3 %), n=10)

La figura 34 muestra los resultados de la medición de los cambios en el área del cabello de G1-G10.

(G1: Control de vehículo (Agua destilada estéril para inyección), n=10;

G2: Artículo de prueba I (HU02420 ug/cabeza/día), n=10;

G3: Artículo de prueba I (HU02460 ug/cabeza/día), n=10;

G4: Artículo de prueba II (HU02520 ug/cabeza/día), n=10;

G5: Artículo de prueba II (HU02560 ug/cabeza/día), n=10;

G6: Artículo de prueba III (HU02620 ug/cabeza/día), n=10;

G7: Artículo de prueba III (HU02660 ug/cabeza/día), n=10;

G8: Artículo de prueba IV (HU02720 ug/cabeza/día), n=10;

G9: Artículo de prueba IV (HU02760 ug/cabeza/día), n=10;

G10: Control de referencia (Minoxyl 3 %), n=10)

La Figura 35 muestra los resultados de la medición de los cambios de peso del cabello.

(G1: Control de vehículo (Agua destilada estéril para inyección), n=10;

G2: Artículo de prueba I (HU02420 ug/cabeza/día), n=10;

G3: Artículo de prueba I (HU02460 ug/cabeza/día), n=10;

G4: Artículo de prueba II (HU02520 ug/cabeza/día), n=10;

G5: Artículo de prueba II (HU02560 ug/cabeza/día), n=10;

G6: Artículo de prueba III (HU02620 ug/cabeza/día), n=10;

G7: Artículo de prueba III (HU02660 ug/cabeza/día), n=10;

G8: Artículo de prueba IV (HU02720 ug/cabeza/día), n=10;

G9: Artículo de prueba IV (HU02760 ug/cabeza/día), n=10;

G10: Control de referencia (Minoxyl 3 %), n=10)

La Figura 36 muestra los resultados de la medición de los cambios de presión intraocular en el modelo animal de presión intraocular aumentada administrado con muestras 1-5.

Nor: ratón normal

Microesferas: modelo animal de presión intraocular aumentada

Muestra 1: Tafluprost HU024 (20ug/ml)

Muestra 2: HU024 (20ug/ml)

Muestra 3: HU025 (20ug/ml)

Muestra 4: HU026 (20ug/ml)

Muestra 5: HU027 (20ug/ml)

Pos Cont: Tafluprost

La Figura 37 muestra los resultados de la medición de los cambios de las células del nervio óptico en el modelo animal de presión intraocular aumentada administrado con las muestras 1-5.

Control: ratón normal

Microesferas: modelo animal de presión intraocular aumentada

Muestra 1: Tafluprost HU024 (20ug/ml)

Muestra 2: HU024 (20ug/ml)

Muestra 3: HU025 (20ug/ml)

Muestra 4: HU026 (20ug/ml)

Muestra 5: HU027 (20ug/ml)

(+)Control: Tafluprost

MEJOR MODO DE LLEVAR A CABO LA INVENCIÓN

[0082] En lo sucesivo, la presente descripción se describirá con más detalles a través de ejemplos. Estos ejemplos pretenden describir la presente descripción con más detalles.

Ejemplo 1. Síntesis de péptido

[0083] Un polipéptido que consiste en 452° - 509° aminoácidos del dominio 15 de metalopeptidasa ADAM (AD^aM 15) (N° de acceso GenBank AAH14566.1) se designa como HU022 (SEQ ID NO: 1), y comprende una porción de desintegrina.

[0084] Además, un péptido que consiste en un total de 15 aminoácidos que está diseñado para rodear un motivo RGD en la región de desintegrina de la proteína ADAM15 (Secuencia de Referencia NCBI: n M_001261464), comprende cisteínas que desempeñan un papel clave en la estructura tridimensional (3D) con el motivo RGD centrado. El péptido está diseñado para tener un enlace disulfuro formado entre cisteínas y se designa como HU024 (SEQ ID NO: 2).

[0085] Además, un péptido diseñado para tener la misma secuencia de aminoácidos que HU024, pero sin enlace disulfuro, se designa como HU025 (SEQ ID NO: 3).

[0086] Además, adicionalmente, un péptido de menor tamaño que está diseñado para rodear un motivo RGD en la región de desintegrina de la proteína ADAM15, que consiste en 12 aminoácidos, se designa como HU026 (SEQ ID NO: 4), y que consiste en 9 aminoácidos, se designa como HU027 (SEQ ID NO: 5).

[0087] En lo sucesivo, se describe con más detalle un procedimiento para producir los péptidos.

[0088] Para la síntesis de un nuevo péptido que comprende un motivo RGD de acuerdo con la presente descripción, se utilizó un procedimiento de síntesis de péptidos de fase sólida (procedimiento de fase sólida) (Merrifield, R.B., J.Am. Chem. Soc. 85:2149, 1963). Los péptidos diana HU024, HU025, HU026, HU027 se sintetizaron en resina MBHA de amida de Rink usando química Fmoc, y el aminoácido utilizado fue aquel que tenía cadenas laterales y N-terminales protegidas usando grupo 9-fluorenilmetoxicarbonilo. Una cantidad de aminoácidos usados en síntesis fue de 0,3 mmol que es 3 equivalentes de resina 0,1 mmol. En el acoplamiento en cada etapa, la reacción se realizó con una adición de DIC (N,N'-Diisoprpil Cabodiimida) como un reactivo para la activación del extremo C y Cl-HOBt (6-cloro-1-hidroxibenzotriazol) como un reactivo para suprimir la racemización en un orden secuencial de acuerdo con cada secuencia, y el grupo Fmoc de los péptidos se retiró mediante tratamiento con solución de piperidina/DMF al 50 % (50/50,v/v) a temperatura ambiente durante 10-20 minutos. Después de que se completó la síntesis peptídica, para la liberación de la fase sólida y la desprotección de la cadena lateral, se realizó el tratamiento con TFA (ácido trifluoroacético)/solución mezclada con agua (9,5/0,5,v/v) a temperatura ambiente durante 2 horas. Para la formación de enlaces disulfuro en el péptido, se utilizó un procedimiento de oxidación en el aire con alta dilución para formar enlaces S-S en moléculas. Para acelerar la reacción, se utilizó una cantidad catalítica de DMSO.

[0089] El péptido sintetizado se separó mediante HPLC usando columna C18 de fase inversa y se confirmó 95 % o más de pureza mediante HPLC para análisis. Además, el peso molecular de cada péptido se confirmó mediante el procedimiento de análisis de masa Ma LDI-TOF (ionización por desorción láser asociada a matriz) (FIG. 1, FIG. 2, FIG. 3 y FIG. 4).

[0090] Las secuencias de aminoácidos y las características del polipéptido sintetizado se enumeran en la Tabla 1.

[Tabla 1]

[0091] Además, para el péptido diana HU022, se utilizó el producto comercial (EYEGENE Inc.).

Ejemplo 2. Efecto del tratamiento contra quemaduras (no forma parte de la invención)

[0092] El experimento se llevó a cabo con 55 ratas SD macho (Sprague-Dawley) que se dividieron en cinco grupos: 5 ratas para el grupo normal (1 grupo, G1), 9-10 ratas para el control negativo (1 grupo, G2), 30 ratas para el grupo experimental (3 grupos, 10 ratas en cada grupo, G3, G4, G5) y 9-10 ratas para el control positivo (1 grupo, G6). En los grupos restantes, excepto el grupo normal, se utilizaron ratas SD macho quemadas para el experimento. Después de anestesiar a las ratas SD, se indujeron quemaduras de 2 grados, de 2 cm de diámetro, en las ratas SD utilizando un soldador eléctrico de aluminio.

[0093] La sustancia de prueba HU022 (G3, G4, G5), solución salina normal (G2) y Fiblasto (G6) se aplicaron a la piel de las ratas SD macho quemadas repetidamente una vez al día siete veces a la semana durante 7 días. El fibroblasto se aplicó al grupo control (G6) en 10 ^g/dosis/cabeza, y el grupo experimental se dividió en 3 grupos y la sustancia de prueba se aplicó a cada grupo en 3,3 ^g/dosis/cabeza (G3), 10 ^g/dosis/cabeza (G4) y 30 |jg/dosis/cabeza (G5).

[0094] Después de que se indujo la quemadura, se realizaron imágenes antes de aplicar la sustancia de prueba y se realizaron imágenes en los días 1, 4, 8, 11 y 15, y después de las imágenes, se aplicó la sustancia de prueba y el sitio aplicado se cubrió con gasa y se envolvió con tegadermo. Además, las imágenes tomadas para medir el área de la herida quemada se analizaron utilizando el programa analizador de imágenes.

[0095] El día 14 después de la quemadura, el sitio de la quemadura en la espalda se raspó de la dermis y se fijó en una solución de formalina neutralizada al 10 %, y la prueba histopatológica se llevó a cabo mediante tinción H&E. El tejido cutáneo se observó con microscopio óptico (Olympus BX41, Olympus, Japón), y se analizaron los cambios histológicos relacionados con el tratamiento de quemaduras en la epidermis, dermis, hipodermis y músculos subcutáneos para cada uno de los siguientes seis elementos: 1) escara, (0, ninguno; 1, leve; 2, moderado; 3, grave; 4, muy grave), 2) infiltración de células inflamatorias (0, ninguna; 1, infiltración de epidermis; 2, infiltración de dermis; 3, infiltración de hipodermis, 4, infiltración muscular), 3) angiogénesis (seleccionando aleatoriamente 3 zonas con un aumento de *400, y contando y promediando el número de todos los vasos sanguíneos observados), 4) regeneración del apéndice cutáneo (pilosebaceo), (0, ninguno; 1, el grado de regeneración es bajo; 2, se observa regeneración en varias zonas; 3, la regeneración de los apéndices es de forma normal, pero el número es menor que lo normal; 4; el mismo nivel que el grupo normal), 5) crecimiento del tejido conectivo (fibroplasia) (0, nivel normal del grupo; 1, solo se observa en algunas áreas de la dermis o hipodermis; 2, observado en la dermis y la hipodermis; 3, observado en una amplia área de la dermis y la hipodermis; 4, observado en toda el área de la herida por quemadura), 6) regeneración epidérmica (0, no se observa regeneración; 1, las células basales se observan como una capa en algunas áreas; 2, se observan células basales en fila, 3, se observan células basales como una capa o múltiples capas en la mayoría de las regiones de la piel dañada y se identifica la capa espinosa o la capa granular, 4, estructura de epidermis de grupo normal), y después de la evaluación, se calcularon promedios para cada grupo.

[0096] Con los resultados de la medición, la comparación paramétrica determinó la significación a través de la prueba t de Student y ANOVA unidireccional, y se realizaron pruebas de significación en relación con el control negativo. Además, con los resultados de la prueba histopatológica de quemaduras, se realizó la prueba H de Kruskal-Wallis, y cuando se identificó la significación entre los grupos, se realizó la comparación entre los grupos a través de la prueba U de Mann-Whitney. El programa de cálculo para la estadística fue SPSS 10.1 K. P<0,05 se determinó que era estadísticamente significativo.

[0097] Como resultado, no se observó ningún síndrome anormal después de aplicar la sustancia de prueba, y al octavo día (Día 8), se observó una reducción de peso estadísticamente significativa (P<0,01) en el grupo de quemaduras en comparación con el grupo normal, pero la reducción de peso fue el resultado de la quemadura (Tabla 2, Figura 5).

[Tabla 21

PESOS CORPORALES (g) MASCULINO Día 1 Día 8 Día 15

G1 255,31±8,84 288,69±5,72 302,88±4,53

G2 260,02±13,82 266,12±16,86** 299,07±16,75

G3 261,24±10,05 269,41±17,57 300,31±20,36

G4 260,59±9,27 267,86±5,20 296,55±8,86

G5 257,94±9,23 259,49±15,34 284,87±17,06

G6 255,56±7,60 260,49±12,77 293,06±13,16

Los datos se expresan como Media ± D.E. Los resultados se analizaron estadísticamente en la prueba t de Student. ##: significativamente diferente de G1 versus G2, P<0,01

[0098] Como resultado de la medición del área de la herida por quemadura, al comparar los valores absolutos de las áreas, no se observó un cambio estadísticamente significativo en todos los grupos experimentales en comparación con el control negativo (Tabla 3, Figura 6). Como resultado de la medición de la reducción (%) en el área de la herida por quemadura, se observó una reducción de área estadísticamente significativa en la sustancia de prueba 30 jg/cabeza/grupo diario (G5) el Día 4 en comparación con el control negativo (P<0,05), y no se observó ninguna diferencia en los grupos restantes a quienes se administró la sustancia de prueba (Tabla 4, Figura 7).

Tabla 3

(continuación)

Tabla 4

[0099] Los resultados de la prueba de histopatología son los siguientes (Tabla 5, FIG. 8, FIG. 9 y FIG. 10): 1) Eschar

[0100] En la epidermis de la piel de herida por quemadura, la fibrina, los glóbulos blancos, el exudado coagulado y el tejido muerto se coagulan juntos para formar escara. El grado de formación de escaras se evaluó utilizando 5 niveles (0-4 puntos). El grupo normal G1 fue el tejido cutáneo normal donde no se observa escara. En el grupo de control negativo (G2) y la sustancia de prueba 3,3 pg/cabeza/día administrados (G3), se observó escara tan gruesa como la media de 4,0±0,0 y 4,0±0,0 puntos en toda el área quemada y se evaluó como muy grave. En el grupo de administración de 10 pg/cabeza/día de la sustancia de prueba (G4), la escara obtuvo 3,2±0,6 puntos correspondientes al nivel de aproximadamente el 80 % de toda el área quemada, y en el grupo de administración de 30 pg/cabeza/día de la sustancia de prueba (G5) y control positivo (G6), la escara obtuvo 2,7±0,7 y 2,6±0,5 puntos, lo que indica una formación reducida de escara. Además, en la sustancia de prueba 10 pg/cabeza/día administrado al grupo (G4), 30 pg/cabeza/día administrado al grupo (G5) y control positivo (G6), se observó una formación de escara reducida y un espesor de escara reducido, y los resultados del análisis estadístico revelaron que hubo significación en comparación con el control negativo (G2) (P<0,01).

2) Infiltración de células inflamatorias

[0101] Después de que se indujo la quemadura, ocurre una reacción inflamatoria aguda, y se observa principalmente infiltración de linfocitos y neutrocitos. El grado de infiltración de células inflamatorias se evaluó utilizando 5 niveles (0-4 puntos). El grupo normal (G1) fue el tejido normal donde no se observó infiltración de células inflamatorias. En el control negativo (G2), todos los grupos a los que se administró la sustancia de prueba (G3, G4, G5) y el control positivo (G6), se observó infiltración de células inflamatorias como linfocitos, neutrocitos y monocitos en la capa de epidermis, dermis e hipodermis, y no se observó ninguna diferencia entre cada grupo.

3) Regeneración de apéndice de la piel (Pilosebáceo)

[0102] El grado en que los apéndices de la piel ubicados en la capa de dermis, tales como folículos, glándulas sudoríparas y glándulas sebáceas se regeneran después de la quemadura es un estándar importante para determinar el grado de regeneración de la piel con regeneración epidérmica. Los apéndices de la piel se componen de células epidérmicas, y las células indiferenciadas ubicadas en los apéndices se diferencian y se mueven a la epidermis, y participan en el procedimiento de regeneración de la epidermis. El grado de regeneración de los apéndices de la piel se evaluó utilizando 5 niveles (0-4 puntos). En el grupo normal (G1), los apéndices de la piel como folículos y glándulas sebáceas se observaron como una estructura normal y se evaluaron como 4 puntos. En el control negativo (G2), la regeneración de los apéndices de la piel no se observó en absoluto, o el grado de regeneración se observó como muy bajo. En la sustancia de prueba 10 ug/cabeza/día administrada al grupo (G4) y la sustancia de prueba 30 pg/cabeza/día administrada al grupo (G5), se encontró que la regeneración de los apéndices de la piel dependiente de la concentración de la sustancia de prueba se promovía y el nivel de regeneración de los apéndices de la piel se encontró como estadísticamente significativo en comparación con el control negativo (G2) (P<0,05 o P<0,01). En el control positivo (G6), también se observó promoción de regeneración de apéndices de la piel, y fue estadísticamente significativa (P<0,01).

4) Crecimiento del tejido conectivo (fibroplasia)

[0103] Después de la inducción de la quemadura, se observa un crecimiento de fibroblastos y un aumento en el colágeno producido a partir de su célula en el procedimiento de terapia. El grado de crecimiento del tejido conectivo se evaluó utilizando 5 niveles (0-4 puntos). Tras el crecimiento de las células de fibra y la producción de colágeno en la dermis a alta densidad junto con la regeneración de la piel, cuando se completa la regeneración, las células de fibra cultivadas y el aumento del colágeno se reducen lentamente y alcanzan un nivel normal. El grupo normal (G1) fue el tejido normal donde no se observó fibroblasto. En el control negativo (G2), se observaron todos los grupos a los que se administró la sustancia de prueba (G3, G4, G5) y el control positivo (G6), un crecimiento de células de fibra muy activo y un aumento de colágeno en la dermis y la hipodermis, y se evaluó que no había diferencia entre cada grupo.

5) Regeneración epidérmica

[0104] La regeneración de células epidérmicas es el procedimiento de regeneración de la epidermis dañada o perdida con crecimiento de células basales y diferenciación en células epidérmicas de la piel. Para la capacidad de regeneración epidérmica, se observó y evaluó la extensión de la formación de epidermis y el crecimiento de células basales utilizando 5 niveles (0-4 puntos). En el grupo normal (G1), se observó tejido epidérmico normal de la capa basal, capa espinosa, capa granular y capa cornificada. En el control negativo (G2), no se observó regeneración epidérmica en la mayoría de los animales. En el grupo de administración de la sustancia de prueba 3,3 pg/cabeza/día (G3), se observó un nivel muy bajo de regeneración celular de la capa basal en algunas regiones, y en el grupo de administración de la sustancia de prueba 10 pg/cabeza/día (G4) y 30 pg/cabeza/día (G5) y control positivo (G6), se observó regeneración de una capa basal en el área más amplia, y se evaluó que tenía un efecto de promoción estadísticamente significativo de la regeneración de células epidérmicas en comparación con el control negativo (P<0,05).

[Tabla 5]

Grupo Eschar Infiltración de Pilosebáceo Fibroplasia Regeneración células epidérmica inflamatorias

G1 0 0 4,0±0,0 0 4,0±0,0

G2 4,0±0,0** 2,9±0,4** 0±0,0** 3,0±0,0** 0,0±0,0**

G3 4,0±0,0 3,0±0,0 0,1±0,3 3,1±0,3 0,1±0,0

G4 3,2±0,6** 3,0±0,0 0,9+1,1* 3,0±0,5 0,6±0,5*

G5 2,7±0,7** 3,0±0,0 1,1±1,0** 3,3±0,5 0,6±0,7*

G6 2,6±0,5** 2,7±0,5 0,4±0,5** 3,210,4 0,6±0,5*

Los datos se expresan como Media ± D.E. Los resultados se analizaron estadísticamente por procedimientos de box-plot y Kruscal-wallis.

*: significativamente diferente del valor de G1, P<0,05

**: significativamente diferente del valor de G2, P<0,01

##: significativamente diferente de G1 versus G2. P<0,01_______________________________________________ Ejemplo 3. Tratamiento de reducción de arrugas

[0105] Fueron examinadas mujeres de 30-65 años que tenían arrugas alrededor de los ojos. Durante 4 semanas, el producto de prueba (HU022 o HU024) y el producto de control (D.i-agua) se administraron aleatoriamente para usar los productos en cada uno de los lados izquierdo y derecho de la cara dos veces al día, y en la primera visita, los sujetos recibieron el producto de prueba y el producto de control para usar durante 4 semanas, y al mismo tiempo, se completó la evaluación e investigación antes del uso. Tuvieron segundas y terceras visitas en el intervalo de 2 semanas después del inicio del uso, y en cada visita, se les pidió que respondieran a varios tipos de evaluación e investigación definidos en el experimento.

[0106] Los ítems de evaluación, el procedimiento de prueba y sus resultados son los siguientes:

(1) Evaluación del efecto de reducción de arrugas del producto de prueba HU022

[0107] La extensión de las arrugas alrededor de los ojos se midió utilizando equipos. Un sitio diana para medir la extensión de las arrugas fueron las regiones alrededor de los ojos de los sujetos, y el lado izquierdo y el lado derecho de la cara se establecieron como un sitio de medición. Para medir la extensión de las arrugas, a los sujetos se les permitió lavar el sitio de medición con agua, y descansar durante 30 minutos en la sala de espera bajo condiciones de temperatura constante y humedad constante de 20-25°C de temperatura interior y humedad 40-60 % para aclimatar la temperatura superficial de la piel y la humedad al ambiente del espacio de medición, y no se les permitió beber agua durante el resto. Para la medición objetiva, las mediciones fueron realizadas por un investigador, y el mismo sitio se midió en cada momento de la primera visita antes del uso y la segunda y la tercera visita en 2 y 4 semanas después del uso. El análisis de perfilometría de transparencia se realizó utilizando el Visiometer SV600 (Courage-Khazaka electronic GmbH, Alemania) en la réplica de la piel del sitio al que se aplicaron el producto de prueba y el producto de control antes del uso y 2 y 4 semanas después del uso, y para identificar si hay alguna diferencia en cada grupo de control y grupo experimental después del uso, se analizó un cambio (%) en los valores de medición R1, R2, R4, R5 en 2 y 4 semanas después del uso en relación con antes del uso.

[0108] Los parámetros de extensión de las arrugas son los siguientes:

[Tabla 61

R1 ■ Rugosidad de la piel

■ La diferencia entre el pico más alto y el valle más bajo del perfil de arrugas

R2 ■ Rugosidad máxima

■ El mayor de los cinco valores R1 obtenidos para cada una de las cinco subdivisiones iguales en el perfil de arrugas

R3 ■ Rugosidad media

■ Media aritmética de una diferencia entre el máximo y el mínimo medido en cada subdivisión después de que el perfil de arrugas se divide en cinco subdivisiones iguales a lo largo del eje X

■ Libre de artefactos en lugar de R1 y R2

R4 ■ Profundidad de suavidad

■ La integral del área entre el pico más alto del perfil de arrugas y el perfil, dividida por la longitud de la línea media del perfil

■ Profundidad media de las arrugas de la piel

R5 ■ Rugosidad media aritmética

■ La integral del área entre la línea media del perfil y el perfil, dividida por la longitud de la línea media del perfil

■ Rugosidad media de la piel

[0109] Para identificar cambios en el valor numérico R3 después del uso del producto de prueba (HU022), se midieron los valores numéricos R3 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R3 del producto de prueba fue 34,24±3,51 antes del uso, 24,41±4,16 en 2 semanas después del uso y 18,62±2,79 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R3 del producto de control fue 22,48±2,74 antes del uso, 20,70±1,76 en 2 semanas después del uso y 18,13±0,91 en 4 semanas después del uso, y para identificar claramente los cambios en el valor numérico R3, se calculó un cambio (%) en R3 en cada zona horaria (Tabla 7, Figura 13).

[Tabla 71

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 34,24±3,51 22,48±2,74 2 semanas después del 24,41±4,16 20,70±1,76 uso

4 semanas después del 18,62±2,79 18,13±0,91 uso

Cambio (%) Antes del uso-2 semanas -28,71 -7,91

después del uso

Antes del uso-4 semanas -45,62 -19,33 después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0110] Para identificar cambios en el valor numérico R1 después del uso del producto de prueba (HU022), se midieron los valores numéricos R1 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R1 del producto de prueba fue 76,23±12,15 antes del uso, 54,59±10,99 en 2 semanas después del uso y 51,06±19,28 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R1 del producto de control fue 55,74±12,48 antes del uso, 56,17±11,11 en 2 semanas después del uso y 50,86±4,67 en 4 semanas después del uso (Tabla 8, Figura 11).

[Tabla 8]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 76,23±12,15 65,74±12,48 2 semanas después del uso 54,59+10,99 56,17±11,11 4 semanas después del uso 51,06±19,28 50,86±4,67 Antes del uso-2 semanas después -28,38 0,77

del uso

Cambio ( %) Antes del uso-4 semanas después -33,02 -8,76

del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0111] Para identificar cambios en el valor numérico R2 después del uso del producto de prueba (HU022), se midieron los valores numéricos R2 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R2 del producto de prueba fue 54,26±5,70 antes del uso, 36,87±6,02 en 2 semanas después del uso y 29,16±2,74 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R2 del producto de control fue 35,24±5,12 antes del uso, 31,64±4,37 en 2 semanas después del uso y 27,57±2,89 en 4 semanas después del uso (Tabla 9, Figura 12).

___________________________________________ [Tabla 91___________________________________________

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 54,26±5,70 35,24±5,12 2 semanas después del 36,87±6,02 31,64±4,37 _uso

4 semanas después del 29,16±5,12 27,57±2,89 _uso

Antes del uso-2 semanas

Cambio (%) después del uso -32,04 -10,23

Antes del uso-4 semanas

después del uso -46,25 -21,75 *Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0112] Para identificar cambios en el valor numérico R4 después del uso del producto de prueba (HU022), se midieron los valores numéricos R4 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R4 del producto de prueba fue 30,41±7,01 antes del uso, 23,64±5,11 en 2 semanas después del uso y 22,94±10,03 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R4 del producto de control fue 24,50±5,43 antes del uso, 25,06±5,49 en 2 semanas después del uso y 24,42±4,57 en 4 semanas después del uso (Tabla 10, Figura 14).

[Tabla 10]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 30,41±7,01 24,50±5,43 2 semanas después del uso 23,64±5,11 25,06±5,49 4 semanas después del uso 22,94±10,03 24,42±4,57 Antes del uso-2 semanas -22,27 2,31 después del uso

^{Cambio (%)}Antes del uso-4 semanas -24,57 -0,33

después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0113] Para identificar cambios en el valor numérico R5 después del uso del producto de prueba (HU022), se midieron los valores numéricos R5 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R5 del producto de prueba fue 13,57±3,65 antes del uso, 9,44±2,44 en 2 semanas después del uso y 10,10±5,97 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R5 del producto de control fue 11,02±2,94 antes del uso, 11,44±3,14 en 2 semanas después del uso y 10,51±1,90 en 4 semanas después del uso (Tabla 11, Figura 15).

[Tabla 11]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 13,57±3,65 11,02±2,94 2 semanas después del 9,44±2,44 11,44±3,14 uso

4 semanas después del 10,10±5,97 10,51±1,90 uso

Antes del uso-2 semanas -30,43 3,79 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -25,52 -4,64}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0114] Además, la extensión de las arrugas se midió mediante imágenes 3D. Un sitio diana para medir la extensión de las arrugas fueron las regiones alrededor de los ojos de los sujetos, y el lado derecho de la cara se estableció como un sitio de medición. Para medir la extensión de las arrugas, a los sujetos se les permitió lavar el sitio de medición con agua y descansar durante 30 minutos en la sala de espera en condiciones de humedad constante a temperatura constante de 20-25°C y humedad 40-60 % para aclimatar la temperatura superficial de la piel y la humedad al ambiente del espacio de medición, y no se les permitió beber agua durante el resto. Para la medición objetiva, las mediciones fueron realizadas por un investigador, y el mismo sitio se midió en cada momento de la primera visita antes del uso y la segunda y la tercera visita en 2 y 4 semanas después del uso. Antes del uso y en 2 y 4 semanas después del uso, se formaron imágenes del sitio al que se aplicó el producto de prueba (HU022) utilizando una máquina de imágenes de la piel 3D (PRIMOS Premium), y para verificar si hay alguna diferencia en cada grupo de control y grupo experimental en 4 semanas después del uso, se analizaron los parámetros de arrugas, Ra, Rmax, Rt, Rp, Rv, en las imágenes almacenadas de 2 semanas y 4 semanas después del uso en relación con antes del uso.

[0115] Los parámetros de extensión de las arrugas son los siguientes:

[Tabla 121

Ra ■ Rugosidad promedio del perfil de arrugas

Rmax ■ Altura máxima del perfil de arrugas

Rt ■ Distancia entre el pico más alto y el valle más bajo del perfil de arrugas Rp ■ Altura máxima del pico del perfil de arrugas

Rv ■ Profundidad máxima del valle del perfil de arrugas

[0116] Para identificar los cambios en el valor numérico Ra después del uso del producto de prueba, se midieron los valores numéricos Ra antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso.

[0117] El valor numérico Ra del producto de prueba fue 19,19±4,27 antes del uso, 18,20±3,94 en 2 semanas después del uso y 17,00±3,88 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico Ra del producto de control fue 14,86±4,48 antes del uso, 14,94±4,73 en 2 semanas después del uso y 14,60±4,58 en 4 semanas después del uso (Tabla 13, Figura 16).

[Tabla 131

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 19,19±4,27 14,86±4,48 2 semanas después del uso 18,20±3,94 14,94±4,73 4 semanas después del uso 17,00±3,88 14,60±4,58 Antes del uso-2 semanas después -5,15 0,54 Cambio (%) ^{del uso}

_{Antes del uso-4 semanas después -11,42 -1,76}

del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0118] Para identificar cambios en el valor numérico de Rmax después del uso del producto de prueba, los valores numéricos de Rmax se midieron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico de Rmax del producto de prueba fue 176,29±27,79 antes del uso, 168,83±29,61 en 2 semanas después del uso y 168,80±33,21 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rmax del producto de control fue 162,81±64,15 antes del uso, 159,52±61,85 en 2 semanas después del uso y 158,36±62,80 en 4 semanas después del uso (Tabla 14, Figura 17).

[Tabla 141

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 176,29±27,79 162,81±64,15 2 semanas después del 168,83±29,61 159,52±61,85 uso

4 semanas después del 168,80±33,21 158,36±62,80 uso

Antes del uso-2 semanas -4,23 -2,02 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -4,25 -2,73}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0119] Para identificar cambios en el valor numérico de Rt después del uso del producto de prueba, los valores numéricos de Rt se midieron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico de Rt del producto de prueba fue 195,05±31,31 antes del uso, 187,85±34,10 en 2 semanas después del uso y 184,63±36,83 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rt del producto de control es 174,12±68,96 antes del uso, 171,13±66,76 en 2 semanas después del uso y 169,86±65,80 en 4 semanas después del uso (Tabla 15, Figura 18).

[Tabla 151

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 195,05±31,31 174,12±68,96 2 semanas después del uso 187,85±34,10 171,13±66,76 4 semanas después del uso 184,63±36,83 169,86±65,80 Antes del uso-2 semanas de -3,69 -1,72 Cambio (%) uso-4 semanas

Antes después del uso -5,35 -2,45 *Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0120] Para identificar cambios en el valor numérico de Rp después del uso del producto de prueba, los valores numéricos de Rp se midieron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico de Rp del producto de prueba fue 122,73±31,55 antes del uso, 116,47±35,75 en 2 semanas después del uso y 121,88±38,06 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rp del producto de control fue 123,29±57,51 antes del uso, 120,32±53,57 en 2 semanas después del uso y 119,57±56,77 en 4 semanas después del uso (Tabla 16, Figura 19).

[Tabla 161

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 122,73±31,55 123,29±57,51 2 semanas después del uso 116,47±35,75 120,32±53,57 4 semanas después del uso 121,88±38,06 119,57±56,77 Antes del uso-2 semanas -5,10 -2,41 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -0,70 -3,02}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0121] Para identificar cambios en el valor numérico de Rv después del uso del producto de prueba, los valores numéricos de Rv se midieron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico de Rv del producto de prueba fue 72,32±17,16 antes del uso, 71,38±16,44 en 2 semanas después del uso y 62,75±11,92 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rv del producto de control fue 50,83±16,13 antes del uso, 50,81±16,29 en 2 semanas después del uso y 50,29±11,75 en 4 semanas después del uso (Tabla 17, Figura 20).

__________________________________________ [Tabla 171__________________________________________ ____________________________________________________________________________(Media ± D.E.) _______________________________Visita______________ Producto de prueba:_______ Producto de control Antes del uso 72,32±17,16 50,83±16,13 (continuación)

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control 2 semanas después del uso 71,38±16,44 50,81±16,29 4 semanas después del uso 62,75±11,92 50,29±11,75 Antes del uso-2 semanas -1,30 -0,05 Cambio (%) ^{después del uso}

_{' Antes del uso-4 semanas -13,24 -1,07}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0122] Además, se realizó una evaluación visual. En cada visita antes y después del uso, los expertos evaluaron la extensión de las arrugas determinando las puntuaciones usando la puntuación global de fotodaño (Br J Dermatol. 2010;162(3):497-502). Para verificar si hay alguna diferencia en cada grupo de control y grupo experimental en 4 semanas después del uso, se analizó un cambio (%) en las puntuaciones de evaluación visual de 2 semanas y 4 semanas después del uso en relación con antes del uso. Las puntuaciones de la evaluación visual son las siguientes (Tabla 18):

[Tabla 181

Gravedad Clasificación de arrugas

0 ninguna

1 ninguna /leve

2 leve

3 leve /moderado

4 moderado

5 moderado /grave

6 grave

7 muy grave

[0123] Como resultado, la puntuación de evaluación visual de los expertos del producto de prueba fue de 2,17±0,75 antes del uso, 2,17±0,75 en 2 semanas después del uso y 1,67±1,03 en 4 semanas después del uso, y la puntuación de evaluación visual de los expertos del producto de control fue de 2,33±1,03 antes del uso, 2,33±1,03 en 2 semanas después del uso y 2,33±1,03 en 4 semanas después del uso (Tabla 19, Figura 21).

[Tabla 191

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 2,17±0,75 2,33±1,03 2 semanas después del uso 2,17±0,75 2,33±1,03 4 semanas después del uso 1,67±1,03 2,33±1,03 Antes del uso-2 semanas 0 0 Cambio (_'%) ^{después del uso}

_' _{Antes del uso-4 semanas -23,08 0}

después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0124] Además, se realizó una encuesta a los sujetos sobre la efectividad. Se pidió a los sujetos que respondieran personalmente sobre el grado en que los sujetos sentían que las arrugas se reducían después del uso del producto de prueba usando 5 niveles: mejor (4), un poco mejor (3), sin cambios (2), un poco peor (1), peor (0). El investigador determinó si el producto de prueba tiene eficacia mediante el cálculo del porcentaje de la cantidad de sujetos para cada respuesta.

[0125] Como resultado de la evaluación de la encuesta sobre la reducción de arrugas, en la tercera visita en 4 semanas después del uso, los sujetos respondieron si tanto el producto de prueba como el producto de control redujeron las arrugas y, en particular, el producto de prueba fue mejor para reducir las arrugas que el producto de control. Como se puede observar de esto, los sujetos que participaron en la prueba encontraron que la eficacia de reducción de arrugas del producto de prueba era superior (Tabla 20).

[Tabla 20]

Prod

*4: muy bueno, 3: bueno, 2: justo 1: malo, 0: muy malo

[0126] Además, se realizó una evaluación de la encuesta sobre la sensación táctil y la preferencia, y se pidió a los sujetos que respondieran personalmente a los materiales de la encuesta sobre la sensación táctil que los sujetos sintieron en 4 semanas después del uso del producto de prueba clínica. La investigación se llevó a cabo con base en los ítems de evaluación, incluyendo el grado de sensación de humedad, sensación suave, rendimiento de absorción, sensación táctil general y fragancia, y la evaluación se llevó a cabo en 5 niveles de muy buena, buena, regular, mala y muy mala.

[0127] Como resultado de la investigación, se encontró que los sujetos generalmente tenían preferencia positiva por el producto de prueba. Particularmente, los sujetos tuvieron mayor preferencia por el producto de prueba que el producto de control en términos de sensación pegajosa (Tabla 21).

[Tabla 21]

Puntuación de preferencia (media ± desviación estándar)

*4: muy bueno, 3: bueno, 2: regular 1: malo, 0: muy malo

[0128] Además, se realizó la evaluación de cumplimiento, y en la segunda y tercera visita, se recogieron los registros del producto para la prueba, se identificó el número de usos del producto de prueba y se calculó el cumplimiento. En cada visita, se descartó cualquier sujeto que tuviera el cumplimiento de menos del 80 % o que no hubiera utilizado 6 veces consecutivas o más. Como resultado, al final de la prueba, el cumplimiento total fue del 100 %, el cumplimiento más alto fue del 100,00 % y el cumplimiento más bajo fue del 100,00 %. En esta prueba, no hubo ningún sujeto que tuviera el cumplimiento del 80 % o menos, y se utilizaron datos de todos los sujetos para analizar los resultados.

[0129] Además, se realizó una evaluación de seguridad, y para la seguridad del producto de prueba clínica, en todos los sujetos que habían utilizado el producto de prueba al menos una vez, se utilizaron respuestas anormales encontradas en la segunda semana y cuarta semana después del uso y respuestas anormales informadas durante el período de prueba como datos de evaluación de seguridad del producto. No hubo reporte de respuesta anormal, y en el examen físico del dermatólogo, no se observó ningún signo anormal en la piel, por ejemplo, enrojecimiento, erupción de la piel y sensación de picazón. En consecuencia, se pudo ver que el producto de prueba era un producto seguro que no causaba irritación a la piel.

(2) Evaluación del efecto de reducción de arrugas del producto de prueba HU024

[0130] Los elementos de evaluación y el procedimiento de prueba fueron los mismos que los utilizados para la evaluación del producto de prueba HU022.

[0131] Después de que se midió la extensión de las arrugas utilizando el equipo, para identificar cambios en el valor numérico R3 después del uso del producto de prueba, se midieron los valores numéricos R3 antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso. El valor numérico R3 del producto de prueba fue 29,15±5,56 antes del uso, 20,80±3,97 en 2 semanas después del uso y 17,81±4,00 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R3 del producto de control fue 24,43±3,12 antes del uso, 23,56±3,53 en 2 semanas después del uso y 18,57±1,86 en 4 semanas después del uso (Tabla 22, Figura 24).

[Tabla 221

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 29,15±5,56 24,43±3,12 2 semanas después del uso 20,80±3,97 23,56±3,53 4 semanas después del uso 17,81±4,00 18,57±1,86 Antes del uso-2 semanas -28,66 -3,55 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -54,55 -23,99}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0132] El valor numérico R1 del producto de prueba fue 71,33±15,8 antes del uso, 57,29±3,21 en 2 semanas después del uso y 45,23±13,77 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R1 del producto de control fue 58,01±21,09 antes del uso, 56,17±15,89 en 2 semanas después del uso y 45,03±14,74 en 4 semanas después del uso (Tabla 23, Figura 22).

[Tabla 23]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 71,33±15,86 58,01±21,09 2 semanas después del uso 57,29±3,21 56,17±15,89 4 semanas después del uso 45,23±13,77 45,03±14,74 Antes del uso-2 semanas -19,68 -3,17 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -36,59 -22,37}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0133] El valor numérico R2 del producto de prueba fue 46,06±11,62 antes del uso, 30,71±6,57 en 2 semanas después del uso y 28,67±7,47 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R2 del producto de control fue 35,97±5,82 antes del uso, 37,15±4,96 en 2 semanas después del uso y 26,68±3,30 en 4 semanas después del uso (Tabla 24, Figura 23).

[Tabla 24]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 46,06±11,62 35,97±5,82 2 semanas después del uso 30,71±6,57 37,15±4,96 4 semanas después del uso 28,67±7,47 26,68±3,30 Antes del uso-2 semanas -33,33 3,27 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -37,74 -25,84}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0134] El producto de prueba de valor numérico R4 fue 31,44±11,04 antes del uso, 26,24±2,90 en 2 semanas después del uso y 20,64±6,07 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R4 del producto de control fue 26,22±11,38 antes del uso, 24,11±8,82 en 2 semanas después del uso y 20,67±8,43 en 4 semanas después del uso (Tabla 25, FIG. 25).

[Tabla 25]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 31,44±11,04 26,22±11,38 2 semanas después del uso 26,24±2,90 24,11±8,82 4 semanas después del uso 20,64±6,07 20,67±8,43 Antes del uso-2 semanas -16,54 -8,04 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -34,36 -21,17}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0135] El valor numérico R5 del producto de prueba fue 13,52±5,43 antes del uso, 11,58±0,89 en 2 semanas después del uso y 8,42±3,48 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico R5 del producto de control fue 10,93±6,72 antes del uso, 10,68±5,56 en 2 semanas después del uso y 8,79±4,95 en 4 semanas después del uso (Tabla 26, Figura 26).

[Tabla 261

(Media ± D.E.) Visita

Producto de prueba:

Producto de control Antes del uso 13,52±5,43 10,93±6,72 2 semanas después del 11,58±0,89 10,68±5,56 uso

4 semanas después del 8,42±3,48 8,79±4,95 uso

Antes del uso-2 semanas -14,36 -2,26 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -37,71 -19,59}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0136] Después de que la extensión de las arrugas se midió mediante imágenes 3D, para identificar cambios en el valor numérico Ra después del uso del producto de prueba, los valores numéricos Ra se midieron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso.

[0137] El valor numérico Ra del producto de prueba fue 18,64±3,19 antes del uso, 18,33±2,12 en 2 semanas después del uso y 17,71±2,43 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico Ra del producto de control fue 15,49±2,77 antes del uso, 15,23±2,51 en 2 semanas después del uso y 15,53±2,46 en 4 semanas después del uso (Tabla 27, Figura 27).

[Tabla 271

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 18,64±3,19 15,49±2,77 2 semanas después del uso 18,33±2,12 15,23±2,51 4 semanas después del uso 17,71±2,43 15,53±2,46 Antes del uso-2 semanas -0,75 1,27 Cambio (%) después del uso

Antes del uso-4 semanas -4,10 0,75 *Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0138] El valor numérico de Rmax del producto de prueba fue 206,55±40,54 antes del uso, 198,77±39,74 en 2 semanas después del uso y 196,85±39,02 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rmax del producto de control fue 162,86±35,l7 antes del uso, 158,09±40,68 en 2 semanas después del uso y 165,26±39,77 en 4 semanas después del uso (Tabla 28, Figura 28).

[Tabla 281

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 206,55±40,54 162,86±35,17 2 semanas después del uso 198,77±39,74 158,09±40,68 4 semanas después del uso 196,85±39,02 165,26±39,77 Cambio (%) Antes del uso-2 semanas -3,77 -2,93

después del uso

Antes del uso-4 semanas -4,69 1,47 después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0139] El valor numérico de Rt del producto de prueba fue 225,94±45,00 antes del uso, 216,37±41,76 en 2 semanas después del uso y 210,60±38,61 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rt del producto de control fue 174,55±34,66 antes del uso, 167,65±41,28 en 2 semanas después del uso y 176,14±39,43 en 4 semanas después del uso (Tabla 29, FIG. 29).

[Tabla 291

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 225,94±45,00 174,55±34,66 2 semanas después del uso 216,37±41,76 167,65±41,28 4 semanas después del uso 210,60±38,61 176,14±39,43 Antes del uso-2 semanas -4,24 -3,95 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -6,79 0,91}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0140] El valor numérico de Rp del producto de prueba fue 160,85±37,51 antes del uso, 155,24±43,18 en 2 semanas después del uso y 153,78±36,12 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rp del producto de control fue 118,80±39,02 antes del uso, 112,77±44,16 en 2 semanas después del uso y 123,39±42,81 en 4 semanas después del uso (Tabla 30, Figura 30).

[Tabla 30]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 160,85±37,51 118,80±39,02 2 semanas después del uso 155,24±43,18 112,77±44,16 4 semanas después del uso 153,78±36,12 123,39±42,81 Antes del uso-2 semanas -3,48 -5,07 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -4,40 3,86}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0141] El valor numérico de Rv del producto de prueba fue 65,09±11,95 antes del uso, 61,12±8,02 en 2 semanas después del uso y 56,82±12,01 en 4 semanas después del uso, y el valor numérico de Rv del producto de control fue 55,75±17,98 antes del uso, 54,87±21,72 en 2 semanas después del uso y 52,75±15,00 en 4 semanas después del uso (Tabla 31, Figura 31).

[Tabla 31]

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 65,09±11,95 55,75±17,98 2 semanas después del uso 61,12±8,02 54,87±21,72 4 semanas después del uso 56,82±12,01 52,75±15,00 Antes del uso-2 semanas -6,10 -1,57 Cambio (%) ^{después del uso}

_{Antes del uso-4 semanas -12,71 -5,37}después del uso

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0142] Para identificar cambios en la puntuación de la evaluación visual, las puntuaciones de la evaluación visual por experto se evaluaron antes del uso, 2 semanas después del uso y 4 semanas después del uso.

[0143] La puntuación de evaluación visual por experto del producto de prueba fue de 2,00±0,63 antes del uso, 2,00±0,63 en 2 semanas después del uso y 1,67±0,82 en 4 semanas después del uso, y la puntuación de evaluación visual por experto del producto de control fue de 2,00±0,63 antes del uso, 2,00±0,63 en 2 semanas después del uso y 2,00±0,63 en 4 semanas después del uso (Tabla 32, Figura 32).

__________________________________________ [Tabla 32]__________________________________________

(Media ± D.E.) Visita Producto de prueba: Producto de control Antes del uso 2,00±0,63 2,00±0,63 2 semanas después del uso 2,00±0,63 2,00±0,63 4 semanas después del uso 1,67±0,82 2,00±0,63 Cambio (%) Antes del uso-2 semanas después del uso 0 0

Antes del uso-4 semanas después del uso -16,67 0

*Cambio (%) = {(Después-Antes)/Antes}*100

[0144] Como resultado de la evaluación de la encuesta sobre la reducción de arrugas, en la tercera visita en 4 semanas después del uso, los sujetos respondieron que tanto el producto de prueba como el producto de control redujeron las arrugas y, en particular, el producto de prueba fue mejor para reducir las arrugas que el producto de control. Como se puede observar a partir de esto, los sujetos que participaron en la prueba encontraron que la eficacia en la reducción de arrugas del producto de prueba era superior.

Tabla 33

*4: muy bueno, 3: bueno, 2: regular 1: malo, 0: muy malo

[0145] Como resultado de investigar la preferencia de los sujetos en términos de sensación de humedad, sensación suave, rendimiento de distribución, rendimiento de absorción, sensación pegajosa y fragancia del producto de prueba, se encontró que los sujetos generalmente tenían preferencia positiva por el producto de prueba. En particular, la preferencia por el producto de prueba fue mayor que el producto de control en términos de sensación pegajosa.

__________________________________________ [Tabla 34]__________________________________________

Puntuación de preferencia (media ± desviación estándar)

*4: muy bueno, 3: bueno, 2: regular 1: malo, 0: muy malo

[0146] Además, no hubo reporte de respuesta anormal mientras los sujetos estaban usando el producto de prueba durante 4 semanas, y en el examen físico del dermatólogo, no se observó ningún signo anormal en la piel, por ejemplo, enrojecimiento, erupción de la piel y sensación de comezón. En consecuencia, se pudo ver que el producto de prueba era un producto seguro que no causaba irritación a la piel.

Ejemplo 4. Efecto de la prueba de crecimiento capilar (no forma parte de la invención)

[0147] Esta prueba se realizó para evaluar la influencia en el crecimiento del pelo de ratón C57BL/6 cuando se aplicaron 4 tipos de sustancias de prueba, HU024, HU025, HU026 y HU027, a la piel durante 14 días.

[0148] El diseño del grupo se estableció en grupos de control negativo (agua estéril para inyección G1), sustancia de prueba HU02420 ug/cabeza/día (G2), sustancia de prueba HU02460 ug/cabeza/día (G3), sustancia de prueba HU02520 ug/cabeza/día (G4), sustancia de prueba HU02560 ug/cabeza/día (G5), sustancia de prueba HU026 20 ug/cabeza/día (G6), sustancia de prueba ^hU026 60 ug/cabeza/día (G7), sustancia de prueba HU027 20 ug/cabeza/día (G8), sustancia de prueba HU027 60 ug/cabeza/día (G9) y minoxilo de control positivo 3% (G10) administrados. Cada grupo tenía 10 animales.

[0149] Después de que el animal se puso bajo anestesia usando zoletilo (1 mL/kg, i.p), la parte posterior del animal se afeitó principalmente usando un depilador y el depilatorio Veet se aplicó uniformemente en la parte posterior. Después de aproximadamente 5 minutos, el sitio aplicado se limpió usando gasa humedecida con agua estéril para inyección. Solo se utilizó un animal cuya espalda afeitada era de color escarlata para la separación del grupo. La sustancia de prueba se aplicó al mismo sitio diariamente una vez al día, 7 veces por semana durante 14 días, y la sustancia de prueba se aplicó uniformemente al sitio afeitado (en la parte posterior) frotando con una varilla de vidrio aproximadamente 10 veces.

[0150] El ítem de prueba fueron mediciones de animal muerto, síndrome general, cambio de peso, área de crecimiento del pelo y peso del pelo, y se realizó comparación con el control negativo.

[0151] Se midió y determinó el área de crecimiento del pelo (%) con respecto al área a que se aplicó la sustancia de prueba, y el programa de analizador de imágenes (Image Pro Plus ver. 6.3, Cybermetics, EE. UU.) se utilizó para medir. Se midió en los días 1, 3, 7, 10 y 14 después de la administración de la sustancia de prueba. Las imágenes se realizaron junto con las mediciones en la fecha en que se midió el área del pelo. Al día siguiente después del final de la aplicación, los animales fueron sacrificados por gas CO², y el pelo en el área de crecimiento del pelo fue eliminado por un depilador y se midió el peso del pelo.

T l 1

[0152] Los resultados de la medición se analizaron utilizando SPSS (ver. 10.1K), la prueba t de Duncan para cambios de peso se llevó a cabo a través del análisis de varianza unidireccional, el peso del pelo se comparó entre los grupos usando la prueba t de Student y el área de crecimiento del pelo se comparó entre los grupos a través de procedimientos de comparación múltiple no paramétricos procedimientos Whitney-Mann. Se determinó que P<0,05 era estadísticamente significativo.

[0153] Los resultados de la prueba son los siguientes:

Con respecto a los cambios de peso, no se observó ninguna diferencia en el grupo al que se administró la sustancia de prueba en comparación con el control negativo. Más bien, en comparación con el control negativo en los 7 y 11 días después de la administración, se observó un aumento de peso estadísticamente significativo en el grupo de control administrado con minoxilo 3 % (P<0,05 o P<0,01). Se pensó que el aumento de peso en el grupo de control administrado con minoxilo 3 % era un aumento de peso que es un efecto adverso del principio activo de minoxilo, minoxidilo (Tabla 36, FIG. 33).

[Tabla 361

PESOS CORPORALES MASCULINO

(g)

Día 1 Día 7 Día 11

G1 21,41±0,91 22,62±1,19 23,64±1,29

G2 21,34±0,60 22,64±0,76 24,15±0,86

G3 21,54±0,53 23,02±0,74 24,30±1,08

G4 21,20±1,23 22,63±1,01 23,77±1,17

G5 21,53±0,63 23,20±0,83 24,23±1,02

G6 21,20±0,77 22,48±1,12 23,75±1,27

G7 21,58±0,61 22,8011,03 23,8311,30

G8 21,71±0,59 23,27±0,71 23,98±0,79

G9 21,77±0,87 23,0711,13 23,97±1,14

G10 20,70±1,24 23,85±0,75* 25,73±1,13**

Los datos se expresan como Media ± D.E. Los resultados se analizaron estadísticamente mediante la prueba t de Student.

*: significativamente diferente de G1, P<0,05

**: significativamente diferente de G1. P<0,01_______________________________________________________

[0154] Como resultado de la medición del área de crecimiento del pelo, en comparación con el grupo de sustancia de prueba administrado y el control negativo, no se observó ninguna diferencia hasta el 7o día después de la administración. En los días 10 y 14, se observó un aumento estadísticamente significativo en el área de crecimiento del pelo en la sustancia de prueba HU02560 ug/cabeza/día administrada al grupo (G5) en comparación con el control negativo (P<0,05). También se observó una tendencia hacia un aumento del área de crecimiento del pelo de aproximadamente un 20 % o más en los otros grupos a los que se administró la sustancia de prueba, excepto en el grupo al que se administró la sustancia de prueba HU02520 ug/cabeza/día los días 10 y 14, en comparación con el control negativo. En comparación con el control negativo, se observó un aumento estadísticamente significativo en el área de crecimiento del pelo en el grupo de administración de la sustancia de control minoxilo 3 % en los días 4, 10 y 14 (P<0.01) (Tabla 37, FIG. 34).

Tabla 37

[0155] Como resultado de la medición del peso del pelo, en comparación con el control negativo, se observó un aumento estadísticamente significativo en el peso del pelo en la sustancia de prueba HU026 60 ug/cabeza/día administrada al grupo (P<0,05). Entre los otros grupos a los que se administró la sustancia de prueba, en comparación con el control negativo, se observó un aumento de peso de aproximadamente el 100 % o más en los grupos a los que se administró la sustancia de prueba restante, excepto HU025 20 ug/cabeza/día y HU027 20 ug/cabeza/día administrado. En comparación con el control negativo, se observó un aumento estadísticamente significativo del peso del pelo en el grupo administrado con la sustancia de control minoxilo 3 % (P<0,01) (Tabla 38, Figura 35).

Tabla 38

Ejemplo 5. Efecto de la prueba de glaucoma (no forma parte de la invención)

[0156] Para el fármaco de control, se utilizaron gotas oftálmicas de Taflotan (Santen Pharmaceutical Co., Ltd.), y para el fármaco de prueba, se utilizaron gotas oftálmicas de Taflotan HU024 (muestra 1), HU024 (muestra 2), HU025 (muestra 3), HU026 (muestra 4) y HU027 (muestra 5), y se realizaron pruebas en el modelo animal de glaucoma que tenía presión intraocular elevada inducida por microesferas. En el modelo animal experimental, solución de Rompun para inyección y zoletilo se mezclaron y usaron para anestesiar al animal experimental, se aplicó anestesia

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de una composición que comprende un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1 que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) o su fragmento que comprende un motivo RGD (motivo Arg-Gly-Asp) como principio activo, para la reducción de las arrugas de la piel.

2. Uso según la reivindicación 1, en el que el fragmento es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en los siguientes fragmentos:

2) un fragmento que comprende del 30° al 38° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

3) un fragmento que comprende del 32° al 43° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

4) un fragmento que comprende del 30° al 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento;

5) un fragmento que comprende del 18° al 54° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento; y

6) un fragmento que comprende del 10° al 54° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1, opcionalmente sin enlace disulfuro o 1 o más enlaces disulfuro entre cisteínas en el fragmento.

3. Uso según la reivindicación 2, en el que el fragmento es al menos uno seleccionado del grupo que consiste en los siguientes fragmentos:

2) un fragmento que consiste en del 30° al 38° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de la SEQ ID NO: 1; 3) un fragmento que consiste en del 32° al 43° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, con un enlace disulfuro entre la 36a cisteína y la 42a cisteína;

4) un fragmento que consiste en del 30° al 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, sin enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento; o

5) un fragmento que consiste en del 30° al 44° aminoácidos en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, con un enlace disulfuro entre cisteínas en el fragmento.

4. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que el péptido o su fragmento tiene un efecto de promoción de la síntesis de colágeno.

5. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la composición se formula para administración tópica.

6. Uso según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en la promoción de síntesis de colágeno.