CN101132804A - 治疗皮肤情况，失调或疾病的胚胎皮肤细胞蛋白组合物及其制备和使用方法 - Google Patents

Abstract

本发明提供了对患有皮肤情况，失调或疾病的病人进行治疗的方法和组合物。该组合物包括胚胎5皮肤细胞蛋白，该胚胎5皮肤细胞蛋白来源于经细胞裂解的胚胎皮肤细胞。

Description

治疗皮肤情况，失调或疾病的胚胎皮肤细胞蛋白组合物及其制备和使用方法

技术领域

本发明涉及对患有皮肤情况，失调或疾病的病人进行治疗的方法和组合物。该组合物包括来源于经细胞裂解的胚胎皮肤细胞的胚胎皮肤细胞蛋白。

背景技术

在妊娠的特定阶段，胚胎皮肤受伤之后的恢复无伤疤形成或伤疤形成极小(也称为无伤疤修复或无伤疤恢复)(Dang C等，Clin Plast Surg 2003：30，13-23)，其显示了在妊娠的特定时期胚胎皮肤细胞应答调节的最佳(平衡)协调(调整)。然而，新生儿，儿童和成人皮肤(对应于非胚胎皮肤)，在受伤后的恢复带有伤疤形成，这表明与胚胎皮肤相比，非-胚胎皮肤的细胞应答调节的最佳性或平衡性较差。

在大型动物和人类中，受伤后的无伤疤修复发生在妊娠的前三分之一时期。在此阶段后，胚胎皮肤受伤后将从无伤疤修复转变为伤疤修复形式。在皮肤中，胎儿的无伤疤修复以带有正常附属物(发囊，汗腺，分泌腺)的真皮组织的再生为特征。无伤疤修复被认为是，至少部分地，炎症的相对缺失的结果，其相应于受伤后的平衡(最佳)前-和抗-炎症应答。

无伤疤修复的能力似乎是胚胎皮肤的特性，并可能是许多调节蛋白包括细胞因子的协调交互作用的结果。这将在下文描述。

无伤疤胚胎修复带有极小的炎症，而在胎儿修复期间伤疤的形成与急性炎症渗透相关联(G.P.Yang等.Wound Rep Reg 2003；11：411-418)。此外，在正常的无伤疤-修复中引入炎症引起增加胶原质沉积和伤疤形成的结果。这意味在伤疤形成过程中炎症具有重要的功能。当免疫系统产生并且应答炎症反应增加时，伤疤开始形成于修复位置。伤疤纤维原细胞的细胞外基质(ECM)的合成和改变可能是修复后真皮构建的主要决定因素。伤疤和无伤疤形成中胶原质构建之间的区别可以部分地由成人和胚胎成纤维细胞间表型的不同而解释。

胚胎和成人的成纤维细胞在胶原质，透明质酸(HA)，和其它ECM成分的合成速率方面有所不同。在体外，相对于成人，胚胎成纤维细胞合成更多的III和IV型胶原质。胚胎成纤维细胞可以同时扩增(生长)和合成胶原质。胚胎成纤维细胞相比于成人成纤维细胞，其具有更强的迁移进入胶原凝胶的能力。增加的细胞密度减少了成人中HA的生成，但对胚胎成纤维细胞HA合成无影响。

转化生长因子(TGF)异构体TGF-β1和TGF-β2(两种异构体都为生长因子；生长因子属于细胞因子蛋白家族)具有前纤维化功能(引起纤维化)并促进伤疤形成。它们的表达在正常的创伤修复中增加，并且对成人伤疤施用外源的这种生长因子可增加胶原，蛋白聚糖，和炎症细胞的聚集。TGF-β1也可以减少基质金属蛋白酶并增加基质金属蛋白酶表达的内源性抑制物，其可促进胶原聚集和伤疤形成。此外，在成年大鼠创伤模型中施用TGF-β1和TGF-β2的中和抗体可以减少伤疤形成。据报道施用纤维调节素，一种TGF-β调节物，也可减少出生后的伤疤形成。

此外，已经发现，一定比例TGF-β异构体组成的成分，而非特定数量的任何一种异构体，决定了创伤修复的产生。在无伤疤胚胎创伤中，TGF-β3(TGF-β异构体)的表达增加而TGF-β1的表达无变化。相反地，在伤痕性胚胎创伤中TGF-β1的表达增加而TGF-β3的表达减少。在成年大鼠创伤模型中施用外源性TGF-β3可减少伤疤形成。这些数据表明TGF-β3与TGF-β1的比例可决定在受伤后皮肤的构建是复原性或形成伤疤。

白介素(属于细胞因子蛋白家族)调节炎症细胞的趋向性和活性。白介素-6(IL-6)刺激单核细胞的趋化和巨噬细胞的活性，而白介素-8(IL-8)引发嗜中性粒细胞并刺激新血管形成。创伤刺激了IL-6和IL-8的快速增长，其在成人中持续存在而在胎儿中迅速消失。血小板衍生的生长因子(PDGF，属于细胞因子蛋白家族的生长因子)引发成人纤维原细胞中IL-6的生成。依次，胚胎创伤中增加的IL-6将形成早期伤疤。相比于成人，胎儿纤维原细胞IL-6和IL-8的表达低于基线并且受PDGF刺激后其表达也较低。通过减少IL-6和IL-8的生成，白介素-10(IL-10)具有一种抗-发炎作用。例如，据显示在成熟大鼠中对创伤施用过量表达IL-10的腺病毒载体可减少发炎并产生无创伤修复。

PDGF和纤维原细胞生长因子(FGF)家族是额外的致纤维化细胞因子。PDGF，纤维原细胞的一种潜在的有丝分裂原和chemoattractant(化学引诱剂)，在创伤形成中延长表达而在胎儿创伤中迅速消失。例如，据显示用PDGF处理胎兔创伤可导致明显增强的急性炎症，纤维原细胞汇集，和胶原质聚集。细胞因子的FGF家族，包括角化细胞生长因子-1和-2(属于细胞因子蛋白家族的生长因子)，在胚胎皮肤不断增加的妊娠时期中和成人创伤产生期间具有更高的表达量。

相反，内皮细胞有丝分裂原，血管内皮生长因子(VEGF，属于细胞因子蛋白家族的生长因子)，在无伤疤创伤中表达增加而在胚胎的伤痕性创伤中其表达未有变化。这样，血管起源和静脉渗透性刺激物的增加可以加速胚胎创伤的修复。

虽然在过去数十年中获得的知识已经有了极大增加，但无伤疤修复的确切机制仍未知。无伤疤胚胎创伤修复是一种包括各种细胞调节物如细胞因子和其它蛋白的紧密的调节(协调)过程。

目前的治疗未揭示无伤疤修复的机制。因此，本发明的目的是使用发现的组合物来提供组合物和方法，对患有皮肤情况，失调或疾病，及需要无伤疤修复和/或需要对皮肤炎症产生平衡应答的病人进行治疗。

发明内容

本发明提供对患有皮肤病况，失调或疾病的病人进行治疗的组合物。该组合物包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受的载体，其中的胚胎皮肤细胞蛋白来源于经细胞裂解的一种或一种以上胚胎皮肤细胞。

胚胎皮肤细胞来源于6-24周孕期，或更优选地12-16周孕期的胚胎。由全胚胎皮肤组织或胚胎皮肤组织片段获得胚胎皮肤细胞。胚胎皮肤细胞可以包括纤维原细胞，角化细胞，黑素细胞，Langerhans细胞，Merkel细胞或其结合物或混合物。优选地，胚胎皮肤细胞包含胚胎纤维原细胞。胚胎皮肤细胞可以是永生的。可以从细胞库或细胞系获得胚胎皮肤细胞。

胚胎皮肤细胞蛋白可以是纯化的或可以包括一种或多种细胞成分。胚胎皮肤细胞蛋白可以包括细胞因子，酶，激素，细胞外基质结构蛋白，神经肽或神经肽拮抗剂。细胞因子可以包括生长因子，白介素，淋巴因子，单核细胞激活素，干扰素，菌落刺激因子或趋化因子或其结合物或混合物。胚胎皮肤细胞蛋白在组合物中的浓度可以介于0.001％至95％之间。更优选地，在组合物中的浓度可以介于0.01％至5％之间。最优选地，在所述的组合物中的浓度介于0.05％至0.25％之间。

组合物可以进一步包括止痛剂，麻醉剂，抗-炎症药物，抗组胺药物，抗氧化剂，应对刺激剂，抗微生物药物，抗菌剂，抗真菌药物，防腐剂，蛋白稳定剂，蛋白酶抑制剂，皮肤保护剂，遮光剂或其结合物或混合物。

该组合物适用于局部，肌肉，眼睛，直肠或阴道给药。优选地，该组合物适用于局部给药。

该组合物可以是适用于药用或整容用的药膏，洗液，乳膏，泡沫，摩丝，喷雾，气雾剂，乳剂，纳米乳剂，微米乳液，膜，凝胶，水凝胶，溶液，海绵体或分散剂。该组合物可以是油包水或水包油乳液或以油包水或水包油乳液为基础的乳膏形式。

细胞裂解是被介导的而非自发性的。可以通过机械，物理或化学方式进行细胞裂解。优选地，通过一次或更多次冻-融过程可使细胞裂解。可以对每毫升的溶液系统中100至60,000,000个胚胎皮肤细胞进行裂解。更优选地，细胞裂解物是由10,000,000至20,000,000个胚胎皮肤细胞制备。水相溶液系统可以是生理缓冲溶液。更优选地，水相溶液系统可以是磷酸缓冲盐溶液。水相系统可以进一步包括一种或多种蛋白稳定化合物，蛋白酶抑制物，抗-微生物药物，抗-菌药物，抗氧化剂，防腐剂或其联合物或混合物。

本发明也提供了治疗皮肤或粘膜情况，失调或疾病的方法，包括对需要的病人施用一种组合物，其中该组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受的载体，从而对所述的情况，失调或疾病进行治疗。皮肤或粘膜情况，失调或疾病可以是一种炎症性皮肤或粘膜情况，神经性或神经炎症性皮肤或粘膜情况，急性或慢性创伤，急性或慢性溃疡或烧伤。

本发明也包括治疗一种炎症性皮肤情况的方法，包括对所需的病人施用一种组合物，其中该组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况。炎症性皮肤情况可以是阴前庭炎综合症，外阴疼痛感觉异常，牛皮癣，皮炎，过敏性皮炎，湿疹，接触性皮炎，过敏性接触性皮炎，皮炎疱疹，全身性剥脱性皮炎，外阴硬化性苔藓，皮脂囊肿，脂溢性皮炎，红斑痤疮，痤疮，瘢痕瘤，搔痒症，白色萎缩，头皮屑，尿疹，光敏性-皮炎，溃疡，伤疤或干燥病。

本发明也包括治疗一种外阴疼痛的方法，包括对所需的病人施用一种组合物，其中该组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况。优选地，外阴疼痛可以是阴前庭炎综合症或外阴硬化性苔藓。本方法可以进一步包括施用皮质类固醇，雌激素，孕酮，利多卡因，辣椒素，异维甲酸，干扰素-α，干扰素-β，干扰素-γ，氨苯砜，阿昔洛韦，三环抗-镇静剂或其可能的联合物或混合物。

本发明也提供治疗一种或多种创伤，溃疡或烧伤的方法，包括对所需的病人施用一种组合物，其中该组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的一种或多种溃疡或烧伤。该方法可以进一步包括施用薄膜，水状胶质，水凝胶，泡沫，矿脂，硅，硅片，藻酸钙或玻璃纸。该方法中的组合物可以外敷给药。合适地，通过一个或多个绷带进行外敷给药。绷带可以是轻质的相容-伸展绷带，轻质支撑绷带或缚料绷带。

本发明也提供通过联用整容或皮肤病治疗从而改善皮肤外观的方法，包括对所需的病人施用组合物，其中该组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体。整容和/或皮肤病治疗可以是化学去皮，物理去皮，去疤痕手术，微去疤痕手术，光和/激光治疗，强脉冲光治疗，射频治疗，热疗，氧和/或臭氧治疗，电外科修复缺损或射频气化，多余毛发去除，纹身去除，肉毒素注射，填充物注射，注射管去脂，脂肪抽吸，整容或非-整容外科方案，冷冻手术或冷冻疗法和/或局部药物，包括α-羟基酸，壬二酸，苯甲酸，过氧化苯甲酰，β-羟基酸，倍他米松，柠檬酸，氯洁霉素，皮质类固醇，diclofeneac，蒽三酚，5氟尿嘧啶，羟基乙酸，氢化可的松，醋酸氢化可的松，对苯二酚，消炎痛，异维甲酸，曲酸，乳酸，甲硝唑，苯酚，视黄酸，视黄醇，视黄醛，维甲酰β-葡糖苷酸，水杨酸，硫化硒，磺胺醋酰钠，硫化物，他扎罗汀，维甲酸，三氯乙酸，尿素或其派生物或任何这些整容或皮肤病治疗的联合。整容或皮肤病治疗可以是针对红斑痤疮的治疗。

优选地，由本发明提供的方法进行治疗的主体是一种动物。优选地，该动物是马。更优选地，主体是人类。

附图说明

图1是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂1治疗阴前庭炎综合症，并以性生活质量评估其效果的示意图。

图2是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂2治疗阴前庭炎综合症，并以性生活质量评估其效果的示意图。

图3是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂2治疗阴前庭炎综合症，并以治疗前后测定的外阴疼痛域值评估其效果的示意图。疼痛域值以毫牛顿(mN)表示；给出了平均值和标准偏差(n＝6)。

图4是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂1治疗手湿疹的效果图。下列的分值系统：0＝未呈现，1＝轻度，2＝中度，3＝严重，4＝非常严重，用于评估治疗前(黑色曲线)和后(红色)症状。给出了平均值；n＝5。

图5是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂1治疗牛皮癣的效果图。显示了牛皮癣病人在使用霜剂使用前及数周后的代表性例子。

图6是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂2和α羟基酸(羟基乙酸)产物联用治疗红斑痤疮的效果图。显示了红斑痤疮病人在使用霜剂使用前及二周后的代表性例子。

图7是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂2和红斑痤疮药物(羟基乙酸产物)联用治疗伴发脂溢性皮炎的红斑痤疮的效果图。显示了伴发脂溢性皮炎的红斑痤疮病人在使用霜剂使用前及七周后的代表性例子。

图8是显示以含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的霜剂2治疗由冷冻手术导致的较小创伤和/或皮肤损害的效果图。冷冻手术(或冷冻疗法)用于去除手部的老年斑。图片显示了冷冻手术后(前面的图片；相应于使用霜剂前)及每天两次使用霜剂治疗6周后的情况(后面)。

图9是显示霜剂2改善54岁老年妇女皮肤细线和皱纹外观，包括鼻-口折痕的效果图：之前(左图)和每天两次使用6周(右图)。

具体实施方式

许多研究显示大量的皮肤情况，失调和/或疾病通常由多-因子引发，常带有复杂的免疫和炎症途径的激活。例如，复杂的细胞因子网络协调炎症，神经性和/或神经炎症性皮肤情况，失调和/或疾病中存在的疾病-相关机制的发展。皮肤再生，皮肤修复或创伤修复中的细胞应答的协同调节需要许多细胞因子的交互作用(Physiol Rev 83：2003，835-870)。

因此，可以推测，多种炎症，神经性和/或神经炎症性皮肤情况，失调和/或疾病可以通过联用特异活性的和/或联用特异的治疗药物成功地进行治疗。

目前，大部分炎症，神经性和/或神经炎症性皮肤情况，失调和/或疾病用单一的活性药物进行治疗。很少将两种，或高达三种活性药物在同一药物制品中联合以获得加强的，增效的或复合的药物活性和疗效。作为示范性例子，提供了在同一制剂中联合使用两种外用镇痛药物如氢化可的松和盐酸普莫卡因。在另一例子中，联合局部皮质类固醇(倍他米松二丙酸盐和二氟可龙，相应地)和水杨酸治疗牛皮癣获得增强的效果(Am J Clin Dermatol 5，2004，71-77)。关于局部应用，其它相识的例子对于本领域的普通技术人员是熟知的。这些例子显示在同一组合物中，药物制品联用了两种或更多合成化合物作为活性药物成分。相似的联合两种或更多活性蛋白质的生物制药组合物则是较少见的。例如，目前市场上未有此类商业化供应的生物制药组合物。

胚胎皮肤细胞的诱导性细胞裂解(诱导性细胞破裂)，可以提供胚胎皮肤细胞蛋白，用于皮肤炎症，皮肤再生和皮肤修复的平衡(最佳的)协调(调节)，其中的细胞由妊娠的特定阶段获得，其中胚胎皮肤受伤之后的恢复无伤疤形成或伤疤形成极小。诱导被定义为人工和/或人为计划的，有意的，设计的和/或预定的。诱导被进一步定义为与自发的或自然发生相对立的情况。通过改变细胞的培养条件，人工诱导细胞裂解被进一步定义为非程序性细胞死亡和非凋亡。

诱导性细胞裂解可以通过机械，物理和/或化学方法完成。例如，一次和多次冻-融是诱导性细胞裂解的示范例。

诱导性细胞裂解可以通过单一步骤获得特定的和指定的细胞状况阶段(例如：代数，生存力，细胞循环，汇合能力，等)的蛋白质。作为结果，诱导性细胞裂解可获得细胞在裂解期间表达的特定蛋白组合物(对应于自然平衡的，最佳的蛋白混合物)的蛋白混合物。当将活细胞合并入组合物时该组合物有所不同，其中蛋白质是释放的(通过细胞分泌排出)和/或由细胞在一定时期内和/或程序性细胞死亡或凋亡期间及之后生产出。此外，诱导性细胞裂解可以获得：(1)细胞非正常释放的蛋白，(2)释放过程或胞外分泌期间未被修饰的蛋白，(2)翻译-后修饰不同阶段的蛋白(翻译-后修饰可以包括二硫键的形成和/或连接任何生物化学功能基团，如醋酸盐，磷酸盐，多种脂和碳水化合物。酶可以去除多肽链氨基末端的一个或多个氨基酸，或切断链中的多肽。)并且/或者(3)蛋白质前体(例如，活性蛋白的非活性前体)。以前体形式存在的蛋白稳定性通常比最终(活性)蛋白更强。前体蛋白可以被组合物中的酶(例如，水解酶)激活，及/或当其接触目标组织及/或目标细胞(例如，皮肤，皮肤细胞)时被激活。此外，诱导的细胞裂解可以获得自然的，细胞-类似环境中的蛋白，但不含细胞壁，而其将帮助蛋白的稳定(防止降解，水解，形式的变化和/或变性)。诱导的细胞裂解的另一好处是所获得的蛋白不含有较少量的通常由受胁迫细胞分泌/产生的蛋白。而这可能发生在含有组合物的细胞中。通常，在施用组合物时，细胞组合物中的细胞由于缺少细胞营养，pH-改变，温度改变，氧化趋势和/或其它影响细胞生长和/或细胞稳定性的环境的，物理的和化学因子作用而受到胁迫。由这些受胁迫细胞产生的一些蛋白具有预引发-炎症的特性，无或仅具有极少临床效果，并且/或可能是有害的。

通过在此引用并入本文的美国专利申请2003/0195256，给出了细胞组合物的代表性示范例。组合物包括连接胶原质基质或载体的未分化的胚胎皮肤细胞。

在一个优选实施方案中，细胞裂解由冻/融或冻-融所引发。该技术包括将胚胎皮肤细胞和/或胚胎皮肤细胞悬浮液冻结(例如，以液氮，干冰和酒精喷淋，等处理)并将材料置于室温及/或37℃融化。这种引发细胞裂解的方法可在冻结过程中形成冰晶并在融化过程中影响细胞，导致细胞膨胀并最终破裂。通常多次重复冻-融是有效裂解所必需的。已经表明，冻/融可有效释放细胞中的蛋白。

在所述的诱导性细胞裂解之后获得的蛋白包括一种或多种蛋白的混合物，并可能含有或不含有其它皮肤细胞成分如脂，多醣，核酸和/或其它生物分子。生物-分子是一种在活机体和细胞中自然存在的化学物质。生物-分子主要包含碳(C)和氢(H)，及氮(N)，氧(O)，磷(P)和硫(S)。除这些元素之外(C，H，N，O，P和S)，某些时候也含有其它元素但比较少见。脂，多糖和核酸是生物-分子的示范例。

蛋白质和氨基酸聚合体通过多肽链连接；蛋白可以包括一种，两种或更多多肽链。蛋白可以是不同的蛋白类型(例如，水溶性蛋白，膜结合蛋白，细胞表面蛋白，结构蛋白，同族蛋白，等)及/或不同的酶种类(氧化还原酶，转移酶，水解酶，裂解酶，异构酶和/或连接酶)并可以被不同程度地糖基化。蛋白也可以被称为多肽和/或聚肽。

所述诱导的细胞裂解物可以获得所述的蛋白，该蛋白以诱导细胞裂解时存在于细胞中的生理性的，自然或最佳(或自然平衡)的蛋白混合物形式存在。与通过以上定义的诱导细胞裂解获得的所述蛋白相反，合并不同细胞组成组合物，其用于治疗皮肤情况，失调或疾病，并不能获得所述的蛋白。合并不同细胞的组合物中获得的蛋白与诱导细胞裂解获得的蛋白相比，具有不同特征(例如，蛋白结构，蛋白成分，细胞因子存在情况，稳定性，等)和/或活性(例如，增殖刺激性，抗-炎症特性，等)。

活性细胞是可以测定细胞活性的细胞。可以通过不同细胞活性测定方法测定细胞活性，包括但不局限于，测定代谢活性(例如：MTT[3-(4，5-二甲基噻唑-2-基)-2，5-溴化联苯四唑]方法，ATP[三磷酸腺甘]方法)，组织培养中的存活和生长(例如，增殖试验)，功能方法，代谢添加(例如，荧光-基础方法)，结构改变，和膜完整性(例如LDH(乳酸脱氢酶)方法)。每种活性测试方法基于不同的细胞活性的定义。

此外，所述的由所述的诱导细胞裂解获得的胚胎皮肤细胞蛋白可以被处理，分离，纯化，浓缩，修饰，分裂，稳定化和储存。而且，所述的胚胎皮肤细胞蛋白可以以修饰或非修饰形式整合入不同的载体(输送形式，释放形式，剂型，装置)。本发明的一个优选实施方案中，所述的载体是一种合适的药物应用和/或整形应用的局部制备物。合适的局部制备物含有合适的(forl’Hommedel’Art)化妆和/或药物应用的成份，并用合适的(for l’Homme del’Art)方法制备。所述的局部制备物被应用于身体表面如皮肤，头皮和/或粘膜。粘膜是起源于内胚层的衬里结构，包被有上皮组织，具有吸收和分泌功能。它们存在于各种体腔内，暴露于外环境和内部器官。其位于几处与皮肤相连的位置：鼻孔，嘴唇，耳朵，生殖器包括阴茎，阴户和阴道，及肛门。

用于对患有皮肤情况，失调或疾病的病人进行治疗的组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白，其通过诱导性细胞裂解从一种或多种胚胎皮肤细胞中获得。所述的胚胎皮肤细胞来源于人类和/或动物。在胎儿发育期间已经出现皮肤组织时，由处于的一种或多种胚胎皮肤组织样本和/或胚胎皮肤组织片段获得。在本发明的一个优选实施方案中，在妊娠任何阶段都可获得胚胎皮肤组织，胚胎皮肤组织样本和/或胚胎皮肤组织片段来制备所述的胚胎皮肤细胞，此时子宫内的胚胎皮肤受伤后的修复伤疤形成极小或无。

本发明描述了利用所述妊娠中期至前三分之一时期的胚胎皮肤细胞获得所述的胚胎皮肤细胞蛋白。在一个优选实施方案中，在孕6-24周(通过外科手术移出，活组织检查或采样)获得所述的胚胎皮肤组织。另一优选实施方案中，胚胎皮肤组织在孕8-18周获得。在优选实施方案中，所述的胚胎皮肤组织在人类胎儿孕12-16周获得。

通过皮肤组织取样，获得作为皮肤组织的部分或全部的所述的胚胎皮肤细胞。运用标准细胞培养技术，在合适的培养条件下，将胚胎皮肤组织，组织片段和/或组织样本置于培养板中生长可以获得胚胎皮肤细胞。获得胚胎皮肤培养细胞或胚胎皮肤细胞系后，可以建立细胞库和/或细胞系。胚胎皮肤细胞可以通过培养增殖(生长，繁殖)至更高的代次和/或更高的细胞倍增数。优选地，胚胎皮肤细胞被培养和增殖至一定代次和/倍增数，其中该细胞特性，特别是基因和蛋白表达特征与从胚胎皮肤组织获得的细胞的细胞特征相似或具有相比性。通常，胚胎皮肤细胞培养或增殖至较低的代次和/或倍增数。

胚胎皮肤细胞可以处于任何分化或增殖阶段。它们可以是未分化的或已分化的。胚胎皮肤细胞包括任何胚胎细胞类型，其位于胚胎上皮和胚胎真皮，包括但不局限于成纤维细胞，角化细胞，黑素细胞，Langerhans细胞和Merkel细胞。本发明包括了单一皮肤细胞类型的运用，和以任何细胞数比例混合的不同胚胎皮肤细胞类型的联合物或混合物的运用。一个优选实施方案中，使用了一种或更多胚胎皮肤成纤维细胞。另一优选实施方案中，使用了一种或更多胚胎皮肤角化细胞。另一实施方案中，使用了一种或多种胚胎成纤维细胞与一种或多种胚胎角化细胞的联合物。

胚胎成纤维细胞被定义为起源于或取自胚胎皮肤，其可以由本领域技术人员在与培养成人皮肤成纤维细胞通常使用的条件相同或相似的细胞培养条件下(如，培养基)培养和生长(增殖)。胚胎角化细胞被定义为起源于或取自胚胎皮肤，其可以由本领域技术人员在与培养成人皮肤角化细胞通常使用的条件相同或相似的细胞培养条件下(如，培养基)培养和生长(增殖)。胚胎黑素细胞被定义为起源于或取自胚胎皮肤，其可以由本领域技术人员在与培养成人皮肤黑素细胞通常使用的条件相同或相似的细胞培养条件下(如，培养基)培养和生长(增殖)。胚胎Langerhans细胞被定义为起源于或取自胚胎皮肤，其可以由本领域技术人员在与培养成人皮肤Langerhans细胞通常使用的条件相同或相似的细胞培养条件下(如，培养基)培养和生长(增殖)。胚胎Merkel细胞被定义为起源于或取自胚胎皮肤，其可以由熟练人员在与培养成人皮肤Merkel细胞通常使用的条件相同或相似的细胞培养条件下(如，培养基)培养和生长(增殖)。

任选地，胚胎皮肤细胞或胚胎皮肤细胞系可以在使用前去有丝分裂活性。有丝分裂活性的去除可以通过γ-照射，有丝分裂抑制物和/或丝裂霉素作用而完成。

任选地，胚胎皮肤细胞可以是永生化的并且/或者转染一种基因。连续的或永生的胚胎皮肤细胞可以来源于胚胎皮肤组织。持续的或永生的胚胎皮肤细胞包括，但不局限于永生胚胎皮肤成纤维细胞，和/或永生胚胎皮肤角化细胞，和/或永生胚胎黑素细胞。它们来源于人类和/或动物的所述的胚胎皮肤组织。所述的持续或永生胚胎皮肤细胞经设计含有原初(非永生的或非持续的)胚胎皮肤细胞的分化潜力，并且/或者在其高(极高)代次时仍能表达原初胚胎皮肤成纤维细胞，原初胚胎皮肤角化细胞和/或胚胎黑素细胞特有的分化蛋白。更特别地，本发明的一个目的即是获得连续胚胎皮肤细胞(或持续胚胎皮肤细胞系)，其在高(极高)代次时仍具有产生(表达，合成)蛋白的能力，该蛋白与抗-炎症相关过程和/或皮肤再生，皮肤修复和/或创伤治愈协调(调节)相关。

通过所述的诱导性细胞裂解(细胞分裂)可以从一种或多种胚胎皮肤细胞中获得一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白。胚胎皮肤细胞蛋白可以主要由蛋白质组成(＞75％干重)或可以包括其它生物分子和/或源于细胞的有机和/或无机成分，包括但不局限于氨基酸，细胞外基质成分(例如，透明质酸)，DNA，RNA，脂肪酸，脂肪酸酶，脂，糖，单糖，多糖，矿物质，水，盐其任何其它细胞外或细胞内组分。无论是否进行进一步的加工和/或处理都可以使用胚胎皮肤细胞蛋白。例如，可以在一步或几步纯化和/或分离步骤后使用胚胎皮肤细胞蛋白。例如，不含有，或含有较少RNA和/或DNA的胚胎皮肤细胞蛋白可以通过合适的处理，分离，和/或纯化步骤去除或部分去除RNA和/或DNA而获得。同样地，可以在诱导性细胞裂解之后进行一步或多步处理，纯化和/或分离步骤以获得单一的和特定的高浓度或纯度的蛋白。相似地，可以在诱导性细胞裂解之后进行一步或多步处理，纯化和/或分离步骤以获得高浓度或纯度的包括两种或更多蛋白的蛋白质混合物。

本发明另一组实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白仅仅包括将所述的胚胎皮肤细胞蛋白离心后获得的上清(液体，在混合物离心后其含有可溶性成分)。本发明的另一实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白仅仅包括将胚胎皮肤细胞蛋白离心后获得的细胞沉淀(离心管底部存留的细胞物质)。

本发明的一个优选实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白宝包括自然平衡的胚胎皮肤细胞蛋白混合物，可以在标准(正常或通常)的成人表皮成纤维细胞培养条件下(例如，使用含有10％胎牛血清(FBS，也称为牛血清或FCS)的Dulbecco’s Modification ofEagle’s Medium(DMEM)培养基，以37℃，5％至10％CO₂和＞80％湿度培养)培养胚胎皮肤细胞并引导细胞裂解而获得。可选地，使用无血清(无FCS或FBS)培养基(或培养物)和/或血清-缺乏型培养基(例如，＜10％胎牛血清)也可以作为成人表皮成纤维细胞的标准细胞培养条件。在培养基中补充(追加)抗生素(例如，青霉素，链霉素，等)可以作为标准细胞培养条件。

另一组实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白包括胚胎皮肤细胞蛋白的混合物，其通过非-标准(非正常)培养条件下培养胚胎皮肤细胞并诱导细胞裂解而获得。非-标准细胞培养条件包括，但不局限于氧化和/或化学压力，物理和/或机械压力和/或在短期或长期内提升或降低培养温度。为增加胚胎皮肤细胞中特定细胞因子的生成而在培养基中加入选择性的化学药物和/或蛋白质(例如，PDGF，等)也可以作为一种非-标准细胞培养条件。

本发明的一个优选实施方案中，所述的胚胎皮肤细胞蛋白包括了细胞因子。细胞因子是多种蛋白质和多肽的通用名称，其作为调节物质，在正常或病理情况下，调节单独细胞组织的功能活性。这些蛋白也直接介导细胞间的相互作用并调节细胞外环境中发生的反应过程。

如在此通过特定引述合并于本文的“细胞因子手册”(第4版，学院出版社，Angus W.Thomson和Michael T.Lotze)和/或者“细胞因子在线探索百科全书”(http://www.copewithcytokines.de/cope.cgi)所举例，细胞因子包括生长因子，白介素，淋巴因子，单核因子，干扰素，集落刺激因子，趋化因子，和多种其它蛋白。

大多数但非全部的细胞因子是糖蛋白。许多编码细胞因子的基因可以通过选择性拼接生成大量不同形式的细胞因子，产生具有轻微不同但具备生物学重要活性的分子。许多方面，细胞因子或细胞因子家族成员的不同形式的表达模式具有部分重叠，表明每个因子的特定作用。膜-结合形式已经在许多细胞因子中描述了，而其中一些也与细胞-外基质相关。

几乎所有细胞因子都是显示多重细胞学活性的多效性因子。此外，多重细胞因子通常具有重叠活性，并且单个细胞通常被多种细胞因子影响而产生表面同一效应(串扰)。这种功能重叠的一种结果是一种因子在另一种因子缺失的情况下，可以功能性地取代另一种因子，或至少其部分成分。既然许多细胞因子具有普遍的生物活性，它们作为正常生理性调节物的生理作用通常很难评估。

许多细胞因子显示了刺激或抑制活性并且将增强(具协同作用)或抑制(作为抑制物)其它细胞因子和/或其它因子的活性。一种细胞因子可以在特定条件下表现某种效应，而在另一种条件下可以表面相反的效应。

细胞的微-环境可以影响特定细胞因子引发的细胞活性的类型，持续时间和范围，并依赖于细胞的生长情况(分散或汇合)，邻近细胞的类型，细胞因子浓度，同时存在的其它细胞因子的联合作用，甚至同一细胞中几种细胞因子起作用的先后顺序。在这种组合效应条件下，单一的细胞因子可以传送不同的信号给不同的细胞类型。

细胞因子是胚胎形成和器官发育中的重要调节因子，并且其在此过程中作用可以不同于其在诞生后(出生后)起的作用。此外它们在神经免疫，神经分泌，和神经调节过程中显示了关键作用。细胞因子是有丝分裂，分化，迁移，细胞存活和细胞死亡，和转化的重要的促进或阻抑调节物。

细胞因子的生物活性由特定的膜受体进行调节，其在所有已知类型的细胞中都表达。它们的表达也服从于几种调节机制，虽然一些受体是持续表达的。已经显示细胞因子受体蛋白具有大量的特点。许多受体是细胞因子受体家族成员。许多受体是结合配基的多重-亚单位结构，并由于其固有的酪氨酸激酶活性，同时具有信号传导功能。同一家族中许多受体通。常具有共同的信号传导受体成分，例如，至少部分地，细胞因子的功能冗余性。

不同信号系统间的交叉-联系最终导致了大量不同刺激信号的综合，使得细胞可以适应于不同的生理条件。

虽然目前临床已经应用了一些重组的细胞因子，并且计划研究源于细胞因子的杂交分子，其具有相应因子的优点，而不含其缺点，但是必需意识到目前的知识仍非常有限。细胞因子是具有两面性的“武器”，可以引发级联放大反应，并且其显示的活性可能超越希望出现的单一高度特异特性。新的因子被不断发现并且扩展了我们关于细胞因子网络的知识。

白介素以及生长因子和菌落-刺激因子是这些细胞因子家族的成员。白介素的已知-特征的细胞因子的通常称谓，这类细胞因子由白细胞和包括皮肤细胞的其它细胞类型产生。它们具有广泛的功能，调节众多不同细胞的活性和功能，并且是调节炎症和免疫应答的细胞网络的特定的重要成员。生长因子是结合细胞表面受体的蛋白质，带有增强细胞增殖和/分化的结果。许多生长因子是通用的，在众多不同细胞类型中刺激细胞分化；而其它是针对特定细胞-类型的。

此外，所述的胚胎皮肤细胞蛋白也可以包括所有已知酶种类中的酶，如酶术语1992(学院出版社，圣地亚哥，加利福尼亚)和其增刊中所阐述，包括但不局限于氧化还原酶(EC1)，转移酶(EC2)，水解酶(EC3)，裂解酶(EC4)，异构酶(EC5)和连接酶(EC6)。

所述的氧化还原酶可以包括但不局限于作为受体作用于过氧化物的氧化还原酶(亚-类EC1.11；包括氧化还原酶(EC1.11.1)如过氧化氢酶和/或谷胱甘肽过氧化酶)，及/或作为受体作用于超氧自由基的氧化还原酶(亚-类EC1.15；包括超氧化物歧化酶(SOD)和/或超氧化物还原酶)。

所述的胚胎皮肤细胞蛋白也可以包括多肽和/或蛋白，包括但不局限于激素，神经肽，神经激素和/或其相应的受体拮抗剂。

本发明的另一实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白包括某些蛋白，其存在于一种或多种所述的胚胎皮肤细胞的条件培养基中。条件培养基是一种含有消耗的(使用完的，衰竭的)培养基和蛋白及其它在细胞培养阶段分泌入培养基中的细胞成分的液体。

所述的胚胎皮肤细胞蛋白可以整合入(合并，包含，混合，掺合，乳化，均质化和/或加入)多种成分。通过将一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白整合入一种载体，制剂或装置来制备组合物，适用于局部，肌肉，眼部，直肠和/或阴道给药，获得特定的治疗患有皮肤情况，失调或疾病的病人的组合物。一个优选的实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白整合入适合于药物和/或整形应用的局部制备物。

本发明的另一实施方案中，培养所述的胚胎皮肤细胞后获得的条件培养基被整合入适用于局部，肌肉，眼部，直肠和/或阴道给药的载体，制剂或装置。

所述的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病包括，但不局限于炎症性皮肤情况，神经性或神经炎症性皮肤情况，急性和慢性创伤，急性和慢性溃疡，和烧伤。

一个优选实施方案中，炎症，神经性和/或神经炎症性皮肤情况是包括阴前庭炎和外阴硬化性苔藓的外阴疼痛。

本发明的另一实施方案中，所述的组合物治疗的所述的皮肤情况失调或疾病包括粘膜情况，失调或疾病，其中粘膜组织邻近于所治疗的皮肤。

本发明的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病的实施例进一步包括痤疮，遗传性皮炎，过敏性接触皮炎，白色萎缩，头皮屑，皮炎，手部湿疹，疱疹，尿疹，湿疹，普遍剥脱性皮炎，瘢痕瘤，局部和/普遍搔痒症，光线性皮肤病，溃疡，牛皮癣，疤痕，皮脂囊肿，脂溢性皮炎，红斑痤疮，和/或干燥病。

本发明的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病的实施例也包括创伤；包括急性和慢性创伤，溃疡；包括急性和慢性溃疡和/或烧伤。

本发明的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病的实施例进一步包括在单一或重复皮肤异体移植治疗，皮肤自体移植，三-维皮肤构建，和/或其它创伤治疗期间和/之后的创伤，溃疡，和/或烧伤。

手术后的创伤也可由本发明的组合物治疗。手术包括，但不局限于非-整形的，整形的，外科整形和/或重构手术过程。

整形的，外科整形和重构手术包括，但不局限于乳房提升，乳房增大或缩小，除皱术，额部除皱，鼻子手术，耳部手术，眼睑手术，腹部手术，去脂，脂肪抽吸术，疤痕修复，脂肪去除，软-组织增加，冷冻手术或冷冻疗法，头发移植，指甲手术，硬化治疗，激光手术，纹身去除和/或血管手术。

此外，所述的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病包括非-病理皮肤情况，包括但不局限于，正常皮肤和/或健康皮肤，固有的和/或非固有的年老或光-老化皮肤。此外，所述的组合物治疗的皮肤情况，失调或疾病包括将皮肤暴露于(接触)整形，药物或皮肤病理学制品，家用制品，工业制品和/或含有有害于皮肤的成分的制品如腐蚀性化学物，譬如刺激物和皮肤过敏原。

整形和/或皮肤病理学制品包括，但不局限于含有一种或多种以下物质的制品，如exfoliant，促蜕皮药物，去疣药物，褪毛发药物，化学去皮药物，物理去皮药物，自身-棕褐色抑制药物，芳香物质，除臭药物，抗-头皮屑活性药物，抗-痤疮活性药物，抗-炎症药物，抗-红斑痤疮活性药物，化妆品，染料，增色剂，色素，皮肤增亮剂，皮肤增白剂，抗氧化剂，脂质，皮肤营养物质，遮光剂，表面活性剂，聚合物，蛋白质，肌松药，抗-衰老药物，抗-皱纹药物，保湿剂，湿润剂，维生素，润肤剂，膜-生成药物，脂质体，纳米微球，微球和/或任何其可能的混合物和联合物。

所述的整形和/或皮肤病理学制品可以包括一种以下成分或其联合物：果酸，α-羟基酸，β-羟基酸，壬二酸，苯甲酸，过氧苯甲酰，倍他米松，克林霉素，皮质醇，diclofeneac，蒽三酚，5氟尿嘧啶皮质醇，醋酸氢化可的松，对苯二酚，消炎痛，异维甲酸，曲酸，甲哨唑，苯酚，视黄酸，视黄醇，视黄醛，维甲酰β-葡糖苷酸维甲酰β-葡糖苷酸，slicylic acid，硫化硒，磺胺醋酰钠，硫化物，他扎罗汀，维甲酸，三氯醋酸，脲素，脂肪酸，脂肪酸酯，维生素A，B，C，D，E，F，H，和K及其任何派生物。

α-羟基酸包括，但不局限于羟基乙酸，乳酸，苹果酸，柠檬酸，结合乙醇酸铵的羟基乙酸，结合α-羟基乙酯的α-羟基乙醇酸，α-羟基辛酸，α-羟基辛酸，羟基辛酸，混合果酸，三-α羟基果酸，三果酸和甘蔗粹取。

本发明的一个优选实施方案中，所述的组合物用于在整形和/或皮肤病处理过程中的皮肤和/或皮肤情况的治疗。整形和/或皮肤病处理过程包括，但不局限于轻度化学去皮，中度化学去皮，深度化学去皮，物理去皮，上蜡，微晶磨面，皮肤磨削术，光疗(强脉冲光，光调整，可见，非-可见，红外和/或紫外光治疗)，激光治疗，射频治疗，热疗(热，冷，热冷循环)，电疗，超声治疗，理疗(按摩，压，抽气，振动，摩擦，磨损)，氧和/或臭氧治疗，注射和/或任何其联合疗法。所述的组合物与所述的整形和/或皮肤病处理过程联合使用；可以在整形和/或皮肤病处理过程之前，之后和/或期间(平行)使用。

家用和/或工业制品包括，但不局限于肥皂，清洁剂，洗发液，清洁产品，洗手液，颜料，环氧固化剂，有机溶剂，酸，碱，金属，加热或制冷液体和加热或制冷材料或设备。

除非另加声明，下列在说明书和权利要求书中使用的术语具有以下给予的意义：

术语“处理的”，“处理”或“治疗”和类似词句指受纳者情况的改变。该改变可以是主观的或客观的，并可与所治疗的疾病或情况的症状，迹象或表现的特征相关。例如，如果病人或/和主体减弱了其骚痒或疼痛，则获得了成功的治疗。相似地，如果临床医生通过组织病理学分析活组织样本发现主体有所改变，则该治疗是成功的。作为选择，临床医生可以在对病人的治疗中发现炎症伤害或其它异常情况的减弱。这也体现了一种改善的或成功的治疗。术语中也包括了受纳者情况恶化的预防。治疗性受益包括任何一种主观的或客观的因素，该因素表明这里所述的治疗情况的应答。

术语“药物”，“药理制剂”，“药物制剂”，“活性物质”，“药剂”和“活性药剂”和相似物可交替使用，并具有其最广泛的解释，即任何治疗活性物质，其通过输送入活有机体而产生期望的，通常为有利的效果。一般而言，这包括所有主要治疗领域中的治疗药物，也包括蛋白质，多肽，寡核苷酸，和碳水化合物和无机离子。

皮肤情况，失调和/或疾病

本发明中设计用于治疗患有皮肤情况，失调和/疾病的病人的组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白，其由一种或多种胚胎皮肤细胞通过诱导性细胞裂解获得。本发明描述了制备一种组合物的方法，该组合物包括一种或多种与适用于局部，肌肉，眼部，直肠和阴道的载体相混合，整合或联合的胚胎皮肤细胞蛋白。

组合物可以用于治疗多种炎症，神经性和/或神经炎症皮肤情况，异常或疾病，如外阴疼痛，阴前庭炎，阴硬化性苔藓，遗传性过敏皮炎或湿疹，手部湿疹，脂溢性皮炎，红斑痤疮，牛皮癣，局部和/或广泛搔痒症，光敏性-皮炎和/或日光灼伤和放射性-皮炎。

组合物可以根据标准创伤恢复和/或白色萎缩进一步用于治疗急性和慢性创伤，如轻微烧伤，轻微创伤，裂缝，裂纹，擦伤，意外受伤，溃疡，周围-溃疡皮肤，创伤闭合和/或治愈后的皮肤。

组合物也可以通过整形和/或皮肤病理学处理用于皮肤或皮肤情况的外观改善(或修饰)，包括但不局限于轻度化学去皮，中度化学去皮，深度化学去皮，物理去皮，上蜡，微去疤痕，去疤痕，光疗(可见，非-可见，红外和/或紫外光治疗)，激光治疗，射频治疗，热疗(热，冷，热冷循环)，电疗，超声治疗，理疗(按摩，压，抽气，振动，摩擦，磨损)，氧和/或臭氧治疗，注射，整形手术和/或任何其联合疗法。所述的组合物与所述的整形和/或皮肤病处理过程联合使用；可以在整形和/或皮肤病处理过程之前，之后和/或期间(平行)使用。

此外，组合物可以用于对疤痕和/或瘢痕瘤急性预防和/或改善其表观。组合物也可用于对皮肤进行水合或湿润，特别针对由于干燥引起的干皮肤或干燥皮肤。

下文对本发明中的组合物治疗的皮肤情况，异常或疾病进行了简明但不完全的描述。关于皮肤情况，异常或疾病的症状，诊断和治疗更详细和完整的最新信息可以在veneorology，男科学，异常或创伤治疗，皮肤病和/或整形标准手册中找到，如“常规医学中的Fitzpatrick’s皮肤病“(第五版；I.M.Freedberg，A.Z.Eise，K.Wolff，K.F.Austen，L.A.Goldsmith，S.I.Katz和T.B.Fitzpatrick编辑)和“整形皮肤病手册”(第二版，R.Baran和H.I.Maibach编辑)，其通过引述在此特定地合并于本文。

炎症性皮肤情况

大量的皮肤情况，异常或疾病包括，但不局限于属于炎症性，神经性和/或神经炎症性皮肤情况，失调或疾病的种类，如痤疮，遗传性皮炎，过敏性接触皮炎，白色萎缩，头皮屑，皮炎，手部皮炎或手部湿疹，疱疹皮炎，尿疹，湿疹，普遍剥脱性皮炎，瘢痕瘤形成，局部或全身搔痒症，光线性皮肤病，溃疡，牛皮癣，脂溢性囊肿，脂溢性皮炎，红斑痤疮，外阴疼痛，阴前庭炎或阴前庭炎综合症，阴硬化性苔藓。

阴前庭炎综合症是外阴疼痛中一种最常见的类型。这是一种复杂的妇科疾病，表现为局限于阴门的疼痛，但未有客观的临床发现来解释这种症状。阴前庭炎综合症的特点是阴门部位的疼痛及对于接触或压迫刺激的应答。在这个方面，它与感觉异常性外阴疼痛不同，而其包括了在受或未受刺激情况下发生的慢性的，通常为非-局部的阴部疼痛。

根据Friedrich(J Reprod Med 32，1987，110-114)，VVS的症状位于阴门。识别VVS的标准包括：(1)阴门接触或尝试进入阴道引起的疼痛，(2)阴门对于压力敏感；和(3)发现局限于阴门的不同程度的红斑(J Reprod Med 32，1987，110-114)。红斑可以是弥散的或点状的，并可位于周围或阴唇小带。其它阴门红斑和敏感引发的情况，如念珠菌病(酵母菌感染)或疱疹感染应当排除在外(Smart和Maclean：Curr Opin Obster Gynecol15，2003，497-500)。

VVS可以是急性或慢性的，而以任意六个月的疾病中止来区别这两种形式是可接受的。VVS的引发原因是多-因素的。真菌或细菌感染(例如，假丝酵母)，化学刺激物(例如，肥皂)，治疗性药物(例如，杀菌剂，栓剂，药霜)，和过敏性药物应答是引起急性形式的疑似因素。急性形式中，对推测因素进行治疗可以获得快速缓解。

该情况严重地削弱了性功能并产生严重的心理障碍。除了表现为刺激性，灼热或刺痛感的疼痛之外，其它症状包括骚痒，膨大和磨损。在一些病例中，疼痛可以抑制性交往。此外，塞入棉塞，骑自行车，或穿着过紧短裤也可以引发不适。病症趋势通常超越局部的症状，并且许多女性将表现出第二性官能障碍和处于-明显压抑。这些改变可能包含对于婚姻的严重不利因素。

阴前庭炎综合症最近由Farage M.A.和Galask R.P.在Eur JObster Gynecol Reprod Biol杂志上进行了综述(“阴前庭炎综合症：A review”，May 28，2005，Epub ahead of print)，其通过引述在此合并于本文。

通常人群中阴前庭炎综合症的流行情况仍未知。在为期六个月的妇产科医学临床研究中，病人中的流行情况为15％(Br JObstet Gynaecol 1991，98，703-706)。仅有的基于调查获得的人群数，其包括了来源于人种差异Boston组织调查的4915位年龄从18至64岁的妇女(回复率68％)，发现大约16％的回答者具有持续3个月或更长时期的慢性灼热，刀割样疼痛或接触疼痛的历史(J Am Med Womens Assoc 2003，58，82-88)。接近7％的人群在受调查期间具有该病症。约12％表示在vulvar接触时有特定的疼痛。此外，调查发现在患有vulvar疼痛的女性中，接近40％的人群未进行治疗，而在治疗的人群中，60％看了3个或更多医生，而许多医生无法提供诊断。然而，该调查没有完全区分阴前庭炎和感觉异常性外阴疼痛。

阴前庭炎综合症的病因仍未知。复杂的大量因素已经与该病症相联系，暗示了一个多-因子致病机理(Farage MA和GalaskRP)。流行的理论是阴前庭炎综合症是一种神经性失调，其包括了由前庭神经纤维敏感性增强及感应性疼痛循环维持的出现导致的异常疼痛。该理论中，未确认的引发因素；-假定性的一些慢性炎症形式-，激活交感类型C神经纤维的应答并维持其长效性从而转运有害化学刺激物至大脑。这导致大脑中神经细胞的广泛活性而导致应答异常性，如微弱刺激可产生疼痛。这种过程显示了阴前庭炎综合症的局部疼痛导致的最初结果，并产生慢性的，进行性的感觉异常性外阴疼痛疼痛。

一些研究显示了阴前庭炎综合症的神经性病因学：在阴前庭炎病人中对于热和机械刺激的域值是较低的(Pain。2004，107，47-53)，而最近一些证据揭示了阴前庭炎病人中慢性炎症的潜在的遗传遗传位点。患有阴前庭炎的女性中更为普遍地具有多态白介-1受体拮抗剂基因(Am J Obstet 182：2000，283-285)和黑皮质素-1受体基因(J Reprod Med 2004，49，503-509)的前-炎症变量。值得注意的是，与健康对照相比，阴前庭炎病人血液中白介-1受体拮抗剂具有明显地减少(Am J ObstetGynecol 2002，186，696-700)。个别地，干扰素-α的缺乏，其与以上-描述的基因型不相关，可以通过减弱其抗击细胞内感染的能力而在阴前庭炎病人亚群中导致慢性前庭炎症(Am JObstet Gynecol 2002，186，361-364)。

阴前庭炎综合症可能的引发因素包括感染性物质，过多使用刺激性局部药物或制剂，针对HPV感染的激光或冷治疗，或对精液的超敏感性。鉴定这些引发因素的复杂因子是症状首次发作至首次被诊断的时间间隔(Farage MA和Galask RP)。

由于其多重的和经常性的未知的因素，VVS是非常难以治疗的。病人有时在误诊期间忍受病痛，并在治疗中可能显示长期未成功的努力。对于阴前庭炎的首选治疗是针对其可疑病因的治疗。这包括刺激和治疗药物的非连续的局部和系统使用，其可能引发病症。

现未有可接受的治疗，并且目前的治疗缺少清楚的病源基础(Farage MA和Galask RP)。在许多治疗中，进行小范围严格的随机临床前试验；它们的效果在单一病例情况或病例系列间差别很大。研究对于成功标准的定义也有不同，包括终点的评定，恢复的程度和持续的时间。

干涉治疗包括：症状的减轻(局部麻醉如利多卡因，低剂量三环抗抑郁剂如阿米替林，加巴喷丁，等)，生物反馈剂(骨盆肌肉的电肌动生物反馈)，推测感染因素的药物治疗(口服氟康唑，注射干扰素-α或-β，等)，物理和支持治疗(认知-行为，性治疗，等)，手术去除受影响的前庭组织(前庭成形术，前庭切除术，perineoplaty)，和其联合治疗。

没有一种单一的治疗方案可以针对所有病人。此外，许多这些方法包括复杂的药物过程，费用巨大，并且/或者非期望的副反应。

需要一种改良的治疗阴前庭炎的方法，特别对于那些不明病因和治疗未起作用的病例。

硬化性苔癣是一种难以诊断的慢性炎症皮肤失调，主要影响外阴和肛门周围(Am J Clin Dermatol.2004：105-25)。虽然其被认为主要影响成熟女性，但所有年龄的女性都可患有硬化性苔癣。男性也可以患有此失调并影响阴茎及肛门周围。儿童也可患有硬化性苔癣并可以影响身体的其它部位。当硬化性苔癣影响生殖器以外的身体部位时，它被认为是“额外生殖器硬化性苔癣”。影响硬化性苔癣的因素仍未知，但发现在硬化性苔癣和甲状腺疾病，白癫风和其它自身-免疫疾病之间具有联系。

不同的病症是外阴区域的慢性骚痒和疼痛，外阴皮肤的爆裂，导致刺激感和疼痛，炎症和某些时候的肿胀，当肠运动使得肛门张开时导致周围皮肤的爆裂和流血，导致疼痛和不舒适，皮肤变得易碎和苍白并增加了对感染和鹅口疮的易感性，外阴区域的“收缩”(萎缩)，区域性状和大小的改变，有时导致排尿困难和性问题，硬化性苔癣并不影响阴道，并且/或者在男性中包皮变得“融合”或紧绷，使得收回包皮疼痛并使排尿困难。

诊断可能是困难和耗时的。许多普通从业无法识别该症状，并且病人有时被误诊并以“鹅口疮”，STDs，更年期，或激素问题治疗。专家诊断通常是必要的，并采用皮肤活组织检查以确认硬化性苔癣的存在并去除任何恶性病变的可能性。

在女性中，硬化性苔癣通常被归入外阴疼痛的类别。

牛皮癣是一种持续的皮肤疾病，其命名来自于希腊语“骚痒”。皮肤发炎，变红，银屑状增厚；通常位于头皮，肘，膝盖，和后背。某些情况下，牛皮癣发病十分轻微以至于人们并未意识到已经患有此病。相反地，严重的牛皮癣可以侵染身体的大部分面积。

牛皮癣的病因仍未知。然而，最近的发现表明这是一种由T-细胞，树突状细胞和炎症因子介导的慢性皮肤炎症失调(NatRev Immunol.2005，5：699-711)。由于炎症，皮肤脱落过快，频率为每三至四天一次。人们可以在皮肤剥落，擦落，摩擦，或严重性晒伤后10至14天发现新的斑痕。感染，如链球菌喉炎，和特定的药物也可以引起牛皮癣。冬季，皮肤干燥和缺少日晒可引起疾病发作。

牛皮癣表现为多种形式。每种形式在严重性，持续时间，位置，磷状区的性状和模式上都有不同。最常见的形式为由小红肿块逐渐长大并发展为磷状。其时顶部的磷状物经常易脱落，表面下的磷状物相互粘连。当其去除时，柔嫩的，暴露的皮肤将出血。这些小的红色区域将扩张，有时变得相当巨大。肘，膝盖，腹股沟和生殖器，手臂，腿，手掌和脚底，头皮和脸部，身体折痕和指甲是经常发生牛皮癣的区域。牛皮癣常常出现在身体两侧的相同区域。患牛皮癣的指甲带有小凹陷。指甲将松动，增厚或破碎并难以治疗。逆向牛皮癣发生在腋窝，乳房下和腹股沟，臀部，生殖器周围的皮肤。斑点状牛皮癣常影响儿童和年轻人。其通常在咽喉疼痛后发作，在皮肤上带有许多小的，红色的，水滴-状，磷状斑点。数周或数月后其可自愈。牛皮癣患者中超过30％患有关节炎症状，5-10％带有不同关节的关节炎引起的功能性丧失。一些人群中，当皮肤情况严重时关节炎将恶化。某些时候当病人的皮肤改善时其关节炎也将改善。

红斑痤疮是一种常见的起源于面部皮肤的慢性皮肤疾病。在三十和四十几岁时常见，在40至50岁之间为其发病高峰。红斑痤疮的病理生理学似乎为炎症发生，而大多干涉疗法可通过一些方法调节炎症的发展(Cutis.2005，75(3Suppl)：27-32)。局部的药物包括乙酰磺胺钠和硫磺，甲硝哒唑，壬二酸，过氧化苯甲酰/氯林可霉素。口服药剂包括常规和低剂量的抗生素。红斑痤疮治疗中的示范性改变方案包括单独使用这些和其它药物，或者进一步，根据红斑痤疮的亚型进行不同的联合运用。

红斑痤疮的早期阶段表现为持久性的红斑和主要为伴随有丘疹和丘疹脓痂的脸颊毛细管扩张。随后，其可引起连接组织和皮脂腺的弥漫性增生。这可导致鼻肥大，即为通常所说的鼻赘。随红斑痤疮的发展可以影响眼睛，通常造成睑炎和结膜炎。脸部其它区域如耳廓区域，颈部，胸脯，后背和头皮也可以受影响。临床表现类似于痤疮，但相反红斑痤疮不是一种滤泡疾病。在美国，估计14,000,000美国人受影响。由于其红脸、类似痤疮的表观，若不进行治疗则将引起严重的心理，社会和职业问题。

皮炎表现了皮肤的炎症。事实上皮炎指使皮肤发炎的许多皮肤情况。皮炎以皮肤的发红，松弛，起水泡，结痂，磷状化，渗液，或发痒为特征。某些类型的皮炎由过敏原引起，而大多数没有已知的引发因素。许多类型的皮炎需要通过医师或其它健康专家进行临床治疗。

遗传过敏性皮炎(遗传过敏性湿疹或湿疹)是一些不同的非-感染皮肤疾病的组合，其可以由刺激和免疫机制引发，并导致表皮和上真皮的病理性改变。它是一种最常见的皮肤疾病种类。湿疹疾病也是一种常见的职业病。湿疹是临床发现的一组，而非某一特定的疾病，并表现为红斑，丘疹，囊泡，结硬皮，在其急性阶段表现为滴液和水肿及皮肤增厚，苔藓样硬化，在其慢性阶段时磷状化。骚痒是一种导向性症状。术语“皮炎”和“湿疹”经常交互使用，其中一些作者使用术语“皮炎”来描述急性炎症损害而用术语“湿疹”描述带有角化过度症的相当缓慢的表皮损害。两个术语经常相同使用，虽然人们需要意识到术语“皮炎”也可以用于非-湿疹性疾病(如疱疹样皮炎)的事实。

手部皮炎(手湿疹)是常见的。手部皮疹通常是敏感性皮肤和刺激性或过敏性接触物质联合导致的结果。患有手部皮炎的人通常在其它部位也有皮炎。

接触性皮炎是一种在皮肤接触特定物质时发生的生理性反应。约80％的反应是刺激性物质引起的。剩余的20％反应是有过敏原引起的，其引发了过敏应答。在过敏反应中，反应可以是非直接的，但可以在数天后发生。直接接触刺激物可引发非过敏性应答的，刺激物引发的接触性皮炎。

成人和儿童中过敏性接触皮炎最常见的引发物包括：肥皂，清洁剂，香水，尿布，不同的食物，刺激性婴儿浴液，植物，以及金属，化妆品，和药物也可以引发接触性皮炎反应。毒葛，一种包括毒葛和漆树的植物家族中的一部分，是引起接触性皮炎反应的最常见引发因素。数千种化学药物是引发过敏性接触皮炎的可能因素。镍，铬，汞，是引发过敏性接触皮炎的常见金属。镍被发现于装饰珠宝，带扣，和手表，以及服装上的拉链，绞链和钩中。许多类型的化妆品可以导致过敏性接触皮炎。含有邻-苯二胺或其派生物的永久性染发剂是最常见的引发因素。其它可导致病情的物质包括半-永久性染发剂或服装染料，香水，眼影，指甲油，口红，和某些防晒霜。新霉素，其被发现于抗菌素膏中，是最常见的引起药物接触皮炎的因素。青霉素，磺胺类药剂，和局部麻醉剂，如奴佛卡因或尼泊金是其它可能的因素。

最常见的接触性皮炎症状包括：皮肤的中度发红和增大，皮肤水泡，骚痒，皮肤磷状化和临时性增厚。最严重的反应发生于接触位置。接触性皮炎的症状可以类似于其它皮肤情况。然而，每一种也可以表现为不同的症状。

皮炎疱疹是一种严重的骚痒(发痒)皮肤疾病，其以成串小水泡或囊(含有液体的皮肤小突起)和小肿块或丘疹(小的，固体的，皮肤突起)的出现为特点。皮炎疱疹通常影响15至60岁的人群。皮炎疱疹与皮肤下顶部IgA沉积的出现相关。这些沉积的发生对应于小麦，大麦，裸麦，和燕麦制品中发现的食物中的食用麸质(蛋白)。然而，一旦IgA沉积发生，即使没有麸质的存在，其被身体清除的速度仍缓慢。该疾病在非裔-美国人或亚洲人中不常见。患有皮炎疱疹的病人通常于自身免疫失调和甲状腺疾病高度关联。

最常见的皮炎疱疹的症状包括：成串骚痒，小水泡，常位于肘，后背低处，臀部，膝盖，和头部后部，骚痒和燃烧感通常是非常严重的。许多病人通常具有肠部损坏。

皮炎疱疹的症状可类似于其它皮肤情况。然而，每个个体都可以表现出不同的症状。

通用剥脱性皮炎是一种严重的皮肤全部表面的炎症，其由一定的药物反应，或其它皮肤情况的并发症所引起。一些情况中，淋巴结瘤(淋巴瘤)可以导致通用剥脱性皮炎。然而，常常无法发现引发因素。

下列是最常见的通用剥脱性皮炎的症状。然而，每个个体都可以表现出不同的症状。症状包括：皮肤极度变红，鳞片化，皮肤增厚，骚痒，淋巴结肿胀，发热，损害皮肤中失去流体和蛋白。通用剥脱性皮炎的症状可类似于其它皮肤情况。

脂肪的、或表皮外囊肿，是一种小的、位于皮肤下的可移动的肿块，其在表面皮肤细胞迁移至皮肤深处并繁殖时出现。这些细胞形成囊肿壁并分泌柔软的，微黄色的物质，充满囊肿。当壁破裂时，这些内容物释放至周围皮肤中，导致刺激性和炎症。脂肪囊肿通常出现于头皮、脸、耳、后背、或腹股沟区域。脂肪囊肿可以是堵塞的腺体或腺管。

脂溢性皮炎是一种皮肤上层炎症，以发红，骚痒和磷状脱落为特征。一般情况，脂溢性皮炎通常在寒冷天气时恶化。脂溢性皮炎在幼年时常见。幼年时，由于其特征化的磷状物出现在头皮，该情况也称为“摇篮帽”。然而，摇篮帽也可以出现在尿布区域。这些年龄组中出现的脂溢性皮炎通常在第一年自愈。当脂溢性皮炎出现在中年时，情况通常为继发性的。油性皮肤或头发的人具有更高的患脂溢性皮炎的可能性。

脂溢性皮炎的相关症状包括：头皮骚痒，头皮出现干的或油性磷状物，发丝，耳后，耳道，眉毛，鼻子周围，和/或脸颊出现黄色或红色皮疹。脂溢性皮炎的症状可类似于其它皮肤情况。然而，每个个体都可以表现出不同的症状。

痤疮是一种带有堵塞毛孔(黑头和白头)，红色丘疹(脓疱)，和深部肿块(节结)的皮肤情况。痤疮发生于面部，及颈部，面颊，后背，肩部，手臂上部。痤疮使病人容貌变丑并令人烦恼。痤疮未治疗可留下永久性的疤痕。为防止痤疮疤痕，对痤疮进行治疗是重要的。

由于肥大细胞的存在，瘢痕瘤是红斑性、柔软的、严重的、色素斑，形成坚固状态并且骚痒。瘢痕瘤是常常发生在具有更多黑色素的人群中的良性成纤维细胞增生。瘢痕瘤疤痕持续存在超过12个月，并在原初创面的边缘产生扩张。瘢痕瘤发生在如下皮肤创伤如外科切口，外伤创口，免疫接种位置，烧伤，水痘，痤疮，或甚至细微擦伤。衣服或其它形式的摩擦可以对其产生刺激。

在创伤恢复的早期阶段，当纤维原细胞产生胶原质和蛋白多糖时细胞外基质开始聚集。在正常皮肤或成熟伤疤中，纤维原细胞产生胶原质和蛋白多糖的效率随时间推移而减少。然而，在瘢痕瘤伤疤中，创伤的恢复过程保持加速的效率，带有数周或数月的过度-应答的纤维原细胞增殖。瘢痕瘤形成的发病机理仍未完全清楚。但存在假设：白介素-1和转化生长因子-β可造成胶原质代谢的改变，从而导致瘢痕瘤形成，即，新生血管内皮细胞表达转化生长因子-β，随后由邻近的纤维原细胞产生TGF-β。类型I和IV胶原质基因的表达在瘢痕瘤组织中增加。

搔痒症是一种表示骚痒的医学用语。其被定义为一种想要抓搔的感觉。骚痒可以是一种病人难受和不适的重要原因。最终其包括了皮肤神经对特定化学物质如组胺的应答，并将信号传递给大脑的过程。搔痒症可以是一种特定皮肤疾病的症状，并且有时是一种内部情况的表现。其它无皮肤或内在疾病的证据的病人，骚痒症可能由于神经系统对于骚痒感觉的错误传递。

许多带有骚痒的皮肤情况，失调或疾病与作为显著症状的皮疹相关。示范例可以是但不局限于麻疹，水痘，湿疹。一些皮肤情况仅具有骚痒症状而无明显的皮疹。例如，在老年中常见的干燥皮肤，可以非常骚痒(特别在冬天)，但没有可见的皮疹。搔痒症通常随敏感干燥皮肤之后，但其可以是一种内部情况的表现。昆虫和皮肤中一些寄生生物，如疥疮和虱子的叮咬，可以是非常骚痒的。

急性和慢性创伤

创伤(例如，破口，开创，或溃疡)可以是急性或慢性的。急性创伤典型地是皮肤上包括细小组织丢失的尖锐的伤害。许多急性创伤通过将创伤开口相互吻合而闭合和恢复。慢性创伤是无法完全恢复，或非常缓慢的创伤。慢性创伤的示范例包括褥疮溃疡，糖尿病皮肤溃疡，静脉瘀血溃疡，烧伤和肿瘤切除遗留创伤。

创伤的细胞形态学由三层结构组成：中心创伤区域，局部缺血梯度区域，和活性胶原质合成区域。虽然需要快速恢复创伤(例如，严重烧伤，外科开口，破口和其它外伤)的方法，然而至今在使用药物制剂加速创伤愈合上仅有非常有限的成功。

治疗创伤的最初目标是使创伤愈合。开放性皮肤创伤代表了一种创伤类型，其包括严重的外科和外伤创伤，例如，慢性溃疡，烧伤，及慢性创伤如神经性溃疡，褥疮，动脉和静脉(郁积)或混合动脉-静脉溃疡，和糖尿病溃疡。具代表性地，这些创伤恢复将按以下过程进行：1)炎症，2)纤维原细胞增殖，3)血管增殖，4)连接组织合成，5)上皮形成，及6)创伤收缩。当这些情况，单独或全部地，未完全发挥其功能时，创伤恢复将削弱。阴性创伤恢复的因素包括营养不良，感染，药物(例如，毒性药物和皮质类固醇)，糖尿病，及年龄老化(Current SurgicalDeagnosis&Treatment，Way；Appleton&Lange，1988，86-98)。

许多不同的产物和方法可以用于治疗慢性创伤(如Brit JPlast Surg 55：2002，185-193所述)。这包括简单的绷带(特别的压缩绷带)，泡沫和薄膜，凝胶和胶体，药物制品，如生长因子。典型地，使用湿润闭合缚料比使用干燥，非-闭合缚疗跟普遍用于创伤恢复(Nature 193：1962，293-294)。目前，在创伤恢复中常规使用大量类型的缚疗。这些包括薄膜(例如，聚亚安酯膜)，水状胶体(结合聚亚安酯膜的水合胶体微粒)，水凝胶(含有超过至少60％水分的水凝胶的交联多肽)，泡沫(亲水的或疏水的)，藻酸钙(藻酸钙制备的光纤无纺复合物)，玻璃纸(带有可塑剂的纤维素)(Dermatol Sug 21：1995，583-590；Burns 10：1983，94)。创伤的特定类型(例如，糖尿病溃疡，施压疼痛)和特定病人的创伤(例如，外源性皮质类固醇接受者)的恢复在特定时期内(或全部)不使用这些创伤缚料治疗。

研究发现大部分溃疡可以通过使用足够水平持续梯度压力而恢复。对于患有静脉疾病的病人，通过在血管和淋巴结空隙处压入液体，使用分段外部压力，可以帮助减小或逆转由于血管系统堵塞或损坏而引起的皮肤和血管的变化。

此外，几种药物形式(例如，用于治疗的硫酸锌，维生素A，C，和D，钙，镁，铜和铁)，已经应用于改善创伤恢复的尝试。然而，除了非常有限的情况，使用这些药物恢复创伤仅取得少量成功。

通常使用的绷带有三种类型：(1)轻量适应-伸缩绷带，(2)轻度支撑绷带，和(3)包括轻度，中度，高度和超-高度性能的压力绷带。

一些烧伤病人没有或少有剩余的未受伤害的皮肤，人造皮肤结构或纤维素绷带被用于包裹和保护创伤区域，但其也可促进自然皮肤的再生是其胜于伤疤组织形成。这些人造皮肤结构的示范例是ApligrafTM，TrancyteTM或OrtecTM。

化妆品和整容制品

使用的化学溶液中存在的化学去皮剂(也称为化学脱皮或去真皮)可以去除皮肤外层，以治疗细纹，皱纹，中度疤痕，痤疮，皮肤色斑，和前-瘤生长。去皮溶液可以包括一种或多种化学物质如α-羟基酸，β-羟基酸，果酸，水杨酸，Jessner’s溶液，三氯乙酸，苯酚，或碳酸。化学去皮剂介导的后期-效应类似于日灼。中度或浅度去皮后，皮肤发红和起皱将持续3到5天。中等-深度或深度去皮可以导致7-14天的发红，渗液，起水泡和蜕皮结果。应使用药物以减轻不适。在一定时期内应避免过度暴露于阳光以防止敏感的新生皮肤受日光伤害。

磨去皮肤疤痕术采用外科砂纸打磨或磨平，通过高速旋转丝，刷子，钻石磨损物，锯齿状轮，等的运动)去除皮肤外表层以改善痤疮和其它疤痕，去除纹身并减小老年斑，皱纹和特定类型的皮肤生长。需要进行创伤的后期-治疗，然而再生上皮形成通常在10天内完成。重要的后期-效应是类似于严重日灼的皮肤发红，疤痕增殖或瘢痕瘤形成，炎症后的超或亚色素沉着。病人在治疗后3至6个月应避免日晒。

微磨去皮肤疤痕术是一种较少侵害的面部复原治疗，其使用微粒以磨损和摩擦掉最外的皮肤层，真空吸除死皮微粒。该方法可以间隔重复减小。潜在的后期-效应是类似于严重日灼的皮肤发红。

光和/或激光治疗包括许多皮肤表面重塑和皮肤复原治疗，去除老年斑，毛发，疤痕，纹身和疣，也可用于治疗溃疡，胎记，鲜红斑痣，牛皮癣，红斑痤疮，生长纹，纹理，白癫风和包括光化学角化症和皮肤瘤的其它皮肤情况。

治疗可以是融蚀的(损害和“融化”表面)或非-融蚀的(非-创伤性)。融蚀性激光治疗(CO₂，Er：YAG，Argon，等)需要治疗-后创伤修复，其中再生上皮形成通常在10天内完成。红斑典型地将最多持续3至4个月并且皮肤将持续数月敏感。存在疤痕增殖或瘢痕瘤形成，后期-炎症超，或亚-色素沉着的风险。

非-融蚀的激光(冷激光，长脉冲激光，Fraxel激光，等)或光治疗(强脉冲光(IPL)治疗，光调整，红外光，等)由于其针对更低层的皮肤(真皮)并几乎无损伤地去除表皮使其侵染性较小。副作用是发红和皮肤敏感及有时小量渗液。

可选的皮肤表面重塑激光是电外科表面重塑，也称为“冷消融”。该激素使用微-电子无线电频率传递能量脉冲至皮肤，去除或改善表面以缓和皮肤损害。该过程具有较少的后期-效应，并在一个月内轻柔恢复缓和渗液。电外科表面重塑具有应用于许多皮肤类型和颜色的优点，并不使皮肤色素沉着。

去除多余的毛发可以改善整体美观，并可带随或不带随面部皮肤复原。传统的处理多余毛发的方法包括：(1)过氧化氢漂白使毛发不明显，(2)临时性剃除毛发，(3)拔除毛发，(4)用蜡覆盖毛发，随蜡去除毛发，(5)使用化学脱毛剂“去除”非期望的毛发，及(6)电解或电热分解破坏发囊永久去除毛发。面部皮肤的化学脱毛剂可以是刺激性的。目前最常使用光热分解完成激光毛发去除。激光毛发去除的副作用包括数小时至数天的后期-治疗的疼痛，和皮肤发红。

其它化妆和整容过程包括：

流动性静脉切除术：通过沿着扩张血管进行一系列微创治疗去除非期望的曲张和网状腿部静脉。

眼睑整容术：去除松弛皮肤和过剩脂肪组织的上、下眼帘手术。

肉毒素：肉毒术注射治疗以麻痹导致皱眉纹，鱼尾纹和其它皱纹的特定面部肌肉。其也可以用于改善颈部纹路并控制过量出汗。作为肉毒素的替代，也可以使用肉毒素-类似物。

化妆手术：改善和复原皮肤外观的美容方法，例如，激光重塑，皱纹填充，抽脂，化学去皮，毛发修复，等。

冷冻手术和冷冻疗法：用液氮冰冻皮肤组织去除皮肤增生，老年斑或疣。

刮除术和干燥法：使用尖锐器械刮除皮肤组织，随后用热电针头破坏皮肤生长。

侧翼手术：邻近皮肤组织移植，通常将毛发-生长的皮肤移植至头皮脱发区域。

填充物注射：填充物是放置或注射入深度纹理和皱纹的材料(如胶原质，透明质酸，羟磷灰石钙，聚L-乳酸，硅，等)。典型地，填充剂应用于那些较深的以至于不适合激光治疗的皱纹。许多常用的填充剂应用于笑纹，眉毛间，下垂颧骨或改观上下唇。痤疮，水痘和其它深度疤痕也可以改善。

毛发修复手术：各种技术，如打孔移植，小-或微-移植，头皮复位和外科皮瓣，以恰当地去除原毛发并移植他人的自然发丝。

抽脂：抽脂术是使用小的，连接抽吸仪器的称为套管的麦杆-状装置，去除额外的脂肪。使用套管抽脂可以使整容医生安全有效地去除特定部位的深层和浅层脂肪。

微型脂注入：一种使用自身脂肪的软组织填充形式，以填充和美观由于年龄，日晒-伤害，受伤或手术造成的皱纹，折痕和压力。

微型染色：灌输色素进入皮肤的永久性方法而增加皮肤颜色，用于治疗白癫风，皮肤移植或烧伤疤痕和美容。

莫氏显微手手术：使用显微镜一层一层地精确去除皮肤瘤。

指甲手术：去除或修复指甲形态，从而进行诊断和/或治疗。

注射术：注射溶液去除肿胀和网状腿部血管。

软组织填充：填充物质通常用于使脸部皱纹，皱褶和凹陷“丰满”和最小化，使皮肤更光滑和更美观。填充物可以在皮下注射。牛胶原质和相关材料，自身脂肪和聚合体移植是美化特定面部位置和改善压力和疤痕的有效方法。

干燥病或干燥皮肤

干燥病是皮肤干燥的医学术语。在寒冷气候中这是一个常见的问题。寒冷时，人工加热使得干燥空气更为干燥，其象海绵作用，通过加强的表面蒸发“吸出”皮肤中的水分。而水分是皮肤“柔软”的主要因素，干燥皮肤将变得粗糙，鳞片状，甚至发红，灼热，骚痒。严重时这些改变将具有皮炎表现。治疗“冬季骚痒”方法有1)增加相应的空气湿度；2)减少加剧问题的因素，如过多的洗澡和使用粗糙肥皂；和3)用润肤霜，洗液，或油膏使皮肤保湿。

胚胎皮肤细胞蛋白制备

在妊娠的特定阶段，胚胎皮肤受伤之后的恢复无伤疤形成或伤疤形成极小时获得的胚胎皮肤细胞的诱导性细胞裂解(诱导性细胞破裂)，提供了用于平衡协调(调整)皮肤炎症，皮肤再生和皮肤修复的胚胎皮肤细胞蛋白。

所述的诱导性细胞裂解获得的所述蛋白包括一种或多种蛋白的混合物，其可以含有或不含有皮肤细胞成分如脂质，多醣，和核酸及/或其它生物-分子。

所述的诱导性细胞裂解可以获得所述的蛋白，在诱导细胞裂解时蛋白在细胞中以生理的、自然的或正常的(或自然平衡的)蛋白混合物形式存在。与细胞裂解获得所述蛋白不同，将活细胞引入组合物治疗皮肤情况，失调或疾病时并不能获得所述的蛋白。引入组合物的活细胞获得的蛋白在特性和性质上不同于诱导性细胞裂解获得的蛋白。

所述的胚胎皮肤细胞蛋白包括的细胞因子包括生长因子，白介素，淋巴因子，单核细胞激活素，干扰素，菌落刺激因子和趋化因子。此外，所述的胚胎皮肤细胞蛋白包含其它蛋白或多肽，如酶，细胞外基质结构蛋白如胶原质，弹性蛋白，纤维联结蛋白，微纤维蛋白和/或层粘连蛋白。所述的结构蛋白可以以蛋白多糖的形式存在；其中的蛋白与粘多糖(GAGs)链或重复二糖单元连接。

此外，所述的胚胎皮肤细胞蛋白也包括其它蛋白或多肽，包括但不局限于神经多肽，神经多肽拮抗剂，蛋白酶，和/或蛋白酶抑制剂。

胚胎皮肤细胞蛋白可以方便地被处理，纯化，分离，浓缩，修饰，分馏，灭菌和储存。此外，胚胎皮肤细胞蛋白可以带有或不带有先前描述的修饰而被整合入不同的输送制剂，载体和药剂。

制备胚胎皮肤细胞蛋白的胚胎皮肤细胞可以从完整皮肤组织、皮肤组织片段和/或来源于胚胎皮肤细胞培养的皮肤细胞获得。胚胎皮肤细胞培养物或胚胎皮肤细胞系是使用标准皮肤培养程序的技术从完整皮肤组织，皮肤组织片段或皮肤活组织检查中获得的。胚胎皮肤细胞或胚胎皮肤细胞系是原初细胞(具有有限生命周期的细胞系)。

为了获得连续或永生胚胎皮肤细胞或胚胎皮肤细胞系，可以将配体皮肤细胞进行永生化。连续或永生细胞是被高度期望的，其可提供具有指定特性的稳定的、无限的细胞来源。相反，非-永生细胞在体外只能生长有限的细胞分裂周期。此外，原初细胞比永生细胞具有更大的可变性，难以获得具有繁殖特性的细胞和细胞源。使用永生细胞的不良作用是永生细胞系可能具有恶性表型。然而，我们最近发展了使用充分-鉴定的永生化技术制备永生细胞系，提供带有较小的恶性表型可能性的连续或永生的细胞系。细胞永生化技术在过去几年中已经有了重要发展。正常的哺乳动物或体细胞由于其不具有维持端粒酶长度和染色体稳定性的能力而只有有限的生命周期。将端粒酶单独或与其它永生化基因联合表达，以制备遗传稳定的，具有明显地不确定的继代增殖能力的非-肿中瘤性细胞系。

胚胎皮肤(胚胎皮肤组织)从人类胚胎或动物胚胎中获得。通常，人胚胎皮肤组织可以在妊娠的任何时期获得。然而，最好在妊娠的三分之一至中期前，无伤疤形成时获得胚胎组织。例如，人类胚胎皮肤组织最佳获得时期在妊娠的6至24周。更优选地，人类胚胎皮肤组织在妊娠的8-18周获得。最优选地，人类胚胎皮肤组织在妊娠的12-16周获得。

胚胎皮肤活组织检查可以通过妊娠中断，随后用宫内手术或内窥镜或其它产前检查相关的方法而获得，如Holbrollk K.A.(Arch Dermatol.1993，129：1437-1454)或Cadrin C.和GolbusM.S.等所述(West J Med.1993，159：269-272)。

通过妊娠中断，宫内手术或产前检查捐赠组织的妇女将用血清学检查筛选多种感染疾病，包括但不局限于人类免疫缺陷病毒，乙肝病毒，丙肝病毒，巨细胞病毒和梅毒。在组织收集阶段，Donor eligibility and donor(mother)serology的操作将参照目前FDA(http://www.fda.gov/cber/index.html)和ICH(http://www.ich.org)法规，指南和推荐。

随药物和/或其它原因造成的妊娠中断而获得胚胎皮肤组织，从流产的胚胎中通过胚胎皮肤biopsy活体组织检查和/或外科切除可以获得制备细胞培养的足够大的胚胎皮肤组织。当执行妊娠中断时，组织收集将根据法律和伦理规则执行。通过妊娠中断获得的胚胎皮肤组织被用于建立胚胎皮肤细胞库和/或胚胎皮肤细胞系。

外科干预治疗目前应用于筛选具有出生后高死亡率或严重病态的解剖学缺陷的胎儿。将来，由于对母亲和胎儿的安全性，用宫内手术干涉作为胎儿手术治疗非-生命-威胁的疾病时将变得可能。宫内手术获得的胚胎皮肤组织可以用于建立胚胎皮肤细胞库和/或胚胎皮肤细胞系。

为了诊断严重遗传性皮肤病的不同形式(J Dermatol Sci1999，19：1-8)如大疱性疾病(如大疱性表皮松解症)，角质化疾病(如鱼鳞癣)，色素细胞失调(如眼皮肤白化病)，和表皮附加物失调(如外胚层发育异常)，以及对胎儿22号染色体三倍镶嵌型进行鉴定，需要通过活体组织检查或其它方法获得胚胎皮肤。

通常，产前诊断在妊娠的16至22周进行。不用于诊断的皮肤样本；其中胎儿未感染疾病，可以用于建立胚胎皮肤细胞库和/或胚胎皮肤细胞系。

胚胎皮肤组织用解剖刀，小刀和/或其它剪切工具分割成中等大小碎片(例如，0.5mm³)，并以给定的种植密度(例如，每个10cm直径板放置10个碎片)放置入合适的培养板中(例如，10cm直径板)。

在合适的细胞培养条件下从胚胎皮肤组织片段中生长获得胚胎皮肤细胞。合适的细胞培养条件包括，但不局限于使用补充10％胎牛血清(FCS)的Delbecco’s Modified Eagles Medium(DMEM)。在细胞培养箱中以标准细胞培养条件(例如，37℃，＞80％相对湿度和5至10％CO₂的人工气候)获得细胞的生长。

经过合适的培养时间后，通常为5至12天，依赖于精确的细胞培养情况和胚胎皮肤组织的选择，含有剩余的胚胎皮肤组织和生长的胚胎皮肤细胞的培养板可以挑选出，以获得来源于胚胎组织的单独的胚胎皮肤细胞。酶，如胰酶(例如，溶解于0.1％乙二胺四乙酸(EDTA)的0.25％胰酶)或其它蛋白水解酶(例如，蛋白酶)被优先选取。此时，来源于胚胎皮肤组织的胚胎皮肤细胞可以从培养板中集中，收集和合适地保存以便将来应用或使用。细胞可以通过离心(例如2000g，15分钟)或其它细胞收集方法。

可选地，胚胎皮肤细胞可以是永生的。源于包括胚胎皮肤角化细胞的细胞组织的永生细胞系的制备方法已有叙述(BurnettTS et al，J Gen Virol 64，1983，1509-1520；Brown KW et al，Br J Cancer 56，1987，545-554)。通常这些方法包括细胞的转染和转化。

永生化指制备的细胞，其能够理想地、无限期地在体外培养相当长时间。一种永生细胞在给定的生长条件下是永生的。一种细胞在以下情况下是永生的，如果其可以在给定给定生长条件下培养超过20代，优选地超过30代，更优选地超过40代，而最优选地超过50代。这些细胞也称为连续细胞系。相反非-永生细胞只能在体外生长有限的代次。永生细胞是高度被期望的，其可提供具有指定特性的稳定的，无限的细胞来源。该应用中，术语“有条件的永生”和“永生”可以交互使用。

制备永生胚胎细胞系的技术包括放射，化学突变，病毒，重组病毒或重组DNA(Stacey G.和MacDonald C.，Cell BiolToxicol 17，2001，231-246)。制备遗传稳定和非-癌变的细胞系的技术是是胚胎皮肤细胞永生化的首选。例如，这种永生化技术包括将端粒酶催化亚单位(hTERT)基因转化入正常来源的细胞(Bodnar A.G.等，Science 279，1998，349-352；Morales C.P.等，Nature Genetics 21，1999，115-118)。这些技术已经成功应用于人类皮肤纤维原细胞(Vaziri H.F.和Bechimol s.，Oncogene18，1999，7676-7680)和其它细胞类型。这种转染技术可以获得延长生命-跨度的细胞系，而其不同于由癌基因转染所制备的产物，是稳定的并保留原初细胞重要特征。并且，永生基因，SV40T抗原，目前应用于新的重组物，与端粒酶联合，和存在于导致可逆永生化的Cre-lox结构中(Cascio S.M.，Artificial Organs 25，2001，529-538)。

制备永生人类细胞系的最常用方法包括使用SV40序列，更具体地为SV40大T抗原DNA作为永生化试剂。可选地，细胞转化 方法可以是电转化，或其它已知技术，例如Sambrook等在分子克隆，实验室手册，冷泉港出版，1988，中的叙述，该文献通过引证在此并入本文。

许多科学出版物报道了使用SV40载体和含有SV40大T抗原的载体制备永生化细胞系。引入这些序列的方法通常有使用SV40病毒或腺病毒-12SV40杂交病毒感染，或用含有劳氏肉瘤病毒长末端重复和Ori-SV40早期区域的重组质粒通过磷酸锶共-沉淀转染细胞。

另一种已知的制备永生细胞系，特别是永生角化细胞的方法，包括用人乳头瘤病毒(HPV)DNA序列转染或感染细胞。

更多的方法是使用至少一种从以下组中选择的基因或多肽，腺病毒E1A基因的12S和13S产物，hTERT，SV40小T抗原，SV40大T抗原，乳头瘤病毒E6和E7，Epstein-Barr病毒(EBV)，Epstein-Barr核抗原-2(EBNA2)，人T-细胞白血病病毒-1(HTLV-1)，HTLV-1tax，松鼠猴疱疹病毒(HVS)，突变p53，myc，c-jun，c-ras，c-Ha-ras，h-ras，v-src，c-fgr，myb，c-myc，n-myc，和Mdm2。

无-血清培养基(或培养物)在分离和制备永生上皮细胞，特别是人角化细胞中的使用已经有所描述。例如，Barbosa等(Oncogene，4，1989，1529-1532)描述了电击或脂质体转染的人角化细胞在低钙，无-血清培养基中的最初培养直至汇合。

胚胎细胞可以自然分泌一种或多种生物活性分子。可选地，细胞可以通过遗传改造以分泌高水平的一种或多种生物活性分子。分泌可以通过基因开关控制或其可以是构成性的。例如，细胞可以改造以表达或提高表达蛋白或其它基因产物，或抑制蛋白或基因产物。其它操作可以包括插入(插入，置换)或敲除(去除)一个基因或现有基因或基因产物的突变体。

任选地，细胞可以在使用前去除有丝分裂活性。例如，这种有丝分裂去活性可以通过包括γ或X-射线的放射，和/或UV光线完成。去活性也可以通过使用化学-基础有丝分裂抑制物和/或丝裂霉素而完成。

该发明的一个优点是创造了胚胎皮肤细胞库或胚胎皮肤细胞库系统，其可以稳定和及时提供胚胎皮肤细胞蛋白。细胞库系统是一种通过对源于同一个主细胞库(MCB)的细胞进行培养制备连续批次产物的系统。通常，细胞库系统确定的代次水平或群体数量要两倍于常规制备方法所获。

主细胞库是分装于容器内的细胞培养物，其按一定方法一同处理以保证同一性并按一定方法保存以保证稳定性。主细胞库通常储存于-70℃或更低温度。主细胞库通常是充分鉴定的。工作细胞库是源于主细胞库的细胞培养物，用于准备细胞培养物的制备。工作细胞库通常储存于-70℃或更低温度。

例如，通过捐赠者胚胎皮肤收集胚胎皮肤组织从而获得或建立胚胎皮肤细胞库；在合适的细胞培养条件下生长胚胎皮肤组织并繁殖胚胎皮肤细胞；通过胰酶，胶原酶和/或其它蛋白酶等酶，将培养的组织和细胞分离获得悬浮液；汇集悬浮的胚胎皮肤细胞以从培养物中制备一般均一的细胞悬液；轻柔混合冷冻保护剂(见下文)；将胚胎皮肤细胞悬液分装于安瓿并密封；冻存(见下文)，制备胚胎皮肤细胞库。

优选地，胚胎皮肤细胞是胚胎真皮纤维原细胞和/或胚胎表皮角化细胞，和/或胚胎黑素细胞或任何可能的联合或混合物。

可以使用各种低温贮藏细胞，包括组织和蛋白的方法。冻-融技术中，细胞外溶液冻结，而为减缓细胞内冰冻形成速度则逐步进行操作。在玻璃化冷冻过程中，将尝试完整样品中的冰冻形成。由于细胞内将形成冰晶，其对于融解后的细胞活力是有害的，所以从前使用的方法是有问题的。然而，用无-毒性的防冻剂以受控的速度进行冷冻的细胞可以在冻-融循环中存活。玻璃化冷冻的后期研究将关注通过使用非常高浓度的溶液和/或聚合体阻止冰冻形成，防止潜在的细胞内和细胞外冰冻的危害。然而，细胞在长期暴露于有害水平的这些玻璃化冷冻需要的附加成分时将产生细胞损害。

含有甘油，丙二醇，乙二醇，和/或二甲亚砜的防冻剂是优选的。本发明的一个优选实施方案中，防冻剂为含有1.5M至2.5M甘油，优选为2M甘油的Dulbecco’s Modified Eagle’s培养基。根据特殊应用，这些溶液可以由本领域中的技术人员使用已知的防冻剂和冷冻，储存，融化，和漂洗过程进行优化，以维持最大活性。

冷却步骤是冻-融过程中的关键步骤。每种细胞类型具有完全不同的特性，最佳的低温贮藏条件可以由于不同细胞类型而多样化。本发明的一个优选实施方案中，分装进行冻存的细胞以每分钟降低1℃的速度降温直至负70℃。大约24小时后细胞转移至液氮中并/或液氮气相中储存(10年或更久)直至使用。

蛋白和其它细胞-相关材料或生物分子通过诱导性细胞裂解或诱导性细胞破裂而获得(Becker等：Biotech Advs 1，1983，247-261；Schutte等，Biotechnol Appl Biochem 12，1990，599-620)。虽然一些生物蛋白由细胞分泌或通过细胞自我分解释放(自动或自然的细胞裂解)，但是许多其它细胞内的蛋白(细胞内蛋白)需要诱导性细胞裂解而获得(释放)。

裂解细胞的大量技术已经存在或正在发展。这些技术可以分为两组“机械的”和“非-机械的”。它们可以单独或联合使用裂解细胞。机械的细胞裂解将使用高速搅拌器，微珠碾磨，喷射流和持续细胞裂解系统而完成。非-机械的细胞裂解通过物理的，化学的或酶方法完成。物质方法是减压，渗压震扰，热分解或超声。化学方法将使用抗生素，螯合试剂，去垢剂，高pH，chaotropens或溶剂。酶方法将使用细胞溶解酶，裂解酶或自身裂解酶。

碾磨，高压均质化，(例如French压，X-亚，等)，超声波降解和冻-融法使用剪切力和压力破碎细胞。因此，需要关注防止或限制在用于细胞破裂的条件下造成的酶活性丧失。

一个优选实施方案中，胚胎皮肤细胞通过一次或多次冻-融循环而裂解(破裂)。出于此目的，胚胎皮肤细胞在冻-融前悬浮于水相系统。水相系统包括但不局限于培养基(例如DMEM、MEM，等)，缓冲液系统(例如，pH7.4缓冲液，等)，生理缓冲液(例如，PBS，PBSw/o Ca⁺⁺和Mg⁺⁺，HEPES，等)，非-生理缓冲液系统，水溶剂(例如，水，等)和/或其联合或混合物。本发明的一个优选实施方案中，细胞悬浮于含有或不含有Ca(II)和Mg(II)的磷酸盐缓冲液(PBS)(称为磷酸缓冲盐系统)。

将胚胎皮肤细胞以特定的细胞浓度悬浮于水相溶液中，经冻-融裂解胚胎皮肤细胞获得胚胎皮肤细胞蛋白。胚胎皮肤细胞悬浮的细胞浓度可以在每毫升(ml)水相溶液中几千至几百万个细胞间变化。本发明的一个优选实施方案中，胚胎皮肤细胞悬浮液的每毫升(ml)水相溶液含有100至60,000,000个胚胎皮肤细胞。另一实施方案中，胚胎皮肤细胞悬浮液的每毫升(ml)水相溶液含有1,000,000至30,000,000个胚胎皮肤细胞。另一实施方案中，胚胎皮肤细胞悬浮液的每毫升(ml)水相溶液含有5,000,000至25,000,000个胚胎皮肤细胞。在优选实施方案中，胚胎皮肤细胞悬浮液的每毫升(ml)水相溶液含有10,000,000至20,000,000个胚胎皮肤细胞。

胚胎皮肤细胞蛋白可以由活性胚胎皮肤细胞，非-活性胚胎皮肤细胞或活性胚胎皮肤细胞和非-活性胚胎皮肤细胞的混合物制备。本发明的一个优选实施方案中，大于80％活性的胚胎皮肤细胞悬浮于水相溶液中并随后通过冻-融裂解。

另一实施方案中，等于或小于80％活性的胚胎皮肤细胞悬浮于水相溶液中并随后通过冻-融裂解。通常，在制备好胚胎皮肤细胞水相系统悬液后立即进行细胞裂解。细胞活性可以使用经典细胞活性方法测定。

可选地，用于冻-融的水相系统可以在细胞裂解之前用防冻剂，蛋白酶抑制剂，糖苷酶抑制剂，稳定蛋白的化学物质，防止蛋白还原的化学物质，抗氧化剂，防腐剂，抗菌剂和/或其它化学物质进行处理。该处理可以对由胚胎皮肤细胞诱导性细胞裂解获得的胚胎皮肤细胞蛋白起到帮助保护和/或稳定作用。而且，该处理可以帮助维持或提高胚胎皮肤细胞蛋白的功能或活性。

可选地，胚胎皮肤细胞蛋白可以进行纯化以获得期望成分的和/或纯度的胚胎皮肤细胞蛋白。出于此目的，可以使用已知的技术，如“蛋白分析和纯化-台式技术”(Rosenberg I.M.，Birkauser，Boston)所描述的，该文献通过引证在此合并于本文。

可选地，胚胎皮肤细胞蛋白可以通过离心分离成沉淀(主要含有非可溶成分)和上清(主要含有可溶成分)。经过或不经过进一步的操作和/或纯化，上清可以整合入一种载体。其含有胚胎皮肤细胞蛋白。可选地，经过或不经过进一步的操作和/或纯化，沉淀可以整合入一种载体。

可选地，胚胎皮肤细胞蛋白或其任何片段可以通过乙酰化，酯化，聚乙二醇化，糖基化进行化学修饰和/或与聚合体化学交联，以提高胚胎皮肤细胞蛋白的化学/物理稳定性和治疗活性。

本领域的技术人员熟悉的许多文献描述了蛋白稳定方法，并且大量化合物被用于防冻剂(Cryobiology 25，1988，244-255；Pharm Res 8，1991，285-291；Advanced Drug Delivery Reviews46，2001，307-326)。常用的防冻剂包括，例如，糖，多羟基化合物，特定氨基酸和合成聚合体。其它防冻剂包括，例如，无机盐，有机盐或混合成分。适合的糖的非限制性示范例包括，例如，蔗糖，乳糖，葡萄糖，trealsose和麦芽糖。使用的多羟基化合物的示范例包括，例如，乙二醇，甘油，山梨糖醇，甘露醇，肌糖，木糖醇，2-甲基-2，4-戊二醇。氨基酸的示范例包括，例如，谷氨酸钠，脯氨酸，丙氨酸，甘氨酸，赖氨酸和羟基脯氨酸。聚合体的示范例包括，例如，聚乙二醇，右旋糖苷和聚乙烯吡咯烷酮。使用的无机盐示范例包括，例如，硫酸钠，硫酸铵，磷酸钾，硫酸镁和氟化钠。有机盐的示范例包括，例如，醋酸钠，聚乙烯钠，辛酸钠，丙酸盐，乳酸盐和琥珀酸盐。混合防冻剂的示范例包括，例如，二甲亚砜，乙醇，三甲胺N-氧化物，肌氨酸，甜菜碱，γ-氨基丁酸，羧乙基精氨酸，2，2-亚氨双丙氨酸和N-羧基-甲基丙氨酸。

蛋白酶抑制剂可以进一步用于防止胚胎皮肤细胞蛋白的蛋白水解。蛋白酶抑制剂包括但不局限于丝氨酸蛋白酶抑制剂(例如，亮抑蛋白酶肽，抗蛋白酶素，PMSF，AEBSF，等)，胱氨酸蛋白酶抑制剂(例如，亮抑蛋白酶肽，抑凝乳蛋白酶素，等)，天冬氨酸蛋白酶抑制剂(例如，抑肽素A，等)金属蛋白抑制剂(例如，EDTA，1，10-邻二氮杂菲，氨肽酶N抑制剂，内皮素转化酶抑制剂，TIMP 1，TIMP 2，等)和其混合物。

可以将蛋白酶抑制剂在进行诱导性细胞裂解前加入其水相溶液，以及/或者在进行诱导性细胞裂解后获得胚胎皮肤细胞蛋白时加入。优选的实施方案中，EDTA加入水相系统进行冻-融。

蛋白可以由其它方法如冻-干或冻干法保存。

另外，稳定胚胎皮肤细胞蛋白的试剂可以加至包括胚胎皮肤细胞蛋白的组合物中。

细胞培养基提供的成分使细胞在受控的，人工的条件下进行体外生长。当培养基孵育细胞时，其称为“消耗”或“条件培养基”。条件培养基含有许多培养基的原始成分，以及多种细胞新陈代谢产物和分泌蛋白，包括，例如，生物活性生长因子，炎症调节物和其它细胞-外蛋白。本发明的一个实施方案中，通过培养胚胎皮肤细胞获得的条件培养基可以直接或整合入载体用于局部应用。

组合物制备

胚胎皮肤细胞蛋白可以整合入一种载体以适合于局部，肌肉，口服，直肠和/或阴道给药。

包括适合于局部，肌肉，口服，直肠和/或阴道给药的可接受的载体是那些局部应用的载体；典型地直接针对皮肤和粘膜以及折中的，非完整的或病理的和/或受伤皮肤和粘膜。这与典型的系统制备物相反，其可以通过口服或注射途径，并通过整个系统起作用而非直接针对身体表面。

优选地，载体是一种局部可接受载体。术语“局部可接受载体”指任何媒介，佐剂，赋形剂，稀释剂，已知其在药物学，食品或美容领域中应用于皮肤(或粘膜组织的表皮层)以及真皮/粘膜给药。载体的选择将根据特定的活性药物，例如，其在特定载体中的分散性(亲水或疏水)，以及其它特性如其应用位置的大小和表面性质(例如洗头液实用于头皮而对于较小面积则药膏是更适合的，等等)。

这些将包括局部可接受液体，面霜，油，洗液，药膏，凝胶，或固体，包括但不局限于常规化妆晚霜，化妆日霜，粉底霜，防晒液，遮光剂，洗手液，水凝胶，彩妆和妆前霜，面膜，海绵及类似物。组合物可以包括其它可选的合适成分，如雌激素，维生素A，C和E，含α-羟基的α-酮酸，如丙酮酸，乳酸或乙醇酸，羊毛脂，凡士林，芦荟，甲基或丙基乙酯，色素和类似物。合适的局部可接受载体包括水，凡士林油(凡士林)，矿脂，矿物油，植物油，动物油，有机和无机蜡，如微晶蜡，石蜡和地蜡，自然的聚合体，如苍耳烷，凝胶，纤维素，胶原质，淀粉，或阿拉伯树胶，合成聚合体，如，酒精，多羟基化合物，和类似物。赋形剂包括溶剂，表面活性剂，润肤剂，防腐剂，着色剂，芳香剂和类似物。优选地，载体是一种在水中充分混合的水混合载体成分。这种水混合局部化妆可接受载体成分可以包括那些由上述的一种或多种恰当成分制成的载体成分，但也可以包括持续或延缓释放载体，包括含水的，水分散性或水溶性成分，如脂质体，微海绵体，微球或微囊，水相基础软膏，油-包-水或水-包-油乳液，凝胶或类似物。

胚胎皮肤细胞蛋白可以按0.001％至95％的体积或重量比整合入组合物中。优选地，胚胎皮肤细胞蛋白按0.01％至5％的体积或重量比整合。

一个优选实施方案中，以每毫升生理缓冲液(例如，PBS)含1千万至2千万个细胞的悬浮液(分散液)制备胚胎皮肤细胞蛋白，所获得的胚胎皮肤细胞蛋白以0.05％至0.25％体积或重量比整合入适合于局部，肌肉，口服，直肠和/或阴道给药的载体。

在各种实施方案中，载体是一种局部制备物或剂量形式。局部制备物是药膏，面霜，凝胶和洗液。Bhuse L.等定义的这些局部剂量形式(Int J Pharm 295：2005，101-112)。

另一实施方案中，载体是液体，泡沫，摩丝，喷雾，气雾剂，油-包-水乳液，水-包-油乳液，三重乳液，纳米乳剂，微乳液，水凝胶，溶液，糊状物，凝胶和/或分散剂或悬浮剂。载体可以含有囊泡，脂质体，纳米微球，微球，纳米微粒，微粒，脂滴，固体颗粒，色素和/或水滴。

本领域的技术人员应当意识到本发明组合物的任意参考品包括含有一种或多种与载体相连的胚胎皮肤细胞蛋白的任意组合物。

本发明的组合物可选地含有细胞外结构基质蛋白，胶原质，藻酸盐，藻酸盐珠，琼脂糖，壳聚糖，纤维蛋白，纤维蛋白胶，纤维蛋白原，血浆纤维蛋白珠，透明质酸，透明质酸，全血浆或其成分，层粘蛋白，纤维结合蛋白，蛋白聚糖，热激活蛋白，壳聚糖，肝磷脂，和/或其它合成聚合体或聚合体框架物和/或固体支持物。

本领域的技术人员应当意识到额外的活性药物可以加入本发明的方法和组合物中。这些药物包括，例如，抗-炎症药物，抗-腐败药物，抗氧化剂，抗-痤疮药物，收敛剂，直肠药物，止痛剂，麻醉剂，止痒剂，应对刺激剂，杀菌剂，抗生素，抗组胺剂，抗-牛皮癣药物，抗-红斑痤疮药物，抗-疤痕药物，头发生长药物，抗-秃发药物，抗真菌药物，抗生素，维生素，伤疤修复药物，促脱皮药物，抗氧化剂，激素，刺激因子，皮肤漂白药物，皮肤保护药物，皮肤染色药物，疣去除药物，遮光剂和其任何合适的联合物。也可以加入化妆成分。

止痛剂包括胺和卡因-型局部麻醉剂，酒精和酮麻醉剂，抗组胺剂，氢化可的松和/或其合适的联合物。

胺和卡因-型局部麻醉剂包括柜台发售(OTC)外用止痛药，包括苯坐卡因，苦味酸氨苯丁酯，比狄布卡，diemethisoquin，达克罗宁，利多卡因，普莫卡因，丁卡因，其相应的盐和其合适的联合物。优选实施方案中，盐酸普莫卡因作为止痛剂。优选实施方案中含有0.5至1％的盐酸普莫卡因。

酒精和酮类型局部麻醉剂包括OTC外用止痛剂，包括苯甲醇，樟脑，薄荷醇，苯酚，间苯二酚和其合适的联合物。一些优选实施方案中，樟脑或薄荷醇作为止痛剂。

抗组胺剂局部麻醉剂包括OTC外用止痛剂，包括氢化可的松和氢化可的松醋酸盐。

应对刺激剂OTC麻醉剂包括异硫氰酸烯丙酯，稀释的氨溶液，水杨酸甲酯，松节油，樟脑，薄荷醇，二氢氯化物组胺，甲基烟酸酯，辣椒素，线辣椒，辣椒油树脂和其合适的联合物。

皮肤杀虫剂OTC药物包括尿囊素，氢氧化铝，炉甘石，可可脂，鱼肝油，clloidal oatmeal，二甲基硅油，丙三醇，硬脂酸甘油酯，高岭石，羊毛脂，矿物油，凡士林，局部糊剂，白凡士林，zinczcetate，碳酸锌，氧化锌，醋酸铝，硫酸铝和其合适的联合物。

抗菌剂OTC药物包括酒精，洁而灭，氯化苄乙胺，含樟脑的间甲酚，含樟脑的苯酚，桉叶脑，己基间苯三酚，异丙醇，薄荷醇，甲基苄索氯铵，水杨酸甲酯，苯酚，聚维酮碘，麝香草酚，杆菌肽，杆菌肽锌，盐酸金霉素，硫酸新霉素，盐酸四环素，氯碘羟喹，氯酚醚，硝酸咪康唑，托萘酯，十一碳烯酸和其钙盐，铜和锌-盐，克霉唑，间苯二酚，间二酚-乙酸酯，水杨酸，硫化物，过氧化苯酰和其合适的联合物。

理想地，将选择那些不干扰或最小干扰胚胎皮肤细胞蛋白活性的药物，成分和/或活性物质。

本领域的普通技术人员知道上述OTC药物的浓度或浓度范围。此外，多种OTC药物的组合也是可行的。

关于制备药物组合物的信息可见，例如：“药物生产制备手册”第3卷：液体制品，第4卷：半固体制品和第5卷：柜台发售制品，(S.K.Niazi编辑，CRC出版，Boca Raton，2004)。此外，关于制备美容或美容学组合物的信息可见Happy杂志(http://www.happi.com/special/formulal.htm)此外，美容或美容学组合物的信息可从多种途径获得，如Croda，Ciba，BASF，Dow Chemicals，等。

组合物的使用

本发明也提供了对病人皮肤易感或影响部位施用本发明组合物的治疗有效剂量以防止或治疗皮肤情况，失调或疾病的方法。

防止或治疗的皮肤情况，失调或疾病包括，但不局限于炎症皮肤情况，神经或神经炎症皮肤情况，急性和慢性创伤，急性和慢性溃疡，及烧伤。

一个优选实施方案中，炎症性，神经性和/或神经性皮肤情况是包括阴前庭炎和外阴硬化性苔的外阴疼痛。

本发明的另一实施方案中，所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病包括粘膜情况，失调或疾病，其中粘膜或粘膜组织与治疗的皮肤相邻。

所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病实施例进一步包括痤疮，遗传过敏性皮炎，过敏性接触皮炎，白色萎缩，头皮屑，皮炎，手部湿疹，疱疹，尿疹，湿疹，全身剥脱性皮炎，瘢痕疙瘩，局部或全身性搔痒症

皮肤瘙痒，光线性皮肤病，溃疡，牛皮癣，瘢痕，皮脂囊肿，脂溢性皮炎，红斑痤疮，和/或干燥病。

本发明所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病实施例也包括创伤；包括急性和慢性创伤，溃疡；包括急性和慢性溃疡，和/或烧伤。

本发明所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病实施例进一步包括在单次或重复应用皮肤移植(异体，自体)，三-维皮肤构建，和/或其他创伤处理过程期间和/或之后的创伤，溃疡，和/或烧伤。

手术后的创伤也可以用本发明的组合物治疗。手术包括，但不局限于非-美容，美容，整形和/或重建手术程序。

美容，整形和/或重建手术程序包括，但不局限于提胸，丰胸或缩胸，脸部提升，额头提升，鼻子手术，耳朵手术，眼帘手术，腹部手术，去脂技术，脂肪抽吸术，伤痕修复，脂肪移除，软-组织增加，冷冻手术或冷冻治疗，毛发移植，指甲手术，硬化治疗，激光手术，纹身去除和/或血管手术。

此外，所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病实施例包括非-病理皮肤情况，包括但不局限于，正常皮肤和/或健康皮肤，本质的和/或非本质老化或光老化皮肤。此外，所述的组合物治疗的所述的皮肤情况，失调或疾病包括暴露于(接触)美容制品，药物或皮肤病制品，日用品，工业制品和/或含有对皮肤有害成分如腐蚀性化学物，皮肤刺激物和皮肤过敏原的制品的皮肤。

美容和/或皮肤病制品包括，但不局限于含有一种或多种去角质霜，角质松解剂，疣去除剂，毛发去除剂，化学蜕皮剂，物理蜕皮剂，自-晒黑成分，香料，除臭药，去屑活性剂，抗-痤疮药物，抗-炎症药物，抗-红斑痤疮药物，抗-牛皮癣药物，人工化妆品，燃料，颜色添加剂，燃料，皮肤亮化剂，抗氧化剂，脂质，皮肤营养剂，遮光剂，表面活性剂，多聚体，蛋白，肌松药，抗-老化成分，抗-皱纹药剂，湿润剂，保湿剂，维生素，润肤剂，膜-生成药物，脂质体，纳米微粒，微粒，纳米微球，微球和/或任何其可能的混合物和组合物。

本发明另一优选实施方案，所述的组合物用于治疗在美容和/或皮肤病过程中发生的皮肤和/或皮肤情况。美容和/或皮肤病过程包括，但不局限于轻度化学去皮，中度化学去皮，深度化学去皮，物理去皮，上蜡，微晶磨面，皮肤磨削术，光疗(强脉冲光，光调整，可见，非-可见，红外和/或紫外光治疗)，激光治疗，射频治疗，热疗(热，冷，热冷循环)，电疗，超声治疗，理疗(按摩，压，抽气，振动，摩擦，磨损)，氧和/或臭氧治疗，注射和/或任何其联合疗法。所述的组合物与所述的整形和/或皮肤病处理过程可以在整形和/或皮肤病处理过程之前、之后和/或期间(平行)联合使用。

主体可以从由人类，非-人类灵长类，野生动物，狗，猫，马，牛，猪，绵羊，兔子，大鼠和小鼠组成的群组中选择。一个优选实施方案中，主体是人类或动物，如马，狗或猫。

本发明通过参考以下实施例进一步被定义。应该理解，前述详细描述的和下列的实施例仅仅作为例证，并不作为本发明范围的限制。在不脱离本发明的目的和意图下实施的任何修改，包括材料和方法的修改，对本领域的技术人员来讲是显而易见的。除非另有定义，这里使用的本发明所有技术和科学术语与本发明所属领域的普通技术人员的理解具有相同的意义。这里提及的所有应用，专利申请，专利，及其他参考通过在此引述全部合并于文本。如有争议，以本说明书，包括定义为准。

实施例

实施例1：胚胎皮肤组织取样

根据瑞士洛桑大学医院伦理委员会的方针和程序在怀孕终止后立即从胚胎皮肤中获得胚胎皮肤组织样本(皮肤活组织)。

捐赠者eligibility和捐赠者(目前)血清根据目前的FDA(http://www.fda.gov/cber/index.html)和ICH(http://www.ich.org)规章，指南和推荐急性筛选。组织捐赠时，捐赠者的医学背景和血清学应符合这些指南和推荐。

捐赠者资格包括通过评估HIV，乙肝，丙肝，包括CJD的人类TSE，梅毒，及异源移植相关的危险(未从尸体中获得角膜和/或硬脑(脊)膜及人生长激素)。血清试验包括使用有效的抗体方法评估HIV I，HIV II，巨细胞病毒，甲肝，乙肝，丙肝，风疹，弓形体病，梅毒的存在。捐赠者的医学背景不作为任何病毒存在的证据。在活组织取样时和3个月之后通过血清学试验进行验证。

通常，胚胎皮肤组织或皮肤活组织在无伤疤形成恢复或修复发生前取样；例如，怀孕-中期至前三分之一前。人类中，人捐赠组织或皮肤活组织为妊娠12-16周。然而，人捐赠活组织也可以在妊娠的更早期或更晚期获得(包括6-11周和17-24周)。通常，活组织具有全部的皮肤-厚度。可选地，特定厚度的活组织是合适的；其含有真皮和/表皮胚胎皮肤组织。妊娠的更早期，活组织主要含有真皮胚胎皮肤组织。为制备胚胎皮肤细胞库和/或胚胎皮肤细胞系，通过胚胎皮肤活组织取样和/或外科切除获得足够于制备细胞培养大小的一片(或样本)胚胎皮肤组织。通常，胚胎皮肤组织样本为0.5cm²至8com²。

胚胎皮肤组织(或胚胎皮肤活组织)也可以从马中获得。如以下实施例所述，使用相似的方法和过程获得马胚胎皮肤细胞蛋白。

技术人员知道其他可能的方法获得胚胎皮肤组织建立胚胎皮肤细胞库。胚胎皮肤组织可以在子宫内手术时和/或进行需要胚胎皮肤组织样本的产前检查后获得。

实施例2：胚胎皮肤细胞库

建立胚胎皮肤细胞库的典型程序包括由这里给予的胚胎皮肤组织和/或胚胎皮肤活组织样本制备主细胞库(MCB)和工作细胞库(WCB)。通常，细胞库由一个捐赠者的胚胎皮肤制备。制备细胞库的胚胎皮肤样本在怀孕终止后按实施例1所述方法获得。胚胎皮肤样本(活组织)在怀孕16周获得，合适的大小为4cm3。

皮肤样本中，约0.5mm³和更小的组织块通过剪刀和/或使用解剖刀或其他剪切器械制备。组织块以约每板10块的密度种入无菌板中(例如，10cm直径)。这些组织块在含有10％胎牛血清(FCS，Hyclone)的Dulbecco’s Modification of Eagle’s Medium(DMEM)中，于37℃，10％CO₂和95％湿度培养箱中培养。每2或3天更换培养基。当细胞生长1-2周至汇合后，含有皮肤组织和细胞的培养板用含有0.1％乙二胺四乙酸(EDTA)的0.25％胰酶进行酶解。细胞移入离心管离心。随后，收集的细胞(相应于0代次细胞)重悬于含有10％FCS的DMEM中并以每cm²2000个细胞种植于T175培养瓶(Nalge Nunc)。汇合后，按前述方法收集细胞(代次1)并以每cm²3000个细胞种植于T175培养瓶以获得代次2细胞。收集代次2细胞后，分装于合适的冻存管(例如，1.8ml)并冻存于液氮中。对于此目的，细胞重悬于由DMEM，FCS和二甲基亚砜以5∶4∶1混合的冻存液中，以1ml进行冻存分装(含有4百万至8百万细胞)冻存于负70℃或更低温度，并使用Cryo 1℃冷冻容器(Halge Nunc)以达到每分钟下降1℃的速度。细胞放置于冷冻容器24小时后，其被转移至液氮(或气相)保存。获得包括数瓶代次2冻存细胞的胚胎皮肤细胞MCB。

源于人类皮肤细胞的MCB将测试其内源性和外源性特性(无菌，支原体和病毒)和鉴别以确定细胞库的特性。该试验按照(目前)实验室操作规范(GLP)要求，和(目前)欧洲药典委员会(EMEA)的原则和国家药品管理局(FDA)指南，包括国际协调协会(ICH)指南“来源于人类或动物细胞系的生物技术制品的病毒安全性评估”(Q5A)和“制备生物技术/生物制品的细胞的来源和特性”(Q5D)。

MCB试验没有测定出支原体，细菌或真菌。MCB经电镜观察不含有逆转录病毒颗粒，并测定无逆转录病毒的逆转录活性。此外，PCR方法并不测定任何人类病毒，包括人逆转录病毒。其他测试方法不测试MCB中其他病毒来源的物质。MCB的试验结果典型地为人类细胞系。鉴定将验证人源性。概要地，试验显示MCB不含有病毒或病毒来源物质，支原体，细菌或真菌。

使用一瓶MCB建立WCB，细胞种于合适的培养瓶中(例如，Nalge Nunc T175培养瓶)，汇合后收集，按MCB所述进行分装和冻存。WCB可以在代次3时建立。或者，可以将MCB传代2次后在代次4时建立WCB。WCB细胞以每瓶2至6百万细胞装于冻存管并保存于液氮(或气相)中。

源于人类皮肤细胞的WCB将测试其外源性特性(无菌，支原体和病毒)和鉴别以确定细胞库的特性。该试验按照(目前)GLP要求，和(目前)EMEA原则和FDA指南，包括ICH指南“来源于人类或动物细胞系的生物技术制品的病毒安全性评估”(Q5A)和“制备生物技术/生物制品的细胞的来源和特性”(Q5D)。

WCB试验没有测定出支原体，细菌或真菌。WCB的试验结果典型地为人类细胞系。鉴定将验证人源性。概要地，试验显示WCB不含有支原体，细菌或真菌。

本领域的普通技术人员知道，如实施例所述在怀孕16周后终止妊娠获得4cm²胚胎皮肤建立细胞库的方法之外，其他在不同怀孕阶段和/或子宫内手术和/或产前诊断(如实施例1描述)获得的胚胎皮肤组织可以用于建立根据所述条件进行合适修饰的细胞系。

技术人员知道许多细胞库方法可以建立胚胎皮肤细胞库。作为所述方法的简单选择，细胞库(MCB和/或WCB)可以在37℃，5％CO2和＞80％湿度的培养箱中培养建立。可选地，细胞库可以用不同培养容器(例如，许多滚瓶，多-托盘细胞培养器，细胞生物反应器，等)和培养条件(例如，无血清，等)建立根据所述条件进行合适修饰的细胞系。

实施例3：胚胎皮肤细胞增殖

为制备胚胎皮肤细胞蛋白，使用源于胚胎皮肤细胞库的胚胎皮肤细胞，在合适的培养容器中培养，在合适的培养条件下生长(扩增，繁殖)，达到合适的代次后收集并随后通过机械，物理或化学方法裂解。这里给出了由一个或多个WCB瓶(如实施例2所述获得)开始细胞扩增过程的典型程序。实施例4给出了胚胎皮肤细胞收集和随后的细胞裂解典型程序。

第一天，一瓶WCB(含有约2至3百万个细胞，细胞代次3)立即放入37℃±2℃水-浴直至冰恰好融化。瓶中的内容物加入9ml预-热的DMEM，10％FCS并用Beckman GH3.8水平转子(或相当物)于200g(约936rpm)离心10分钟。离心后，细胞沉淀重悬于10ml含10％FCS的新鲜DMEM并进行细胞计数。细胞悬液种植于4个T225培养瓶(提供225Gm²的细胞培养面积，NalgeNunc)，每瓶含40ml DMEM，10％FCS，并在36.5℃±1.5℃，10±1％CO2和＞80％湿度的培养箱中培养6至10天直至培养物汇合。每2天或3天更换培养基。随后，消耗的培养基(条件培养基)从每个瓶中无菌去除，并用大约10m预热的PBS(37℃±2℃)清洗细胞层。去除PBS后，每瓶加入大约3ml胰酶-EDTA(例如，Invitrogen，Ref#25300-062)覆盖细胞层并置水平位置约1分钟。去除胰酶在每瓶中再加入约3ml胰酶-EDTA。瓶子置于36.5℃±1.5℃直到通过肉眼或通过显微镜可见细胞分离。加入大约10ml含10％FCS的DMEM至每个瓶中，中和胰酶-EDTA。细胞悬液用Beckman GH3.8水平转子(或相当物)于200g(约936rpm)离心10分钟。细胞沉淀重-悬于合适体积的含10％FCS的DMEM中。取出少量细胞悬液样本(例如，0.5ml)进行细胞计数。

随后，获得的细胞悬液分装入10至20个T500培养瓶(提供500cm2细胞培养面积，Nalge Nunc)，每瓶含150ml含10％FCS的DMEM，细胞密度为每cm²2000至3000个。在36.5℃±1.5℃，10±1％CO₂和＞80％湿度的培养箱中培养8至12天直至培养物汇合。每2天或3天更换培养基。随后，消耗的培养基(条件培养基)从每个瓶中无菌去除，并用大约30m预热的PBS(37℃±2℃)清洗细胞层。去除PBS后，每瓶加入大约30ml胰酶-EDTA(例如，Invitrogen，Ref#25300-062)覆盖细胞层并置水平位置约1分钟。去除胰酶在每瓶中再加入约30ml胰酶-EDTA。瓶子置于36.5℃±1.5℃直到通过肉眼或通过显微镜可见细胞分离。加入大约30ml含10％FCS的DMEM至每个瓶中，中和胰酶-EDTA。细胞悬液用Beckman GH3.8水平转子(或相当物)于200g(约936rpm)离心10分钟。细胞沉淀重-悬于合适体积的含10％FCS的DMEM中。取出少量细胞悬液样本(例如，0.5ml)进行细胞计数。

细胞悬液分装入100个T500培养瓶(提供500cm²细胞培养面积，Nalge Nunc)，每瓶含150ml含10％FCS的DMEM，细胞密度为每cm²2000至3000个。在36.5℃±1.5℃，10±1％CO₂和＞80％湿度的培养箱中培养8至12天直至培养物汇合。每2天或3天更换培养基。该程序可获得代次为6的胚胎皮肤细胞。

本领域的技术人员知道，对本实施例所述相似的给当定情况进行合适调整，可以将本细胞扩增程序可以扩展至更高代次。通常，细胞扩增程序可以在代次6至10之间停止，并按实施例4所述收集细胞。

本领域的技术人员知道虽然根据所述使用培养瓶进行细胞扩增，可以对所述的条件进行调整而使用许多滚瓶，多-托盘细胞培养器和/或细胞生物反应器。

技术人员也知道可以使用许多细胞扩增方法。对于所述方法的一个简单可选办法，可以在37℃，5％CO₂和＞80％湿度的培养箱中进行细胞扩增。可选地，细胞扩增可以在无血清，部分无血清，和/或血清消耗的培养基中，使用常规技术和细胞培养方法进行。

实施例4：收集胚胎皮肤细胞及制备胚胎皮肤细胞蛋白

本实施例给出了收集胚胎皮肤细胞及随后的胚胎皮肤细胞裂解以获得胚胎皮肤细胞蛋白的典型程序。根据实施例3所述对一个或多个WCB扩增(传代，繁殖)获得胚胎皮肤细胞，其收集按下述方法进行：

1)取出含有胚胎皮肤细胞的培养瓶(例如，T500培养瓶)并无菌去除消耗培养基(条件培养基)。

2)加入合适体积的预-热PBS(例如，T500培养瓶中加入大约30ml；温度37℃±℃)清洗细胞层。前后轻柔摇晃培养瓶充任清洗细胞，随后无菌去除PBS。

3)培养瓶中加入胰酶-EDTA(例如，T500培养瓶中加入大约50ml；例如，Invitrogen，Ref#25300-062)覆盖细胞层并置水平位置约1分钟。

4)去除胰酶-EDTA并加入新鲜胰酶-EDTA(例如，T500培养瓶中加入大约50ml)。

5)瓶子置于36.5℃±1.5℃直到通过肉眼或通过显微镜可见细胞分离。

6)加入合适体积的含10％FCS的DMEM至每个瓶中(例如，T500培养瓶中加入大约50ml)，中和胰酶-EDTA，吸出细胞悬液至无菌离心管中。

7)用培养基清洗培养瓶(例如，T500培养瓶中加入大约50ml)并无菌吸出至同一离心。

8)于室温以合适时间和速度离心(例如，Beckman GH3.8水平转子(或相当物)于200g(约936rpm)离心10分钟)。

9)去除上清。

10)加入合适体积的含10％FCS的DMEM培养基至每个瓶中(例如，T500培养瓶中加入大约50ml)重-悬细胞沉淀。

11)取出部分样本进行细胞计数。

12)按前述离心并去除培养基上清。

13)加入合适体积的磷酸盐缓冲液(PBS)至细胞沉淀(例如，一个T 500培养瓶获得的沉淀中加入大约50ml)并重-悬沉淀清洗细胞。

14)按前述离心并去除培养基上清。

15)重复13和14的PBS清洗步骤。

16)按每16,000,000个活细胞1ml PBS加入至细胞沉淀。可选地，1ml PBS可以加入至更低或更高的胚胎皮肤细胞中以获得更低或更高浓度的细胞悬液。合适的胚胎皮肤细胞悬液由1mlPBS加入至10,000,000至20,000,000个活胚胎皮肤细胞而制备。

17)混合以充分重-悬胚胎皮肤细胞于PBS中。

18)胚胎皮肤细胞重-悬后(步骤17)立即进行三次冻融循环。每次循环包括将含有胚胎皮肤细胞悬液的管子(或冻存管)置于液氮中直至细胞悬液完全冻结，随后将含有冻结细胞悬液的管子置于大约37℃的水浴中直至完全融化。当融化过程中最后残留的冰消失时，立即将含有胚胎皮肤细胞悬液的管子(或冻存管)置于液氮中直至细胞悬液完全冻结进行再-冻结。可选地，干冰甲醇混合物(或其他醇，如乙醇，异-丙醇，等)可以用于冻结。融化也可以在室温进行。本程序使胚胎皮肤细胞裂解以获得胚胎皮肤细胞蛋白。

19)获得的胚胎皮肤细胞蛋白的少量样本进行标准细胞活力测试(例如，MTT-assay，ATP-assay，荧光测试，等)。测定的胚胎皮肤细胞蛋白的细胞活力应低于10％。优选地，胚胎皮肤细胞蛋白不应含有任何活性胚胎皮肤细胞和/或0％细胞活性。若测试的细胞活力大于10％，则对步骤18)或获得的悬液再进行冻-融循环(步骤18所述)直至细胞活力低于10％。本程序使胚胎皮肤细胞裂解从而获得胚胎皮肤细胞蛋白。

20)可选地，步骤1至19获得的胚胎皮肤细胞蛋白可以被处理，分离为上清和细胞沉淀，并/或纯化以获得期望组成，纯度，活力和/或特性的胚胎皮肤细胞蛋白。出于此目的，将参照“蛋白分析和纯化-Benchtop技术”(Rosenberg I.M.，Birkauser，Boston)中所述的技术。

21)最后将胚胎皮肤细胞蛋白分装于合适的冻存管(例如，Nunc 3.6ml内纹冻存管)。

22)保存胚胎皮肤细胞蛋白于负70℃或更低温度直至使用。

本领域的技术人员知道虽然根据所述使用培养瓶进行细胞收集，可以对所述的条件进行调整而使用许多滚瓶，多-托盘细胞培养器和/或细胞生物反应器。

技术人员还将知道，除了PBS，可以对所述的条件进行调整而使用任何其他生理缓冲液(例如，无Ca⁺⁺和/或无Mg⁺⁺的PBS，HEPES，等)清洗胚胎皮肤细胞和制备用于细胞裂解的胚胎皮肤细胞悬液。技术人员也知道，除了生理缓冲液，其他水溶液系统(例如，培养基，非-生理缓冲液，pH-缓冲液系统，水，等)也可以用于制备用于裂解的胚胎皮肤细胞悬液。技术人员也可以知道，用于冻-融的水溶液系统可以在细胞裂解之前补充防冻剂，蛋白酶抑制剂，糖苷酶抑制剂，稳定蛋白的化学物，防止蛋白还原的化学物，抗氧化剂，防腐剂，抗菌剂和/或其他化学物质。

此外，技术人员也将知道，除了冻-融，也可以对所述的条件进行调整而使用许多细胞裂解技术破裂细胞以获得胚胎皮肤细胞蛋白。

获得的胚胎皮肤细胞蛋白也称为“加工的皮肤蛋白”，“加工的皮肤细胞蛋白”，或PSP^TM。

实施例5：胚胎皮肤细胞蛋白的特性

使用商业细胞因子阵列(细胞因子抗体阵列C系列1000.1，RayBiotech，Inc.)分析胚胎皮肤细胞蛋白中细胞因子的存在。本阵列特异针对细胞裂解物设计，可同时测定多种细胞因子表达。根据制造商对阵列的说明(RayBiotech，Inc)对胚胎皮肤细胞蛋白离心后获得的上清进行分析。该-获得的上清未进行进一步的处理。

如实施例3和4所述，从源于胚胎皮肤细胞库(如实施例2所述建立)的胚胎皮肤细胞获得胚胎皮肤细胞蛋白，该细胞库起源于约怀孕16周的皮肤样本(如实施例1所述获得)。除了上述对胚胎皮肤细胞蛋白的离心之外，未对胚胎皮肤细胞蛋白进行纯化，处理和/或补充(如实施例4所述)。

分析显示了胚胎皮肤细胞蛋白中超过100种细胞因子的存在情况。测定了包括生长因子，白介素，淋巴因子，单核因子，干扰素，集落刺激因子和趋化因子的许多细胞因子蛋白家族蛋白。

测定的细胞因子包括，但不局限于生长因子(EGF)，基本纤维原细胞生长因子(hFGF或FGF-2)，β神经生长因子(b-NGF)，纤维原细胞生长因子4，6和9(FGF-4，FGF-6，FGF-9)，粒细胞-集落刺激因子(G-CSF)，粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)，肝细胞生长因子(HGF)，胰岛素-类似生长因子(IGF-1)，干扰素-γ(IFN-γ)，白介素IL-1α和IL-1β，白介素IL-4，IL-6，IL-10和IL-13，白介素受体拮抗剂(IL-1ra)，角化细胞生长因子1(KGF-1或FGF-7)，胎盘生长因子(PGF)，血小板来源生长因子(PDGF)，转化生长因子β1和3(TGF-β1，TGF-β3)，金属-蛋白酶组织抑制子1和2(TIMP-1，TIMP-2)，血管内皮生长因子(VEGF)。本阵列不测定其他许多已知的细胞因子(例如，TGF-β2，FGF-10，等)。

2-维凝胶电泳和质谱分析进一步用于分析胚胎皮肤细胞蛋白。分析将关注凝胶上相应于等电点(pI)在4和8之间及分子量在8000至35000之间的区域。该区域检测到373±42个点(n＝18)。对一些点进行分析并且显示存在几种抗氧化酶，包括超氧化物歧化酶和硫氧还蛋白过氧物酶。

本领域的技术人员知道胚胎皮肤细胞蛋白(如上述获得)含有更多的细胞来源蛋白，细胞外基质蛋白，糖蛋白和/或其他细胞组分或生物-分子，如脂质，脂肪酸，脂肪酸酯，单糖，多糖，DNA和RNA，无机物如矿物和盐，等。

除了本实施例所述的细胞因子阵列和2-维凝胶电泳分析，其他合适的分析方法，如ELISA，GC，HPLC，HPLC联合质谱和/或其他分析和/或蛋白质组研究技术平台可以进一步用于测定胚胎皮肤细胞蛋白特性。

实施例6：胚胎皮肤细胞蛋白活性

实施例5中测定特性的胚胎皮肤细胞蛋白被评估其促进真皮纤维原细胞增殖或细胞生长的能力。如实施例3和4所述，从源于胚胎皮肤细胞库(如实施例2所述建立)的胚胎皮肤细胞获得胚胎皮肤细胞蛋白，该细胞库起源于约怀孕16周的皮肤样本(如实施例1所述获得)。未对胚胎皮肤细胞蛋白进行纯化，处理和/或补充(如实施例4所述)。

按下列所述进行增殖分析。正常8代次的人真皮纤维原细胞，于含10％FCS的DMEM(Invitrogen 21969035)中按5000个细胞每孔种于96-孔板中。12小时后培养基替换成含2％FCS的新DMEM。去除培养基并替换含有(或不含有，作为对照)不同浓度测试物的无血清DMEM。细胞于37℃和5％CO2培养48小时。放射标记的[3H]-胸腺嘧啶脱氧核苷(Amersham TRK686，2.92Tbq/mmole，79Ci/mmol)在培养结束前24小时加入至培养基中。所有操作都作三个重复。

细胞裂解后分析整合入DNA的放射活性，加入1倍体积的裂解缓冲液(Tris/Hcl 50mM，胍4M及EDTA 5mM，pH 8.0)收集DNA，trichloracetic acid三氯醋酸(TCA)沉淀，过滤收集(Skatron收集器和过滤器)，TCA和70％乙醇漂洗，随后通过对特定整合入DNA的放射活性进行液体闪烁量化测定(相对于增殖水平)。

胚胎皮肤细胞蛋白以0.01％和0.25％进行测试，结果为胸腺嘧啶脱氧核苷的整合明显增强，分别为0.05％和0.25％。相对于对照，分别增加305％和361％，在0.01％时，得到轻微的刺激(127％于对照)。

结论，本体外试验显示0.05％和0.25％的胚胎皮肤细胞蛋白可以增强人真皮纤维原细胞的增殖大约3倍或以上。

实施例7：包括胚胎皮肤细胞蛋白的组合物制备

本实施例描述了一系列适合于局部，粘膜，眼部，直肠和/阴道给药的含有胚胎皮肤细胞蛋白的组合物的制备。如实施例3和4所述，从源于胚胎皮肤细胞库(如实施例2所述建立)的胚胎皮肤细胞获得胚胎皮肤细胞蛋白，该细胞库起源于约怀孕16周的皮肤样本(如实施例1所述获得)。除了上述对胚胎皮肤细胞蛋白的离心之外，未对胚胎皮肤细胞蛋白进行纯化，处理和/或补充(如实施例4所述)。

获得的胚胎皮肤细胞蛋白也称为“加工的皮肤蛋白”，“加工的皮肤细胞蛋白”，或PSP^TM。

体外试验中(如实施例6所述)适合于局部，粘膜，眼部，直肠和/阴道给药的胚胎皮肤细胞蛋白在载体中的浓度为0.05％和0.25％之间。

下列实施例将描述含有0.050％或0.065％胚胎皮肤细胞蛋白的组合物的制备。

一种含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(如实施例3和4所述获得)的以水-包-油为基础的霜剂应用标准乳化技术制备。通过将合适的离子，两性-离子和/或非-离子表面活性剂与水(或无机盐或天然泉水)及合适的油恰当混合获得乳液。使用合适的自然的，精练的和/或合成油。合适的自然油包括，但不局限于鳄梨油，桃仁油，琉璃苣油，琉璃苣种子油，茶油，芥花籽油，蓖麻油，椰子油，玉米油，棉籽油，月见草油，棕榈油，棕榈仁油，花生油，菜籽油，红花籽油，甜杏仁油，玫瑰果油，金盏花油，甘菊油，桉树油，剌柏油，红花油，檀香油，茶树油，葵花油，豆粕油，小麦胚油和/或其混合物。通常，这些油将经过精练和/或氢化后使用。也可以使用其他合适的油，如动物，矿物(，硅(或合成油(例如，羊毛脂，凡士林，二甲基硅油，二甲聚硅氧烷，辛酸/癸酸甘油，三酸甘油脂，脂肪酸酯，等)。本制备物也可以含有合适的润肤剂和/或湿润剂如甘油，丙二醇，丁烯二醇，1，3-丁二醇，异己二醇，癸基油酸，泛醇，乙醇，棕榈酸鲸腊酯，甘油硬脂酸和/或其混合物。乳液也可以含有一种合适的抗氧化剂或其联合物，如维生素e，醋酸维生素E，抗坏血酸，抗坏血酸棕榈酸酯，抗坏血酸镁，β-胡罗卜素，BHT，阿魏酸，硫辛酸，辅酶Q10，黄酮，绿茶提取物，白茶提取物，多-酚成分，脲酸，富硒和/或任何其派生物。也可以加入盐类如氯化钠，氯化钾，氯化镁和磷酸盐。糖，如蔗糖，葡萄糖，右旋和左旋麦芽糖，羟基醇，如山梨糖醇，甘露糖醇，木糖醇和麦芽糖醇，和聚合体如卡波姆，葡聚糖，黄原胶，胍胶，藻酸钠，卡拉胶，羟丙基纤维素(HPC)，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，甲基纤维素，聚乙烯吡咯烷酮(PVP)，麦芽糊精，卡波姆，聚乙烯乙醇，聚乙二醇(PEG)，聚氧乙烯，羧甲基纤维素钠(CMC)和羟乙基纤维素(HEC)是合适的流体变力调节物以增加制备物的黏性。

在制备水-包-油乳液基础霜剂组合物的最后步骤中将胚胎皮肤细胞蛋白混合入水-包-油乳液霜剂的外层水相中。在室温或略高温度下将胚胎皮肤细胞蛋白混合入制备物。

使用标准的乳化技术制备霜剂基础(不合胚胎皮肤细胞蛋白的制备物)，随后当霜剂基础达到室温时(20℃至30℃)，用合适的，标准混合方法和装置将胚胎皮肤细胞蛋白混合入霜剂基础，从而获得霜剂1，2和3(下列给定的成分)。

混合方法和装置包括将上述霜剂基础和胚胎皮肤细胞蛋白进行混合，混匀，乳化，均质化和/或分散。

因而，在与霜剂基础混合成最后的悬液(分散液)前，胚胎皮肤细胞蛋白将稀释于合适体积的水中。通常，用水稀释胚胎皮肤细胞蛋白之最终的体积(或重量)浓度为2至5％。一个优选实施方案中，胚胎皮肤细胞蛋白中加入水至最终体积浓度为3％，其随后用合适的，标准混合方法和装置与97％的前述制备的霜剂基础混合。

可选地，防腐剂(例如，parabenes、苯氧乙醇、咪唑烷基脲、异噻唑啉酮、hlycols、等)，蛋白稳定剂(例如，氨基酸，多羟基化合物，糖，合成聚合体，PEGs，PEG-PPG-PEGs，透明质酸，透明质酸钠，层粘连蛋白，肌动蛋白，胶原蛋白，EDTA，等)，蛋白酶抑制剂和/或抗氧化剂可以在加入霜剂基础之前，以合适的浓度加入至所-制备的胚胎皮肤细胞蛋白。

本领域的技术人员知道有不同方法制备水-包-油乳液基础霜剂。可选地，对所述条件进行调整，可以将胚胎皮肤细胞蛋白混合入油-包-水乳液基础霜剂。

霜剂1：

一种按上述制备的含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的水-包-油霜剂，并含有以下其他成分以传递优势：水，氢化花生油，甘油，己酸乙酯，鲸腊醇，PEG-8 C12-18烃基酯，PPG-25-laureth-25，PEG-5季戊酯，羟乙基纤维素，十六醇，棕榈酸鲸腊酯，甘油硬脂酸，氯化钠，抗坏血酸棕榈酸酯，血糖，二甲聚硅氧烷，醋酸盐维生素E，柠檬酸，蓖麻油醇聚醚-40，氯化钾和氯化镁。霜剂进一步含有苯甲基甲酯，对羟基苯甲酸丙酯和咪唑烷基脲以防腐保存。

霜剂2：

一种按上述制备的含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的水-包-油霜剂，并含有以下其他成分以传递优势：水，辛基十二烷醇，甘油基硬脂酸油酸癸脂，甘油，丙二醇，小麦胚芽油，硬脂酸，十六烷醇，鲸蜡硬脂醇醚-20，肉豆蔻酸异十四酯，鲸蜡硬脂醇醚-12，鲸腊醇，棕榈酸鲸腊酯，醋酸盐维生素E，二甲聚硅氧烷，玻璃苣种子油(玻璃苣种子油)，卡波姆，三乙醇胺，对羟基苯酸甲酯，羟基丙脂，glycophingolipids，乙二胺四乙酸二钠和BHT.霜剂进一步含有苯氧乙醇，对羟基苯甲酸乙酯，羟基苯酸丁酯，甲基异丙基噻唑啉酮和甲基氯化异丙基噻唑啉酮以防腐保存。

霜剂3：

一种按上述制备的含有0.065％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的水-包-油霜剂，并含有以下其他成分以传递优势：水，辛酸/癸酸甘油，C12-20酸PEG-8酯，丁二醇，甘油，天然异构寡糖，PEG-8，十六烷醇，辛酸乙二醇，鲸蜡磷酸酯，卡波姆，红没药醇，adcorbyl tetraisopalmitate，咖啡因，乙二胺四乙酸二钠，膜磷脂，甘草次酸，透明质酸，聚丙烯酸钠，柠檬酸，羟基丙脂，生育酚，山毛榉花芽提取物(山毛榉萃取液)，棕榈油(油棕)，生育三烯酚类，抗坏血酸棕榈酸酯，三十碳六烯，抗坏血酸和植物甾醇。霜剂进一步含有苯氧乙醇，对羟基苯酸甲酯，羟基苯酸丁酯，尼泊金乙酯和对羟基苯甲酸异丁酯以防腐保存。

霜剂4：

一种按上述制备的含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的水-包-油霜剂，并含有以下其他成分以传递优势：水，辛酸/癸酸甘油，C12-20酸PEG-8酯，椰油醇辛酸酯/癸酸酯，丁二醇，二甲聚硅氧烷，聚苯基三甲基硅氧烷，biosaccharide gum-1，甘油，十六烷醇，苯氧乙醇，天然异构寡糖，卡波姆，鲸蜡磷酸酯，琉璃苣(琉璃苣子油)，酯化维生素C，辛酰乙二醇，对羟基苯酸甲酯，乙二胺四乙酸二钠，角叉藻(鹿角菜胶)，透明质酸，棕榈油，生育三烯酚类，植物甾醇，羟基苯酸丁酯，尼泊金乙酯，PEG-8，对羟基苯甲酸异丁酯，羟基丙脂，生育酚，柠檬酸，抗坏血酸棕榈酸酯，三十碳六烯和抗坏血酸。

霜剂5：

一种按上述制备的含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的水-包-油霜剂，并含有以下其他成分以传递优势：水，肉桂酸盐类，C12-20酸PEG-8酯，辛酸/癸酸甘油，椰油醇辛酸酯/癸酸酯/，丁二醇，丁基甲氧基二苯甲酰甲烷，十六烷醇，biosaccharide gum-1，甘油，C12-15烷基安息香酸盐，天然异构寡糖，苯氧乙醇，辛酰乙二醇，二氧化钛，鲸蜡磷酸酯，卡波姆，琉璃苣子油，酯化维生素C，对羟基苯酸甲酯，氢氧化钠，乙二胺四乙酸二钠，鹿角菜胶(鹿角菜胶)，透明质酸，油棕(棕榈)油，生育三烯酚类，植物甾醇，羟基苯酸丁酯，硬脂酸铝，聚羟基硬脂酸，尼泊金乙酯，氧化铝，PEG-8，对羟基苯甲酸异丁酯，羟基丙脂，生育酚，柠檬酸，BHT，抗坏血酸棕榈酸酯，三十碳六烯和抗坏血酸。

霜剂1至5含有抗氧化剂如抗坏血酸，BHT，生育酚和生育三醇其一些派生物(抗坏血酸棕榈酸酯，酯化维生素C，醋酸盐维生素E).

霜剂3至5含有蛋白稳定剂如透明质酸盐钠，biosaccharidegum-1和/或天然异构寡糖。

霜剂2至3含有蛋白酶抑制剂：EDTA或EDTA二钠。

霜剂5含有遮光剂(乙基乙基一甲氧基肉桂酸盐，二氧化钛).

水凝胶是亲水的，三-维网络结构，其可以吸收大量的水或生物液体，这样其在很大范围上相似于生物组织(Peppas N.A.等。Eur J Pharm Biopharm.2000，50：27-46)。由于存在化学(约束-点，联结)和/或物理交-联如缠结和微晶，其是不可溶的。这些材料可以相应于许多身体内的生理刺激，如pH，离子强度和温度而合成。

水合凝胶是基于亲水聚合体的，其为交-联结构以防止在水中分解。除了水合凝胶可以含有大量水分，也可以使用其他装置输送蛋白(Int J Pharm.2004；277：99-104)。

可以使用藻酸，胶原质，右旋糖酐，凝胶，淀粉，cextran-lactate，透明质酸，壳多糖，聚(乙烯醇)(PVA)，乙烯乙酸聚-1-乙交酯，陶质羟基磷灰石，n-乙烯基吡咯烷酮，聚乙烯二醇，聚(乙烯)-b-聚(氧化丙烯)共聚物(pluronics)和其派生物与水或水溶液混合获得水合凝胶。

经化学或物理交联链获得水合凝胶。可以通过戊二醛处理，冻-融处理聚合，放射-引发的交联(例如，UV光线)或装配蛋白链的断裂获得交-联。将右旋(I)-乳酸和右旋(d)-乳酸溶液混合，通过对映结构寡聚乳酸链形成立体复合结构，是一种物理交联方法(Int J Pharm.2004；277：99-104.)。

凝胶1：

使用15至22％的泊洛沙姆407(Lutrol F127，BASF)制备含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白(或PSP)的凝胶。也可加入防腐剂。

实施例8：使用组合物治疗外阴疼痛和/或阴前庭炎

霜剂1(如实施例7中所述制备)和霜剂2(如实施例7中所述制备)；这两种相似的水-包-油乳液制备物都含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白，评估其在使用条件下治疗阴前庭炎症的效果。

在前6至8周，阴前庭炎病人用食指在前庭的U-形部位低处3点钟至9点钟位置，每天用霜剂治疗两次(早上和晚上)。每次治疗，使用约0.2ml霜剂(相当于一个绿豌豆大小)。6至8周后，继续每天治疗一次直至症状稳定或消失。当症状稳定或消失时，可以根据安排继续每天治疗一次以防症状复发。

霜剂1在13位长期患有阴前庭炎(2至10年之间；4±3年)的妇女(20至39岁之间；28±5年)进行试验。本霜剂的效果根据病人性生活质量的客观评价作为终点。所有病人都报告了在每天使用2次治疗3至8个周后性生活质量有了提高(图1)。62％的病人报告在此期间可以具有正常的，无疼痛的交往。31％报告了更好的效果，一位病人(8％)报告了良好的性生活。本霜剂在所有病人中都具有良好的耐受性；未报道或发现骚痒，敏感快速抗药反应，或阴道菌群的改变。

霜剂2在10位长期患有阴前庭炎(1至3年之间；2±1年)的妇女(17至30岁之间；23±4年)进行试验。本霜剂的效果根据病人性生活质量的客观评价作为终点。

所有病人都报告了在每天使用2次治疗2至8个周(5±2周)后性生活质量有了提高(图2)。60％的病人报告在此期间可以具有正常的，无疼痛的交往，而40％报告在此期间后具有更好的行生活。本霜剂在所有病人中都具有良好的耐受性；未报道或发现骚痒，敏感快速抗药反应，或阴道菌群的改变。

此外为客观评估性交往中的外阴疼痛，对这些妇女中的6位的外阴疼痛域值根据Semmes Weinstein Von Frey Aesthesiometer(也称为Frey filaments)进行了量化测定。妇女年龄在17至30岁之间(24±5岁)，患有1至2年(2±0年)的阴前庭炎。

在每天两次使用霜剂2治疗8周后，平均外阴疼痛域值具有明显的，30-倍的提高，从3.7±3.2imN增加至112.6±80.7mN，其验证了访问中获得的结果。Bohm-Starke等(Pain 2001，94，177-183)报道健康妇女的值接近于158±33mN。

综合而言，这些结果表明在病人用霜剂治疗期间和/或之后所报告的性生活的提高，是以具有减少或无疼痛的性交往和/或其他性活动的能力为结果的。除了增加了由阴道进入或摩擦和阴道和外阴区域的摩擦造成的疼痛域值之外，重复使用上述的霜剂1和2进一步减少了前庭发红和红斑(在使用霜剂前出现)，搔痒症(骚痒)和灼烧感。

结论，据显示霜剂可以良好地治疗阴前庭炎症。

实施例9：组合物治疗外阴硬化性苔癣

霜剂2(如实施例7中所述制备)用于测试9位患有外阴硬化性苔癣的妇女(17至30岁之间；23±4年)。霜剂的效果通过妇科医生的观察进行评估。在外阴处每天两次使用霜剂2可以获得外阴硬化性苔癣症状明显改善的结果。霜剂具有良好的耐受性，不出现局部和全身副反应。

结论，据显示霜剂可以良好地治疗阴硬化性苔藓。

实施例10：组合物治疗遗传过敏性皮炎或湿疹

霜剂1(如实施例7中所述制备)，含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白的水-包-油乳液制剂，通过两项研究评估其在遗传过敏性皮炎或湿症使用情况中的作用。

在一项研究中，霜剂1用于5位患有遗传和/或刺激性手部湿疹的研究。病人年龄在17至58岁之间(33±16年)。治疗开始期间，病人每天使用2至3次霜剂。后期，使用频率降低为每天1至2次。病人使用霜剂的时间为1至数月。治疗前后的总体评估，以及如搔痒症，红斑，囊泡，水肿，鳞片化，苔藓样硬化和裂纹或裂缝等症状将使用0至4级别进行评估(0＝无症状，1＝轻度，2＝中度，3＝严重，4＝非常严重)。

所有病人中，除了一位，在使用霜剂1至6个月后湿疹的总体严重程度(总体评估)至少减少了1-点(图4)。特别值得关注的是使用后骚痒症(骚痒)和鳞片，裂纹和裂缝的减少。除了一位病人，骚痒症在所有人中都完全减少；个人的骚痒或骚痒症分值平均减少了80％。此外，5个病人中的平均情况，红斑减少了58％，囊泡减少了50％，水肿减少了67％，裂缝减少了53％，苔藓减少了28％，裂纹减少了53％。

霜剂具有良好的耐受性，不出现局部和全身副反应。

另一研究中，霜剂1用于23位湿疹病人的研究，其中15患有严重的裂缝和手部裂痕；一种手部湿疹的形式。病人年龄在5至75岁之间。评估期间用霜剂每天对病人使用3次。

连续使用数周至数月后，除一位病人外，所有病人手部湿疹的表观和症状明显改善。霜剂具有良好的耐受性，不出现局部和全身副反应。

结论，霜剂1显示了其治疗湿疹；特别对于手部湿疹，及治愈裂纹和裂痕手的优势。

实施例11：组合物治疗牛皮癣

霜剂1(如实施例7中所述制备)用于试验3位牛皮癣病人。评估期间病人每天使用霜剂治疗3次。除一位病人外，所有病人牛皮癣的表观和症状明显改善(图5)。而该病人未按照研究方案使用霜剂。每天使用数周至数月后治疗有了效果。霜剂具有良好的耐受性，不出现局部和全身副反应。

结论，霜剂1显示了其治疗牛皮癣的优势。

实施例12：组合物治疗红斑痤疮

霜剂2(如实施例7中所述制备)与皮肤治疗手段和/或红斑痤疮药物联合使用试验一些红斑痤疮病人。下面报告了两种代表性红斑痤疮类型：一种不带有伴随性脂溢性皮炎(类型1)而另一种则带有(类型2)。

一项研究中，使用霜剂2(如实施例7中所述制备)前，红斑痤疮病人(白种妇女，58岁)，使用MD Forte Facial Cleanser II(含有15％glycolic成分)，MD Forte Replenish Hydrating霜剂和Physiogel霜剂(Stiefel实验室)每天使用2次共6周，没有显著改善erythemato telangiectatic红斑痤疮(图6，上图)。

停止使用Physiogel霜剂并用霜剂2替代使用，并在前6周协同使用相同的面部清洁剂和水合霜剂。每天2次使用霜剂2周后，在全部面部，额头，鼻子，面颊和下巴处红斑痤疮的红斑明显减少(图6，下图)。

另一研究中，患有6个月额头皮疹的病人在使用霜剂2之前(白种妇女，41岁)已经用Elocon(0.1％mometasone furoateointment；Schering Cop.)治疗2周。停止使用Elocon后一周额头皮疹复发。

病人随后每天2次使用Finacea凝胶(Berlex实验室提供)治疗4周，并同时使用RH清洁剂和RH霜剂。在此期间脂溢性皮炎和红斑痤疮至少改善了75％，并减少了炎症损害和额头红斑(图7，上图)。

在此期间之后，病人开始使用霜剂2，协同使用Finacea凝胶(凝胶为先前提供)和RH清洁剂和RH霜剂。额外的霜剂2帮助病人中症状中恢复。每天使用2次共7周后，脂溢性皮炎和红斑痤疮有显著的，进一步的改善(图7，下图)。

红斑痤疮病人对霜剂具有良好耐受性-不出现局部和全身副反应。

结论，霜剂2显示其治疗牛皮癣的优势。

实施例13：组合物治疗较小创伤和/或烧伤

霜剂1(如实施例7中所述制备)和霜剂2(如实施例7中所述制备)；这两种相似的水-包-油乳液制备物都含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白，评估其在使用条件下治疗较小创伤和/或烧伤的效果。

霜剂1用于8位1级烧伤的病人。病人年龄在5至68岁之间。评估期间病人每天用霜剂治疗3次。所有病人中烧伤表观和症状明显改善。每天使用数周后治疗具有良好效果。霜剂具有良好耐受性，不出现局部和全身副反应

霜剂2用于治疗由于冷冻治疗去除手部老年斑带来的皮肤损害。每天使用霜剂2次共6周后可快速治愈皮肤损害，并明显改善皮肤表观，色泽和肌理(图8)。

结论，霜剂1和霜剂2显示了治疗较小创伤如1级烧伤和冷冻治疗带来的皮肤损害上的优势。

实施例14：治疗伤疤和瘢痕瘤

霜剂1(如实施例7中所述制备)用于试验11位具有疤痕和最近形成的瘢痕瘤的病人。病人年龄在53至68岁之间。评估期间病人每天用霜剂治疗3次。所有病人中伤疤和瘢痕瘤的表观明显改善，其中疤痕存在时间不超过一年。每天使用数周至数月后治疗有了效果。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

结论，霜剂1显示了治疗新形成(少于1年)疤痕和瘢痕瘤的优势。

实施例15：皮肤自体-或异体移植后的组合物治疗

霜剂1(如实施例7中所述制备)和霜剂2(如实施例7中所述制备)；这两种相似的水-包-油乳液制备物都含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白，评估其在使用条件下对烧伤和溃疡皮肤移植后的治疗。

霜剂1用于试验8位2级和3级烧伤的儿童。作为标准程序，霜剂在一种或多种皮肤细胞构建的创伤完全或部分闭合后使用。此外，霜剂也应用于移植位置附近的较小烧伤程度的皮肤。病人年龄为14个月至9岁。身体部位包括手，胳膊，脚，腿和臀部。评估期间病人每天用霜剂治疗3次。所有病人中创伤位置皮肤的表观，纹理和色泽及伤疤-形成都明显改善。每天使用数周至数月后治疗有了效果。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

结论，霜剂1显示了在皮肤自体-，或异体移植后的后期-烧伤治疗的优势。此外，霜剂成功地与皮肤移植联合使用以完全恢复创伤。给儿童施用时，霜剂是安全的。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

霜剂1用于试验13位患有压力或糖尿病溃疡的病人。作为标准程序，霜剂在一种或多种皮肤细胞构建的创伤完全或部分闭合后使用。此外，霜剂也应用于溃疡附近的皮肤和前-溃疡皮肤。并且，一旦创伤闭合或变得太小而无法继续构建时，则每天使用霜剂2次作为后期治疗。病人年龄为10天至85岁之间。身体位置包括小腿，踝，脚和手臂。凭期间霜剂每天使用3次。

除了一位病人，所有病人皮肤溃疡位置的表观，纹理和色泽及疤痕-形成具有明显改善。该病人的治疗由于诊断出糖尿病而终止。一位男性病人(85岁)，疾病在最初成功治疗后复发。作为一个实施例，一位10日龄的带有手臂肌肉层出生压力溃疡的儿童被成功治疗。婴儿接受了三次皮肤移植，并用霜剂平行治疗。治疗15天后创伤闭合，继续对完整皮肤使用霜剂数周，获得良好的和较少-疤痕的创伤修复。许多情况中，每天使用霜剂治疗数周至数月后具有良好效果。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

结论，霜剂1显示了在皮肤自体-，或异体移植后的后期-溃疡治疗的优势。此外，霜剂成功地与皮肤移植联合使用以完全恢复创伤。给新生儿使用时，霜剂是安全的。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

实施例16：组合物治疗白色萎缩

白色萎缩是一种特定的出现于腿下部的疤痕类型。当血液供应缺少并且皮肤受伤时出现。其以青斑样血管炎为损害特征。青斑样血管炎是一种罕见的，以持续的手足末端疼痛性溃疡为特点的慢性血管失调。青斑样血管炎的特点包括(1)疼痛性红色或紫色痕迹和斑点，并发展为小的，轻微的，不规则的溃疡(30％的情况)，以及(2)无痛、白色萎缩疤痕。

霜剂1(如实施例7中所述制备)用于试验3位白色萎缩病人。病人年龄在37至76岁之间。评估期间病人每天用霜剂治疗3次。所有病人的白色萎缩表观和症状明显减少并且萎缩皮肤和周围区域具有明显稳定性。每天使用霜剂治疗数周至数月后具有良好效果。霜剂具有不出现局部和全身副反应的良好耐受性。

结论，霜剂1显示了治疗白色萎缩的优势。

实施例17：使用组合物治疗其他皮肤情况，失调和疾病

各种应用研究显示霜剂1和/或霜剂2(如实施例7中所述制备；这两种相似的水-包-油乳液制备物都含有0.05％胚胎皮肤细胞蛋白)可以治疗，减轻或改善以下疾病表观：放射性皮肤炎，接触性风疹，接触性皮炎或刺激性接触过敏性接触皮炎，晒伤和/或光敏性-皮炎，全身性骚痒或搔痒症，外部骚痒或搔痒症，阴茎或阴囊局部骚痒或骚痒症，由于暴露于有害oak和有害ivy造成的局部骚痒或骚痒症，以及插入刺痛和/或疤痕或瘢痕瘤皮肤位置的局部骚痒或骚痒症。

实施例18：使用组合物在化妆/皮肤病程序后进行治疗

各种应用研究显示霜剂2(如实施例7中所述制备)可以改善以下情况：恢复，化学蜕皮后的皮肤再生和/或恢复，磨去皮肤疤痕手术和微磨去皮肤疤痕手术，光和激光治疗，射频治疗，热治疗，电外科重塑表面或等离子(CO2-激光和射频)，过多毛发去除，各种美容手术过程，冷冻手术和/或各种其他美容和皮肤病过程。

在这些治疗后用霜剂进行治疗有助于增强皮肤痊愈和恢复并且皮肤的表观，纹理和色泽都明显改善

实施例19：使用组合物减少皮肤-年龄记号

正在进行的研究表明霜剂2(如实施例7中所述制备)可有效改善面部笑纹和皱纹，包括鼻-唇褶皱的表观，色泽和纹理(图9)。

Claims (66)

1.用于治疗患有皮肤情况，失调或疾病主体的组合物，包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和可接受的载体，其中所述的胚胎皮肤细胞蛋白从一种或一种以上细胞裂解之后的胚胎皮肤细胞中获得。

2.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞在怀孕6-24周获得。

3.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞在怀孕12-16周获得。

4.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞由完整胚胎皮肤组织获得。

5.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞由胚胎皮肤组织片段获得。

6.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞包括纤维原细胞，角化细胞，黑素细胞，Langerhans细胞，Merkel细胞或其结合物或混合物。

7.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞包括纤维原细胞。

8.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞是永生的。

9.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞从细胞库或细胞系中获得。

10.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白是纯化的。

11.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白包括一种或一种以上细胞成分。

12.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白包括细胞因子，酶，激素，细胞外基质结构蛋白，神经多肽或神经多肽拮抗剂。

13.根据权利要求12的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白包括一种或一种以上细胞因子。

14.根据权利要求13的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白包括生长因子，白介素，淋巴因子，单核细胞激活素，干扰素，菌落刺激因子或趋化因子或其结合物或混合物。

15.根据权利要求1的组合物，进一步包括止痛剂，麻醉剂，抗-炎症剂，抗组胺剂，抗氧化剂，应对刺激剂，抗微生物药物，抗菌剂，抗真菌剂，防腐剂，蛋白稳定剂，蛋白酶抑制剂，皮肤保护剂，遮光剂或其结合物或混合物。

16.根据权利要求1的组合物，其中所述的组合物适用于局部，肌肉，眼睛，直肠或阴道给药。

17.根据权利要求16的组合物，其中所述的组合物适用于局部给药。

18.根据权利要求1的组合物，其中所述的组合物是适用于药物应用的药膏，洗液，乳膏，泡沫，摩丝，喷雾，气雾剂，乳剂，纳米乳剂，微乳液，面膜，凝胶，水凝胶，溶液，海绵胶或分散剂。

19.根据权利要求1的组合物，其中所述的组合物是适用于美容应用的药膏，洗液，乳膏，泡沫，摩丝，喷雾，气雾剂，乳剂，纳米乳剂，面膜，微乳液，凝胶，水凝胶，溶液，海绵胶或分散剂。

20.根据权利要求1的组合物，其中所述的组合物是油-包-水乳液或水-包-油乳液基础的霜剂。

21.根据权利要求1的组合物，其中所述的组合物是水-包-油乳液或油-包-水乳液基础的霜剂。

22.根据权利要求1的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.001％至95％浓度整合入所述的组合物。

23.根据权利要求22的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.01％至5％浓度整合入所述的组合物。

24.根据权利要求23的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.05％至0.25％浓度整合入所述的组合物。

25.根据权利要求1的组合物，其中所述的细胞裂解是诱导的而非自发的。

26.根据权利要求1的组合物，其中所述的细胞裂解通过机械，物理或化学方法完成。

27.根据权利要求26的组合物，其中所述的细胞裂解通过一次或一次以上冻-融循环完成。

28.根据权利要求1的组合物，其中所述的细胞裂解用1毫升水系统中含100至60,000,000个胚胎皮肤细胞的悬液完成。

29.根据权利要求28的组合物，其中所述的细胞裂解用1毫升水系统中含10,000,000至20,000,000个胚胎皮肤细胞的悬液完成。

30.根据权利要求28的组合物，其中所述的水系统是一种生理缓冲系统。

31.根据权利要求28的组合物，其中所述的水系统是一种磷酸盐缓冲系统。

32.根据权利要求28的组合物，其中所述的水系统进一步包括一种或一种以上蛋白稳定化学物质。

33.根据权利要求28的组合物，其中所述的水系统进一步包括一种或一种以上蛋白酶抑制剂。

34.根据权利要求28的组合物，其中所述的水系统进一步包括一种或一种以上抗-微生物药物，抗-菌药物，抗氧化剂，防腐剂或其联合物和混合物。

35.治疗皮肤或粘膜情况，失调或疾病的方法，包括对有需要的主体施用组合物，其中所述的组合物包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况，失调或疾病。

36.根据权利要求35的方法，其中所述的皮肤或粘膜情况，失调或疾病是炎症皮肤或粘膜情况，神经或神经炎症皮肤或粘膜情况，急性和慢性创伤，急性和慢性溃疡，及烧伤。

37.治疗炎症皮肤情况的方法，包括对有需要的主体施用组合物其中所述的组合物包括一种或多种胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况，失调或疾病。

38.根据权利要求37的方法，其中所述的炎症皮肤情况是阴前庭炎综合症，外阴疼痛感觉异常，外阴疼痛，牛皮癣，皮炎，过敏性皮炎，湿疹，接触性皮炎，过敏性接触性皮炎，皮炎疱疹，全身性剥脱性皮炎，外阴硬化性苔藓，皮脂囊肿，脂溢性皮炎，红斑痤疮，痤疮，瘢痕瘤，搔痒症，白色萎缩，头皮屑，尿疹，光敏性-皮炎，溃疡，伤疤或干燥病。

39.治疗外阴疼痛的方法，包括对有需要的主体施用组合物，其中所述的组合物包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况，失调或疾病。

40.根据权利要求39的方法，其中所述的外阴疼痛是阴前庭炎综合症。

41.根据权利要求39的方法，其中所述的外阴疼痛是外阴硬化性苔藓。

42.根据权利要求39的方法，进一步包括施用皮质类固醇，雌激素，孕酮，利多卡因，辣椒素，异维甲酸，干扰素-α，干扰素-β，干扰素-γ，氨苯砜，阿昔洛韦，三环抗-镇静剂或其结合物或混合物。

43.治疗一种或一种以上创伤，溃疡或烧伤的方法，包括对有需要的主体施用组合物，其中所述的组合物包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况，失调或疾病。

44.根据权利要求43的方法，进一步包括施用薄膜，水状胶质，水凝胶，泡沫，矿脂，硅，硅片，藻酸钙或玻璃纸。

45.根据权利要求43的方法，其中所述的组合物通过外部加压施用。

46.根据权利要求45的方法，其中所述的外部加压通过一种或一种以上绷带施用。

47.根据权利要求46的方法，其中所述的一种或一种以上绷带是轻质的相容-伸展绷带，轻质支撑绷带或缚料绷带。

48.与美容或皮肤学治疗联合施用以改善皮肤外观的方法，包括对有需要的主体施用组合物，其中所述的组合物包括一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白和一种可接受载体，从而治疗所述的情况，失调或疾病。

49.根据权利要求48的方法，其中所述的美容和/或皮肤学治疗是化学去皮，物理去皮，去疤痕手术，微去疤痕手术，光和/激光治疗，强脉冲光治疗，射频治疗，热疗，氧和/或臭氧治疗，电外科修复缺损或射频气化，多余毛发去除，纹身去除，肉毒素注射，填充物注射，注射管去脂，脂肪抽吸，整容或非-整容外科方案，冷冻手术或冷冻疗法和/或局部药物，所述局部药物包括α-羟基酸，壬二酸，苯甲酸，过氧化苯甲酰，β-羟基酸，倍他米松，柠檬酸，氯洁霉素，皮质类固醇，diclofeneac，蒽三酚，氟尿嘧啶，羟基乙酸，氢化可的松，醋酸氢化可的松，对苯二酚，消炎痛，异维甲酸，曲酸，乳酸，甲硝唑，苯酚，视黄酸，视黄醇，视黄醛，β-葡萄视黄苷酸，水杨酸，硫化硒，磺胺醋酰钠，硫化物，他扎罗汀，维甲酸，三氯乙酸，尿素或其派生物或任何这些整容或皮肤病的联合治疗。

50.根据权利要求48的方法，其中所述的美容和/或皮肤学治疗是红斑痤疮的治疗。

51.根据权利要求35的方法，其中所述的主体是动物。

52.根据权利要求51的方法，其中所述的动物是马。

53.根据权利要求35的方法，其中所述的主体是人类。

54.根据权利要求35的方法，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白通过细胞裂解从一种或一种以上胚胎皮肤细胞中获得。

55.根据权利要求35的方法，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白在怀孕的6-24周获得。

56.根据权利要求3 5的方法，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞在怀孕12-16周获得。

57.根据权利要求35的方法，其中所述的胚胎皮肤细胞包括一种或一种以上细胞成分。

58.根据权利要求35的方法，进一步包括止痛剂，麻醉剂，抗-炎症药物，抗组胺药物，抗氧化剂，应对刺激剂，抗微生物药物，抗菌剂，抗真菌药物，防腐剂，蛋白稳定剂，蛋白酶抑制剂，皮肤保护剂，遮光剂或其结合物或混合物。

59.根据权利要求35的方法，其中所述的组合物适用于局部，肌肉，眼睛，直肠或阴道给药。

60.根据权利要求59的方法，其中所述的组合物适用于局部给药。

61.根据权利要求35的方法，其中所述的组合物是药膏，洗液，乳膏，泡沫，摩丝，喷雾，气雾剂，乳剂，纳米乳剂，微乳液，凝胶，水凝胶，溶液或分散剂。

62.根据权利要求35的方法，其中所述的组合物是油-包-水乳液或水-包-油乳液基础的霜剂。

63.根据权利要求35的方法，其中所述的组合物是水-包-油乳液或油-包-水乳液基础的霜剂。

64.根据权利要求35的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.001％至95％浓度整合入所述的组合物。

65.根据权利要求64的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.01％至5％浓度整合入所述的组合物。

66.根据权利要求65的组合物，其中所述的一种或一种以上胚胎皮肤细胞蛋白以0.05％至0.25％浓度整合入所述的组合物。

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