CN101057823B - 一种具有抗衰老及美容作用的复合生物制剂 - Google Patents
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Abstract
本发明公开了一种具有抗衰老及美容作用的复合生物制剂,由下列物质组成:2-30ng/ml重组人表皮生长因子,2-10%D-葡萄糖,5-20%胎牛血清和3-10μg/ml胰岛素,溶剂为多重蒸馏水。本发明的复合生物制剂可以用于生产抗衰老的化妆品和美容产品,使皮肤保持娇嫩、皱纹减少、色斑黯淡甚至消失,皮肤最终有光泽有弹性,具有广泛的应用前景。
Description
本申请是2004年01月15日申请的,申请号是200410000679.0,发明名称为“一种重组人表皮生长因子复合生物制剂及其应用”的分案申请。
技术领域
本发明涉及一种生物制剂组合物,特别涉及一种具有抗衰老和美容作用的重组人表皮生长因子复合生物制剂。
背景技术
Cohen和Levi Montalcin于1960年,在小鼠颌下腺纯化神经生长因子NGF时发现,不含神经生长因子的一种组分注射到新生小鼠后可以引起眼睑早开,门齿早萌,毛发生长抑制以及生长迟缓。1962年Cohen报道了这种具有热稳定和酸稳定的蛋白,可以促进眼睑和门齿的发育。组织学研究表明,眼睑早开是由于表皮厚度和角质化的特征性增加引起的。皮肤或表皮组织块体外培养的研究证实该蛋白对表皮生长具有直接的作用,因此将其命名为表皮生长因子(epidermal growth factor,EGF)。经过数十年的研究,目前已经发现EGF是一个蛋白质家族。Brown研究小组通过随机研究显示,重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growthfactor,rhEGF)具有明显的促进创面愈合作用。Thornton研究小组以及其他研究小组研究发现rhEGF可以明显促进大鼠II度烧伤以及浅I度创面愈合(P<0.01),对供皮区也有促进愈合的作用(P<0.01);而且rhEGF的促进作用主要表现在创面愈合的后期。在创面愈合早期,表层的坏死组织紧覆于创面,使局部应用的rhEGF无法穿透而作用到残存的真皮层和皮肤附件的上皮细胞,只能待坏死组织溶解或脱落,创面出现明显的皮岛后才能发挥其促进生长作用。研究表明,在rhEGF临床使用期间,使用者的肝、肾功能及血常规等均未发现异常,全身和局部无过敏反应,未见毒副作用发生。局部使用rhEGF后创面渗出明显而且迅速减少,这可能与rhEGF促进上皮迅速再生等因素有关。
EGF对多种上皮细胞具有促进其有丝分裂作用,同时还刺激各种间质细胞增值,包括角膜内皮细胞、肠胃粘膜细胞、血管内皮细胞、血管平滑肌细胞、成纤维细胞和软骨细胞,这就为整个表皮的生长提供了所需的基础物质。除了促增殖作用外,EGF还能促进某些细胞如角膜内皮细胞和血管内皮细胞的迁移,这对于创伤的修复是必要的。EGF可促进角膜及皮肤创面上皮细胞及胃肠粘膜溃疡创面的修复,促进表皮细胞增殖,并可通过刺激成纤维细胞和其他细胞的增殖,促进胶原的沉积。EGF在一定时期内可以非持续性地提高成纤维细胞的增殖的能力。EGF对真皮成纤维细胞的生长有极大地促进作用,促进了细胞周期蛋白Cyclin D1和CDk4的表达增强,细胞周期变短,增殖能力增强。Savage在1972年研究发现EGF可以促进角膜上皮增殖,很多学者采用角膜切口、角膜刮伤、角膜上皮切除以及碱烧伤等动物角膜损伤模型也证实这一点。另外,在一些角膜上皮的非营养不良性疾病中还发现EGF对角膜损伤的修复有较好的促进作用。Brown等人1989年对12例整形外科手术和烧伤病人进行皮肤移植后,使用EGF可以明显的促进创面愈合。除此之外,EGF还对胃溃疡有明显治疗作用。
胃壁细胞、十二指肠粘膜上皮细胞上均有EGF受体。EGF由唾液直接进入消化道或由十二脂肠腺直接分泌于小肠而发挥对消化道粘膜的生物效应。EGF是一种重要的胃粘膜保护因子,通过与胃肠粘膜细胞上的特异性受体EGFR结合而发挥作用。胃液中EGF水平是溃疡愈合质量中再生粘膜功能成熟度评价的重要指标之一。动物实验表明,小鼠胃内灌注EGF可预防由阿斯匹林所诱发的胃溃疡,而且,外源性EGF可明显抑制药物引起的胃和十二指肠溃疡。
已有研究表明,消化性溃疡患者胃液EGF含量比正常人明显降低,提示EGF的降低可能与胃溃疡的发生有一定的关系;胃溃疡愈合后其胃液EGF含量亦明显增高,表明EGF在溃疡愈合中可能起作用。目前,根据实验推测EGF参与消化性溃疡修复的可能机制是①激活鸟氨酸脱羧酶(ODC),增加粘膜DNA合成;②抑制胃酸分泌;③促进胃粘膜粘液糖蛋白的合成和分泌;④增加胃粘膜血流量。在临床工作中可以通过动态监测胃液EGF含量来预测溃疡发生的可能性,同时在治疗过程中亦可以此来观察药物疗效。
EGF是一种强有力的促细胞分裂、分化、增殖的因子,已知它对多种组织有促进增殖和刺激DNA合成的作用,通过作用于靶细胞膜上的特异性受体而发挥其促细胞生长的活性。体外研究表明,EGF能主动刺激皮肤上皮细胞和成纤维细胞的增殖、促进新生血管形成及核酸、蛋白质和羟脯氨酸的合成。动物试验证实,极微量的重组人表皮生长因子(recombinant human epidermal growth factor,rhEGF)即能发挥作用,剂量增加反而因细胞膜上的EGF受体数目受到rhEGF“负调节”而减少影响其作用。
有资料显示,EGF是通过细胞外基质(ECM)的改建而调控细胞的行为,或ECM的改建结果即是通过EGF的释放而启动了细胞表型的变化,ECM能分离EGF结合蛋白,即相关生长因子活性调控的理论。随着细胞生物学和分子生物学技术的进展,细胞因子在创伤修复过程中的作用正逐渐被人们所重视。
胰岛素由胰岛β细胞分泌,胰岛素原含有86个氨基酸,分子量约6,000,胰岛素由51个氨基酸组成。不同动物其结构略有差异,但不影响其生理活性。胰岛素能促进细胞对葡萄糖、氨基酸和离子的摄取,增强细胞内酪氨酸和色氨酸的磷酸化作用,调整调节酶的活性,刺激或抑制特异性基因的转录以及促进细胞的生长。局部使用可以促进伤口愈合,防止疤痕的形成和挛缩。
氢化可的松是由肾上腺皮质分泌的一种糖皮质激素,调节全身的糖、水、盐代谢,临床上使用可以抗炎症、抗过敏、抗毒等。氢化可的松能增加多种抗炎分子蛋白合成,如SLPT,促进炎症减轻或消失。另外,氢化可的松还可以通过抑制自由基的生成来减轻自由基对细胞的攻击。一些学者发现血管源性水肿与周围细胞外间质氧自由基清除程度密切相关,而氢化可的松是氧自由基非酶类清除剂,可直接清除OH2与LOO-等自由基。氢化可的松分子疏水基团嵌入膜双分子疏水区多不饱和脂肪酸拱道中,使磷脂双分子结合紧密,粘性增加,并阻断花生四烯酸从细胞膜释放,从而减轻氧自由基的攻击。同时,氢化可的松不仅在富含磷脂环境中抑制铁催化的脂质过氧化反应,在无膜成份参与下也可抑制该反应。氢化可的松经其受体介导使脂皮素及巨皮素合成及释放增加,抑制磷酸二脂酶活性,从而阻断及抑制前列腺素级联反应,减少氧自由基及TXA2、白三烯以及PG的生成和释放,从而降低血管通透性。氢化可的松可抑制巨噬细胞一氧化氮合成酶活性,减少巨噬细胞-NO及氧自由基的生成。在生物制剂中与其他成分联合使用可以不仅促进溃烂处组织的快速修复,还保护新生组织不受自由基的攻击和破坏。
人类长期罹患静脉曲张、静脉炎、静脉血栓症等静脉疾病,类风湿关节炎和糖尿病,导致机体或局部组织营养供给不足。疾病后期将不同程度地导致腿脚部皮肤溃疡/溃烂长期不愈的症状,这些患者大多数的预后为截肢。
溃疡/溃烂是机体局部炎性坏死皮肤腐烂的结果。静脉曲张/静脉炎性溃疡/溃烂是由一种慢性的静脉机能不全造成的。下肢静脉曲张是外科常见病之一,患病率在各国差别很大。许多欧美国家的发病率高达20%-40%,热带非洲仅为01%。例如,在英国50岁以上的人群中,50%的人有轻微的静脉曲张症状,其中10%住院治疗。有5%的成年人不同程度地罹患慢性静脉机能不全;女性患病率高于男性。在中国,张培华等调查15岁以上人群的发病率为8.6%,45岁以上为16.4%,由此推算中国现有病人约8000万至1亿例。长期静脉过度紧张或静脉回流不畅,就会在腿部的股静脉、隐静脉和腿弯部的静脉部分较常发生静脉疾病。10-25%的静脉曲张患者同时罹患动脉疾病;12%的糖尿病和类风湿关节炎病患者同时罹患静脉曲张或静脉炎。到目前为止,导致静脉曲张的病因还不清楚,可能与家族史、肥胖症、怀孕以及口服避孕药等因素有关,同时长期站立的职业会加重静脉曲张的症状。
目前治疗静脉溃疡的方法有以下几种:1.患者穿两级或三级(梯级)有高弹性的袜子,以挤压膝盖以下的静脉血管,以防坏死进一步发生;2.在患处十字交叉缠裹4层绷带,分别为棉纱、crepe、Elset和Coban绷带;这两种治疗要持续12周左右,大约有45%的患者症状可以得到改善,有些患者溃疡还可以愈合。3.手术切除:对于浅表性静脉曲张或静脉炎患者可以切除浅表静脉,但是治愈率仅仅为2%,而且4年后100%复发,有时可以将贯穿腿部的股静脉全部抽出,但疗效都不明显;对于深层静脉曲张或炎症的患者通常采用切除溃疡、清除腐肉后移植颗粒性皮肤,但很少有治愈的;4.激光照射治疗至少3个月,可以减缓静脉的压力;5.蝇蛆治疗法,蝇蛆可以有效清除创口腐肉帮助创口愈合。
以上所有的治疗方法不是繁琐费时,就是疗效甚微,因此,有溃烂或溃疡的患者要忍受多年的疼痛,给他们的精神造成巨大压力,给生活带来了很大不便。而且,静脉疾病等一旦引起腿部和脚部的溃烂后,如果以上治疗的疗效特别缓慢或无效,溃烂会在原来坏死的基础上继续扩展,静脉回流不畅营养供给不足更加剧了这种症状的发展,最终导致患者高位截肢。
放射性皮肤溃疡多见于放射性事故和肿瘤放疗等引起的并发症,其特点为顽固性反复发作、长期不愈合,最后可能发展为癌变。此病变发生发展的分子机制尚不清楚,更缺乏有效的治疗手段。
发明创造内容
本发明的目的是提供一种重组人表皮生长因子复合生物制剂。
本发明所提供的重组人表皮生长因子复合生物制剂,包括2-30ng/ml重组人表皮生长因子,2-10%D-葡萄糖,0-20%胎牛血清,0-10μg/ml胰岛素,0-5μg/ml氢化可的松,0-100μg/ml氨苄青霉素和0-100IU/ml硫酸链霉素,溶剂为多重蒸馏水。
氨基酸的含量以胎牛血清(FBS,GIBCO)的添加含量计算。
其中,所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,优选为包括5-10ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,0-20%胎牛血清,0-8μg/ml胰岛素,0-2μg/ml氢化可的松,0-100μg/ml氨苄青霉素和0-100IU/ml硫酸链霉素。
当所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,由5ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,5μg/ml胰岛素,100IU/ml硫酸链霉素和多重蒸馏水组成时,可用于治疗眼科疾病。
当所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,由10%胎牛血清,5ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,1μg/ml氢化可的松,5μg/ml或8μg/ml胰岛素,100μg/ml氨卞青霉素,100IU/ml硫酸链霉素和多重蒸馏水组成时,可用于治疗静脉曲张、静脉炎等引起的溃烂和糖尿病后期并发症引起的溃烂,为达到更佳的治疗效果,可配合辅助治疗液:5%D-葡萄糖或者5%D-葡萄糖+20%FBS,配合20%甘油水溶液+5%FBS(后者可以不用FBS)使用。
当所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,由5%胎牛血清,5ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,3μg/ml胰岛素,100μg/ml氨卞青霉素,100IU/ml硫酸链霉素和多重蒸馏水组成时,可用于治疗健康创伤、烧伤和手术后刀口愈合,为达到更佳的治疗效果,可配合辅助治疗液:5%D-葡萄糖或者5%D-葡萄糖+20%FBS使用。
当所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,由5%胎牛血清,5ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,3μg/ml胰岛素和多重蒸馏水组成时,可抗衰老、美容;为达到更佳效果可配合辅助液:20%甘油水溶液+5%FBS使用。
当所述重组人表皮生长因子复合生物制剂,由10ng/ml重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖,2μg/ml氢化可的松和多重蒸馏水组成时,可用于治疗胃溃疡。
本发明的重组人表皮生长因子复合生物制剂主要以重组人表皮生长因子(hrEGF)为主要成分,添加包含人体所需的必需氨基酸和非必需氨基酸的胎牛血清(FBS)、右旋葡萄糖(D-glucose)、胰岛素、氨苄青霉素、硫酸链霉素和氢化可的松,既提供了损伤/健康组织修复所需的生长因子,同时又提供了组织快速修复时所需的各种营养物质以及促进细胞利用这些营养物质的成分,从而使得由于长期静脉曲张、静脉炎、糖尿病后期、放射线等引起的溃疡或溃烂可以快速愈合;使得褥疮等类似皮肤创口快速愈合;使得烧伤或意外创伤可以快速愈合;使得胃溃疡症状减轻甚至康复;使得损伤性眼科疾病迅速康复;使得颜面皮肤保持娇嫩、皱纹减少以及色斑黯淡甚至消失。本发明的重组人表皮生长因子复合生物制剂可用于制备治疗溃疡、溃烂、创伤、烧伤的药物;还可以用于生产抗衰老的化妆品和美容产品,使皮肤保持娇嫩、皱纹减少、色斑黯淡甚至消失,皮肤最终有光泽有弹性;也可以用于制备治疗损伤性眼科疾病的药物。
具体实施方式
以下供试人员均为志愿者,使用后无任何不良的生理反应;rhEGF购自美国Sigma公司,货号为E 9644,氨基酸的含量以胎牛血清(FBS,GIBCO)的添加含量计算。
实施例1、治疗眼科疾病
制剂的配方5ng/ml rhEGF+5%D-葡萄糖+5μg/ml胰岛素+100IU/ml硫酸链霉素,基础溶液为多重蒸馏水,混匀后过滤除菌,4℃冷藏。
使用前,需要在室温放置5分钟左右,然后滴眼,每次一滴,每天3-4次。特别是晚上临睡前使用一次效果最佳。其治疗眼科疾病的效果如表1所示,治疗前由焊接造成的焊接工人的眼睛灼伤表现为眼睛充血,持续疼痛,久治不愈,使用该制剂1周后,症状消失并痊愈且无反弹。
表1.治疗眼科疾病的效果
焊接导致的眼睛灼伤,久治不愈 | 不明原因导致的眼睛常年充血和昏花 | |
人数 | 5人(男性) | 4人(男∶女=1∶1) |
效果 | 1周症状消失并痊愈,无反弹 | 1-2周充血症状消失,患者感觉良好 |
实施例2、治疗静脉曲张、静脉炎等引起的溃烂和糖尿病后期并发症引起的溃烂:
主制剂配方:10%FBS+5ng/ml rhEGF+5%D-葡萄糖+1μg/ml氢化可的松+5μg/ml(8μg/ml)胰岛素+100μg/ml氨卞青霉素+100IU/ml硫酸链霉素,基础溶液为多重蒸馏水,混匀后过滤除菌,4℃冷藏。
辅助治疗液:5%D-葡萄糖+20%FBS,配合20%甘油水溶液,过滤除菌,4℃冷藏。
首先使用0.9%生理盐水清洗创口(严重者首先使用双氧水或75%酒精清洗),然后将主制剂涂抹创口,每天早晚各一次。皮肤干燥或已经形成痂皮的患者,还需使用辅助治疗液涂抹以保持创口湿润,促进吸收和疗效。所有的患者使用主制剂的同时,需在主制剂使用的间隙使用辅助治疗液涂抹,增加治疗效果,每天3-4次。对于没有溃烂口的坏死组织面,由于痂皮的存在妨碍了制剂有效成分的吸收,因此,可以采用皮下注射的方式,将主制剂直接注射到有活性的组织间隙,一天一次。注射剂量依据皮肤可吸收的程度适量注射,一般为0.05ml-0.1ml;注射点数视坏死面积的大小而定,一般为1点/cm2。该制剂治疗静脉曲张、静脉炎引起的溃烂、糖尿病后期并发症引起的溃烂及褥疮的效果如表2所示。
表2.治疗静脉曲张、静脉炎引起的溃烂、糖尿病后期并发症引起的溃烂及褥疮的效果
静脉曲张、静脉炎引起的溃烂 | 糖尿病后期并发症引起的溃烂 | 褥疮 | |
治疗人数 | 6人 | 3人 | 1人 |
治疗效果 | 均为60-85岁的老人,早上使用主制剂,4小时后溃烂口停止分泌;三天后溃烂口肉芽组织开始生长。2周左右创口愈合,皮肤恢复原来的肤色。主制剂中胰岛素为5μg/ml。 | 除了主制剂中胰岛素为8μg/ml以外,治愈方法、时间及效果与治疗静脉曲张、静脉炎引起的溃烂大致相同。 | 治愈方法、时间及效果与治疗静脉曲张、静脉炎引起的溃烂大致相同。 |
实施例3、治疗健康创伤、烧伤和手术后刀口愈合
主制剂配方:5%FBS+5ng/ml重组人表皮生长因子+5%D-葡萄糖+3μg/ml胰岛素+100μg/ml氨卞青霉素+100IU/ml硫酸链霉素,溶液过滤除菌,4℃冷藏。
辅助治疗液:5%D-葡萄糖或者5%D-葡萄糖+20%FBS。
首先使用0.9%生理盐水清洗创口,然后将主制剂涂抹创口,每天早上一次,伤口较大或严重的可以每天两次。为了使主制剂发挥更好的功效,配合使用辅助治疗液,以提供组织再生修复所需的足够能量和营养物质。辅助治疗液使用3-4次/天。治疗健康创伤、烧伤和手术后刀口愈合的效果如表3表示。
表3.治疗健康创伤、烧伤和手术后刀口愈合的效果
烧、灼伤和创伤 | 手术后刀口 | |
人数 | 6人 | 3人 |
治疗效果 | 重度灼伤的恢复需要1.5-3天;烧伤可以比普通治疗提前3-5天愈合;创伤一般为3-5天,疤痕轻微。 | 一般为3天左右,而且疤痕轻微。 |
实施例4、抗衰老和美容
主制剂配方:5%FBS+5ng/ml重组人表皮生长因子+5%D-葡萄糖+3μg/ml胰岛素,过滤除菌,4℃冷藏。
辅助液:20%甘油水溶液+5%FBS,4℃冷藏。
每天晚上清洗干净皮肤后,使用0.5ml主制剂拍打在脸部,使其充分吸收。然后,涂抹适量辅助液,使皮肤充分保湿。该制剂的抗衰老和美容效果如表4所示。
表4.抗衰老和美容效果
抗衰老、美容、祛斑和防止皴裂 | |
人数 | 15人(成年人以及儿童) |
效果 | 使用14-20天后,雀斑淡化甚至消失;面部皮肤娇嫩,皱褶减少,有光泽;皴裂消失,皮肤光泽如初。 |
实施例5、治疗胃溃疡
制剂配方:10ng/ml重组人表皮生长因子+5%D-葡萄糖+2μg/ml氢化可的松,葡萄糖水溶液高压灭菌后,温度降至室温时添加其他两种成分。
空腹口服5-10ml/次,每天2-3次。该制剂治疗胃溃疡的效果如表5所示。
表5.治疗胃溃疡的效果
胃溃疡 | |
治疗人数 | 5人 |
治疗效果 | 胃镜检查结果表明,1-6个月溃疡面基本消失 |
Claims (2)
1.一种具有抗衰老及美容作用的复合生物制剂,由下列物质组成:5%胎牛血清,5×10-1重组人表皮生长因子,5%D-葡萄糖和3×10-3mg/ml胰岛素,溶剂为多重蒸馏水。
2.权利要求1所述复合生物制剂在制备化妆品和美容产品中的应用。
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