CN108289934A - 用于伤口愈合的纤溶酶原给药方案 - Google Patents

用于伤口愈合的纤溶酶原给药方案 Download PDF

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Abstract

本发明涉及纤溶酶原或其生物活性变体的用途，其用于制备用以局部施用至少一个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体来促进受试者的伤口愈合的药剂。所述剂量是介于约2mg与约30mg之间。所述施用的频率可从每天一次至每周一次变化。本发明进一步涉及相关药剂和治疗方法。

Description

用于伤口愈合的纤溶酶原给药方案
发明领域
本发明涉及医学领域，并且更具体地说涉及伤口愈合，包括例如急性或慢性伤口的治疗。
发明背景
伤口愈合或伤口修复是一种复杂机制，其涉及三个阶段：发炎、新组织形成和重塑(Gurtner等人2008Nature.第453卷,第15期,第314-321页)。在一些情况下，修复机制受损且伤口永远无法愈合。例如，这经常发生在糖尿病患者中，糖尿病患者常常具有肾病变、受损的血管调节和变弱的免疫系统，从而使得伤口更难愈合。对于糖尿病患者而言，小的损伤可能会因为愈合能力降低而发展成更大的伤口。伤口当其在可预测量的时间内不愈合时可变为慢性的。三个月内不愈合的伤口通常被视为慢性的。糖尿病患者的常见伤口是糖尿病性足部溃疡，其致残性极高且经常导致腿部截肢和更高的死亡风险(Jeffcoate和Harding.The Lancet.Review:Diabetic Foot Ulcers,2003年2月25日线上出版)。仅有的糖尿病性足部溃疡的已知治疗包括感染管理、减荷技术、不同类型的绷带和截肢。
在长期卧床不起的住院人员中观察到另一类型的慢性伤口，且通常称为褥疮或压疮或压迫性溃疡，其特征在于四个阶段。在第1阶段，疮不是开放性伤口，但皮肤发红并温热且可能会疼。在第2阶段，皮肤破开，磨损，或形成溃疡，其通常是脆弱且疼痛的。在第3阶段，疮变得更糟且延伸至皮肤下的组织中，从而形成小凹坑。在第4阶段，压疮很深，进入肌肉和骨胳且引起大面积损伤。在第3和4阶段，由于显著组织损伤可能存在极少或不存在疼痛。多年来用于压疮的常用治疗包括创新床垫、软膏、乳霜、溶液、敷料、超声波检查、紫外线加热灯、糖以及外科手术。在选择治疗策略时，应考虑伤口阶段和治疗目的(例如保护、湿润或移除坏死组织)。对于阶段3和4病变，可能需要手术干预(例如皮瓣重建)，不过这些病变中的一些由于共同存在的医学问题而必须保守治疗(不进行手术)且患者不能经历此程序。
另一种类型的慢性伤口是血管伤口，其可以是静脉或动脉。典型的血管伤口是静脉性腿部溃疡和静脉性腿部溃疡。腿部溃疡通常是持续超过四至六周来愈合的慢性伤口。腿部溃疡通常发生在腿部内侧，就在脚踝上方。静脉性腿部溃疡的症状包括受累腿部的疼痛、瘙痒和肿胀。溃疡周围也可能存在变色或变硬的皮肤，并且疮可产生恶臭气味。就像糖尿病足部溃疡一样，腿部溃疡可本身呈现或者与动脉性腿部溃疡组合呈现；由动脉血液循环不良引起，糖尿病腿部溃疡；由与糖尿病相关的高血糖引起，血管炎腿部溃疡；与慢性炎性病症如类风湿性关节炎和狼疮相关，外伤性腿部溃疡；由腿部的损失引起，以及恶性腿部溃疡；由腿部皮肤的肿瘤引起。
急性和/或慢性伤口通常被分类为动脉(局部缺血)溃疡如糖尿病性足部溃疡；静脉性伤口(静脉曲张、腿部、郁积)溃疡；淋巴水肿(慢性皮肤破裂)溃疡；压迫性(褥疮)溃疡；由于创伤的后期影响；不受控制的感染和/或自身免疫性溃疡，如但不限于银屑病和狼疮。通常，这些伤口或溃疡具有血管损伤(动脉、静脉、微血管)。此外，它们具有减少的组织氧浓度，并且它们具有代谢受损。
单一病因学溃疡是不常见的，并且意图通过本申请治疗的伤口或溃疡可具有混合病因学，如糖尿病/压疮、压迫性/静脉性溃疡、静脉性/动脉性溃疡或压迫性/静脉性/动脉性溃疡。
在鼓膜穿孔中观察到另一类型的慢性伤口。在一些患者中，鼓膜穿孔通常愈合；但对于其他患者而言，穿孔无法闭合。感染是鼓膜穿孔(TMP)的主要结果(副作用)。中耳的急性感染可引起鼓膜内相对缺血同时中耳腔中压力增加。这导致鼓膜撕裂或破裂，其通常先有严重疼痛。如果穿孔未愈合，则其留下残余鼓膜穿孔。耳道感染很少引起鼓膜穿孔。当这发生时，其常常与黑曲霉(Aspergillus niger)感染相关。创伤性穿孔也可能由耳朵被击打(例如用手掌拍打；自滑水板跌落而耳朝下头部撞击水面)引起。因爆炸而暴露于严重大气压过压会撕裂鼓膜。在水肺潜水员中通常在因先前疾病而萎缩的鼓膜中发生因水压而产生的鼓膜穿孔。用于清洁耳道的物体会使鼓膜穿孔。证据表明此类穿孔很少会自发愈合。当外科医师在耳鼓膜中进行切割(鼓膜切开术)时，有意地造成鼓膜穿孔。当放置压力均衡管(通风管)时，有意地使鼓膜穿孔保持打开。当管挤出时手术造成的开口愈合失败导致慢性鼓膜穿孔。穿孔症状可包括在打喷嚏和擤鼻涕时可听见口哨声、听力减退和在感冒期间且当水进入耳道时易于感染。许多人带着完全无症状的鼓膜穿孔过生活。通常不指示此类病变的修复。然而，当暴露于水时穿孔可能与复发性感染有关。
木样结膜炎是慢性结膜炎的罕见形式，其特征在于主要在眼睑下侧(睑板结膜)发展的复发性富含纤维蛋白的伪膜性病变(伤口)的木质状稠度。它通常是全身性疾病，其可涉及牙周组织、上呼吸道和下呼吸道、肾脏、中耳和女性生殖器。它可危及视力，并且偶尔可因肺部受累而发生死亡。这种医学病状本身可呈现为急性或慢性伤口/急性或慢性伤口两者。
除了外科手术(截肢或重建)，当前不存在用于诸如糖尿病性足部溃疡或深压疮的慢性伤口的有效治疗；并且不存在用于诸如鼓膜穿孔的慢性伤口的治疗。
因此，需要用于改善或促进伤口愈合，包括用于急性和慢性伤口的非侵袭性治疗的新颖方法。
本说明书提及许多文献，所述文献的内容以引用的方式整体并入本文。
发明概述
本发明涉及纤溶酶原或其生物活性变体的用途，其用于促进伤口愈合。
本发明涉及以下权利要求1至66：
1.纤溶酶原或其生物活性变体的用途，其用于制备用以促进受试者的伤口愈合的药剂，其中所述药剂适合于局部施用并且包含至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
2.如项目1所述的用途，其中所述局部施用是皮内、皮下、肌内或局部施用。
3.如项目2所述的用途，其中所述局部施用是在所述伤口周围、在所述伤口附近或在所述伤口中进行。
4.如项目2所述的用途，其中所述局部施用由在所述伤口周围在其约0.5cm处进行的若干次注射组成。
5.如项目1所述的用途，其中所述伤口是开放性伤口。
6.如项目1所述的用途，其中所述伤口是慢性伤口或急性伤口。
7.如项目1至6中任一项所述的用途，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
8.如项目1所述的用途，其中所述局部施用以至少每周一次、至少每周两次、至少每三天一次、至少每两天一次、至少每天一次或至少每天两次的频率进行。
9.如项目1或8所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少50％。
10.如项目1或8所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少90％。
11.如项目1所述的用途，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
12.如项目11所述的用途，其中所述浓度是约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml。
13.如项目1所述的用途，其中所述伤口具有面积，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述面积成比例。
14.如项目13所述的用途，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm2表示的所述伤口面积的约2.5倍。
15.如项目1所述的用途，其中所述伤口具有面积，并且其中当所述伤口面积小于4cm2时所述剂量是约10mg；当所述伤口面积是4cm2至8cm2时所述剂量是约20mg，或当所述伤口面积大于8cm2时所述剂量是约30mg。
16.如项目1所述的用途，其中所述伤口具有周长，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述伤口周长成比例。
17.如项目16所述的用途，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm表示的所述伤口周长的约1.5倍。
18.如项目4所述的用途，其中所述若干次注射由2至30次注射组成。
19.如项目1所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物，并且优选人。
20如项目1所述的用途，其中所述伤口是选自糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、静脉性腿部溃疡、动脉血腿部溃疡、血管伤口或病变的组的慢性伤口。
21.一种用于促进受试者的伤口愈合的药剂，所述药剂适合于局部施用并且包含至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
22.如项目21所述的药剂，其中所述药剂还包含用于皮内、皮下肌内或局部施用的装置。
23.如项目21所述的药剂，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
24.如项目21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体呈准备用于复水的粉末形式。
25.如项目21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
26.如项目25所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml的浓度处于溶液中。
27.如项目22所述的药剂，其中所述装置适合用于进行若干次注射。
28.如项目27所述的药剂，其中所述若干次注射是在所述伤口周围、在所述伤口附近或在所述伤口中进行。
29.如项目21所述的药剂，其中所述局部施用由在所述伤口周围在其约0.5cm处进行的若干次注射组成。
30.如项目21所述的药剂，其中所述伤口是开放性伤口。
31.如项目21所述的药剂，其中所述伤口是慢性伤口或急性伤口。
32.如项目21至31中任一项所述的药剂，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
33.如项目21所述的药剂，其中所述局部施用以至少每周一次、至少每周两次、至少每三天一次、至少每两天一次、至少每天一次或至少每天两次的频率进行。
34.如项目21或27所述的药剂，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少50％。
35.如项目21或27所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少90％。
36.如项目21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
37.如项目36所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml的浓度处于溶液中。
38.如项目21所述的药剂，其中所述伤口具有面积，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述面积成比例。
39.如项目38所述的药剂，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm2表示的所述伤口面积的约2.5倍。
40.如项目21所述的药剂，其中所述伤口具有面积，并且其中当所述伤口面积小于4cm2时所述剂量是约10mg；当所述伤口面积是4cm2至8cm2时所述剂量是约20mg，或当所述伤口面积大于8cm2时所述剂量是约30mg。
41.如项目21所述的药剂，其中所述伤口具有周长，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述伤口周长成比例。
42.如项目41所述的药剂，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm表示的所述伤口周长的约1.5倍。
43.如项目27所述的药剂，其中所述若干次注射由2至30次注射组成。
44.如项目21所述的药剂，其中所述受试者是哺乳动物，并且优选人。
45.如项目21所述的药剂，其中所述伤口是选自糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、静脉性腿部溃疡、动脉血腿部溃疡、血管伤口或病变的组的慢性伤口。
46.如项目21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体呈准备用于复水的粉末形式。
47.一种促进受试者的伤口愈合的方法，所述方法包括向所述受试者局部施用至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
48.如项目41所述的方法，其中所述局部施用是皮内、皮下、肌内或局部施用。
49.如项目41所述的方法，其中所述局部施用由若干次注射组成。
50.如项目49所述的方法，其中所述若干次注射是在所述伤口周围、在所述伤口附近或在所述伤口中进行。
51.如项目47所述的方法，其中所述局部施用由在所述伤口周围在其约0.5cm处进行的若干次注射组成。
52.如项目47所述的方法，其中所述伤口是开放性伤口。
53.如项目47所述的方法，其中所述伤口是慢性伤口或急性伤口。
54.如项目47至53中任一项所述的方法，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
55.如项目47所述的方法，其中所述局部施用以至少每周一次、至少每周两次、至少每三天一次、至少每两天一次、至少每天一次或至少每天两次的频率进行。
56.如项目47或49所述的方法，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少50％。
57.如项目47所述的方法，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约2mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
58.如项目57所述的方法，其中所述浓度是约5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml。
59.如项目47所述的方法，其中所述伤口具有面积，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述面积成比例。
60.如项目59所述的方法，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm2表示的所述伤口面积的约2.5倍。
61.如项目47所述的方法，其中所述伤口具有面积，并且其中当所述伤口面积小于4cm2时所述剂量是约10mg；当所述伤口面积是4cm2至8cm2时所述剂量是约20mg，或当所述伤口面积大于8cm2时所述剂量是约30mg。
62.如项目47所述的方法，其中所述伤口具有周长，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述伤口周长成比例。
63.如项目62所述的方法，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm表示的所述伤口周长的约1.5倍。
64.如项目47至49中任一项所述的方法，其中所述若干次注射由2至30次注射组成。
65.如项目47所述的方法，其中所述受试者是哺乳动物，并且优选人。
66.如项目47所述的方法，其中所述伤口是选自糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、静脉性腿部溃疡、动脉性腿部溃疡、血管伤口或病变的组的慢性伤口。
由以下描述、权利要求和本文的概述，本发明的其他方面对本领域技术人员而言将显而易见。
附图简述
图1是人纤溶酶原的示意性图示，其示出其中的内部桥和纤维蛋白溶酶u-PA和t-PA裂解位点。
图2表示如UniProt登录号P00747中所描述的人纤溶酶原前体的氨基酸序列。
图3A和3B分别示出实施例1中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗之前和之后的照片。
图4A和4B分别示出实施例2中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗之前和之后的照片。
图5A和5B分别示出实施例3中所描述的受试者足部溃疡在其纤溶酶原治疗之前和之后的照片。图5C示出实施例3中所描述的受试者在纤溶酶原治疗之后两个月双脚站立的照片。图5D至5G分别示出实施例3中所描述的受试者左脚溃疡在治疗前和第8、30、57、84和94天时的照片。
图6A、6B和6C分别示出实施例4中所描述的受试者右腿伤口在纤溶酶原治疗前和第33和56天时的照片。图6D至6H分别示出实施例4中所描述的受试者左腿伤口在纤溶酶原治疗前和第33、62、93和129天时的照片。图6I呈现示出第0天至第129天在实施例4的受试者中所观察到的左腿伤口尺寸百分比的图。
图7A至7D分别示出实施例5中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗前和第30、54和59天时的照片。
图8A、8B和8C分别示出实施例6中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗前和第9和28周时的照片。图8D呈现示出第0天至第28周在实施例6的受试者中所观察到的伤口尺寸百分比的图。
图9A至9E分别示出实施例7中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗前和第29、45、64和88周时的照片。图9F呈现示出自伤口开始(纤溶酶原治疗前120个月)直到纤溶酶原治疗结束(开始纤溶酶原治疗之后20个月)实施例7所描述的受试者的伤口尺寸百分比的图。
图10A至10I分别示出实施例8中所描述的受试者伤口在纤溶酶原治疗前和第1天、第10天、第3个月、第5.5个月、第11个月、第12个月、第14个月和第15个月时的照片。图10K呈现示出自第0天至第15个月在实施例8的受试者中所观察到的伤口尺寸百分比的图，其指示因暂时中断纤溶酶原治疗而产生的伤口尺寸增加。
发明详述
本文公开一种经由用纤溶酶原或其生物活性变体治疗来促进具有伤口(急性伤口或慢性伤口)的受试者的伤口愈合的治疗或给药方案，以及用于此目的的药剂。
纤溶酶原是如图1中所示的纤维蛋白溶酶的酶原。人纤溶酶原前体的氨基酸序列展示于图2中。人纤溶酶原含有791个氨基酸(前体＝810个氨基酸)，且分子量为约90kD且pI为大约7.0，但是差异糖基化和/或N末端活化肽的移除可产生6.2至8.0范围的等电点。它是由前77个氨基酸组成的具有24个链内二硫键、5个环状结构域(kringle domain)(参与结合于纤维蛋白和抑制剂α2-抗纤维蛋白溶酶)、丝氨酸蛋白酶结构域(P)和活化肽(AP)的单链蛋白质。存在一个N-连接糖基化位点和一个O-连接位点，但是已经鉴定了第二O-连接位点(Goldberg,2006)。在循环中大约70％的纤溶酶原仅含有O-连接糖基化，而其余含有N-连接糖与O-连接糖两者。
天然纤溶酶原以两种主要形式产生：Glu-纤溶酶原(Glu-Pg)和Lys-纤溶酶原(Lys-Pg)，其分别针对谷氨酸或赖氨酸的N末端氨基酸加以命名。Glu-Pg由通过基因序列命名的整个氨基酸序列(排除活化肽)组成，而Lys-Pg是Glu-Pg在Lys-77与Lys-78之间裂解的结果(在图2中加下划线)。Lys-Pg的循环半衰期明显比Glu-Pg短(Glu-Pg为2-2.5天，Lys-Pg为0.8天)。Glu-Pg是存在于血浆中的Pg的主导形式，且在循环中检测到极少的Lys-Pg(Violand,B.N.,Byrne,R.,Castellino F.J.(1978)The effect ofα-,ω-Amino Acids onHuman Plasminogen Structure and Activation.J Biol Chem.253(10):5395-5401；Collen D,Ong EB,Johnson AJ.(1975)Human Plasminogen:In Vitro and In VivoEvidence for the Biological Integrity of NH2-Terminal Glutamic AcidPlasminogen.Thrombosis Research.7:515-529)。
纤溶酶原在肝脏中合成且分泌至血浆中。纤溶酶原分布于整个身体中，并且当存在活化的条件时，纤溶酶原(Plasminogen pro-enzyme)由组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)或由尿激酶纤溶酶原活化剂(u-PA)转化为活性酶纤维蛋白溶酶。纤维蛋白溶酶然后降解纤维蛋白且将潜伏性基质金属蛋白酶(pro-MMP)转化成活性MMP，活性MMP进而进一步降解细胞外基质(ECM)作为组织愈合/重塑过程的一部分。纤维蛋白稳态中主要涉及由t-PA介导的纤溶酶原活化，而经由u-PA产生纤维蛋白溶酶(从而与其受体u-PAR形成复合物)在组织重塑中起作用。
在患糖尿病的受试者中，纤溶酶原在血液循环中糖基化。糖基化的纤溶酶原是无功能或功能不良的。因此，糖尿病受试者的伤口更难以自己愈合且倾向于不愈合和变成慢性伤口。在糖尿病受试者中，考虑静脉内施用的纤溶酶原在到达伤口之前可能发生糖基化，局部施用纤溶酶原来治疗伤口是有利的。这在血糖不受控制或部分受控制的糖尿病受试者中尤其是一个问题。
在伤口区域的周围区域中，组织可能损伤。常常存在缺氧、缺血、感染和/或肿胀。这些条件妨碍正常血液循环到达伤口且可代表静脉内施用的化合物到达伤口的障碍。因此，为使化合物能够更迅速且更有效地到达伤口和受干扰组织的细胞，将药物局部施用至伤口是有利的。
在本发明的一方面中，局部施用是皮内(或真皮内)、皮下(或真皮下)、肌内或局部施用。在本发明的一方面中，所述施用是在伤口中、在伤口附近或在伤口周围进行。优选地，在伤口外部但紧邻伤口进行施用。当所述施用是皮内(或真皮内)、皮下(或真皮下)或肌内时，所述剂量可一次注射(单次注射)或以若干次注射(多次注射)来施用。优选地，局部施用由超过一次注射组成。注射次数也可随伤口尺寸(即伤口边缘的长度)而变化。在一个优选实施方案中，注射次数是介于2次与30次注射之间，或介于3次与12次注射之间。在本发明的一个实施方案中，注射是在离伤口约0.1cm至约2cm的距离处且优选在约0.1cm至约1cm的距离处进行。在一个实施方案中，注射是在离伤口约0.5cm或约1cm的距离处进行。在伤口不为开放性伤口(如第1阶段的褥疮，或真皮仍然连续时的烧伤，或病变)的条件下，局部施用优选在伤口区域中进行。在伤口为开放性伤口(如切口、溃疡或类似伤口)的条件下，局部施用优选在伤口区域周围进行。当施用是局部时，纤溶酶原的剂量可通过滴剂、乳膏、凝胶等进行施用。当伤口是鼓膜穿孔时，或当伤口在眼睛中时(如眼睑中的木样结膜炎)，经由使用滴剂的局部施用是优选的。尽管如此，鼓膜穿孔和木样结膜炎也可通过在鼓膜穿孔周围皮内或皮下施用纤溶酶原或在木样结膜炎的情况下在眼睑中施用。木样结膜炎伤口通常被称为病变。在纤溶酶原包含在滴剂溶液、乳膏、凝胶等中的实施方案中，局部施用可施用在伤口上、伤口周围或两者。
在一方面中，本文所描述的治疗包括重复施用约0.4mg至约30mg的剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。根据本发明的实施方案，每天两次、每天一次或更经常、每两天一次或更经常、每三天一次或更经常、每周两次或更经常、每四天一次或更经常、每五天一次或更经常或每周一次或更经常进行施用。
如本文所用的术语“纤溶酶原”是指来自任何动物(例如哺乳动物，例如人)的任何形式的天然纤溶酶原多肽(例如Glu-纤溶酶原或Lys-纤溶酶原)。纤溶酶原是由组织型纤溶酶原活化剂(t-PA)或由尿激酶纤溶酶原活化剂(u-PA)转化成活性酶纤维蛋白溶酶的酶原。纤维蛋白溶酶然后降解纤维蛋白且将潜伏性基质金属蛋白酶(pro-MMP)转化成活性MMP，活性MMP进而进一步降解细胞外基质(ECM)作为组织愈合/重塑过程的一部分。如本文所用的术语“生物活性变体”是指保留天然纤溶酶原的生物活性(即被转化为能够降解纤维蛋白且将潜伏性基质金属蛋白酶(pro-MMP)转化成活性MMP的纤维蛋白溶酶多肽(由t-PA和或u-PA)的能力)的改变的纤溶酶原多肽。变体可包含一个或多个氨基酸取代、缺失/截短(N末端、C末端和/或内部氨基酸缺失/截短)、添加(N末端、C末端和/或内部氨基酸添加)。生物活性变体可展现低于、高于或类似于天然纤溶酶原多肽的生物活性(例如所得纤维蛋白溶酶的酶活性)。在实施方案中，变体与天然纤溶酶原多肽具有至少60％、70％、75％、80％、85％、90％或95％的氨基酸序列同一性。生物活性纤溶酶原变体描述于例如WO2012/093132、WO2013/024074和Wang等人(1995,Protein Science4,1758-1767)中，且包括通常被称为“中型纤溶酶原(midiplasminogen)”、“小型纤溶酶原(miniplasminogen)”、“微型纤溶酶原(microplasminogen)”和“δ-纤溶酶原”的纤溶酶原的缺少一个或多个环状结构域和/或其部分的截短变体。在一个实施方案中，纤溶酶原是人纤溶酶原。在另一个实施方案中，组合物包含天然人纤溶酶原。纤溶酶原可获自若干来源。其可通过重组合成获得，或自血液、血浆或血液源性溶液提取/纯化。纤溶酶原可通过科恩分级分离(Cohnfractionation)或通过沉淀自血液或血浆提取。纤溶酶原可通过例如结合亲和色谱法(如WO 2006/120423中所描述的方法)自血浆或血液源性溶液纯化或重组产生。
术语“药物组合物”和“药剂”在本文中可互换使用。药剂必然包括纤溶酶原或其变体的药物组合物。在本发明的某些方面中，所述药剂还包括用于施用药物组合物的装置。所述组合物可呈粉末形式或呈溶液形式。在组合物呈粉末形式的实施方案中，其优选准备用于在注射或局部施用之前进行复水。
在本发明的一个实施方案中，所述药物组合物中所含的纤溶酶原或其生物活性变体具有约70％或更高、约80％或更高、约85％或更高、约90％或更高、约95％或更高和约98％或更高的纯度。在本发明的另一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体含于药物组合物中，其中除纤溶酶原或其变体外的蛋白质的总量低于约30％、低于约20％、低于约15％、低于约10％、低于约5％或低于约2％。
在本发明的一个实施方案中，包含纤溶酶原或其变体的药物不包含或实质上不含另一蛋白质(即除纤溶酶原或其变体之外)。在本发明的一个实施方案中，所述组合物不包含或实质上不含白蛋白。在本发明的一个实施方案中，所述组合物或药剂不包含或实质上不含抑肽酶或不超过10KIU/mL抑肽酶。在本发明的一个实施方案中，所述组合物或药剂不包含或实质上不含牛抑肽酶或不超过10KIU/mL牛抑肽酶。在本发明的一个实施方案中，所述组合物或药剂不包含或实质上不含合成抑肽酶或不超过10KIU/mL合成抑肽酶。在本发明的一个实施方案中，所述组合物不包含或实质上不含胰蛋白酶抑制剂。在本发明的一个实施方案中，所述组合物不包含或实质上不含丝氨酸蛋白酶抑制剂。在本发明的一个实施方案中，所述组合物不包含或实质上不含纤维蛋白溶酶。在本发明的一个实施方案中，所述组合物实质上不含或不含表面活性剂，即表面活性剂的浓度小于0.01mM。
如本文所用的术语“皮下”是指施用或递送至皮肤下或皮下组织中，并且等效于术语“真皮下”。如本文所用的术语“皮内”是指在皮肤内施用或递送，并且等效于术语“真皮内”。如本文所用的术语“肌肉内”是指在肌肉组织中施用或递送。如本文所用的术语“局部”是指在皮肤上或伤口上施用或递送。
如本文所用的术语“每天”是指每天一次施用一定剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。优选地，施用是在一天中大致相同的时间进行，但是不一定如此。有时，在治疗期期间施用可漏掉一天或两天，而不会背离每天施用的预期含义。术语“有时”在此背景下是指每周一次或两次。
如本文所用的术语“促进”是指刺激、加速和/或改善。如本文所用的术语“愈合”是指恢复、修复、治疗或复原。如本文所用的术语“伤口”包括开放性伤口和非开放性伤口。开放性伤口是指皮肤中的开口，包括但不限于病变、割破、划破、切破、溃疡、损伤或对皮肤完整性的任何破坏。非开放性伤口是指皮肤未开放但皮肤组织颜色异常、温度升高和/或硬度异常(比其周围区域硬或软)的伤口，且皮肤下面的组织的特征为发炎、比正常组织敏感性高和/或肿胀。
已发现低至每天2mg的重复剂量足以促进伤口愈合。伤口愈合的加速可通过将剂量增加至3mg与30mg之间且优选为4mg、5mg或10mg来增加。在实施例中已施用各种剂量的纤溶酶原，且已注意到，高于某一量，修复机制似乎饱和且伤口未更快愈合。因此，在一个实施方案中，每一剂量待施用的纤溶酶原或其生物活性变体的范围是约2mg至约30mg。在另一个实施方案中，每一剂量待施用的纤溶酶原或其生物活性变体的范围是约2mg至约20mg。在其他实施方案中，所述剂量是约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg。在另一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量是约10mg。
施用频率自每天两次至每周一次变化，优选自每天一次至每周一次，且更优选为每天一次、每两天一次、每三天一次、每两天或三天一次、每周两次或每周一次。在一个实施方案中，施用频率是每两天或三天一次。在一个实施方案中，施用频率是每天一次。
在一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量使用以下等式关于伤口尺寸(面积)来确定：
X＝(m)Y
其中：
X＝纤溶酶原或其生物活性变体的剂量(mg)；
Y＝伤口面积(cm2)；并且
m＝2.0至3.0，在一个实施方案中2.2至2.8，在另一个实施方案中2.4至2.6。
在一个实施方案中，m＝2.5且等式为：
X＝(2.5)Y
在另一方面中，本发明提供一种治疗受试者的伤口的方法，所述方法包括(i)确定伤口的尺寸；(ii)使用以上等式中的一者确定待向受试者施用的纤溶酶原或其生物活性变体的剂量；以及以每天两次至每周一次的频率局部施用所述剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。
在一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量的确定是基于初始伤口面积，即在治疗之前所测量的伤口面积。’治疗’指示施用(例如多次或重复施用)一定剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。在一个实施方案中，所施用的纤溶酶原或其生物活性变体的剂量在治疗持续时间期间(即在所有重复施用中)保持相同。在另一个实施方案中，在治疗过程中根据‘治疗中的伤口面积’再确定纤溶酶原或其生物活性变体的剂量。由于预期在治疗期间伤口面积的尺寸减小，因此存在如下的实施方案：在治疗过程期间所施用的纤溶酶原或其生物活性变体的剂量随着伤口面积减小而降低，且所述剂量可使用上文提及的等式来确定。剂量的再评估可在治疗期间进行一次或在治疗期间进行若干次。存在另一个实施方案，其中在治疗过程期间增加所施用的纤溶酶原或其生物活性变体的剂量以加速伤口愈合。
在另一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量可通过使用以下图表关于伤口尺寸(面积)来确定：
伤口面积 剂量
<4cm2 约10mg
4-8cm2 约20mg
>8cm2 约30mg
在一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量可使用以下等式关于伤口周长来确定：
X＝(n)Z
其中：
X＝纤溶酶原或其生物活性变体的剂量(mg)，
Z＝伤口周长(cm)，并且
n＝1.0至2.0，在一个实施方案中1.2至1.8，在另一个实施方案中1.4至1.6。
在一个实施方案中，n＝1.5且等式为：
X＝(1.5)Z
在一个实施方案中，施用一定剂量的纤溶酶原或其生物活性变体(各剂量)的频率可随伤口尺寸(面积)而变化。例如，当伤口尺寸减小超过50％时可更不频繁地施用剂量。例如，初始施用频率可以是每天一次，并且当伤口尺寸减小了其初始尺寸的超过50％时，频率可降至每两天一次。频率可进一步降至每周一次。可在治疗期间对频率进行一次或若干次再评估。
最佳地，“治疗持续时间”当将受试者鉴定为需要接受治疗以促进伤口愈合的受试者时起始且当伤口闭合时结束。然而，出于各种原因，治疗可能不在有需要的受试者被鉴定时立刻起始。出于各种原因，治疗可能在伤口闭合之前停止。然而，在一些情况下(如在修复机制受损的患者中和在纤溶酶原-缺陷型患者中)，可能需要寻求治疗直到伤口闭合。根据本发明的一个实施方案，治疗在伤口开始自己愈合且开口尺寸开始减小时停止。在一些情况下，可能需要将治疗持续时间延长至超出伤口闭合时间，以确保确定愈合。优选地，治疗持续时间是至少3天、至少11天、至少14天、至少18天、至少21天、至少22天、至少28天、至少30天、至少32天或至少52天。在一个优选实施方案中，治疗持续时间是至少21天。在另一个优选实施方案中，治疗持续时间在观察到伤口状况显著改善(如发红减轻和/或伤口尺寸显著减小)时结束。伤口尺寸显著减小被定义为与初始伤口尺寸(治疗之前)相比伤口尺寸为75％、50％、40％、30％、20％或10％。在一个实施方案中，当伤口尺寸减小至少50％、至少75％、至少90％或100％时，治疗持续时间结束。伤口尺寸减小100％意味着伤口完全愈合。完全愈合意味着伤口在开放性伤口的情况下是闭合的，或者在非开放性伤口的情况下(如例如病变)消失。
在一个实施方案中，纤溶酶原或其生物活性变体的剂量是含于药物组合物中。所述组合物可呈粉末或液体溶液形式。所述溶液中所含的纤溶酶原或其生物活性变体优选在约1mg/ml至约20mg/ml的浓度下，且更优选在约1mg/ml、约5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml的浓度下。在一个优选实施方案中，所述溶液中所含的纤溶酶原或其生物活性变体的量是呈约10mg/ml的浓度。
使用本发明的方法、用途和药剂治疗的伤口可以是急性伤口或慢性伤口。慢性伤口意图定义长时间仍然未愈合或开放或者似乎至少三个月不愈合或者至少三个月仍然开放或者不显示愈合特征或者显示存在脓液、腐败或坏疽的伤口。急性伤口意图定义不为慢性伤口的伤口。意图用本发明的方法、用途和药剂治疗的慢性伤口的实例包括但不限于糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、血管伤口、静脉性腿部溃疡、动脉性腿部溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、病变、木样结膜炎伤口。
在一个优选实施方案中，伤口是局部或粘膜伤口，或受试者的表皮、真皮或粘膜的伤口。在一个实施方案中，受试者是哺乳动物。术语哺乳动物包括动物或人。
在一个实施方案中，本发明的药剂含有为整个治疗持续时间所必需的所有剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。在另一个实施方案中，药剂的剂型是用于一次施用用途且含有一个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体。在此实施方案中，用以注射纤溶酶原或其生物活性变体的装置可以是一次性的。在药剂的剂型用于一次性用途的实施方案中，用于一次施用的纤溶酶原或其生物活性变体的剂量优选已插入所述装置。例如，药剂可呈含有单个剂量(即约2mg至约30mg之间的纤溶酶原或其生物活性变体)的一次性注射器的形式。在另一个实例中，药剂可呈若干个预填充一次性注射器的形式，其中所述预填充一次性注射器各自含有单个剂量(即约2mg至约30mg之间的纤溶酶原或其生物活性变体)。根据本发明的一个实施方案，药剂包括优选若干个预填充一次性注射器以涵盖整个治疗持续时间或治疗持续时间的一部分，且优选至少21个预填充一次性注射器或至少28个预填充一次性注射器。当药剂包括涵盖为涵盖一部分治疗持续时间所必需的剂量的药剂时，可更新所述药剂直到伤口完全愈合或直到伤口尺寸减小其初始尺寸的超过50％。根据另一个实施方案，药剂呈其中含有多个剂量的一个容器的形式。根据另一个实施方案，药剂进一步包括至少21个一次性注射器，以便能够施用纤溶酶原或其生物活性变体持续整个治疗持续时间或持续整个治疗持续时间的一部分。在另一个实施方案中，注射器(一次性或非一次性)由医生、护士提供或与药剂分开购买。在一个实施方案中，装置是适合于多次注射的笔。在另一个实施方案中，装置是适合于多次注射的无针头笔。所述注射器(一次性或非一次性)、所述针头、所述笔和所述无针头笔适合于皮内、皮下或肌内递送。
根据另一个实施方案，所述药剂呈其中含有多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体的一个容器的形式，其中所述剂量呈溶液或准备用于复水成溶液的粉末的形式。所述粉末可以是冻干过程的结果或以其他手段获得。
术语“药物组合物”命名用于药物、医疗或治疗目的的组合物。药物组合物通常包含一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂，且可以药物领域中熟知的方式通过将具有所需纯度的活性成分与一或多种任选的药学上可接受的载体、赋形剂和/或稳定剂混合来制备。也可将补充活性化合物合并至组合物中。载体/赋形剂可适合用于例如皮下或真皮内施用(参见Remington:The Science and Practice of Pharmacy by Alfonso R.Gennaro,2003,第21版,Mack Publishing Company)。
如本文所用的“赋形剂”具有其在本领域中的通常含义并且是不为活性成分(药物)本身的皮内、皮下、真皮内或局部剂型的任何成分。赋形剂包括例如张力调节剂、稳定剂、填充剂、防腐剂等。稳定剂可包含(i)氨基酸，(ii)氨基酸盐，(ii)氨基酸类似物或(iv)其任何混合物。如本文所用，“药学上可接受的赋形剂”是指不妨碍活性成分的生物活性的有效性且对受试者无毒(即为一类赋形剂和/或以对受试者无毒的量使用)的任何赋形剂。赋形剂是本领域中熟知的，并且本发明系统在这些方面中不受限制。
配制于本发明的组合物中的纤溶酶原可获自若干来源。其可例如通过重组合成获得，或自血液、血浆或血液衍生溶液提取/纯化。纤溶酶原可通过科恩分级分离或通过沉淀自血液或血浆提取。纤溶酶原可通过结合亲和色谱法(如WO 2006/120423中所描述的方法)自血浆或血液源性溶液纯化。纤溶酶原的变体包括但不限于对氨基酸序列的任何修饰或向其中添加任何基团或向其中添加任何氨基酸或氨基酸序列。纤溶酶原的片段包括但不限于其中缺失任何氨基酸或氨基酸序列，只要维持或部分维持纤溶酶原活性即可。
如本文所用，术语“约”具有其普通含义。术语“约”用于指示值包括用于测定所述值的装置或方法的固有误差变化，或者涵盖接近于所叙述的值(例如在所叙述的值的10％或5％以内)的值(或值的范围)。
术语“受试者”包括可受益于纤溶酶原、其变体或其片段的施用的活生物体。术语“受试者”包括动物，如哺乳动物、宠物或鸟。优选地，受试者是哺乳动物或人。更优选地，受试者是人。更优选地，受试者是具有伤口(包括急性伤口或慢性伤口)的人患者。还最优选地，受试者是具有慢性伤口的人患者。在一个实施方案中，哺乳动物是高等哺乳动物。高等哺乳动物的实例包括但不限于非人灵长类动物、马、奶牛、象。宠物的实例包括但不限于犬、猫、兔、马、矮种马。
如本文所用，“预防(preventing/prevention)”意图指至少降低获得疾病或病症的风险的可能性(或对疾病或病症的敏感性)(即使得在可能暴露于或容易患所述疾病但尚末经历或展现所述疾病的症状的患者中不发生所述疾病的至少一种临床症状)。用于鉴定此类患者的生物和生理参数提供于本文中且也为医师熟知的。
术语“治疗(treatment/treating)”受试者包括向受试者施用或施用本发明的组合物(或向受试者的组织或器官施用或施用本发明的组合物)，目的为延迟、稳定、治愈、愈合、缓解、减轻、改变、补救、减少恶化、改善、改良或影响疾病或病状、疾病或病状的症状或疾病或病状的风险(或对疾病或病状的敏感性)。术语“治疗”是指在治疗或改善损伤、病变或病状时成功的任何指示，包括任何客观或主观参数，如消除；减退；恶化速率减小；疾病严重程度减轻；症状稳定、削弱或使受试者更能耐受损伤、病变或病状；退化或衰退速率减慢；使得退化终点衰弱程度更低；或改善受试者的身体或心理健康。在一些实施方案中，术语“治疗”可包括增加受试者的预期寿命和/或延迟对其他治疗的需要。
如本文所用，术语“治疗有效量”是指在向受试者施用以治疗或预防特定病症、疾病或病状时化合物足以实现对所述病症、疾病或病状的此类治疗或预防的量。如本文所用，术语“治疗有效量”进一步是指纤溶酶原、其变体或其片段有效愈合伤口的量。
根据本发明，所述剂量(或量)的纤溶酶原或其生物活性变体是皮下、皮内或肌内施用。在一个实施方案中，所述剂量或量是皮下施用。在另一个实施方案中，所述剂量或量是皮内施用。如本文所用，术语“皮内”与“真皮内”含义相同且可互换使用。在另一个实施方案中，所述剂量或量是肌内施用。
应注意，术语“制剂(formulation)”和“组合物”以及“制剂(preparation)”在本文中可替换使用，且意图命名相同对象。
除非另外指出本文中，否则本文中叙述值的范围仅仅旨在充当个别提及属于范围内的各单独值的便捷方法，且各单独值合并至本说明书中，如同其在本文中被个别叙述一般。范围内的值的所有子集也合并至本说明书中，如同其在本文中被个别叙述一般。
实施例
以下实施例进一步说明对本发明的实践，但不意图限制本发明。在所有以下实施例中，使用用于真皮内或皮下施用的具有0.3mm针头的1ml注射器来进行注射。以若干次注射将纤溶酶原剂量分配于伤口周围离伤口约0.5cm处。
实施例1：烧伤伤口愈合
两腿上具有烧伤损伤的34岁健康女性历经10年时间接受了7次皮肤组织扩张术。使用常规治疗无任何愈合进展，右膝远端区域的伤口被视为慢性伤口。
纤溶酶原治疗由9个月期间22个剂量的4mg纤溶酶原组成。在9个月治疗之后，伤口尺寸减小了其初始尺寸的88％。纤溶酶原治疗之前和之后的伤口照片分别示于图3A和3B中。
实施例2：切割伤口愈合
62岁男性在右手侧边具有由锯子造成的伤口。伤口经修补和缝合处理，但仍然发生深部感染。在清创术之后，用传统局部治疗来治疗伤口在2个月期间无任何改善。
纤溶酶原治疗由每天4mg纤溶酶原构成的3天治疗组成。开始治疗之后10天时伤口完全愈合，且所述男性回去工作。纤溶酶原治疗前和开始治疗之后10天时的伤口照片分别示于图4A和4B中。
实施例3：足部溃疡愈合
具有动脉粥样硬化和严重足部神经病变的非糖尿病77岁男性在3年期间在各脚上患有慢性足溃疡。在纤溶酶原治疗之前1.5年时对左脚第一个脚趾进行了远端部分截肢。已施用了抗生素治疗，但伤口仍然开放。患者达到了被评估为进行双侧膝下截肢作为除去患者疼痛的解决方案的程度。
左脚溃疡的纤溶酶原治疗由56天期间21个纤溶酶原剂量组成。右脚溃疡的纤溶酶原治疗由84天期间32个纤溶酶原剂量组成。最初8个剂量含有2mg的纤溶酶原且每天或每两天注射一次。后面的剂量含有5mg的纤溶酶原且每两天或每三天进行注射。在纤溶酶原治疗之后，足部溃疡完全愈合且患者可行走且双脚正面保持平衡。患者未观察到或报道纤溶酶原治疗的副作用。
纤溶酶原治疗前和治疗之后的足部溃疡照片分别示于图5A和5B中。图5C示出在治疗结束之后约2个月时患者站立时的双脚。图5D、5E、5F和5G分别示出第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第8天(2mg)、第30天(5mg)和第56天(5mg)时的左脚。图5H、5I、5J、5K、5L和5M分别示出第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第8天(2mg)、第30天(5mg)、第57天(5mg)、第84天(5mg)和第94天(不治疗)时的右脚。
实施例4：手术后伤口愈合
患有动脉硬化的80岁女性已使得自其腿部收获静脉移植物以便进行冠状动脉旁路术。在旁路术之后三个月，她在她左腿和右腿中留下了未愈合的手术后伤口。伤口用令人痛苦的清创术处理而无改善。患者在两条腿中均患有双侧性神经病变。
右腿伤口的纤溶酶原治疗由56天期间20个剂量的5mg纤溶酶原组成，其中前13个剂量是在治疗前33天内注射。每两天或三天进行纤溶酶原的施用。在治疗56天之后观察到右腿伤口完全愈合。第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第33天和第56天时的右腿伤口照片分别示于图6A、6B和6C中。
左腿伤口的纤溶酶原治疗由129天期间46个剂量的5mg纤溶酶原组成，其中前13个剂量是在治疗前33天内注射，之后13个剂量是在29天期间注射，随后11个剂量是在再31天期间注射，且后面9个剂量是在最后36天内注射。纤溶酶原施用频率最初为每两天或三天一次，且延长至每四天一次。在治疗129天之后观察到左腿伤口完全愈合。第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第33天、第62天、第93天和第129天时的左腿伤口照片分别示于图6D、6E、6F、6G和6H中。第0天至第129天时的左腿伤口尺寸百分比报道于图6I中所示的图中。
实施例5：外伤伤口治疗
具有胰岛素依赖性1型糖尿病的40岁男性被奶牛踩在其右脚上而受伤。两年来，已用不同方法治疗伤口：包括固定靴、脚趾部分和远端截肢、深部感染引流、静脉内抗生素治疗和固定。
纤溶酶原治疗由52天期间23个剂量的5mg纤溶酶原组成，其中前10个剂量是在治疗前24天内注射。每两天或三天进行纤溶酶原的施用。在治疗开始时，已观察到与伤口相关的难闻气味减轻。在第24天，患者已再次开始工作。在第59天，如图7D中所示伤口完全闭合。
第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第30天、第54天和第59天时的伤口照片分别示于图7A、7B、7C和7D中。
实施例6：慢性伤口治疗
58岁男性在左脚下面具有慢性伤口，所述慢性伤口是由15年前走在一片玻璃上而引起。已施用了许多抗生素治疗，所述抗生素治疗对愈合伤口效率很低。在此15年间，所述男性难以使用其脚部。
纤溶酶原治疗由一个剂量的5mg纤溶酶原每周一次持续28周组成。在28周之后，组织肿胀减轻且伤口尺寸已减小了其初始尺寸的32％。在每次剂量施用期间和之后未观察到负面副作用。
第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第9周和第28周时的照片伤口分别示于图8A、8B和8C中。第0天(100％)、第9周(74％)和第28周(62％)时的伤口尺寸百分比报道于图8D中所示的图中。
实施例7：慢性伤口愈合
66岁女性在其左脚锤骨外侧区域具有慢性伤口达9年。患者经历多种已知常规伤口治疗而无改善。
纤溶酶原治疗由重复剂量的10mg纤溶酶原组成。在前两周，每天施用剂量，然后每周3次，且后面每周一次。在治疗20个月之后，伤口尺寸已减小了其初始尺寸的91％，且患者的生命力和社交生活得到显著改善。
第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第29周、第45周、第64周和第88周时的照片伤口分别示于图9A、9B、9C、9D和9E中。图9F显示报道常规伤口治疗和纤溶酶原治疗期间的伤口尺寸百分比的图。
实施例8：慢性伤口愈合
71岁男性具有定位至阿基里斯脚踵(Achilles heel)区的伤口达3年。肌腱具有血管炎。患者也受若干种慢性病状影响，如甲状腺肿(goit)、动脉硬化、张力过强和肥胖症，但患者不是糖尿病患者。伤口已经多种已知常规干预进行处理，包括使用EnibrelTM的静脉内抗生素治疗。在3个周期后EnibrelTM治疗因缺乏任何改善而停止。伤口严重感染。由于伤口被怀疑为血管形成的原因进一步施用免疫抑制治疗。
纤溶酶原治疗由每天剂量的10mg纤溶酶原持续14天组成。在此时间之后，伤口状况已改善且停止纤溶酶原治疗达14天。这种纤溶酶原治疗中断已导致伤口恶化，伤口已回到其初始状态。因此，以相同方案重新(即10mg的每天剂量)开始纤溶酶原治疗。纤溶酶原治疗数月之后，伤口状况显著改善且停止免疫抑制药物。在治疗15个月之后，伤口尺寸已减小了60％。
第0天(治疗前)、纤溶酶原治疗第10天、第3个月、第5.5个月、第11个月、第12个月、第14个月和第15个月时的照片伤口分别示于图10A、10B、10C、10D、10E、10F、10G、10H和10I中。图10J显示报道纤溶酶原治疗期间(包括其在第14天与第28天之间的中断)的伤口尺寸百分比的图。
*****
本文中包括标题供参考且用于帮助定位某些章节。这些标题不意图限制其中所描述的概念的范围，并且这些概念可在整个说明书通篇中的其他章节中具适用性。因此，本发明不意图限于本文所示的实施方案，而是与符合本文所公开的原理和新颖特征的最宽范围相一致。
除非上下文另外明确指示，否则单数形式“一个/种(a/an)”和“所述”包括相应复数参考物。
除非另外指出，否则本说明书和权利要求中所用的所有表示成分的量、反应条件、浓度、性质等的数字应理解为在所有情况下由术语“约”修饰。最低限度地，各数值参数至少应根据具有所报道有效数位的数字且通过应用一般舍入技术来理解。因此，除非指示为相反的，否则本说明书和随附权利要求中所阐述的数值参数为近似值，其可取决于设法获得的性质而变化。尽管阐述实施方案的广泛范围的数值范围和参数是近似值，但特定实施例中所阐述的数值是尽可能精确报道的。然而，任何数值固有地含有因实验、测试测量、统计分析和此类因素的变化而产生的某些误差。
应了解，本文所描述的实施例和实施方案仅用于说明性目的，且将向本领域技术人员建议根据其进行的各种修改或变化，并且所述修改或变化应包括在本发明和随附权利要求的范围内。

Claims (47)

1.一种纤溶酶原或其生物活性变体的用途，其用于制备用以促进受试者的伤口愈合的药剂，其中所述药剂适合于局部施用且包含至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
2.如权利要求1所述的用途，其中所述局部施用是皮内、皮下肌内或局部施用。
3.如权利要求2所述的用途，其中所述局部施用是在所述伤口周围、在所述伤口附近或在所述伤口中进行。
4.如权利要求2所述的用途，其中所述局部施用由在所述伤口周围在其约0.5cm处进行的若干次注射组成。
5.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口为开放性伤口。
6.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口是慢性伤口或急性伤口。
7.如权利要求1至6中任一项所述的用途，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
8.如权利要求1所述的用途，其中所述局部施用是以至少每周一次、至少每周两次、至少每三天一次、至少每两天一次、至少每天一次或至少每天两次的频率进行。
9.如权利要求1或8所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少50％。
10.如权利要求1或8所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少90％。
11.如权利要求1所述的用途，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
12.如权利要求11所述的用途，其中所述浓度是约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml。
13.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口具有面积，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述面积成比例。
14.如权利要求13所述的用途，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm2表示的所述伤口面积的约2.5倍。
15.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口具有面积，并且其中当所述伤口面积小于4cm2时所述剂量是约10mg；当所述伤口面积是4cm2至8cm2时所述剂量是约20mg，或当所述伤口面积大于8cm2时所述剂量是约30mg。
16.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口具有周长，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述伤口周长成比例。
17.如权利要求16所述的用途，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm表示的所述伤口周长的约1.5倍。
18.如权利要求4所述的用途，其中所述若干次注射由2至30次注射组成。
19.如权利要求1所述的用途，其中所述受试者是哺乳动物，并且优选人。
20.如权利要求1所述的用途，其中所述伤口是选自糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、静脉性腿部溃疡、动脉性腿部溃疡、血管伤口或病变的组的慢性伤口。
21.一种用于促进受试者的伤口愈合的药剂，所述药剂适合于局部施用并且包含至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
22.如权利要求21所述的药剂，其中所述药剂还包含用于皮内、皮下、肌内或局部施用的装置。
23.如权利要求21所述的药剂，其中所述剂量是约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
24.如权利要求21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体呈准备用于复水的粉末形式。
25.如权利要求21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
26.如权利要求25所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml的浓度处于溶液中。
27.如权利要求22所述的药剂，其中所述装置适合用于进行若干次注射。
28.如权利要求27所述的药剂，其中所述若干次注射是在所述伤口周围、在所述伤口附近或在所述伤口中进行。
29.如权利要求21所述的药剂，其中所述局部施用由在所述伤口周围在其约0.5cm处进行的若干次注射组成。
30.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口是开放性伤口。
31.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口是慢性伤口或急性伤口。
32.如权利要求21至31中任一项所述的药剂，其中所述剂量含有约2mg、约4mg、约5mg、约10mg、约15mg、约20mg、约25mg或约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
33.如权利要求21所述的药剂，其中所述局部施用是以至少每周一次、至少每周两次、至少每三天一次、至少每两天一次、至少每天一次或至少每天两次的频率进行。
34.如权利要求21或27所述的药剂，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少50％。
35.如权利要求21或27所述的用途，其中所述药剂包含多个剂量的纤溶酶原或其生物活性变体，用于进行多次施用直到所述伤口尺寸减小至少90％。
36.如权利要求21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml至约20mg/ml的浓度处于溶液中。
37.如权利要求36所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体以约1mg/ml、5mg/ml、约10mg/ml、约15mg/ml或约20mg/ml的浓度处于溶液中。
38.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口具有面积，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述面积成比例。
39.如权利要求38所述的药剂，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm2表示的所述伤口面积的约2.5倍。
40.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口具有面积，并且其中当所述伤口面积小于4cm2时所述剂量是约10mg；当所述伤口面积是4cm2至8cm2时所述剂量是约20mg，或当所述伤口面积大于8cm2时所述剂量是约30mg。
41.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口具有周长，并且其中纤溶酶原或其生物活性变体的所述剂量与所述伤口周长成比例。
42.如权利要求41所述的药剂，其中所述剂量以mg表示并且对应于以cm表示的所述伤口周长的约1.5倍。
43.如权利要求27所述的药剂，其中所述若干次注射由2至30次注射组成。
44.如权利要求21所述的药剂，其中所述受试者是哺乳动物，并且优选人。
45.如权利要求21所述的药剂，其中所述伤口是选自糖尿病性足部溃疡、糖尿病性伤口、压疮、压迫性溃疡、鼓膜穿孔、烧伤伤口、切割伤口、静脉性腿部溃疡、动脉性腿部溃疡、血管伤口或病变的组的慢性伤口。
46.如权利要求21所述的药剂，其中所述纤溶酶原或其生物活性变体呈准备用于复水的粉末形式。
47.一种促进受试者的伤口愈合的方法，所述方法包括向所述受试者局部施用至少一个剂量的约2mg至约30mg的纤溶酶原或其生物活性变体。
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