본 발명은 피부의 주름 및 과각질 제거, 기미, 주근깨 제거, 색소침착 개선 등을 목적으로 하여 사용하고 있는 AHA 등 피부개선 성분과 함께 EGF를 함유하는 피부보호 화장료 조성물에 관한 것이다.
본 발명자들은 피부주름 및 기미, 주근깨, 색소침착 개선을 위해 널리 사용되고 있는 AHA가 함유된 치료용 외용제 및 화장료가 가지고 있는 피부 자극을 표피성장인자인 Epidermal growth factor(EGF)가 효과적으로 완화함을 발견하여 본 발명을 완성하였다.
EGF는 외배엽 및 중배엽에서 기원하는 다양한 상피세포의 강력한 세포분열 촉진인자로서, 신체의 체액 중에 널리 분포되어 있고 뇨와 모유 등에 고농도로 존재하는(Capenter, 1985) 53개의 아미노산 잔기를 가진 Single polypeptide로서 분자량은 6,200 daltons이다(Capenter and Cohen, 1979 : Capenter and Wahl, 1990). EGF는 1962년 Cohen이 성숙쥐 숫컷의 턱밑샘으로부터 분리, 동정하였고 1972년 Savage와 Taylor 등이 Mouse EGF의 1차 구조와 생리적인 작용에 필수적인 역할을 하는 3개의 intramolecular disulfide bonds의 위치를 확인한 바 있다. 사람의 표피성장인자(Human EGF, hEGF)는 1975년 Gregory가 임산부 뇨에서 추출한 위산 분비억제 호르몬인 Urogastron human EGF와 동일한 것임을 증명하고 구조를 확인하였다. EGF는 상피세포, 내피세포 및 섬유아세포의 세포증식에 강력한 촉진제로 작용하며, 상피세포 결손시 상피세포의 이동과 증식을 촉진시키기 때문에 우수한 상처치유 효과를 가지고 있다. 본 발명에 사용된 EGF는 재조합 대장균으로부터 순수 분리 정제한 것으로 인간의 hEGF와 동일하다는 것이 증명되었다.(US5,652,120: JP2609515: EP652954 : KR102993: KR107023: KR110123: KR114856)
본 발명에 사용된 EGF는 화장료의 총 중량에 대하여 0.00001∼1중량%, 바람직하게는 0.0001∼0.1중량%의 함량으로 함유되며, AHA는 화장료의 총 중량에 대하여 0.1∼20중량%, 바람직하게는 3.0∼10.0중량%의 함량으로 함유된다.
본 발명에 사용된 EGF는 재조합 대장균(E. coliJM101)을 반회분식(Fed-batch) 방법으로 48∼72시간 동안 발효시킨 후 발효 상등액을 Amberchrome CG71 chromatography와 Q-sepharose chromatography 방법으로 순수 분리함으로써 정제 및 제조된다. (US5,652,120: JP2609515: EP652954: KR102993: KR107023: KR110123 :KR114856)
본 발명의 화장료 조성물은 그 제형에 있어서 특별히 한정되는 바가 없는데, 예를 들면, 유연화장수, 수렴화장수, 영양화장수, 아이크림, 영양크림, 맛사지크림, 클렌징크림, 클렌징폼, 클렌징워터, 파우더, 엣센스, 팩 등의 제형을 가질 수 있다.
또한, 각 제형의 화장료 조성물에 있어서, 상기한 EGF를 포함하여 피부개선 원료로서 AHA(glycolic acid, tartaric acid, Citric acid, lactic acid, malic acid) 또는 BHA 이외의 성분들을 화장료의 제형 또는 사용목적 등에 따라 당업자가 어려움 없이 적의 선정하여 배합할 수 있다.
이하, 시험예를 들어 본 발명의 구성 및 효과를 상세히 설명하고자 하나, 본 발명을 이들 시험예에 한정하고자 하는 것은 아니다
시험예를 위하여 하기 표 1과 같이 본 발명에 따라 AHA(젖산)와 함께 EGF를 함유하는 조성물(실시예) 및 AHA 만을 함유하는 조성물(비교실시예)이 제조되었다.
표 1.
실시예 및 비교실시예
단위(중량부) |
배합성분 |
실시예 |
비교실시예 |
EGF |
0.005 |
- |
AHA(Lactic acid) |
10.0 |
10.0 |
바셀린 |
7.0 |
7.0 |
유동파라핀 |
10.0 |
10.0 |
밀납 |
2.0 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
2.0 |
2.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
2.5 |
2.5 |
스쿠알란 |
3.0 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
0.5 |
카르복시비닐폴리머 |
0.5 |
0.5 |
토코페릴아세테이트 |
0.1 |
0.1 |
향, 방부제 |
미량 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
to 100 |
[시험예 1] 피부첩포시험(Patch Test)
본 발명의 상기 EGF 함유 피부보호 화장료에 대한 피부첩포시험을 실시하였다.
피검자 30명(평균연령 22세, 연령분포 19세-34세)을 2개 그룹(A,B)으로 나눈 후, A그룹을 대상으로는 실시예를, B그룹을 대상으로는 비교실시예를 상기 표 1에 따라 제형한 후, Haye's Test Chamber를 이용하여 상박에 피부 첩포시험(Patch Test)을 실시하였다. 단, 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 시험에서 제외 하였다.
시험부위를 70% 에탄올로 닦아낸 뒤 건조시킨 다음 A그룹에는 실시예의 크림을, B그룹에는 비교실시예의 크림을 각각 15㎍씩 Chamber에 적하 시킨 후 시험 부위인 상박 부위에 얹어 고정시켰다. 첩포는 24시간 동안 도포하고, 첩포를 제거한 후에는 Marking Pen으로 시험부위를 표시하여 각각 24시간, 48시간, 72시간 후에 시험부위를 관찰하였다.
판정은 첩포 제거 24시간, 48시간, 72시간 후에 행하며 피부반응은 하기 표 2의 국제접촉피부염연구회(International Contact Dermatitis Research Group: ICDRG)의 규정에 따라 판정하였다. 시험결과는 하기 표 3에 나타내었다.
표 2.
국제접촉피부염연구회의 판정 기준
기호 |
판 정 기 준 |
평 가 |
Mean Score |
±++++++- |
Doubtful or slight reaction and erythemaErythema + IndurationErythema + Induration + VesicleErythema + Induration + BullaeNegative |
미소자극경자극중자극강자극무자극 |
0∼0.91.0∼2.93.0∼4.95.0이상0 |
표 3.
피부첩포시험(Patch Test)
경과시간 |
실시예 |
비교실시예 |
24시간 |
0.5 |
4.5 |
48시간 |
0 |
2.0 |
72시간 |
0 |
0.5 |
피부 첩포실험에 따른 피부안전성 시험 결과, AHA 만을 함유한 비교실시예는 24시간, 48시간 및 72시간에서 매우 강한 자극을 보인 반면 AHA와 EGF를 함유한 실시예는 처음 24시간에서만 아주 낮은 미소자극을 보였지만 48시간 이후에는 자극을 보이지 않았다. 이는 EGF가 AHA에 의한 피부자극을 매우 효과적으로 억제하여 줌을 나타낸다. 일반적으로 AHA의 주 기능중 하나는 각질제거로써 AHA를 피부에 적용했을 때 피부의 두께는 매우 얇아진다. 따라서 얇아진 피부를 시간이 지남에 따라 EGF가 신속히 재생(3∼4일)하여 피부 두께를 정상으로 회복시킴으로써 피부의 자극을 효과적으로 줄여주는 것으로 생각된다.
[시험예 2] 피부자극감 시험(Stinging Potential Test)
본 발명의 상기 EGF 함유 피부보호 화장료에 대한 피부자극감시험을 실시하였다.
피검자 20명(평균연령 22세, 연령분포 19세-34세)을 대상으로 Steam Generator를 사용하여 15분간 충분히 Sweating 시킨 후, 왼쪽 얼굴에는 실시예를, 오른쪽 얼굴에는 비교실시예를 코 주위 및 뺨을 중심으로 강하게 비빈다. Stinging grade는 적용 후 자극 반응이 나타나는 시간에 따라 30초 이내에 나타나면 Intense stinging, 2.5분 이내는 mild stinging, 5분 이내는 moderate stinging, 8분 이내는 delayed stinging으로 분류하여 평가하였다. 단 건선(Psoriasis), 습진(Eczema), 기타 피부병변 보유자나 임신, 수유부 또는 피임제, 항히스타민제 등을 복용하고 있는 사람은 본 시험에서 제외하였다.
시료(실시예, 비교실시예)를 얼굴에 바른후 나타나는 피부반응(가려움, 따가움, 쓰라림, 붉어짐, 부어오름 등)을 8분 동안 관찰하고, 자극정도(Response score)를 피검자수(n)로 나누어 자극양성율(Response rate: %)을 구함으로써 자극을 평가하였다. 자극양성율에 따른 피부자극 정도는 하기 표 4에 따라 판정하고 그 결과를 표 5에 나타내었다.
표 4.
피부자극감 시험 판정기준
Grade |
Response rate(%) |
판정 |
1 |
0.00 - 0.75 |
무자극 |
2 |
0.76 - 1.50 |
미자극 |
3 |
1.51 - 2.50 |
경자극 |
4 |
2.51 - 4.00 |
중자극 |
5 |
4.01이상 |
강자극 |
표 5.
피부자극감 시험 결과
|
실시예 |
비교실시예 |
Response rate(%) |
0.95 |
4.55 |
판정 |
미자극 |
강자극 |
Grade |
2 |
5 |
피부자극감 시험에 의한 피부안전성 시험 결과, 실시예는 Response rate(%)이 0.95로 미자극으로 판정되었으나 이는 AHA 만을 함유한 비교실시예(Response rate: 4.55)에 비해 매우 낮은 피부자극을 보여주고 있다. 일반적으로 AHA를 함유한 화장료가 강한 자극을 갖고 있음을 감안할 때 EGF를 함유한 실시예의 화장료는 매우 안전한 화장료임을 알 수 있다.
[시험예 3] 제형의 안정성 시험
본 발명의 상기 EGF 함유 피부보호 화장료에 대한 제형의 안정성 시험을 실시하였다.
화장료의 안정성을 시험하기위해 상기 실시예 및 비교실시예를 45℃로 일정하게 유지되는 항온조에 불투명 초자 용기에 담아 12주동안 보관하고, 또한 4℃로 일정하게 유지되는 완전히 차광된 냉장고 내에서 불투명 초자 용기에 담아 12주 동안 보관한 후, 분리 정도 및 변색 정도를 비교 측정하였다. 그 결과를 하기 표 6에 나타내었다. 이때 제품 분리 또는 변색 정도를 다음의 6등급으로 분류하여 평가하였다.
·제품 변색 평가 기준
0: 변화 없음 1: 극히 조금 분리(변색)
2: 조금 분리(변색) 3: 조금 심하게 분리(변색)
4: 심하게 분리(변색) 5: 극히 심하게 분리(변색)
표 6.
분리 및 변색정도
온도 |
실험물질 변색 정도 |
실시예 |
비교실시예 |
45℃ |
0 |
0 |
4℃ |
0 |
0 |
제형안정성 시험 결과, 실시예 및 비교실시예에서 변색 및 분리현상이 전혀 없어 안정한 기제임을 알 수 있다.
상기한 시험예들의 결과를 볼 때, 피부주름 및 기미, 주근깨, 색소침착 개선을 위한 치료용 외용제 및 화장료에 널리 사용되고 있는 성분인 알파 히드록시 애시드(AHA)를 사용할 때 나타나는 피부 자극을 표피성장인자인 Epidermal growth factor(EGF)를 함께 함유시켜 사용함으로써 효과적으로 완화시킬 수 있음이 밝혀졌으며, 아울러 기존 화장료의 피부자극성을 완화시킨 본 발명의 EGF 함유 조성물을 제공할 수 있게 되었다.
이하 상기한 시험예들의 결과를 근거로 하여 EGF를 함유하는 본 발명 화장료의 제형예를 제시한다. 그러나, 본 발명의 조성물을 하기의 제형예들로 한정하고자 하는 것은 아니다.
제형예 1. 유연화장수(스킨로션)
배합성분 |
중량부 |
Lactic acid |
0.1 |
EGF |
0.0001 |
1,3-부틸렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
올레일알코올 |
0.1 |
폴리솔베이트 20 |
0.5 |
에탄올 |
15.0 |
벤조페논-9 |
0.05 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예 2. 영양화장수(밀크로션)
배합성분 |
중량부 |
Lactic acid |
2.0 |
EGF |
0.0002 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
1.2 |
토코페릴아세테이트 |
3.0 |
유동 파라핀 |
5.0 |
스쿠알란 |
3.0 |
마카다미아너트오일 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
1.5 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
1.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
1.0 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예 3. 영양크림
배합성분 |
중량부 |
Lactic acid |
5.0 |
EGF |
0.0005 |
바셀린 |
7.0 |
유동파라핀 |
10.0 |
밀납 |
2.0 |
폴리솔베이트 60 |
2.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
2.5 |
스쿠알란 |
3.0 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
카르복시비닐폴리머 |
0.5 |
토코페릴아세테이트 |
0.1 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예 4. 마사지크림
배합성분 |
중량부 |
Lactic acid |
2.0 |
EGF |
0.0002 |
프로필렌글리콜 |
6.0 |
글리세린 |
4.0 |
트리에탄올아민 |
0.5 |
밀납 |
2.0 |
토코페릴아세테이트 |
0.1 |
폴리솔베이트 60 |
3.0 |
솔비탄세스퀴올레이트 |
2.5 |
세테아릴알코올 |
2.0 |
유동파라핀 |
30.0 |
카르복시비닐폴리머 |
0.5 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |
제형예 5. 팩
배합성분 |
중량부 |
Lactic acid |
10.0 |
EGF |
0.0005 |
프로필렌글리콜 |
2.0 |
글리세린 |
4.0 |
카르복시비닐 폴리머 |
0.3 |
에탄올 |
7.0 |
피이지-40 히드로게비이티드 캐스터 오일 |
0.8 |
트리에탄올아민 |
0.3 |
향, 방부제 |
미량 |
정제수 |
to 100 |