CN107206000A - 预防和治疗血小板增多的癌症患者中的转移性疾病 - Google Patents

Abstract

本发明涉及抗巨核细胞剂阿那格雷(anagrelide)或其治疗活性代谢物在预防和/或治疗表现出副肿瘤性血小板增多的癌症患者中的转移性疾病中的用途。

Description

预防和治疗血小板增多的癌症患者中的转移性疾病

发明领域

本发明涉及抗巨核细胞剂阿那格雷(anagrelide)或其治疗活性代谢物在预防和/或治疗表现出副肿瘤性血小板增多的癌症患者中的转移性疾病中的用途。特别地，本发明涉及降低此类患者中最明显的潜在致死性骨、肺和其他转移的形成和进展。

本发明还涉及抗巨核细胞剂阿那格雷或其治疗活性代谢物用于增强常规的癌症化学治疗药物在血小板增多的癌症患者中的功效的用途。

药物可以被配制为适当的副作用调节(SEM)/心脏保护制剂，这最小化药物的PDEIII抑制性作用并由此最小化药物的心脏刺激物活性。合适的制剂包括先前建立的用于降低或避免首过代谢(first pass metabolism)并因此在这种情况下产生阿那格雷高度有效的PDEIII抑制性心脏活性代谢物的那些。此类制剂具有抑制血小板介导的癌细胞增殖、肿瘤发展和癌转移形成的潜能，而没有通常与阿那格雷相关的不想要的心脏毒性。

发明背景

尽管在过去的25年中，癌症治疗取得了重大进展，但几种癌症的存活率仍然很低。例如，胃癌、脑癌和食管癌的五年存活率为约15-20％，而肺癌和胰腺癌的存活率低于10％(Cancer Research UK data,2010http://www.cancerresearchuk.org/health-professional/cancer-statistics/survival)。甚至在更常见的癌症，例如肠癌和膀胱癌中，存活率仅为约50％。

近年来已经观察到多种不同类型的癌症与血小板增多，即血小板的升高相关。虽然这种所谓的副肿瘤性血小板增多由Reiss等早在1872年首次指出，但仅最近血小板增多才被鉴定为侵袭性癌症进展、转移性疾病和较差存活的独立风险因素。在大约10-57％的癌症患者中观察到副肿瘤性血小板增多，其中数目根据癌细胞类型(Sierko&Wojtukiewicz2004)和疾病阶段而变化。例如，据报道，受血小板增多影响的癌症患者的比例在卵巢癌中为33％(Hale,2012)，在乳腺癌中为18％(Stravodimou&Voutsadakis,2013)，在食管癌中为21％(Voutsadakis,2014)，在胃癌中为21％(Wang等，2012)，在肺癌中为27％(Maraz等，2013)，在结肠直肠癌中为14％(Guo等，2014)，在肾癌中为12.5％(O’Keefe等，2002)且在肝癌中为3％(Hwang等，2004)。在这些和其他实体癌症中，与具有正常血小板计数的患者相比，具有副肿瘤性血小板增多的患者对标准护理抗癌疗法显示出较差的响应和显著更差的存活。特别地，该患者亚组通常易受与最差预后相关的骨转移的影响(Zhang等2015)。这表明目前可用的治疗对这些患者服务不足。

血小板计数对癌症结果的影响在例如具有胃癌的患者中非常明显，其中显示在具有较高血小板计数(>300,000/uL)的患者中，5年存活率仅为16％，相比之下在具有较低数目(<300,000/uL)的患者中为63％(Lv等，2010)。还在肺癌患者中，与具有正常血小板计数的患者(75.3％)相比，具有升高的血小板计数的患者的3年累积总存活(OS)概率较低(59.2％)(Yu等，2013)。在具有胶质母细胞瘤的患者中，较高的血小板计数也与较差的临床结果相关(Williams,2012)。类似地，在鼠(murine)和人类两者卵巢癌的广泛研究中，Stone等(2012)得出结论，副肿瘤性血小板增多促进侵袭性肿瘤生长和较差的存活。最近的研究显示血小板在刺激多发性骨髓瘤细胞生长以及肿瘤生长中的主要作用(Takagi等，2015)。在血小板减少的小鼠中明显的是，肿瘤生长减少，存活也随之改善。

虽然几乎没有证据表明血小板在癌症中异常，但有令人信服的证据表明癌细胞刺激血小板的过度产生和不适当的活化，为肿瘤生长和转移创造有利的微环境。超过30种生长调控蛋白包括转化生长因子β(TGFβ)、血管内皮细胞生长因子(VEGF)、血小板因子4(PF4)和血小板来源的生长因子(PDGF)储存于血小板的细胞质颗粒内，同时信号受体包装细胞膜，这通常引导生长因子释放其止血、血管生成和组织愈合核心功能。癌细胞与血小板以多种方式直接地和间接地相互作用，以劫持血管生成因子、淋巴管生成因子和一般促分裂因子的这种装备，以增强肿瘤扩张和转移性扩散(Davis等，2014；Bambace&Holmes,2011；Buergy等，2012；Labelle&Hynes,2012；Riedl等，2014)。

最近的几种科学评论和会议强调了血小板与癌细胞之间发生的多重相互作用(Bambace and Holmes(2011),Stravodimou&Voutsadakis(2013),Labelle等(2011),Riedl等(2014),第55期ASH会议2013年12月。癌细胞本身似乎刺激血小板增多，增强数目的活化的血小板反过来作用于癌细胞，以辅助癌症的发展和扩散。

这种血小板-癌细胞的相互作用导致了牵涉两者之间的共生关系的“恶性循环”或致病性环路。癌细胞刺激巨核细胞/血小板产生，其反过来，通过释放多种生长因子，增强癌细胞生长和增殖并最终增强癌细胞转移。增加数目的癌细胞然后在致病性反馈环路中驱动更多血小板形成，以此类推(Lin RJ等2014)。

巨核细胞生成的初始刺激通常被认为受癌细胞细胞因子释放影响，其刺激肝脏产生血小板产生过程的驱动剂血小板生成素。然后，所得的增加的血小板数目(血小板增多)以及随之更大可用性的血小板来源的营养生长因子TGFβ、PF4、VEGF和PDGF刺激癌细胞生长和增殖。此外，VEGF促进血管生成和锚定血管形成，并且因此建立原发性肿瘤。

随着癌细胞数目的生长，这反过来刺激更大的巨核细胞生成和由癌细胞活化的更多血小板的形成。在这些血小板被活化后，这些血小板粘附至已经变得与原发性肿瘤分离的循环癌细胞，并提供免受免疫系统的自然杀伤细胞的屏蔽。这种保护使得循环的癌细胞能够到达其他靶器官，诸如继发肿瘤或转移可能发展的骨。

现在，对于这个提出的事件顺序存在实质性证据。例如由Cho等(2012)报道了血小板经由转化生长因子β(TGF-β)依赖性机制增强卵巢癌中癌细胞生长的证据。血小板为循环中TGF-β的主要来源，并且如此很可能刺激癌细胞增殖。

如早期提到的，首先由Folkman在1971年假设，随后的肿瘤发展和生长取决于新的血管的形成(血管生成)，并且血小板为调控这一过程的多种因子的载体。这些因子储存于血小板的α颗粒中，并在由癌细胞引起的血小板活化之后释放。这些血管生成因子中最突出和最重要的是VEGF。癌细胞似乎特异性地诱导了VEGF从α颗粒的释放，这然后促进血管生成(Kisucka等，2006)，并因此促进肿瘤建立和生长。

支持血小板对肿瘤扩散(转移)的促进作用的证据现在令人信服(Gay&FeldingHabermann(2011)；Borsig(2008))。由于所有癌症相关死亡的90％以上是由转移引起的(Lou等，2015)，了解血小板在该过程中的作用变得关键。在转移期间，癌细胞通过被称为渗入血管(intravasation)的过程中从原发性肿瘤进入血流而播散至身体其他部分，渗入血管现在已知由血小板介导(Battinelli等，2014)。在癌细胞进入血液后，它们活化血小板，使得血小板能够聚集并形成围绕循环肿瘤细胞的屏蔽，这针对免疫系统的自然杀伤(NK)细胞提供保护(Nieswandt等，1999)。藉此癌细胞与血小板之间的这种相互作用被实现的机制尚未完全了解，但被认为牵涉许多机制，包括血小板表面整合素及其相应的肿瘤细胞配体，以及血小板P-选择素与肿瘤上表达的选择素配体的结合(Amo L等，2014)。那些逃脱NK细胞的破坏的循环癌细胞最终通过附连至沿血管排列成行的内皮细胞并跨越组织或器官的血管壁在转移部位溢出脉管系统。该溢出过程被血小板释放的腺苷三磷酸所促进，因此打开内皮屏障并使得肿瘤细胞能够逃脱脉管系统(Schumacher等，2013)。进一步促进这一癌细胞溢出和渗透到相邻组织中的过程是将其转化为更恶性的表型，所谓的“上皮间充质转换”(EMT)，其最近已再次被证明取决于血小板/癌细胞相互作用(Labelle等，2011)。血小板来源的TGFβ在这种相互作用中协同活化癌细胞中的TGFβ/Smad和NF-κΒ途径，导致EMT转换。癌细胞中NF-κB信号传导的抑制或仅在血小板中消融TGFβ1表达已被证明防止体内肺转移(Labelle等，2011)。因此，癌细胞将似乎依赖于原发性肿瘤外的血小板来源信号进行有效的转移。事实上，在具有转移性癌症的患者中最常观察到血小板增多。

骨转移为许多癌症(特别是乳腺癌、前列腺癌、肺癌、甲状腺和肾癌)的常见并发症，并且以及导致非常严重的疼痛，通常是致死性的(Weilbaecher等2011)。自十九世纪晚期以来，人们认为，局部宿主组织的微环境积极参与某些癌症转移至特定器官的倾向，包括发展“转移前的生态位(nich)”，且骨提供了特别肥沃的“土壤”(Paget 1889)。肿瘤细胞在骨髓中的迁移和保留通过多重结合相互作用来实现，多重结合相互作用包括在肿瘤细胞和骨中的支持性宿主基质细胞两者上具有表面整合素的那些(破骨细胞/成骨细胞、新的血管、炎性细胞、巨核细胞/血小板和骨髓基质细胞)，其在增强骨转移中发挥关键作用。

此外，在血小板增多的癌症患者中，较高水平的巨核细胞及其随后发展为血小板-在它们在骨髓中产生的部位处是明显的，并且似乎使这些患者倾向更高的骨转移风险。在Zhang等(2015)的最近的一篇文章中发现，肺部腺癌患者的血小板增多与骨转移发展之间的强相关性。据报道，巨核细胞作为待被溢出的肿瘤细胞到达骨髓遇到的第一种细胞，对癌细胞具有凋亡/吞噬作用，并以防御能力起作用(Park等2011。Li等2011&Jackson等2015)。然而与此背道而驰的是产生巨核细胞分泌的生长因子，包括已知刺激癌细胞生长的TGFβ、VEGF&PDGF等等。此外，且不言而喻，骨转移的特有发展与巨核细胞可能发挥的任何防御作用的局限性有关。Boucharaba等早在2004年且同年Gupta&Massague也报道了巨核细胞/血小板在促进乳腺癌骨骼转移中的关键作用的主要证据。虽然巨核细胞可以初始表现出防御作用，但癌细胞经由复杂的多步骤过程朝向骨髓归巢并遇到巨核细胞(Mishra等2011)，导致了成骨细胞/破骨细胞骨稳态的干扰(Weilbaecher等2011)，一种通常由巨核细胞部分地调控的过程(Kacena等2006)。由于这种趋化性，进入骨髓的绝大多数癌细胞可以随后导致骨转移的发展。总之，因此，将呈现的是，血小板增多的患者中的明显过量数目的巨核细胞支持骨转移的发展。

除了骨髓以外，巨核细胞的另一个主要储库(reservoir)为肺。这里也报道了，与肺部癌转移相关的肺巨核细胞数目高于来自具有局部癌的患者和健康个体患者的肺中的数目，这再次指出巨核细胞在转移发展中的关键作用(Soares 1992)。

因此，将呈现的是，在肿瘤细胞生长、肿瘤建立和重要地后续转移，特别是在骨和肺中的后续转移方面，癌症相关血小板增多在疾病结果中发挥关键作用。因此，降低血小板功能和/或形成的治疗性干预可以提供解决与癌症相关的发病率和死亡率的有价值的新的方法。

解决由这一过量数目的血小板的血小板增多的患者所引起的问题的一种方法为使用所谓的“抗血小板”剂。该术语有点令人困惑，因为此类剂事实上并不降低血小板数目，而是简单地降低血小板活化和聚集。这具有降低由血小板提供的免疫屏蔽和随后的癌细胞血管沉积的潜能。在回顾性观察性研究中，在不确定地暴露于多种抗聚集剂，包括西洛他唑(cilostazol)、氯吡格雷(clopidogrel)、普拉格雷(prasugrel)、噻氯匹定(ticlopidine)、阿昔单抗(abciximab)、依替巴肽(eptifibatide)、替罗非班(tirofiban)、阿那格雷、阿司匹林&双嘧达莫(dipyridamole)后，Rachidi等(2014)注意到，改善的头颈部癌症的治疗结果与此类治疗之间通常的明显相关性。然而，改善的存活率最显著地与表现出较低血小板计数的那些患者相关，这并不是由这些抗聚集剂(除了阿那格雷以外)引起的，尽管这些作者困惑地描述它们作为“降低血小板的药物干预”的用途。在早期的文章中，Ambrus等(1986)报道了，在小鼠中用一种具有抗聚集但在动物中没有血小板降低作用(它的血小板降低作用对人类是特异性的)的药物阿那格雷的抗聚集疗法与癌细胞的循环时间的增加(转移发展潜能降低的指示)相关。虽然此类抗血小板疗法最近已经被证明在癌症预防中发挥部分作用(Bosetti等，2012,Leader等2015)，例如阿斯匹林在肠癌中，但选择性血小板降低剂在阻止癌症进展中的潜在价值尚未被系统研究。即便如此，Voglova等(2006)报道了人类血小板降低/抗聚集剂阿那格雷被用于临床病例研究中，其中在用伊马替尼和阿那格雷治疗的51岁的老年男性中尝试了血小板减少。然而，这里，主要目标为最小化与他的慢性骨髓性白血病相关的严重血栓-出血并发症，而不是癌症进展。57岁老年男性患者的另一个临床案例研究(Chen YG等2012)使用阿那格雷的血小板降低活性来减轻原发性肺部肿瘤血小板增多的血栓形成风险。通过血栓形成诱导的腿部肿胀的降低而不是癌症进展来测量成功。

血小板降低作为简单改变血小板聚集之一的替代，为减缓癌症进展提供了有吸引力的策略。对于潜在地与适度血小板降低相关的任何可能的出血风险的担忧可能会错位，因为即使当血小板数目被降低至100,000/μL，止血基本上不受影响。事实上，在高于75,000/μL血小板计数下，外科医师将通常在无需血小板输注的情况下操作。在手术之前的预防性血小板输注仅在严重血小板减少的患者中推荐，如果可能，将血小板计数提高至50,000与100,000/μL之间。手术和其他侵入性程序已经在较低的血小板计数下进行，没有出现大量出血，参见http://www.transfusionguidelines.org/？Publication＝HTM&Section＝9&pageid＝1120。因此，在不引起出血风险的情况下存在相当大的降低血小板数目的范围。

在动物中，携带肿瘤的小鼠的血小板消耗已经被证明引发肿瘤内出血和随之的肿瘤坏死(Ho-Tin-Noe等，2009)。此外，血小板的消耗已被证明增强DNA疫苗对癌症的治疗性抗肿瘤作用(Lee等，2013)。在治疗癌症中血小板消耗的潜在价值的另外支持来自进一步的动物研究，其中血小板数目的实验性降低已被证明具有极大的抗转移作用(Gay&Felding-Habermann,2011)。Stone等(2012)也证明，消除具有卵巢癌的小鼠中血小板增多抑制肿瘤生长，并增加肿瘤坏死。虽然存在一些其他公布的研究强调血小板计数在癌症进展中的重要性[Demers等(2011)、Li等(2014)和Cho等(2012)]，它们既没有具体说明如何实现这一点，例如，抗巨核细胞剂阿那格雷，也没具体说明如何避免极大的阿那格雷引起的心脏刺激。

降低血小板的一种方法来源于对通过其癌细胞诱导血小板增多的机制的理解。尽管Buergy等推测癌细胞可能直接刺激巨核细胞，但其他证据表明了间接机制。这被认为通过增加细胞因子诸如白细胞介素IL-1、IL-6、IL-8和/或粒细胞集落刺激因子的循环水平而实现(Sierko&Wojtukiewicz2004,Johnson等2015)，细胞因子诱导肝脏中血小板生成素产生，并且血小板生成素反过来刺激骨髓中的血小板产生。在卵巢癌小鼠模型的最近研究中，施用IL-6抗体，siltuximab，显著降低血小板计数和肿瘤生长(Stone等，2012)。然而，此类制剂的使用可能受其成本、静脉内递送的要求，且特别是其显著的免疫抑制剂以及其他不想要的副作用限制。与siltuximab和事实上另一种IL-6抗体制剂托珠单抗相关的最明显的副作用为上呼吸道感染(>20％的用siltuximab的患者中)。在具有免疫系统受损的癌症患者中，这些是特别不希望的副作用。事实上，在接受此类免疫抑制剂的患者中已经报道了严重的且有时致死性的感染。参见：http://www.medicines.org.uk/emc/ingredient/2423/tocilizumab/

血小板降低的替代的方法可以是采用一种或更多种通常用于治疗原发性血小板增多症(ET)的药物，原发性血小板增多症(ET)为以过量数目的血小板和随之的血栓形成风险为标记的罕见骨髓增生性状况。与正常范围的150,000-350,000血小板/L相比，这时的血小板计数可以大大超过10⁶血小板/L血液。历史上对这种状况的治疗使用了一种或更多种以下剂：

羟基尿素(Hydroxycarbamide)(羟基脲(hydroxyurea))。其为非特异性细胞毒性剂，影响几种造血细胞系，包括粒细胞、白细胞和红细胞谱系。在可能已经具有免疫系统受损的癌症患者中白细胞减少症(一种施用羟基尿素的潜在结果)将是不希望的。

参见：http://www.medicines.org.Uk/emc/medicine/18928/SPC

白消安(Busulphan)其为一种烷基化化学治疗剂。毒性包括严重呕吐、消瘦综合征，癫痫发作和肝毒性(静脉闭塞性疾病，VOD)。癫痫发作和VOD为用白消安疗法的严重担忧，且后者导致剂量限制性毒性。因此，鉴于此类严重的副作用，白消安可能不是降低癌症患者中的血小板的选择药物。

参见：http://www.medicines.org.uk/EMC/medicine/24686/SPC/Busulfan+2+mg+tablets

干扰素-α虽然这种药物会降低血小板数目，但其价格昂贵，仅作为可注射制剂可用，并且具有显著的副作用，包括白细胞减少症、肌痛、关节痛和厌食，所有的在癌症患者中也是非常不希望的。参见：http://www.medicines,org.uk/emcsearchresults.aspx？term＝Interferon％20alfa2b％20(lntron-A)s。

阿那格雷这种药物为目前可用的仅有的细胞选择性血小板降低剂，即它不抑制除血小板以外的其他血细胞系的形成(Hong等2006)。这种独特的选择性将在治疗可能已被血液学上受损的为潜在的贫血和白细胞减少两者的癌症患者中特别有价值。阿那格雷目前作为和以及用于治疗原发性血小板增多症的多种通用制剂销售。该药物的主要药理作用，即血小板降低，是由其对巨核细胞(血小板祖细胞)成熟的影响而引起的。如以上陈述的，其细胞选择性作用使其有独特价值。然而，该药物还显示出抗聚集(抗血小板)活性，这为抑制磷酸二酯酶(PDE)III的结果，抑制磷酸二酯酶(PDE)III为继发性的但单独的药理活性。令人遗憾的是这种特性，即抑制PDEIII，这也导致其非常不希望的心血管副作用。

现在看来，阿那格雷的不想要的心血管作用主要是由于药物的极其有效的PDEIII抑制性代谢物，即3-羟基阿那格雷(以前称为BCH 24426)。作为正性肌力剂(inotrope)，该化合物对心脏具有显著的刺激作用(Wang等，2005)。虽然阿那格雷本身具有一些PDEIII抑制性活性，但其与该代谢物相比的活性相对较低，后者几乎更有效40倍，但具有略低于阿那格雷本身的血小板降低活性(Wang等，2005)。该代谢物的形成为口服剂量之后大量首过代谢的结果。在临床实践中，该代谢物的血浆浓度通常超过母体药物2-3倍(Martinez-Selles等，2013)。

表现为心动过速、心悸和严重头痛的这些不利的心血管作用可能是剂量限制性的，并且为患者停止疗法的主要原因。据保守估计，由于此类心血管副作用，约25％的阿那格雷患者停止药物治疗(Birgegard等，2004)。批准的阿那格雷标记清楚地表明，心血管作用，诸如心悸和心动过速，可能发生在治疗性剂量的药物之后，特别是如果给予预先存在心脏病的患者之后。因此，标记警告不要对此类患者施用药物，并建议在开始疗法之前进行心血管检查，参见：-http://www.medicines,org.uk/emc/medicine/15737/SPC/Xagrid+0.5mg+hard+capsule这些心血管副作用目前将阿那格雷的使用降低至治疗原发性血小板增多症的二线疗法(参见Birgegard等，2004)。

几篇文献报道进一步强调了可能与阿那格雷长期使用相关的心脏并发症(Mlot&Rzepecki 2012)。在一个病例研究中，在一名具有真性红细胞增多症的48岁女性中阿那格雷的心脏毒性表现为充血性心脏衰竭(James CW 2000)。在常规治疗期间，此类心血管副作用的频率已经被报道如下：

常见：心悸和心动过速，

不太常见：充血性心力衰竭、高血压、心律失常、心房颤动

偶尔：心绞痛、心肌梗塞、心脏肥大、心肌病、心包积液和直立性低血压。

在Jurgens等(2004)报道的一项研究中，发现阿那格雷引起许多患者中的心肌病。在从约434位具有原发性血小板增多症和真性红细胞增多症的患者收集的数据中，特发性心肌病在11位中是明显的。Wong等(2008)后来报道了阿那格雷诱导的心肌病的另一个病例。此外，药物发起人Shire Pharmaceuticals向所有医疗保健专业人员发送的最近的一封信(Shire,2013)强调了甚至在没有疑似心脏病和先前具有正常的心血管功能的患者中也可能发生严重的心血管不利事件。

心血管副作用在潜在地处于化学疗法诱导的心血管毒性风险的癌症患者特别是那些先前存在心血管疾病的老年患者中将是有问题的(Yeh等2004)。Fuiza M(2012)在对肿瘤学(oncologics)心脏毒性的深入综述中强调，这是大多数(如果不是全部)化学治疗剂的常见问题。事实上，化学疗法现在被广泛认为与范围从心律失常、心包炎、心肌缺血至心肌病的许多不同方面的心脏毒性相关(Saidi&Althrethi,(2011),Mlot&Rzpecki 2012)。许多常用的化学治疗剂诸如顺铂、多柔比星和曲妥珠单抗已被证明对左心室功能具有显著的不利作用(Saidi&Althrethi,2011)。

因此，尽管阿那格雷在血小板增多的癌症患者中选择性降低血小板具有相当大的潜在效用，但可能由于担忧由化学疗法诱导的任何心脏毒性的加重，其使用似乎被忽视。

尽管有这些担忧，但最近出现了三项专利，表明阿那格雷可以通过其在非常高剂量的假定的凋亡作用或者相当出人意料地其PDEIII抑制作用，潜在地用作癌症患者中的抗肿瘤剂。在WO2014/183673A1中，Quiang Yu等基于在多种癌细胞系中体外观察到的表面上的凋亡(IC50值100nM)和在10-30mg/kg的剂量之后大鼠中显示此类活性的体内研究，请求保护“阿那格雷及衍生物的抗肿瘤用途”。这些浓度/剂量比人类中可以安全地达到的高>10-倍&>1000-倍，并将导致严重的心血管干扰。另外，其他公布的研究发现阿那格雷甚至多达1μΜ的浓度都没有凋亡作用(Hong等2006)。在另外两个专利WO2015/055898和WO2014/164794中，宣称开发阿那格雷的PDEIII抑制性作用可用于治疗癌症。鉴于对癌症患者中已经明显的心血管问题的临床担忧，此类建议似乎特别不适当。

总之，目前可用的癌症治疗的有限效果强调对解决该疾病的新的方法的需求。最近的临床数据提示注意血小板在促进癌细胞生长、肿瘤建立和转移，特别是骨中的作用提供了潜在的新的治疗性干预方法。简单来说，这可能仅牵涉血小板数目的降低。然而，阻断癌细胞诱导的血小板产生刺激并因此破坏癌细胞与血小板之间的致病性环路，将为癌症治疗提供有趣的不同方法。此外，癌细胞迁移至骨髓的抑制将提供潜在的靶，以最小化几乎不可避免的致死性骨转移的风险。

目前可用的唯一的细胞选择性血小板降低剂为阿那格雷，阿那格雷以目前的形式将是不合适的药物候选者，因为其非常不希望的心血管副作用可能使心脏受损的癌症患者进一步处于风险中。

发明概述

现在存在强调了以下的广泛的临床证据：许多不同癌症中血小板增多的存在以及过量数目的血小板在促进癌细胞生长、肿瘤建立包括血管生成和随后的转移，特别是潜在致死性的骨转移中发挥作用。由于癌细胞刺激巨核细胞生成/血小板产生，巨核细胞生成/血小板产生反过来驱动癌细胞生长，这导致了恶性循环或致病性环路的建立。

因此，副肿瘤性血小板增多呈现了用于治疗性干预的潜在地有价值的新靶，并提供破坏该恶性循环的机会。尽管如此，可能是由于缺乏安全的细胞选择性抗巨核细胞剂，目前在癌症治疗中未出于该目的采用任何药物。在目前可用的少数血小板降低剂中，仅抑制血小板形成并且不抑制其他造血细胞系的阿那格雷是有独特价值的。

根据本发明的一个方面，提供了一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在治疗或预防血小板增多的癌症患者中的转移性疾病中使用。

根据本发明的一个方面，提供了一种治疗或预防血小板增多的癌症患者中的转移性疾病的方法，所述方法包括将化合物施用至患者，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物。

血小板增多的患者为具有高血小板计数的个体，例如具有>450,000/μL血液的血小板计数的患者(Harrison等，2010)。然而，对于基线血小板计数在较低的正常范围内的个体，血小板计数高于400,000/μL、350,000/μL、300,000/μL或甚至250,000/μL可以被认为是血小板增多的。

在本发明的另一个方面，提供了一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在抑制癌细胞对巨核细胞生成过程的刺激作用中使用。

在本发明的另一个方面，提供了一种抑制癌细胞对患者中的巨核细胞生成过程的刺激作用的方法，所述方法包括将化合物施用至患者，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物。在一个实施方案中，患者为血小板增多的癌症患者。

破坏促进癌症生长和发展的这种恶性循环或致病性环路，提供了全新的治疗疾病的方法。

在本发明的另一个方面，提供了一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在抑制循环癌细胞朝向巨核细胞的迁移吸引中使用。

在本发明的另一个方面，提供了一种抑制患者中循环癌细胞朝向巨核细胞迁移吸引的方法，所述方法包括将化合物施用至患者，其中化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物。在一个实施方案中，患者为血小板增多的癌症患者。

抑制循环癌细胞朝向巨核细胞迁移的吸引限制了例如在骨骼和肺(体内巨核细胞的主要储库)中转移的可能性。再次阻断这种‘致死性吸引力’提供了完全不同的治疗癌症的方法。

在本发明的一个实施方案中，待治疗的癌症选自由以下组成的组：脑癌、口腔癌、头颈部癌(包括鼻咽部区域癌)、甲状腺癌、胃肠癌(包括食管癌或胃癌)、胰腺癌、肝细胞癌或结肠直肠癌以及肺和支气管癌、和卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤间皮瘤、黑素瘤、胆囊癌和多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，癌症选自由卵巢癌和乳腺癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由脑癌、口腔癌、头颈部癌包括鼻咽部区域和甲状腺癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由卵巢癌、食管癌、胃癌和结肠直肠癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由胃肠癌(包括食管癌、胃癌)、胰腺癌、肝细胞癌或结肠直肠癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由卵巢癌、肺癌、食管癌、胃癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由肺癌和支气管癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由胰腺癌、结肠直肠癌和肾癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由头颈部癌、肝细胞癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌或乳腺癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症为前列腺癌。

在一个实施方案中，癌症选自由脑癌、口腔癌、支气管癌、子宫内膜癌、乳腺癌、前列腺癌、皮肤间皮瘤和黑素瘤组成的组。

在一个实施方案中，癌症选自由肾癌或胆囊癌癌组成的组。

在一个实施方案中，癌症为多发性骨髓瘤。

在一个实施方案中，被治疗的患者为处于发展癌症的风险的血小板增多的个体。

在一个实施方案中，被治疗的患者为血小板增多的癌症患者。

在另一个实施方案中，被治疗的患者为心脏受损和血小板增多的癌症患者。

在一个实施方案中，被治疗的患者处于特定癌症的特定遗传风险中，例如BRCA1/2基因的乳腺癌和卵巢癌携带者。

在本发明的一个实施方案中，阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物被配制为最小化适当心脏保护制剂中的任何心血管副作用。此类制剂可以通过最小化通过肝脏吸收的药物的比例，通过控制首过产生的高度有效的心脏活性代谢物3-羟基阿那格雷的形成的速率和程度来实现，因此降低不希望的正性肌力和血管舒张作用的风险。在这样做时，这使得能够在预防或治疗血小板增多的患者中的癌症时更安全地使用药物(见定义)。

本领域技术人员将认识到，存在许多良好建立的策略和方法可用于降低或避免首过代谢，并且因此在阿那格雷的情况下，降低或避免产生其高度有效的心脏活性代谢物。

肠内剂量制剂，其在GI道的最近端和远端利用吸收，降低通过肝脏的药物的比例，并因此降低了首过作用。例如在口中缓慢溶解的含服锭剂-硬糖制剂-促进含服和舌下吸收，并随之使药物直接通过进入体循环。此类制剂将降低药物到达下GI道的量，在下GI道中药物通常会被吸收并通过肝脏，随之阿那格雷的心脏活性的代谢物的首过产生。

替代的含服制剂包括粘膜粘附性含服膜和片剂、舌下片剂、口腔粘膜(oromucosal)喷雾剂等等，其中的许多已经成功地用于多种药物以降低首过代谢，例如睾酮http://www.actientpharma.com/filebin/pdf/products/5881610_Striant_full_PI_4pager.和丁丙诺啡(Krotscheck等，2010)。

药物递送至GI道的远端(直肠)导致下和中痔静脉的部分吸收，这直接排入到腔静脉，并因此进入体循环，因此降低通过肝脏的递送，并降低随之明显的阿那格雷的心脏活性代谢物的首过产生。此类位置特异性药物递送可用直肠凝胶或栓剂容易地实现。

肠胃外施用-总之，避免GI道提供了回避阿那格雷的高度心脏活性代谢物的首过产生的最直接的手段。在Remington,The Science and Practice of Pharmacy，2012年第22版中，全面地介绍了多种可能的胃肠外制剂的一般描述。

一种降低该首过代谢物的形成风险的有吸引力的非肠内施用途径为使用鼻内喷雾剂。这里药物经由鼻粘膜被直接吸收到体循环中，再次最小化首过肝脏代谢。这一良好建立的策略已经成功地用于全身性递送许多药物，包括咪达唑仑(midazolam)和去氨加压素(desmopressin)。

最小化该心脏活性代谢物形成的另一种手段为使用肺部施用途径。至肺部上皮细胞用于全身性作用的气雾剂施用将再次克服肝脏中首过代谢的问题。

另一非肠内途径通过局部/皮肤应用来提供。这里，药物通过皮肤直接吸收到体循环中，所以再次避免了阿那格雷的心脏活性代谢物的首过形成。

本发明的制剂可以理想地被每天一次或两次施用，但其他可以得益于较少或更频繁的施用。在所有这些剂型中，本质是使用良好建立的方法来降低阿那格雷的心脏活性代谢物3-羟基阿那格雷的形成。还设想了与其他抗癌药物和辅助疗法的共施用。

附图描述

图1卵巢癌细胞增强巨核细胞发育：抑制阿那格雷的作用。将扩增的CD34+细胞在具有或不具有阿那格雷(1μΜ)的包含10ng/ml TPO的MK培养基中并且在以指定密度接种的COV362细胞的不存在或存在下共培养7天。在分化期开始之前4天，在Boyden室中与在底部室中接种的COV362细胞进行共培养。如根据实验程序描述分析MK发育。结果(2个重复培养物的平均值±SEM)相对于在COV362细胞的不存下发育的巨核细胞的数目来表示。

图2巨核细胞增强卵巢癌细胞的迁移。将COV362细胞装载到Boyden室上，并且如根据实验程序描述在指定时间确定它们朝向7天MK培养物或至相当量的MK培养基(对照)的横穿迁移(transmigration)。结果表示迁移的COV362细胞的数目/显微视野(每种条件下5-10视野的平均值±SEM)。

图3阿那格雷抑制巨核细胞对卵巢癌细胞迁移的增强。将COV362细胞装载到Boyden室上，并且如根据实验程序描述在过夜孵育之后确定它们朝向在阿那格雷(1μΜ)的不存在或存在下生长的7天MK培养物或朝向相当量的MK培养基(对照)的横穿迁移。结果(4次实验的平均值±SEM)相对于朝向单独的生长培养基迁移的COV362细胞的数目来表示。^**，P<0.01，通过ANOVA与Bonferroni事后检验；ns，不显著。

图4阿那格雷以临床相关浓度抑制巨核细胞对卵巢癌细胞迁移的增强。将COV362细胞装载到Boyden室上，并且如根据实验程序描述在16h之后确定它们朝向在指定浓度的阿那格雷的不存在或存在下生长的7天MK培养物或朝向相当量的MK培养基(对照)的横穿迁移。结果(2个重复孔的平均值±SEM)相对于朝向单独的生长培养基迁移的COV362细胞的数目来表示。

发明详述

如本文使用的定义：-

抗巨核细胞指通过干扰巨细胞发育和成熟进入血小板而引起的人类中的血小板降低活性。此类剂在预防和治疗癌症中可以是特别有价值的。

“血小板增多”被世界卫生组织(World Health Organization)定义为血小板计数大于450,000/μL血液(Harrison等，2010)。然而，较低数量可能与本文描述的治疗性设置相关。在此类受试者中，350,000/μL或甚至为300,000/μL的血小板计数可以被认为是血小板增多的。出于本发明的目的，在其他受试者中，250,000/μL的血小板计数可以被认为是血小板增多的。

“心脏受损(Cardio-compromised)”为任何心脏问题，诸如冠状动脉疾病、动脉粥样硬化、动脉硬化、动脉瘤、心律异常(dysrhythmia)、心力衰竭、心肌缺血/梗死、高血压和血栓栓塞，的一般术语。更具体地，它可以指在用化学治疗剂治疗的癌症患者中常见的左心室功能的降低。

术语“副作用调节”或“心脏保护”指阿那格雷或该药物的活性代谢物的那些制剂(及其施用途径)被特定地设计为最小化有效的心脏活性剂3-羟基阿那格雷或其他类似实体的首过产生并最小化随后对有效的心脏活性剂3-羟基阿那格雷或其他类似实体的全身性暴露。

血小板减少通常被定义为小于75,000/μL的血小板计数。

术语“载体”指与阿那格雷(或其适当的活性代谢物)一起施用的稀释剂、赋形剂或媒介物。本发明的药物组合物可以包含多于一种载体的组合。此类药学载体可以是无菌液体，诸如水、盐水溶液、水性右旋糖(dextrose)溶液、水性甘油溶液，和油，包括石油、动物油、植物油或合成起源的那些油，诸如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等。水或水性溶液盐水溶液和水性右旋糖和甘油溶液优选地被用作载体，特别是用于可注射溶液。合适的药学载体被描述于由Loyd V Allen编著的“Remington’s Pharmaceutical Sciences”，第22版，2012)中。

术语“药学上可接受的”指通常被认为是安全的分子实体和组合物。特别地，在本发明实践中使用的药学上可接受的载体为生理上可耐受的，并且当被施用至患者时通常不产生变应性或类似的不想要反应(例如，胃不适，头晕等)。优选地，如本文使用的，术语“药学上可接受的”意指适当政府机构的管理机构所批准的或在美国药典或其他一般公认的药典中列出用于在人类中使用的。

“药学上可接受的赋形剂”意指可用于制备药物组合物的通常为安全的、无毒的且既无生物学的，也无其他不希望方面的赋形剂，并且包括对于人类药物使用是可接受的赋形剂。如本申请中使用的“药学上可接受的赋形剂”既包括一种此类赋形剂又包括多于一种此类赋形剂。

术语“治疗”包括：(1)预防或延迟在可能罹患或易患状态、紊乱或状况但尚未经历或表现出状态、紊乱或状况的临床或亚临床症状的人中发展的状态、紊乱或状况的临床症状的出现；(2)抑制状态、紊乱或状况(例如，阻止、降低或延迟疾病的发展或在维持治疗的情况下，阻止、降低或延迟疾病的至少一种临床或亚临床症状复发)；和/或(3)缓解状况(即引起状态、紊乱或状况或其至少一种临床或亚临床症状的消退)。对待治疗的患者的益处为在统计学上显著的或至少对患者或对医师为可感知的。在一个实施方案中，术语“治疗”包括降低以下的任何或全部的潜能：癌细胞增殖、肿瘤建立和发展以及转移的形成。

术语“受试者”指人类。

“有效量”意指足以产生期望的治疗性响应的本发明的阿那格雷(或其适当的活性代谢物)或组合物的量。治疗性响应可以是使用者(例如，临床医师)将认为是对疗法的有效响应的任何响应。治疗性响应通常将改善用活性药物可治疗的一种或更多种状况。例如，减缓患者中的肿瘤发展和转移。还在本领域普通技术人员的技术内的是基于治疗性响应的评价，确定适当的治疗持续时间、适当的剂量和任何潜在的组合治疗。

除非明确地指示，术语“活性成分”应当理解为指阿那格雷或其任何适当的活性代谢物。术语“活性代谢物”指已经单独地或组合地在位置5、8或9处被羟基化的阿那格雷。可选地，在形成N-氧化物的第三氮位置处的氧化被设想为伴随或不伴随位置5、8或9处的羟基化。

术语“盐”可以包括酸加成盐或游离碱的加成盐。合适的药学上可接受的盐包括，但不限于，金属盐诸如钠、钾和铯盐；碱土金属盐诸如钙和镁盐；有机胺的盐诸如三乙胺、胍和N-取代的胍盐、乙脒和N取代的乙脒、吡啶、皮考啉、乙醇胺、三乙醇胺、二环己基胺和N,N’-二苄基乙二胺盐。(碱性氮中心的)药学上可接受的盐包括，但不限于，无机酸盐，诸如盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、磷酸盐；有机酸盐诸如三氟乙酸盐和马来酸盐；磺酸盐诸如甲烷磺酸盐、乙磺酸盐、苯磺酸盐(benzenesulfonate)、对甲苯磺酸盐、樟脑磺酸盐和萘磺酸盐；和氨基酸盐诸如精氨酸盐、葡萄糖酸盐、半乳糖醛酸盐、丙氨酸盐、天冬酰胺盐(asparginate)和谷氨酸盐(参见，例如，Berge等(1977))。

“术语“首过代谢或作用”指在口服给药后药物初始通过肝脏期间被该器官去除(&转化为一种或更多种代谢物)的药物量。

本发明化合物的优势

本文提供的体外研究已经证明了癌细胞在刺激巨核细胞生成中的直接作用，并且此外，阿那格雷尽管有这种刺激作用，但仍能够显著抑制巨核细胞生成。由此，癌细胞-血小板相互作用的“恶性循环”被破坏，提供了全新的治疗癌症的方法。

本发明的优势为，第一次显示，在临床相关的血浆浓度，阿那格雷抑制观察到的循环癌细胞朝向巨核细胞的迁移吸引。巨核细胞通常主要位于骨髓和肺中，并且因此降低癌细胞向这些部位的任何趋化响应应该限制此类定位并因此限制在其中的转移潜能。这再次提供了全新的治疗癌症的方法。

由于相同的血小板介导的肿瘤生长和转移发展的机制似乎跨越大部分癌症类型(参见下文列表)中普遍存在，本发明具有广泛地适用于治疗一系列广泛的不同起源的癌症的优势。事实上，副肿瘤性血小板增多在许多癌症中是明显的，并且现在被认识到是由它诱导的。此外，跨越许多不同的癌症，血小板计数的量级确定存活的证据现在是令人信服的。迄今，存活率已经被证明与以下癌症的血小板数目相关：

脑癌，Brockmann MS等(2007)Williams M等(2012)

口腔癌(包括头颈部癌、鼻咽癌、食管癌)-Rachidi S等(2014)，Furlan C等(2015)Chen Y-P等(2015).Verma GR等(2015)

甲状腺癌-Sun等(2013)

乳腺癌Lai I等(2013)，Stravodimou A&Voutsadakis IA(2013)，Rajkumar A&Szallasi A(2013)，

肺癌-Yu D，等(2013)，Zhang X，&Ran Y(2015)

胃癌-Lv X等(2010)，Li F-X等(2014)，Voutsadakis IA(2014)

肝癌-Lee C-H等(2015)，Pang Q等(2015)

胆囊癌-Wang RT等(2015)，

胰腺癌-Shimada H等(2004)，Suzuki K等(2004)，Chadha AS等(2015)，Wang H等(2014)

卵巢癌、子宫颈癌和子宫内膜癌-Lee等(2011)，Yuan L&Liu X(2015)Bottsford-Miller KJ等(2015)，Kawano M等(2015)

肾癌-Gu L等(2015)

前列腺癌-Li F等(2015)

结肠直肠癌-Josa V等(2015)

多发性骨髓瘤-Takagi S等(2015)

本发明的另一个重要优势为，其能够通过利用本文描述的多种心脏保护制剂之一更安全地使用细胞选择性抗巨核细胞剂阿那格雷来治疗血小板增多的患者中的癌症。这些制剂最小化高度心脏刺激代谢物3-羟基阿那格雷(一种在这方面比母体药物有效40倍的但作为血小板降低实体具有较少活性的化合物)的正常首过产生。

阿那格雷的固有效力和随之的仅1-2mg的低口服日剂量，促进这种类型的低载量制剂(即含服/舌下片剂、口腔粘膜喷雾剂、鼻喷雾剂、肺部递送、直肠或iv/im/sc注射)的发展。

这些心脏保护制剂的另外的优势为，通过它们的施用途径，即含服/舌下、口腔粘膜喷雾剂、鼻喷雾剂、肺部递送、直肠或iv/im/sc注射，它们最小化由癌症患者中的化学疗法诱导的呕吐所导致的药物自胃损失的风险。

本发明的另外的优势为，当阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或其活性代谢物与另一种化学治疗剂组合时，阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或其活性代谢物潜在地与其他施用的化学治疗剂协同作用以增加此类癌症治疗的有效性。此类增强可以导致需要较低剂量的所述化学治疗和伴随此类剂观察到的不利副作用的降低，所述不利副作用诸如恶心、呕吐(vomiting)、腹泻以及全血的多种细胞组分的不想要的降低。由此可以改善患者依从性。

本发明还使得能够潜在的有益地改变待使用的阿那格雷的剂量。通过增加药物的全身性生物可利用度并最小化暴露于高度心脏刺激代谢物和心血管风险，可以使用比目前采用的剂量低的剂量。由于广泛的首过代谢，阿那格雷的口服生物可利用度通常较低，首过代谢不仅产生心脏刺激物3-羟基阿那格雷，而且还产生其他非药理活性代谢物，诸如2-氨基-5,6-二氯-3,4-二氢喹唑啉(RL603)。阿那格雷的口服生物可利用度的估计指示这低于50％。参见：-http://www.fda.gov/OHRMS/DOCKETS/dailys/04/aug04/081604/04p-0365-cp00001-09-Tab-H-vol1.pdf.因此设想这些心脏保护制剂的日剂量可以显著低于目前使用的那些剂量。

此外，通常观察到的阿那格雷剂量限制性心血管副作用的预期降低可以使得能够在难治性案例中需要的情况下使用较高剂量。副作用的降低还应该提供改善的患者依从性与可能停止治疗的患者较少的益处。

因此，总之，本发明力图，在预防和/或治疗由于副肿瘤性血小板增多而具有显著较差预后的患者中的广泛不同病因的癌症中的转移性疾病中，以多种心脏保护制剂的任一种使用阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物。这将通过降低血小板数目破坏血小板-癌细胞相互作用的恶性循环以及通过抑制癌细胞迁移朝向巨核细胞所位于的骨髓和肺降低在这些部位处的潜在的致死性转移的可能性来实现。

采用选择的肠内和非肠内制剂避免高度心脏活性代谢物3-羟基阿那格雷的口服首过形成，并提供了安全且全新的治疗广泛不同起源的癌症的方法。

贯穿本说明书的描述和权利要求，词语“包括(comprise)”和“包含(contain)”以及所述词语的变型，例如“包括(comprising)”和“包括(comprises)”意指“包括但不限于”并且不意图排除(且不排除)其他部分、添加物、组分、整体或步骤。

贯穿本说明书的描述和权利要求，单数涵盖复数，除非上下文另有要求。具体地，在使用不定冠词时，应理解本说明书预期多个以及单个，除非上下文另有要求。

结合本发明的特定方面、实施方案或实例所描述的特征、整数、特性、化合物、化学部分或基团应理解为可应用于本文所述的任何其它方面、实施方案或实例，除非与该方面、实施方案或实例不相容。

本发明的药物组合物

阿那格雷固有的作为血小板降低剂的高效力-反映为该药物在体外的抗巨核细胞IC50为仅26nM＝7ng/mL&低剂量的目前采用的制剂(单位剂量0.5mg)理想地使其本身适合于“可低装载的(low loadable)”的施用途径，这允许最小化高度心脏活性代谢物3-羟基阿那格雷的肝脏首过产生(IC50 0.7nM)。建立的药物递送方法和制剂可用于促进这一点。

肠内制剂

含服/舌下递送-包括内颊、舌下区域(舌下)、牙龈区域(牙龈)和最后腭区域(口腔根部(roof of the mouth))的口腔粘膜提供了将一些(如果不是全部)药物直接递送到体循环，因此最小化阿那格雷的心脏活性代谢物的首过肝脏产生的潜能。

含服-舌下片剂。阿那格雷的舌下片剂可以有多种不同的设计。一种此类制剂可以类似于(丁丙诺啡)舌下片剂所使用的。此类片剂中的典型赋形剂包括柠檬酸、无水乳糖一水合物、甘露醇、柠檬酸钠、硬脂富马酸钠、预胶化淀粉(玉米)。将片剂放置于舌下，直至溶解。

含服喷雾剂 含服喷雾剂制剂可以被制备为几种设计中的任何一种。一种此类设计可以类似于芬太尼口服喷雾剂将药物溶解于脱水醇(dehydrated alcohol)63.6％、纯净水、丙二醇、木糖醇和L-薄荷醇。单次启动(actuation)递送100μL包含适当药物剂量的喷雾剂。另一种口腔黏膜喷雾剂用于四氢大麻醇/大麻二醇产品。这里喷雾剂装置使用为包含40mg乙醇/100μL喷雾剂的液体二氧化碳的气态推进剂。

粘膜粘附性含服片剂 可以以多种方式制备阿那格雷的含服片剂。这种类型的制剂的实例可见于丙氯拉嗪(prochlorperazine)含服片剂中。这里，将片剂放置于口的任一侧的上唇(top lip)下的牙龈上。粘膜粘附性确保片剂保持原位并在随后的1-2h的时间段内溶解。典型的赋形剂包括可压性糖、聚维酮K30、黄原胶、刺槐豆胶、滑石、硬脂酸镁和核黄素磷酸钠。

粘膜粘附性含服膜 可以根据几种不同的设计制备粘附至颊内部的阿那格雷的自溶解薄膜。一种此类设计可能类似于用于(芬太尼)的设计的设计。为一种可溶性矩形、平坦、柔性的含服膜，其一侧粘附至颊内部，且另一侧被设计为最小化药物释放到唾液和由吞咽所致的药物损失。设想了不同药物强度的贴片，且其尺寸范围将为0.8cm²至2.4cm²。

含服锭剂/棒糖 再次这些可以有多种设计，但本质上为包含药物的硬糖块制剂，理想地在这种情况下在pH为～3，药物在pH为～3比pH7水溶性显著更高(250μg/mL对比于～1.0μg/mL)。此类锭剂可以安装在类似于芬太尼棒糖制剂的短塑料棒上。典型的赋形剂包括水合dextrate、柠檬酸、磷酸氢二钠，人工浆果调味剂/硬脂酸镁和可食用胶(修饰的食品淀粉和糖粉(confectioner’s sugar))。

直肠制剂。直肠施用通过使药物能够被直接排入全身性血液供应的下痔和中痔静脉吸收而降低首过代谢的程度。

直肠栓剂。栓剂制剂通常利用可熔蜡，例如Witepsol H14或45或可可油和白蜡。替代的直肠制剂设计牵涉将药物溶液包封于栓剂型软明胶胶囊中。在插入直肠后，明胶壳溶解并释放药物溶液用于吸收。阿那格雷的原型栓剂制剂可以是基于包含12.5mg或25mg盐酸异丙嗪的具有抗坏血酸棕榈酸酯、二氧化硅、白蜡和可可油的异丙嗪栓剂的制剂。

阿那格雷的直肠凝胶 可以被制备为多种不同的设计。阿那格雷直肠凝胶可以例如类似于用于diazepam的，diazepam如Diastat一种以用于直接直肠滴注的施用器、以预填充的单位剂量提供的非无菌的diazepam凝胶。Diazepam直肠凝胶包含药物以及丙二醇、乙醇(10％)、羟丙基甲基纤维素、苯甲酸钠、苯甲醇(1.5％)、苯甲酸和水。

非肠内(肠胃外)制剂 这些施用途径将再次最小化甚至完全避免阿那格雷的高效心脏活性代谢物的肝脏产生。多种此类制剂的一般描述可容易地见于Remington,TheScience and Practice of Pharmacy，第22版，2012中。

鼻喷雾剂 可以以与用于去氨加压素(鼻喷雾剂)的方式相差无几的方式配制阿那格雷的鼻喷雾剂。药物的水性溶液/悬浮液被包含在手指致动泵下方的10mL塑料储库内。每一次启动将100μL喷雾剂递送到每一个鼻孔内，提供所需剂量的药物。可选地，可以以类似于咪达唑仑的方式制备用于鼻递送的阿那格雷。通常，这使用被抽取到注射器中的浓缩的水/丙二醇药物溶液pH 4.0，注射器然后与鼻内粘膜雾化装置例如MADNASAL^TM附连。每次喷雾递送～100μL溶液，并且在这种情况下在每一个鼻孔内两次启动给予所需量的药物。使用这种施用手段，将咪达唑仑在该剂量的生物可利用度从当口服给予时的～30％增加至87％(Bjorkman等1997)。

肺部递送 虽然在治疗此类状况如支气管哮喘中肺部递送传统上与局部疗法相关，肺内药物施用提供潜在有价值的全身性递送途径。事实上，吸入香烟烟雾或最近使用多种所谓的“电子烟(vaping)”尼古丁产品提出了新型的全身性递送形式。使用电子烟装置提供了简单的配制用于此类递送的药物的方法。详细内容请参见WO 2015131058 A1中的“Electronic vaping device and components thereof”。可选地，传统的推进剂驱动或干粉吸入剂提供了直接递送到体循环并避免首过代谢的手段。传统定量吸入剂(metereddose inhaler)的详细内容可见于“Metered dose inhaler for albuterol”US 6131566 A中。

局部递送 也在本发明范围内设想的是阿那格雷的局部制剂，其将通过皮肤吸收并且再次避免首过代谢。此类制剂可以包括储库或基质类型的自粘附性经皮贴片。阿那格雷的经皮贴片制剂可以以类似于用于丁丙诺啡或罗替戈汀(rotigotine)的方式制备，

注射-替代的心脏保护制剂将为利用静脉内、肌内或皮下施用途径的那些，其中药物可以作为立即和持续释放制剂来给予。在后一种情况下，这些将包括在施用后在预定的时间段内释放药物的剂型。这些将包括使用皮内植入物或肌内注射贮库制剂(depotformulation)。对于肌内贮库制剂，这些制剂可以包括此类递送的多种方法的任何一种，诸如溶解控制、吸收控制、包封控制、溶解于合适粘稠或油性媒介物中。植入物将包括任何数目的基于使用(有机硅弹性体)杆以及使用其他聚合物材料的那些的装置类型。

促进改善的水溶解度。在pH 4-8之间，阿那格雷的水溶解度仅为～1μg/mL。因此，根据FDA的生物制药分类系统，阿那格雷被归类为低溶解度/高渗透性药物。

通过再次使用本领域熟知的多种渗透增强剂，可以促进溶解度并由此促进吸收。这些将包括阴离子和阳离子两种的以及非离子的、脂肪酸及衍生物(包括油酸和辛酸、胆盐、多元醇诸如丙二醇的)表面活性剂(参见Dodla&Velmurugan,2013)。

所有以上提及的制剂可以得益于使用微粉化药物(<100(微米)μm或更理想地<10μm)或纳米颗粒材料(通常<0.1μm)来增加表面积并因此增加溶解速率并因此促进吸收。此类粒径降低的材料的制备为熟悉本领域技术人员熟知的，但由Joshi JT(2011)在“A reviewof micronization techniques”中以及由Pathak&Thassu(2009)在“Drug deliverynanoparticles；formulation and characterization”中广泛描述。

增加阿那格雷(及相关化合物)的水溶解度的另一种手段将为通过使用具有β-环糊精的可逆复合物。(参见Rasheed等，2008)。

对于其中pH调节是可能的那些阿那格雷制剂，使用微酸性pH<4是希望的，因为这显著增加了药物的水溶解度。例如在pH1阿那格雷的水溶解度被增加至236μg/mL。(参见http://www.shirecanada.com/en/documents/AGRYLIN_PM_EN.pdf)

本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种活性药物成分或其药学上可接受的衍生物(例如其盐或溶剂化物)和药学上可接受的载体。特别地，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含治疗有效量的阿那格雷(或适当的活性代谢物)和药学上可接受的载体。

本发明中采用的药物可以与其他疗法和/或活性剂组合使用。因此，本发明提供了一种药物组合物，所述药物组合物包含至少一种可用于本发明实践的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物、第二活性剂和任选地药学上可接受的载体。

当在相同的制剂中组合时，应当认识到，两种化合物优选地在制剂的其他组分的存在下是稳定的，并且彼此及与制剂的其他组分相容。当单独配制时，它们可以以任何方便的制剂以本领域用于此类化合物已知的方式提供。

可以使用借助于一种或更多种合适的载体呈现制剂。用于治疗性使用的可接受的载体为制药领域熟知的，并且被描述于例如Remington’s Pharmaceutical Sciences，第22版，2012中。药物载体的选择可以就预期施用途径和标准药物实践来选择。除了载体以外，药物组合物可以包含任何合适的粘合剂、润滑剂、悬浮剂、包衣剂和/或增溶剂。

可以在药物组合物中提供防腐剂、稳定剂、染料和甚至调味剂。防腐剂的实例包括苯甲酸钠、抗坏血酸和对羟基苯甲酸的酯。也可以使用抗氧化剂和悬浮剂。

本发明中使用的化合物可以使用已知的研磨程序诸如湿法研磨来研磨，以获得适合于片剂形成和其他制剂类型的粒径。化合物的细散的(Finely divided)制剂可以通过本领域已知的其他程序，例如参见国际专利申请第WO 02/00196号(SmithKline Beecham)来制备，并且将包括微粉化以及使用纳米颗粒材料。

本发明的化合物和药物组合物旨在肠内(但仅使用GI道的近端(含服粘膜)和远端[直肠])或肠胃外施用。对于肠内使用，制剂可以包括舌下片剂、粘膜粘附性含服片剂、口腔粘膜喷雾剂、硬锭剂、棒上的棒糖锭剂、栓剂或直肠凝胶或悬浮液。对于非肠内递送，鼻喷雾剂、肺部递送装置、电子烟装置或对于注射的预混制剂、卵形剂(ovules)、溶液、悬浮液、分散体、凝胶或植入物/贮库制剂。固体和液体组合物可以根据本领域熟知的方法制备。此类组合物还可以包含一种或更多种可以呈固体或液体形式的药学上可接受的载体和赋形剂。

分散体可以被制备于液体载体或中间体诸如甘油、液体聚乙二醇、甘油三乙酸酯油(triacetin oils)及其混合物中。液体载体或中间体可以是包含以下的溶剂或液体分散介质：例如，水、乙醇、多元醇(例如，甘油、丙二醇等)、植物油、无毒甘油酯及其合适的混合物。在分散体的情况下，施用合适的粒径或通过添加表面活性剂，可以维持合适的流动性。

口腔粘膜制剂可以包含赋形剂诸如微晶纤维素、乳糖、柠檬酸钠、碳酸钙、磷酸氢钙和甘氨酸、崩解剂诸如淀粉(优选地玉米、马铃薯或木薯淀粉)、羟基乙酸淀粉钠、交联羧甲基纤维素钠和某些复合硅酸盐、以及造粒粘合剂诸如聚乙烯吡咯烷酮、羟丙基甲基纤维素(HPMC)、羟丙基纤维素(HPC)、蔗糖、明胶和阿拉伯胶。

另外，可以包括润滑剂诸如硬脂酸镁、硬脂酸、山萮酸甘油酯和滑石。

可用于本发明的口腔粘膜组合物的药学上可接受的崩解剂的实例包括，但不限于，淀粉、预胶化淀粉、羟基乙酸淀粉钠、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠、微晶纤维素、藻酸盐、树脂、表面活性剂、泡腾组合物、水性硅酸铝溶液和交联的聚乙烯吡咯烷酮。

可用于本文的口腔粘膜组合物的药学上可接受的粘合剂的实例包括，但不限于，阿拉伯胶；纤维素衍生物，诸如甲基纤维素、羧甲基纤维素、羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素或羟乙基纤维素；明胶、葡萄糖、右旋糖、木糖醇、聚甲基丙烯酸酯、聚乙烯吡咯烷酮、山梨糖醇、淀粉、预胶化淀粉、黄蓍胶，黄原胶树脂、藻酸盐、硅酸镁铝、聚乙二醇或膨润土。

可用于本文的口腔粘膜组合物的药学上可接受的填充剂的实例包括，但不限于，乳糖、无水乳糖、乳糖一水合物、蔗糖、右旋糖、甘露醇、山梨糖醇、淀粉、纤维素(特别地微晶纤维素)、二氢磷酸钙或无水磷酸钙、碳酸钙和硫酸钙。

可用于本发明组合物的药学上可接受的润滑剂的实例包括，但不限于，硬脂酸镁、滑石、聚乙二醇、环氧乙烷聚合物、月桂基硫酸钠、月桂基硫酸镁、油酸钠、硬脂富马酸钠和胶体二氧化硅。

用于口腔粘膜组合物的合适的药学上可接受的气味剂的实例包括，但不限于，合成香味和天然芳香油，诸如油、花、水果(例如香蕉、苹果、酸樱桃、桃子)的提取物及其组合，以及类似的香味。它们的使用取决于许多因素，最重要的为将要服用药物组合物的人群的感官可接受性。

用于口腔粘膜组合物的合适的药学上可接受的染料的实例包括，但不限于，合成和天然染料，诸如二氧化钛、β-胡萝卜素和葡萄柚皮提取物。

用于口腔粘膜组合物以改变释放特性、改善外观和/或遮蔽组合物的味道的有用的药学上可接受的包衣的实例包括但不限于羟丙基甲基纤维素、羟丙基纤维素和丙烯酸酯-甲基丙烯酸酯共聚物。

用于口腔粘膜组合物的药学上可接受的甜味剂的合适实例包括，但不限于，阿斯巴甜(aspartame)、糖精、糖精钠、环己烷氨基磺酸钠、木糖醇、甘露醇、山梨糖醇、乳糖和蔗糖。

可用于本文的药学上可接受的缓冲液的合适实例包括，但不限于，柠檬酸、柠檬酸钠、碳酸氢钠、磷酸氢二钠、氧化镁、碳酸钙和氢氧化镁。

可用于本文的药学上可接受的表面活性剂的合适实例包括但不限于月桂基硫酸钠和聚山梨醇酯。

药学上可接受的防腐剂的合适实例包括，但不限于，多种抗细菌剂和抗真菌剂诸如溶剂，例如乙醇、丙二醇、苯甲醇、氯丁醇、季铵盐和对羟基苯甲酸酯类(诸如对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸乙酯、对羟基苯甲酸丙酯等等)。

药学上可接受的稳定剂和抗氧化剂的合适实例包括，但不限于，乙二胺四乙酸(EDTA)、硫脲、生育酚和丁基羟基茴香醚(butyl hydroxyanisole)。

本发明的药物组合物可以包含从0.01％至99％重量/体积的由本发明包括的药物。

剂量

除非另有说明，贯穿本说明书中提及的剂量指阿那格雷游离碱当量或适当的活性代谢物的量。

根据本发明待治疗的适当的患者包括需要治疗的任何人类，但特别是表现出血小板增多的那些癌症患者。用于诊断和临床评价多种癌症，包括人类经历的此类状况的严重程度的方法为本领域熟知的。因此，确定患者是否需要治疗在本领域的普通从业者(例如，医师/肿瘤学家)的技能范围内。

通常，医师将确定将最适合于关于血小板数目的降低的个体受试者的实际剂量。用于任何特定个体的具体剂量水平和剂量频率可以变化，并且将取决于多种因素，诸如施用途径，经历疗法的个体的年龄、体重、一般健康，药物组合，特定状况的严重程度(&关键地，在该个体中起始血小板计数和血小板计数的改变比率)。

靶最终血小板计数应该在150-400x 10³/μL血液范围内。

理想地，血小板计数将被降低至350x 10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

更理想地，血小板计数将被降低至300x 10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

最理想地，血小板计数将被降低至250x 10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

本文提出的心脏保护剂量制剂不同于目前的阿那格雷商业制剂的制剂，并且被设计为降低心脏活性代谢物的首过产生和作为结果的不利的心血管作用。虽然由于药物的全身可用性的潜在改善，剂量可能较低，但迄今为止可能是剂量限制性的心血管副作用的降低可以使得能够在需要时使用较高剂量。

然而，通常在临床设置中，通常预期的为，少于阿那格雷的目前典型的2-3mg口服日剂量的一半的剂量将在降低血小板计数方面是有效的，并且作为结果，有效地最小化血小板增多的癌症患者中的癌症进展风险。剂量可以每天、每周或每月调整，这取决于如观察到的血小板计数所定义的血小板增多的程度。

通常，阿那格雷可能被施用每天两次。然而，根据观察到的血小板计数和使用的制剂类型，可能需要不太频繁地或不连续地给予药物。给药频率和对于不连续给药的可能需要将需要依据观察到的血小板增多的严重程度而考虑。通常，医师将确定将最适合于个体受试者的实际剂量。

本发明中设想的阿那格雷制剂可以与其他疗法和/或与其他活性剂结合施用。例如，本发明所包括的药物产品可以与用于管理状况的其他活性剂组合施用至患者。这可以包括疾病改变药物，诸如生长因子或细胞因子的抑制剂、化学治疗剂和/或疼痛的姑息性治疗法(palliative remedies)。与本发明所包括的药物组合施用的活性剂可以包括，选自包括以下的组的药物，但不限于此：烷基化剂、抗代谢物、抗肿瘤抗生素、抗雄激素、抗雌激素、拓扑异构酶抑制剂、有丝分裂抑制剂、抗血管生成剂、酪氨酸激酶抑制剂、包括“检查点(check-point)”抑制剂皮质类固醇和多种化学治疗剂的免疫疗法。另外，患者可以会被给予抗凝集药物(抗血小板药物)，诸如阿司匹林、氯吡格雷、普拉格雷、双嘧达莫等等。为了疼痛缓解，也可以给予患者镇痛药(阿片类和非阿片样物质两者)以控制疼痛。在此类组合疗法中，本发明所包括的药物可以在其他疗法和/或活性剂之前、同时或其后施用。这些复方药物(co-medications)的适当剂量将由其效力和疾病的严重程度确定。

当本发明所包括的药物产品与另一种活性剂结合施用时，此类组合的单独组分可以通过任何方便的途径以单独或组合的药物制剂顺序或同时施用。当顺序施用时，可以首先施用本发明所包括的药物产品或第二活性剂。例如，在与另一种活性剂的组合疗法的情况下，本发明所包括的药物产品可以以将提供有益的药物组合效果的方案以顺序方式施用。当同时施用时，组合可以以相同或不同的药物组合物施用。例如，本发明所包括的药物和另一种活性剂可以以这些剂的固定比率或以每一种剂的多个单独的剂型形式，以基本上同时的方式施用。

当本发明的药物与用于治疗不同癌症的方法中有活性的另一种剂组合使用时，每一种化合物的剂量可以不同于当该化合物被单独地使用时的剂量。本领域普通技术人员将容易认识到适当的剂量。

实施例

实施例1：阿那格雷对癌细胞介导的巨核细胞扩增的抑制作用的证明。

实验程序：

药物-盐酸阿那格雷购自Tocris Bioscience(Bristol,UK)。将储备溶液制备于DMSO中，以等分试样储存于-20℃，并且当需要时在临实验之前在培养基中稀释。

细胞和药物处理-巨核细胞(MKs)基本上如先前描述(Ahluwalia M等2010)离体产生。简言之，为促进终末巨核细胞分化，将预扩增的人类脐带血来源的CD34+造血细胞在补充有1％人类脐带血血浆和40ng/ml血小板生成素(TPO)的Stemspan^TM SFEM II培养基(StemCell Technologies)中培养7天，除非另有指示(MK培养基)。当需要时，在分化期开始时添加阿那格雷(1μΜ)或等量的媒介物。

将人类卵巢癌细胞系COV362在补充有2mM谷氨酰胺和10％胎牛血清(FBS)的Iscove改良的Dulbecco培养基(IMDM)中生长。将细胞培养物在加湿的培养箱中在5％CO2/95％空气下在37℃维持。

共培养实验-COV362细胞(COV)和发育中的MK的共培养在经改良的Boyden室(BDFalcon,BD Biosciences,Oxford,UK)中进行，该室包括放置在24孔配套板(companionplate)的孔内部的一个杯形细胞培养插入物，其中插入物的底部由具有0.4μm孔径的可渗透微孔性聚对苯二甲酸乙二醇酯(PET)膜制成。

在检查COV对MK发育的影响的实验中，将COV以多种细胞密度接种在配套板中，并在安装插入物之前生长4天。然后，将配套板中的培养基去除并用新鲜的MK培养基替换。此后立即将预扩增的造血细胞接种于插入物中。在共培养7天之后，收获插入物中生长的细胞用于MK发育的分析。

巨核细胞发育的分析-使用设置为～7.5μm的较低截止值限制的CasyTT Cell计数器(Innovatis,Germany)确定细胞密度。如先前描述(Wang G等2005)使用异硫氰酸荧光素缀合的抗-CD61抗体(clone Y2/51,Dako,Ely,UK)通过流式细胞术监测MK-特异性抗原表达。通过将培养物中的细胞总数目乘以CD61阳性细胞的分数来计算MK的数目。

结果(参见图1)-清楚地证明，在阿那格雷(1μΜ)存在下，在COV的不存在下，血小板生成素驱动的MK扩增如先前报道的数据所预期的被抑制了～50％。在COV的存在下(以1000个细胞/mL接种)，MK数目显著增加了148％，并且随着更多数目的COV(以3000个细胞/mL接种)MK数目增加了近160％。添加阿那格雷(1μΜ)基本上降低了在COV的存在下观察到的MK扩增的增加。在1000个细胞/mL的情况下，COV的刺激作用被完全消除，而在3000细胞/mL时，预期的增加为超过一半。

讨论-这些结果最终证明了癌细胞在刺激巨核细胞扩增及由此刺激血小板产生中的直接作用。在本研究中，将COV和MK隔开的膜的孔径排除了前者的物理运动，并因此观察到的作用必然是由于一些类型的COV趋化因子的释放。已知血小板经由其生长因子在癌症发展和进展中发挥关键作用。先前，癌细胞在巨核细胞扩增中的作用通常被认为是经由细胞因子(白细胞介素，特别是IL-6，参见Davis等2014)从癌细胞释放并随后刺激肝脏产生血小板生成素，这反过来加速巨核细胞/血小板产生，进一步促进癌细胞生长的间接过程，这被描述为恶性循环或致病性环路。当前的研究已经显示癌细胞分泌物能够直接刺激巨核细胞扩大。重要地，这项研究已经证明，甚至在癌细胞的此类刺激作用的存在下，阿那格雷仍然能够极大地抑制这种作用。这种新发现的阿那格雷特性提供了降低响应于癌细胞的MK扩增并由此降低疾病进展和发展的机会。

实施例2：阿那格雷对癌细胞向巨核细胞迁移的抑制作用的证明。

横穿迁移测定-在良好建立的癌细胞迁移模型(Hart等2005)和Kramer等2013)中检查了人类卵巢癌细胞COV362细胞(COV)的横穿迁移，所述良好建立的癌细胞迁移模型采用以上描述改良的Boyden室，但使用具有较大的8μm孔的PET膜的插入物。这种孔径使得癌细胞响应于下方的巨核细胞表现出的任何吸引特性而移动通过至室的下部。在这种情况下，在放置插入物之前，将预扩增的造血细胞在配套板的孔中在MK培养基中生长7天。然后将插入物安置于这些包含MK的孔内或安置于填充有等量体积的单独的MK培养基的平行孔中。然后将以2.86x 10⁵个细胞/ml的密度在无血浆MK培养基中制备的0.35mL COV细胞的悬浮液装载到插入物上，并允许在组织培养箱中在37℃通过PET膜横穿迁移多达24h。在不同的时间点，通过从配套板的孔中取出插入物并吸出其内容物来终止迁移测定。在用磷酸盐缓冲盐水(PBS)洗涤插入物之后，用浸于PBS中的棉拭子刮去附着至PET膜上侧的未迁移细胞。PET膜下侧上的迁移细胞用在25％甲醇中的0.5％结晶紫染色。以100x放大倍数在5个随机视野中拍摄明视野数字显微照片，并且通过手动计数确定平均细胞数目/视野。

结果(参见图2、3&4)-在本研究中显示COV朝向包含在改良Boyden室下部的MK培养物的大量迁移，证明了该模型中MK对COV的化学引诱物(chemoattractant)特征。在MK的不存在下，COV的迁移非常慢，反映了在对照培养物(incubates)中添加至室的下部的包含血浆的培养基的非常小的引诱物特性。MK对于COV的引诱物行为被清楚地证明是时间依赖性的(图2)。发现在阿那格雷(1μΜ)的存在下生长的MK培养物的显著添加对COV没有引诱物特性(图3)。当MK在临床相关浓度的药物下生长时，也表现出引诱物特性的损失(图4)。

讨论-作为用于癌细胞向骨&肺中的巨核细胞储库迁移的行为-并由此用于在这些位置建立转移的潜能的模型-该研究中产生的数据提供了对阿那格雷在抑制该过程中的可能有益作用的深刻见解。在癌细胞进入到骨髓后遇到的第一种细胞为巨核细胞，并且来自当前研究的数据已经最终地-且出乎意料地-显示了MK对卵巢癌细胞的正向引诱物行为。这种结合相互作用的性质可能是复杂的并且牵涉可能与对于肿瘤细胞-血小板相互作用所报道的那些类似的多个过程(Erpenbeck&Schon 2010)。此外，正是巨核细胞对癌细胞的这种引诱物特性，可能在建立转移性疾病中发挥关键作用。在这种情况下，阿那格雷提供极大地改变转移性疾病过程的大的潜能。

实施例3：阿那格雷降低血小板来源的癌细胞生长因子血小板因子4和血管内皮细胞生长因子的能力的证明(在Cacciola等2004之后)

本研究招募了13名具有原发性血小板增多症-ET(平均疾病持续时间为4年)的患者(8名男性和5名女性，平均年龄53岁)。4名患者接受羟基脲(HU)1.25g/天，3名患者接受干扰素α(IFN-a)1.5x 10⁶个单位/天，且6名患者接受阿那格雷(A)1.5mg/天。10名健康受试者用作对照。

通过酶联免疫吸附测定(Boehringer-Mannheim,Germany)测量PF4和VEGF。在Sysmex XE-213000(Dasit,Italy)上确定血小板。

在治疗之前，所有患者具有高的血小板计数1045+/-207x 10³/μL和比对照2.1+/-1.5IU/mL和0.2+/-0.08pg/ml高的PF4和VEGF水平(137+/-63IU/mL和1.5+/-0.7pg/mL。

在治疗之后，患者具有400+/-62x 10³/μL的平均血小板计数。HU和IFα均未使PF4和VEGF下降，并且有趣地仅阿那格雷治疗将PF4和VEGF水平降低至正常，表明仅阿那格雷诱导血小板功能的正常化。

虽然该研究是关于研究这些药物在ET患者中的作用而进行的，但现在认识到这两种生长因子在癌细胞生长和肿瘤血管生成中的重要作用都使这些数据的重要性投入新的背景下。在最常用的血小板降低治疗(在ET中)中，仅阿那格雷可能降低这些重要的两种生长因子的循环血浆水平，并且因此对癌细胞和肿瘤发展具有积极的治疗作用。

实施例4：实现血小板降低但最小化心血管风险需要的阿那格雷剂量的估计

由于全身可用性的改善&不利心血管作用的降低，本文描述的心脏保护制剂的提议剂量可以不同于目前商业制剂的剂量。虽然由于药物的全身可用性的潜在改善，剂量可能较低，但迄今为止可能具有剂量限制性的心血管副作用的降低可以使得能够在难治性案例中使用较高剂量。以下的测定提供了有用的见解。

阿那格雷的非常不希望的心血管作用是由于3-羟基阿那格雷的首过形成，以及在PDE III的抑制方面-(这些作用引起的机制)，，该代谢物的相应IC50值与药物的相比的极大差异。对于该代谢物，这仅为0.7nM(0.2ng/mL)，但对于药物为32nM(8.2ng/mL)。

在典型的1mg临床剂量之后，代谢物的峰值血浆水平为29nM(～8ng/mL)，比其体外PDE III抑制IC50高约40倍。甚至允许体内任何非特异性组织结合，这仍然可能大大超过该IC50。相比之下，阿那格雷峰值血浆水平仅为16nM(～4ng/mL)，仅为其体外PDEIII抑制IC50的50％。鉴于体内可能的非特异性组织结合，这潜在地在体内不太可能具有任何大的作用。因此，不言而喻，该代谢物可能是药物心血管作用的压倒性因素。

使用所提出的心脏保护制剂的任何一种可能显著地增加阿那格雷的全身可用性，并且因此显著地降低了通常首过产生的心脏毒性代谢物。在最佳情况下，在iv给药之后，阿那格雷的生物可利用度为定义的100％，且无该代谢物的首过产生。关于本文提出的其他制剂策略，历史先例预测阿那格雷生物可利用度可能增加至>75％，并且因此首过产生的代谢物显著降低。当考虑到该代谢物与母体药物之间的心血管效力差异的量级时，这种首过代谢产生的降低变得更加深刻，且CV的负荷影响明显更小。

该计算说明降低暴露于该代谢物以最小化不想要的心血管作用的潜在价值。

实施例5：阿那格雷含服片剂的制备

阿那格雷含服片剂可以以多种不同的方式制备。一种方法将以类似于用于经粘膜递送格列本脲(glibenclamide)的方式的方式，格列本脲是另一种BCS II类化合物，具有类似水溶性并以类似的剂量水平给予(Sarfarez等2011)。阿那格雷粘膜粘附性含服片剂可以使用生物粘附聚合物诸如Carbopol 934P、HPMC K4M和NaCMC通过直接压片方法制备。优选的阿那格雷含服片剂设计具有以下组成：-微粉化(<1μm)阿那格雷载量0.25-2.5mg、Carbopol-934P 46mg、HPMC46mg、甘露醇94mg、硬脂酸镁2mg、滑石2mg。该制剂将预期具有约为～3.5g的生物粘附强度。总体可能的～7的表面pH值呈现最小的粘膜损伤风险，而此类生物粘附强度值指示对颊粘膜的良好粘附性。

实施例6：阿那格雷含服薄膜缓慢释放制剂的制备

阿那格雷含服薄膜制剂可以以几种不同的方式制备。一种制剂策略可以类似于用于经粘膜递送是格列本脲的那些策略，格列本脲是以类似的剂量水平给予的另一种BCS II类化合物(Bahri-Najafi R等2014)。自溶薄膜含服制剂由于易于施用具有更好的患者依从性的优势。可以使用羟丙基甲基纤维素(HPMC)K4M、K15M或Eudragit RL100聚合物和丙二醇作为增塑剂和共溶剂制备微粉化阿那格雷的粘膜粘附性含服膜。使用溶剂浇铸方法(solvent casting method)制备膜。使用Eudragit RL100的那些为最优选的，因为它们倾向于为透明的、均匀的、柔性的且避免泡罩(bubble enclosures)。此类制剂的最佳组合物将包含0.25-2.5mg药物和～100mg的Eudragit聚合物，其中典型的膜厚度为～250μm。表面pH可能在6.2-6.6的范围内。且生物粘附力约为～5N。药物释放谱可能显示在6h内释放>90％。

实施例7：替代的阿那格雷含服薄膜缓慢释放制剂的制备

用于阿那格雷粘膜粘附性含服薄膜的替代的设计可以以类似于用于BUNAVAIL^(R)的方式的方式来制备。此类丁丙诺啡和纳络酮(naloxone)的含服膜为柑橘味口服经粘膜形式，旨在应用于颊粘膜。每一个剂量单位为黄色矩形膜，在粘膜粘附性侧具有墨水标记。该膜在与湿的颊粘膜接触后粘附并逐渐溶解释放药物以用于局部吸收。每一膜还包含羧甲基纤维素钠、柠檬酸，柑橘混合香料(flavour)、磷酸氢二钠、蓝色墨水、羟乙基纤维素、羟丙基纤维素、对羟基苯甲酸甲酯、磷酸二氢钠、聚卡波非、丙二醇、对羟基苯甲酸丙酯、黄色氧化铁、苯甲酸钠、氢氧化钠、糖精钠、维生素E乙酸酯和纯净水。蓝色墨水包含FD&C蓝#1、乙醇、纯化虫胶、丙酮、氢氧化铵和水。相差无几的阿那格雷制剂可以以可用的多种强度来制备，例如，在2.2cm²膜中0.1mg阿那格雷&在4.4cm²膜中0.25mg。该制备方法的详细细节可以见于专利号US 8475832 B2“Sublingual and buccal film compositions”中。

实施例8：阿那格雷含服锭剂/棒糖的制备

阿那格雷含服锭剂/棒糖可以以许多不同的方式配制。一种方法将与用于芬太尼锭剂/棒糖(Actiq)(被支持在短塑料棒上的柠檬酸芬太尼(fentanyl citrate)的固体糖块制剂)的方法相差无几。当吮吸时，这在15分钟时间内缓慢地溶解于口中，导致药物有效的经粘膜吸收。本质上，此类锭剂制剂包含糖(右旋糖，诸如Cerelose 2043)、结合剂玉米淀粉(预胶化食品级淀粉)和微粉化药物(粒径为1-5μm)。锭剂中药物的浓度范围可以为0.25-2.5mg。另外，还可以添加着色剂和调味剂诸如柠檬、菠萝或覆盆子以及缓冲盐磷酸氢二钠和柠檬酸以调节pH。为了最大化阿那格雷的水溶解度，酸性pH是优选的，理想地pH为3。最后，将塑料棒固定到在锭剂模制过程中产生的槽中。用于制备芬太尼锭剂棒糖的方法的详细内容可以见于专利号US20070104763A1“Composition of fentanyl citrate oralsolid dosage form excipient and binding material therefore and methods ofmaking”中。

实施例9：阿那格雷的口腔粘膜喷雾剂的制备

口腔粘膜喷雾剂为被设计为利用口腔内药物吸收的另一种递送方法。阿那格雷的制剂可以以与Sativex类似的方式来实现。这包含I型(Ph.Eur.)琥珀色塑料包被的玻璃喷雾容器(10mL)，其配备有计量泵(具有聚丙烯浸渍管)和弹性体颈部(覆盖有聚乙烯盖)。计量泵从具有5.5ml体积的储库递送100微升/喷雾。微粉化阿那格雷可以以所需浓度溶解/悬浮于柠檬酸缓冲液丙二醇和乙醇的共溶剂混合物中。泵作用喷雾可以设计为递送在100-500μg/100μL喷雾之间的药物量。用于制备Sativex的方法的详细内容可以见于专利第EP1542657号“Cannabinoid Liquid Formulations for Mucosal Administration”中。

实施例10：阿那格雷的鼻喷雾剂的制备

阿那格雷的鼻喷雾剂可以以许多不同的方式配制。一种此类方式将以类似于用于去氨加压素(Stimate^(R)鼻喷雾剂)的方式的方式。对于阿那格雷，药物的水性溶液/悬浮液将被包含在附连至手指致动泵的10mL塑料储库内。这将包含用盐酸调节至pH 3.5的盐水中的微粒化阿那格雷(1-5μm粒径)的溶液/悬浮液。可选地，柠檬酸和磷酸二钠二水合物可以用作缓冲液。氯丁醇0.5％v/v或0.01％苯扎氯铵w/v可以用作防腐剂。当插入到鼻内并致动每一次喷雾(100μL)时将递送在100-500μg之间的药物。用于制备去氨加压素鼻喷雾剂的方法的详细内容可以参见专利第US 5498598号“A composition for nasal administrationof desmopressin”中。配制阿那格雷鼻喷雾剂的替代的方法为在WO20111036521A2“Formulations comprising triptan compounds”中对于舒马曲坦(sumitriptan)给出的方法。

实施例11：阿那格雷的肺部吸入剂的制备

可以采用类似于用于递送沙丁胺醇(salbutamol)的设计的阿那格雷的干粉吸入剂，其中每一次致动在口服吸入后将100-500μg的微粉化药物递送到肺中。该装置包括配备有计量阀的小型铝加压罐。推进剂可以是氯氟烃或较新的替代物，例如1,1,1,2-四氟乙烷。当插入到具有塑料吹口的标准塑料致动器时，阀门的每一次下压提供了作为乳糖中“悬浮液”的在100-500μg之间的剂量的药物。使用较新推进剂的沙丁胺醇的配制和制备的详细内容可以见于US 20140286877 A1“Compositions comprising salbutamol sulphate”中。

实施例12：阿那格雷的直肠栓剂制剂的制备

阿那格雷可以通过类似于用于递送地西泮的方法制成栓剂。这包括制备包含100-1000μg阿那格雷的1.3ml栓剂，该100-1000μg阿那格雷溶解/悬浮于包含丙二醇5ml、硅胶2.5g和Medusca polypeg栓剂基底的基底中。更多详细内容可以参见：-http://www.medisca.net/pdf/sample/F％20001％20603v2％20Diazepam％205％20mg％20Rectal％20Suppositories％201.3％20mL.pdf。

实施例13：阿那格雷的直肠凝胶制剂的制备

阿那格雷的直肠凝胶可以以类似于用于制备地西泮直肠凝胶的方式的方式制备(Dabbagh MA等2007)。本质上，这是一种包含药物物质与合适的共溶剂和防腐剂的直肠水凝胶产品。基底(HPMC)凝胶的制备可以通过将三分之二的所需体积的水加热至80℃，并且然后添加一定量的HPMC，以得到～6％的最终制剂浓度。然后添加剩余量的冷水。然后将需要量的阿那格雷药物物质与柠檬酸缓冲液pH 3.5(形成5％v/v最终混合物)和作为共溶剂的丙二醇(形成50％v/v最终混合物)+乙醇(形成2％v/v最终混合物)混合。向其中添加防腐剂苯甲醇(2％v/v最终混合物)&最后添加构成23％的最终混合物的所需量的凝胶基底)。制备的制剂可以等分到3mL注射器中，准备递送。待递送的量将在100-1000μg阿那格雷/滴注的范围内。

实施例14：阿那格雷肌内贮库缓释(extended-release)聚合物微球制剂的制备

对于阿那格雷的贮库制剂，可以使用类似于利培酮(risperidone)的那些制备，利培酮是具有非常类似的低水溶性的另一种BCS II类化合物。此类长效注射制剂包含缓释聚合物微球和相关稀释剂。在的情况下，将药物微胶囊化于7525聚乳交酯乙交酯共聚物(PLG)中。用于肠胃外使用的稀释剂为透明的无色溶液，并且包括聚山梨醇酯20、羧甲基纤维素钠、磷酸氢二钠二水合物、无水柠檬酸、氯化钠、氢氧化钠和注射用水。在注射之前将微球悬浮于稀释剂中。阿那格雷可以以差不多的方式制备，以实现持续肌内释放。此类药物贮库制剂的剂量范围可以为1-10mg。

实施例15：替代的阿那格雷肌内缓释贮库制剂的制备。

可选地，用于肌内注射的阿那格雷又可以以类似于帕潘立酮(paliperidone)的持续释放贮库制剂的方式制备，帕潘立酮是另一种BCS II类药物。这被呈现为在媒介物中的无菌水性缓释悬浮液，所述媒介物包括聚山梨醇酯20、聚乙二醇4000、柠檬酸一水合物、无水磷酸氢二钠，磷酸二氢钠一水合物、氢氧化钠和注射用水。再次，阿那格雷可以以差不多的方式制备，以实现持续肌内释放。阿那格雷的此类药物贮库制剂的剂量范围可以为1-10mg。

实施例16：阿那格雷的真皮植入物的制备

阿那格雷可以以类似于用于另一种BCS II类药物伊维菌素(ivermectin)的方式的方式被制备为植入物。Maeda等(2003)已经描述了该后一种药物的制备。此类植入物包含圆柱形有机硅结构，其中内核包含活性物和添加剂诸如在有机硅基质中的脱氧胆酸钠和蔗糖。因为水不能渗透有机硅胶外盖，所以它通过横截面端获得进入并引起活性成分的溶解。溶解的活性物然后自由地扩散，并且通过由于活性物质溶解而产生的在内核中形成的通道释放。此类药物释放提供了伪零级谱(pseudo zero order profile)。此类植入药物递送系统的优势为它们易于手术插入，并且可以当需要时容易地取出。阿那格雷的此类药物贮库制剂的剂量范围可以为1-10mg。

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权利要求书(按照条约第19条的修改)

1.一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，其中阿那格雷的所述活性代谢物为在位置5、8或9处被单独地或组合羟基化的阿那格雷和/或在形成N-氧化物的第三氮位置处被氧化的阿那格雷，所述化合物用于在治疗或预防血小板增多的癌症患者中的转移性疾病中使用；其中待治疗的癌症选自由以下组成的组：脑癌、口腔癌、头颈部癌、甲状腺癌、胃肠癌、胰腺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、肺和支气管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤间皮瘤、黑素瘤、胆囊癌和多发性骨髓瘤。

2.如权利要求1所述的用于使用的化合物，其中所述患者为处于发展癌症的风险的血小板增多的个体。

3.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中所述头颈部癌为鼻咽部区域癌。

4.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中所述胃肠癌选自由食管癌或胃癌组成的组。

5.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，所述化合物被配制为选自由以下组成的组的心脏保护/副作用降低制剂：舌下片剂、含服喷雾剂、粘膜粘附性含服片剂、粘膜粘附性含服膜、含服锭剂/棒糖、直肠栓剂、直肠凝胶、鼻喷雾剂、肺部递送装置、经皮贴片凝胶软膏或霜剂、可注射制剂，包括作为立即和持续释放制剂静脉内、肌内或皮下给予的那些可注射制剂。

6.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至400x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

7.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至350x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

8.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至300x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

9.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至250x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

Claims (12)

1.一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在治疗或预防血小板增多的癌症患者中的转移性疾病中使用。

2.一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在抑制循环癌细胞与骨髓巨核细胞之间的迁移吸引中使用。

3.如权利要求2所述的用于使用的化合物，其中循环癌细胞与骨髓巨核细胞之间的迁移吸引的所述抑制降低转移，例如骨或肺转移，的可能性。

4.一种化合物，其中所述化合物为阿那格雷、其药学上可接受的盐、溶剂化物或活性代谢物，所述化合物用于在抑制癌细胞对患者中巨核细胞生成和血小板形成过程的刺激作用中使用。

5.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中所述患者为处于发展癌症的风险的血小板增多的个体。

6.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中所治疗的患者为血小板增多的个体。

7.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中待治疗的癌症选自由以下组成的组：脑癌、口腔癌、头颈部癌(例如鼻咽部区域癌)、甲状腺癌、胃肠癌(例如食管癌或胃癌)、胰腺癌、肝细胞癌、结肠直肠癌、肺和支气管癌、卵巢癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌、肾癌、皮肤间皮瘤、黑素瘤、胆囊癌和多发性骨髓瘤。

8.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，所述化合物被配制为选自由以下组成的组的心脏保护/副作用降低制剂：舌下片剂、含服喷雾剂、粘膜粘附性含服片剂、粘膜粘附性含服膜、含服锭剂/棒糖、直肠栓剂、直肠凝胶、鼻喷雾剂、肺部递送装置、经皮贴片凝胶软膏或霜剂、可注射制剂，包括作为立即和持续释放制剂静脉内、肌内或皮下给予的那些可注射制剂。

9.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至400x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

10.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至350x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

11.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至300x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。

12.如任一项前述权利要求所述的用于使用的化合物，其中血小板计数被降低至250x10³/μL的上限，但高于150x10³/μL的下限。