CN104940212A - 地塞米松用于抑制或治疗转移性或耐药性肿瘤的用途 - Google Patents

Abstract

本发明涉及一种治疗耐药性和转移性肺癌的方案及其制剂和用途，该方案包括使用有效量的地塞米松或其可药用的盐。本发明的治疗方案能显著抑制耐药性肺癌的生长和转移，降低耐药性和转移性肺癌的治疗成本和风险，且无明显毒副作用。

Description

地塞米松用于抑制或治疗转移性或耐药性肿瘤的用途

技术领域

本发明涉及地塞米松或其可药用的盐在治疗耐药性或转移性癌症中的用途。

背景技术

癌症(Cancer)是全球发病和死亡的主要原因之一，据世界卫生组织(World HealthOrganization，WHO)最新统计，2012年约有1,400万新发癌症病例和820万例癌症相关死亡，且预计今后二十年新发病例数将增加70％(参考自WHO官方网站http://www.who.int/mediacentre/factsheets/fs297/en/)。其中，肺癌位于癌症死亡病因的首位，即使采用手术联合化疗、放疗的综合治疗手段，五年存活率仍低于15％。

目前，治疗肺癌的方法主要包括放疗、化疗和靶向治疗等。这些方法在肺癌治疗初期，能产生一定的疗效，但随着时间的延长，往往会产生药物耐受，导致治疗失败。据统计，90％以上肺癌患者的死亡在不同程度上与耐药有关，因此，耐药性问题是肺癌治疗过程中急需解决的难题。

肺癌转移是指癌细胞从肺部侵入淋巴管、血管或通过其他途径被带到它处继续生长，形成与肺部肿瘤类型相同的肿瘤。据估计，90％以上癌症患者死于不同程度的肿瘤转移和复发，其中肺癌占很大一部分。因此，与耐药性问题一样，肺癌的转移同样是治疗过程中的一大难题，如何提高对肺癌耐药和转移的治疗效果具有显著的临床意义。

地塞米松(Dexamethasone，DEX)是一种甾体类化合物，具有抗炎和抑制免疫的作用，其广泛应用于风湿类疾病、皮肤性疾病、过敏反应、哮喘、慢性阻塞性肺病、哮吼、脑水肿、结核病及其他传染性疾病的治疗。在恶性肿瘤的治疗过程中，DEX常用于减轻化疗药物带来的毒副作用，如恶心呕吐等。虽然近年来的临床前研究发现，在某些特定肿瘤的治疗过程中，DEX本身具有一定抑制肿瘤(非耐药性肿瘤)生长的作用。然而，目前已有的研究中，尚无任何证据表明DEX对耐药性肺癌和转移性肺癌具有较好的抑制作用。

发明内容

本发明人在研究肺癌的治疗过程中，意外地发现DEX或其可药用的盐对耐药性肺癌及其转移具有良好的抑制效果，且无明显药物毒性。

DEX自1960年德国默克公司生产地塞米松磷酸钠以来，至今上市的DEX衍生物已达12种以上。然而，一直以来其在肿瘤方面的应用十分有限，特别是在肺癌中的应用鲜有报道。本发明人在研究初期，按照抗癌药研究的经典思路，先开展了体外细胞试验，结果显示DEX对肺癌细胞几乎没有杀伤作用(见实施例1)，这一结果正好解释了少有研究者对DEX的抗肺癌效果进行研究的原因。正当本发明人欲放弃这一研究课题时，却在一次动物体内试验过程中，出人意料的发现DEX对耐药性肺癌具有显著的抑制效果，其作用明显好于临床常用的化疗药物吉西他滨(Gemcitabine，GEM)和小分子靶向药物埃罗替尼(Erlotinib)、舒尼替尼(Sunitinib)，且无明显药物毒性(见实施例2、3)。

考虑到DEX对内分泌的相关作用，本发明人还选取了类似药物他莫昔芬(Tamoxifen，TAM)进行试验，结果发现，TAM对耐药性肺癌几乎没有抑制作用(见实施例3)。

以上结果说明，不论是化疗药物还是小分子靶向药物或内分泌治疗药物，在耐药性肺癌的治疗中，其可行性都难以令人信服，而DEX却能很好的抑制耐药肺癌的生长。

基于此，本发明人又尝试进行了DEX抗肺癌转移的试验。令人惊讶的发现，DEX在体内外试验中均能很好的抑制肺癌转移(见实施例3、4)。

因此，本发明的一个目的是提供一种能显著抑制耐药性肺癌和转移性肺癌且不产生明显毒副作用的治疗药物，包括有效量的地塞米松或其可药用的盐。

所述的可药用的盐是通过常规的化学方法从母体化合物合成的，所述母体化合物包含碱性的或酸性的部分。通常，所述盐是比如通过这些化合物的游离酸或碱形式和化学当量的合适的碱或酸在水中或在有机溶剂或在水和有机溶剂的混合物中反应而制备的。通常，非水介质如乙醚、乙酸乙酯、乙醇、异丙醇或乙腈是优选的。酸加成盐的例子包含无机酸加成盐如盐酸盐、氢溴酸盐、氢碘酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐，和有机酸加成盐如醋酸盐、三氟醋酸盐、马来酸盐、延胡索酸盐、柠檬酸盐、草酸盐、琥珀酸盐、酒石酸盐、苹果酸盐、扁桃酸盐、安乃近和对甲苯磺酸盐。碱加成盐的例子包含无机盐如钠、钾、钙和铵盐，以及有机的碱金属盐如乙二胺、乙醇胺、N，N-二亚烃基乙醇胺、三乙醇胺和碱性的氨基酸盐。

根据本发明的一个方面，所述耐药性肺癌和转移性肺癌意味着具有药物耐受特性或具有肿瘤转移特性的包含肺部肿瘤、瘤形成和任何其它的恶性组织或细胞。具体包括具有耐药特性或具有转移特性的小细胞肺癌或非小细胞肺癌。其中所述的耐药性和转移性肺癌优选为耐药性和转移性非小细胞肺癌。

本发明的另一目的是提供一种抗癌制剂，其包括所述的DEX或其可药用的盐和药学上的常规辅料。其中，地塞米松常规制剂包括片剂、溶液剂、混悬剂、乳剂、散剂、颗粒剂、胶囊剂、微囊、微球、注射液、脂质体、缓/控释制剂等。所述的药学上的常规辅料包括润滑剂、填充剂、表面活性剂、增溶剂、助溶剂等。

本发明的实现具有以下积极意义：

(1)通过DEX治疗耐药性肺癌和转移性肺癌，可显著抑制肿瘤体积的增大，同时抑制肿瘤的转移，其效果明显好于常用化疗药物、小分子靶向药物和内分泌治疗药物，且无明显毒副作用；

(2)本发明所述的药物成本低廉，可在确保良好药效的条件下极大地降低患者的治疗成本。

附图说明

图1为DEX和TAM对A549细胞存活率的影响结果图(n＝6)。耐药性人非小细胞肺癌细胞(A549)分别给予空白对照和不同浓度DEX或TAM时细胞存活率的变化曲线。

图2为DEX和TAM对H1299细胞存活率的影响结果图(n＝6)。耐药性人非小细胞肺癌细胞(H1299)分别给予空白对照和不同浓度DEX或TAM时细胞存活率的变化曲线。

图3为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠肿瘤的生长(DEX单剂量，n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX以及埃罗替尼和舒尼替尼时裸鼠肿瘤体积的变化曲线。

图4为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠肿瘤的照片(DEX单剂量，n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX以及埃罗替尼和舒尼替尼时裸鼠肿瘤的实拍照片。

图5为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠肿瘤的生长(DEX多剂量，n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX 0.5mg/kg、DEX 2mg/kg、DEX 4mg/kg以及TAM和GEM时裸鼠肿瘤体积的变化曲线。

图6为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠肿瘤的照片(DEX多剂量，n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX 0.5mg/kg、DEX 2mg/kg、DEX 4mg/kg以及TAM和GEM时裸鼠肿瘤的实拍照片。

图7为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠体重的变化(n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX 0.5mg/kg、DEX 2mg/kg、DEX 4mg/kg以及TAM和GEM时裸鼠体重的变化曲线。

图8为DEX给药时雌性荷瘤裸鼠肿瘤同侧腋下淋巴结的照片(n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX 2mg/kg、DEX 4mg/kg时裸鼠肿瘤同侧腋下淋巴结的实拍照片。

图9为DEX给药32天时雌性荷瘤裸鼠的血象指标(n＝5)。耐药性人非小细胞肺癌细胞(A549)荷瘤裸鼠分别给予空白对照、DEX 0.5mg/kg、DEX 2mg/kg、DEX 4mg/kg以及TAM和GEM 32天时裸鼠的血象指标。

图10为DEX对H1299细胞迁移的影响结果图。耐药性、转移性非小细胞肺癌细胞分别给予空白对照、DEX 0.1μM、DEX 1μM、DEX 10μM、DEX 40μM时细胞迁移的实拍照片。

图11为DEX对H1299细胞迁移的影响试验中划痕宽度的定量结果图(n＝3)。耐药性、转移性非小细胞肺癌细胞分别给予空白对照、DEX 0.1μM、DEX 1μM、DEX 10μM、DEX 40μM时细胞划痕的宽度。

具体实施方式

为了更好的理解本发明，本发明人提供了下述的实施例，然而，这些实施例仅仅是作为说明性的目的而给出的，并且不解释为对本发明的限制，因为其中许多变化是可能的，而不脱离本发明的主旨和范围。本发明的方法虽然在特定实施方案加以描述，但所属技术领域的技术人员显而易见，可使所述方法的步骤或步骤的顺序发生变化，但不偏离本发明的概念和范畴。更具体来说，显而易见的在化学上和生物学上相关的其他药理过程类似的药物可以取代本文所述的药物，同时达到相同或相似的效果。所述技术领域的技术人员显而易见的对所有这种相似的替换或修饰都应被认为在本发明的范畴和概念内。

实施例1：

DEX对体外耐药性肺癌细胞增殖的影响

本实施例研究了DEX对耐药性肺癌细胞体外增殖的影响。

取对数生长期细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、计数。将A549和H1299(均为原发性耐药细胞系)分别按1×10⁴个/孔接种于96孔细胞培养板。培养24h后，进行给药，DEX给药组的终浓度为1、5、10、50、100、400、600、1000μM，每组设6个平行，继续孵育48h。孵育结束后弃去培养基，每孔加入100μl预先预冷的10％三氯乙酸(TCA，w/v)溶液，4℃固定1h；弃去TCA溶液，自来水冲洗5次，自然晾干；每孔加入100μl 0.4％磺酰罗丹明B(SRB)染料，室温下染色30min；弃去SRB染料，用1％醋酸溶液洗5次，自然晾干；每孔加入200μl 10mmol/L Tris溶液(pH10.5)，振荡器上振摇20min使与肿瘤细胞碱性氨基酸残基结合的SRB溶解，酶标仪测定540nm波长处吸光度。空白对照组和药物处理组的吸光度表示为OD_{control，540}和OD_sample，540。其中一块96孔细胞培养板不给药处理，在细胞自接种起培养24h后按上述步骤处理，其平均吸光度设为OD_0h，540。本实施例中以TAM作为阳性对照，操作步骤与DEX给药组相同，TAM给药组的终浓度为1、2、5、10、20、25、30、40、50、100μM(A549细胞系)和0.2、2、5、10、15、20、25、50、100μM(H1299细胞系)。细胞存活率按公式1-1计算：

结果显示(图1、2)：DEX在A549和H1299细胞中的IC₅₀(抑制50％细胞增殖所需的药物浓度)均＞500μM，远大于TAM的IC₅₀，说明DEX对耐药性肺癌细胞体外增殖无明显抑制作用。

讨论：抗肿瘤药物的研究步骤一般为先进行体外研究，再选择体外药效较好的药物进行体内试验。本实施例研究了DEX对体外肺癌细胞增殖的影响，结果表明DEX对耐药性非小细胞肺癌细胞体外增殖无明显抑制作用。这一试验结果与后期DEX可显著抑制体内耐药性肺癌生长及转移的结果形成明显的对比，说明相关领域的技术人员在本发明之前无法预料DEX对耐药性肺癌的生长和转移具有显著的抑制作用。

实施例2：

DEX对体内非小细胞肺癌耐药移植瘤模型中肿瘤生长的抑制作用(DEX单剂量)

本实施例研究了DEX对人耐药性非小细胞肺癌细胞接种的裸鼠肿瘤生长的抑制作用。

BALB/c裸鼠饲养一周后接种A549细胞(原发性耐药细胞系)。取对数生长期的A549细胞，经0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化制备成单细胞悬液，1,000rpm离心5min，细胞用PBS洗两次，用PBS调整细胞密度为2×10⁷个/ml。在无菌条件下于裸鼠左侧皮下脂肪垫皮下注射0.2ml细胞悬液(约4×10⁶个细胞)。用游标卡尺测量肿瘤的长径(D_max)和短径(D_min)，计算肿瘤体积V(V＝D_max×D_min ²/2)。

将A549细胞原位接种到20只BALB/c裸鼠乳腺位置，得到异种移植的非小细胞肺癌肿瘤模型，当裸鼠的平均肿瘤体积约为50mm³时，随机分为4组，每组5只。DEX的给药方式为口服灌胃，药物溶剂为玉米油。给药方案如下：(1)空白对照组：每天灌胃玉米油0.1mL；(2)DEX组：每天灌胃含DEX的玉米油溶液0.1mL，DEX给药剂量为8mg/kg；(3)埃罗替尼阳性对照组：每天灌胃含埃罗替尼的4％SBE-β-环糊精溶液0.1mL，埃罗替尼给药剂量为20mg/kg；(4)舒尼替尼阳性对照组：每天灌胃含舒尼替尼的1，2-丙二醇溶液0.1mL，舒尼替尼给药剂量为20mg/kg。各组每天给药前测定肿瘤体积。

结果显示(图3、4)：DEX给药组肿瘤体积显著小于空白对照组和埃罗替尼、舒尼替尼阳性对照组。

讨论：A549为具有原发性耐药的非小细胞肺癌细胞系，小分子靶向药物埃罗替尼和舒尼替尼对其肿瘤大小的抑制作用较小，这也进一步证实了其耐药特性。DEX给药组肿瘤体积显著小于空白对照组和小分子靶向药物给药组，说明DEX对耐药性肿瘤具有较好的抑制作用。

实施例3：

DEX对体内非小细胞肺癌耐药移植瘤模型中肿瘤生长和转移的抑制作用(DEX多剂量)

本实施例研究了DEX对入耐药性非小细胞肺癌细胞接种的裸鼠肿瘤生长和早期转移的抑制作用。

Nu/nu裸鼠饲养一周后接种A549细胞(原发性耐药细胞系)。取对数生长期的A549细胞，经0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化制备成单细胞悬液，1,000rpm离心5min，细胞用PBS洗两次，用PBS调整细胞密度为2×10⁷个/ml。在无菌条件下于裸鼠左侧皮下脂肪垫皮下注射0.2ml细胞悬液(约4×10⁶个细胞)。用游标卡尺测量肿瘤的长径(D_max)和短径(D_min)，计算肿瘤体积V(V＝D_max×D_min ²/2)。

将A549细胞原位接种到30只Nu/nu裸鼠乳腺位置，得到异种移植的非小细胞肺癌肿瘤模型，当裸鼠的平均肿瘤体积约为50mm³时，随机分为6组，每组5只。DEX的给药方式为口服灌胃，药物溶剂为10％(w/v)羟丙基-β-环糊精。给药方案如下：(1)空白对照组：每天灌胃10％(w/v)羟丙基-β-环糊精0.1mL；(2)DEX 0.5mg/kg组：每天灌胃含DEX的10％(w/v)羟丙基-β-环糊精溶液0.1mL，DEX给药剂量为0.5mg/kg；(3)DEX 2mg/kg组：每天灌胃含DEX的10％(w/v)羟丙基-β-环糊精溶液0.1mL，DEX给药剂量为2mg/kg；(4)DEX 4mg/kg组：每天灌胃含DEX的10％(w/v)羟丙基-β-环糊精溶液0.1mL，DEX给药剂量为4mg/kg；(5)TAM阳性对照组：每天灌胃含TAM的10％(w/v)羟丙基-β-环糊精溶液0.1mL，TAM给药剂量为50mg/kg；(6)GEM阳性对照组：每三天尾静脉注射含GEM的生理盐水溶液0.1mL，GEM给药剂量为20mg/kg q3d。各组每天给药前测定肿瘤体积及裸鼠体重；给药最后1天，测定(1)、(3)、(4)、(5)、(6)组裸鼠血象指标；最后1天给药后，处死裸鼠，摘取(1)、(3)、(4)组裸鼠肿瘤同侧的腋下淋巴结，考察各组淋巴结大小，衡量肿瘤早期转移的水平。

结果显示(图5、6、7、8、9)：DEX给药组肿瘤体积显著小于空白对照组和TAM、GEM阳性对照组，且DEX对肿瘤大小的抑制作用呈剂量依赖性。DEX组淋巴结大小明显小于空白对照组，DEX对肿瘤细胞的淋巴结转移有明显的抑制作用。给药期间，各组裸鼠体重均无显著变化；给药最后一天，各组裸鼠血象指标除白细胞水平外，其它指标DEX给药组与空白对照组无明显差异，药物安全性良好。

讨论：A549为具有原发性耐药的人非小细胞肺癌细胞系，化疗药物GEM和内分泌治疗药物TAM对其肿瘤大小的抑制作用较小，这也进一步证实了其耐药特性。DEX给药组肿瘤体积显著小于空白对照组和化疗药物、内分泌治疗药物给药组，且其对肿瘤的抑制作用呈剂量依赖性，说明DEX对耐药性肿瘤具有较好的抑制作用。肿瘤转移的第一步常常是转移到邻近淋巴结，造成淋巴结肿大，因此，淋巴结的大小可作为衡量肿瘤转移的早期指标。DEX给药组淋巴结大小显著小于空白对照组，说明DEX对肿瘤的早期转移具有良好的抑制效果。裸鼠体重变化及血象指标常作为衡量药物毒性的两大指标，本实施例中，DEX给药组裸鼠体重与空白对照组无明显差异，从一个方面说明了DEX药物安全性良好；裸鼠血象指标除白细胞水平外，其它指标DEX给药组与空白对照组无明显差异，而白细胞水平是目前临床报道的DEX常见不良反应，该不良反应在一定范围内是可以被患者接受的，另外，DEX对白细胞水平的影响小于TAM和GEM，说明DEX给药安全性值得信赖。

实施例4：

DEX对体外非小细胞肺癌细胞迁移的影响

本实施例研究了DEX对转移性肺癌细胞体外迁移的影响

取对数生长期细胞，用0.25％胰酶-0.53mmol/L EDTA溶液消化、计数。将H1299(转移性细胞系)按1×10⁶个/孔接种于6孔细胞培养板。培养12h后，用200μL枪头在培养板上划直线，PBS溶液将划下的细胞清洗干净，然后进行给药，DEX给药组的终浓度为0.1、1、10、40μM，采用无血清培养基继续孵育12h。孵育结束后弃去培养基，EVOS倒置显微镜下观察空白对照组与DEX给药组肿瘤细胞的迁移情况，每个样品拍摄3处照片测量划痕宽度。

结果显示(图10、11)：DEX给药组划痕宽度明显大于空白对照组，且DEX抑制肺癌细胞迁移的作用呈剂量依赖性。

讨论：肿瘤细胞迁移是肿瘤转移的第一步，肿瘤细胞的迁移能力在一定程度上代表了其发生转移的能力。DEX能明显抑制划痕的愈合，说明其对肿瘤细胞的迁移能起到较好的抑制作用。

Claims (10)

1.地塞米松及其药学上可用的盐在治疗耐药性肿瘤或转移性肿瘤中的应用。

2.根据权利要求1中所述的应用，所述肿瘤为具有耐药性或转移性的小细胞肺癌或非小细胞肺癌。

3.根据权利要求1中所述的应用，所述肿瘤为具有耐药性或转移性的非小细胞肺癌。

4.根据权利要求1中所述的应用，其中所述的地塞米松和其他种类的抑制/治疗肿瘤的药物联合使用，或地塞米松单独使用。

5.根据权利要求1中所述的应用，其中所述的应用为在用药对象的体内施用，所述的用药对象为动物或人。

6.地塞米松及其药学上可用的盐在制备用于治疗耐药性肿瘤或转移性肿瘤的药物中的应用。

7.根据权利要求6中所述的应用，所述肿瘤为具有耐药性或转移性的小细胞肺癌或非小细胞肺癌。

8.根据权利要求6中所述的应用，所述肿瘤为具有耐药性或转移性的非小细胞肺癌。

9.根据权利要求6中所述的应用，其中所述的地塞米松和其他种类的抑制/治疗肿瘤的药物联合使用，或地塞米松单独使用。

10.根据权利要求6中所述的应用，其中所述的药物在用药对象的体内施用，所述的用药对象为动物或人。