CN107202884B - 基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒 - Google Patents
基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒 Download PDFInfo
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Abstract
本发明公开了基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒,制备具有超顺磁性的磁珠,将该磁珠与副溶血性弧菌多克隆抗体偶联;合成MnO2纳米粒子,将该纳米粒子与副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体偶联;取待测液,将其与两种探针混合,使用磁力架分离磁珠‑菌体‑MnO2复合物,用柠檬酸盐缓冲液重悬该混合物,加入TMB显色,从而实现副溶血性弧菌快速特异性检测。该发明提出利用免疫磁珠和MnO2纳米粒子技术对副溶血性弧菌检测,利用ELISA方法的免疫学反应显色,缩短了检测时间,定量检测时变异系数小。最低检测浓度为10CFU/mL,加标回收率达到96.7%,灵敏度高,稳定性好。
Description
技术领域
本发明属微生物检测领域,具体涉及基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒。
背景技术
副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus,VP)是一种革兰氏阴性非芽孢嗜盐菌,是常见的食源性致病菌之一。该菌主要来源于虾,鱼和贝类等海产品中,主要通过污染的海产品引起人类急性胃肠炎、伤口感染和败血症等。近几年来,随着食用海产品的人群在不断扩增,由副溶血性弧菌引起的食物中毒呈上升趋势,据报道,自1998年以来,副溶血性弧菌引起的食物中毒已超过沙门菌食物中毒,成为最严重的食源性病原菌。目前,该菌是多数进出口水产品必检的致病菌。
当前,我国副溶血性弧菌的传统检测方法以微生物培养法为主,全程大概需要5-8天,操作繁琐,耗时长,已不能满足人们对食品安全检测快速简便的要求。随着技术的不断进步,推动着检测方法的不断发展,越来越多的方法应用于检测副溶血性弧菌,如PCR技术、酶联免疫吸附法(ELISA)、环介导等温扩增技术(LAMP)等。PCR技术可在短时间内放大检测目标,具有灵敏度高的特点,但是PCR操作过程要求高且易出现假阳性。ELISA法利用抗原-抗体的特异性结合检测,对设备要求低,但是耗时长,灵敏度相对而言较低。LAMP作为一个新兴的检测技术,具有费用低,灵敏度高,特异性高等特点,但是LAMP需要先选择性增菌培养,因此不利于样品的现场检测,而且有可能进入新的污染。所以,非常必要有开发一种快速,灵敏度高,特异性强的检测手段,来监控食源性致病菌,以保障人们的食品安全。
发明内容
本发明目的是提供一种快速、灵敏、简便的副溶血性弧菌检测的基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒。
基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒,它包括:羧基化Fe3O4纳米粒子与抗副溶血性弧菌兔多抗偶联的免疫磁珠和MnO2纳米粒子与抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联的MnO2纳米探针。
快速检测食品副溶血性弧菌的方法,它包括:
1)纳米磁珠的制备:
添加1.08g FeCl3.6H2O到22mL乙二醇中,超声溶解10min,;再添加1.2g NaAc和0.2g柠檬酸钠超声10min,;最后,添加0.2g PEG6000于上述溶液中,超声混匀,将所得均质溶液转移至反应釜中,于199℃烘箱中反应18h;用永磁铁从反应溶液中分离中黑色的固体物质,用超纯水和乙醇交替清洗3-5次,得到羧基化Fe3O4纳米粒子;
2)免疫磁珠的制备:
取0.5mg羧基化Fe3O4纳米粒子,用PBS洗2次,用1mL PBS重悬,加入10mg EDC和10mgNHS活化羧基,30min后,磁吸附,去上清,PBS洗3次,1mL PBS重悬,加入50µg抗副溶血性弧菌兔多抗,室温反应2h,磁分离,去上清,PBS洗3次,加入1mL封闭液封闭1h,得到功能化免疫磁珠;
3)纳米MnO2粒子的制备:
添加25mg牛血清白蛋白于10mL PBS中,搅拌混匀,加入100µL MnSO4.H2O(0.1M)于混合液中,搅拌2min,再向其加入1M的NaOH 100µL ,搅拌6-7h后,用超纯水透析48h,15000rpm离心,得到MnO2纳米粒子;
4)MnO2纳米探针的制备:
取1mg MnO2纳米粒子,PBS重悬,加入1mg EDC和1.5mg NHS活化15min,加入50µg抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY,反应2h,15000 rpm离心,得到功能化MnO2纳米探针;
5)副溶血性弧菌的检测:
取待测样品液100µL,MnO2纳米探针100µL,免疫磁珠0.5mg 重悬为800µL于室温反应30min,磁分离,去上清,PBS洗3遍,加入1mL柠檬酸盐缓冲液和10µL TMB显色10min,于紫外分光光度计测吸收光谱;
所述的PBS缓冲液为8g NaCl,0.2g KCl,3.63g Na2HPO4.12H2O,0.24g KH2PO4溶于1L超纯水中,调节pH至7.4;
所述的封闭液为10mg 牛血清白蛋白(BSA)加入1mL PBS 缓冲液中,现用现配;
所述的柠檬酸盐缓冲液为0.73g Na2HPO4.2H2O、0.4665g柠檬酸溶于50mL超纯水中,调节pH至5;
所述的步骤1)Fe3O4纳米粒子尺寸为130-330nm。
本发明提供了基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒,制备具有超顺磁性的磁珠,将该磁珠与副溶血性弧菌多克隆抗体偶联;合成MnO2纳米粒子,将该纳米粒子与副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体偶联;取待测液,将其与两种探针混合,使用磁力架分离磁珠-菌体-MnO2复合物,用柠檬酸盐缓冲液重悬该混合物,加入TMB显色,从而实现副溶血性弧菌快速特异性检测。该发明提出利用免疫磁珠和MnO2纳米粒子技术对副溶血性弧菌检测,利用ELISA方法的免疫学反应显色,缩短了检测时间,定量检测时变异系数小。最低检测浓度为10CFU/mL,加标回收率达到96.7%,灵敏度高,稳定性好。
附图说明
图1 免疫磁珠和MnO2纳米探针对副溶血性弧菌的检测流程图。
具体实施方式
实施例1 副溶血性弧菌兔克隆抗体IgG的制备
取浓度为1×109 CFU·mL-1灭活菌液与等量的弗氏完全佐剂/弗氏不完全佐剂乳化完全,制备灭活疫苗。首次免疫取浓度为1×109 CFU·mL-1弗氏完全佐剂疫苗免疫健康新西兰大白兔(由吉林大学基础医学院实验动物中心提供),采用背部皮下多点注射法,每只免疫2 mL,在第二周、第三周采用同等剂量的弗氏不完全佐剂疫苗对兔进行第二次免疫、第三次免疫。10天后,用灭活菌液加强免疫两次。每次免疫前兔耳缘静脉取血,测定血清效价。达到分离标准,兔心脏采血,分离血清,得到抗副溶血性弧菌的抗血清。采用饱和硫酸铵盐析沉淀法对所述的抗血清中的多克隆抗体IgG进行纯化;采用间接ELISA法对纯化后抗体的效价和特异性进行测定,表1为免疫前后兔血清及抗体效价测定结果,结果显示,随着免疫次数的增加,血清抗体效价逐渐升高,最终获得的副溶血性弧菌兔多克隆抗体效价可以达到1:1024000;表2为兔多克隆抗体IgG特异性结果,结果显示,制备的抗体特异性较好;采用BCA蛋白定量试剂盒对纯化后的IgG抗体的浓度进行测定,并用PBS缓冲液将其蛋白浓度调整为1mg/mL,-20℃保存备用。
实施例2 副溶血性弧菌鸡卵黄抗体IgY的制备
取浓度为1×109 CFU·mL-1灭活菌液与等量的弗氏完全佐剂/弗氏不完全佐剂乳化完全,制备灭活疫苗,用来免疫蛋鸡。采用肌肉多点注射的方式将疫苗接种于鸡胸。首次免疫采用弗氏完全佐剂疫苗,每只鸡1mL,间隔两周后采用弗氏不完全佐剂疫苗进行第二次免疫,随后每隔两周进行一次强化免疫。收集免疫前后的鸡蛋,储存于4℃冰箱中备用。采用PEG 6000盐析法对鸡蛋中的卵黄抗体进行提取。采用间接ELISA法对纯化前后卵黄抗体的效价和特异性进行测定,表3为免疫前后鸡血清及抗体IgY效价测定结果,结果显示,随着免疫次数的增加,鸡血清中的抗体效价逐渐升高,最后一次免疫后,抗体效价高达1:64000,经提取纯化后,最终获得的副溶血性弧菌IgY抗体效价可以达到1:128000。表4为鸡卵黄抗体IgY特异性结果,结果显示制备的IgY抗体特异性较好;采用BCA蛋白定量试剂盒对纯化后的IgY抗体的浓度进行测定,并用PBS缓冲液将其蛋白浓度调整为1mg/mL,-20℃保存备用。
实施例3免疫磁珠的制备
添加1.08g FeCl3.6H2O到22mL乙二醇中,超声溶解10min,形成红棕色溶液;再添加1.2g NaAc和0.2g柠檬酸钠到该溶液中,超声10min,形成暗红色溶液;最后,添加0.2gPEG6000于上述溶液中,超声混匀,将所得均质溶液转移至反应釜中,于199℃烘箱中反应18h。用永磁铁从反应溶液中分离中黑色的固体物质,用超纯水和乙醇交替清洗3-5次,得到Fe3O4纳米粒子;取0.5mg羧基化Fe3O4纳米粒子,用PBS洗2次,用1mL PBS重悬,加入10mg EDC和10mg NHS活化羧基,30min后,磁吸附,去上清,PBS洗3次,1mL PBS重悬,加入50µg抗副溶血性弧菌兔多克隆抗体,室温反应2h,磁分离,去上清,PBS洗3次,加入1mL封闭液封闭1h,得到功能化免疫磁珠。
实施例4 MnO2纳米探针的制备
添加25mg牛血清白蛋白(BSA)于10mL PBS中,搅拌混匀,加入100µL MnSO4.H2O(0.1M)于混合液中,搅拌2min,溶液变成乳白色,再向其加入100µL NaOH (1M),溶液由乳白色渐变为棕黄色,搅拌6-7h后,用超纯水透析48h,15000rpm离心,得到MnO2纳米粒子;取1mgMnO2纳米粒子,PBS重悬,加入1mg EDC和1.5mg NHS活化15min,加入50µg抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体(IgY),反应2h,15000rpm离心,得到功能化MnO2纳米探针。
实施例5 缓冲液的配置
PBS缓冲液: 取8g NaCl,0.2g KCl,3.63g Na2HPO4.12H2O,0.24g KH2PO4溶于1L超纯水中,调节pH至7.4。
实施例6菌液标准品的制备
取-80℃保存菌种,进行菌株活化。将活化后的菌株在3%氯化钠胰蛋白胨琼脂平板上划线分纯,37 ℃培养18~24 h后,挑取单个菌落,接种3%氯化钠胰蛋白胨液体培养基,37℃振荡培养12~18 h。取1mL菌液10倍倍比稀释平板倾注法进行活菌计数。剩余的菌液用1 %甲醛在室温下灭活10 min ,将灭活的菌液 3000 rpm 离心 3 min,收集菌体,然后用PBS溶液充分混匀,制成菌悬液并,用PBS溶液调节菌悬液浓度为109 CFU·mL-1,存于4 ℃冰箱中备用。
实施例7 基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌的方法
检测流程图如图1。取待测样品液100µL,MnO2纳米探针100µL,免疫磁珠0.5mg重悬800µL于室温反应30min,磁分离,去上清,PBS洗3遍,加入1mL柠檬酸盐缓冲液和10µL TMB显色10min,于紫外分光光度计测吸收光谱。参考所做的标准曲线图,确定样品中副溶血性弧菌的数量。定量检测该菌浓度的范围在10-105CFU/mL.本发明方法检测稳定,检测限可低至10 CFU/mL,检测时间短,检测效果好。对副溶血性弧菌、单核细胞增生性李斯特菌(LM)、志贺菌、金黄色葡萄球菌、沙门氏菌、大肠杆菌O157:H7等菌进行检测,只有副溶血性弧菌的检测结果呈阳性,其余均为阴性,该方法特异性强,未见假阳性和假阴性结果,结果如表5。
注:<+>表示副溶血性弧菌阳性,<->表示副溶血性弧菌阴性。
实施例8试剂盒的制备
由实施例3所描述的抗副溶血性弧菌免疫磁珠、实施4例所描述的MnO2纳米探针、实施例5所描述的缓冲液、实施例6所描述的菌液标准品共同组成基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌的试剂盒。
实施例9 模拟样品的检测
制备蛤蜊浸出液:精确称取5g蛤蜊肉,加入5mL灭菌PBS,研磨均匀后,用滤纸过滤,用0.22μm滤膜对滤出液进行抽滤;取不同浓度的副溶血性弧菌接种于该浸出液中,用本发明检测方法对其进行检测。取待测样品液100µL,MnO2纳米探针100µL,免疫磁珠0.5mg重悬800µL于室温反应30min,磁分离,去上清,PBS洗3遍,加入1mL柠檬酸盐缓冲液和10µL TMB显色10min,于紫外分光光度计测吸收光谱。
参考所做的标准曲线图,确定样品中副溶血性弧菌的数量。定量检测该菌浓度的范围在10-103CFU/mL.本发明方法检测稳定,加标回收率达到96.7%。
Claims (6)
1.基于免疫磁珠和MnO2纳米粒子检测副溶血性弧菌试剂盒,它包括:羧基化Fe3O4纳米粒子与抗副溶血性弧菌兔多抗偶联的免疫磁珠和MnO2纳米粒子与抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY偶联的MnO2纳米探针;
所述的羧基化Fe3O4纳米粒子由下述方法制备:
添加1.08g FeCl3.6H2O到22mL乙二醇中,超声溶解10min;再添加1.2g NaAc和0.2g柠檬酸钠超声10min;最后,添加0.2g PEG6000于上述溶液中,超声混匀,将所得均质溶液转移至反应釜中,于199℃烘箱中反应18h;用永磁铁从反应溶液中分离出黑色的固体物质,用超纯水和乙醇交替清洗3-5次,得到羧基化Fe3O4纳米粒子;
所述的免疫磁珠由下述方法制备:
取0.5mg羧基化Fe3O4纳米粒子,用PBS洗2次,用1mL PBS重悬,加入10mg EDC和10mg NHS活化羧基,30min后,磁吸附,去上清,PBS洗3次,1mL PBS重悬,加入50µg抗副溶血性弧菌兔多抗,室温反应2h,磁分离,去上清,PBS洗3次,加入1mL封闭液封闭1h,得到功能化免疫磁珠;
所述的MnO2纳米粒子由下述方法制备:
添加25mg牛血清白蛋白于10mL PBS中,搅拌混匀,加入100µL0.1MMnSO4.H2O于混合液中,搅拌2min,再向其加入1M的NaOH 100µL ,搅拌6-7h后,用超纯水透析48h,15000rpm离心,得到MnO2纳米粒子;
所述的MnO2纳米探针由下述方法制备:
取1mg MnO2纳米粒子,PBS重悬,加入1mg EDC和1.5mg NHS活化15min,加入50µg抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY,反应2h,15000 rpm离心,得到功能化MnO2纳米探针。
2.快速检测食品副溶血性弧菌的方法,它包括:
1)羧基化Fe3O4纳米粒子的制备:
添加1.08g FeCl3.6H2O到22mL乙二醇中,超声溶解10min;再添加1.2g NaAc和0.2g柠檬酸钠超声10min;最后,添加0.2g PEG6000于上述溶液中,超声混匀,将所得均质溶液转移至反应釜中,于199℃烘箱中反应18h;用永磁铁从反应溶液中分离出黑色的固体物质,用超纯水和乙醇交替清洗3-5次,得到羧基化Fe3O4纳米粒子;
2)免疫磁珠的制备:
取0.5mg羧基化Fe3O4纳米粒子,用PBS洗2次,用1mL PBS重悬,加入10mg EDC和10mg NHS活化羧基,30min后,磁吸附,去上清,PBS洗3次,1mL PBS重悬,加入50µg抗副溶血性弧菌兔多抗,室温反应2h,磁分离,去上清,PBS洗3次,加入1mL封闭液封闭1h,得到功能化免疫磁珠;
3)纳米MnO2粒子的制备:
添加25mg牛血清白蛋白于10mL PBS中,搅拌混匀,加入100µL 0.1MMnSO4.H2O于混合液中,搅拌2min,再向其加入1M的NaOH 100µL ,搅拌6-7h后,用超纯水透析48h,15000rpm离心,得到MnO2纳米粒子;
4)MnO2纳米探针的制备:
取1mg MnO2纳米粒子,PBS重悬,加入1mg EDC和1.5mg NHS活化15min,加入50µg抗副溶血性弧菌特异性鸡卵黄抗体IgY,反应2h,15000 rpm离心,得到功能化MnO2纳米探针;
5)副溶血性弧菌的检测:
取待测样品液100µL,MnO2纳米探针100µL,免疫磁珠0.5mg 重悬为800µL于室温反应30min,磁分离,去上清,PBS洗3遍,加入1mL柠檬酸盐缓冲液和10µL TMB显色10min,于紫外分光光度计测吸收光谱。
3. 根据权利要求2所述的快速检测食品副溶血性弧菌的方法,其特征在于:所述的PBS缓冲液为8g NaCl,0.2g KCl,3.63g Na2HPO4.12H2O,0.24g KH2PO4溶于1L超纯水中,调节pH至7.4。
4. 根据权利要求2或3所述的快速检测食品副溶血性弧菌的方法,其特征在于:所述的封闭液为10mg 牛血清白蛋白 (BSA)加入1mL PBS 缓冲液中,现用现配。
5. 根据权利要求4所述的快速检测食品副溶血性弧菌的方法,其特征在于:所述的柠檬酸盐缓冲液为0.73g Na2HPO4.2H2O、0.4665g柠檬酸溶于50mL超纯水中,调节pH至5。
6.根据权利要求5所述的快速检测食品副溶血性弧菌的方法,其特征在于:步骤1)制备的Fe3O4纳米粒子尺寸为130-330nm。
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Families Citing this family (9)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN108251415B (zh) * | 2018-01-22 | 2020-05-15 | 北京中科圆融生物科技发展有限公司 | 一种阴离子多肽羧基化生物纳米磁珠及其制备方法 |
CN110470840B (zh) * | 2019-09-06 | 2022-05-27 | 齐鲁工业大学 | 一种检测副溶血性弧菌的方法 |
CN110850076A (zh) * | 2019-11-28 | 2020-02-28 | 南京迪安医学检验所有限公司 | 一种抗双链DNA抗体IgG化学发光免疫测定试剂盒及其制备方法和应用 |
CN111323596B (zh) * | 2020-03-11 | 2023-07-04 | 赵薇 | 一种金黄色葡萄球菌检测试剂盒及其制备方法 |
CN111575299A (zh) * | 2020-05-11 | 2020-08-25 | 吉林农业大学 | 牛荚膜a型多杀性巴氏杆菌免疫磁珠的制备方法 |
CN112649602A (zh) * | 2020-06-17 | 2021-04-13 | 吉林大学 | 可视化基于免疫磁珠检测金黄色葡萄球菌试剂盒 |
CN112557384B (zh) * | 2020-12-10 | 2024-01-26 | 贵州大学 | 一种基于比色分析的硫化氢检测方法及应用 |
CN113804887B (zh) * | 2021-08-25 | 2023-08-01 | 中国农业科学院油料作物研究所 | 一种具有多检测尺度的免疫检测试剂盒的应用 |
CN117110607B (zh) * | 2023-09-16 | 2024-01-26 | 鲁东大学 | 一种检测副溶血性弧菌的组合物及其应用 |
Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105092843A (zh) * | 2015-07-03 | 2015-11-25 | 济南大学 | 一种Pt-二氧化锰/四氧化三铁胰腺癌标志物的生物传感器的制备方法及应用 |
CN106336458A (zh) * | 2016-07-29 | 2017-01-18 | 浙江省海洋水产养殖研究所 | 副溶血弧菌的胶体金‑卵黄抗体快速检测试纸及制备方法 |
CN106706901A (zh) * | 2015-07-14 | 2017-05-24 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 可实现多种致病菌同步检测方法 |
CN106771194A (zh) * | 2017-01-18 | 2017-05-31 | 青岛大学 | 一种检测病原微生物的方法 |
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2017
- 2017-06-16 CN CN201710459663.3A patent/CN107202884B/zh active Active
Patent Citations (4)
Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
---|---|---|---|---|
CN105092843A (zh) * | 2015-07-03 | 2015-11-25 | 济南大学 | 一种Pt-二氧化锰/四氧化三铁胰腺癌标志物的生物传感器的制备方法及应用 |
CN106706901A (zh) * | 2015-07-14 | 2017-05-24 | 深圳出入境检验检疫局食品检验检疫技术中心 | 可实现多种致病菌同步检测方法 |
CN106336458A (zh) * | 2016-07-29 | 2017-01-18 | 浙江省海洋水产养殖研究所 | 副溶血弧菌的胶体金‑卵黄抗体快速检测试纸及制备方法 |
CN106771194A (zh) * | 2017-01-18 | 2017-05-31 | 青岛大学 | 一种检测病原微生物的方法 |
Non-Patent Citations (3)
Title |
---|
BSA-templated MnO2 nanoparticles as both peroxidase and oxidase mimics;Xing Liu et al.;《Analyst》;20121007;第137卷(第19期);摘要,4553-4554页2.4-2.5节 |
副溶血性弧菌免疫检测新方法研究;王燕;《中国优秀硕士学位论文全文数据库(电子期刊)医药卫生科技辑》;20140215(第2期);摘要、论文正文第9-20、25、35-38页2.3、2.44-2.4.9、3.4、3.12节 |
副溶血性弧菌高免卵黄抗体的制备和不同提纯方法效果的比较;翟玥等;《吉林大学学报(医学版)》;20170331;第43卷(第2期);摘要和442页 |
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