CN107105685A - 用于缓解宿醉的含有乳球菌属菌株作为活性成分的食品组合物 - Google Patents
用于缓解宿醉的含有乳球菌属菌株作为活性成分的食品组合物 Download PDFInfo
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Abstract
本发明涉及用于缓解宿醉的食品组合物，所述食品组合物含有选自如下中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分：Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌。具体而言，功能性奶油奶酪使用具有分解乙醇和乙醛的能力的上述五种乳球菌属菌株而制作。这种功能性奶油奶酪优选用于功能保健食品，该功能保健食品用于缓解宿醉，并且广泛地分解作为乙醇分解产物的乙醛，以使在体内可能导致癌症的乙醛的积聚最小化。此外，作为相较于市场上可得的奶油奶酪而言降低了单位成本的奶酪引子，所述功能性奶油奶酪可以与市场上销售的奶油奶酪区分开。
Description
技术领域
本发明涉及用于缓解宿醉的食品组合物，该食品组合物含有选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种(Lactococcus lactis subsp.cremoris)、乳酸乳球菌乳酸亚种(Lactococcus lactissubsp.lactis)和棉子糖乳球菌(Lactococcus raffinolactis)所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分。
背景技术
奶酪是人类已知数千年的发酵食品。目前已知超过1400种的奶酪。根据公元前6000年左右的美索不达米亚的类似奶酪食品的记录，奶酪被认为起源于古代。此外，认为自古时候起就已经使用奶酪，因为发掘出了处于公元前3000年左右的瑞士Cortaillod文明时期或者公元前3000年左右的瑞士Crete中的克里特岛的Minoan文明时期的用于制作奶酪的木制装置。尽管有1400种奶酪，但一些奶酪是彼此相似的，而其它奶酪在形状、大小、老化时间(aging period)、所用的原油(crude oil)、添加剂、包装方法和生产区域方面彼此非常不同。Codex Alimentarius Commission持续对将要生产的奶酪的质量标准进行审查和修改。奶酪通常含有20％至30％的蛋白质和脂肪，而农家奶油奶酪(cottage cream cheese)的脂肪含量高于蛋白质。已经老化的奶酪含有由于酶(如乳酸菌)的影响而变成易于消化或吸收的形式的成分。此外，奶酪还富含矿物质(如钙、磷和硫)以及维生素A和维生素B，并因此有益于美容护理。奶酪是强烈建议作为消化系统较弱的老年人患者以及成长中的儿童的营养食品的发酵食品。
顾名思义，奶油奶酪是不具有天然奶酪令人不愉快的口味和气味的奶油状奶酪。奶油奶酪处于白色柔软的奶油块的形式，具有可在酸奶发酵过程中品尝到的酸甜口味，并且其特征在于柔软的质感。奶油奶酪通过对凝乳进行加热和分离而制成，所述凝乳通过加入凝乳酶和含有各种乳酸菌的引子(starter)而生产，因此具有高水分含量并且难以储存。在这方面，以这种方式生产的奶油奶酪售价较高。
人在饮酒后的第二天可能感觉到的宿醉不仅可破坏身体健康，而且还会降低生活品质。饮酒后的第二天，大多数人患有酸痛、呕吐和严重的头痛。酒精存在轻微的差异，但是以烧酒(soju)为基础，烧酒中每1g乙醇的卡路里为7.1kcal，并且含有少量其它营养成分。通过饮酒吸收的乙醇中只有2％至10％经由肾或肺通过呼气或尿液排出，并且超过90％的剩余乙醇在肝脏中迅速代谢。在肝脏中分解的乙醇产生乙醛，其又转化为乙酸，以分解成水和二氧化碳。这里产生的乙醛引起宿醉，包括脸红、心跳、头痛和胃痛。频繁饮酒是导致分解酒精的肝脏负担加重的主要原因。
为了缓解饮酒后的这种宿醉，从旧时起已经使用豆芽、干鳕鱼、绿豆等作为缓解饮酒后宿醉的食品。此外，已知多种与宿醉护理相关的食品，但是这些食品依赖于民间偏方中已知或在经典的东方医学书籍中描述的原料和功效，因此缺乏科学的方法。
发明内容
技术问题
本发明提供了用于缓解宿醉的食品组合物，所述食品组合物含有选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分。
技术方案
本发明提供了用于缓解宿醉的食品组合物，所述食品组合物含有选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分。
本发明还提供了制备用于缓解宿醉的奶油奶酪的方法，所述方法包括对选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株进行培养，并将所培养的菌株与奶混合。
发明的有益效果
本发明涉及用于缓解宿醉的食品组合物，该食品组合物含有选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分。具体而言，功能性奶油奶酪使用具有分解乙醇和乙醛的能力的上述五种乳球菌属菌株而制备。这种功能性奶油奶酪优选用于功能保健食品，该功能保健食品用于缓解宿醉，并且广泛地分解作为乙醇分解产物的乙醛，以使得在体内可能导致癌症的乙醛的积聚最小化。此外，作为相较于市场上可得的奶油奶酪而言降低了单位成本的奶酪引子，该功能性奶油奶酪可与市场上销售的奶油奶酪区分开。
附图说明
图1示出了使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制备的奶油奶酪的图片。
图2是示出了通过使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制备的奶油奶酪对小鼠巨噬细胞RAW 264.7细胞进行处理获得的细胞毒性分析结果的图。
图3是示出了含有Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物的乙醇脱氢酶(ADH)活性的测量结果的图，测量结果经由体外方法获得。
图4是示出了含有Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物的乙醛醛化氢酶(ALDH)活性的测量结果的图，测量结果经由体外方法获得。
图5是示出了使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的ADH活性的测量结果的图，测量结果经由体外方法获得。
图6是示出了使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的ALDH活性的测量结果的图，测量结果经由体外方法获得。
图7是示出了小鼠中的血液乙醇水平的图，向该小鼠口服给予使用Lactococcuschungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪。
图8是示出了小鼠中的血液乙醛水平的图，向该小鼠口服给予使用Lactococcuschungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪。
具体实施方式
在本发明中，将各自具有分解乙醇和乙醛的能力的Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌用于制作功能性奶油奶酪，并且这种功能性奶油奶酪优选用于缓解宿醉的功能保健食品。广泛地，将作为乙醇分解产物的乙醛进行分解，以使得在体内可能导致癌症的乙醛的积聚最小化。此外，作为相较于市场上可获得的奶油奶酪降低了单位成本的奶酪引子，所述功能性奶油奶酪可以与市场上销售的奶油奶酪区分开。
本发明提供了用于缓解宿醉的食品组合物，所述食品组合物含有选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基作为活性成分。
优选地，所述培养基可以在25℃至37℃的温度下培养24小时至48小时，但实施方式并不限于此。
详细地说，具有分解乙醇或乙醛的能力的食品组合物可缓解宿醉。
本发明公开的食品组合物可以含有Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌的活细胞或干燥细胞，它们的培养基或它们的发酵产物作为活性成分；其中，所述培养基或发酵产物可以包括培养基本身(其中，将上述五种乳球菌属菌株在合适的液体培养基中培养)、或通过对培养基进行过滤或离心而从其中移除菌株的滤液(通过离心获得的经过滤的液体或上清液)。然而，实施方式不限于此。
此外，本发明的公开物可以用作食品或发酵产物，并且对这种食品或发酵产物的类型无特别限制。食品的实例为肉、香肠、面包、巧克力、糖果、零食(snacks)、饼干、比萨饼、拉面、其它面条、口香糖、包括冰淇淋的乳制品、各种汤、饮品(beverages)、茶、饮料(drinks)、酒精饮料和维生素复合物。发酵产物的实例包括发酵肉制品(如火腿和香肠)、发酵生吃产品 发酵奶制品和泡菜本发明的使用乳酸菌的发酵产物可以根据本领域已知的常规方法进行制作。优选地，根据本发明的实施方式，食品可以为奶酪，特别是奶油奶酪，但实施方式不限于此。
本发明中使用的术语“引子(starter)”是指在制作发酵产物时使用的微生物培养基。因此，引子微生物的种类决定待制作的产物的特性，并且对产物的质量也具有重要的影响。细菌、真菌和酵母是引子微生物的实例，并可单独使用或组合使用。
另外，本发明提供了制作用于缓解宿醉的奶油奶酪的方法，所述方法包括：(1)通过接种到奶中，对选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基进行培养；(2)对在步骤(1)中培养的培养物进行巴氏杀菌；(3)将经巴氏杀菌的培养物与奶混合，并对混合物进行加热；以及(4)移除通过加热混合物而得到的奶酪中的水分。
发明的实施方式
在下文中，将参考不会限制本发明的实施例对本发明进行详细描述。本发明的以下实施例仅用于说明目的，而并不限制本发明的范围。因此，将理解的是，基于本发明的详细描述和实施例，本领域普通技术人员容易推断的内容被认为属于本发明的范围。
实验例
以下实验例旨在提供通常应用于本发明的各个实施例的实验例。
1.Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养
在本实验室中分离出的菌株Lactococcus chungangensis分离自活性污泥气泡。该菌株保藏在韩国典型菌种保藏中心(Korean Collection for Type Cultures，KCTC)。
使用由KCTC分销的Lactococcus fujiensis(KCTC3185T)。
使用由韩国微生物培养中心(Korean Culture Center of Microorganisms，KCCM)分销的乳酸乳球菌乳脂亚种(KCCM40699)。
使用由KCTC分销的乳酸乳球菌乳酸亚种(KCTC3769T)。
使用由Deutsche Sammlung von Mikroorganismen(DSM)分销的棉子糖乳球菌(DSM20443T)。
将Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌接种到胰蛋白酶大豆肉汤(TSB)培养基中，然后在振荡恒温培养箱中于30℃下培养24小时。本文中，使用酶标仪(modelF200，Tecan，Mannedorf，瑞士)对各菌株的细胞密度进行测定，并将各菌株以4×108个细胞的浓度接种于酸化乳中。
2.使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌进行的奶油奶酪的制作
将用作奶油奶酪的引子的乳酸菌(如Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌)接种到酸化乳中，然后培养48小时。孵育后，将培养产物与奶混合，通过在68℃下巴氏杀菌30分钟并冷却经巴氏杀菌的奶以及随后在70℃下加热5分钟来进行制作。为了除去在对培养产物进行加热后产生的奶酪中的水分，使用织物仅得到凝乳。使用0.5％的盐去除水分，从而完成奶酪的制作(参见图1)。使由此获得的奶酪经受冻干，从而用于以粉末的形式储存，并随后储存在4℃下直至进行进一步的实验。
3.格氏乳球菌(Lactococcus garvieae)、乳酸乳球菌霍氏亚种(Lactococcuslactis subsp.hordiniae)、Lactococcus lactis subsp.tructae和Lactococcustaiwanensis的培养
使用由KCTC分销的格氏乳球菌(KCTC3772T)和乳酸乳球菌霍氏亚种(KCTC3768)，使用由National Biological Resource Center(NBRC)分销的Lactococcus lactissubsp.tructae(NBRC110453)和Lactococcus taiwanensis(NBRC109049)。
将格氏乳球菌、乳酸乳球菌霍氏亚种、Lactococcus lactis subsp.tructae和Lactococcus taiwanensis各自接种至TSB培养基中，然后在30℃的振荡恒温培养箱中培养24小时。在本文中，使用酶标仪(model F200，Tecan，Mannedorf，瑞杉)对各菌株的细胞密度进行测定，并将各菌株以4×108个细胞的浓度接种于酸化乳中。
4.使用格氏乳球菌、乳酸乳球菌霍氏亚种、Lactococcus lactis subsp.tructae和Lactococcus taiwanensis进行的奶油奶酪的制作
将用作奶油奶酪的引子的乳酸菌(如格氏乳球菌、乳酸乳球菌霍氏亚种、Lactococcus lactis subsp.tructae和Lactococcus taiwanensis)接种到酸化乳中，然后培养48小时。孵育后，将培养产物与奶混合，通过在68℃下巴氏杀菌30分钟并冷却经巴氏杀菌的奶以及随后在70℃下加热5分钟来进行制作。然而，上述菌株不能生产用于制作奶酪的凝乳，导致奶油奶酪制作失败。
5.通过气相色谱法进行的奶油奶酪中的脂肪酸的测定
根据上述实验方法，对使用Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌各自制作的奶油奶酪中的挥发性脂肪酸进行检测，并对它们的产量进行比较。在本文中，将奶油奶酪冻干，然后精细研磨。加入340μL甲基化混合物(MeOH:Benzen:DMP:H2SO4＝39:20:5:2)和200μL庚烷并随着奶油奶酪进行搅拌，并在80℃下进行2小时的提取工艺以获得脂肪酸。使用火焰离子化检测器(FID)根据气相色谱法对有机酸进行分析。本文中使用的柱是DB-Wax(Agilent，30mm×0.25mm×0.25μm)，并且分析条件如下：烘箱温度每分钟升高25℃，由此从50℃升温至230℃，并且入口温度和检测器设置在250℃。
6.奶油奶酪中的RAW 264.7细胞的细胞毒性测定
对上述获得的奶油奶酪进行细胞毒性测定。使用小鼠巨噬细胞(即，RAW 264.7细胞)进行细胞毒性测定实验。将RAW 264.7细胞每周继代培养3次至4次，并且本文中使用的培养基是补充有20μg/ml庆大霉素和10％胎牛血清(FBS)的Dulbecco's Modified Eagle培养基(DEME)，从而在37℃下于5％CO2的环境中对RAW 264.7细胞进行培养。然后，将经培养的细胞分配至96孔板中，并随后以1×105细胞/孔的浓度培养24小时。另外，用细胞株对在新鲜的无FBS的DMEM中熔融至10mg/ml的终浓度的奶油奶酪进行处理，然后，将细胞株培养24小时。为了测量细胞株的存活力，使用3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四唑溴化物(MTT)试剂，用酶标仪对590nm处的吸光度进行测量。此外，为了测量细胞损伤，进行酶(如乳酸脱氢酶(LDH))的测定。用酶标仪在430nm处测量从细胞释放的LDH的量。
7.含有Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物中的乙醇脱氢酶(ADH)和乙醛脱氢酶(ALDH)活性的测定
对于含有选自以上且无细胞毒性的Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物，根据以下方法测定菌株分解酒精和乙醛的能力。通过修改Lebsack和Bostian的方法，对含有乳酸菌的培养物中的ADH活性进行测定。通过用酶标仪测量340nm处的吸光度并与对照组的相对活性的测量结果进行比较，从而对ADH活性进行测定。在本文中，使用ADH使对照组经受比较分析。关于反应溶液的组成，加入1.0M Tris/HCl缓冲液(pH 8.8)、20mM NAD+、0.2M乙醇和蒸馏水至总体积为3ml，然后在30℃的恒温水浴中反应5分钟。反应后回收上清液，并测定其在340nm处的吸光度。通过修改Tottmar的方法，实施含有乳酸菌的培养物中的ALDH活性的测定。还通过用酶标仪测量340nm处的吸光度并与对照组的相对活性的测量结果进行比较，对ALDH活性进行测定。在本文中，使用ALDH使对照组经受比较分析。关于反应溶液的组成，加入1.0M Tris/HCl缓冲液(pH 8.0)、20mM NAD+、3.0M KCl、0.33M 2-巯基乙醇、1.0M乙醛和蒸馏水至总体积为3ml，然后在30℃恒温水浴中反应5分钟。反应后回收上清液，并测定340nm处的吸光度。
8.奶油奶酪中的ADH和ALDH活性的测定
对于选自以上且无细胞毒性的奶油奶酪，还根据与用于测定含有乳酸菌的培养物的方法相同的方法对该奶油奶酪分解酒精和乙醛的能力进行测定。
9.通过口服给予使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的小鼠中的酒精和乙醛的浓度的测定
在本发明中，将购自SAMTAKO(Osan，Gyeonggi-do)的5周龄的印迹调控区(imprinting control region，ICR)小鼠用固体饲料和水预先饲养一周，然后进行实验。为了研究使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌(选自以上并具有优异的酒精和乙醛分解能力)制作的奶油奶酪对酒精性宿醉的作用，在小鼠饮酒后随着时间推移(1小时、3小时、5小时和7小时)对血液酒精和乙醛浓度进行测定。在如下中进行动物实验：将蒸馏水口服给予至小鼠的正常组、将酒精口服给予至小鼠的对照组，以及将酒精和使用Lactococcuschungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪口服给予至小鼠的实验组；其中，各组由10只小鼠组成。关于饮酒量，将22％酒精(15ml/kg体重)口服给予，并且在阳性对照组中，将酒精和使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪(100mg/kg体重)一起口服给予。给予后1小时、3小时、5小时和7小时收集血液，并在室温下放置30分钟，以及在4℃下放置10分钟，然后经受1500rpm的转速离心15分钟，以分离上清液。将0.3M磷酸钾缓冲液(pH 9.0)和49mM NAD+混合在一起，并向混合物中加入血液样品。在20℃下使混合物反应5分钟，并用酶标仪对340nm处的吸光度(A1)进行测量。另外，将ADH或ALDH 50加入混合物，使得能够在20℃下反应5分钟，并对340nm处的吸光度(A2)进行测量。因此，通过以下公式对血液酒精浓度进行量化：
浓度＝0.7259/3.6×△A
△A＝样品(A2-A1)-空白(A2-A1)
另外，通过以下公式对血液乙醛浓度进行量化：
浓度＝0.7158/3.6×△A
△A＝样品(A2-A1)-空白(A2-A1)
实施例
1.使用气相色谱法对使用Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪进行脂肪酸分析
结果，使用气相色谱法对使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪的脂肪酸组成进行分析发现：棕榈酸甲酯最多，其次按顺序是油酸、十五烷酸甲酯、十八烷酸和肉豆蔻酸甲酯。上述组成的比例可以确定使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪的风味(参见表1)。
表1
结果，使用气相色谱法对使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪的脂肪酸组成进行分析发现：十五烷酸甲酯最多，其次按顺序是棕榈酸甲酯、油酸、十八烷酸和肉豆蔻酸甲酯。上述组成的比例可以确定使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪的风味(参见表2)。
表2
结果，使用气相色谱法对使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪的脂肪酸组成进行分析发现：棕榈酸甲酯最多，其次按顺序是油酸、十五烷酸甲酯、十八烷酸和肉豆蔻酸甲酯。上述组成的比例可以确定使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪的风味(参见表3)。
表3
结果，使用气相色谱法对使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪的脂肪酸组成进行分析发现：棕榈酸甲酯最多，其次按顺序是油酸、十五烷酸甲酯、十八烷酸和肉豆蔻酸甲酯。上述组成的比例可以确定使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪的风味(参见表4)。
表4
结果，使用气相色谱法对使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的脂肪酸组成进行分析发现：十五烷酸甲酯最多，其次按顺序是棕榈酸甲酯、油酸、十八烷酸和肉豆蔻酸甲酯。上述组成的比例可以确定使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的风味(参见表5)。
表5
2.以使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪处理的RAW 264.7细胞的细胞毒性测定
证实了以使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪处理的RAW 264.7细胞的存活力未降低，并且从所述细胞释放的乳酸脱氢酶(LDH)的量显著降低，从而无细胞损伤。因此，还证实了使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪无细胞毒性(参见图2)。
3.含有Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物中的ADH和ALDH活性的测定
根据体外研究，通过使用含有Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌的培养物，对与ADH和ALDH的活性有关的酒精代谢中发生的两种重要化学反应(即，ADH和ALDH)进行评估。
如图3所示，含有Lactococcus chungangensis的培养物中的ADH活性的结果表明，含有Lactococcus chungangensis的培养物中的ADH活性低于对照组，但具有66.6％的高的水平。含有Lactococcus fujiensis的培养物中的ADH活性的结果表明，含有Lactococcusfujiensis的培养物中的ADH活性低于对照组，但具有48.7％的高的水平。含有乳酸乳球菌乳脂亚种的培养物中的ADH活性的结果表明，含有乳酸乳球菌乳脂亚种的培养物中的ADH活性低于对照组，但具有59.3％的高的水平。含有乳酸乳球菌乳酸亚种的培养物中的ADH活性的结果表明，含有乳酸乳球菌乳酸亚种的培养物中的ADH活性低于对照组，但具有55.2％的高的水平。含有棉子糖乳球菌的培养物中的ADH活性的结果表明，含有棉子糖乳球菌的培养物中的ADH活性低于对照组，但具有44.2％的高的水平。
另外，如图4所示，含有Lactococcus chungangensis的培养物中的ALDH活性的结果表明，含有Lactococcus chungangensis的培养物中的ALDH活性低于对照组，但具有62.8％的高的水平。含有Lactococcus fujiensis的培养物中的ALDH活性表明，含有Lactococcus fujiensis的培养物中的ALDH活性低于对照组，但具有39.3％的高的水平。含有乳酸乳球菌乳脂亚种的培养物中的ALDH活性表明，含有乳酸乳球菌乳脂亚种的培养物中的ALDH活性低于对照组，但具有53.4％的高的水平。含有乳酸乳球菌乳酸亚种的培养物中的ALDH活性表明，含有乳酸乳球菌乳酸亚种的培养物中的ALDH活性低于对照组，但具有58.3％的高的水平。含有棉子糖乳球菌的培养物中的ALDH活性表明，含有棉子糖乳球菌的培养物中的ALDH活性低于对照组，但具有43.9％的高的水平。
上述结果进一步广泛地指出，Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌可以用作功能食品，以帮助缓解宿醉和肝功能。
4.使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪中的ADH和ALDH活性的测定
根据体外研究，通过使用利用Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪，对与ADH和ALDH的活性有关的酒精代谢中发生的两种重要化学反应(即，ADH和ALDH)进行评估。
如图5所示，使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪中的ADH活性的结果表明，使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪中的ADH活性比对照组高0.4％。使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪中的ADH活性的结果表明，相较于对照组中的ADH活性，使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪中的ADH活性具有81.7％的高的水平。使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪中的ADH活性的结果表明，相较于对照组中的ADH活性，使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪中的ADH活性具有94.9％的高的水平。使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪中的ADH活性的结果表明，相较于对照组中的ADH活性，使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪中的ADH活性具有94.8％的高的水平。使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪中的ADH活性的结果表明，相较于对照组中的ADH活性，使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪中的ADH活性具有63.8％的高的水平。
另外，如图6所示，使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪中的ALDH活性的结果表明，使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪中的ALDH活性低于对照组，但具有82.1％的高的水平。使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪中的ALDH活性的结果表明，相较于对照组中的ALDH活性，使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪中的ALDH活性具有56.8％的高的水平。使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪中的ALDH活性的结果表明，相较于对照组中的ALDH活性，使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪中的ALDH活性具有60.1％的高的水平。使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪中的ALDH活性的结果表明，相较于对照组中的ALDH活性，使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪中的ALDH活性具有67.3％的高的水平。使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪中的ALDH活性的结果表明，相较于对照组中的ALDH活性，使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪中的ALDH活性具有58.1％的高的水平。
也就是说，关于使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪和使用Lactococcuschungangensis制作的奶油奶酪之间的比较评估，Lactococcus chungangensis的ADH活性比Lactococcus fujiensis高18.7％。另外，Lactococcus chungangensis的ALDH活性比Lactococcus fujiensis高25.3％。
关于使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪和使用Lactococcuschungangensis制作的奶油奶酪之间的比较评估，Lactococcus chungangensis的ADH活性比乳酸乳球菌乳脂亚种高5.5％。此外，Lactococcus chungangensis的ALDH活性比乳酸乳球菌乳脂亚种高22.0％。
关于使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪和使用Lactococcuschungangensis制作的奶油奶酪之间的比较评估，Lactococcus chungangensis的ADH活性比乳酸乳球菌乳酸亚种的ADH活性高5.6％。此外，Lactococcus chungangensis的ALDH活性比乳酸乳球菌乳酸亚种的ALDH活性高14.8％。
关于使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪和使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪之间的比较评估，Lactococcus chungangensis的ADH活性比棉子糖乳球菌的ADH活性高36.6％。此外，Lactococcus chungangensis的ALDH活性比棉子糖乳球菌的ALDH活性高24.0％。
发现Lactococcus chungangensis易于用作可以分解乙醇(如奶油奶酪)的奶油奶酪引子，并且发现使用Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪可以用作功能食品，以帮助缓解宿醉和肝功能。
5.通过口服给予使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的小鼠中的酒精和乙醛浓度的测定
为了证实使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的缓解宿醉的作用，使用小白鼠对血液酒精和乙醛的浓度进行测定。如图7所示，血液酒精(乙醇)水平在饮酒后3小时达到峰值，并且证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用Lactococcuschungangensis制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，酒精水平下降25％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，酒精水平下降6％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，酒精水平下降20％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，酒精水平下降23％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，酒精水平下降4％。
此外，如图8所示，血液乙醛水平在饮酒后1小时达到峰值，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用Lactococcus chungangensis制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，乙醛水平下降18％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用Lactococcus fujiensis制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，乙醛水平下降2％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用乳酸乳球菌乳脂亚种制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，乙醛水平下降11％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用乳酸乳球菌乳酸亚种制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，乙醛水平下降14％。此外，证实了相较于仅服用酒精的组，一起服用酒精和使用棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪的组在饮酒后5小时，乙醛水平下降4％。
基于上述结果，发现使用Lactococcus chungangensis、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种或棉子糖乳球菌制作的奶油奶酪降低了血液乙醛的浓度(这被认为是宿醉的主要诱因)，因此，这种奶油奶酪被认为能够减少在饮酒后在机体内出现的有害症状，并且可用作功能食品。
PCT/RO/134表
Claims (6)
1.一种用于缓解宿醉的食品组合物，所述食品组合物包含选自于由Lactococcuschungangensis(KCTC12684BP)、Lactococcus fujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基。
2.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，所述食品组合物具有乙醇分解活性。
3.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，所述食品组合物具有乙醛分解活性。
4.如权利要求1所述的食品组合物，其特征在于，食品为奶酪、酸奶、黄油、奶油、冰淇淋、乳酸饮品、开菲尔、泡菜或乳制品。
5.如权利要求4所述的食品组合物，其特征在于，所述奶酪为奶油奶酪。
6.一种制作用于缓解宿醉的奶油奶酪的方法，所述方法包括：
(1)通过接种到奶中，对选自于由Lactococcus chungangensis、Lactococcusfujiensis、乳酸乳球菌乳脂亚种、乳酸乳球菌乳酸亚种和棉子糖乳球菌所组成的组中的至少一种菌株或它们的培养基进行培养；
(2)对在步骤(1)中培养的培养物进行巴氏杀菌；
(3)将经巴氏杀菌的培养物与奶混合，并对混合物进行加热；以及
(4)移除通过加热混合物而得到的奶酪中的水分。
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