JP2023515791A - サッカロポリスポラ、及び当該サッカロポリスポラの、生体アミンの低減における使用 - Google Patents
サッカロポリスポラ、及び当該サッカロポリスポラの、生体アミンの低減における使用 Download PDFInfo
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Abstract
Description
(1)食品発酵系への使用において、食品の正常発酵に影響を与えない。
(2)当該菌株で調製した純粋種の麦麹は、黄酒の発酵に適しており、アルコールの生成速度を促進するだけでなく、黄酒中のアミノ酸の含有量を高めることができる。
(3)生体アミンの産生量は、いずれも2.5mg/L未満であり、検出された生体アミンの量は極めて少ない。
(4)チラミン、ヒスタミン、プトレシン、カダベリンのいずれに対しても分解作用がある。
(5)臭いケツギョの発酵、料理酒の発酵、及び食酢の発酵に適用することができるとともに、生体アミンを減少させる機能を有する。
ステップ(1):小麦1粒につき3~5フレークとなり少量の粉末が生じる程度に、小麦粒の組織を破砕し、デンプンを露出させる小麦破砕と、
ステップ(2):ステップ(1)で処理された材料に、当該材料の質量の30~45%の真水を加え、15分間~25分間撹拌して当該材料に充分かつ均一に水分を吸収させる小麦湿潤と、
ステップ(3):ステップ(2)で処理された材料をスチーミングして、滅菌するスチーミング滅菌と、
ステップ(4):ステップ(3)で得られた材料を40℃未満の温度に下げた後、活性化された菌種を105~107CFU/mLの接種量で接種する接種と、
ステップ(5):発酵と、を含む。
a)胞子発芽期:麹を皿へ供給してから6時間後、品温を34~35℃程度になるまでゆっくり上昇させ、自己制御モードを開始し、毎回5~10分間、2時間間隔で、均一な吹き抜けとなるように小風量で間欠的に通風することで、品温を32℃まで下げる。
b)菌糸成長期:間欠的に3~5回通風した後、菌糸が成長し始め、品温が35℃以上に上昇して麹が固結し始めた時、連続的に通風して品温を35±2℃に維持する。
c)菌糸繁殖期:接種してから12時間後、品温が速やかに上昇する場合、第一回の固結の状況に応じて麹を切り返し、切り返し前は先ず測温プローブを上げ、切り返し機を起動した後は、麹を平らに広げ、測温プローブを下ろし、通風及び噴霧システムを起動する。
d)麹について1回目の切り返しを行った返後、品温を36~37℃の間に保ち、スムーズな通風及び噴霧を保持し、約20時間後、目視で麹が再び固結して白くなったとき、温度を37℃以下に制御し、麹について2回目の切り返しを行いし、その後、品温を35±2℃に制御する。
ステップa)酵母の活性化培養:YPD培地に酵母を接種し、30℃、150r/min(分)の条件下で24時間活性化培養を行う。
ステップb)酒母の調製:蒸し米飯を600g取り、それに1600mLの真水、60gの生麦麹、800U/gの米飯用糖化酵素を加え、糖化温度を55~65℃、糖化時間を3~4時間に制御しながら糖化させ、糖化終了後、見かけ糖度が12°Bx以上になったとき、115℃で15分間滅菌し、その後、24~31℃に冷却し、ステップa)で培養して熟成させた酵母培養液を5%の接種量で接種し、30℃を超えない培養温度下で、150r/minで18~24時間培養し、熟成した後、酒母を得る。
ステップc)伝統的な黄酒発酵の原料配合に従って、麦麹の添加量40~50g/Lにて、供料及び発酵を行う。最初の4日間では、温度を28~30℃に制御しながら、毎日、少なくとも一回加水し、最初に加水する時間を8~10時間とし、4日間発酵することで、前発酵段階を行い、後発酵段階では、温度を13~15℃とし、毎日、一回攪拌して加水し、発酵を10~15日続ける。
(1)試料の下処理:ケツギョの内臓を除去し、3kg分を秤量する。
(2)発酵液の調製:ケツギョと同質量の飲用水を100%とし、それに6%の塩、1%のネギ、0.6%のショウガ、0.1%のスターアニス、0.05%のアニス、0.05%のクミン、0.01%のトウガラシ、300000Uの中性プロテアーゼを加え、均一に混合して発酵液を得る。
(3)接種:ステップ(2)の発酵液に、活性化されたSaccharopolyspora.jiangxiensis J3菌種を10%の接種量、菌液濃度107cfu/mLで接種する。
(4)発酵:ステップ(3)の発酵液にケツギョを浸し、最上層を石で押し固め、20℃で6日間発酵させ、臭いケツギョを得る。
(1)本発明に係る菌株は、食品の正常な発酵に影響を与えることなく、食品発酵系に適用される。
(2)本発明に係る菌株を用いて調製された純粋種の麦麹は、黄酒の発酵に適しており、アルコールの生産率を向上するだけでなく、黄酒中のアミノ酸の含有量を高めることができる。純粋種のS.jiangxiensis J3を用いてなる発酵黄酒中のアミノ酸の含有量は、対照群と比べて有意な差がない。一方、複合菌剤を添加してなる発酵黄酒中のアミノ酸の含有量は最も高い。また、いずれの菌株についても、その添加が伝統的な黄酒の風味に与える目立った影響はない。S.jiangxiensis J3を添加した試料群は、その生体アミンの含有量が対照群と比べて35.09%低減し、黄酒中のアミノ酸の含有量及び栄養価が向上したため、黄酒中のアミノ酸の含有量及び揮発性物質の含有量を増加させて黄酒の品質を向上させるという目的は達成できた。
(3)S.jiangxiensis J3による生体アミンの生成量は2.5mg/L未満と、生体アミンの検出量が極めて少なく、生体アミンはほとんど生成されていない。S.jiangxiensis J3の、チラミンに対する分解率は81.55%に達し、S.jiangxiensis J3の、ヒスタミンに対する分解率は100%に達し、S.jiangxiensis J3の、プトレシンに対する分解率は51.8%に達し、S.jiangxiensis J3の、カダベリンに対する分解率は40.01%に達し、総生体アミンに対する分解率は69.09%に達した。これは、いずれの菌株も、生体アミンを低減する良好な能力を有していることを意味する。
(4)S.jiangxiensis J3は、生体アミンを低減する効果を有し、当該S.jiangxiensis J3を黄酒の発酵に用いる場合、S.jiangxiensis J3を添加し発酵して得た黄酒中の生体アミンの含有量は16.88±1.41mg/Lであり、対照群に比べて36.90%低減した。S.jiangxiensis J3を添加して得た臭いケツギョ中の生体アミンの含有量は、対照群と比べて23.24%低減した。S.jiangxiensis J3を添加して得た料理酒中の生体アミンの含有量は、対照群と比べて18.91%低減し、S.jiangxiensis J3を添加して得た食酢中の生体アミンの含有量は、対照群と比べて27.61%低減した。S.jiangxiensis J3を添加して得たチーズ中の生体アミンの含有量は、対照群と比べて13.33%低減した。
(5)S.jiangxiensis J3の複合菌剤は、生体アミンを低減する効果を有し、当該S.jiangxiensis J3を黄酒の発酵に用いる場合、複合菌剤Mixを添加し発酵して得た黄酒中の生体アミンの含有量は15.57±0.44mg/Lであり、対照群と比べて41.79%低減した。
(6)S.jiangxiensis J3は、品質向上及び損害低減の効果を有し、当該S.jiangxiensis J3をタバコの発酵に用いる場合、S.jiangxiensis J3を添加し発酵して得たタバコ葉中の有害物質である、タール、HCN、フェノール、NH3、及び亜硝酸塩の含有量は、対照群と比べてそれぞれ32.65%、17.55%、17.69%、25.36%及び29.17%低減した。
(7)S.jiangxiensis J3は、栄養転化率を高める性能を有し、当該S.jiangxiensis J3を飼料の発酵に用いる場合、対照群と比べて、S.jiangxiensis J3を添加し発酵して得た飼料中の有機酸の含有量は、37.26%を向上し、アミノ酸の含有量は18.57%を向上し、粗タンパク質の含有量は23.41%を向上した。
Saccharopolyspora jiangxiensis J3は、分類としてSaccharopolyspora jiangxiensis J3と命名され、2020年4月30日にChina Center for Type Culture Collectionに寄託された。その保存所の住所は中国武漢市武漢大学であり、受託番号はCCTCC NO:M 2020104である。
Saccharopolyspora hirsuta J2は、分類としてSaccharopolyspora hirsuta J2と命名され、2020年4月30日にChina Center for Type Culture Collectionに寄託された。その保存所の住所は中国武漢市武漢大学であり、受託番号はCCTCC NO:M 2020103である。
アルコール度、アミノ酸態窒素及び総酸の測定は中国国家標準GB/T 13662-2018に従って測定した。風味物質における生体アミンの含有量は、高速液体クロマトグラフィー(HPLC)及びガスクロマトグラフ質量分析(GC-MS)を用いて測定した。還元糖の含有量の測定はDNS法を用いた。
(1)試料の採取及び前処理
麦麹の試料は浙江省紹興市にある黄酒工場から採集し、採集した麦麹を密閉した無菌ビニール袋に置いて4℃で保存した。麦麹を5g秤量して50mLの遠沈管に入れた。当該遠沈管に蒸留水を30mL添加し、30℃のシェーカーインキュベーターに入れて30分間インキュベートした。
放線菌のスクリーニング培地:硝酸カリウム 1.0g/L、リン酸二水素カリウム 0.5g/L、硫酸マグネシウム 0.5g/L、硫酸第一鉄 0.01g/L、塩化ナトリウム 0.5g/L、可溶性デンプン 20.0g/L、寒天 15.0g/L、pH7.2~7.4(25℃)。
無菌の操作環境下で、試料1mLを滅菌ピペットで吸引して15mLの滅菌遠沈管に入れ、10mLになるまで滅菌水を加えて十分に混合し、10―1の均質液試料を調製した。滅菌ピペットを用いて、10―1の均質液試料を1mL吸引して15mLの滅菌遠沈管に入れ、10mLになるまで滅菌水を加えて十分に混合し、10ー2の均質液試料を調製した。上記の操作により、10―1~10―6の十倍漸増シリーズとして麦麹、米漿水、発酵もろみの希釈均質液を作製した。
各希釈度にて、麦麹、発酵もろみ、米漿水の菌液100μLをそれぞれ吸い取って、放線菌のスクリーニング培地に塗布し、28℃で1~7日間培養した。コロニーの密度が適切なプレート上で、乳白色で、薄く、隆起又は凸面を有し、ややしわを呈する単一のコロニーを選別し、放線菌のスクリーニング培地に画線接種し、繰り返して画線することで純コロニーを特定し、スクリーニングした菌株を保存した。
スクリーニングされた菌株のゲノムを抽出し、これに対して16S rDNA増幅の配列決定を行った。
PCR増幅プライマー27F(5’―AGAGTTTGATCCTGGCTCAG―3’)及び1492R(5’―GGTTACCTTGTTACGACTT―3’
PCR増幅系(50μL):2×Taq PCR Master Mixを25μL、フォワードプライマー及びリバースプライマーをそれぞれ1μL、鋳型を1μL、滅菌水を22μL加え、50μLになるまで補足したもの。
PCR増幅プロセス:94℃で3分間予変性させ、95℃で30秒間変性させ、58℃で30秒間アニールし、72℃で2分間伸長させ、合計で35回サイクル行い、最後に72℃で8分間伸長させた。
PCR産物を、1%のアガロースを用いるゲル電気泳動により測定し、遺伝子配列決定業者に遺伝子配列の決定を依頼した。その16S rDNA結果は配列番号1で示されるとおりである。
菌株の活性化:保存されたS.jiangxiensis J3を10%の接種量で放線菌の液体培地に接種し、30℃のシェーカーインキュベーターで48時間培養し、一次種子液を得た。活性化された菌株を10%の接種量で放線菌の液体培地に接種し、150r/min、30℃という条件下、シェーカーインキュベーターで48時間培養した。
放線菌の液体培地:硝酸カリウム 1.0g/L、リン酸二水素カリウム 0.5g/L、硫酸マグネシウム 0.5g/L、硫酸第一鉄 0.01g/L、塩化ナトリウム 0.5g/L、可溶性デンプン 20.0g/L、pH7.2~7.4(25℃)。
PDA培地:ジャガイモ粉 6.0g/L、グルコース 20.0g/L、寒天 20.0g/L、pH5.4~5.8であり、121℃でオートクレーブにより15分間滅菌した上、固体培地を添加したものである。
MRS培地:ビーフペースト 10g/L、ペプトン 10g/L、酵母ペースト 0.5g/L、グルコース 20g/L、Tween80 0.10g/L、酢酸ナトリウム 5g/L、リン酸水素二カリウム 2g/L、クエン酸水素二アンモニウム 2g/L、硫酸マグネシウム 0.58g/L、硫酸マンガン 0.28g/L。
ステップ(1)小麦破砕:1粒につき3~5フレークとなり少量の粉末が生じる程度に、小麦粒の組織を破砕し、デンプンを露出させた。
ステップ(2)小麦湿潤:ステップ(1)で処理された材料に、30~45%の真水を加え、20分間~25分間撹拌して当該材料に充分にかつ均一に水分を吸収させた。
ステップ(3)スチーミング滅菌:ステップ(2)で処理された材料を121℃、30分間滅菌した。
ステップ(4)接種:ステップ(3)で得られた材料の温度を36℃に下げた後、活性化された菌種を、菌液濃度105~106CFU/mL、接種量4‰~20%にて接種した。
ステップ(5):麹を皿へ供給した後、適当な品温及び室温を維持して6時間静置培養し、その後、以下のステップa)~d)で処理した。
b)菌糸成長期:間欠的に3ー5回通風した後、菌糸が成長し始め、品温が35℃以上に上昇して麹が固結し始めた時、連続的に通風して品温を35℃程度に維持した。
c)菌糸繁殖期:接種してから12時間後、品温が速やかに上昇する場合、第一回の固結の状況に応じて麹を切り返し、切り返し前は、先ず測温プローブを上げ、切り返し機を起動した後は、麹を平らに広げ、測温プローブを下ろし、通風及び噴霧システムを起動した、
d)麹について1回目の切り返しを行った後、品温を36~37℃の間に保ち、スムーズな通風及び噴霧を保持し、約20時間後、目視で麹が再び固結して白くなったとき、温度を37℃以下に制御し、麹について2回目の切り返しを行い、その後、品温を35℃程度に制御した。
(1)本実施例で選択した伝統的な黄酒発酵の原料割合(発酵容積1リットル当たり)としては、蒸し米飯は、500gであり、真水は417mLであり、酒母は38gである。
ステップa)酵母の活性化培養:無菌操作台でグリセリン貯蔵管中の酵母菌をYPD培地に接種し、30℃、150r/minの条件下で24時間活性化培養を行った後、調製しておいた酒母に接種し、接種済の酵母を30℃、150r/minの条件下で18時間~24時間培養を行い、保管した。
ステップb)酒母の調製:蒸し米飯を600g取り、それに1600mLの真水、60gの生麦麹、800U/gの米飯用糖化酵素を加え、糖化温度を55~65℃、糖化時間を3~4時間に制御しながら糖化させ、糖化終了後、見かけ糖度が12°Bx以上になったとき、115℃で15分間滅菌し、その後、24~31℃に冷却した。熟成した酵母種子培養液を5%の接種量で接種し、30℃を超えない培養温度下で、18~24時間培養し、培養して熟成した後、酒母を得た。
ステップc)ステップ(1)に記載の伝統的な黄酒発酵の原料配合に従って供料及び発酵を行った。
サッカロポリスポラの黄酒発酵における作用をさらに検証するために、伝統的な麦麹と純粋種の麦麹との発酵過程における物理的・化学的指標(アルコール度、還元糖、滴定酸、アミノ酸態窒素)の変化を比較した(図2参照)。麦麹の発酵グループは、下記5グループに分けられ、それぞれ、A.flavus(黄酒発酵における常用菌)、A.oryzae(日本酒醸造における常用菌)、Mix(Saccharopolyspora jiangxiensis J3とSaccharopolyspora hirsuta J2とを混合した麦麹発酵グループ)、S.jiangxiensis J3グループ、及びL.plantarumグループである。これらの5種類の純粋種の麦麹は、本実施例のステップ(2)におけるステップa)~c)に係る伝統的な醸造方法を用いてそれぞれ醸造酵母とともに発酵させた。発酵終了までの間は、L.plantarumグループを除くその他の各グループに係る酒精度、酸性度、アミノ酸態窒素の含有量は、すべて黄酒の中国国家標準に達した。L.plantarumグループでは、滴定酸の含有量が17.50g/Lまで急速に増加し、試料は明らかな酸敗を呈した。
HPLC方法を用いて発酵黄酒中のアミノ酸含有量を分析した結果、Mix、A.flavus及びA.oryzaeの実験グループではアミノ酸含有量は大差がなかったが、対照グループ(TF Control)に比べる場合、いずれも顕著に高かった。S.jiangxiensis J3を添加した実験グループでは、総アミノ酸含有量は、対照グループとの差が低いものの、一部のアミノ酸含有量が対照グループを有意に上回った。
S.jiangxiensis J3及び複合菌剤(Mixグループ)の、生体アミンを低減する効果の分析は、以下の通りである。発酵して得られた黄酒について、HPLC方法を用いてその生体アミンの含有量を測定した結果、S.jiangxiensis J3を添加した試料グループでは、対照グループと比べて35.09%低減し、Saccharopolyspora hirsuta J3を添加した試料グループでは、対照グループと比べて21.71%低減し、S.jiangxiensis J3とSaccharopolyspora hirsuta J2とを添加した複合菌剤(Mixグループ)では、対照グループと比べて42.17%低減した。
主成分分析法を用いて純粋種の発酵試料と伝統的な発酵試料との風味成分の変化及び類似性を分析した。すべての試料のbiplot分析の結果、最初の2つの主成分の分散累積寄与率は83.6%であり、これはほとんどの発酵試料の風味の違いを解釈しうる結果であった。図3から、伝統的な発酵グループはMixグループとS.jiangxiensis J3グループと同じ区分に属し、麹菌(A.flavus及びA.oryzae)グループ及びL.plantarumグループと明らかに分離したことが分かった。これは、サッカロポリスポラがほとんどの風味物質の合成に関与し、黄酒発酵において主導的な役割を果たしていることを意味する。
実施例4に係る伝統的な黄酒の供料配合に従って、黄酒発酵を行った。Mixグループ及びS.jiangxiensis J3グループをそれぞれ実験グループとし、それらの麦麹の接種率をいずれも10%とした。ただし、それらの相違点としては、S.jiangxiensis J3グループでは、S.jiangxiensis J3グループの純粋種の麦麹を接種し、Mixグループでは、Saccharopolyspora jiangxiensis J3とSaccharopolyspora hirsuta J2との混合菌液を用いて実施例3の方法に従って調製された複合菌種の麦麹を接種した。実施例4に従って、黄酒の醸造プロセス及び指標測定方法を実施した。
表2から、発酵終了後の各グループのアルコール度は14%v/v程度に達し、すべての試料の還元糖、総酸、アミノ酸態窒素の含有量はいずれも4.52~5.03g/Lの範囲にあり、いずれも、黄酒に求められる物理的・化学的要件を満たしたことが分かった。有意性の解析によると、Mixグループ及びS.jiangxiensis J3グループのアルコール度、総酸の含有量、アミノ酸態窒素の含有量は、対照グループに比べ、いずれも有意の差が表れなかった(P>0.05)ことが示された。すなわち、S.jiangxiensis J3の接種は黄酒発酵過程における重要な物理的・化学的指標にほとんど影響せず、黄酒発酵過程に悪影響を与えないことを意味する。
発酵終了後、複合菌剤Mixグループ及びS.jiangxiensis J3グループを接種した試料の生体アミン含有量は、それぞれ15.57±0.44mg/L及び16.88±1.41mg/Lであり、いずれも対照グループ(26.75±2.39mg/L)より低かった。S.jiangxiensis J3グループは、対照グループと比べて36.90%低下した。これは、複合菌剤Mix及びS.jiangxiensis J3のいずれも、生体アミンの含有量を低減させる性能を有していることを意味する。
菌種の活性化は、実施例1に係る方法により行った。
(1)試料前処理:ケツギョの内臓を除去し、3kgの重量を量った。
(2)発酵液の調製:ケツギョと同質量の飲用水を100%とし、それに6%の塩、1%のネギ、0.6%のショウガ、0.1%のスターアニス、0.05%のアニス、0.05%のクミン、0.01%のトウガラシ、300000Uの中性プロテアーゼを加え、均一に混合して発酵液を得た。
(3)接種:発酵液を2部に分け、一部の発酵液に、活性化されたSaccharopolyspora.jiangxiensis J3菌種を10%の接種量で、菌液濃度107cfu/mLで接種したのに対し、もう一部は、接種しなかった。
(4)発酵:ステップ(3)の接種された後の発酵液にケツギョを浸し、最上層を石で押し固め、20℃で6日間発酵させ、臭いケツギョを得た。
ミンチにした魚肉試料を5.0g秤量して50mL遠沈管に入れ、20mLの5%トリクロロ酢酸を加えて超音波処理を30分間行った後、50mLの栓付けの遠沈管に移し、6,000r/minで10分間遠心分離し、その上澄み液は50mLのメスフラスコに移し、その残渣は20mLの上記溶液を用いてさらに1回抽出した。上澄み液を混合し目盛りまで希釈した後、上澄み液を正確に1mL秤量し、それを15mLの遠沈管に入れ、NaHCO3の飽和溶液を1mL加えて均一に混合した。塩化ダンシル(5mg/mLアセトン)試薬を2mL加えて均一に混合した後、65℃の恒温水浴鍋に置いて暗いところで30分間誘導体化させ、室温下で静置した。その後、0.5mLの塩化ナトリウムの飽和溶液を加えて均一に混合した後、エチルエーテルを5mL加え、ボルテックスで20秒間振とうし、静置して分層した。その後、上層の有機相は15mLの遠沈管に移し、下層の水相はもう1回抽出した。2回分の抽出液を混合し、50℃の水浴下、窒素で吹き乾かした。
実施例1に係る方法により生体アミン含有量を測定した。
実施例4に係る醸造方法に従って純粋種の発酵黄酒を得、それを酢酸の発酵原料とした。実施例1に係る方法により生体アミン含有量を測定した。
白酒醸造に用いるサッカロポリスポラの純粋種の麦麹を、実施例3に係る麦麹の調製方法に従って調製した。実施例1に係る方法により生体アミン含有量を測定した。
実施例1に係る方法により、菌種の活性化及び生体アミン含有量の測定を行った。醤油は、高塩希釈状態発酵法により醸造した。
(2)菌液濃度が105~106cfu/mLのS.jiangxiensis J3の種子液を5‰~10%の割合で添加し、次いで、材料の質量の約1.5~2倍の塩水を添加したことにより、醤油もろみの最終塩分含有量が約18%、水分含有量が65%となるように均一に混合した。
(3)醤油もろみの発酵:発酵の開始温度を14~16℃に制御し、発酵の進行に伴って徐々に温度を約35℃に上昇させた。発酵は約5ヶ月間継続した。
(4)発酵終了後、醤油もろみをプレート&フレーム式フィルタープレスによりプレスして、醤油もろみを除去した。プレス終了後、珪藻土濾過及び膜濾過を行い、沈殿を除去した。濾過して清澄化された醤油を低温殺菌した後、充填した。
S.jiangxiensis J3を添加した醤油製品における生体アミン含有量は、対照グループより低減した。
放線菌の液体培地:硝酸カリウム 1.0g/L、リン酸二水素カリウム 0.5g/L、硫酸マグネシウム 0.5g/L、硫酸第一鉄 0.01g/L、塩化ナトリウム 0.5g/L、可溶性デンプン 20.0g/L、pH7.2~7.4(25℃で測定)。
実施例1に係る方法により、菌種の活性化及び生体アミン含有量の測定を行った。新鮮な生乳に対して均質化処理及び低温殺菌処理を行った後、当該生乳を室温に冷却した。その後、菌体数量の比が1:1である、ブルガリア乳酸菌と植物性乳酸菌との混合菌液(菌液濃度が1×108~109cfu/mLである)を0.1mL/Lで添加し、均一に撹拌し、32~35℃で30分間酸性化した。その後、0.05g/Lの凝乳酵素を添加し、均一に混合して凝乳を形成した後、切断を行い、乳清を排出し、チーズ凝塊を得た。チーズ凝塊の表面に105~106cfu/mLのS.jiangxiensis J3をスプレーし、30~37℃で3~5日間培養し、それを生長させて熟成させ、3.0g/Lの食塩を添加した後、プレス成形を行ってチーズ製品を得た。
実施例1に係る方法により、菌種の活性化を行った。活性化された菌液を4℃、10,000gで15分間遠心分離し、収集した菌体を無菌水で105~106cfu/mLのS.jiangxiensis J3菌液に調製し、菌液をタバコ葉の表面に均一にスプレーして十分に混合した。また、同量の無菌水で処理したものを対照とした。30~37℃、湿度70~80%の恒温恒湿槽に置いて15日間発酵・培養し、毎日換気を行った。培養終了後、タバコ葉を水分15%未満になるまで乾燥させた。
実施例1に係る方法により、菌種の活性化を行った。米ぬか、ストロー及び豆粕を(1~5):(1~5):2の割合で均一に混合し、粉砕して発酵物を調製した。原料と水との割合が1:0.5~0.9となるように水を加え、菌液濃度が105~106cfu/mLであるS.jiangxiensis J3を10‰~10%の割合で接種し、均一に撹拌し、発酵温度30~40℃、発酵時間4~9日間で自然発酵を行った。発酵終了後、水分含有量が15%未満になるまで乾燥させ、生物発酵飼料を得た。
Claims (14)
- 受託番号がCCTCC NO:M 2020104であり、2020年4月30日にChina Center for Type Culture Collectionに寄託された、Saccharopolyspora.jiangxiensis J3株。
- 請求項1に記載のSaccharopolyspora.jiangxiensis J3を含む、微生物製剤。
- 前記Saccharopolyspora.jiangxiensis J3の生細胞、凍結乾燥により得られた乾燥菌体、固定化された細胞、液体の菌剤若しくは固体の菌剤、又は、他の任意の形態で存在している菌株を含むことを特徴とする、請求項2に記載の微生物製剤。
- 前記Saccharopolyspora.jiangxiensis J3の数量は、発酵剤1グラムあたり又は1ミリリットルあたり、1×106CFU以上であることを特徴とする、請求項2又は3に記載の微生物製剤。
- 請求項1に記載のSaccharopolyspora.jiangxiensis J3又は請求項2~4のいずれか一項に記載の微生物製剤を用いて調製される、純粋種の麦麹。
- 小麦破砕処理及び湿潤処理を経った小麦をスチーミングした後、請求項1に記載のSaccharopolyspora.jiangxiensis J3又は請求項2~3のいずれか一項に記載の微生物製剤を接種して発酵させて純粋種の麦麹を得る調製方法により、調製されることを特徴とする、請求項5に記載の麦麹。
- 前記純粋種の麦麹の調製方法は、
ステップ(1):小麦粒の組織を破砕し、そのデンプンを露出させる小麦破砕処理と、
ステップ(2):ステップ(1)で処理した材料に、当該材料の質量の30~45%の真水を加え、15分間~25分間撹拌する小麦湿潤処理と、
ステップ(3):ステップ(2)で処理した材料をスチーミングして、滅菌するスチーミング滅菌処理と、
ステップ(4):ステップ(3)で得られた材料を40℃未満の温度に下げた後、活性化された菌種を105~107CFU/mLの接種量で接種する接種処理と、
ステップ(5):発酵処理と、
を含むことを特徴とする、請求項5に記載の麦麹。 - 請求項1に記載の菌株、請求項2~4のいずれか一項に記載の微生物製剤、又は請求項5~7のいずれか一項に記載の純粋種の麦麹の、発酵食品、飲料、調味料、タバコ又は飼料を調製するための使用。
- 前記発酵食品は、発酵魚、発酵乳製品を含むことを特徴とする、請求項8に記載の使用。
- 前記調味料は、食酢、料理酒、又は醤油を含むことを特徴とする、請求項8に記載の使用。
- 前記飲料は、アルコール飲料を含むことを特徴とする、請求項8に記載の使用。
- 請求項1に記載のSaccharopolyspora.jiangxiensis J3の、発酵食品中の生体アミン含有量を低減させるための使用。
- 生体アミンを含む環境に、前記Saccharopolyspora.jiangxiensis J3を添加することを特徴とする、請求項12に記載の使用。
- 前記生体アミンは、チラミン、ヒスタミン、プトレシン又はカダベリンを含むことを特徴とする、請求項12に記載の使用。
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