CN107056863A - 一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 - Google Patents
一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN107056863A CN107056863A CN201710369428.7A CN201710369428A CN107056863A CN 107056863 A CN107056863 A CN 107056863A CN 201710369428 A CN201710369428 A CN 201710369428A CN 107056863 A CN107056863 A CN 107056863A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- tiny rna
- liquid
- minutes
- polysaccharide polyphenol
- solution
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/02—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with ribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H1/00—Processes for the preparation of sugar derivatives
- C07H1/06—Separation; Purification
- C07H1/08—Separation; Purification from natural products
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Plant Substances (AREA)
- Saccharide Compounds (AREA)
Abstract
本发明涉及一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括制备提取基材，制备提取液，一次离心作业，二次离心作业及提纯等五个步骤。本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可极大的提高多糖多酚小RNA提取做的工作效率和纯度，降低提取作业的工作成本及提取作业中污染性原料的使用量，另一方面本发明实施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小RNA提取作业的规范性和标准型，便于多糖多酚小RNA提取作业技术的交流和经验积累。
Description
技术领域
本发明涉及一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，属植物提取技术领域。
背景技术
从植物中提取多糖多酚小RNA，是当前开展植物研究工作的重要前提，当前在进行植物多糖多酚小RNA提取作业时，主要是通过大量使用裂解液、沉淀剂等方式实现对植物中小RNA提取作业的需要，虽然这种方式可有效的获得植物相关多糖多酚小RNA提取物，但在实际工作中法，当前的提取方法获得植物小RNA往往均不能有小的对植物所含的多糖多酚进行有效的清理，从而导致提取得到的植物小RNA中含有大量的杂质，从而导致后续小RNA检测工作难度大，严重影响了检测工作的工作效率和精度，除此之外，由于当前传统的植物小RNA提取中，主要依靠大量使用裂解液等原料进行，因此也不同程度导致了提取作业的操作工序存在较大的差异，提取作业过程中易产生大量的化学污染物，因此针对这一问题，迫切需要开发一种全新的植物小RNA提取方式，以满足实际使用的需要。
发明内容
本发明目的就在于克服上述不足，提供一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法
为实现上述目的，本发明是通过以下技术方案来实现：
一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括以下步骤：
第一步，制备提取基材，首先选取生长旺盛且无病虫害的植物组织，将截取的植物组织通过液氮进行冻干，并在-80℃—-40℃环境中进行保存从而获得成品提取基材；
第二步，制备提取液，将第一步制备的提取基材置于液氮预冷的研磨设备中进行研磨作业，制备得到80—200目的粉末状植物组织，然后将粉末状植物组织添加到CTAB裂解液中并混合均匀，然后将混合物在20℃—40℃环境中静置3—10分钟，且静置后的混合物温度为0℃—10℃；其中研磨作业时，研磨温度不高于-40℃；
第三步，一次离心作业，将第二步制备的混合物防治到离心机上，在0℃—10℃恒定温度下，以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将离心得到的液体通过真空负压分离设备进行固液分离，然后在分离后的液体中加入Trizol试剂并搅拌均匀后静置1—5分钟，然后在分离后的液体中加入浓度为15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并搅拌均匀，然后静置10—30分钟；
第四步，二次离心作业，将第三步制备的过滤液在0℃—10℃恒定环境下添加到离心机中，并向过滤液中添加入异丙醇，然后由离心机对混合物以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将混合液在-40℃—0℃环境中静置1—3小时，然后将混合液温度自然升温至0℃—4℃后，以离心机在10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后静置5—10分钟，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物备用；
第五步，提纯，向第四步中制备得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，对沉淀物进行清洗，然后将清洗后的沉淀物自然阴干，然后由有机溶剂对干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。
进一步的，所述的第二步中，CTAB裂解液的浓度为2％，CTAB裂解液的使用量与粉末状植物组织量的比为1：1—5。
进一步的，所述的Trizol试剂的浓度为2％—20％，且分离后的液体量与Trizol试剂使用量的比为1：1.5—5。
进一步的，所述的15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比为1：1—1.5，15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的总量与分离后的液体量比为1：2—10。
进一步的，所述的第四步中，异丙醇使用量为过滤液总量的1/10—1/3。
本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可极大的提高多糖多酚小RNA提取做的的工作效率和纯度，降低提取作业的工作成本及提取作业中污染性原料的使用量，另一方面本发明实施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小RNA提取作业的规范性和标准型，便于多糖多酚小RNA提取作业技术的交流和经验积累。
附图说明
图1为本发明流程示意图；
具体实施方式
实施例1
如图1所示，一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括以下步骤：
第一步，制备提取基材，首先选取生长旺盛且无虫害的植物组织，将截取的植物组织通过液氮进行冻干，并在-40℃环境中进行保存从而获得成品提取基材；
第二步，制备提取液，将第一步制备的提取基材置于液氮预冷的研磨设备中进行研磨作业，制备得到100目的粉末状植物组织，然后将粉末状植物组织添加到CTAB裂解液中并混合均匀，然后将混合物在35℃环境中静置5分钟，且静置后的混合物温度为5℃；其中研磨作业时，研磨温度为-40℃；
第三步，一次离心作业，将第二步制备的混合物防治到离心机上，在0℃恒定温度下，以10000转/分钟的转速离心操作8分钟，然后将离心得到的液体通过真空负压分离设备进行固液分离，然后在分离后的液体中加入Trizol试剂并搅拌均匀后静置3分钟，然后在分离后的液体中加入浓度为15％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并搅拌均匀，然后静置20分钟；
第四步，二次离心作业，将第三步制备的过滤液在0℃恒定环境下添加到离心机中，并向过滤液中添加入异丙醇，然后由离心机对混合物以10000转/分钟的转速离心操作5分钟，然后将混合液在0℃环境中静置1—3小时，然后将混合液温度自然升温至4℃后，以离心机在22000转/分钟的转速离心操作5分钟，然后静置10分钟，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物备用；
第五步，提纯，向第四步中制备得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，对沉淀物进行清洗，然后将清洗后的沉淀物自然阴干，然后由有机溶剂对干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。
本实施例中，所述的第二步中，CTAB裂解液的浓度为2％，CTAB裂解液的使用量与粉末状植物组织量的比为1：2。
本实施例中，所述的Trizol试剂的浓度为2％，且分离后的液体量与Trizol试剂使用量的比为1：1.5。
本实施例中，所述的15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比为1：1.5，15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的总量与分离后的液体量比为1：2。
本实施例中，所述的第四步中，异丙醇使用量为过滤液总量的1/10。
实施例2
如图1所示，一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，包括以下步骤：
第一步，制备提取基材，首先选取生长旺盛且无虫害的植物组织，将截取的植物组织通过液氮进行冻干，并在-80℃环境中进行保存从而获得成品提取基材；
第二步，制备提取液，将第一步制备的提取基材置于液氮预冷的研磨设备中进行研磨作业，制备得到200目的粉末状植物组织，然后将粉末状植物组织添加到CTAB裂解液中并混合均匀，然后将混合物在40℃环境中静置3分钟，且静置后的混合物温度为10℃；其中研磨作业时，研磨温度为-50℃；
第三步，一次离心作业，将第二步制备的混合物防治到离心机上，在℃恒定温度下，以15000转/分钟的转速离心操作7分钟，然后将离心得到的液体通过真空负压分离设备进行固液分离，然后在分离后的液体中加入Trizol试剂并搅拌均匀后静置3分钟，然后在分离后的液体中加入浓度为15％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并搅拌均匀，然后静置15分钟；
第四步，二次离心作业，将第三步制备的过滤液在5℃恒定环境下添加到离心机中，并向过滤液中添加入异丙醇，然后由离心机对混合物以20000转/分钟的转速离心操作6分钟，然后将混合液在-5℃环境中静置3小时，然后将混合液温度自然升温至4℃后，以离心机在20000转/分钟的转速离心操作5分钟，然后静置6分钟，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物备用；
第五步，提纯，向第四步中制备得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，对沉淀物进行清洗，然后将清洗后的沉淀物自然阴干，然后由有机溶剂对干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。
本实施例中，所述的第二步中，CTAB裂解液的浓度为2％，CTAB裂解液的使用量与粉末状植物组织量的比为1：3。
本实施例中，所述的Trizol试剂的浓度为8％，且分离后的液体量与Trizol试剂使用量的比为1：1.5。
本实施例中，所述的17％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比为1：1.2，15％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的总量与分离后的液体量比为1：7。
本实施例中，所述的第四步中，异丙醇使用量为过滤液总量的1/5。
本发明工艺简单，操作简便且操作效率高，一方面可极大的提高多糖多酚小RNA提取做的的工作效率和纯度，降低提取作业的工作成本及提取作业中污染性原料的使用量，另一方面本发明实施方法便于掌握，操作控制精度高，可有效的提高多糖多酚小RNA提取作业的规范性和标准型，便于多糖多酚小RNA提取作业技术的交流和经验积累。
以上显示和描述了本发明的基本原理和主要特征和本发明的优点。本行业的技术人员应该了解，本发明不受上述实施例的限制，上述实施例和说明书中描述的只是说明本发明的原理，在不脱离本发明精神和范围的前提下，本发明还会有各种变化和改进，这些变化和改进都落入要求保护的本发明范围内。本发明要求保护范围由所附的权利要求书及其等效物界定。
Claims (5)
1.一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的高效植物多糖多酚小RNA提取方法包括以下步骤：
第一步，制备提取基材，首先选取生长旺盛且无病虫害的植物组织，将截取的植物组织通过液氮进行冻干，并在-80℃—-40℃环境中进行保存从而获得成品提取基材；
第二步，制备提取液，将第一步制备的提取基材置于液氮预冷的研磨设备中进行研磨作业，制备得到80—200目的粉末状植物组织，然后将粉末状植物组织添加到CTAB裂解液中并混合均匀，然后将混合物在20℃—40℃环境中静置3—10分钟，且静置后的混合物温度为0℃—10℃；其中研磨作业时，研磨温度不高于-40℃；
第三步，一次离心作业，将第二步制备的混合物防治到离心机上，在0℃—10℃恒定温度下，以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将离心得到的液体通过真空负压分离设备进行固液分离，然后在分离后的液体中加入Trizol试剂并搅拌均匀后静置1—5分钟，然后在分离后的液体中加入浓度为15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液并搅拌均匀，然后静置10—30分钟；
第四步，二次离心作业，将第三步制备的过滤液在0℃—10℃恒定环境下添加到离心机中，并向过滤液中添加入异丙醇，然后由离心机对混合物以10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后将混合液在-40℃—0℃环境中静置1—3小时，然后将混合液温度自然升温至0℃—4℃后，以离心机在10000—22000转/分钟的转速离心操作5—10分钟，然后静置5—10分钟，然后清理混合液中的上清液，收集沉淀物备用；
第五步，提纯，向第四步中制备得到的沉淀物中加入75％乙醇溶液，对沉淀物进行清洗，然后将清洗后的沉淀物自然阴干，然后由有机溶剂对干燥后的沉淀物溶解，即可得到成品小RNA。
2.根据权利要求1所述的一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的第二步中，CTAB裂解液的浓度为2％，CTAB裂解液的使用量与粉末状植物组织量的比为1：1—5。
3.根据权利要求1所述的一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的Trizol试剂的浓度为2％—20％，且分离后的液体量与Trizol试剂使用量的比为1：1.5—5。
4.根据权利要求1所述的一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的使用比为1：1—1.5，15％—25％的PEG8000溶液和1MNaCl溶液的总量与分离后的液体量比为1：2—10。
5.根据权利要求1所述的一种高效植物多糖多酚小RNA提取方法，其特征在于：所述的第四步中，异丙醇使用量为过滤液总量的1/10—1/3。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710369428.7A CN107056863A (zh) | 2017-05-23 | 2017-05-23 | 一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN201710369428.7A CN107056863A (zh) | 2017-05-23 | 2017-05-23 | 一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN107056863A true CN107056863A (zh) | 2017-08-18 |
Family
ID=59610451
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN201710369428.7A Pending CN107056863A (zh) | 2017-05-23 | 2017-05-23 | 一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN107056863A (zh) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110033825A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-19 | 扬州大学 | 一种箭筈豌豆种质资源筛选方法 |
Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103740698A (zh) * | 2013-11-06 | 2014-04-23 | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 | 一种热带植物多糖多酚小rna提取方法 |
| CN105176973A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-23 | 镇江瑞繁农艺有限公司 | 一种甘蓝叶片小rna的提取方法 |
-
2017
- 2017-05-23 CN CN201710369428.7A patent/CN107056863A/zh active Pending
Patent Citations (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN103740698A (zh) * | 2013-11-06 | 2014-04-23 | 中国热带农业科学院环境与植物保护研究所 | 一种热带植物多糖多酚小rna提取方法 |
| CN105176973A (zh) * | 2015-08-31 | 2015-12-23 | 镇江瑞繁农艺有限公司 | 一种甘蓝叶片小rna的提取方法 |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN110033825A (zh) * | 2019-04-26 | 2019-07-19 | 扬州大学 | 一种箭筈豌豆种质资源筛选方法 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN101755850A (zh) | 瑞香狼毒植物性双黄酮类农用抑菌剂及其制备方法 | |
| CN101973984B (zh) | 一种提取竹叶总黄酮的方法 | |
| CN104673497B (zh) | 一种植物精油、多糖和黄酮的提取工艺 | |
| CN103265520B (zh) | 一种用酿酒后葡萄籽制备低聚原花青素和单宁色素的方法 | |
| CN109232346A (zh) | 一种叶黄素和万寿菊黄酮的工业化制备方法 | |
| CN102357066B (zh) | 一种黄柏提取液及其制备方法 | |
| CN110840806B (zh) | 一种袋鼠爪提取物及其制备方法和应用 | |
| CN103215251B (zh) | 一种分离叶绿体dna的方法 | |
| CN109700789A (zh) | 一种大麻二酚提取物的用途 | |
| CN101829501A (zh) | 用于中药提取分离和浓缩的联合膜过滤方法 | |
| CN103976453A (zh) | 滁菊提取物、固体饮料、含片和食品添加剂及其制备方法 | |
| CN102172364B (zh) | 一种超声辅助提取豌豆中总黄酮的方法 | |
| CN104974068B (zh) | 一种阿霍烯的制备方法 | |
| CN107056863A (zh) | 一种高效植物多糖多酚小rna提取方法 | |
| CN103766913B (zh) | 一种从牡丹籽中提取总芪类化合物的方法 | |
| CN105175476A (zh) | 一种从油茶饼粕中提取茶皂素的方法 | |
| CN102604540B (zh) | 一种系列栲胶原料超微细粉碎制备及其用于系列栲胶产品组合、耦合化制备工艺与方法 | |
| CN104726197B (zh) | 利用闪式提取技术从香料烟废弃烟籽中提取烟籽油的方法 | |
| CN102180985B (zh) | 艾蒿多糖提取及纯化方法 | |
| CN108948124A (zh) | 一种茶皂素的制备方法 | |
| CN104370992B (zh) | 一种从女贞子中提取熊果酸和齐墩果酸混合物的方法 | |
| CN103901143B (zh) | 一种用于少量生物血清中四溴双酚a分析的前处理方法 | |
| CN102060858B (zh) | 一种从红三叶加工废水中同时提取叶绿素和蛋白质的方法 | |
| CN107759467A (zh) | 一种提高迷迭香脂溶性抗氧化剂中鼠尾草酸含量的制备方法 | |
| CN105001284B (zh) | 一种紫小麦麦麸花色苷提取方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication | ||
| RJ01 | Rejection of invention patent application after publication |
Application publication date: 20170818 |