CN101755850A - 瑞香狼毒植物性双黄酮类农用抑菌剂及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明涉及一种适用于防治植物病原真菌的植物源农用抑菌剂及其制备方法和用途,它由瑞香狼毒Stellera chamae jasme L采用化学提取的方法,经大孔吸附树脂RP-8用30%乙醇洗脱的植物双黄酮等有效成分,加入表面活性剂、乳化剂、渗透剂、增效剂等制成,具有高效、低毒、低残留、与环境和协的特点。
Description
技术领域
本发明涉及一种农药及其制备方法,特别是涉及一种农用抑菌剂及其制备方法。
背景技术
瑞香狼毒作为植物源农药的研究与利用多集中在杀虫方面,在杀菌方面的研究相对较少,实际上瑞香狼毒自古以来在中医学上一直是一种优秀的抗菌药物,体外抗菌试验证明:瑞香狼毒对大肠秆菌、宋内氏痢疾杆菌、变形杆菌、伤寒杆菌、副伤寒杆菌、氯浓杆菌及霍乱孤菌有完全抑制作用;对志贺氏痢疾杆菌、金葡萄及链球菌有抑制作用;对真菌Ustilago hordei、羊瑞香狼毒抑菌活性成分的研究毛状小芽孢癣菌、堇色毛癣菌、同心性毛癣菌、许兰氏黄癣菌、奥杜盎氏小芽孢癣菌、铁锈色小芽孢癣菌、腹股沟表皮癣菌、红色表皮癣菌、星形奴卡氏菌等皮肤真菌有不同程度的抑制作用。对人型结核杆菌在高浓度时有明显的抗菌作用。其成分伞形花内酯对细菌、真菌和酵母均有活性,65ppm时对大肠杆菌和枯草杆菌有完全抑制作用,对白色粘球菌、须发癣菌和红发癣菌有抑制作用。近年来对瑞香狼毒化学成分的研究主要集中在黄酮类、香豆素类、二萜类及木脂素类。黄酮类特别是异黄酮化合物具有很强的抗菌作用,但是对瑞香狼毒双黄酮类化合物对植物病原真菌活性的研究还不多,特别是对瑞香狼毒双黄酮类化合物提取方法的改进也不多。为此,我们以6种有代表性的植物病原真菌作为供试菌种,研制瑞香狼毒植物性双黄酮类农用抑菌剂,并建立了其制备方法。
发明内容
本发明采用化学提取的方法,利用大孔吸附树脂从瑞香狼毒中提取对植物病原真菌有广谱抑制作用的瑞香狼毒总双黄酮,并研制植物源农用抑菌剂。
本发明瑞香狼毒总双黄酮的获取制备工艺如下:
采用多功能提取罐,植物瑞香狼毒粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2-5,优选1∶3-4,反复渗漉提取2-10次,或连续回流提取4-10小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。
将本发明瑞香狼毒乙醇提取物用水混悬后,置于分液漏斗中,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯等溶媒以体积比1∶1的比例对水混悬液采用液-液分配法萃取,乙酸乙酯萃取物经过减压浓缩后,再用水混悬,将水混悬物上大孔树脂RP-8,分别用10%、30%、50%、70%、95%的乙醇为洗脱剂进行洗脱,最终收集30%乙醇洗脱部分,通过高效液相色谱仪分离得到其主要成分,核磁分析结果显示为双黄酮类化合物,因此,确定大孔树脂30%乙醇洗脱组分主要为双黄酮类化合物。
抑菌剂的制备方法:将瑞香狼毒30%乙醇洗脱组分用丙酮溶解,可按下列顺序和比例在其中加入促进提取物或萃取物溶解或悬浮的增溶剂、乳化剂和/或助悬剂、增效剂、渗透剂等辅料制成抑菌剂。
表1、瑞香狼毒总双黄酮抑菌剂配制方法:
提取物: 3~40重量份
溶剂: 30~90重量份
增溶剂: 1~25重量份
乳化剂或助悬剂:2~30重量份
增效剂: 0.5~25重量份
渗透剂: 0.5~20重量份
所述瑞香狼毒提取物配制方法中用的有机溶剂除丙酮外还可以非限定性地选自乙酸乙酯、甲醇、乙醇等中的一种。
抑菌剂的配制方法中,溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮、环己酮、甲苯、二甲苯、石油醚、石油芳烃、纯苯中的一种;增溶剂是十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钾、吐温(聚山梨酯)、聚乙二醇、山梨醇聚氧乙醚、木质素磺酸盐、茶枯、搭皂角中的任何一种;增效剂是茶皂素、2-C1C6H4-N=OCH3SCH3、亚甲基二氧苯衍生物、6-乙烯基癸醛、八氯二丙醚中的任何一种;乳化剂是C15~17H31~37COONa、硬脂酸钠、十二烷基硫酸钠、N-十二烷基二甲胺、聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、对辛基苯酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯基醚、脂肪酸聚氧乙烯基酯、烷基芳基磺酸盐中的任何一种;渗透剂是苄基苯酚聚氧乙烯醚、氮酮、三苯磷中的任何一种.
瑞香狼毒30%乙醇洗脱部分植物双黄酮优选为:
提取物: 15重量份
30%乙醇: 70重量份
聚山梨酯: 1重量份
茶皂素: 2重量份
十二烷基硫酸钠:0.5重量份
氮酮: 0.5重量份
本发明提供了一种高效、低毒、低残留、与环境及与其它生物和协的新型的生物源农用植物病原真菌抑菌剂,它对环境保护与解决植物真菌病害的抗药性都具有深远意义。与化学制备的农药相比,本发明具有以下的特点和优点:
1.由于瑞香狼毒为自然界中的植物,因此其提取物在自然条件下易于分解,对环境和周围的生态系统安全,没有环境污染问题。2.瑞香狼毒抑菌剂是一种多成分的双黄酮混合物,对植物病原真菌可能有多个作用位点,因此不易产生抗药性。3.实验证明,瑞香狼毒双黄酮抑菌剂有显著的抑制真菌的效果,具有化学农药高效的特点。4.瑞香狼毒中大孔树脂富集植物双黄酮的方法简单易行,十分有利于进行大规模工业化生产。
下面实验例或实施例用于进一步说明但不限于本发明。
实验例1药效学研究资料
将本发明获得的瑞香狼毒双黄酮组分,参照文献的生物测定方法---生长速率法进行抑菌活性测定。具体方法如下,将配制好的供试药液加入到热的培养基(40℃)里面,配制成终浓度为2mg/mL的溶液,混匀后倒入培养皿里面,制成带毒培养基。以加入相同量的对照溶剂为对照平板。然后,在培养在PDA平板上的菌落边缘,用内径为0.4cm的打孔器打若干个菌饼。将打好的菌饼,用接种针移植到带毒平板中央(长有菌丝的一面与带毒培养基接触),重复3~4次。培养到对照菌落直径为培养皿直径的2/3或者3/4时,采用十字交叉法测量对照和处理平板的菌落直径。按下列公式计算菌落纯生长量:纯生长量=菌落直径-菌饼直径。求各重复的平均值作为其菌落平均直径。按下列公式计算药物的抑制百分率:抑制率(%)=(对照菌落平均纯生长量-处理菌落平均纯生长量)/对照菌落平均纯生长量×100。
表2、瑞香狼毒双黄酮类提取物对6种病原真菌抑制效果
实验例2瑞香狼毒双黄酮类提取物抑菌剂对草莓灰霉病菌的半数抑制浓度(EC50)的计算,配制成最终浓度为0.125,0.25,0.5,1,2mg/mL的带毒培养基,以加入相同量的对照溶剂为对照平板。如实验例1所述,将草莓灰霉病菌饼移植到带毒平板中央,计算各个处理浓度的抑制率。随后,将各个处理浓度的抑制率转换成机率值Y,求出浓度的对数X,做回归分析,求出毒力方程和EC50。
表3、瑞香狼毒双黄酮类提取物对草莓灰霉病菌的抑制效果
本发明下面实施例均能实现上述效果。
具体实施方式
实施例1:
将瑞香狼毒洗净,于通风处阴干,或于20-45℃下烘干,磨碎后过40-60目筛。将粉碎后的植物粉末放入多功能提取罐中,用植物粉末5倍体积的石油醚(40-90℃)或氯仿进行提取,收集氯仿或石油醚提取物,获得瑞香狼毒提取物16.9%抑菌剂乳油。
实施例2:
将瑞香狼毒洗净,于通风处阴干,或于45℃下烘干,磨碎后过60目筛。将粉碎后的植物粉术放入多功能提取罐中,用4倍体积的氯仿进行提取,获得瑞香狼毒萃取物。
实施例3:
采用多功能提取罐,瑞香狼毒的粉术与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2,1∶3或1∶4,温浸或冷浸8、10、12、18或24小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。
实施例4:
瑞香狼毒粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2,1∶3或1∶4,反复渗漉提取4、6、8或10次,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。或连续回流提取4、6、8或10小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。
实施例5:
将实施例3瑞香狼毒提取物用甲醇溶解后,置于密闭的萃取罐中,用石油醚或氯仿溶媒以体积比0.7∶1.6的比例与甲醇采用液-液分配法萃取,以溶剂极性从小到大为溶媒的萃取顺序,最终收集氯仿或石油醚萃取相并减压浓缩至油膏状(相对密度0.96g/cm3),得瑞香狼毒萃取物。
实施例6:
将实施例4瑞香狼毒提取物用甲醇溶解后,置于密闭的萃取罐中,用氯仿或石油醚溶媒以体积比0.7∶1.6的比例与甲醇采用液-液分配法萃取,使用柱层析方法,以溶剂极性从小到大为溶媒的萃取顺序,连续反复层析、分离、纯化,最终收集氯仿或石油醚萃取相并减压浓缩至油膏状(相对密度0.9g/cm3),得瑞香狼毒萃取物。
实施例7:
实施例3组分按下列比例制备抑菌剂
组分: 35kg
丙酮: 30kg
聚乙二醇: 20kg
6-乙烯基癸醛: 10kg
对辛基苯酚聚氧乙烯醚: 18kg
苄基苯酚聚氧乙烯醚: 5kg
实施例8:
实施例4组分按下列比例制备抑菌剂
组分: 8kg
环己酮: 80kg
十二烷基苯磺酸钠: 4kg
茶皂素: 25kg
N-十二烷基二甲胺: 2kg
三苯磷: 15kg
实施例9:
实施例5组分按下列比例制备抑菌剂
组分: 20kg
石油醚: 35kg
十二烷基苯磺酸钾: 22kg
八氯二丙醚: 4kg
聚氧丙烯醚: 20kg
氮酮: 1kg
实施例10:
实施例6组分按下列比例制备抑菌剂
组分: 5kg
甲苯: 79kg
山梨醇聚氧乙醚: 5kg
硬脂酸钠: 20kg
氮酮: 3kg
亚甲基二氧苯: 23kg。
Claims (16)
1.一种植物瑞香狼毒有效部位,其特征在于该瑞香狼毒提取物是由如下方法之一制成:
A采用多功能提取罐,植物瑞香狼毒的粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2-5,温浸或冷浸4-24小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物;
B采用多功能提取罐,植物瑞香狼毒粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2-5,反复渗漉提取2-10次,或连续回流提取4-10小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。
2.如权利要求1所述的瑞香狼毒有效部位,其特征在于制成该瑞香狼毒提取物的方法中,瑞香狼毒粉末与乙醇的体积比为1∶3或1∶4。
3.如权利要求1或2所述的瑞香狼毒有效部位,其特征在于该瑞香狼毒提取物由以下方法制成瑞香狼毒萃取物:将瑞香狼毒提取物用甲醇溶解后,置于密闭的萃取罐中,用氯仿或石油醚溶媒以体积比0.7∶1.6的比例与甲醇采用液-液分配法萃取,以溶剂极性从小到大为溶媒的萃取顺序,最终收集氯仿或石油醚萃取相。
4.如权利要求1或2所述的瑞香狼毒有效部位,其特征在于该瑞香狼毒提取物由以下方法制成瑞香狼毒总双黄酮组分:将瑞香狼毒萃取物用水混悬,将水混悬物上大孔树脂RP-8,分别用10%、30%、50%、70%、95%的乙醇为洗脱剂进行洗脱,最终收集30%乙醇洗脱部分并减压浓缩至相对密度0.8-1g/cm3油膏状的瑞香狼毒总双黄酮提取物。
5.如权利要求1或2所述的植物瑞香狼毒有效部位制成抑菌剂的制备方法,其特征在于该方法为:将瑞香狼毒总双黄酮提取物用氯仿、环己烷、苯、二甲苯或乙醇溶解,可以在其中加入增溶剂、增效剂、乳化剂和/或助悬剂、渗透剂辅料,按下列比例与顺序制成提取物抑菌剂;
提取物: 5~40重量份
溶剂: 30~90重量份
增溶剂: 1~25重量份
乳化剂或助悬剂: 2~30重量份
增效剂: 0.5~25重量份
渗透剂: 0.5~20重量份
抑菌剂的制备方法中,溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮、环己酮、甲苯、二甲苯、石油醚、石油芳烃、纯苯中的一种;增溶剂是十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钾、聚山梨酯、聚乙二醇、山梨醇聚氧乙醚、木质素磺酸盐、茶枯、搭皂角中的任何一种;增效剂是茶皂素、2-C1C6H4-N=OCH3SCH3、亚甲基二氧苯衍生物、6-乙烯基癸醛、八氯二丙醚中的任何一种;乳化剂是C15~17H31~37COONa、硬脂酸钠、十二烷基硫酸钠、N-十二烷基二甲胺、聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、对辛基苯酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯基醚、脂肪酸聚氧乙烯基酯、烷基芳基磺酸盐中的任何一种;渗透剂是苄基苯酚聚氧乙烯醚、氮酮、三苯磷中的任何一种。
6.如权利要求3所述的瑞香狼毒有效部位制成抑菌剂的制备方法,其特征在于该方法为:将瑞香狼毒萃取物用氯仿、环己烷、苯、二甲苯或乙醇溶解,按下列顺序和比例在其中加入增溶剂、渗透剂、增效剂、乳化剂、助悬剂辅料制成萃取物抑菌剂;
萃取物: 3~30重量份
溶剂: 30~90重量份
增溶剂: 1~25重量份
乳化剂或助悬剂: 2~25重量份
渗透剂: 0.5~23重量份
增效剂: 0.5~25重量份
抑菌剂的制备方法中,溶剂选自水、乙醇、甲醇、丙酮、环己酮、甲苯、二甲苯、石油醚、石油芳烃、纯苯中的一种;增溶剂是十二烷基苯磺酸钠、十二烷基苯磺酸钾、聚山梨酯、聚乙二醇、山梨醇聚氧乙醚、木质素磺酸盐、茶枯、搭皂角中的任何一种;增效剂是茶皂素、2-C1C6H4-N=OCH3SCH3、亚甲基二氧苯衍生物、6-乙烯基癸醛、八氯二丙醚中的任何一种;乳化剂是C15~17H31~37COONa、硬脂酸钠、十二烷基硫酸钠、N-十二烷基二甲胺、聚氧乙烯醚、聚氧丙烯醚、对辛基苯酚聚氧乙烯醚、脂肪醇聚氧乙烯基醚、脂肪酸聚氧乙烯基酯、烷基芳基磺酸盐中的任何一种;渗透剂是苄基苯酚聚氧乙烯醚、氮酮、三苯磷中的任何一种。
7.如权利要求1或2所述的瑞香狼毒有效部位,其特征在于其中所述有机溶剂乙醇由氯仿、40-90℃石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、苯、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、环己酮中的一种代替。
8.如权利要求3所述的瑞香狼毒有效部位,其特征在于其中所述有机溶剂乙醇由氯仿、40-90℃石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、苯、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、环己酮中的一种代替。
9.一种植物瑞香狼毒提取物有效部位的制备方法,其特征在于该方法是如下方法之一:
A采用多功能提取罐,瑞香狼毒粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2-5,温浸或冷浸4-24小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物;
B采用多功能提取罐,瑞香狼毒粉末与有机溶剂乙醇的体积比为1∶2-5,反复渗漉提取2-10次,或连续回流提取4-10小时,过滤,干燥,得瑞香狼毒提取物。
10.如权利要求8所述瑞香狼毒有效部位的制备方法,其特征在于该方法中瑞香狼毒粉末与乙醇的体积比为1∶3或1∶4。
11.如权利要求8或9所述瑞香狼毒有效部位的制备方法,其特征在于该方法为:将瑞香狼毒提取物用甲醇溶解后,置于密闭的萃取罐中,用氯仿或石油醚溶媒以体积比0.7∶1.6的比例与甲醇采用液-液分配法萃取,以溶剂极性从小到大为溶媒的萃取顺序,最终收集氯仿或石油醚萃取相并减压浓缩至相对密度0.8-1g/cm3油膏状瑞香狼毒萃取物。
12.如权利要求8或9所述瑞香狼毒有效部位的制备方法,其特征在于其中所述有机溶剂乙醇由氯仿、40-90℃石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、苯、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、环己酮中的一种代替。
13.如权利要求10所述瑞香狼毒有效部位的制备方法,其特征在于其中所述有机溶剂乙醇由氯仿、40-90℃石油醚、乙醚、乙酸乙酯、正己烷、环己烷、苯、乙酸乙酯、甲醇、丙酮、环己酮中的一种代替。
14.如权利要求1或2所述的瑞香狼毒有效部位在制备抑菌药物中的应用。
15.如权利要求3所述的瑞香狼毒有效部位在制备抑菌药物中的应用。
16.瑞香狼毒在制备抑菌剂中的应用。
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