CN102357066B - 一种黄柏提取液及其制备方法 - Google Patents
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Abstract
本发明提供了一种制备黄柏提取液的方法,该方法包括步骤:将黄柏粉末与水混合,先添加纤维素酶进行酶解处理,然后进行水煎提取,过滤,所得上清液用无水乙醇沉淀,再过滤,将所得上清液去除无水乙醇,并与丙二醇混合,得到所述的黄柏提取液。利用本发明的方法提取得到的黄柏提取液,可作为护肤品原料添加至化妆品中,水为溶剂,使用更安全;通过与丙二醇一定比例的复配后活性物更稳定,可保持更高的含量而不结晶析出,添加工艺更简单;应用后,赋予产品杀菌解毒,消炎抗螨,抑制和改善湿疹,提高肌肤屏障功能和保湿的特点。
Description
技术领域
本发明是关于一种黄柏提取液及其制备方法,具体是关于一种可作为护肤品原料添加至化妆品中的黄柏提取液及其制备方法。
背景技术
黄柏提取物是从芸香科植物黄柏或黄柏皮的树皮中提取得到的提取物,黄柏中含有大量盐酸小檗碱、药根碱、黄柏碱等生物碱,另含黄柏酮、黄柏内酯等,文献“黄柏化学成分和药理作用的现代研究”(胡俊青,胡晓,当代医学2009年3月第15卷第7期总第162期)报道黄柏中盐酸小檗碱的含量约为1.4%~5.8%,即每g黄柏粉末中含盐酸小檗碱,为14mg·g-1~58mg·g-1。黄柏提取物具有清热燥湿、泻火除蒸、解毒疗疮、抗菌等功效。已有文献报道将黄柏提取物用于化妆品中,增强化妆品的抗菌、抗过敏、消炎、消除湿疹等功效。
现有技术中对黄柏提取物的提取方法报道很多,例如:文献“黄柏中盐酸小檗碱在不同复方中提取率的考察”(郭东艳、陈娟,陕西中医学院,时珍国医国药2009年第20卷第6期1504~1505)报道了黄柏药材水提液中盐酸小檗碱的含量及提取率,其中是称取黄柏药材30g,粉碎成粗粉,加10倍量水煎煮3次,2h/次,提取液趁热过滤,滤液浓缩至200ml,检测结果表明,黄柏水提工艺的水提液中盐酸小檗碱的含量为5.06mg·ml-1,换算成每g黄柏粉末中提取的盐酸小檗碱,含量约为33.73mg·g-1。文献“微波、超声及其联用萃取黄柏中总生物碱的研究”报道了微波-超声联用萃取黄柏中总生物碱的最佳工艺条件为料液比为1∶70、H2SO4质量分数为0.30%、微波3min、微波功率为中低火、超声时间40min.在最佳工艺条件条件下,实验5次,黄柏中总生物碱提取量为21.911mg/g。文献“正交设计优选黄柏中小檗碱的提取工艺”报道了最佳的乙醇提取工艺为:7倍量的70%乙醇热回流提取2次,2h/次。文献“超声酶法提取黄柏中小檗碱的工艺研究”(徐艳,刘少霞,孙娟(沈阳农业大学生物科学技术学院),时珍国医国药,2007(6):1460~1462)研究了超声-酶法在黄柏中小檗碱提取的应用高效果方法,采用单因素实验和正交实验考察不同因素对超声-酶法提取黄柏小檗碱的影响,优选提取工艺条件,结果水浴时间2.5h,超声功率80%,加酶25ml,水浴温度60℃时提取率最高。文献“黄柏中总生物碱的提取工艺优化”(范家佑,张松竹(贵州大学生命科学学院),井冈山大学学报(自然科学版),2010,31(5):112~117)报道了黄柏总生物碱不同溶剂提取的最佳工艺。方法以黄柏为原料,分别以水、乙醇为提取剂提取黄柏生物碱,采用单因素试验,按照所给定的条件和生物碱含量测定方法,进行不同的提取时间、提取温度、料液比、乙醇浓度的单因素实验,考察了各因素对生物碱提取率的影响,根据单因素实验得出的显著条件,以盐酸小檗碱含量为考察指标,利用L9(33)正交实验方法优选提取工艺,确定最佳工艺条件,结果以水为提取剂的最佳工艺条件组合是100℃水浴下提取次数为4次,提取时间为2.5小时,料液比1∶16,提取的盐酸小檗碱含量是46.55mg/g;乙醇为提取剂的最佳工艺条件组合是70℃水浴下乙醇浓度为70%,料液比1∶12,提取时间为80min,提取次数为3次。
然而,利用上述现有技术的方法提取得到的黄柏提取物,活性物的溶解度很低,在常温或低温放置时很容易出现浑浊、有沉淀现象,如果添加到化妆品基质中,将会导致产品稳定性及外观品质的改变,难以保证产品质量。
发明内容
本发明的主要目的在于根据上述现有技术的方法提取得到的黄柏提取物不适于加入到化妆品中的缺陷,提供一种改进的制备黄柏提取物的方法,保证其活性成分含量的前提下,提高其稳定性。
本发明的另一目的在于提供了按照所述的方法制备得到的黄柏提取物,其外观清澈透明,不易发生浑浊、沉淀现象,适于添加至化妆品基质中。
一方面,本发明提供了一种制备黄柏提取液的方法,该方法包括步骤:
将黄柏粉末与水混合,先添加纤维素酶进行酶解处理,然后进行水煎提取,过滤,所得上清液用无水乙醇沉淀,再过滤,将所得上清液去除无水乙醇,并与丙二醇混合,得到所述的黄柏提取液。
根据本发明的具体实施方案,本发明的制备黄柏提取液的方法中,所用原料黄柏粉末为芸香科植物黄柏或黄柏皮的树皮粉碎后得到的粉末,本发明对粉末粒度不做特殊要求,通常为20~50目。
根据本发明的具体实施方案,本发明的制备黄柏提取液的方法中,所述酶解处理是将黄柏粉末与8~12倍重量的无菌去离子水混合,用柠檬酸调节pH值到4.6~5.0,加入纤维素酶,40~50℃处理0.5~2小时,优选处理0.5~1小时。根据本发明的优选方案,以每0.1g黄柏粉末计算,加入的纤维素酶的量为8~12万活力单位,通常按重量计为0.01g~0.02g纤维素酶。
根据本发明的具体实施方案,本发明的制备黄柏提取液的方法中,所述水煎提取是将经酶解处理的黄柏粉末与酶的水溶液在94~98℃微沸条件下煎煮0.5~2小时(随着煎煮时间的延长,黄柏提取物中的生物碱成分的提取率不断提高,当时间延长至1.5h以上时,有效物提取率增加不明显。同时考虑到效率和成本问题,本发明优选水煎0.5~1.5小时);之后降温至60~70℃离心过滤,留上清液。根据具体情况需要,可对滤渣进行二次水煎处理,合并两次滤液,以充分提取。
根据本发明的一具体实施方案,本发明的制备黄柏提取液的方法包括:
将黄柏粉末与8~12倍重量的无菌去离子水混合,用柠檬酸调节pH值到4.6~5.0,每0.1g黄柏粉末加入8~12万活力单位的纤维素酶,40~50℃处理0.5~1小时;然后升温至94~98℃微沸条件下煎煮0.5~1.5小时;之后降温至60~70℃离心过滤,留上清液;
滤渣用6~10倍重量的酶的水溶液(酶溶液浓度同第一次酶解处理)分散均匀,40~50℃处理0.5~1小时;然后升温至94~98℃微沸条件下煎煮0.5~1.5小时;之后降温至60~70℃离心过滤,留上清液;
合并前述两次上清液,适当浓缩至原上清液体积的1/3~1/2,加入浓缩液体积1/3~1/2的无水乙醇沉淀,离心过滤,取上清液,并将该上清液浓缩(主要是回收乙醇,并可根据需要蒸去部分水分),得到黄柏提取原液。
根据本发明的具体实施方案,实际生产时,为使本发明的黄柏提取原液浓度有统一的规格标准以方便计量,在本发明的制备黄柏提取液的方法中,是将所述黄柏提取原液的浓度定容为:以黄柏粉末g/黄柏提取原液的量g计,为0.09~0.11g黄柏粉末/g黄柏提取原液。
根据本发明的具体实施方案,本发明的制备黄柏提取液的方法还包括步骤:
将所得到的黄柏提取原液,利用旋转蒸发去除原液重量1/4~1/2的水分,并加入原液重量1/4~1/2的丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液。同样的,为方便计量,本发明优选是将该黄柏提取原液的浓度定容为:以黄柏粉末g/黄柏提取液的量g计,为0.09~0.11g黄柏粉末/g黄柏提取液。
另一方面,本发明还提供了按照所述的方法制备得到的黄柏提取液。该黄柏提取液为透明棕褐色,无论在室温还是低温放置时都不会有活性物析出的现象,外观清澈透明,易于添加至化妆品基质中。
另一方面,本发明还提供了所述的黄柏提取液在制备化妆品中的应用。
另一方面,本发明还提供了一种化妆品,其中含有本发明所述的黄柏提取液。优选的,本发明的该化妆品,其中,所述黄柏提取液在该化妆品中的质量含量为0.1%~5%。所述的化妆品可以是膏霜类、乳液类或溶液类,例如可以是面霜、柔肤水或花露水等。具体在制备该化妆品时,将本发明的黄柏提取液作为添加相,按照常规工艺生产化妆品即可。添加了本发明的黄柏提取液的该化妆品,含有黄柏提取物活性成分,具有抗菌、抗过敏、消炎等功效,且具有良好的储存稳定性。
综上所述,利用本发明的方法提取得到的黄柏提取液,可作为护肤品原料添加至化妆品中,水为溶剂,使用更安全;通过与丙二醇一定比例的复配后活性物更稳定,可保持更高的含量而不结晶析出,添加工艺更简单;应用后,赋予产品杀菌解毒,消炎抗螨,抑制和改善湿疹,提高肌肤屏障功能和保湿的特点。
具体实施方式
为了更清楚地理解本发明,现参照下列实施例进一步描述本发明。实施例仅用于解释而不以任何方式限制本发明。
实施例1、黄柏提取液的制备一
本实施例的黄柏提取液的制备方法的总流程:
黄柏粉末——(纤维素酶处理——水煎)反复2次——浓缩——1/2体积的无水乙醇沉淀——离心过滤留上清液——回收乙醇并浓缩——浓缩液用丙二醇处理——黄柏提取物。
具体制备过程如下:
1、黄柏提取过程:
首先将市售黄柏粉末与10倍重量的无菌去离子水混合,用柠檬酸调节pH值到4.8左右,以每0.1g黄柏粉末加入10万活力单位纤维素酶的量加入纤维素酶,加热到约45℃处理1h后,94~98℃微沸条件下,煎煮1h,然后降温至65℃离心过滤,留上清液;
沉渣用8倍体积的酶的水溶液分散均匀,约45℃处理1h,94~98℃微沸条件下,煎煮1h;60~70℃离心过滤,合并上清液。
合并后的上清液浓缩至原上清液体积的1/2,加入浓缩液体积1/2的无水乙醇沉淀(即,加入无水乙醇的体积是浓缩液体积的一半),去除杂多糖和杂蛋白,离心过滤留取上清液。浓缩回收乙醇后用水定容得到0.1g/g的黄柏提取原液(黄柏粉末g/原液的量g)。
此黄柏提取原液中盐酸小檗碱等生物碱活性成分含量高。由于经过乙醇除杂过程,其中杂多糖和杂蛋白被除去,使活性物的纯度和得率都有所提高。但由于盐酸小檗碱的易溶于热水特性,在其含量较高的情况下,室温或低温放置时活性物容易有结晶析出的现象,黄柏提取液不稳定,故进行下一步处理。
2、原液处理过程(采用上述提取过程中方式二得到的黄柏提取原液,分别按照以下三种方式进行):
方式一:得到的0.1g/g的黄柏提取原液,利用旋转蒸发去除1/4质量的水分,加入1/4质量丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液一。
方式二:得到的0.1g/g的黄柏提取原液旋转蒸发去除1/3质量的水分,加入1/3质量丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液二。
方式三:得到的0.1g/g的黄柏提取原液旋转蒸发去除1/2质量的水分,加入1/2质量丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液三。
结论:原液经过与丙二醇的复配组合,使活性物的溶解度增加,提取物溶液无论在室温还是低温放置时都不会有活性物析出的现象,外观清澈透明,易于添加至化妆品基质中。
本实施例的黄柏提取液的特点及优势:
a.黄柏提取物中含盐酸小檗碱等生物碱、丙二醇、水及少量乙醇。其中丙二醇含量至少为25%,且不高于50%;盐酸小檗碱含量≥2.0mg/g。
b.按照本领域的常规操作进行哺乳动物皮肤局部刺激作用或腐蚀作用及其程度试验,结果表明,本发明的黄柏提取液对大耳白兔多次皮肤刺激性为无刺激。
c.优势:(1)本发明的经无水乙醇处理的黄柏提取物,其杂质蛋白和多糖类物质多被除去,生物碱类活性物纯度更高,与丙二醇复配后活性物不易析出,提取物更稳定,添加工艺更简单;(2)以水作为溶媒提取,较有机萃取剂更安全,原料来源更广泛,成本更低,中间副产物少,提取效率更高,后处理工作较简单,低碳环保。
本实施例中,按照上述方法在黄柏提取物的制备过程中,黄柏原液未经处理时测得提取的盐酸小檗碱,换算成每g黄柏粉末提取出盐酸小檗碱,含量可达到38.70mg·g-1,即利用酶法-水煎法的提取技术,黄柏中盐酸小檗碱可被提取出38.70mg·g-1。不加酶时,即利用传统的水煎法,与酶法-水煎法对比工艺为:一定质量的黄柏粉末用10体积的去离子水分散均匀,45℃处理1h,94~98℃微沸条件下,煎煮1h。60~70℃离心过滤,留上清液。沉渣用8倍体积的去离子水水分散均匀,45℃处理1h,94~98℃微沸条件下,煎煮1h,60~70℃离心过滤,合并清液。测得提取出的盐酸小檗碱的量为32.03mg·g-1。经无水乙醇除杂后所得原液中盐酸小檗碱的含量为1.6mg·g-1(提取液),或16.0mg·g-1(黄柏粉末)。
本发明中盐酸小檗碱的含量≥2.0mg·g-1(提取液)为提取物中最终含量,即经过无水乙醇的除杂精制后,盐酸小檗碱含量有一定损失,最终黄柏提取物的含量按所占每g提取液的量计算,含量为≥2.0mg·g-1(提取液),或者按每g黄柏粉末计算为≥20mg·g-1。
利用本发明的方法,原液制备过程中,经无水乙醇沉淀后,盐酸小檗碱的纯度提高。验证方法(以下试验经多次平行取样检测,所得盐酸小檗碱的含量为平均值):取两份等质量酶解水煎液(采用上述提取过程中方式二进行提取,未经无水乙醇沉淀除杂),一份直接干燥得到含盐酸小檗碱的结晶粉末A,质量为M1;另一份浓缩后,加入1/2倍体积的无水乙醇沉淀后,分离出上清液,上清液经旋转蒸发回收乙醇后,浓缩干燥得到除杂后的结晶粉末B,质量为M2。通过高效液相色谱检测,结晶粉末A中盐酸小檗碱的含量约为25.63%,结晶粉末B中盐酸小檗碱含量约为69.96%,即提取液经无水乙醇除杂后,盐酸小檗碱纯度是原来的2.73倍。
本发明中,所述盐酸小檗碱的检测方法——高效液相色谱检测:
1.色谱条件与系统适用性色谱柱为GL Science Wondasil C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流动相为乙腈-0.1%磷酸溶液(50∶50)(每100ml加十二烷基磺酸钠0.1g);检测波长为265nm[7]。柱温为40℃,流速为1.0mL·min-1.理论板数按盐酸小檗碱峰计算应不低于4000。
2.标准曲线的制备及样品检测精密称取在100℃干燥5小时的盐酸小檗碱对照品适量,加流动相分别制成每1ml含0.1mg、0.2mg、0.3mg、0.4mg、0.5mg的溶液,在以上色谱条件下,进样量10μL,得到盐酸小檗碱浓度与峰面积的线性回归方程为:y=2×107x+186597,R=0.9997。取一定量的待测样品液或样品粉末,稀释定容至适当的浓度进行检测。
利用本发明的制备黄柏提取物的方法,对不同比例的丙二醇与黄柏提取物原液的复配进行了检测试验:
1.取5份等量的黄柏提取物原液1#、2#、3#、4#、5#,浓缩挥发除去一定量的水分,再添等量丙二醇补充至原液质量。
2.5个原液处理方案如下表所示。
原液编号 | 1# | 2# | 3# | 4# | 5# |
去除的水份占原液的量 | 0 | 1/5 | 1/4 | 1/3 | 1/2 |
添加的丙二醇占原液的量 | 0 | 1/5 | 1/4 | 1/3 | 1/2 |
3.分别将5个样品放置24h在4℃、25℃,45℃进行测试,观察现象。
4.复配了丙二醇后的各样品在各温度下的现象,结果见下表:
5.结论:实验证明,丙二醇可以增加提取物中活性物的溶解,并且按照3#、4#、5#实验样品进行复配添加效果较好,常温或低温下无沉淀无浑浊,提取物表现出良好的稳定性。
实施例2、黄柏提取液的制备二
1、黄柏提取过程:
将市售黄柏粉末(同实施例1)与8倍重量的无菌去离子水混合,用柠檬酸调节pH值到4.8左右,以每0.1克黄柏粉末加入8万活力单位的纤维素酶的量加入纤维素酶,加热到约45℃处理1h后,约94~98℃微沸条件下,煎煮0.5h,然后降温至65℃离心过滤,留上清液;
沉渣用8倍体积的酶的水溶液分散均匀,约45℃处理1h,94~98℃微沸条件下,煎煮0.5h;60~70℃离心过滤,合并上清液。
合并后的上清液浓缩至原上清液体积的1/3,加入浓缩液体积1/2的无水乙醇沉淀,去除杂多糖和杂蛋白,离心过滤留取上清液。浓缩回收乙醇并定容得到0.1g/g的黄柏提取原液(黄柏粉末g/原液的量g)。该黄柏提取原液中盐酸小檗碱等生物碱活性成分含量较高,在室温或低温放置24小时后容易出现结晶析出、浑浊的现象,故进行下一步处理:
得到的0.1g/g的黄柏提取原液旋转蒸发去除1/2质量的水分,加入1/2质量丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液四。经室温及低温放置实验,该黄柏提取液四无论在室温还是低温放置7天后均无沉淀、无浑浊,外观清澈透明,表现出良好的稳定性。
实施例3、含有黄柏提取物的润肤霜
润肤霜配方:
原料名称 %wt
油相:
添加相:
实施例1制备的黄柏提取液三 0.1~1.0
双菊精油(市售) 0.01~0.5
防腐剂 适量
水相:
甘油 1~5
丙二醇 1~4
去离子水 加至100%
制备方法:
1.按照配方量准确称取各种物料,备用。
2.将油相物料投入油相反应釜,水相投入水相反应釜中,加热,温度控制在90℃~98℃,直至完全溶解。
3.投料前,真空釜密闭并预热,使釜内温度达到50℃以上即可。此时开启搅拌,使釜内真空度达到60Kpa(数字表),美之贺真空度达到0.04Kpa即可。
4.经过滤将油相全部吸入真空釜中,开刮板。然后再经过滤吸入水相,一次开快速搅拌、均质器(700升乳化釜的快速搅拌和均质器开6~8分钟)进行真空乳化,此时乳化釜内温度不得低于85℃。均质后开动冷却装置,迅速降温。
5.膏体温度降至50℃~55℃时,破真空,从锅盖处加入添加相,在密闭乳化釜中,抽真空(700升乳化釜的快速搅拌和均质器开6~8分钟,转速为3000rpm),开刮板搅拌(转速为30rpm)。
6.温度降至45℃以下时,按外观、粘度及pH值标准检验合格后,停冷却水,即可过滤出料。半成品经晾料间静置24小时,温度低于38℃即可灌装。
结论:含有黄柏提取物的本膏霜产品外观淡黄色,质地均匀细致,肤感柔和,经过24h的耐寒(-15±1℃)耐热(40±1℃)放置,不变质,无有效物结晶析出、无变色的现象。经皮肤测试,润肤效果好,有抗菌、除螨、抑制皮肤炎症、抑制湿疹的效果。
实施例4、含有黄柏提取物的柔肤水
柔肤水配方:
制备方法:
1.将透明质酸钠配置成1%的水溶液,备用。
2.将除黄柏提取液、透明质酸钠水溶液、防腐剂、香精之外的所有物料添加至反应釜中,开搅拌(转速为30rpm),同时开启加热,温度控制在90℃~98℃,灭菌5min。
3.物料搅拌冷却至45℃时,添加黄柏提取物,透明质酸钠水溶液、防腐剂、香精。并搅拌均匀。
4.检验合格后,温度降至38℃以下即可灌装。
结论:添加了黄柏提取物的柔肤水淡黄色,纯净透明,经过24h的耐寒(5±1℃)耐热(40±1℃)放置测试,无结晶析出,无变色等不稳定现象。经皮肤测试,易吸收,肤感清爽,可抑制皮肤炎症、过敏,可在皮肤表层形成很好的保护屏障。
实施例5、含有黄柏提取物的花露水
花露水配方:
制备方法:
将所有物料投入主反应釜中,开动刮板搅拌(搅拌转速为30rpm)均匀即可出料。
结论:含有黄柏提取物的花露水,溶液透亮,无浑浊现象,经过24h的耐寒(5±1℃)耐热(40±1℃)放置测试,无结晶析出,无变色、浑浊、沉淀等不稳定现象。经皮肤测试,肤感清凉,具有很好的止痒效果。有效抑制皮肤炎症,抑菌以及对抗皮肤湿疹。
Claims (6)
1.一种制备黄柏提取液的方法,该方法包括步骤:
将黄柏粉末与8~12倍重量的无菌去离子水混合,用柠檬酸调节pH值到4.6~5.0,以每0.1g黄柏粉末8~12万活力单位纤维素酶的量加入纤维素酶,40~50℃处理0.5~1小时;然后升温至94~98℃微沸条件下煎煮0.5~1.5小时;之后降温至60~70℃离心过滤,留上清液;
滤渣用6~10倍重量的酶的水溶液分散均匀,40~50℃处理0.5~1小时;然后升温至94~98℃微沸条件下煎煮0.5~1.5小时;之后降温至60~70℃离心过滤,留上清液;
合并前述两次上清液,浓缩至原上清液体积的1/3~1/2,加入浓缩液体积1/3~1/2的无水乙醇沉淀,离心过滤,取上清液,并将该上清液浓缩去除其中的无水乙醇,得到黄柏提取原液;
将所得到的黄柏提取原液,利用旋转蒸发去除原液重量1/4~1/2的水分,并加入原液重量1/4~1/2的丙二醇代替挥去的水分,得到黄柏提取液。
2.根据权利要求1所述的制备方法,其中,所述黄柏提取原液的浓度为:以黄柏粉末g/黄柏提取原液的量g计,为0.09~0.11g黄柏粉末/g黄柏提取原液。
3.按照权利要求1或2所述的方法制备得到的黄柏提取液。
4.权利要求3所述的黄柏提取液在制备化妆品中的应用。
5.一种化妆品,其中含有权利要求3所述的黄柏提取液。
6.根据权利要求5所述的化妆品,其中,所述黄柏提取液在该化妆品中的质量含量为0.1%~5%。
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