CN107056743A - 一种缩酚酸环醚化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种缩酚酸环醚化合物及其制备方法和应用，所述的缩酚酸环醚化合物分子式为C23H24O7，该化合物命名为multidepsidone A，具有下述结构式，所述制备方法是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤。所述的应用为缩酚酸环醚化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。经抗轮状病毒活性实验，选用病毒唑作为对照，multidepsidone A对轮状病毒的CC50和EC50值分别为290.3和19.2umol/L，其具有较好的抗轮状病毒活性。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗轮状病毒药物的先导性化合物，有良好的应用前景。

Description

一种缩酚酸环醚化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种缩酚酸环醚化合物及其制备方法和应用。
背景技术
藤黄科(Garcinia L.)植物全球约 450 种，产亚洲、非洲南部及波利尼西亚西部，我国有 21 种，分布于广东、广西、云南等南部省区。藤黄科植物还是天然呫吨酮(xanthone)类成分的主要资源之一，富含异戊烯基取代的呫吨酮（xanthones），这类成分结构新颖多样，且具有广泛的药理活性，尤以藤黄酸(gambogic acid)最具代表性，具有广谱强效的抗肿瘤活性，是近年来抗肿瘤天然产物的研究热点之一，我国学者正在开发其注射液，为抗肿瘤一类新药。除呫吨酮(xanthone)类外，缩酚酸环醚化合物(depsidone)、苯甲酮类(benzophenones)、双黄酮类(bioflavonoids)和联苯类(biphenyls)等化合物也是本科植物的特征性成分，也具有多种生物活性。为了更有效地利用我国藤黄科植物资源，从中寻找具有开发前景的活性成分，我们选择对藤黄科植物开展较系统的活性成分研究工作。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种缩酚酸环醚化合物；第二目的在于提供所述缩酚酸环醚化合物的制备方法；第三目的在于提供所述缩酚酸环醚化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的缩酚酸环醚化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为 C23H24O7，该化合物命名为 multidepsidone A,具有下述结构式：
本发明的第二目的是这样实现的，所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40 目，用有机溶剂超声提取 2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a；
B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏b用重量比1.5~3倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重0.8~1.2倍的200~300目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为200~300目，用量为浸膏b重量6~8倍量；用体积比为1:0~0:1的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以4:1配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用C-18、C-8或 ODS等反相材料装柱；用体积含量为40~100%的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经TLC监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量55~80%甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的缩酚酸环醚化合物multidepsidone A；
F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以50~70%的甲醇为流动相，流速10~14ml/min，21.2× 250 mm，5 um 的反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样45~60 uL，收集16~34 min的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的缩酚酸环醚化合物multidepsidone A。
本发明缩酚酸环醚化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和其他波谱技术测定方法确定为缩酚酸环醚化合物，并表征其具体结构为：
化合物multidepsidone A，为橙黄色胶状物；紫外光谱（溶剂为甲醇），λ max（log ε）：274(3.29), 205 (3.98) nm；红外光谱（溴化钾压片）υmax 3425, 2968, 2925, 1714, 1615,1595, 1508, 1484, 1266, 1144, 1080, 996, 838 cm–1； HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰m/z 412.1514 [M]+（计算值为412.1522），结合13C 和1H NMR谱（图1和图2，碳谱氢谱数据归科见表1）给出其分子式为C23H24O7。1H NMR (CD3OD, 400 MHz)和13C NMR（CD3OD,100 MHz）数据，见表1。
HRESIMS 显示其准分子离子峰为准分子离子峰m/z 412.1514 [M]+ （计算值为412.1522），结合 13C NMR谱确定分子式为 C23H24O7，不饱和度为12。红外光谱显示了羟基（3425 cm-1）、内酯羰基（1 714 cm-1 ）的吸收峰。在 13C-NMR 中，C-9 (δ C 165.8)也证实了内酯羰基的存在。该化合物的 1H-和 13C-NMR 数据归科，显示其含有 23 个碳,其中包括 4个甲基、1 个羰基、2 个亚甲基、4 个烯次甲基、12 个季碳。根据核磁共振数据以及两组典型的异戊烯基信号 [δ H 6.41 (1H, d, J=2.7 Hz, H-5), 6.18 (1H, d, J=2.7 Hz, H-7), 4.96–4.98 (1H, m, H-12), 4.92–4.95 (1H, m, H-17), 3.37 (2H, d, J=6.0 Hz,H-11), 3.28 (2H, d, J=6.6 Hz, H-16), 1.68 (3H, s, H-14), 1.62 (3H, s, H-20),1.61 (3H, s, H-15), 和 1.60 (3H, s, H-19); δ C 28.0 (C-11), 124.0 (C-12),130.9 (C-13), 16.8 (C-14), 24.5 (C-15), 24.5 (C-16), 122.6 (C-17), 130.8 (C-18), 16.7 (C-19), 24.5 (C-20)] 可初步推测该化合物为含有两个异戊烯基的缩酚酸环醚类化合物。根据芳香质子信号 δ H6.41 与 C-6、C-7、C-10a、C-8a 以及 δ H 6.18 与 C-5,C-6, C-8, C-8a 呈现 HMBC 相关，可确定 H-5 (δ H6.41) 和 H-7（δ H 6.18）为苯环上间位氢，进一步能确定其具有一个 4 取代的芳香环。H-11 与 C-1、C-2、C-9a 呈现 HMBC 相关，以及 H-12 与 C-1 呈现 HMBC 相关，证实 C-1 上连有一个异戊烯基。根据 H-16 和 H-17与 C-4 (δ C 125.6) 呈现 HMBC 相关，可以证实另一个异戊烯基与 C-4 相连。根据 C-2(δ C134.5), C-3 (δ C 148.3), C-6 (δ C 153.4), C-8 (δ C 154.7) 为季碳以及其分子式为C23H24O7，可以确定 4 个羟基分别取代在 C-2, C-3, C-6 和 C-8。至此，该化合物的结构得到确定,将其命名为 multidepsidone A。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的缩酚酸环醚化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。经抗轮状病毒活性实验，选用病毒唑作为对照，multidepsidone A 对轮状病毒的 CC50和 EC50值分别为 290.3 和 19.2 μmol/L，，其具有较好的抗轮状病毒活性。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗轮状病毒药物的先导性化合物，有良好的应用前景。
附图说明
图1为化合物multidepsidone A的核磁共振碳谱（13C NMR）；
图2为化合物multidepsidone A的核磁共振氢谱（1H NMR）；
图3为化合物multidepsidone A的主要HMBC（→）相关。
具体实施方式
下面结合附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明所述的缩酚酸环醚化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为C23H24O7，命名为multidepsidone A，具有下述结构式：
本发明的第二目的是这样实现的，所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40目，用有机溶剂超声提取 2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a；
B、有机溶剂萃取：浸膏 a 中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取 3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏 b 用重量比 1.5~3 倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重 0.8~1.2 倍的 200~300 目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为 200~300 目，用量为浸膏b 重量 6~8 倍量；用体积比为 1:0~0:1 的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以 4:1 配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用C-18、C-8 或 ODS 等反相材料装柱；用体积含量为 40~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量 55~80% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A；
F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以 50~70% 的甲醇为流动相，流速 10~14ml/min，21.2× 250 mm，5 um 的反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 45~60 uL，收集 16~34 min 的色谱峰，多次累加后蒸干。
本发明所述的缩酚酸环醚化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
本发明所述的藤黄科植物不受地区和品种限制，均可以实现本发明。
实施例 1
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 5.6kg，粗粉碎至 20 目，用 70% 的丙酮超声提取 4 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成 660g 浸膏a；在浸膏 a 中加入 660g 水，用与水等体积的氯仿萃取 5 次，合并萃取相，减压浓缩成 244g 浸膏 b；用 200 目硅胶 1700g 装柱，在浸膏 b 中加入 600g的丙酮溶解，然后加入 100 目硅胶 290g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的氯仿-甲醇混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分，得到 9 个部分，体积比 7:3 的氯仿-甲醇混合有机溶剂的洗脱液 c 为 57g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 60% 的甲醇为流动相，流速 8ml/min，21.2 mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 50 uL，收集 21 min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 2
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 3.2kg，粗粉碎至 20 目，用 100%的乙醇超声提取 2 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/3；静置，滤除沉淀物，浓缩成 360g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 360g 的水，用与水等体积的氯仿萃取 3 次，合并萃取相，减压浓缩成 120g 浸膏 b；用 160 目硅胶 960g 装柱，在浸膏 b 中加入240g 的丙酮溶解，然后加入 80 目硅胶 120g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1 的正己烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的正己烷-丙酮混合有机溶剂的洗脱液 c为 46g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 68% 的甲醇为流动相，流速 14ml/min，21.2mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样 50 uL，收集 23min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 3
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 6.5kg，粗粉碎至 30 目，用 80%的甲醇超声提取 4 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成 675g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 700g 的水，用与水等体积的乙醚萃取 4 次，合并萃取相，减压浓缩成 342g 浸膏 b；用 180 目硅胶 2800g 装柱，在浸膏 b 中加入930g 的丙酮溶解，然后加入 90 目硅胶 360g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂的洗脱液c 为 45g；用反相材料 ODS 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 55% 的甲醇为流动相，流速 12ml/min，21.2 mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，每次进样 50 uL，收集 20min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 4
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 5.9kg，粗粉碎至 40 目，用 90%的乙醇提取3 次，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成 810g浸膏 a；在浸膏 a 中加入 880g 的水，用与水等体积的石油醚萃取 4 次，合并萃取相，减压浓缩成 265g 浸膏 b；用 160 目硅胶 1450g 装柱，在浸膏 b 中加入 290g 的丙酮溶解，然后加入 80 目硅胶 265g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的石油醚-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的石油醚-丙酮混合有机溶剂的洗脱液 c 为52g；用反相材料 C-8 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 70% 的甲醇为流动相，流速 10ml/min，21.2 mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，收集 18min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物multidepsidone A。
实施例 5
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 5.6 kg，粗粉碎至 20 目，用 70%的甲醇超声提取 4 次，每次 35min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成 700g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 1400g 的水，用与水等体积的苯萃取 5 次，合并萃取相，减压浓缩成 310g 浸膏 b；用 200 目硅胶 1860g 装柱，在浸膏 b 中加入 420g的丙酮溶解，然后加入 100 目硅胶 310g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1 的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂的洗脱液 c 为 56g；用反相材料 ODS 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 50% 的甲醇为流动相，流速 12ml/min，21.2 mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，收集 26min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物multidepsidone A。
实施例 6
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 11kg，粗粉碎至 20 目，用 100%的乙醇超声提取 2 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/3；静置，滤除沉淀物，浓缩成 1200g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 1200g 的水，用与水等体积的氯仿萃取 3次，合并萃取相，减压浓缩成 400g 浸膏 b；用 160 目硅胶 3200g 装柱，在浸膏 b 中加入400g 的丙酮溶解，然后加入 80 目硅胶 400g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1 的正己烷-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂的洗脱液c 为110g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 68% 的甲醇为流动相，流速 14ml/min，21.2mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254 nm，每次进样 50 uL，收集 22min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 7
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和/或果实 1kg，粗粉碎至 30 目，用 80%的甲醇超声提取 4 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成 110g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 120g 的水，用与水等体积的乙醚萃取 4 次，合并萃取相，减压浓缩成 52g 浸膏 b；用 180 目硅胶 430g 装柱，在浸膏 b 中加入 140g的丙酮溶解，然后加入 90 目硅胶 55g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂的洗脱液 c 为6g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 55% 的甲醇为流动相，流速 12ml/min，21.2 mm×25 cm，5 um 的 Zorbax PrepHT GF 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为254nm，每次进样 50 uL，收集 20min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 8
取实施例 1 制备的化合物 multidepsidone A，为橙黄色胶状物；测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。
（1）紫外光谱（溶剂为甲醇），λ max（logε ）：274 (3.29), 205 (3.98) nm；
（2）红外光谱（溴化钾压片）υmax 3 425, 2 968, 2 925, 1 714, 1 615, 1 595, 1508, 1 484, 1 266, 1 144, 1 080, 996, 838 cm–1；
（3）HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰为m/z 412.1514 [M]+（计算值为412.1522），结合 13C 和 1H NMR 谱（图 1 和图 2 ，碳谱氢谱数据归科见表1）给出其分子式为 C23H24O7。1H NMR(400 MHz,CD3OD) 和 13C NMR(100 MHz,CD3OD) 数据，见表 1。
HRESIMS 显示其准分子离子峰为 m/z 412.1514 [M]+（计算值为412.1522），结合13C NMR 谱确定分子式为 C23H24O7，不饱和度为 12。红外光谱显示了羟基（3 425 cm-1）、内酯羰基（1 714 cm-1 ）的吸收峰。在 13C-NMR 中，C-9 (δ C 165.8)也证实了内酯羰基的存在。该化合物的 1H- 和 13C-NMR 数据归科，显示其含有 23 个碳,其中包括 4 个甲基、1 个羰基、2 个亚甲基、4 个烯次甲基、12 个季碳。根据核磁共振数据以及两组典型的异戊烯基信号 [δ H 6.41 (1H, d, J=2.7 Hz, H-5), 6.18 (1H, d, J=2.7 Hz, H-7), 4.96–4.98(1H, m, H-12), 4.92–4.95 (1H, m, H-17), 3.37 (2H, d, J=6.0 Hz, H-11), 3.28(2H, d, J=6.6 Hz, H-16), 1.68 (3H, s, H-14), 1.62 (3H, s, H-20), 1.61 (3H, s,H-15), 和 1.60 (3H, s, H-19); δ C 28.0 (C-11), 124.0 (C-12), 130.9 (C-13),16.8 (C-14), 24.5 (C-15), 24.5 (C-16), 122.6 (C-17), 130.8 (C-18), 16.7 (C-19), 24.5 (C-20)] 可初步推测该化合物为含有两个异戊烯基的缩酚酸环醚类化合物。根据芳香质子信号 δ H6.41 与 C-6、C-7、C-10a、C-8a 以及 δ H 6.18 与 C-5, C-6, C-8, C-8a 呈现 HMBC 相关，可确定 H-5 (δ H6.41) 和 H-7（δ H 6.18）为苯环上间位氢，进一步能确定其具有一个 4 取代的芳香环。H-11 与 C-1、C-2、C-9a 呈现 HMBC 相关，以及 H-12 与C-1 呈现 HMBC 相关，证实 C-1 上连有一个异戊烯基。根据 H-16 和 H-17 与 C-4 (δ C125.6) 呈现 HMBC 相关，可以证实另一个异戊烯基与 C-4 相连。根据 C-2(δ C 134.5),C-3 (δ C 148.3), C-6 (δ C 153.4), C-8 (δ C 154.7) 为季碳以及其分子式为 C23H24O7，可以确定 4 个羟基分别取代在 C-2, C-3, C-6 和 C-8。至此，该化合物的结构得到确定,将其命名为 multidepsidone A。
实施例 9
取实施例 2 制备的化合物，为橙黄色胶状物；按实施例 8 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 8，分子式为 C23H24O7。确认实施例 2 制备的化合物为所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 10
取实施例 3 制备的化合物，为橙黄色胶状物；按实施例 8 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 8，分子式为 C23H24O7。确认实施例 3 制备的化合物为所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
表1 化合物的 1H 和 13C NMR 数据 (400/100 MHz,CD3OD)
No δ C δ H(m, J, Hz) No δ C δ H(m, J, Hz)
1 133.0 s 9a 112.4 s
2 134.5 s 11 28.0 t 3.37 (d, 6.0)
3 148.3 s 12 124.0 d 4.96–4.98 (m)
4 125.6 s 13 130.9 s
4a 148.6 s 14 16.8 q 1.68 (s)
5 98.9 d 6.41 (d, 2.7) 15 24.5 q 1.61 (s)
10a 147.8 s 16 24.5 t 3.28 (d, 6.6)
6 153.4 s 17 122.6 d 4.92–4.95 (m)
7 100.4 d 6.18 (d, 2.7) 18 130.8 s
8 154.7 s 19 16.7 q 1.60 (s)
8a 126.3 s 20 24.5 q 1.62 (s)
9 165.8 s
实施例 11
取实施例 4 制备的化合物，为橙黄色胶状物；按实施例 8 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 8，分子式为 C23H24O7。确认实施例 4 制备的化合物为所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 12
取实施例 5 制备的化合物，为橙黄色胶状物；按实施例 8 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 8，分子式为 C23H24O7。确认实施例 5 制备的化合物为所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A。
实施例 11
取实施例 1~7 所制备的任一缩酚酸环醚化合物进行抗轮状病毒活性检测试验，试验情况如下：
细胞株: 恒河猴肾细胞系 (MA-104)。
实验设计: MA-104 细胞与不同浓度化合物温育 72 小时, 每株细胞的实验均重复 3 次, 用 3 次实验的结果进行数据处理, 采用改良 MTT 法评价化合物对细胞增殖的抑制程度, 计算抑制率, 根据抑制率采用 Logit 方法计算 IC50, 比较化合物的体外抗病毒活性。
EC50 即指半数有效浓度，是指引起 50％ 试验动物产生某一特定反应，或是某反应指标被抑制一半时的浓度。
CC50即指半数细胞毒性浓度，是指对半数细胞产生毒性作用所需浓度。在本实验中，指致 50％ 细胞死亡所需的药物浓度。
化合物细胞毒性测定
化合物用二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide，DMSO) 溶解，于微波消毒 l0min，用 MEM配成 lmg/ml 的母液备用，MEM 溶液稀释成所需浓度。96 孔细胞培养板，加 l x l05 /ml浓度的 Mal04 细胞悬液，100 ul/孔，37℃、5%CO2 孵箱培养 24h，在生长良好的单层细胞上分别加入浓度分别为 l mg/ml、0.2 mg/ml、40 ug/ml、8 ug/ml、1.25 ug/ml 的化合物;100 ul/孔，每个浓度设 3 个复孔，同时设正常细胞对照。置于 37℃，5%CO2 孵箱继续培养24h 后，MTT 法检测细胞存活率。
化合物对病毒感染预防作用
以细胞浓度为 104/ml，每孔 l00ul 接种细胞于 96 孔板中，培养 24 小时，见细胞长成单层并生长状况良好，用浓度分别为 100 ug/ml、75 ug/ml、50 ug/ml、25 ug/ml、l ug/ml 的化合物在 37℃ 孵箱预先作用细胞 l.5 h，PBS 洗涤后以100TCID50/ml 的轮状病毒每孔 100ul 吸附 lh 后弃去，加 MEM 培养基 100 ul/孔 维持，置 37C、5%CO2 孵箱，每日观察细胞病变情况。48h 后以 MTT 法检测病毒抑制率。
化合物对病毒感染治疗作用
以细胞浓度为 104/ml，每孔 l00ul 接种细胞于 96 孔板中，培养 24 小时，见细胞长成单层并生长状况良好，先用以 100TCID50/ml 的轮状病毒每孔 100 ul 吸附 lh 后弃去，然后加入上述不同浓度的化合物，100 ul/孔，同上法培养与检测。各组实验均设病毒对照组(C组)和正常细胞对照组(N组)。
细胞存活率测定
采用 MTT 法，在培养 48h 的细胞中加入 5mg/ml 甲基噻唑基四唑 (methylthiazolyl tetrazolium，MTT) 20 ul，继续培养 3-4 h，弃上清，加入 DMSO 每孔 100 ul，振荡使孔内结晶完全溶解后立即在 490lun 波长下测定吸光度 A 值。
细胞存活率=药物组平均 A 值/细胞对照组 A 值 x100%
病毒抑制率=[实验组平均 A 值一病毒对照组平均 A 值]/[细胞对照组平均A 值一病毒对照组平均 A 值] x 100%
治疗指数(TI)=半数毒性浓度(CC50)/半数抑制浓度(IC50)
(e) 实验结果
实验结果表明：经抗轮状病毒活性实验，选用病毒唑作为对照，multidepsidone A 对轮状病毒的 CC50和 EC50值分别为 290.3 和 19.2 μmol/L，其具有较好的抗轮状病毒活性。
表 2 化合物的抗轮状病毒活性
No. CC50 (µM) EC50 (µM) TI
multidepsidoneA 290.3 19.2 15.12
Ribavirin 263.2 13.3 19.8
a 所有数据均表示为平均值± SD（标准差）; n = 3
SI: 选择指数, CC50/EC50。

Claims (7)

1.一种缩酚酸环醚化合物，其特征是：所述的缩酚酸环醚化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为 C23H24O7，命名为 multidepsidone A，具有下述结构式：
。
2.一种权利要求 1 所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，其特征在于是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40 目，用有机溶剂超声提取2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a ；
B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏 b 用重量比 1.5~3 倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重 0.8~1.2 倍的 200~300 目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为 200~300 目，用量为浸膏b 重量 6~8 倍量；用体积比为 1:0~0:1 的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以4:1 配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料 C-18、C-8 或 ODS 装柱；用体积含量为 40~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量 55~80% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的缩酚酸环醚化合物 multidepsidone A；
F、E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以 50~70% 的甲醇为流动相，流速 10~14ml/min，21.2×250 mm，5um 的反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 45~60uL，收集 16~34min 的色谱峰，多次累加后蒸干。即得所述的缩酚酸环醚化合物multidepsidone A。
3.根据权利要求 2 所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，其特征是： A步骤所述的有机溶剂为 80~100% 的丙酮、乙醇或甲醇。
4.根据权利要求 2 所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，其特征是： B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。
5.根据权利要求 2 所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，其特征是： C步骤所述的混合有机溶剂为正己烷-丙酮、氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮或石油醚-乙酸乙酯。
6.根据权利要求 2 所述的缩酚酸环醚化合物的制备方法，其特征是： C步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1。
7.一种权利要求 1 所述的缩酚酸环醚化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
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Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108925565A (zh) * 2018-06-20 2018-12-04 广东海洋大学深圳研究院 一种缩酚酸环醚类化合物的应用
CN111377901A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 华东理工大学 一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法与用途

Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1619195A2 (en) * 2004-05-21 2006-01-25 Taiwan Sunpan Biotechnology Development Co., Ltd. Compounds isolated from gamboge resin having activity in inhibiting the growth of tumor/cancer cells and pharmaceutical compositions comprising the same
CN102634551A (zh) * 2012-03-06 2012-08-15 大连交通大学 一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用
CN102796113A (zh) * 2012-09-03 2012-11-28 云南民族大学 一种呫吨酮类化合物及其制备方法与应用
CN105175383A (zh) * 2015-08-12 2015-12-23 云南民族大学 一种联苯类化合物及其制备方法和应用

Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP1619195A2 (en) * 2004-05-21 2006-01-25 Taiwan Sunpan Biotechnology Development Co., Ltd. Compounds isolated from gamboge resin having activity in inhibiting the growth of tumor/cancer cells and pharmaceutical compositions comprising the same
CN102634551A (zh) * 2012-03-06 2012-08-15 大连交通大学 一种海藻附生真菌氯代缩酚酸环醚类化合物及其制备和应用
CN102796113A (zh) * 2012-09-03 2012-11-28 云南民族大学 一种呫吨酮类化合物及其制备方法与应用
CN105175383A (zh) * 2015-08-12 2015-12-23 云南民族大学 一种联苯类化合物及其制备方法和应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN108925565A (zh) * 2018-06-20 2018-12-04 广东海洋大学深圳研究院 一种缩酚酸环醚类化合物的应用
CN111377901A (zh) * 2018-12-27 2020-07-07 华东理工大学 一种缩酚酸环醚类化合物及其制备方法与用途

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