CN109485570A - 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用 - Google Patents

一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用 Download PDF

Info

Publication number
CN109485570A
CN109485570A CN201810884456.7A CN201810884456A CN109485570A CN 109485570 A CN109485570 A CN 109485570A CN 201810884456 A CN201810884456 A CN 201810884456A CN 109485570 A CN109485570 A CN 109485570A
Authority
CN
China
Prior art keywords
group substituted
substituted biphenyl
class compound
isopentene group
medicinal extract
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Granted
Application number
CN201810884456.7A
Other languages
English (en)
Other versions
CN109485570B (zh
Inventor
高雪梅
王闪闪
李干鹏
江志勇
蒋孟圆
朱鸿
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Yunnan Minzu University
Original Assignee
Yunnan Minzu University
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Yunnan Minzu University filed Critical Yunnan Minzu University
Priority to CN201810884456.7A priority Critical patent/CN109485570B/zh
Publication of CN109485570A publication Critical patent/CN109485570A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN109485570B publication Critical patent/CN109485570B/zh
Active legal-status Critical Current
Anticipated expiration legal-status Critical

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C69/00—Esters of carboxylic acids; Esters of carbonic or haloformic acids
    • C07C69/02—Esters of acyclic saturated monocarboxylic acids having the carboxyl group bound to an acyclic carbon atom or to hydrogen
    • C07C69/12—Acetic acid esters
    • C07C69/21—Acetic acid esters of hydroxy compounds with more than three hydroxy groups
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07C—ACYCLIC OR CARBOCYCLIC COMPOUNDS
    • C07C67/00—Preparation of carboxylic acid esters
    • C07C67/48—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives
    • C07C67/56—Separation; Purification; Stabilisation; Use of additives by solid-liquid treatment; by chemisorption

Landscapes

  • Organic Chemistry (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

本发明公开了一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用，所述的异戊烯基取代联苯类化合物分子式为C20H22O6，具有下述结构式：所述制备方法是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离步骤。所述的应用为异戊烯基取代联苯类化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。经抗轮状病毒活性实验，选用利巴韦林作为对照，所述化合物对轮状病毒的TI值大于10，其具有较好的抗轮状病毒活性。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗轮状病毒药物的先导性化合物，有良好的应用前景。

Description

一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
技术领域
本发明属于植物有效成分提取技术领域，具体涉及一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用。
背景技术
藤黄科(Garcinia L.)植物全球约 450 种，产亚洲、非洲南部及波利尼西亚西部，我国有 21 种，分布于广东、广西、云南等南部省区。藤黄科植物还是天然呫吨酮(xanthone)类成分的主要资源之一，富含异戊烯基取代的呫吨酮（xanthones），这类成分结构新颖多样，且具有广泛的药理活性，尤以藤黄酸(gambogic acid)最具代表性，具有广谱强效的抗肿瘤活性，是近年来抗肿瘤天然产物的研究热点之一，我国学者正在开发其注射液，为抗肿瘤一类新药。除呫吨酮(xanthone)类外，联苯类(biphenyls)、苯甲酮类(benzophenones)、双黄酮类(bioflavonoids)和缩酚酸环醚化合物(depsidone)等化合物也是本科植物的特征性成分，也具有多种生物活性。为了更有效地利用我国藤黄科植物资源，从中寻找具有开发前景的活性成分，我们选择对藤黄科植物开展较系统的活性成分研究工作。
发明内容
本发明的第一目的是提供一种异戊烯基取代联苯类化合物；第二目的在于提供所述异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法；第三目的在于提供所述异戊烯基取代联苯类化合物的应用。
本发明的第一目的是这样实现的，所述的异戊烯基取代联苯类化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高效液相色谱分离得到的，该化合物分子式为 C20H22O6，具有下述结构式：
本发明的第二目的是这样实现的，所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40 目，用有机溶剂超声提取2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a ；
B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏 b 用重量比 1.5~3 倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重 0.8~1.2 倍的 200~300 目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为 200~300 目，用量为浸膏b 重量 6~8 倍量；用体积比为 1:0~0:1 的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以 4:1 配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料 C-18、C-8 或 ODS 装柱；用体积含量为80~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量 50~100% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
本发明异戊烯基取代联苯类化合物是首次被分离出来的，通过核磁共振和其他波谱技术测定方法确定为异戊烯基取代联苯类化合物，并表征其具体结构为：
所述化合物为黄色胶状物；紫外光谱（溶剂为甲醇），λ max（logε）：570 (1.71), 262(3.43), 208 (3.92) nm；红外光谱（溴化钾压片）νmax 3434, 2924, 1730, 1714, 1633,1496, 1454, 1373, 1255, 1107, 1048, 822, 584 cm-1；HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰为m/z 358.1420 [M]+（计算值为358.1416），结合13C 和1H NMR 谱（图 1 和图 2，碳谱氢谱数据归属见表1）给出其分子式为 C20H22O6。1H NMR(400 MHz,CD3OD) 和13C NMR(100 MHz,CD3OD) 数据，见表 1。
HRESIMS 显示其准分子离子峰为准分子离子峰m/z 358.1420 [M]+（计算值为358.1416），结合13C NMR谱确定分子式为 C20H22O6，不饱和度为10。红外光谱显示了羟基（3434 cm-1）、羰基（1714 cm-1）的吸收峰。在13C-NMR 中，4＇- OAc (δ C 172.9 )也证实了羰基的存在。该化合物的1H-和13C-NMR 数据归科，显示其含有 20 个碳,其中包括 3 个甲基、2 个亚甲基、6 个次甲基、9 个季碳。根据核磁共振数据 [δ H 7.19 (1H, d, J=2.2 Hz, H-8), 7.18 (1H, dd, J=8.2, 2.2Hz, H-12)，6.78（1H，d, J=8.0 Hz, H-11), 6.62 (1H,brd, H-6), 6.62 (1H, brd, H-2), 5.70 (1H, t, J=7.3 Hz, H-2＇), 4.50 (2H, s, H-4＇), 3.88 (3H, s, 3-OMe), 3.39 (2H, d, J=7.3 Hz, H-1＇), 2.03 (3H, s, 4＇-OAc),1.78 (3H, s, H-5＇); δ C 134.0 (C-1), 103.1 (C-2), 149.8 (C-3), 134.2 (C-4),146.7 (C-5), 108.2 (C-6), 134.2 (C-7), 128.7 (C-8), 128.2 (C-9), 155.3 (C-10), 116.0 (C-11), 126.2 (C-12), 29.2 (C-1＇), 129.0 (C-2＇), 132. 0 (C-3＇),71.3 (C-4＇), 14.1 (C-5＇), 56.7 (3-OMe), 172.9, 20.8 (4＇-OAc)] 可初步推测该化合物为含有一个乙酰氧基异戊烯基的联苯类化合物。H-2和H-6与C-7以及H-8和H-12与C-1的HMBC相关性进一步证实了联苯骨架。在δ C134.2 (C-4), 146.7 (C-5), 155.3 (C-10)处的3个信号表明在两个苯环上存在三个羟基，由于H-1'在δ H 3.39处产生的信号与128.7(C-8), 128.2 (C-9), 155.3 (C-10)呈现HMBC 相关，H-2'与C-9存在HMBC相关，因此可确定乙酰氧基异戊烯基在C-9处，δ H 3.88与C-3 (δ C 149.8)的HMBC相关性表明甲氧基连接在分子中的C-3处，至此，该化合物的结构得到确定。
本发明的第三目的是这样实现的，所述的异戊烯基取代联苯类化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。经抗轮状病毒活性实验，选用利巴韦林作为对照，所述化合物对轮状病毒的TI值大于10，其具有较好的抗轮状病毒活性。本发明化合物结构简单活性好，可作为抗轮状病毒药物的先导性化合物，有良好的应用前景。
附图说明
图1为所述化合物的核磁共振碳谱（13C NMR）；
图2为所述化合物的核磁共振氢谱（1H NMR）；
图3为所述化合物的主要HMBC（→）相关。
具体实施方式
下面结合实施例和附图对本发明作进一步的说明，但不以任何方式对本发明加以限制，基于本发明教导所作的任何变换或改进，均落入本发明的保护范围。
本发明所述的异戊烯基取代联苯类化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为C20H22O6，具有下述结构式：
本发明的第二目的是这样实现的，所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40 目，用有机溶剂超声提取2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a ；
B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏 b 用重量比 1.5~3 倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重 0.8~1.2 倍的 200~300 目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为 200~300 目，用量为浸膏b 重量 6~8 倍量；用体积比为 1:0~0:1 的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以 4:1 配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料 C-18、C-8 或 ODS 装柱；用体积含量为80~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量 50~100% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
进一步的，A步骤所述的有机溶剂为 70~100% 的丙酮、乙醇或甲醇。
进一步的，B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。
进一步的，C步骤所述的混合有机溶剂为氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯或石油醚-乙酸乙酯。
进一步的，C步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、4:1、2:1、1:1、0:1。
进一步的，E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以 50~80% 的甲醇为流动相，流速 2~5ml/min，9.4×250 mm，5μm 的反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，每次进样 45~60μL，收集 7~25min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
本发明所述的异戊烯基取代联苯类化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
本发明所述的藤黄科植物不受地区和品种限制，均可以实现本发明。
实施例 1
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和果实 3.5 kg，粗粉碎至 20 目，用 70% 的丙酮超声提取 4 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成 260g 浸膏a；在浸膏 a 中加入 260g 水，用与水等体积的乙酸乙酯萃取 5 次，合并萃取相，减压浓缩成 154g 浸膏 b；用 200-300 目硅胶 1500g 装柱，在浸膏 b 中加入 200g 的甲醇溶解，然后加入 100-200 目硅胶 160g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的石油醚-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分，得到 9 个部分，体积比 7:3 的石油醚-丙酮混合有机溶剂的洗脱液 c 为 13g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC监测，合并相同的部分；取以体积含量 70~80% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 75%的甲醇为流动相，流速 3ml/min，9.4×250 mm，5μm 的 Alltima C18 反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 50 μL，收集 8 min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 2
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶3.2kg，粗粉碎至 20 目，用含水10%的乙醇超声提取 3次，每次 20min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/3；静置，滤除沉淀物，浓缩成 360g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 360g 的水，用与水等体积的乙酸乙酯萃取 3 次，合并萃取相，减压浓缩成 120g 浸膏 b；用 200-300 目硅胶 1200g 装柱，在浸膏 b 中加入240g 的甲醇溶解，然后加入 100-200 目硅胶 120g拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的氯仿-丙酮混合有机溶剂的洗脱液c 为 46g；用反相材料 C-18 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为80~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 60~80% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 70% 的甲醇为流动相，流速 3ml/min，流速 2~5ml/min，9.4×250 mm，5μm 的Alltima C18反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 50μL，收集 14min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 3
取干燥的藤黄科乔木枝条、果实 6.5kg，粗粉碎至 30 目，用含水20%的甲醇超声提取3 次，每次 20min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成 675g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 700g 的水，用与水等体积的氯仿萃取4 次，合并萃取相，减压浓缩成 342g 浸膏 b；用 200-300 目硅胶 3400g 装柱，在浸膏 b 中加入 900g的甲醇溶解，然后加入 100-200 目硅胶 360g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的二氯甲烷-乙酸乙酯混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的二氯甲烷-乙酸乙酯混合有机溶剂的洗脱液 c 为 45g；用反相材料 ODS 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为80~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 60~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 67% 的甲醇为流动相，流速 3ml/min，9.4×250 mm，5μm 的Alltima C18反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，每次进样 50μL，收集 18min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 4
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和果实 5.9kg，粗粉碎至 40 目，用 90%的乙醇提取 3次，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/4；静置，滤除沉淀物，浓缩成 760g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 800g 的水，用与水等体积的石油醚萃取 4 次，合并萃取相，减压浓缩成 305g 浸膏 b；用 200-300 目硅胶 3000g 装柱，在浸膏 b 中加入 300g 的甲醇溶解，然后加入 100-200 目硅胶 300g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、7:3、3:2、1:1、1:2、0:1 的石油醚-丙酮混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 8:2 的石油醚-丙酮混合有机溶剂的洗脱液 c为 43g；用反相材料 C-8 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量50~80% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 60% 的甲醇为流动相，流速 2ml/min，9.4×250 mm，5μm 的Alltima C18反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，收集28min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 5
取干燥的藤黄科乔木枝条、叶和果实 5.6 kg，粗粉碎至 20 目，用 80%的甲醇超声提取 3 次，每次 30min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩至体积的 1/2；静置，滤除沉淀物，浓缩成 430g 浸膏 a；在浸膏 a 中加入 800g 的水，用与水等体积的丙酮萃取 4 次，合并萃取相，减压浓缩成 260g 浸膏 b；用 200-300 目硅胶 2200g 装柱，在浸膏 b 中加入420g 的乙酸乙酯溶解，然后加入 100-200 目硅胶 400g 拌样，拌样后上柱；用体积比分别为 1:0、20:1、9:1、8:2、3:2、1:1、1:2、0:1 的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；体积比 9:1 的石油醚-乙酸乙酯混合有机溶剂的洗脱液 c 为 26g；用反相材料 ODS 装柱，洗脱液 c 上反相柱，以体积含量为 20~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；取以体积含量 50~70% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液，再以 65% 的甲醇为流动相，流速 3ml/min，9.4×250 mm，5μm 的Alltima C18反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254nm，收集 20min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 6
取实施例 1 制备的化合物，为黄色胶状物；测定方法为：用核磁共振，结合其它波谱技术鉴定结构。
（1）紫外光谱（溶剂为甲醇），λ max（logε）：570 (1.71), 262 (3.43), 208 (3.92)nm；
（2）红外光谱（溴化钾压片）νmax 3434, 2924, 1730, 1714, 1633, 1496, 1454,1373, 1255, 1107, 1048, 822, 584 cm-1；
（3）HRESIMS显示本发明化合物准分子离子峰为m/z 358.1420 [M]+（计算值为358.1416），结合13C 和1H NMR 谱（图 1 和图 2 ，碳谱氢谱数据归属见表1）给出其分子式为 C20H22O6。1H NMR(400 MHz,CD3OD) 和13C NMR(100 MHz,CD3OD) 数据，见表 1。
表1 化合物的1H 和13C NMR 数据 (400/100 MHz,CD3OD)
HRESIMS 显示其准分子离子峰为准分子离子峰m/z 358.1420 [M]+（计算值为358.1416），结合13C NMR谱确定分子式为 C20H22O6，不饱和度为10。红外光谱显示了羟基（3434 cm-1）、羰基（1714 cm-1）的吸收峰。在13C-NMR 中，4＇- OAc (δ C 172.9 )也证实了羰基的存在。该化合物的1H-和13C-NMR 数据归科，显示其含有 20 个碳,其中包括 3 个甲基、2 个亚甲基、6 个次甲基、9 个季碳。根据核磁共振数据 [δ H 7.19 (1H, d, J=2.2 Hz, H-8), 7.18 (1H, dd, J=8.2, 2.2Hz, H-12)，6.78（1H，d, J=8.0 Hz, H-11), 6.62 (1H,brd, H-6), 6.62 (1H, brd, H-2), 5.70 (1H, t, J=7.3 Hz, H-2＇), 4.50 (2H, s, H-4＇), 3.88 (3H, s, 3-OMe), 3.39 (2H, d, J=7.3 Hz, H-1＇), 2.03 (3H, s, 4＇-OAc),1.78 (3H, s, H-5＇); δ C 134.0 (C-1), 103.1 (C-2), 149.8 (C-3), 134.2 (C-4),146.7 (C-5), 108.2 (C-6), 134.2 (C-7), 128.7 (C-8), 128.2 (C-9), 155.3 (C-10), 116.0 (C-11), 126.2 (C-12), 29.2 (C-1＇), 129.0 (C-2＇), 132. 0 (C-3＇),71.3 (C-4＇), 14.1 (C-5＇), 56.7 (3-OMe), 172.9, 20.8 (4＇-OAc)] 可初步推测该化合物为含有一个乙酰氧基异戊烯基的联苯类化合物。H-2和H-6与C-7以及H-8和H-12与C-1的HMBC相关性进一步证实了联苯骨架。在δ C134.2 (C-4), 146.7 (C-5), 155.3 (C-10)处的3个信号表明在两个苯环上存在三个羟基，由于H-1'在δ H 3.39处产生的信号与128.7(C-8), 128.2 (C-9), 155.3 (C-10)呈现HMBC 相关，H-2'与C-9存在HMBC相关，因此可确定乙酰氧基异戊烯基在C-9处，δ H 3.88与C-3 (δ C 149.8)的HMBC相关性表明甲氧基连接在分子中的C-3处，至此，该化合物的结构得到确定。
实施例 7
取实施例 2 制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例 6 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 6，分子式为 C20H22O6。确认实施例 2 制备的化合物为所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 8
取实施例 3 制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例 6 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 6，分子式为 C20H22O6。确认实施例 3 制备的化合物为所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 9
取实施例 4 制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例 6 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 6，分子式为 C20H22O6。确认实施例 4 制备的化合物为所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 10
取实施例 5 制备的化合物，为黄色胶状物；按实施例 6 中的方法进行结构测定，结果为：其结构同实施例 6，分子式为 C20H22O6。确认实施例 5 制备的化合物为所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
实施例 11
取实施例 1~5 所制备的任一异戊烯基取代联苯类化合物进行抗轮状病毒活性检测试验，试验情况如下：
细胞株：恒河猴肾细胞系 (MA-104)。
实验设计：MA-104细胞与不同浓度化合物温育 72 小时, 每株细胞的实验均重复2 次, 用 3 次实验的结果进行数据处理, 采用改良 MTT 法评价化合物对细胞增殖的抑制程度, 计算抑制率, 根据抑制率采用 Logit 方法计算 IC50, 比较化合物的体外抗病毒活性。
EC50 即指半数有效浓度，是指引起 50％试验动物产生某一特定反应，或是某反应指标被抑制一半时的浓度。
CC50即指半数细胞毒性浓度，是指对半数细胞产生毒性作用所需浓度。在本实验中，指致 50％细胞死亡所需的药物浓度。
(a)化合物细胞毒性测定
化合物用二甲基亚砜 (dimethylsulfoxide，DMSO)溶解，于微波消毒 l0min，用 MEM配成 lmg/ml 的母液备用，MEM 溶液稀释成所需浓度。96 孔细胞培养板，加 l x l05 /ml浓度的 Mal04 细胞悬液，100 ul/孔，37℃、5%CO2 孵箱培养 24h，在生长良好的单层细胞上分别加入浓度分别为 l mg/ml、0.2 mg/ml、40 ug/ml、8 ug/ml、1.25 ug/ml 的化合物;100ul/孔，每个浓度设 3 个复孔，同时设正常细胞对照。置于 37℃，5%CO2 孵箱继续培养 24h后，MTT 法检测细胞存活率。
(b)化合物对病毒感染预防作用
以细胞浓度为 104/ml，每孔 l00ul 接种细胞于 96 孔板中，培养 24 小时，见细胞长成单层并生长状况良好，用浓度分别为 100 ug/ml、75 ug/ml、50 ug/ml、25 ug/ml、l ug/ml 的化合物在 37℃ 孵箱预先作用细胞 l.5 h，PBS 洗涤后以100TCID50/ml 的轮状病毒每孔 100ul 吸附 lh 后弃去，加 MEM 培养基 100 ul/孔维持，置 37C、5%CO2 孵箱，每日观察细胞病变情况。48h 后以 MTT 法检测病毒抑制率。
(c)化合物对病毒感染治疗作用
以细胞浓度为 104/ml，每孔 l00ul 接种细胞于 96 孔板中，培养 24 小时，见细胞长成单层并生长状况良好，先用以 100TCID50/ml 的轮状病毒每孔100 ul 吸附 lh 后弃去，然后加入上述不同浓度的化合物，100 ul/孔，同上法培养与检测。各组实验均设病毒对照组(C组)和正常细胞对照组(N组)。
(d)细胞存活率测定
采用 MTT 法，在培养 48h 的细胞中加入 5mg/ml 甲基噻唑基四唑 (methylthiazolyl tetrazolium，MTT) 20 ul，继续培养 3-4 h，弃上清，加入 DMSO 每孔 100 ul，振荡使孔内结晶完全溶解后立即在 490lun 波长下测定吸光度 A 值。
细胞存活率=药物组平均 A 值/细胞对照组 A 值 x100%
病毒抑制率=[实验组平均 A 值一病毒对照组平均A值]/[细胞对照组平均A 值一病毒对照组平均 A 值] x 100%
治疗指数(TI)=半数毒性浓度(CC50)/半数抑制浓度(IC50)
(e) 实验结果
实验结果表明：经抗轮状病毒活性实验，选用利巴韦林作为对照，所述化合物对轮状病毒的 CC50和 EC50值分别为 285.3 和 19.6 μmol/L，见表2，其具有较好的抗轮状病毒活性。
表 2 化合物的抗轮状病毒活性
No. CC<sub>50</sub> (<i>µ</i>M) EC<sub>50</sub> (<i>µ</i>M) TI
所述化合物 285.3<u>+</u>1.2 19.6<u>+</u>1.1 14.56
Ribavirin 263.2<u>+</u>1.9 13.3<u>+</u>0.7 19.8
a所有数据均表示为平均值± SD（标准差）; n = 3
TI：治疗指数, CC50/EC50。

Claims (8)

1.一种异戊烯基取代联苯类化合物，其特征在于所述的异戊烯基取代联苯类化合物是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离得到的，该化合物分子式为 C20H22O6，具有下述结构式：
。
2.一种根据权利要求 1 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于是以干燥藤黄科乔木枝条、叶或果实为原料，经浸膏提取、有机溶剂萃取、硅胶柱层析、高压液相色谱分离获得，具体为：
A、浸膏提取：将藤黄科乔木枝条、叶或果实粗粉碎到 20~40 目，用有机溶剂超声提取2~4 次，每次 30~60 min，提取液合并；提取液过滤，减压浓缩提取液至 1/4 ~ 1/2 体积时，静置，滤除沉淀物，浓缩成浸膏 a ；
B、有机溶剂萃取：浸膏a中加入重量比 1~2 倍量的水，用与水等体积的有机溶剂萃取3~5 次，合并有机溶剂萃取相，减压浓缩成浸膏 b；
C、硅胶柱层析：将浸膏 b 用重量比 1.5~3 倍量的有机溶剂溶解，然后用浸膏重 0.8~1.2 倍的 200~300 目硅胶拌样，然后上硅胶柱层析，装柱硅胶为 200~300 目，用量为浸膏b 重量 6~8 倍量；用体积比为 1:0~0:1 的混合有机溶剂梯度洗脱，收集梯度洗脱液、浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
D、反相柱层析：将以 4:1 配比的有机溶剂进行洗脱得到的洗脱液上反相柱层析，反相柱是用反相材料 C-18、C-8 或 ODS 装柱；用体积含量为80~100% 的甲醇水溶液进行梯度洗脱，收集各部分洗脱液并浓缩，经 TLC 监测，合并相同的部分；
E、高效液相色谱分离：将以体积含量 50~100% 甲醇水溶液洗脱得到的洗脱液经高效液相色谱分离纯化，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
3.根据权利要求 2 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于A步骤所述的有机溶剂为 70~100% 的丙酮、乙醇或甲醇。
4.根据权利要求 2 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于B步骤所述的有机溶剂为乙酸乙酯、氯仿、乙醚、石油醚或苯。
5.根据权利要求 2 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于C步骤所述的混合有机溶剂为氯仿-丙酮、氯仿-甲醇、石油醚-丙酮、二氯甲烷-乙酸乙酯或石油醚-乙酸乙酯。
6.根据权利要求 2 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于C步骤所述的混合有机溶剂的体积配比为1:0、4:1、2:1、1:1、0:1。
7.根据权利要求 2 所述的异戊烯基取代联苯类化合物的制备方法，其特征在于E步骤所述的高效液相色谱分离纯化是以 50~80% 的甲醇为流动相，流速 2~5ml/min，9.4×250mm，5μm 的反相制备柱为固定相，紫外检测器检测波长为 254 nm，每次进样 45~60μL，收集7~25min 的色谱峰，多次累加后蒸干，即得所述的异戊烯基取代联苯类化合物。
8.一种根据权利要求 1 所述的异戊烯基取代联苯类化合物在制备抗轮状病毒药物中的应用。
CN201810884456.7A 2018-08-06 2018-08-06 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用 Active CN109485570B (zh)

Priority Applications (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810884456.7A CN109485570B (zh) 2018-08-06 2018-08-06 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用

Applications Claiming Priority (1)

Application Number Priority Date Filing Date Title
CN201810884456.7A CN109485570B (zh) 2018-08-06 2018-08-06 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN109485570A true CN109485570A (zh) 2019-03-19
CN109485570B CN109485570B (zh) 2021-04-09

Family

ID=65689191

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN201810884456.7A Active CN109485570B (zh) 2018-08-06 2018-08-06 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用

Country Status (1)

Country Link
CN (1) CN109485570B (zh)

Cited By (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111747881A (zh) * 2020-07-01 2020-10-09 济南大学 两种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的异戊烯基取代吲哚生物碱及其制备方法和应用

Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105175383A (zh) * 2015-08-12 2015-12-23 云南民族大学 一种联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106831365A (zh) * 2016-12-27 2017-06-13 云南民族大学 一种羟基甲氧基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106928170A (zh) * 2016-12-27 2017-07-07 云南民族大学 一种二氢呋喃联苯类化合物及其制备方法和应用

Patent Citations (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN105175383A (zh) * 2015-08-12 2015-12-23 云南民族大学 一种联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106831365A (zh) * 2016-12-27 2017-06-13 云南民族大学 一种羟基甲氧基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106928170A (zh) * 2016-12-27 2017-07-07 云南民族大学 一种二氢呋喃联苯类化合物及其制备方法和应用

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN111747881A (zh) * 2020-07-01 2020-10-09 济南大学 两种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的异戊烯基取代吲哚生物碱及其制备方法和应用
CN111747881B (zh) * 2020-07-01 2023-02-28 济南大学 两种具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的异戊烯基取代吲哚生物碱及其制备方法和应用

Also Published As

Publication number Publication date
CN109485570B (zh) 2021-04-09

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN104860912B (zh) 一种二聚色酮类化合物及其制备方法和应用
CN105884621B (zh) 一种倍半萜类化合物及其制备方法和应用
CN105294720B (zh) 一种二聚色酮生物碱类化合物及其制备方法和应用
CN104945360B (zh) 烟草中一种苯丙素类化合物的制备方法和应用
CN105348192B (zh) 一种翅荚决明中抗病毒活性的异喹啉生物碱类化合物及其制备方法
CN106858710B (zh) 一种能改善卷烟抽吸效果的苯并异呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN104761526B (zh) 一种具有抗病毒活性的异黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN105175383B (zh) 一种联苯类化合物及其制备方法和应用
CN105440092B (zh) 一种油茶粕中黄酮苷的快速制备方法
CN106831365A (zh) 一种羟基甲氧基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106588838A (zh) 马齿苋中羟基二氢博伏内酯及其提取分离方法
CN106957322B (zh) 一种能改善卷烟抽吸喉部舒适性的异苯并呋喃类化合物及其制备方法与应用
CN109265423A (zh) 一种色酮类化合物及其制备方法和应用
CN104974122B (zh) 一种源自烟草的香豆素化合物、其制备方法和用途
CN107056743B (zh) 一种缩酚酸环醚化合物及其制备方法和应用
CN106928170A (zh) 一种二氢呋喃联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106008422B (zh) 一种苯并内酯类化合物、其制备方法和在制备抗癌药物中的应用
CN109485570A (zh) 一种异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN103232427B (zh) 一种呫吨酮类化合物及其制备方法和应用
CN109485569A (zh) 一种乙酰氧基异戊烯基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN106083556A (zh) 马齿苋中甘菊蓝结构新化合物及其提取分离方法
CN102764320B (zh) 山大颜提取物及其制备方法与抗肿瘤应用
CN109053447A (zh) 一种异戊烷基取代联苯类化合物及其制备方法和应用
CN104829580A (zh) 烟草所含的异黄酮类化合物及其制备方法和应用
CN106008219B (zh) 一种倍半萜类化合物、其制备方法及在制备抗轮状病毒药物中的应用

Legal Events

Date Code Title Description
PB01 Publication
PB01 Publication
SE01 Entry into force of request for substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
GR01 Patent grant
GR01 Patent grant