CN107006708A - 一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂、其制备方法和应用 - Google Patents

一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂、其制备方法和应用 Download PDF

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Abstract

本发明公开了一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂、其制备方法和应用，属于兽用复合中药制剂技术领域。所述复合中药制剂是由中药成分与菌液混合后经异步发酵制成，所述菌液为植物乳杆菌菌液与枯草芽孢杆菌菌液；其中药各组分的重量份数组成为黄芪15～25份、党参10～20份、白术5～15份、茯苓5～15份、当归5～15份、马齿苋3～10份、甘草3～10份。本发明方法选取的中药组分结构合理、比例适当，在选用的植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌的作用下，显著地提高了原有药物的药效，提高了动物肠道内有益菌比例；使用本发明的复合中药制剂可以提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力。

Description

一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂、其制备方法和 应用
技术领域
本发明属于兽用复合中药制剂技术领域，具体涉及一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂、其制备方法和应用。
背景技术
断奶是养猪生长过程中最重要的环节之一，仔猪在断奶期间会由于多方面的因素而引起应激，从而导致在断奶后的第1～2周出现生长抑制，甚至腹泻。断奶应激主要表现为仔猪腹泻，粪便呈灰白或灰色。断奶仔猪腹泻死亡率高，即使治愈也会影响仔猪的生长发育，甚至成为僵猪，给养殖户带来经济损失。
抗生素一直是缓解仔猪断奶应激最好的饲料添加剂，不但能有效防治仔猪应激腹泻，且能够提高仔猪的日增重。因抗生素使动物及人体产生耐药性及污染环境等缺点而被禁用，人们一直寻求能够替代抗生素的饲料添加剂。
益生菌不仅能通过改善肠道微生态平衡促进机体健康，而且能够减少养殖环境及粪便中氨气等有害物质的含量，减少畜牧业对环境造成的污染，保护生态环境，具有明显的经济效益和社会效益。
发明内容
针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种天然安全、快速有效的复合中药制剂以及制备该制剂的方法，同时，提供一种含有该复合中药制剂且具有提高仔猪生长性能、免疫力和抗氧化力的饲料。
为了到达上述目的，本发明采用以下技术方案予以实现：
一种仔猪用中药组合物，是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪15～25份、党参10～20份、白术5～15份、茯苓5～15份、当归5～15份、马齿苋3～10份、甘草3～10份。
在上述方案的基础上，所述仔猪用中药组合物，是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪20份、党参15份、白术10份、茯苓10份、当归10份、马齿苋5份、甘草5份。
一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，是由中药成分与菌液混合后经异步发酵制成，所述菌液为植物乳杆菌菌液与枯草芽孢杆菌菌液。
在上述方案的基础上，所述异步发酵为先接入枯草芽孢杆菌菌液进行有氧发酵，再接入植物乳杆菌进行厌氧发酵。
在上述方案的基础上，所述植物乳杆菌菌液中菌含量≥108CFU/mL，枯草芽孢杆菌菌液中菌含量≥109CFU/mL。
在上述方案的基础上，所述中药成分是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪15～25份、党参10～20份、白术5～15份、茯苓5～15份、当归5～15份、马齿苋3～10份、甘草3～10份。
在上述方案的基础上，所述中药成分是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪20份、党参15份、白术10份、茯苓10份、当归10份、马齿苋5份、甘草5份。
在上述方案的基础上，所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂的制备方法，步骤如下：
(1)按量取中药组分，粉碎，过20目筛网，备用；
(2)将粉碎后的各组分混合均匀，加入占中药重量30％的小麦麸皮和占物料总重量80％～100％的水，搅拌均匀；
(3)车间使用过氧化氢消毒器进行干雾灭菌，设置发酵室温度30℃～32℃，湿度80％～85％；木制曲盘用0.2％高锰酸钾浸泡1～2h后擦干备用；
(4)将(2)中制备好的物料放入高压锅灭菌，物料厚度≤30cm，灭菌1.5h～2h，同时将曲盘盖布后进行高压灭菌，压力1.0～1.2kgf/cm2；
(5)灭菌后物料通过传输带降温至35℃～37℃；
(6)向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，菌种接种量为10％，搅拌均匀，调初始pH值为6.5；
(7)装盘发酵：盘内发酵物料厚度为2cm～3cm，盖上盖布，发酵时间72h；其中在发酵4h后物料温度升高，设置发酵室温度28℃～30℃；发酵50h后设置发酵室温度33℃～35℃；发酵期间在曲盘盖布上喷洒无菌水保持湿润；
(8)向发酵后物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖后，再加入植物乳杆菌菌液，接种量为10％，于密闭发酵罐中厌氧发酵48h，即得复合中药制剂。
在上述方案的基础上，所述的异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂的用途，是用于提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力。
一种提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力的饲料，在仔猪饲料中添加上述方法制备的仔猪用复合中药制剂，添加量为每吨饲料中添加2kg。
本发明复合中药制剂中，各中药的药性药效如下：
黄芪：为豆科多年生草本植物主要为膜荚黄芪，亦有内蒙黄芪的干燥根，野生或栽培，含生物碱、叶酸、结晶性中性物质、胆碱、氨基酸等主要成分，具有补气升阳、固表止汗、利水消肿、托毒排脓等功效。
党参：主要成分为生物碱、皂甙、蛋白质、淀粉、维生素B1、维生素B2等，具有补中益气、补血、降压、祛痰镇咳等功效。
白术：为菊科多年生草本植物白术的干燥根茎。多为栽培，亦有野生。主要成分为挥发油，其中主要为苍术醇，另含白术酮、维生素A类等物质。具有补脾益气、燥湿利水等功效。
茯苓：为寄菌多孔菌科茯苓的干燥菌核。野生者多寄生于赤松或生真马尾松的根部，大量商品均为人工栽培。主要含茯苓糖、茯苓酸、蛋白质、脂肪、卵磷脂、组胺酸、胆碱、麦角甾醇和钾盐等成分，主要功效为利水渗湿，益脾宁心。
当归：别名秦归、西归，为伞形科多年生草本植物当归的干燥根。栽培品。主要含挥发油和一种能兴奋子宫的成分，又含蔗糖、维生素B12等物质；具有补血、行血、润肠、调经等功效。
马齿苋：别名长寿菜、马屈菜，为马齿苋科一年生草本植物马齿苋的干燥地上全草，野生。茎叶含烟酸、皂甙、鞣质、尿素等，并含硝酸钾、氯化钾、硫酸钾及其它钾盐。其提取物经检定，含左旋去甲腺素等。具有清热解毒，抗菌利尿等作用。
甘草：别名甜甘草，为豆科多年生草本植物甘草和光果甘草等的干燥根和根状茎(芦头)，多为野生。含甘草甜素、甘草黄素、葡萄糖、甘露醇、苹果酸、天门冬酰胺等主要成分，具有补脾益气、清热解毒、润肺止咳等功效。
所述植物乳杆菌菌种为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarumsubsp.Plantarum)，编号AS1.557，来源于中国科学院微生物研究所。
所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为产淀粉酶、蛋白酶和果胶酶的菌种，编号为AS1.942，来源于中国科学院微生物研究所。
本发明的技术原理：
本方中黄芪补中益气、健脾固表、调和应急为君；臣以甘温党参、苦温白术、甘淡茯苓加强益气助运之力，健脾渗湿，苓术相配，则健脾祛湿之功益著。又佐以当归，可以补脾土而泻肝木，调气机以止痛泻；马齿苋清热解毒、凉血止泻，使以甘草益气和中，调和诸药。
本发明的有益效果：
本发明复合中药制剂具有以下特点：(1)该中药组方益气健脾，和中止泻，可有效提高仔猪生长性能、免疫力和抗氧化力。(2)本发明选用的枯草芽孢杆菌在代谢过程中可分泌蛋白酶、果胶酶、淀粉酶等胞外酶进入培养基，分解蛋白质、果胶、淀粉等物质成分，破坏细胞壁，加强细胞内容物溶出。(3)本发明选用的植物乳杆菌通过酸化作用，进一步强化细胞壁的破坏与溶出。(4)在本发明选用的枯草芽孢杆菌和植物乳杆菌的作用下，促使本发明药物活性成分最大限度的释放，增强了原有药物的功能；且发酵后细菌的代谢产生了新的活性物质，进一步补充了本发明药物的功能。
本发明方法选取的中药组分结构合理、比例适当，选用的植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌具有活性高、抗逆性强、可调节肠道菌群等优势，在本发明所选取的植物乳杆菌和枯草芽孢杆菌的作用下，显著地提高了原有药物的药效，提高了肠道内有益菌比例，使用本发明的发酵药物可以提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力。
具体实施方式
以下结合较佳实施例，对依据本发明提供的具体实施方式详述如下：
实施例1
菌液的制备：
将植物乳杆菌菌种接种于活化培养基进行培养，培养温度为37℃，时间24h；将活化好的菌种接种于发酵罐中，控制温度37℃～43℃，时间24h～36h，制备发酵液。
所述活化培养基为：MRS培养基，成分为(g/L)：蛋白胨10.0、肉膏10.0、酵母浸粉5.0、葡萄糖20.0、磷酸氢二钾2.0、柠檬酸氢二铵2.0、乙酸钠5.0、硫酸镁0.58、硫酸锰0.28、半胱氨酸0.5、吐温801.0，调pH 6.2-6.4。
发酵所用培养基为：MRS培养基，成分同上。
发酵完成后，菌液中植物乳杆菌的含量≥1亿/mL。
所述植物乳杆菌菌种为植物乳杆菌植物亚种(Lactobacillus plantarumsubsp.Plantarum)，编号AS1.557，来源于中国科学院微生物研究所。
将枯草芽孢杆菌菌种接种于活化培养基进行活化培养，培养温度为30℃，时间24h；将活化好的菌种接种于发酵罐中，控制温度30℃～35℃，转速80～150rpm，搅拌培养，通无菌风，通气比为0.8～1.2，时间24h～36h。
所述活化培养基和所述发酵所用培养基为：PBY培养基，成分为(g/L)：蛋白胨10.0、牛肉膏5.0、酵母膏5.0、葡萄糖5.0、氯化钠5.0，调pH 7.0-7.2。
发酵所用培养基为：PBY培养基，成分同上。
发酵完成后，菌液中枯草芽孢杆菌的含量≥10亿/mL。
所述枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)为产淀粉酶、蛋白酶和果胶酶的菌种，编号为AS1.942，来源于中国科学院微生物研究所。
实施例2
一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其各中药组分的重量份数为：黄芪20份、党参15份、白术10份、茯苓10份、当归10份、马齿苋5份、甘草5份。
具体制备方法如下：
(1)按量取中药组分，粉碎，过20目筛网，备用；
(2)将粉碎后的各组分混合均匀，加入占中药重量30％的小麦麸皮和占物料总重量80％～100％的水，搅拌均匀；
(3)车间使用过氧化氢消毒器进行干雾灭菌，设置发酵室温度30℃～32℃，湿度80％～85％；木制曲盘用0.2％高锰酸钾浸泡1～2h后擦干备用；
(4)将(2)中制备好的物料放入高压锅灭菌，物料厚度≤30cm，灭菌1.5h～2h，同时将曲盘盖布后进行高压灭菌，压力1.0～1.2kgf/cm2；
(5)灭菌后物料通过传输带降温至35℃～37℃；
(6)向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，菌种接种量为10％，搅拌均匀，调初始pH值为6.5；
(7)装盘发酵：盘内发酵物料厚度为2cm～3cm，盖上盖布，发酵时间72h；其中在发酵4h后物料温度升高，设置发酵室温度28℃～30℃；发酵50h后设置发酵室温度33℃～35℃；发酵期间在曲盘盖布上喷洒无菌水保持湿润；
(8)发酵结束后测得pH值为7.5左右，枯草芽孢杆菌菌数≥10亿/g；
(9)向发酵后物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖后，再加入植物乳杆菌菌液，接种量为10％，于密闭发酵罐中厌氧发酵48h；
(10)发酵结束后测得pH值为4.5左右，枯草芽孢杆菌菌数≥1亿/g，植物乳杆菌菌数≥10-1亿/g，即得复合中药制剂。
实施例3
一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其各中药组分的重量份数为：黄芪15份、党参10份、白术5份、茯苓5份、当归5份、马齿苋3份、甘草3份。
其他制备方法与实施例2相同。
实施例4
一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其各中药组分的重量份数为：黄芪25份、党参20份、白术15份、茯苓15份、当归15份、马齿苋10份、甘草10份。
其他制备方法与实施例2相同。
一、发酵前后中药成分变化对比试验
1.1试验组方
1.1.1传统工艺制备的非发酵中药制剂组(将本发明实施例2所选取的药物进行超微粉碎，粉碎至700目，混合均匀)。
1.1.2有氧发酵制剂组(将本发明实施例2所选取的药物经枯草芽孢杆菌有氧发酵，而不进行植物乳杆菌的厌氧发酵)。
1.1.3实施例2组
1.1.4实施例3组
1.1.5实施例4组
1.2试验方法
1、取中药超微粉、有氧发酵制剂、实施例2、实施例3和实施例4共5组试验样品各300g，设3个平行，每个平行100g样品，各加入蒸馏水600mL，浸泡1h后再小火煎煮1.5h。边加热边加水，保持水量不变。1h后用2层纱布滤过，滤渣加水继续煎煮1h，再用2层纱布滤过，合并滤液。沉淀后取上清液进行5000rpm离心处理，取上清液待测；
2、再取5组试验样品各300g，设3个平行，每个平行100g样品，加入含3％(g/mL)氢氧化钠和60％(mL/mL)乙醇的碱性醇液600mL浸泡0.5h，加热回流提取2次(1.5h、1h)，合并2次提取液，5000rpm离心后取上清液待测；
3、超微粉组、有氧发酵组中药组分同实施例2组；
4、将各试验组水提上清液取1mL于250mL容量瓶中加蒸馏水定容至刻度混匀，检测；
5、将各试验组醇提上清液取1mL于250mL容量瓶中加95％乙醇定容至刻度混匀，检测。
1.3试验结果
分别以超微粉组相应提取液为空白对照，于500nm处测吸光度，取平均值。结果见表1：
表1发酵前后中药成分变化对比试验
由表1可知，通过枯草芽孢杆菌有氧发酵和植物乳杆菌厌氧发酵后，中药溶出成分大大增加，且异步发酵后比单一有氧发酵溶出物增加。
二、药效试验
2.1试验组方
2.1.1传统工艺制备的非发酵中药制剂组(将本发明实施例2所选取的药物进行超微粉碎，粉碎至700目，混合均匀。)
2.1.2实施例2组
2.1.3实施例3组
2.1.4实施例4组
2.1.5空白对照组
2.2动物实验设计
选取28日龄、体重相近、健康无病的杜长大三元杂交仔猪120头，随机分为5个试验组，饲料中分别添加超微粉、实施例2、实施例3或实施例4的复合中药制剂，添加量为2kg/吨；另设一空白对照组；每个试验组24头，分别采食1种试验饲粮，试验期28天。免疫和管理按猪场常规进行。
2.3试验饲粮
基础日粮采用玉米、豆粕型，参照NRC(1998)猪饲养标准配制而成，具体日粮组成和营养水平见表2。
表2基础日粮组成及营养水平
注：预混料向每kg日粮提供Cu 180mg，Fe 220mg，Mn 55mg，Zn 210mg，I 0.3mg，Se0.3mg，Co 0.3mg，VA 15000IU，VD 33700IU，VE 50IU，VK 4.5mg，VB1 4mg，VB2 12mg，VB67.5mg，VB12 35μg，生物素150μg，泛酸35mg，叶酸2.5mg，烟酰胺50mg，氯化胆碱550mg。
2.4测定指标及方法
2.4.1断奶仔猪日增重情况测定
试验仔猪分别于0、14和28天空腹12h后进行称重、记录，以计算不同时期及全期仔猪的增重情况。
对0～28d仔猪腹泻情况评定：观察并记录试验期每头仔猪每天的腹泻情况，其计算公式为：腹泻率＝试验期腹泻仔猪头次/(试验猪头次×试验天数)×100％
2.4.2断奶仔猪盲肠微生物菌群的测定
试验结束后，每组随机选取仔猪5头，打开腹腔，结扎盲肠两端，切下盲肠。在无菌操作台中，准确称取盲肠内容物1g放于盛有99mL灭菌生理盐水的三角瓶中，充分振荡，取稀释液进行10倍的倍比稀释，吸取0.1mL稀释液接种于选择性培养基上。
其中，大肠杆菌用伊红美蓝琼脂培养基37℃培养48h后进行菌落计数；乳酸菌用MRS培养基37℃培养48h后进行菌落计数；双歧杆菌用BL培养基37℃厌氧培养48h后进行菌落计数。
2.4.3断奶仔猪血清抗氧化指数的测定
试验第21天，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。
抗氧化指标的测定：采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA)，试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买。具体步骤按试剂盒说明书操作。
2.4.4断奶仔猪血清免疫指标的测定
试验第28d，各试验组随机选取健康状况良好、体重相近的仔猪5头，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。
血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。
2.5数据分析
所有采集数据采用Excel软件进行前期处理，然后用SPSS19.0进行统计分析，LSD进行多重比较，结果采用平均值±标准差表示。
三、结果与分析
3.1复合中药制剂对断奶仔猪日增重和腹泻率的影响，见表3。
表3复合中药制剂对断奶仔猪日增重和腹泻率的影响
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表3可知，0～14d日增重，超微粉组较对照组提高5.97％，但无显著性差异(P>0.05)；实施例2、3和4组分别比对照组显著提高7.68％、7.63％和7.67％(P<0.05)，较超微粉组分别提高1.62％、1.56％和1.60％，但无显著性差异(P>0.05)。
15～28d日增重，超微粉组较对照组提高6.44％(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著提高45.97％、45.17％和45.64％(P<0.05)，较超微粉组分别显著提高37.14％、36.38％和36.82％(P<0.05)。
0～28d日增重，超微粉组比对照组提高6.15％(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著提高29.37％、27.77％和28.89％(P<0.05)，较超微粉组分别显著提高21.88％、20.36％和21.42％(P<0.05)。
0～28d仔猪腹泻率，各试验组均低于对照组，其中实施例2组仔猪腹泻率最低。
3.2复合中药制剂对断奶仔猪盲肠微生物菌群的影响，见表4。
表4复合中药制剂对断奶仔猪盲肠微生物菌群的影响
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表4可知，大肠杆菌数量实施例2、3和4组均显著低于对照组(P<0.05)；超微粉组大肠杆菌数量低于对照组但无显著性差异(P>0.05)。
乳酸菌和双歧杆菌数量实施例2、3和4组均显著高于对照组(P<0.05)，其中乳酸菌数量显著高于超微粉组(P<0.05)。超微粉组乳酸菌和双歧杆菌数量高于对照组，但差异不显著(P>0.05)。
3.3复合中药制剂对断奶仔猪抗氧化性能的影响，见表5。
表5复合中药制剂对断奶仔猪抗氧化性能的影响
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表5可知，断奶仔猪血清中T-SOD含量超微粉组较对照组提高14.66％，无显著性差异(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著提高了40.52％、39.89％和40.28％(P<0.05)，较超微粉组分别显著提高了22.56％、22.01％和22.34％(P<0.05)。
断奶仔猪血清中GSH含量各试验组与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。
断奶仔猪血清中MDA含量超微粉组较对照组降低51.64％，无显著性差异(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著降低62.96％、62.76％和62.80％(P<0.05)，较超微粉组分别降低23.41％、22.99％和23.07％(P>0.05)。
3.4复合中药制剂对断奶仔猪免疫器官指数的影响，见表6。
表6复合中药制剂对断奶仔猪血清免疫指标的影响
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表6可知，仔猪血清中IgA含量实施例2、3和4组高于对照组和超微粉组但无显著性差异(P>0.05)。
IgG含量超微粉组较对照组提高2.41％，差异不显著(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著提高42.10％、30.86％和36.48％(P<0.05)，较超微粉组分别显著提高38.76％、27.78％和33.27％(P<0.05)。
IL-4含量超微粉组较对照组提高3.98％，差异不显著(P>0.05)；实施例2、3和4组较对照组分别显著提高38.28％、31.58％和35.74％(P<0.05)，较超微粉组分别显著提高32.98％、26.54％和30.54％(P<0.05)。
四、药理学毒性试验
4.1急性毒性试验资料
4.1.1检测试剂：血清AST、ALT检测试剂盒购自南京建成生物工程研究所。
4.1.2检测设备
Micro-200半自动生化检测仪，分析天平，解剖器械，注射器，试管等。
4.1.3试验方法
选取体重为18～22g的ICR鼠100只，经3天适应性饲养后，随机均分为5组(雌雄各半)，超微粉组、实施例2组、实施例3组、实施例4组和空白对照组，每组各20只；空白对照组灌胃生理盐水，超微粉组所用超微粉选用本发明实施例2中的中药组合物进行超微粉碎得到的超微粉；超微粉组将超微粉溶于水中灌服，实施例2组、实施例3组、实施例4组分别将各实施例制备的复合中药制剂溶于水中灌服，超微粉组、实施例2组、实施例3组、实施例4组的药物添加量为0.1g/mL，0.4mL/次，一天3次，连续7天。
4.1.4测定指标及方法
(1)临床症状观察：每日观察试验鼠的精神状态、饮食情况，每日记录发病死亡情况。
(2)病理学观察：对于死亡鼠进行剖检观察内脏变化。
(3)生长指标观察：对试验鼠进行定期称重；试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重脏器指数测定：剖检大鼠，取心脏、脾脏、肝脏、肾脏、睾丸、卵巢，称重，按照下式计算脏器指数：脏器指数＝脏器重/体重×100。
(4)肝脏功能变化观察：试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST、ALT。
4.2数据处理与分析
所有采集数据采用Excel软件进行前期处理，然后用SPSS 19.0进行统计分析，LSD进行多重比较，结果采用平均值±标准差表示。
4.2.1临床症状观察
对照组和试验组鼠，精神状态和饮食欲、对外界反应能力未见明显的异常。各组鼠发病和死亡情况如下表7。
表7 ICR鼠发病和死亡情况
分组 总数 死亡(只) 死亡率(％)
超微粉 20 0 0
实施例2组 20 0 0
实施例3组 20 0 0
实施例4组 20 0 0
对照组 20 0 0
4.2.2病理学观察：对照组和试验组，鼠扑杀后进行剖检眼观未见观察内脏器官明显的病理变化。
4.2.3生长指标观察：试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重分析见表8。
表8各脏器指数分析
分组 肝脏指数 心脏指数 肾脏指数 肺脏指数 脾脏指数
超微粉 54.01±1.25a 4.49±0.18a 13.39±0.25a 6.68±0.40a 4.65±0.51a
实施例2组 54.19±1.09a 4.67±0.23a 13.46±0.20a 6.77±0.33a 4.89±0.50a
实施例3组 54.11±1.18a 4.55±0.19a 13.41±0.17a 6.72±0.41a 4.80±0.48a
实施例4组 54.18±1.15a 4.61±0.25a 13.45±0.24a 6.77±0.35a 4.83±0.45a
对照组 53.88±1.39a 4.22±0.28a 13.33±0.22a 6.65±0.42a 4.49±0.60a
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表8可知，各脏器指数分析，各试验组与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。
4.2.4肝脏功能变化观察
试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)见表9。
表9 AST和ALT测定
分组 总数 ALT AST
超微粉 20 39.11±2.12a 105.41±4.04a
实施例2组 20 39.26±1.97a 105.71±4.33a
实施例3组 20 39.20±2.24a 105.66±4.00a
实施例4组 20 39.25±2.21a 105.68±3.91a
对照组 20 39.09±2.37a 105.38±4.71a
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表9可知，各组数据与空白对照组相比差异不显著，都处于正常范围内。
4.3长期毒性试验资料
根据实施例2制备的本发明发酵制剂，20g/kg、100g/kg给1月龄ICR鼠连续灌胃给药1个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常；动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异；病理组织学检查表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种仔猪用中药组合物，其特征在于：是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪15～25份、党参10～20份、白术5～15份、茯苓5～15份、当归5～15份、马齿苋3～10份、甘草3～10份。
2.根据权利要求1所述仔猪用中药组合物，其特征在于：是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪20份、党参15份、白术10份、茯苓10份、当归10份、马齿苋5份、甘草5份。
3.一种异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其特征在于：由中药成分与菌液混合后经异步发酵制成，所述菌液为植物乳杆菌菌液与枯草芽孢杆菌菌液。
4.根据权利要求3所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其特征在于：所述异步发酵为先接入枯草芽孢杆菌菌液进行有氧发酵，再接入植物乳杆菌进行厌氧发酵。
5.根据权利要求3所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其特征在于：所述植物乳杆菌菌液中菌含量≥1亿/mL，枯草芽孢杆菌菌液中菌含量≥10亿/mL。
6.根据权利要求3-5所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其特征在于：所述中药成分是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪15～25份、党参10～20份、白术5～15份、茯苓5～15份、当归5～15份、马齿苋3～10份、甘草3～10份。
7.根据权利要求6所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂，其特征在于：所述中药成分是由以下组分按重量份数制备而成：黄芪20份、党参15份、白术10份、茯苓10份、当归10份、马齿苋5份、甘草5份。
8.根据权利要求3-7任一项所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂的制备方法，其特征在于：步骤如下：
(1)按量取中药组分，粉碎，过20目筛网，备用；
(2)将粉碎后的各组分混合均匀，加入占中药重量30％的小麦麸皮和占物料总重量80％～100％的水，搅拌均匀；
(3)车间使用过氧化氢消毒器进行干雾灭菌，设置发酵室温度30℃～32℃，湿度80％～85％；木制曲盘用0.2％高锰酸钾浸泡1～2h后擦干备用；
(4)将(2)中制备好的物料放入高压锅灭菌，物料厚度≤30cm，灭菌1.5h～2h，同时将曲盘盖布后进行高压灭菌，压力1.0～1.2kgf/cm2；
(5)灭菌后物料通过传输带降温至35℃～37℃；
(6)向冷却后的物料中加入枯草芽孢杆菌菌液，菌种接种量为10％，搅拌均匀，调初始pH值为6.5；
(7)装盘发酵：盘内发酵物料厚度为2cm～3cm，盖上盖布，发酵时间72h；其中在发酵4h后物料温度升高，设置发酵室温度28℃～30℃；发酵50h后设置发酵室温度33℃～35℃；发酵期间在曲盘盖布上喷洒无菌水保持湿润；
(8)向发酵后物料中加入重量为1.5％的无菌葡萄糖后，再加入植物乳杆菌菌液，接种量为10％，于密闭发酵罐中厌氧发酵48h，即得复合中药制剂。
9.一种权利要求3-7任一项所述异步发酵法制备的仔猪用复合中药制剂的用途，其特征在于：用于提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力。
10.一种提高仔猪的生长性能、免疫力和抗氧化力的饲料，其特征在于：在仔猪饲料中添加权利要求8所述方法制备的仔猪用复合中药制剂，添加量为每吨饲料中添加2kg。
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