CN107927338A - 一种抗霉菌毒素的药物、其制备方法及应用 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种抗霉菌毒素的药物、其制备方法及应用，属于畜禽药物技术领域。本发明的药物是由酿酒酵母细胞壁8～15份、植物提取物8～16份、枯草芽孢杆菌6～14份、活性辅酶2～6份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比4～15∶2～5∶2～6∶1～4组成。本发明的药物各组分之间相互作用，共同达到脱毒、解毒、排毒的功效，减少动物患病率及死亡率；还可调节免疫力、增强肝脏解毒功能，且对营养成分没有吸附作用，利于动物营养均衡摄入，健康成长。

Description

一种抗霉菌毒素的药物、其制备方法及应用
技术领域
本发明属于畜禽药物技术领域，具体涉及一种抗霉菌毒素的药物、其制备方法及应用。
背景技术
霉菌毒素是霉菌在生长过程中产生的对动物、人类和作物具有较大毒性的次级代谢物。目前已知的霉菌毒素种类超过300多种。畜牧生产中常见并能直接影响动物生长生产性能和健康状况的霉菌毒素主要由四种霉菌属产生：曲霉菌属(主要分泌黄曲霉毒素、赭曲霉毒素等)、青霉菌属(主要分泌桔霉毒素)、麦角菌属(主要分泌麦角毒素)、梭菌属(主要分泌呕吐毒素、玉米赤霉烯酮、T-2毒素、串珠镰孢菌毒素等)。各种霉菌所产生的毒素各不相同，造成的危害程度也不相同。其中，毒性最大的有：黄曲霉素、赭曲霉毒素、蛇形毒素、腐马毒素、玉米赤霉稀酮、呕吐毒素、T2毒素等。这些毒素对整个畜牧行业的发展乃至人类的健康都造成了不可估量的危害。霉菌毒素对猪造成的主要危害在于：①各种疾病的发病率上升：蓝耳病、圆环病毒、伪狂犬病、猪瘟、衣原体病、弓红虫病等经常困扰；②生产性能下降：采食量下降或者拒食，导致猪群生长缓慢，饲料报酬降低，瘦肉率也大大降低；③机体组织器官受损：肠道损伤，腹泻增加；肾脏病变，血尿水便；肝脏损伤，功能下降；肺脏受损，急性肺水肿增多等；④猪群免疫力下降：疫苗的保护力大大降低，猪群混染严重，药物治疗效果差，死亡率大大增加。
谷物(饲料原料)在田间生长、收获、储存、加工和饲喂的过程中都有可能感染霉菌从而导致霉菌毒素的产生。饲料霉菌毒素的危害已是影响全球养殖业的一个严重问题。据联合国粮农组织调查，全世界每年被霉菌污染的谷物、油料种子和饲料约占其总量的25％左右。2006～2007年，奥特奇公司对亚洲地区所采集的800多个样品检测发现，原料粮、饲料等的玉米赤霉烯酮、去氧瓜萎镰刀醇、串珠镰孢菌毒素、黄曲霉毒素的阳性检出率均在90％以上。敖志刚等对225个样品检测发现，玉米、全价饲料、蛋白饲料、玉米副产品(玉米胚芽粕、玉米蛋白粉、玉米酒糟等)奶牛混合饲料，青贮饲料的6种霉菌毒素检出率平均达93.2％，最高的呕吐毒素达99.1％，超标率平均为29.6％，超标最高的呕吐毒素达53.5％。2009年农业部对来自于全国的32个玉米样品，46个蛋白原料样品，23个全价饲料样品进行检测发现，黄曲霉菌毒素污染最严重，玉米赤霉烯酮第二，T-2毒素、呕吐毒素、烟曲霉毒素、赭曲霉毒素污染普遍存在。所有样品都检测出黄曲霉菌毒素和呕吐毒素，89％的玉米样品呈赤霉烯酮阳性反应，并通常被三种或三种以上霉菌毒素污染，80％的豆粕同时含有黄曲霉菌毒素、T-2毒素和玉米赤霉烯酮三种毒素。2011年，百奥明公司对来自世界各地的4327样品进行了13854样次的检测，各霉菌毒素阳性检出率分别为：黄曲霉毒素27％，玉米赤霉烯酮40％，呕吐毒素59％，烟曲霉毒素51％、赭曲霉毒素27％。
通过剔除发霉或破损的籽粒，脱去含毒素较多的籽粒外皮或胚芽，清水淘洗，阳光爆晒、辐射、加热等方法，可以减少霉菌数量和降低霉菌毒素的毒性，但该方法难以彻底消除霉菌所产生的毒素。近些年在市场上已出现了多种天然或合成的霉菌毒素清除剂，用来去除饲料和原料中已污染的霉菌和霉菌毒素，按其作用方式，可以分为如下几类：物理脱毒法、化学脱毒法、生物脱毒法等几种。
(1)物理脱毒：其原理是通过在饲料中添加可以吸附霉菌毒素物质，使毒素在经过动物肠道时不被动物所吸收，直接排出体外。目前所用的吸附剂对黄曲霉毒素的吸附作用受多种因素的影响，存在吸附力小及效率低等问题；而高效吸附剂不仅能够吸附黄曲霉毒素，对一些营养物质如氨基酸、维生素、微量元素等也具有吸附作用，在除去黄曲霉毒素的同时也降低了饲粮的营养价值。
(2)化学脱毒。某些霉菌毒素可被部分的化学药物破坏降解，如通常用碱水洗涤发霉的籽粒，用氨水或硫酸铜溶液浸泡发霉饲料。但该方法存在如下弊端：不同的化学物质往往只对某种毒素有效而对其它毒素不能降解，使用的化学物质在饲料中残留而产生新的有毒有害作用。
(3)生物脱毒。主要有酶解法和微生物发酵法，酶解法是通过酶解反应使霉菌毒素的功能基团/毒性失活。该方法受到的限制因素有，从本质上说，酶也是蛋白质，其活力可受pH，温度及受质(霉菌毒素)的影响。该方法的缺陷在于：饲料未必能提供适合该种酶的作用环境；酶对受质的选择专一性的程度非常高，有时是绝对性的，因此此类方法同样仅对某种毒素有一定作用；酶解后的次级产物有可能有毒性；酶不耐热，在饲料加工过程容易失活。微生物发酵法的作用缓慢，不适用于饲料厂和养殖场。因此，使用生物脱毒法成本较高且效果不稳定，所以在生产实践中尚难推广应用。
(4)正常菌群以及中草药脱毒法。近年来，有在饲料中添加乳酸菌用来去除黄曲霉毒素的报道，主要是通过保持肠道菌群平衡，增强机体的免疫力以减轻毒素的危害。该方法对毒素没有特异性，只停留在实验阶段，离实际应用相差甚远。
目前，对霉菌毒素常用的防治方法是在饲料中添加脱霉剂。常用的脱霉剂种类有黏土类、酵母细胞壁类、微生物类、酶解类和中草药类等。但是单一一种方法存在着缺陷和弊端，不能有效遏制霉菌毒素的危害；尽管市场上也有一些复合成分脱霉剂，但作用单一，使用效果也相差比较大。
发明内容
针对现有技术的不足，本发明的目的在于提供特异性吸附霉菌毒素，提高动物免疫力，增强肝脏解毒能力的抗霉菌毒素药物。
为了达到以上目的，本发明的技术方案如下：
一种植物提取物，由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比4～15∶2～5∶2～6∶1～4组成。
在上述方案的基础上，所述植物提取物，由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11～12∶2～5∶2～3∶1～2组成。
在上述方案的基础上，所述植物提取物，由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
在上述方案的基础上，所述植物提取物的制备方法，步骤如下：
①称取各中药组分，加入10倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
②向上述滤渣中加入8倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
③合并①②中的滤液，浓缩至1/6重量的稠膏状；
④将③中的稠膏真空干燥，粉碎，过80目筛，得植物提取物。
在上述方案的基础上，所述植物提取物在处理霉变饲料、提高动物免疫力、增强肝脏解毒能力中的应用。
一种抗霉菌毒素的药物，由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁8～15份、植物提取物8～16份、枯草芽孢杆菌6～14份、活性辅酶2～6份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比4～15∶2～5∶2～6∶1～4组成。
在上述方案的基础上，所述抗霉菌毒素的药物，所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11～12∶2～5∶2～3∶1～2组成。
在上述方案的基础上，所述抗霉菌毒素的药物，由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁13份、植物提取物10份、枯草芽孢杆菌8份、活性辅酶4份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比12∶3∶3∶2组成。
在上述方案的基础上，所述抗霉菌毒素的药物，由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁11份、植物提取物10份、枯草芽孢杆菌9份、活性辅酶3份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
在上述方案的基础上，所述抗霉菌毒素的药物，由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁10份、植物提取物15份、枯草芽孢杆菌6份、活性辅酶3份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比12∶2∶3∶2组成。
在上述方案的基础上，所述植物提取物制备方法如下：
①称取各中药组分，加入10倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
②向上述滤渣中加入8倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
③合并①②中的滤液，浓缩至1/6重量的稠膏状；
④将③中的稠膏真空干燥，粉碎，过80目筛，得植物提取物
在上述方案的基础上，所述的活性辅酶为辅酶Q10、维生素B2、维生素B12、叶酸中的一种或多种。
在上述方案的基础上，所述抗霉菌毒素的药物的制备方法，步骤如下：将酿酒酵母细胞壁、植物提取物、枯草芽孢杆菌、活性辅酶，混匀，装袋，封口，即得。
上述方法制备的抗霉菌毒素的药物用于处理霉变饲料、提高动物免疫力、增强动物肝脏解毒能力。
一种处理霉变饲料的方法，在霉变饲料中添加上述方法制备的抗霉菌毒素的药物，其中，每1000kg轻度霉变的饲料拌用上述药物800g；每500kg中度霉变的饲料拌用上述药物800g。
枯草芽孢杆菌，生产厂家：潍坊益昊生物技术有限公司，商品编号：014；
酿酒酵母细胞壁，生产厂家：金城生物药业有限公司；
维生素B2，生产厂家：湖北广济药业股份有限公司；
维生素B12，生产厂家：宁夏金维制药股份有限公司；
叶酸，生产厂家：深圳安泰生物科技有限公司；
辅酶Q10，生产厂家：陕西锦泰生物工程有限公司
本发明的有益效果：
本发明抗霉菌毒素的药物中酿酒酵母细胞壁、植物提取物、枯草芽孢杆菌、活性辅酶相互配合，协同发挥吸附霉菌毒素，减少霉菌毒素的危害，增强肝脏解毒功能，提高动物免疫力作用。
本发明中的酿酒酵母细胞壁：具有提高免疫力、吸附霉菌毒素、吸附病原微生物的作用。酵母细胞壁提取物利用酵母细胞壁内的葡萄糖甘露聚糖的化学结构与同样属于有机类的霉菌毒素的亲和性，吸附霉菌毒素。类似于肥皂去油的原理，为表面亲和吸附。
本发明中的枯草芽孢杆菌：产生各种消化酶及抗菌肽，促进营养的吸收调节肠道菌群的平衡，提高畜禽对霉菌毒素的抵抗力。有效杀灭黄曲霉素等。
黄芪，具有提高免疫功能，抗菌、抗病毒、保肝、保护神经系统的作用。
益母草，提高免疫系统功能，利水消炎、抗炎镇痛、保护心肌等作用。
蒲公英，广谱抗菌、抗病毒作用，抗炎、利尿、保肝利胆、抗氧化作用，提高免疫力，对胃肠也具有保护作用。
淡竹叶，具有抗炎镇痛、抗氧化、抗心肌缺血、抗菌抗病毒、保肝护肾、调节免疫力等功效。
本发明中药组方原理：
黄芪补气固表、脱毒排脓、利尿、生肌；益母草活血调经、利水消肿、清热解毒；蒲公英清热解毒、消肿散结、利尿通淋；淡竹叶清热泻火、利尿通淋。益母草、蒲公英和淡竹叶清热解毒、消肿散结；黄芪补气固表、托毒排脓，矫正三者的寒偏性，共奏脱毒、解毒、排毒之治则。
本发明抗霉菌毒素药物的优点：
1、本发明的药物对霉菌毒素具有特异性的吸附作用，可定向高效消除各种霉菌毒素、减少病原微生物，可提高动物免疫力、能提高肝脏本身对毒素的解毒能力，消除毒素对动物体损害。
2、本发明抗霉菌毒素药物制备方法简单，材料来源广泛，价格低廉，在食品添加剂领域中具有广阔的市场应用价值。
3、本发明的药物配方科学合理，极大的满足了降解常见畜禽配合饲料中霉菌毒素的需求，将本发明药物添加霉变饲料中，饲喂动物表现动物健康、发病率低、死亡率低、长势好。
4、本发明药物组合物对蛋氨酸、赖氨酸、维生素A、D、E均没有吸附作用。
5、本发明药物组合物还达到保肝护肾、脱毒、解毒、排毒的效果。
本发明的药物各组分之间相互作用，共同达到脱毒、解毒、排毒的功效，减少动物患病率及死亡率；还可调节免疫力、保护胃肠道，且对营养成分没有吸附作用，利于动物营养均衡摄入，健康成长。
具体实施方式
在本发明中所使用的术语，除非有另外说明，一般具有本领域普通技术人员通常理解的含义。
下面结合具体实施例，并参照数据进一步详细的描述本发明。以下实施例只是为了举例说明本发明，而非以任何方式限制本发明的范围。
实施例1
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪12份、蒲公英3份、益母草3份、淡竹叶2份。
具体制备方法为：
①称取各中药组分，加入10倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
②向上述滤渣中加入8倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
③合并①②中的滤液，浓缩至1/6重量的稠膏状；
④将③中的稠膏真空干燥，粉碎，过80目筛，得植物提取物。
实施例2
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪11份、蒲公英5份、益母草2份、淡竹叶1份。
制备方法同实施例1。
实施例3
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪12份、蒲公英2份、益母草3份、淡竹叶2份。
制备方法同实施例1。
实施例4
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪4份、蒲公英2份、益母草2份、淡竹叶1份。
制备方法同实施例1。
实施例5
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪15份、蒲公英5份、益母草6份、淡竹叶4份。
制备方法同实施例1。
实施例6
一种植物提取物，由以下原料按重量份数组成：黄芪9份、蒲公英4份、益母草4份、淡竹叶3份。
制备方法同实施例1。
一、植物提取物药效试验
1.1试验组方
1.1.1实施例1的植物提取物；
1.1.2实施例2的植物提取物；
1.1.3实施例3的植物提取物；
1.1.4实施例4的植物提取物；
1.1.5实施例5的植物提取物；
1.1.6实施例6的植物提取物；
1.1.7实施例2的各中药材直接超微粉碎至700目，混合均匀制得的植物提取物；
1.1.8实施例2不含黄芪的植物提取物；
1.1.9实施例2不含蒲公英的植物提取物；
1.1.10实施例2不含益母草的植物提取物；
1.1.11实施例2不含淡竹叶的植物提取物；
1.1.12实施例2中用金银花替换蒲公英所制得的植物提取物；
1.1.13实施例2中用党参替换黄芪所制得的植物提取物；
1.1.14空白对照组。
1.2试验方法
选择体重相近、健康无病的母猪210头，随机分为14组，每组15头，均投喂轻度霉变的饲料，其中，1～6组的饲料中分别添加1.1.1～1.1.6的植物提取物，添加量为200g/吨，并分别记为“实施例1组～实施例6组”；7～13组的饲料中分别添加1.1.7～1.1.13的植物提取物，添加量为200g/吨，并分别记为“对照组1～对照组7”；第14组的饲料中不添加任何药物，作为空白对照组；所有母猪均在相同营养水平和管理条件下进行饲养管理。
1.3试验饲粮
表1：基础日粮与营养水平
原料 配比(％) 营养指标 营养含量
玉米 64 消耗能量MJ/Kg 13.95
麦麸 5 粗蛋白/％ 18.15
豆粕 13 赖氨酸/％ 0.92
膨化大豆 11.5 蛋氨酸/％ 0.3
国产鱼粉 2.5 蛋氨酸+胱氨酸/％ 0.65
哺乳母猪预混料 4 Ca/％ 0.95
总P/％ 0.68
注：4％哺乳母猪混料每千克中营养成分含量：VA100000～175000IU、VD360000～125000IU、VE≥1200㎎、VK3≥45㎎、VB1≥80、VB2≥210㎎、VB6≥110㎎、VB12≥0.8㎎、泛酸≥600㎎、烟酸≥1150㎎、叶酸≥46㎎、生物素≥8㎎、氯化胆碱≥12.5g、铜125～850㎎、铁2000～5000㎎、锌1000～3500㎎、锰400～2500㎎、碘5～80㎎、硒2.5～12.5㎎、氯化钠35～150g、钙65～260g、总磷15～65g、赖氨酸≥4.0％、水分≤10％；表中营养成分含量除粗蛋白为实测值，其余为计算值。
1.4测定指标及方法
1.4.1发病率、死亡率统计
试验期18天，统计各组母猪的发病率、死亡率。
1.4.2血清抗氧化指数的测定
试验第18天，每组随机抽取6头猪，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。
抗氧化指标的测定：采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA)，试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买。具体步骤按试剂盒说明书操作。
1.4.3血清免疫指标的测定
血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。
1.5数据分析
所有采集数据采用Excel软件进行前期处理，然后用SPSS19.0进行统计分析，LSD进行多重比较，结果采用平均值±标准差表示。
1.6结果及分析
1.6.1各植物提取物对发病率、死亡率的影响，见表2。
表2各植物提取物对发病率、死亡率的影响
试验结果表明：实施例1～6组发病率和死亡率均低于对照组和空白对照组；其中，实施例1～3的植物提取物优于实施例4～6，实施例2的植物提取物药效最佳；对照组1和7的发病率和死亡率均低于其他对照组，除空白对照组外，对照组2的发病率及死亡率最高。
1.6.2各植物提取物对血清抗氧化指数的影响，见表3。
表3各植物提取物对血清抗氧化指数的影响
试验结果显示：丙二醛(MDA)含量，实施例1～6组均低于对照组和空白对照组，T-SOD和GSH含量实施例1～6组均高于对照组和空白对照组；其中实施例2组丙二醛(MDA)含量最低，T-SOD和GSH含量显著高于其他实施例组；对照组1和7丙二醛(MDA)含量显著低于其他对照组，T-SOD和GSH含量显著高于其他对照组；除空白对照组外，对照组2的丙二醛(MDA)含量最高，T-SOD和GSH含量最低。
1.6.3各植物提取物对血清免疫指标的影响，见表4。
表4各植物提取物对血清免疫指标的影响
试验结果显示：实施例1～6组血清IgA、IgG、IL-4含量均高于对照组和空白对照组；其中，实施例1～3、6的植物提取物优于实施例4、5；实施例2的植物提取物药效最佳；对照组1和7血清IgA、IgG、IL-4含量高于其他对照组；除空白对照组外，对照组2的血清IgA、IgG、IL-4含量最低。
实施例7
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁13份、植物提取物10份、枯草芽孢杆菌8份、活性辅酶4份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比12∶3∶3∶2组成。
所述的活性辅酶为维生素B2、维生素B12和叶酸，三者的用量为1∶1∶1。
本发明所述的一种抗霉菌毒素的药物的制备方法，步骤如下：
将酿酒酵母细胞壁、植物提取物、枯草芽孢杆菌、活性辅酶，混匀，装袋，封口，即得。
实施例8
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁11份、植物提取物10份、枯草芽孢杆菌9份、活性辅酶3份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
所述的活性辅酶为辅酶Q10、维生素B2和维生素B12，三者的用量为1∶1∶1。
制备方法同实施例7。
实施例9
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁10份、植物提取物15份、枯草芽孢杆菌6份、活性辅酶3份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比12∶2∶3∶2组成。
所述的活性辅酶为维生素B12。
制备方法同实施例7。
实施例10
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁8份、植物提取物8份、枯草芽孢杆菌6份、活性辅酶2份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
所述的活性辅酶为辅酶Q10、维生素B2和叶酸，三者的用量为1∶1∶1。
制备方法同实施例7。
实施例11
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁15份、植物提取物16份、枯草芽孢杆菌14份、活性辅酶16份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
所述的活性辅酶为辅酶Q10、维生素B2、维生素B12和叶酸，四者的用量为1∶1∶1∶1。
制备方法同实施例7。
实施例12
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁9份、植物提取物15份、枯草芽孢杆菌7份、活性辅酶5份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
所述的活性辅酶为辅酶Q10。
制备方法同实施例7。
实施例13
一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁14份、植物提取物9份、枯草芽孢杆菌13份、活性辅酶3份；
所述的植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
所述的活性辅酶为辅酶Q10和维生素B12，二者的用量为1∶1。
制备方法同实施例7。
二、抗霉菌毒素的药物药效试验
2.1试验组方
2.1.1实施例7的药物；
2.1.2实施例8的药物；
2.1.3实施例9的药物；
2.1.4实施例10的药物；
2.1.5实施例11的药物；
2.1.6实施例12的药物；
2.1.7实施例13的药物；
2.1.8实施例8中的中药材直接超微粉碎至700目，与其他组分混合均匀制得的药物；
2.1.9实施例8不含酿酒酵母细胞壁的药物；
2.1.10实施例8不含植物提取物的药物；
2.1.11实施例8不含枯草芽孢杆菌的药物；
2.1.12实施例8不含活性辅酶的药物；
2.1.13空白对照组。
2.2试验方法
选择体重相近、健康无病的母猪260头，随机分为13组，每组20头，均投喂中度霉变的饲料，其中，1～7组的饲料中分别添加2.1.1～2.1.7的药物，添加量为1600g/吨，并分别记为“实施例7组～实施例13组”；8～12组的饲料中分别添加2.1.8～2.1.12的药物，添加量为1600g/吨，并分别记为“对照组1～对照组5”；第13组的饲料中不添加任何药物，作为空白对照组；所有母猪均在相同营养水平和管理条件下进行饲养管理。
2.3试验饲粮
试验饲粮同表1。
2.4测定指标及方法
2.4.1发病率、死亡率及平均增重统计
试验期10天，统计各组母猪的发病率、死亡率及平均增重。
2.4.2血清抗氧化指数的测定
试验第10天，每组随机抽取6头猪，空腹前腔静脉采血30mL，静置，3000rpm离心10min，离心后血清分装于离心管中，-30℃保存待测。
抗氧化指标的测定：采用黄嘌呤氧化酶法来测定总超氧化物歧化酶(T-SOD)活性、采用比色法来测定谷胱甘肽过氧化物酶(GSH)、采用硫代巴比妥酸法(TBA)来测定丙二醛(MDA)，试验所用试剂盒均在南京建成生物工程研究所购买。具体步骤按试剂盒说明书操作。
2.4.3血清免疫指标的测定
血清免疫指标IgA、IgG、IL-4采用间接酶联免疫吸附试验(ELISA)方法测定。
2.5数据分析
所有采集数据采用Excel软件进行前期处理，然后用SPSS19.0进行统计分析，LSD进行多重比较，结果采用平均值±标准差表示。
2.6结果及分析
2.6.1各药物对猪发病率、死亡率及平均增重的影响，见表5。
表5各药物对猪发病率、死亡率及平均增重的影响
由表5的试验结果可知，实施例7-13组体重平均增重量大于各对照组和空白对照组；各对照组平均增重量大于空白对照组；实施例7-13组的发病率及死亡率均低于各对照组和空白对照组；各对照组的发病率及死亡率均低于空白对照组；使用本发明实施例8的药物母猪的平均增重量最大，发病率和死亡率也较小；可见，本发明的药物各组分之间相互作用，共同达到脱毒、解毒、排毒的功效，可减少动物患病率及死亡率。
2.6.2各药物对血清抗氧化指数的影响，见表6。
表6各药物对血清抗氧化指数的影响
试验结果显示：丙二醛(MDA)含量，实施例7～13组均低于对照组和空白对照组，T-SOD和GSH含量实施例7～13组均高于对照组和空白对照组；其中实施例8组丙二醛(MDA)含量最低，T-SOD和GSH含量显著高于其他实施例组；对照组1丙二醛(MDA)含量显著低于其他对照组，T-SOD和GSH含量显著高于其他对照组，除空白对照组外，对照组2的丙二醛(MDA)含量最高，T-SOD和GSH含量最低。
2.6.3各植物提取物对血清免疫指标的影响，见表7。
表7各药物对血清免疫指标的影响
试验结果显示：实施例7～13组血清IgA、IgG、IL-4含量均高于对照组和空白对照组；其中，实施例8的药物药效最佳；对照组1血清IgA、IgG、IL-4含量高于其他对照组，除空白对照组外，对照组2的血清IgA、IgG、IL-4含量最低。
三、各药物对饲料中霉菌毒素和营养物质的影响
3.1试验设计
取2.2中中度霉变的饲料过20目筛后，取20g分别放置于13个带塞锥形瓶中，向1～12号锥形瓶中分别加入2.1中的药物32mg并混合均匀。1～7号瓶分别记为实施例7组～实施例13组；8～12号瓶分别记为对照组1～对照组5；13号瓶不添加任何药物，记为空白对照组。
分别取上述混合饲料10g加入新的锥形瓶中，向瓶中分别加入25mL的磷酸盐缓冲液，置于37℃，150rpm，振荡60min，混合均匀后，过滤，取上清，采用酶联免疫吸附法和免疫亲和层析法检测每组中黄曲霉毒素的种类和含量。
分别精密称取上述混合饲料1g，置于100mL棕色容量瓶中，加入约80mL甲醇，瓶塞不宁紧，于65℃超声水浴30min，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，充分摇匀。采用高效液相色谱法，用C18柱，流动相：甲醇：水(98∶2)；流速：1.0mL/min；进样量20μL，紫外检测器，检测加2.1中药物后对饲料中维生素A、D、E的影响。
采用高效液相色谱法，用C18柱，流动相：乙腈：水(5∶95)；流速：1.0ml/min；进样量20μL，紫外检测器，检测加2.1中药物后对蛋氨酸、赖氨酸的影响。
3.2结果及分析
3.2.12.1中的药物对饲料中黄曲霉毒素种类及含量的影响，见表8。
表82.1中的药物对饲料中黄曲霉毒素种类及含量的影响
表8结果显示，添加本发明实施例7～13药物后，黄曲霉毒素B1、赭曲霉毒素A、T-2毒素、玉米赤霉烯酮、伏马毒素、呕吐毒素含量均下降，且实施例8比其他实施例组下降的多，说明本发明药物对霉菌毒素具有特异的吸附作用，本发明的药物各组分之间相互作用，共同达到脱毒、解毒、排毒的功效。
3.2.22.1中的药物对饲料中营养成分的影响，见表9。
表92.1中的药物对饲料中营养成分的影响
试验结果显示，添加本发明药物后，维生素A、D、E含量略有升高，蛋氨酸、赖氨酸含量也稍有增加，说明本发明药物对维生素A、D、E及蛋氨酸、赖氨酸没有吸附作用，相应的本发明药物中的各组分如枯草芽孢杆菌还可以增加饲料中维生素和蛋白质的含量，使饲料的营养更加丰富。
四、药理学毒性试验
4.1试验方法
选取体重为18～22g的ICR鼠160只，经3天适应性饲养后，随机均分为8组(雌雄各半)，实施例7组～实施例13组和空白对照组，每组各20只；空白对照组灌胃生理盐水，实施例7组～实施例13组分别将各实施例制备的药物溶于水中灌服，各组药物添加量为0.1g/mL，0.3mL/次，一天3次，连续7天。
4.2测定指标及方法
(1)临床症状观察：每日观察试验鼠的精神状态、饮食情况，每日记录发病死亡情况。
(2)病理学观察：对于死亡鼠进行剖检观察内脏变化。
(3)生长指标观察：对试验鼠进行定期称重；试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重脏器指数测定：剖检大鼠，取心脏、脾脏、肝脏、肾脏、睾丸、卵巢，称重，按照下式计算脏器指数：脏器指数＝脏器重/体重×100。
(4)肝脏功能变化观察：试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST、ALT。
4.3数据处理与分析
所有采集数据采用Excel软件进行前期处理，然后用SPSS 19.0进行统计分析，LSD进行多重比较，结果采用平均值±标准差表示。
4.3.1临床症状观察
对照组和试验组鼠，精神状态和饮食欲、对外界反应能力未见明显的异常。各组鼠均未出现发病和死亡情况。
4.3.2病理学观察：对照组和试验组，鼠扑杀后进行剖检眼观未见观察内脏器官明显的病理变化。
4.3.3生长指标观察：试验结束，扑杀鼠称量体重、脏器重分析见表10。
表10各脏器指数分析
分组 肝脏指数 心脏指数 肾脏指数 肺脏指数 脾脏指数
实施例7组 49.12±1.45a 4.23±0.21a 13.39±0.25a 6.58±0.39a 4.28±0.49a
实施例8组 49.34±1.14a 4.34±0.19a 13.46±0.20a 6.62±0.40a 4.35±0.52a
实施例9组 49.51±1.21a 4.27±0.17a 13.41±0.17a 6.53±0.43a 4.31±0.46a
实施例10组 49.28±1.16a 4.30±0.22a 13.45±0.24a 6.61±0.34a 4.38±0.53a
实施例11组 49.47±1.20a 4.58±0.14a 13.34±0.25a 6.63±0.37a 4.29±0.45a
实施例12组 49.29±1.07a 4.60±0.18a 13.42±0.19a 6.57±0.40a 4.33±0.57a
实施例13组 49.62±1.25a 4.64±0.25a 13.40±0.26a 6.51±0.39a 4.31±0.52a
空白对照组 48.83±1.42a 4.22±0.16a 13.33±0.22a 6.53±0.35a 4.27±0.60a
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表10可知，各脏器指数分析，各试验组与对照组之间无显著性差异(P>0.05)。
4.3.4肝脏功能变化观察
试验结束后，扑杀鼠，采取血液分离血清，测定AST(谷草转氨酶)、ALT(谷丙转氨酶)见表11。
表11AST和ALT测定
分组 总数 ALT AST
实施例7组 20 35.24±1.82a 107.36±4.16a
实施例8组 20 35.17±1.95a 107.54±4.27a
实施例9组 20 35.20±2.01a 107.49±4.15a
实施例10组 20 35.34±2.06a 107.65±3.98a
实施例11组 20 35.46±1.85a 107.77±4.14a
实施例12组 20 35.20±2.03a 107.63±4.21a
实施例13组 20 35.55±2.11a 107.65±3.96a
空白对照组 20 35.29±2.17a 107.42±4.57a
注：同列肩标相同字母表示差异不显著(P>0.05)，肩标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)。
由表11可知，各组数据与空白对照组相比差异不显著，都处于正常范围内。
4.4长期毒性试验资料
根据实施例8制备的本发明药物，15g/kg、80g/kg给1月龄ICR鼠连续灌胃给药1个月，动物的皮毛、肤色、摄食、活动、尿、便等均无异常；动物的血常规、肝、肾功能等血液生化指标和动物的主要脏器指数均在正常范围，且正常动力无差异；病理组织学检查表明，心、肝、脾、肺、肾、肾上腺、气管、睾丸、卵巢等重要脏器无病理改变。停药两周后检查以上各项指标均无明显毒性反应，表明无蓄积毒性。
以上所述，仅是本发明的较佳实施例而已，并非是对本发明作其它形式的限制，任何熟悉本专业的技术人员可能利用上述揭示的技术内容加以变更或改型为等同变化的等效实施例。但是凡是未脱离本发明技术方案内容，依据本发明的技术实质对以上实施例所作的任何简单修改、等同变化与改型，仍属于本发明技术方案的保护范围。

Claims (10)

1.一种植物提取物，其特征在于：由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比4～15∶2～5∶2～6∶1～4组成。
2.根据权利要求1所述植物提取物，其特征在于：由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
3.根据权利要求1或2所述植物提取物，其特征在于：制备方法如下：
①称取各中药组分，加入10倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
②向上述滤渣中加入8倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
③合并①②中的滤液，浓缩至1/6重量的稠膏状；
④将③中的稠膏真空干燥，粉碎，过80目筛，得植物提取物。
4.一种抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁8～15份、植物提取物8～16份、枯草芽孢杆菌6～14份、活性辅酶2～6份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比4～15∶2～5∶2～6∶1～4组成。
5.根据权利要求4所述抗霉菌毒素的药物，其特征在于：由以下原料按重量份数组成：酿酒酵母细胞壁11份、植物提取物10份、枯草芽孢杆菌9份、活性辅酶3份；所述植物提取物由黄芪、蒲公英、益母草、淡竹叶按重量比11∶5∶2∶1组成。
6.根据权利要求4或5所述抗霉菌毒素的药物，其特征在于：所述植物提取物制备方法如下：
①称取各中药组分，加入10倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
②向上述滤渣中加入8倍重量水，煮沸提取2h，滤过；
③合并①②中的滤液，浓缩至1/6重量的稠膏状；
④将③中的稠膏真空干燥，粉碎，过80目筛，得植物提取物。
7.根据权利要求4～6任一项所述抗霉菌毒素的药物，其特征在于：所述所述的活性辅酶为辅酶Q10、维生素B2、维生素B12、叶酸中的一种或多种。
8.根据权利要求7所述抗霉菌毒素的药物的制备方法，其特征在于：步骤如下：将酿酒酵母细胞壁、植物提取物、枯草芽孢杆菌、活性辅酶，混匀，装袋，封口，即得。
9.权利要求8所述方法制备的抗霉菌毒素的药物用于处理霉变饲料、提高动物免疫力、增强动物肝脏解毒能力。
10.一种处理霉变饲料的方法，其特征在于：在霉变饲料中添加权利要求8所述方法制备的抗霉菌毒素的药物，其中，每1000kg轻度霉变的饲料拌用上述药物800g；每500kg中度霉变的饲料拌用上述药物800g。
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