CN104524024B - 一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂及其制备方法 - Google Patents

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Abstract

一种用于男子精子质量改善的复合微生物发酵中药生产的天然生物制剂，所述微生物制剂中微生物的组分按重量百分比为：酿酒酵母10‑20％；嗜酸乳杆菌20‑30％；植物乳杆菌20‑30％；双歧杆菌20‑30％。本发明的优点为：具有改善男子精子质量的功能，通过微生物复合发酵技术对中药的有效成分进行转化，使其具有更易吸收利用，效果显著等特点，是一种对抗氧化、清除自由基、改善男子精子质量的天然生物制剂。

Description

一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂及其制备方法
技术领域
本发明涉及一种保健食品，尤其涉及一种用于男性精子质量改善的复合微生物制剂。
背景技术
WHO的统计资料表明，世界范围内不育症发生率约占育龄夫妇的15％，其中男性不育约占50％，因精子活力低下而导致的男性不育约占30％。流行病调查数据表明，近半个世纪来男性精液中精子数和精子的各项运动参数都呈明显的下降趋势，人类精子计数的正常标准从上世纪六、七十年代计数要大于6000万/毫升降到了而今的2000万/毫升，而且异常精子如缺乏动力和形态畸形精子增多了。引起精子质量下降的原因十分复杂，有些是先天或后天的疾病，有些则是生活中一些人为因素所造成的。近年来研究发现氧化应激时产生的过量活性氧是造成男性不育的重要原因之一，过量的活性氧会对精子膜、精子DNA、精子线粒体和精子的运动能力造成损伤。基于过量活性氧的产生和清除机制，对因氧化应激产生过量活性氧致男性不育的患者，服用抗氧化剂减轻氧化应激损伤可以提高男性生育能力。
现有研究认为很多单味中药有抗氧化，清除过多活性氧，提高精子质量的作用，单味中药主要有枸杞子、菟丝子、淫羊藿、巴戟天、肉苁蓉、黄芪、冬虫夏草、黄芪、野山楂、人参、桃仁等；很多复方也具有抗氧化作用。五子衍棕丸是中医治疗不孕症的基本方药，其治疗原则是温肾填髓，对部分患者有一定疗效，但需要长期服用。
现有的发明专利一般以中草药或其提取物研制而成，中草药需要经过炮制或加工，提取有效成分后服用方有显著效果；如果不经过加工直接服用，则由于吸收的障碍，有效成分不易利用，效果不明显。
发明内容
本发明的目的是提供一种能抗氧化、清除自由基、改善男子精子质量的天然生物制剂。
为实现以上目的，本发明的技术方案提供了如下技术方案：
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述微生物制剂由下列原料发酵而成：复合微生物菌种、中药原料、红糖和水。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述复合微生物菌种包括下列组分及各组分的重量份数：
酿酒酵母 10-20份；
嗜酸乳杆菌 20-30份；
植物乳杆菌 20-30份；
双歧杆菌 20-30份；
其中，所述酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌经过培养发酵；
其中，所述酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)优选为ACCC20065嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)优选为ACCC10637植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)优选为ACCC11118双歧杆菌(Bifidobacterium)优选为ACCC11054
所述中药原料、红糖和水的重量份数：
中药原料 40-65份；
红糖 2-5份；
水 40-60份。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述中药原料至少包括葛根、沙棘和葡萄籽等。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述微生物制剂为固体制剂或液体口服制剂。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述微生物制剂中包括赤藓糖、乳糖、保护剂中的至少一种。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，具体步骤如下所述：
步骤一：复合微生物菌种制备
(1.1)、将酿酒酵母接入马铃薯液体培养基中培养至培养基浑浊；将嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌分别接入MRS液体培养基中培养至培养基浑浊；
(1.2)、将上述培养后的菌种，按以下重量百分比配取，酿酒酵母10-20份、嗜酸乳杆菌20-30份、植物乳杆菌20-30份、双歧杆菌20-30份；
(1.3)、将(1.2)称取的菌种按重量比为1:80-120的比例放入原料I中发酵，得复合微生物菌种；
其中，所述原料I包括红糖、水；
步骤二：中药的复合微生物发酵液制备
将步骤一所得复合微生物菌种与原料II按1:15-20比例培养；
其中，所述原料II包括中药原料、红糖、水；
步骤三：中药的复合微生物发酵浓缩液制备
(3.1)、将步骤二所得中药的复合微生物发酵液加水，使固液比为1:1后，依次浸泡、淋洗；
(3.2)、将淋洗液浓缩，得中药的复合微生物发酵浓缩液；
步骤四：微生物制剂制备
将步骤三得到中药的复合微生物浓缩液与赤藓糖醇、乳糖、保护剂中的至少一种混合，制得固体或液体所述微生物制剂。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述步骤一的(1.1)中酿酒酵母的培养条件为：在28-32℃的条件下，180-220rpm振荡培养48-72小时；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌的培养条件均为：在35-39℃条件下，培养48-72小时；所述步骤一的(1.3)的培养条件为：28-32℃、密闭培养、待pH小于3.60-4.00后，培养12-15天；所述步骤二的培养条件在28-32℃条件下，密闭培养12-15天；步骤三得到中药复合微生物发酵浓缩液后需在60-70℃条件下，杀菌10-30min后，2-4℃储藏待用。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述原料I按重量份为：红糖5-10份、水90-98份；所述原料II按重量份数为：中药原料40-65份、红糖2份、水40-60份。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，所述原料II中的中药原料为粉末状，粒径为30-50目。
一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，不同制剂剂型的制备
(1)固态制剂制备
将物料按以下重量比称取：中药复合微生物发酵浓缩液15-30％、赤藓糖醇15-30％、乳糖30-60％、保护剂3-5％，先将赤藓糖醇和乳糖依次加入喷雾干燥一步制粒机，然后开始喷入中药复合微生物发酵浓缩液，流量10-20ml/分钟，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度60-80℃，出风温度40-60℃，待喷雾器内温度降到25-35℃时出料，即得。
(2)口服液制备
将物料按以下重量比称取：中药复合微生物发酵浓缩液45-50％、赤藓糖醇45-50％、保护剂5-10％，先将赤藓糖醇和保护剂加入适量热蒸馏水搅拌溶解，冷却至25-35℃后加入中药复合微生物发酵浓缩液，搅拌使溶液澄清后即得。
本发明采用上述技术方案，与现有技术相比，具有以下有益效果：
本发明采用国家卫计委公告的《可用于食品的菌种名单》中的菌种，采用常用的中药和保健品为原料，进行复合发酵而成的天然生物制剂。本发明综合了现有保健品中的第一类和第二类的有效成分，产品中富含大量抗氧化能力的活性成分，例如：黄酮类(4.43％)、皂甙类(82.4mg/100g)、氨基酸(4.21％)、谷胱甘肽(886mg/100g)、维生素C(322mg/100g)、维生素E(908μg/100g)、SOD(194000U/100g)，乳酸盐(5.04％)以及多种微量元素(铁：503mg/kg；硒：0.18mg/kg等)等。本发明的优点为：具备改善男子精子质量的功能，通过微生物复合发酵技术对中药的有效成分进行转化，使其具有更易吸收利用，效果显著等特点，是一种对抗氧化、清除自由基、改善男子精子质量的天然生物制剂。
具体实施方式
以下结合具体实施例对本发明的技术方案作进一步说明。
实施例一(固体剂型)
第一步、生产制种
将从中国农业微生物菌种保藏管理中心购买的酿酒酵母(Saccharomycescerevisiae，ACCC20065)转接入马铃薯液体培养基的锥形瓶中，在28℃，180-220rpm振荡培养48小时，待培养基浑浊后取出；嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus，ACCC10637)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum，ACCC11118)、双歧杆菌(Bifidobacterium，ACCC11054)，分别转接入MRS液体培养基的锥形瓶中，在37℃培养48小时，待待培养基浑浊后取出，然后放入4℃冰箱保存待用；
第二步、菌种复合培养
(1)将步骤1培养的菌种按以下重量百分比称取：酿酒酵母15％、嗜酸乳杆菌30％、植物乳杆菌30％、双歧杆菌25％；
(2)菌种复合培养：将以上称取的菌种按1：100比例放入以下配比的原料中：红糖5％、纯净水95％，放入发酵罐搅拌均匀后30℃密闭培养，待pH小于3.60后培养15天；
第三步、原料复合发酵
(1)原料粉碎：将筛选个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽分别通过粉碎机粉碎成40目；
(2)复合发酵：将以上复合培养的菌种按1：20比例放入以下配比的原料中：葛根25％、沙棘20％、葡萄籽5％、红糖5％、纯净水45％，放入发酵罐搅拌均匀后30℃密闭培养15天；
第四步、浓缩液制备
(1)发酵罐内添加水，使固液比达到1：1，浸泡1天，然后淋洗。
(2)淋洗液在50℃进行浓缩至20％
(3)浓缩后的中药复合微生物发酵浓缩液，在60℃下杀菌20分钟后4℃贮藏待用；
第五步、固态剂型制备
将物料按以下重量比称取：中药复合微生物发酵浓缩液20％、赤藓糖醇20％、乳糖55％、保护剂5％，先将赤藓糖醇和乳糖依次加入喷雾干燥一步制粒机，然后开始喷入中药复合微生物发酵浓缩液，流量10ml/分钟，最后喷入溶解于适量水中的保护剂，制粒机的进风温度60℃，出风温度45℃，待喷雾器内温度降到30℃时出料，即得。
实施例二(口服液型)
第一步：同实施例一；
第二步：菌种复合培养
(1)将步骤1培养的菌种按以下重量百分比称取：酿酒酵母10％、嗜酸乳杆菌30％、植物乳杆菌30％、双歧杆菌30％；
(2)菌种复合培养：将以上称取的菌种按1：100比例放入以下配比的原料中：红糖3％、纯净水97％，放入发酵罐搅拌均匀后32℃密闭培养，待pH小于3.60后培养12天；
第三步、原料复合发酵
(1)原料粉碎：将筛选个体均匀的葛根、沙棘、葡萄籽分别通过粉碎机粉碎成40目；
(2)复合发酵：将以上复合培养的菌种按1：15比例放入以下配比的原料中：葛根30％、沙棘20％、葡萄籽5％、红糖5％、纯净水40％，放入发酵罐搅拌均匀后32℃密闭培养12天；
第四步、浓缩液制备
(1)发酵罐内添加水，使固液比达到1：1，浸泡1天，然后淋洗。
(2)淋洗液在45℃进行浓缩至20％
(3)浓缩后的中药复合微生物发酵浓缩液，在65℃下杀菌10分钟后4℃贮藏待用；
第五步、口服液型制备
将物料按以下重量比称取：中药复合微生物发酵浓缩液45％、赤藓糖醇45％、保护剂5-10％，先将赤藓糖醇和保护剂加入适量热蒸馏水搅拌溶解，冷却至35℃后加入中药复合微生物发酵浓缩液，搅拌使溶液澄清后即得。
实施例三：
动物分组：选择健康清洁级雄性昆明种小鼠，体重18-22g，常规适应性喂养2天后，随机分为2组(空白组、给药组)。
给药剂量的确定：根据给人推荐剂量(1.5g固体剂型/d或者50ml液体剂型/d)的小鼠等效剂量作为的灌胃剂量，即0.30g固体剂型/kg BW/d或者10ml液体剂型/kg BW/d，经口给药，灌胃容积20mL/kg·BW，空白组灌胃蒸馏水。
实验方法：每天给药1次，连续给药5天。于第一次灌胃后35天处死，取附睾尾剪碎，置生理盐水中于37℃游离，过滤，涂片，甲醇固定，最后用曙红染色制片。每只小鼠观察1000个精子中的异常精子数。数据组间差异采用χ2检验。
表1各组小鼠精子畸形率比较
组别 给药量 观察精子数 异常精子数 畸形率(％)
空白组 - 5000 108 2.16
液体剂型组 10ml/kg 5000 75 1.50*
固体剂型组 0.30g/kg 5000 71 1.42**
注：与空白组相比，*P<0.05，**P<0.01。
上述可见，各给药组能不同程度地降低小鼠基础精子畸形率，液体剂型组与对照组比较差异显著，固体剂型组与对照组比较差异高度显著，表明本发明具有良好的改善精子质量的作用。
以上对本发明的具体实施例进行了详细描述，但其只是作为范例，本发明并不限制于以上描述的具体实施例。对于本领域技术人员而言，任何对本发明进行的等同修改和替代也都在本发明的范畴之中。因此，在不脱离本发明的精神和范围下所作的均等变换和修改，都应涵盖在本发明的范围内。

Claims (7)

1.一种用于改善男性精子质量的复合微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂经下列原料发酵而成：复合微生物菌种、中药原料、红糖和水；
所述复合微生物菌种包括下列组分：酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)、嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)、植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)和双歧杆菌(Bifidobacterium)；其中，所述酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌经过培养发酵；
所述酿酒酵母、嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌和中药原料的重量份数：
酿酒酵母 10-20份；
嗜酸乳杆菌 20-30份；
植物乳杆菌 20-30份；
双歧杆菌 20-30份；
中药原料 40-65份；
其中，所述中药原料为葛根、沙棘和葡萄籽。
2.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂为固体制剂或液体口服制剂。
3.根据权利要求1所述的微生物制剂，其特征在于，所述微生物制剂中包括赤藓糖、乳糖、保护剂中的至少一种。
4.一种如权利要求1所述的微生物制剂的制备方法，其特征在于，具体步骤如下所述：
步骤一：复合微生物菌种制备
(1.1)、将酿酒酵母接入马铃薯液体培养基中培养至培养基浑浊；将嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌分别接入MRS液体培养基中培养至培养基浑浊；
(1.2)、将上述培养后的菌种，按以下重量百分比配取，酿酒酵母10-20份、嗜酸乳杆菌20-30份、植物乳杆菌20-30份、双歧杆菌20-30份；
(1.3)、将(1.2)称取的菌种按重量比为1:80-120的比例放入原料I中发酵，得复合微生物菌种；
其中，所述原料I包括红糖、水；
步骤二：中药的复合微生物发酵液制备
将步骤一所得复合微生物菌种与原料II按1:15-20比例培养；
其中，所述原料II包括中药原料、红糖、水；
步骤三：中药的复合微生物发酵浓缩液制备
(3.1)、将步骤二所得中药的复合微生物发酵液加水，使固液比为1:1后，依次浸泡、淋洗；
(3.2)、将淋洗液浓缩，得中药的复合微生物发酵浓缩液；
步骤四：微生物制剂制备
将步骤三得到的中药复合微生物发酵浓缩液与赤藓糖醇、乳糖、保护剂中的至少一种混合，制得固体或液体所述微生物制剂。
5.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述步骤一的(1.1)中酿酒酵母的培养条件为：在28-32℃的条件下，180-220rpm振荡培养48-72小时；嗜酸乳杆菌、植物乳杆菌、双歧杆菌的培养条件均为：在35-39℃条件下，培养48-72小时；所述步骤一的(1.3)的培养条件为：28-32℃、密闭培养，待pH小于3.60-4.00条件下，培养12-15天；所述步骤二的培养条件在28-32℃条件下，密闭培养12-15天；步骤三得到中药复合微生物发酵浓缩液后需在60-70℃条件下，杀菌10-30min后，2-4℃储藏待用。
6.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述原料I按重量份为：红糖5-10份、水90-98份；所述原料II按重量份数为：中药原料40-65份、红糖2份、水40-60份。
7.根据权利要求4所述的制备方法，其特征在于，所述原料II中的中药原料为粉末状，粒径为30-50目。
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